Submitted by Luciana Ferreira (lucgeral@gmail.com) on 2016-05-19T11:06:39Z No. of bitstreams: 2 Dissertação - Jacqueline Santos Marques - 2014.pdf: 4633133 bytes, checksum: 8058e7f850a7ea713f7c77b0ad35cc32 (MD5) license_rdf: 23148 bytes, checksum: 9da0b6dfac957114c6a7714714b86306 (MD5) / Approved for entry into archive by Luciana Ferreira (lucgeral@gmail.com) on 2016-05-19T11:08:30Z (GMT) No. of bitstreams: 2 Dissertação - Jacqueline Santos Marques - 2014.pdf: 4633133 bytes, checksum: 8058e7f850a7ea713f7c77b0ad35cc32 (MD5) license_rdf: 23148 bytes, checksum: 9da0b6dfac957114c6a7714714b86306 (MD5) / Made available in DSpace on 2016-05-19T11:08:30Z (GMT). No. of bitstreams: 2 Dissertação - Jacqueline Santos Marques - 2014.pdf: 4633133 bytes, checksum: 8058e7f850a7ea713f7c77b0ad35cc32 (MD5) license_rdf: 23148 bytes, checksum: 9da0b6dfac957114c6a7714714b86306 (MD5) Previous issue date: 2014-09-29 / Conselho Nacional de Pesquisa e Desenvolvimento Científico e Tecnológico - CNPq / The extracts and essential oils from plants are bioactive molecules of interest to resistance induction in plants and the control of plant pathogens. The aim this study was to evaluate the effect of the ethanol extract and essential oil from leaves of Eugenia uniflora and two commercial flavonoid fractions, quercetin and rutin, as bioactive compounds for the control of white mold, caused by the fungus Sclerotinia sclerotiorum in common bean (Phaseolus vulgaris L.). The compounds were tested against pathogen through the mycelial growth, cell viability, sclerotia formation, cell morphology and biochemical aspects. And on the pathossystem Phaseolus vulgaris-Sclerotinia sclerotiorum was evaluated biochemical and molecular aspects (RT-qPCR) involved in the mechanism of plant defense, into a kinetic treatment and infection (12, 24 e 48 hours). The data show that the tested compounds were significantly relevant (P<0.01) to growth inhibition pathogen’s mycelium and cell viability in vitro and in the formation of sclerotia of the pathogen a positive correlation between percent inhibition and the concentration of active compounds applied was observed. The minimum inhibitory concentration (MIC) for S. sclerotiorum was 0.6% (v/v) ethanol extract of leaves from E. uniflora and the 100 ppm of the essential oil. In Bioassays in plants, the treatment with ethanol extract or essential oil from Eugenia uniflora and rutin inhibited the formation of necrotic area in common bean leaves 48 hours after inoculation. Biochemical analysis showed that the compounds induced 12 hours after treatment the activation of key proteins related to plant defense, chitinases, β-1,3- glucanase, phenylalanine ammonia lyase, peroxidases and polyphenoloxidases. Molecular analysis showed that treatment with ethanolic extract, quercetin and rutin in healthy plants activated pathogenesis-related genes (PRs) at different times into the kinetic treatment, and that these genes are highly expressed in plants infected compared to the pretreated and infected plants. The results of this research suggest that the effects of the ethanol extract, flavonoids and oil from Eugenia uniflora are potential bioactive molecules to reduce the severity of disease white mold in bean leaves. / Os extratos e óleos essenciais de plantas são moléculas bioativas de grande interesse para a indução de resistência em plantas e no controle de fitopatógenos. O objetivo deste trabalho foi avaliar o efeito do extrato etanólico e óleo essencial de folhas de E. uniflora e duas frações flavonoides comerciais, quercetina e rutina como compostos bioativos para o controle de mofo branco, causado pelo fungo Sclerotinia sclerotiorum, em feijoeiro comum (Phaseolus vulgaris L.). Os compostos foram testados sobre patógeno através do crescimento micelial, viabilidade celular, esclerogênese, morfologia celular e aspectos bioquímicos. E sobre o patossistema Phaseolus vulgaris-Sclerotinia sclerotiorum foi avaliado aspectos bioquímicos e moleculares (RT-qPCR) envolvidos no mecanismo de defesa da planta, dentro de uma cinética de tratamento e infecção (12, 24 e 48 horas). Os dados mostram que os compostos testados foram significantemente (P<0.01) relevantes na inibição do desenvolvimento e viabilidade celular in vitro do micélio e na formação de escleródios do patógeno, sendo observada uma correlação positiva entre percentual de inibição e as concentrações dos compostos avaliadas. A concentração inibitória mínima (MIC) para o S. sclerotiorum foi de 0.6% (v/v) do extrato etanólico de folhas de E. uniflora e de 100 ppm do óleo essencial. Nos bioensaios em plantas, o tratamento com extrato etanólico ou óleo essencial de folhas de Eugenia uniflora e rutina inibiram a formação de necrose em folhas de feijoeiro comum com 48 horas ápos inoculação. A análise bioquímica mostrou que os compostos induzem com 12 horas após tratamento a ativação das principais proteínas relacionadas à defesa da planta, quitinases, β-1,3- glucanase, fenilalanina amônia-liase, peroxidases, e polifenoloxidases. A análise molecular mostrou que o tratamento com extrato etanólico, quercetina e rutina em plantas sadias ativaram genes relacionados à patogênese (PRs) em diferentes tempos dentro da cinética de tratamento, e que tais genes são altamente expressos em plantas infectadas em comparação as plantas pré tratadas e infectadas. Os resultados obtidos neste trabalho indicam que o extrato etanólico, flavonoides e o óleo essencial de folhas de Eugenia uniflora são moléculas bioativas potenciais para reduzir a severidade da doença mofo branco em plantas de feijoeiro comum.

