Orientador: Wagner Vilegas / Banca: Isabele Rodrigues Nascimento / Banca: Norberto Peporine Lopes / Banca: Elfriede Marianne Bacchi / Banca: Daisy Maria Fávero Salvadori / Resumo: Neste trabalho foram estudadas folhas de Mouriri pusa Gardner e Mouriri elliptica Martius, pertencentes à família Melastomataceae. Espécies de Mouriri são utilizadas popularmente para problemas gastrointestinais, tais como úlceras. O estudo químico do extrato metanólico das folhas de M. pusa permitiu a identificação de uma flavona, dezessete flavonóis e dois flavan-3-óis, além de constatar a presença de taninos e saponinas. O estudo químico do extrato metanólico das folhas de M. elliptica permitiu a identificação de uma flavanona, dez flavonóis, dois falvan-3-óis e oito triterpenos pentacíclicos, além de constatar a presença de taninos e derivados de ácido ellágico. (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract: In this work was studied the leaves of Mouriri pusa Gardner and Mouriri elliptica Martius, belonging to the Melastomataceae family. Species of Mouriri are popularly used against gastrointestinal problems, such as ulcers. THe chemical study of the methanol extract from the leaves of M. pusa allowed the identification of one flavone, seventeen flavonols and two falvan-e-ols (besides the detection of tannins and saponins), where as the chemical study fo the methanol extract from the leaves of M. elliptica led to the identification of one flavanone, ten flavonols, two flavan-3-ols and eight pentacyclic triterpenes (besides tannins and acid ellagic derivates)... (Complete abstract click electronic access below) / Doutor

Orientador: Magali Monteiro da Silva / Banca: José Eduardo Corrente / Banca: Anderson Marliere Navarro / Resumo: As doenças crônicas não transmissíveis (DCNT) de maior importância são a obesidade, doenças cardiovasculares, diabetes melittus, neoplasias e doenças respiratórias crônicas. Os hábitos de vida, com destaque para a alimentação saudável, estão estreitamente associados as DCNT. O consumo de flavonoides faz parte de uma alimentação saudável, que é um dos fatores de prevenção contra as DCNT. O objetivo desde trabalho foi reunir informações sobre os hábitos de vida para prevenção das DCNT, identificar as principais fontes dietéticas de flavonoides consumidos por indivíduos adultos entrevistados e estimar o consumo de flavonoides totais e cítricos, comparando grupos de indivíduos com e sem doenças auto-referidas. Adultos de ambos os sexos (n=122), atendidos em um laboratório de análises clínicas de São Carlos, SP, responderam perguntas sobre dados sócio-demográficos, estado de saúde e peso e altura durante entrevista. Os participantes foram divididos em dois grupos, um com doenças auto-referidas e outro sem doenças autoreferidas. Os alimentos consumidos, de acordo com três recordatórios de 24 horas, e presentes no banco de dados de flavonóides em alimentos, foram utilizados para estabelecer as fontes de flavonóides da dieta consumida pelos indivíduos entrevistados e estimar o consumo de flavonóides totais e cítricos. Dados sócio-demográficos foram associados com as doenças usando qui-quadrado ou teste exato de Fisher. O modelo de medida repetida foi utilizado para comparar o consumo dos grupos. O excesso de peso, baixo consumo de frutas e hortaliças, elevado consumo de açúcar, gordura e sal, consumo excessivo de álcool, tabagismo, hipertensão arterial sistêmica, hipercolesterolemia e o sedentarismo são determinantes para o desenvolvimento de DCNT. As dietas saudáveis baseadas no consumo diário de frutas e hortaliças, cereais... / Abstract: The most important chronic non-communicable diseases (NCD) are obesity, cardiovascular disease, diabetes mellitus, cancer and chronic respiratory diseases. Life habits, with emphasis on healthy eating, are closely involved in the NCD. The consumption