Submitted by Divisão de Documentação/BC Biblioteca Central (ddbc@ufam.edu.br) on 2018-08-08T17:27:34Z No. of bitstreams: 1 DISSERTAÇÃO_ingrityPPGQ_2018.pdf: 5376720 bytes, checksum: fa85e56e97f4af1ea8ebbe715d71c5ce (MD5) / Rejected by Divisão de Documentação/BC Biblioteca Central (ddbc@ufam.edu.br), reason: on 2018-08-08T17:27:55Z (GMT) / Submitted by Divisão de Documentação/BC Biblioteca Central (ddbc@ufam.edu.br) on 2018-08-08T17:29:12Z No. of bitstreams: 1 Reprodução Não Autorizada.pdf: 47716 bytes, checksum: 0353d988c60b584cfc9978721c498a11 (MD5) / Approved for entry into archive by Divisão de Documentação/BC Biblioteca Central (ddbc@ufam.edu.br) on 2018-08-08T17:30:09Z (GMT) No. of bitstreams: 1 Reprodução Não Autorizada.pdf: 47716 bytes, checksum: 0353d988c60b584cfc9978721c498a11 (MD5) / Made available in DSpace on 2018-08-08T17:30:09Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Reprodução Não Autorizada.pdf: 47716 bytes, checksum: 0353d988c60b584cfc9978721c498a11 (MD5) Previous issue date: 2018-05-14 / CAPES - Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior / Indisponível. / As plantas sempre foram utilizadas pelo homem como fonte de agentes terapêuticos, muitas vezes empregadas a partir do conhecimento popular. Na Amazônia apesar da sua grande biodiversidade de plantas medicinais, existem muitas espécies vegetais que não possuem estudos com relação à composição química e atividade biológica. Dessa forma o presente trabalho vem destacar a espécie conhecida como Brosimum parinarioides (Huber) Ducke, pertencente à família Moraceae, que se caracteriza por ser uma árvore de grande porte que produz um látex comestível, popularmente conhecido como leite do amapá. Nesse contexto, este projeto buscou o estudo inédito da caracterização da composição química das diferentes partes (casca e látex) da espécie B. parinarioides, por serem muito comercializadas e utilizadas pela população, devido às suas diversas propriedades fitoterápicas além de avaliar a inibição da enzima acetilcolinesterase e a atividade antitumoral, antioxidante e anti-inflamatória. Para atingir esses objetivos, foram preparados três extratos para a amostra da casca (Hexânico, Acetato de etila e Metanólico) e um para o látex (metanólico) visando à caracterização química e/ou isolamento dos metabólitos secundários. Desta forma, foram empregadas técnicas cromatográficas clássicas como CCD, CCDP, CC e modernas CG-EM e CLAE-DAD-EM além do uso de técnicas espectrométricas e espectroscópicas EM Q-TOF, RMN 1D e 2D. Para as frações proveniente do extrato metanólico do látex, foi possível identificar por APCI-MS2 no modo negativo à presença das substâncias fenólicos: ácido clorogênico e ácido quínico. No extrato hexânico da casca foram identificados por CG-EM a presença de substâncias terpênicas: lanosterol, noroleano, acetato de α-amirina, acetato β-amirina, acetato de cicloartenol e ursa-12-eno. O fracionamento do extrato de acetato de etila e metanólico auxiliado pelo uso de técnicas como CC e CLAE levou ao isolamento da substância fenólica modificada majoritária H-S1 (m/z- 527,1708; FM:C31H27O8). Foram identificados no extrato metanólico da casca por CG-EM seis terpenoides: acetato de lanosterol, α-amirina, β-amirina, lupeol e acetato de lupeol. O fracionamento do mesmo utilizando métodos clássicos como CC e CCDP, resultou no isolamento de três substâncias: 4’,6-dihidroxi-5’-prefenil-flavana (P-S1: m/z- 309,1486; FM:C20H22O3), 2,4,4’-trihidroxi-3’-prenil-chalcona (P-S2: m/z- 323,1293; FM:C20H20O4) e 2,4,4’-trihidroxi-5’-(2”-hidroxi-3”-metil-3”-butenil)-chalcona (P-S3: m/z- 339,1247; FM:C20H19O5). Sendo inéditas as substâncias 4’,6-dihidroxi-5’-prefenil-flavana e a 2,4,4’-trihidroxi-5’-(2”-hidroxi-3”-metil-3”-butenil)-chalcona, já a 2,4,4’-trihidroxi-3’-prenil-chalcona foi isolada pela primeira vez neste gênero. Visando a análise do potencial citotóxico dos extratos realizou-se o estudo de citotoxidade in vitro em linhagens de células tumorais, onde foi possível observar atividade citotóxica promissora para alguns extratos com valores de IC50 < 30μg/mL. Os extratos e as substâncias não apresentaram potencial de inibição sobre a enzima acetilcolinesterase para a concentração de 90 μg/mL. Também foram realizados ensaios de avaliação de atividade antioxidante tanto para os extratos quanto para as substâncias obtidas sendo possível obter alta atividade antioxidante frente ao radical DPPH e ABTS. Por fim, na avaliação da inibição da enzima lipoxigenase, observou-se resultado significativo quando comparados ao padrão NDGA, corroborando para o uso popular contra doenças anti-inflamatórias.