of flavonoids is part of a healthy diet, which is one of prevention factors against NCD. The aim of this work was gathering information about the lifestyle for prevention of NCD, identify the main dietary sources of flavonoids consumed by adults interviewed and estimate the intake of total and citrus flavonoids, comparing groups of individuals with and without self-reported diseases .Adults of both gender (n = 122) of a clinical laboratory in São Carlos, SP, asked about socio-demographic, health, weight and height during an interview. Participants were divided into two groups, one group of individuals with self-reported diseases and other without self-reported diseases. The food intake, according to three 24-hour recall and present in the database of flavonoids in foods were used to establish dietary sources of flavonoids consumed by the individuals and estimate the intake of total and citrus flavonoids. Sociodemographic data were associated with disease using Chi-square or Fisher's exact test. The repeated measures model was used to compare the consumption of the groups. Excess weight, low consumption of fruits and vegetables, high intake of sugar, fat and salt, excessive alcohol consumption, smoking, hypertension, hypercholesterolemia and a sedentary lifestyle are crucial to the development of NCD. Healthy diets based on daily consumption of fruits and vegetables, whole grains, legumes, protein sources with low fat, low salt intake and sugars and intake of fiber and liquids, spread throughout the day, prevent the NCD. Foods considered dietary sources of flavonoids consumed by the individuals interviewed were citrus, ... / Mestre

Orientador: Célia Maria de Sylos / Banca: Elaine Maria Ravasi Stéfano Simionato / Banca: Thaís Borges César / Resumo: Suco de laranja é fonte de compostos benéficos à saúde, como vitamina C, flavonóides e carotenóides, que lhe conferem também propriedade antioxidante. Apesar de muito ser investigado sobre seus compostos bioativos e consequente capacidade antioxidante, há poucos trabalhos que relatem estimação do potencial antioxidante em sucos fresco e pasteurizado de laranja, que são as principais formas disponíveis para consumo no Brasil. Sendo assim o objetivo desse trabalho foi verificar se há diferença no potencial antioxidante nesses dois tipos de sucos. Para isso teores de vitamina C, fenólicos, carotenóides, e flavonóides (flavanonas glicosiladas narirutina, naringina, hesperidina, e flavonas polimetoxiladas sinensetina, nobiletina e tangeritina) foram medidos, e a capacidade antioxidante determinada por três diferentes ensaios, FRAP, ORAC e MTT, sendo este último utilizado pela primeira vez com suco de laranja. Dos três ensaios utilizados, o ORAC foi o que mostrou maiores resultados (cerca 700 vezes maior que MTT e 50 vezes maior que FRAP) e que podem apresentar maior relevância biológica por envolver a geração de radicais livres (peroxilas) de significância patológica, apesar disso o método MTT demonstrou ser uma alternativa viável para medir a capacidade antioxidante de suco de laranja, já que as amostras reduziram o reagente, comprovando seu caráter redutor. O processo de pasteurização pareceu influenciar os conteúdos de fenólicos e carotenóides totais, tendo os sucos pasteurizados menor concentração em relação aos sucos frescos. Em relação ao teor de vitamina C, que variou de 325 a 530 mg/L, não houve diferença significativa entre os sucos frescos e pasteurizados. Quanto aos flavonóides os sucos frescos tiveram maiores concentrações de flavanonas glicosiladas, sendo a hesperidina a predominante (2637-3558 mg/L), enquanto os sucos pasteurizados tiveram maiores níveis de flavonas polimetoxiladas, tendo a ... / Abstract: Orange juice is source of beneficial compounds to health, such as vitamin C, flavonoids and carotenoids, which give also antioxidant