Os flavonoides são um grupo diversificado de compostos polifenólicos que podem ser encontrados na natureza e também sintetizados. A gama de atividades biológicas e o potencial para reduzir o risco de doenças crônicas tem motivado a comunidade científica a desenvolver métodos de síntese de compostos desta classe. Neste sentido, as reações de biotransformação são estratégias interessantes com grande potencial para modificar as estruturas de flavonoides naturais e sintéticos. Este estudo teve como objetivo a biotransformação de derivados de flavonoides por fungos de ambiente marinho. Assim, os derivados de flavonoides 2\'-hidroxichalconas (1a-h), 2\'-hidroxi-diidrochalcona (2a), flavanona (3a) e flavan-4-ol (4a) foram usados como substratos em reações biocatalisadas por células totais de fungos de ambiente marinho. As condições reacionais foram otimizadas variando-se o pH e a composição nutricional do meio reacional. Dessa forma, foi realizada uma triagem com oito fungos derivados de ambiente marinho (Penicillium raistrickii CBMAI 931, Cladosporium sp. CBMAI 1237, Aspergillus sydowii CBMAI 935, Penicillium oxalicum CBMAI 1996, Penicillium citrinum CBMAI 1186, Mucor racemosus CBMAI 847, Westerdykella sp. CBMAI 1679 e Aspergillus sclerotiorum CBMAI 849) utilizando a 2\'-hidroxichalcona 1a como substrato. A partir da triagem foram selecionados os fungos P. raistrickii CBMAI 931 e A. sydowii CBMAI 935 para serem aplicados com outros derivados de flavonoides. As reações empregando o fungo P. raistrickii CBMAI 931 resultou preferencialmente na hidrogenação da ligação C&alpha;=C&beta; das 2\'-hidroxichalconas substituídas (1a-h) com a formação das 2\'-hidroxi-diidrochalconas (2a-h) com conversões que variaram de 25 a 83% em 14 dias de reação. Também foi realizada uma triagem com dez fungos derivados de ambiente marinho (Fusarium sp. CBMAI 1830, Acremonium sp. CBMAI 1676, Aspergillus sp. CBMAI 1829, A. sydowii CBMAI 935, P.oxalicum CBMAI 1996, P. citrinum CBMAI 1186, P. raistrickii CBMAI 931, Cladosporium sp. CBMAI 1237, M. racemosus CBMAI 847 e Westerdykella sp. CBMAI 1679) para a biotransformação da flavanona 3a. A biotransformação da flavanona 3a resultou na formação de produtos de biorredução, hidroxilação e clivagem de anel. As reações empregando os fungos Cladosporium sp. CBMAI 1237, Westerdykella sp. CBMAI 1679 e Acremonium sp. CBMAI 1676 levou preferencialmente a biorredução do grupo cetônico da flavanona 3a para formação do flavan-4-ol 4a correspondente. Os fungos Acremonium sp. CBMAI 1676 e Cladosporium sp. CBMAI 1237 foram então utilizados para reduzir uma série de flavanonas 3b-g meta e para substituídas, onde os flavan-4-ois foram isolados com bons rendimentos (67-87%), porém com baixa seletividade. O fungo P. raistrickii CBMAI 931 também apresentou potencial para obtenção de diidrochalconas a partir de flavanonas, assim como os fungos A. sydowii CBMAI 935 e Fusarium sp. CBMAI que além de produzirem diidrochalconas ainda promoveram a hidroxilação da mesma. Assim, os fungos de ambiente marinho P. raistrickii CBMAI 931 e A. sydowii CBMAI 935 foram eficientes na biotransformação de derivados de flavonoides com controle quimio- e regiosseletivo. Os fungos de ambiente marinhoutilizados mostraram-se como uma fonte de enzimas ene redutases, álcool desidrogenases e monoxigenases ao mediar eficientemente a biotransformação de derivados de flavanoides. / Flavonoids are a diverse group of polyphenolic compounds that can be found in nature and synthesized. The range of biological activities and the potential to reduce the risk of chronic diseases has motivated the scientific community to develop methods of synthesis of compounds of this class. In this sense, biotransformation reactions are interesting strategies with great potential to modify the structures of natural and synthetic flavonoids. This study aimed at the biotransformation of flavonoid derivatives by marine environment fungi. Thus, the flavonoid derivatives 2\'-hydroxychalconas (1a-h), 2\'-hydroxy dihydrochalcone (2a), flavanone (3a) and flavan-4-ol (4a) were used as substrates in biocatalysed reactions by total cells of fungi of marine environment. The reaction conditions were optimized by varying the pH and nutritional composition of the reaction medium. In this way, eight marine-derived fungi (Penicillium raistrickii CBMAI 931, Cladosporium sp. CBMAI 1237, Aspergillus sydowii CBMAI 935, Penicillium oxalicum CBMAI 1996, Penicillium citrinum CBMAI 1186, Mucor racemosus CBMAI 847, Westerdykella sp. 1679 and Aspergillus sclerotiorum CBMAI 849) were screened to perform the biotransformation of 2\'-hydroxychalcone 1a. From the screening, the fungi P. raistrickii CBMAI 931 and A. sydowii CBMAI 935 were selected for applied with other flavonoid derivatives. The reactions using the fungus P. raistrickii CBMAI 931 resulted preferentially in the hydrogenation of the C&alpha;-C&beta; double bond of the substituted 2\'-hydroxychalconas (1a-h) to led formation of 2\'-hydroxy-dihydrochalcones (2a-h) with good conversions (25 to 83%) in 14 days of reaction. It was also carried out a screening with ten fungi derived from marine environment (Fusarium sp. CBMAI 1830, Acremonium sp. CBMAI 1676, Aspergillus sp. CBMAI 1829, A. sydowii CBMAI 935, P. oxalicum CBMAI 1996, P. citrinum CBMAI 1186, P. raistrickii CBMAI 931, Cladosporium sp, CBMAI 1237, M. racemosus CBMAI 847 and Westerdykella sp, CBMAI 1679) for the biotransformation of flavanone 3a. The biotransformation reaction resulted in the biorreduction of flavanona 3a, hydroxylation and ring cleavage of the products. Reactions by Cladosporium sp. CBMAI 1237, Westerdykella sp. CBMAI 1679 and Acremonium sp. CBMAI 1676 preferably led to the reduction of the pro-chiral ketone of flavanone to form the corresponding flavan-4-ol. The fungi Acremonium sp. CBMAI 1676 and Cladosporium sp. CBMAI 1237 were used to reduce a series of substituted flavanones, where flavan-4-ols were isolated in good yields (67-87%), but with low selectivity. The fungus P. raistrickii CBMAI 931 presented potential for produce dihydrochalcones from flavanones, as well as the fungi A. sydowii CBMAI 935 and Fusarium sp. CBMAI that in addition to producing dihydrochalcones still promoted the hydroxylation thereof. Thus, the marine environment fungi P. raistrickii CBMAI 931 and A. sydowii CBMAI 935 were efficient in biotransformation of flavonoid derivatives with chemo- and regioselective control. Marine-derived fungi have been shown to be a source of ene reductase enzymes, alcohol dehydrogenases and monoxigenases by efficiently mediating the biotransformation of flavonoid derivatives.