properties. Although much be investigated on their bioactive compounds and antioxidant capacity resulting, there are few studies that report estimating the antioxidant potential in fresh and pasteurized juices of orange, which are the main forms available for consumption in Brazil. Thus the aim of this study was to observe the differences in the antioxidant potential in these two types of juices. For this vitamin C content, phenolics, carotenoids and flavonoids (flavanones glycosides narirutin, naringin, hesperidin and flavones polymethoxylated sinensetin, nobiletin and tangeritin) were measured, and the antioxidant capacity determined by three different assays, FRAP, ORAC, and MTT the latter being used for the first time with orange juice. Of the three trials used the ORAC was what showed better results (up to 700 times greater than MTT and 50 times greater than FRAP) and that may have greater biological relevance because it involves the generation of free radicals (peroxyl) of pathological significance, yet the MTT method proved to be a viable alternative to measure the antioxidant capacity of orange juice, with the samples reduced the reagent, demonstrating its reducing character. Pasteurization seem to influence the phenolic content and total carotenoids, with the pasteurized juice lower concentration compared to the fresh juice. Regarding the content of vitamin C, ranging 325-530 mg / L, was no significant difference between fresh and pasteurized juices. With regard to the fresh juice flavonoids had higher concentrations of flavanones glycosides, hesperidin is the predominant (2637-3558 mg/L), while the pasteurized juice had higher levels of flavones polymethoxylated, nobiletin having the highest concentration (10.86 to 16 mg/L). The juices showed similar responses from the antioxidant assays, indicating... / Mestre

Orientador: . Alexandre Suman de Araújo / Banca: Rose Mary Zumstein Georgetto Naal / Banca: José Roberto Ruggiero / Resumo: As ciclodextrinas são um grupo de oligossacarídeos cíclicos, que apresentam um formato de cone truncado com cavidade hidrofóbica e exterior hidrofílico. Isto faz com que as ciclodextrinas possam encapsular fármacos, o que propicia melhoras na biodisponibilidade, estabilidade e proteção das moléculas encapsulada. Por esta característica, as ciclodextrinas constituem uma nova classe de excipientes farmacêuticos de grande utilidade, por formar complexos de inclusão reversíveis com moléculas apolares e atuarem como moléculas carregadoras de substancias de interesse biológico e baixa solubilidade. Dentre os compostos com ação farmacológica encontra-se os flavonoides, em destaque a molécula de quercetina, um fármaco natural com diversas propriedades biológicas, como anticâncer, antioxidante, antialérgica, porém devido sua baixa solubilidade torna-se necessária a formação de complexos de inclusão com moléculas carregadoras como a β-ciclodextrina. O presente trabalho busca investigar, por meio de simulações computacionais, as diferentes formas de interação dos flavonoides com a ciclodextrina e do complexo formado por bicamadas lipídicas, a fim de contribuir para um melhor entendimento do processo de formação com complexo de inclusão ciclodextrina/flavonoide e de entrega do fármaco à célula / Abstract: The cyclodextrins are cyclic oligosaccharides that present a structure in form of a truncated cone, with a hydrophobic inside surfaces and hydrophilic outside. This causes the cyclodextrin can encapsulate drugs provides improvements in bioavailability, stability and protection of encapsulated molecules. By this feature, the cyclodextrins are a new class of pharmaceutical excipients useful for forming inclusion complexes with reversible nonpolar molecules and act as carrier of molecules with high biological interest and low solubility. Among the compounds with pharmacological action it is the flavonoid, featured the quercetin molecule; a drug with natural biological proprieties such as anticancer, antioxidant, antialergic, however, due to its low solubility, it becomes necessary the formation of inclusion complexes with carrier molecules. This study aims to investigate, through computer simulation, different forms of interaction of flavonoids with cyclodextrin and the complex formed by lipid bilayers, in order to contribute to a better understanding of the formation process with inclusion complex cyclodextrin/flavonoids and the drug delivery to cell / Mestre

Orientador: Eliana Aparecida Varanda / Banca: Denise Crispim Tavares / Banca: Taís Maria Bauab / Banca: Daisy Maria Fávero Salvadori / Banca: Lourdes Campaner dos Santos / Resumo: Os flavonoides exibem uma multiplicidade de atividades biológicas tanto in vivo como in vitro. No entanto, não existem dados suficientes para fornecer provas conclusivas sobre os efeitos benéficos da maioria das subclasses de flavonoides. Dessa maneira, neste estudo tornou-se relevante avaliar a mutagenicidade, antimutagenicidade, estrogenicidade e atividade antibacteriana dos flavonoides, com o objetivo de traçar o perfil relação estrutura-atividade, uma vez que a atividade biológica dos flavonoides depende da sua estrutura química. A mutagenicidade e antimutagenicidade foram avaliadas pelo teste de Ames, em cepas de Salmonella typhimurium TA98, TA100 e TA102, com e sem ativação metabólica. Para comparação do efeito protetor dos flavonoides foram utilizados 4-nitro-o-fenilenodiamina (NPD), azida sódica (AZS) e mitomicina C (MMC) como mutágenos de ação direta e benzo[a]pireno (B[a]P), aflatoxina B1 (AFB1) e 2-aminoantraceno (2-AA) como mutágenos de ação indireta. A atividade estrogênica foi avaliada por meio do ensaio com leveduras recombinantes (RYA - Recombinant Yeast Assay) e pelo ensaio de proliferação de células de câncer de mama humano (MCF-7⁄BUS) responsivas à estrógeno (E-screen). A determinação da atividade antibacteriana in vitro foi realizada neste estudo utilizando a técnica de diluição em microplacas, com as bactérias Staphylococcus aureus ATTC 25923 e Escherichia coli ATCC 25922. Os compostos avaliados foram: quercetina, kaempferol, luteolina, fisetina, crisina, galanina, flavona, 3-hidroxiflavona, 5- hidroxiflavona e 7-hidroxiflavona. No teste de Ames, a quercetina mostrou-se diretamente mutagênica na linhagem TA98 e antimutagênica... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract: The flavonoids exhibit a wide range of biological activities both in vivo and in vitro. However, there are insufficient data to provide conclusive evidence on the health effects of most flavonoid subclasses. Thus, is relevant to assess the mutagenicity, antimutagenicity, estrogenicity and antibacterial activity of flavonoids with the aim of tracing the structure-mutagenicity relationship profile, since the biological activity of flavonoids is governed by their chemical structure. The mutagenicity and antimutagenicity was assayed by the Ames test, with Salmonella typhimurium strains TA98, TA100 and TA102, carried out with and without metabolic activation. To compare the protective effect of flavonoids were used 4-nitro-o-phenylenediamine (NPD), sodium azide (AZS) and mitomycin C (MMC) as direct acting mutagens and benzo[a]pyrene (B[a]P), aflatoxin B1 (AFB1) e 2-aminoanthracene (2-AA) as indirect acting mutagens. The estrogenic activity was assayed by recombinant yeast assay (RYA) and by proliferation assay of cells of human breast cancer (MCF-7⁄ BUS) responsive to estrogen (E-screen). The determination of antibacterial activity in vitro was performed in this study by technique of dilution in microplates, with the bacteria Staphylococcus aureus ATTC 25923 and Escherichia coli ATCC 25922. The evaluated compounds were: quercetin, kaempferol, luteolin, fisetin, chrysin, galangin, flavones, 3-hydroxyflavone, 5- hydroxyflavone and 7- hydroxyflavone. In the Ames test, quercetin was directly mutagenic... (Complete abstract click electronic access below) / Doutor