Lipossomas (LUV) são estruturas compostas por uma bicamada lipídica que se organizam de forma semelhante a vesículas, contendo um compartimento aquoso em seu interior. Têm sido avaliados como potenciais carreadores de fármacos. No entanto, após sua administração, in vivo, opsoninas do soro adsorvem-se em sua superfície contribuindo para que o sistema fagocitário mononuclear (SFM) reconheça essas partículas, favorecendo sua remoção da circulação. O sistema complemento (SC) parece ter papel importante neste processo, principalmente por gerar fragmentos ativos do componente C3 (C3b/iC3b) que se depositam nas vesículas lipossomais e são reconhecidos por receptores do complemento presentes, por exemplo, nos polimorfonucleares. Antioxidantes, como a quercetina, têm demonstrado importantes e benéficos efeitos sobre a saúde humana, porém sua baixa solubilidade em água e biodisponibilidade limitam seu uso. Assim, o desenvolvimento apropriado de carreadores de flavonoides seria de grande importância para sua aplicabilidade in vivo. O objetivo do presente trabalho é avaliar a ativação das proteínas do SC por lipossomas compostos de fosfatidilcolina de soja e colesterol (PC:CHOL) ou colesteril-etil-éter (PC:CHOL-OET), contendo ou não quercetina. O consumo das vias clássica (VC) e alternativa (VA) provocado pelas diferentes vesículas foi analisado por ensaio hemolítico e a quantificação de iC3b e anticorpos naturais (IgG e IgM) na superfície dessas partículas foi realizada através de kits de ELISA. A ativação de C3 por vesículas contendo ou não quercetina foi avaliada por imunoeletroforese bidimensional (IEF). Os resultados mostram que lipossomas vazios, compostos por grande quantidade de colesterol, consomem mais os componentes do complemento para ambas as vias, VC e VA. Ainda, a substituição de colesterol por colesteril-etil éter reduziu o consumo das duas vias, mas a ativação do SC ainda é dependente da quantidade deste composto. A incorporação de quercetina não alterou o consumo de ambas as vias. O depósito de iC3b, IgG ou IgM nas vesículas compostas de PC:CHOL-OET na proporção de massa 3:1 foi o menor comparado aos demais. A IEF mostrou que vesículas PC:CHOL vazias induzem maior clivagem de C3 em relação às vesículas PC:CHOL-OET. Ainda, a incorporação de quercetina reduz a conversão de C3 em seus fragmentos. Essas observações sugerem que a preparação lipossomal PC:CHOL-OET em proporção de massa 3:1 parece ser a mais adequada para dar continuidade aos estudos que deverão culminar na tentativa de utilizá-la como carreadora de quercetina para administração in vivo / Liposomes (LUV) are structures composed by lipid bilayer that are organized similarly to vesicles, containing an aqueous compartment inside. They have been evaluated as potential drug carriers, however, after in vivo administration, serum opsonins are adsorb on the surface, contributing to their clearance from the circulation by mononuclear phagocytes system (MPS). The complement system (CS) seems to play an important role in this process, mainly to generate active fragments of the C3 component (C3b/iC3b) that are deposited in the liposomal vesicles and are recognized by complement receptors present, for example, in polymorphonuclear cells. Antioxidants such as quercetin have demonstrated significant and beneficial effects on human health, but its low water solubility and bioavailability limit their use. Thus, the proper development of flavonoids carriers would be of great importance to its applicability in vivo. The objective of this study is to evaluate the activation of SC proteins by liposomes composed of soy phosphatidylcholine and cholesterol (PC: CHOL) or cholesteryl ethyl ether (PC: CHOL-OET), with or without quercetin. The consumption of the classical (CP) and alternative pathway (AP) caused by the different vesicles was analyzed by hemolytic assay and quantification of iC3b and natural antibodies (IgG and IgM) on the surface of these particles was performed using ELISA kits. The activation of C3 by vesicles with or without quercetin was assessed by two-dimensional immunoelectrophoresis (IEF). The results show that empty liposomes, composed of large amounts of cholesterol, consume more CS components in both pathways, CP and AP. Moreover the replacement of cholesterol by cholesteryl ethyl ether reduced the consumption of both pathways, but the activation of the SC is still dependent on the amount of the compound. The incorporation of quercetin did not alter the consumption of both pathways. The deposition of iC3b, IgG or IgM in vesicles composed of PC: CHOL-OET at mass ratio of 3:1 was the lowest compared to the others. The IEF showed that empty vesicles of PC:CHOL induce less cleavage of C3 in relation to vesicles of PC: CHOL-OET. In addition, the incorporation of quercetin reduces the conversion of C3 into its fragments. These observation suggest that the liposomes PC:CHOL at mass ratio 3:1 seems to be the most appropriate to continue the studies that could culminate in an attempt to use it as a carrier to administrate quercetin in vivo

O sistema imune inato é organizado por processos complexos que envolvem os diversos tipos celulares que culminam na eliminação de uma variedade de microorganismos a fim de proteger o organismo de infecções. Os neutrófilos são células importantes neste sistema, sendo capazes de migrar rapidamente ao foco da infecção. Estas células reconhecem e fagocitam partículas estranhas e atuam no sentido de elimina-los através da produção de espécies reativas de oxigênio (EROs), proteínas antimicrobianas e enzimas proteolíticas dos grânulos, que são liberadas no fagossomo e no espaço extracelular. Entretanto, em algumas doenças inflamatórias e autoimunes têm sido encontradas lesões nos tecidos envolvendo a produção excessiva de EROs pelos neutrófilos, desencadeada por imunocomplexos (ICs) via receptores Fc gama (Fc) e de complemento (CR). Assim, a modulação da ativação destes receptores e da produção de EROs é importante na manutenção da homeostasia. Nas últimas décadas, flavonóides são considerados como metabólitos secundários promissores mostrando atividade antioxidante e imunomodulatória. Neste trabalho foi avaliado o efeito modulatório dos flavonóides galangina, kaempferol, quercetina e miricetina em algumas funções efetoras de neutrófilos humanos, como o metabolismo oxidativo estimulado via receptores de membrana Fc e/ou CR, fagocitose e atividade microbicida, além do efeito citotóxico, antioxidante e inibitório dessas substâncias sobre a atividade das enzimas mieloperoxidase (MPO) e NADPH oxidase. Os flavonóides analisados mostraram um efeito modulatório negativo no metabolismo oxidativo dos neutrófilos humanos na seguinte ordem: galangina> kaempferol> quercetina > miricetina. Embora a galangina tenha exercido maior atividade, sua ação antioxidante e inibitória na atividade das enzimas MPO e NADPH oxidase foi a menos efetiva dentre os flavonóides avaliados. Além disso, esta substância inibiu de maneira mais acentuada a resposta celular mediada por ambos os receptores Fc e CR quando comparado a estimulação destes receptores individualmente. As substâncias contendo o grupo catecol, quercetina e miricetina mostraram elevada eficiência na inibição da atividade das enzimas NADPH oxidase e MPO, e na redução do radical livre 2,2-difenil-1-picrilhidrazil (DPPH). De maneira geral, os flavonóides não interferiram no processo fagocítico e no mecanismo microbicida, e não induziram toxicidade e morte celular por apoptose ou necrose. Os resultados apresentados neste trabalho mostram uma possível aplicação destes flavonóides como fármacos de origem natural em doenças inflamatórias que apresentem acúmulo de neutrófilos, sendo uma ferramenta promissora para o tratamento efetivo destas doenças. / The innate immune system is composed of complex biological processes involving a variety of cell types that eliminate invading microorganisms to protect the host against infection. Neutrophils are key effector cells of this system, being able to migrate rapidly to infection sites. These cells recognize and engulf foreign particles by phagocytosis, and act to destroy them through production and release of reactive oxygen species (ROS), antimicrobial proteins and proteolytic granule enzymes, which are delivered to the phagossomes and to the extracellular environment. However, tissue damage related to excessive neutrophil ROS production triggered by immune complexes (ICs) via Fc-gamma (FcR) and complement receptors (CR) has been found in some inflammatory and autoimmune diseases. So, modulation of both the activation of these receptors and ROS generation are important to the maintenance of body homeostasis. In the last decades, flavonoids have been considered promising plant secondary metabolites with antioxidant and immunomodulatory activity. This study evaluated the modulator effect of four flavonoids (galangin, kaempferol, quercetin and myricetin) in some human neutrophil effector functions, such as the oxidative metabolism stimulated via FcR and CR classes of membrane receptors, phagocytosis and microbicidal activity, as well as the cytotoxic, antioxidant and inhibitory effect of these compounds in the MPO and NADPH oxidase activity. The flavonoids studied showed a negative modulator effect in the human neutrophils oxidative metabolism in the following ranking order: galangin > kaempferol > quercetin > myricetin. Although galangin had shown the highest activity, it was the least effective antioxidant and inhibitor of MPO and NADPH oxidase activity among the flavonoids tested herein. Furthermore, this compound inhibited more the cellular response mediated by both Fc and CR receptors than by each one of them individually. The flavonoids bearing the catechol group, quercetin and myricetin, had a high efficiency to inhibit NADPH oxidase and MPO activity, as well as to reduce the 2,2-diphenyl-1-picrylhidrazil (DPPH) free radical. In general, the flavonoids did not interfere in the phagocytic process and microbicidal mechanism, and also did not induce toxicity and cell death by apoptosis or necrosis. The group of results presented here provides a possible application of these flavonoids as drugs of natural source in inflammatory diseases with excessive neutrophil infiltration, being a promising tool for an effective treatment of these illnesses.

Causada por protozoários do gênero Leishmania, a leishmaniose é uma doença infecciosa que afeta milhões de pessoas em todos os continentes. São grandes os desafios no tratamento da leishmaniose porque os fármacos atualmente disponíveis apresentam alta toxicidade, efeitos colaterais, alto custo e resistência parasitária. Sendo assim, faz-se necessário o desenvolvimento de novas drogas para o tratamento da doença de maneira mais eficiente. A investigação de novas alternativas terapêuticas, novos alvos bioquímicos, em particular a arginase em de Leishmania (L) amazonensis, é considerada um alvo interessante na busca de novos compostos leishmanicidas. A via bioquímica em que está envolvida a arginase é fundamental para a manutenção do ciclo de vida do parasito, sendo responsável pela hidrólise de L-arginina em L-ornitina em mamíferos. Muitos compostos oriundos de produtos naturais tem sido relatados como inibidores da arginase de L. (L.) amazonensis e a presença de grupos hidroxila em suas estruturas mostraram ser importantes na atividade inibidora da enzima. O objetivo desse trabaho estudar a interação bioquímica entre a enzima arginase de L. (L.) amazonensis, extratos vegetais, flavonoides e derivados do ácido cafeico. O extrato acetônico de folhas de Qualea grandiflora apresentou maior capacidade inibitória da arginase (IC50 = 1,7 &plusmn; 01 &micro;g/mL) dentre os extratos analisados. Dentre os flavonoides, o composto mais potente foi a taxifolina (IC50 = 1,7 &plusmn; 0,2 &micro;M). O verbascosídeo foi o derivado do ácido cafeico com maior potencial de inibição da arginase (IC50 = 0,5 &plusmn; 0,2 &micro;M). As estruturas desses compostos podem servir como referência no desenvolvimento de novas drogas para o controle da leishmaniose, que tenham como alvo a arginase. / Caused by protozoa of the genus Leishmania, leishmaniosis is an infectious disease that affects millions of people on all continents. The currently available drugs are highly toxic, expensive, have side effects and parasitic resistance and for these reasons there is a need of developing new drugs to more effective treatment of the disease. The research of new therapeutic alternatives, new biochemical targets, in particular the arginase of Leishmania (Leishmania) amazonensis is considered an interesting target in the search for new compounds leishmanicidal. The biochemistry of arginase pathway is essential for the survival of the parasite, is also responsible for hydrolysis of L- arginine to L- ornithine in mammals. Many compounds from natural products has been reported as inhibitors of arginase L. (L.) amazonensis, and the presence of hydroxyl groups in their structures shown to be important for inhibitory activity of the enzyme. This work studies the biochemical interaction between the arginase enzyme, plant extracts, flavonoids and derivatives of caffeic acid. The acetone extract of Qualea grandiflora leaves showed higher inhibitory capacity of arginase (IC50 = 1.7 &plusmn; 01 &micro;g/mL) from the analyzed extracts. Among the flavonoids, the most potent compound was taxifolin (IC50 = 1.7 &plusmn; 0.2 &micro;M). The verbascosideo was the derivative of caffeic acid with greater potential for arginase inhibition (IC50 = 0.5 &plusmn; 0.2 &micro;M) The structures of these compounds can serve as a reference in developing new drugs for the control of leishmaniosis, which target arginase.

Submitted by isabela.moljf@hotmail.com (isabela.moljf@hotmail.com) on 2016-08-09T13:49:45Z No. of bitstreams: 1 anacristinaatalaalves.pdf: 6650791 bytes, checksum: 635340f2a060916599b1c5e7d0a1e1c2 (MD5) / Approved for entry into archive by Adriana Oliveira (adriana.oliveira@ufjf.edu.br) on 2016-08-09T14:42:46Z (GMT) No. of bitstreams: 1 anacristinaatalaalves.pdf: 6650791 bytes, checksum: 635340f2a060916599b1c5e7d0a1e1c2 (MD5) / Made available in DSpace on 2016-08-09T14:42:46Z (GMT). No. of bitstreams: 1 anacristinaatalaalves.pdf: 6650791 bytes, checksum: 635340f2a060916599b1c5e7d0a1e1c2 (MD5) Previous issue date: 2015-12-10 / CAPES - Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior / A anatomia ecológica vegetal investiga estratégias adaptativas das plantas quanto ao local que habitam. As folhas são os órgãos vegetativos com maior plasticidade fenotípica em resposta aos fatores ambientais: radiação solar, temperatura, umidade relativa do ar e velocidade do vento. As flores apresentam pistas de como ocorrem interações químicas com seus polinizadores. O Parque Estadual do Ibitipoca (PEIB), Minas Gerais, Brasil, apresenta um mosaico de fitofisionomias, e suas respectivas condições edafoclimáticas podem influenciar na adaptação das Orchidaceae, família de plantas mais representativa do parque, quanto à estrutura e química das folhas e dos recursos florais. Objetivou-se verificar: 1- A estrutura do elaióforo e a composição química de sua secreção em Oncidium donianum Bateman ex W.H.Baxter e O. warmingii Rchb.f.; 2- As adaptações morfo-anatômicas, fisiológicas e químicas das folhas das orquídeas Hadrolaelia coccinea (Lindl.) Chiron, Pleurothallis rubens Lindl. e Prosthechea pachysepala (Klotzsch) Chiron & V.P. Castro no interior (I) e na borda (B) da nanofloresta nebular; 3- As adaptações morfo-anatômicas, fisiológicas e químicas das folhas das orquídeas Zygopetalum maculatum (Kunth) Garay e Epidendrum secundum Jacq. em duas cotas altimétricas, à 1200 e 1784m. Aferições climáticas foram realizadas com o termohigrógrafo Instrutherm Thall 300 em todas as fitofisionomias estudadas nas quatro estações do ano. Elaióforos de flores jovens, maduras e senescentes de O. donianum e de O. warmingii foram coletados para análises morfo-anatômicas, microscópicas de varredura, confocal de varredura à laser, transmissão e cromatografia gasosa acoplada à espectrometria de massas (CG-EM). Para as análises morfo-anatômicas foram coletadas folhas de H. coccinea, P. rubens, P. pachysepala no I e B; e folhas de Z. maculatum e E. secundum, em diferentes altitudes. Quantificação de clorofilas, testes histoquímicos e análises químicas por cromatografia líquida de alta eficiência acoplada a detector de arranjo de fotodiodo (CLAEDAD) foram realizadas em três folhas coletadas de três indivíduos de cada espécie por fitofisionomia. O índice de plasticidade fenotípica (IPF) foi calculado para cada variável morfológica, anatômica e fisiológica. Para avaliar as diferenças de cada variável entre as duas fitofisionomias utilizou-se teste t-student ou teste não paramétrico de Mann-Whitney. A radiação solar global (µmmolm-2s-1) foi maior na B em comparação ao I. Os elaióforos de O. donianum e de O. warmingii são do tipo epidermal e secretam material lipídico representado quimicamente por hidrocarbonetos de cadeia longa. Hadrolaelia coccinea e P. pachysepala apresentaram respostas morfo-anatômicas semelhantes, configurando tipos funcionais similares. Pleurothallis rubens apresentou diferenças significativas apenas para três variáveis no inverno e duas no verão. Maiores teores de flavonoides foram produzidos por P. pachysepala e P. rubens na B, como resposta fotoprotetora. Diferenças significativas para produção de flavonoides foram observadas apenas nas estações verão e inverno, com maiores produções no I e B, respectivamente, para P. pachysepala e o contrário para P. rubens, o que provavelmente esteja relacionado à defesa constitutiva na primeira e fotoproteção na segunda. Hadrolaelia coccinea foi a orquídea de maior IPF, o que possibilita maiores sobrevivência às oscilações climáticas e amplitude de distribuição geográfica. A umidade relativa do ar e a velocidade do vento foram maiores na alta altitude. Zygopetalum maculatum e E. secundum apresentaram respostas adaptativas diferenciadas quanto às cotas altimétricas. Maiores teores de flavonoides foram produzidos por Z. maculatum na baixa altitude como resposta ao maior estresse hídrico. Epidedrum secundum obteve maior IPF. Este trabalho gerou contribuições para a compreensão da dinâmica das adaptações das orquídeas no PEIB e para adoção de medidas preventivas à sua conservação e ao ecossistema no qual elas se encontram. / Plant ecological anatomy investigates plants adaptive strategies as to the place they inhabit. The leaves are the vegetative organs of higher phenotypic plasticity in response to environmental factors: solar radiation, temperature, relative humidity and wind speed. The flowers have important clues as occurring chemical interactions with their pollinators. The Ibitipoca State Park (PEIB), MG, Brazil, presents a mosaic of vegetation types, and their soil and weather conditions may influence the adaptation of Orchidaceae, family most representative plants of the park. The goals were to assess: 1- The structure of the elaiophore and the chemical composition of its secretion in Oncidium donianum Bateman ex W.H.Baxter and O. warmingii Rchb.f. of the PEIB; 2- The morphological, anatomical, physiological and chemical leaves adaptations of orchids Hadrolaelia coccinea (Lindl.) Chiron, Pleurothallis rubens Lindl. and Prosthechea pachysepala (Klotzsch) Chiron & VP Castro inside and on the edge of nebular nanofloresta of PEIB; 3- The morphological, anatomical, physiological and chemical leaves adaptations of orchids Zygopetalum maculatum (Kunth) Garay and Epidendrum secundum Jacq. in two elevations, the 1200 and 1784m, of PEIB. Climate measurements were performed with Instrutherm Thal 300 thermohygrograph, in all vegetation types studied in the four seasons. Elaiophores of young, mature and senescent flowers of O. donianum and O. warmingii were collected for morphological and anatomical analysis, as well as for analyses with scanning confocal microscope, laser scanning microscope, transmission microscope and gas chromatography-mass spectrometry (GCMS). For morphological and anatomical analyzes were collected H. coccinea, P. rubens, P. pachysepala leaves in the nebular nanofloresta and edge; and Z. maculatum e E. secundum leaves at different altitudes. Quantification of chlorophylls, histochemical tests and chemical analysis by high-performance liquid chromatography coupled with photodiode array detector (HPLC-DAD) were conducted in three leaves collected from three individuals of each species per vegetation type. The phenotypic plasticity index (IPF) was calculated for each morphological, anatomical and physiological variable. To assess the significant difference of each variable between the two vegetation types we used Student t test or nonparametric Mann-Whitney.The global solar radiation (µmmolm-2s-1) was higher at the edge compared to nanofloresta nebular. The elaiophores of O. donianum and O. warmingii are epidermal and secrete lipid material chemically represented by long chain hydrocarbons. Higher flavonoid content was produced by P. pachysepala and P. rubens at the edge, as photoprotective response. The flavonoid synthesis was statistically significant only in the summer and winter seasons, with higher yields and inside edge, respectively, for P. pachysepala and the opposite to P. rubens, which is probably related to the constitutive defense in the first and the second photoprotection. Hadrolaelia coccinea was the most IPF, so most likely to survive the environmental fluctuations and shows greater geographical distribution. The relative humidity and wind speed were higher at 1784m. Zigopetalum maculatum and E. secundum showed different adaptive responses regarding altitudes. Higher average content of flavonoids was produced by Z. maculatum at the 1200m. Epidendrum secundum detected the higher IPF. This work led to contributions to the understanding of the dynamics of adaptations of orchids in PEIB and to adopt preventive measures for its conservation and ecosystem in which they operate.

Submitted by isabela.moljf@hotmail.com (isabela.moljf@hotmail.com) on 2017-05-02T11:21:06Z No. of bitstreams: 1 anapauladonascimentoduque.pdf: 2916683 bytes, checksum: a85aca62799c2ecaadcf342720c3f91d (MD5) / Approved for entry into archive by Adriana Oliveira (adriana.oliveira@ufjf.edu.br) on 2017-05-12T15:51:11Z (GMT) No. of bitstreams: 1 anapauladonascimentoduque.pdf: 2916683 bytes, checksum: a85aca62799c2ecaadcf342720c3f91d (MD5) / Made available in DSpace on 2017-05-12T15:51:11Z (GMT). No. of bitstreams: 1 anapauladonascimentoduque.pdf: 2916683 bytes, checksum: a85aca62799c2ecaadcf342720c3f91d (MD5) Previous issue date: 2013-05-02 / CAPES - Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior / O uso de plantas medicinais faz parte da história, sendo de grande importância medicinal por promover o tratamento de diversas doenças. O reino vegetal tem contribuição significativa no fornecimento de substâncias úteis aos seres humanos. A grande variedade e complexidade dos metabólitos vegetais é uma das chaves das atividades biológicas apresentadas. Para espécie Cecropia pachystachya já foram descritas as atividades anti-inflamatória, antitussígena, anti-asmática, anti-histamínica, anti-espasmódica, expectorante, hipoglicemiante, diurética, tônica, antihemorrágica, adstringente, hipotensora e cicatrizante. Assim, o presente estudo teve como objetivos avaliar a atividade antioxidante do extrato em acetato de etila das folhas de C. pachystachya e cicatrizante de um gel contendo esse extrato. Além disso, o perfil cromatográfico do extrato foi determinado por CLAE. A atividade antioxidante foi avaliada pelos métodos do DPPH, poder de redução e TBA. A atividade cicatrizante foi estudada in vivo através de feridas abertas realizadas cirurgicamente na pele de ratos tratados com veículo (gel de carbopol 1%) ou gel contendo extrato de C. pachystachya (ECP) 2% ou 5%, as quais foram avaliadas macro e microscopicamente após 3, 7, 14 ou 21 dias. Foi observada diminuição precoce do processo inflamatório em animais do grupo ECP 5% já aos 3 dias. Ao fim de 21 dias todos os grupos apresentavam resultados semelhantes, porém os grupos tratados com ECP 2% e ECP 5% apresentaram uma maior organização do processo de reparo tecidual. O extrato apresentou atividade antioxidante significativa, provavelmente devido à presença de flavonoides, como orientina e isoorientina identificados no extrato e que podem estar relacionados com a atividade cicatrizante encontrada. / The use of medicinal plants is part of History, which is of great importance to promote medical treatment of various diseases. The plant kingdom has significant contribution as providers of useful substances to humans. The variety and complexity of plant metabolites plays a key role in biological activities. There are reports that Cecropia pachystachya presents anti-inflammatory, antitussive, anti-asthmatic, antihistamine, antispasmodic, expectorant, hypoglycemic, diuretic, tonic, antihemorragica, astringent, hypotensive and wound healing activities. Thus, the present study aimed to evaluate the antioxidant activity of ethyl acetate extract of the leaves of C. pachystachya and the wound healing activity of a gel preparation containing this extract. Moreover, the chromatographic profile of the extract was determined by HPLC. Antioxidant activity was evaluated by DPPH, reducing power and TBA assays. The wound healing activity was evaluated in vivo by open wounds created surgically in rat skin, which were treated with vehicle (Carbopol gel 1%) or gel containing 2% or 5% C. pachystachya extract (ECP) and evaluated macroscopically and microscopically after 3, 7, 14 or 21 days. It was observed early inflammation reduction in the group treated with ECP 5% after 3 days. After 21 days, all groups showed similar results, although the groups treated with 2% and 5% ECP showed better tissue organization in the repair process. The extract showed remarkable antioxidant activity, probably due to the presence of flavonoids such as orientin and isoorientina identified in the extract, which may be related to the wound healing activity found for this plant.

Les proanthocyanidines (PA) du raisin jouent un rôle majeur dans les propriétés organoleptiques du vin notamment dans l'astringence et la stabilité de la couleur. Elles sont accumulées principalement dans la pellicule et les pépins pendant les premiers stades du développement de la baie. La biosynthèse des PA commence à être bien décrite, cependant certaines étapes restent à élucider.Une étude transcriptomic avait permis d'indentifier de nouveaux gènes potentiellemnt impliqués dans la biosynthèse des PA (Terrier et al., 2009). Parmi ces gènes figuraient 3 glucosyltransférases et 2 glucose- acyltransférases.Les trois glucosyltransférases VvgGT1, VvgGT2 et VvgGT3 présentent de fortes homologies entres elles et avec d'autres glucosyltransférases capables de catalyser la formation de glucose ester. Les transcrits sont exprimés durant les premiers stades de développement de la baie principalement dans les pépins et la pellicule mais aussi dans la pulpe pour VvgGT2. Les propriétés de ces 3 enzymes (Km, Vm, spécificité de substrat, effet du pH) ont été étudiées in vitro après production de protéines recombinantes. Les 3 VvgGTs sont capables de catalyser la synthèse d'esters de glucose en présence de dérivés d'acide hydroxybenzoique ou d'acide hydroxycinnamique.Deux acyltransférases VvGAT1 et VvGAT2 ont été isolées. Elle présente de fortes similarités avec des acyltransférases glucose-ester dépendantes de type serine carboxypeptidase like. Les transcrits sont exprimés surtout avant la véraison, dans les pépins et la pellicule pour VvGAT1 et dans la pulpe et les pépins pour la VvGAT2. L'expression hétérologue dans différents hôtes n'a pas permis de détecter d'activité enzymatique. Les analyses en microscopie confocale suggèrent que VvGAT1 fusionnée à une GFP est localisée dans des vésicules cytoplasmiques.L'implication successive des VvgGTs et des VvGATs dans la galloylation des PA et dans la synthèse d'esters d'acides hydroxcinnamiques est discutée. / Grape proanthocyanidins (PA) play a major role in organoleptic properties of wine, being involved in astringency and color stability. They are accumulated mainly in skin and seeds during early stages of berry development. Numerous structural genes involved in PA biosynthesis have already been identified even in grape, but some steps are still not documented.A previous transcriptomic study led to identify new genes putatively involved in the PA pathway (Terrier et al., 2009). Among them, 3 glucosyltransferases and 2 glucose acyl transferases were identified. The objective of this work is to clarify the function of these genes in the phenylpropanoid pathway.The three glucosyltransferases called VvgGT1, VvgGT2, VvgGT3 displayed high sequence similarities between them and with other plant glucosyltransferases able to catalyze the formation of glucose esters. The transcripts are expressed in the early stages of grape berry development, mainly in skins and seeds and also in the pulp for VvgGT2. The properties of these 3 enzymes (Km, Vm, substrate specificity, pH sensitivity) were studied in vitro after production of recombinant proteins. The three of them are able to catalyse the synthesis of glucose ester with derivates of hydroxybenzoic acids and hydroxycinnamic acids as substrates and with similar kinetic properties.Two glucose-acyltransferases called VvGAT1 and VvGAT2 were isolated. They displayed high sequence similarity with other Serine carboxypeptidase like acyltransferases-glucose dependent. The transcripts are expressed in early stages of grape berry development mainly in skins and seeds for VvGAT1 and in pulp and seeds for VvGAT2. Heterologous expression of the proteins in different hosts were unsuccessful. The confocal microscopy data suggest that VvGAT1 fused to GFP are localized in cytosolic vesicles.The successive involvement of those VvgGT and VvGAT in the galloylation of PAs and in the synthesis of hydroxycinnamic esters is discussed.

Le paludisme est responsable de plus de 438 000 morts en 2015. L’apparition et la propagation de P. falciparum résistants à l’artémisinine, l’antipaludique le plus puissant, est un problème majeur en Asie du Sud-Est. Un besoin impérieux de nouveaux médicaments présentant une action rapide et conservée vis-à-vis de ces parasites résistants se fait sentir pour remplacer l’artémisinine. Cette thèse porte sur le développement d’une nouvelle série chimique inspirée d’un biflavonoïde naturel, la lanaroflavone. Le composé tête-de-série MR27770 présente des propriétés intéressantes : il agit de façon plus rapide que l’artémisinine tout au long du cycle érythrocytaire du parasite, ses propriétés pharmacocinétiques sont prometteuses et il est partiellement actif chez la souris impaludée. De plus, il ne présente pas de résistances croisées avec l’artémisinine ou les autres antipaludiques. Son mécanisme d’action n’est pas connu mais pourrait impliquer un stress osmotique. Ce composé prometteur présente néanmoins une activité moyenne in vitro ce qui a motivé l’étude topologique de sa structure et mené à des dérivés optimisés. / Malaria was responsible for 438.000 deaths in 2015. The increasing proportion of P. falciparum parasites resistant to artemisinin, the most potent antimalarial, is a major concern in Southeast Asia. Fast acting drugs with unaltered activity versus the current multi-drug resistant strains are urgently needed to replace artemisinin. This thesis deals with a new antimalarial series based on the structure of an active natural biflavonoid called lanaroflavone. The lead compound, MR27770, displays interesting properties: it acts throughout the blood cycle faster than artemisinin, its pharmacokinetic properties are promising, and it exhibits a partial in vivo antimalarial activity. Plus, it has no cross-resistance with artemisinin or other antimalarials. Its mode of action is unknown and could imply an osmotic stress. This promising compound has however a mild in vitro activity which motivated the topological study of its structure and led to optimized derivatives.