Submitted by Automa??o e Estat?stica (sst@bczm.ufrn.br) on 2017-04-24T18:20:13Z No. of bitstreams: 1 AntonioDeAnchietaCamaraJunior_DISSERT.pdf: 21070528 bytes, checksum: bc9c34ff6fd37e4d09b586b82e55c977 (MD5) / Approved for entry into archive by Monica Paiva (monicalpaiva@hotmail.com) on 2017-04-24T18:29:24Z (GMT) No. of bitstreams: 1 AntonioDeAnchietaCamaraJunior_DISSERT.pdf: 21070528 bytes, checksum: bc9c34ff6fd37e4d09b586b82e55c977 (MD5) / Made available in DSpace on 2017-04-24T18:29:24Z (GMT). No. of bitstreams: 1 AntonioDeAnchietaCamaraJunior_DISSERT.pdf: 21070528 bytes, checksum: bc9c34ff6fd37e4d09b586b82e55c977 (MD5) Previous issue date: 2014-10-07 / Conselho Nacional de Desenvolvimento Cient?fico e Tecnol?gico (CNPq) / Mol?culas bioativas tais como flavonoides, antioxidantes e vitaminas podem ser incorporadas a produtos aliment?cios com apelo funcional. No entanto, flavonoides lipossol?veis como a fisetina possuem biodisponibilidade reduzida quando submetidos ao pH do trato gastrointestinal humano. Nesse caso, a microencapsula??o desse tipo de bioativo em c?lulas de levedura Saccharomyces cerevisiae atrav?s de choque osm?tico ? uma estrat?gia promissora para proteger e transportar essas subst?ncias in vivo. Contudo, at? o presente n?o havia sido relatado estudo quantitativo sobre esse processo. Desse modo, este trabalho avaliou a efici?ncia do processo de encapsula??o (EE) e o teor de fisetina internalizada (FI) nas c?lulas da levedura atrav?s de dois m?todos de quantifica??o: (1) cromatografia l?quida de alta efici?ncia (CLAE) e (2) espectrofotometria UV-Vis?vel. Os par?metros operacionais foram determinados por meio do delineamento composto central rotacional 23. As vari?veis analisadas foram a concentra??o de fisetina (C), a press?o osm?tica de desidrata??o (P) e a temperatura do processo (T). A caracteriza??o das c?lulas foi realizada atrav?s de microscopia confocal a laser (MCL), microscopia eletr?nica de varredura (MEV) e viabilidade celular. Os melhores resultados foram obtidos pelo m?todo 2 nas condi??es dos pontos centrais (C = 2,00 mg.mL-1, P = 30 MPa e T = 25 ?C), onde a EE = 33,30 % e teor de FI = 1,20 mg. Os ensaios de MCL mostraram que a etapa de lavagem com etanol, indispens?vel no m?todo 1, influenciou negativamente a EE e o teor de FI. As imagens em alta resolu??o capturadas pela MEV mostraram que o choque osm?tico n?o afetou a estrutura encapsulante do envelope celular da levedura. A manuten??o das c?lulas em solu??es com P ? 30 MPa reduziu ligeiramente a viabilidade celular (84 % vi?veis) e a compara??o com a amostra controle n?o mostrou diferen?a significativa (p.< 0,05). Os resultados encontrados demonstram o forte potencial do uso das leveduras como matrizes encapsulantes para componentes bioativos sens?veis. Estes resultados demonstram que essa t?cnica pode ser aplicada com sucesso na produ??o de produtos aliment?cios com alto teor de compostos bioativos. / Mol?culas bioativas tais como flavonoides, antioxidantes e vitaminas podem ser incorporadas a produtos aliment?cios com apelo funcional. No entanto, flavonoides lipossol?veis como a fisetina possuem biodisponibilidade reduzida quando submetidos ao pH do trato gastrointestinal humano. Nesse caso, a microencapsula??o desse tipo de bioativo em c?lulas de levedura Saccharomyces cerevisiae atrav?s de choque osm?tico ? uma estrat?gia promissora para proteger e transportar essas subst?ncias in vivo. Contudo, at? o presente n?o havia sido relatado estudo quantitativo sobre esse processo. Desse modo, este trabalho avaliou a efici?ncia do processo de encapsula??o (EE) e o teor de fisetina internalizada (FI) nas c?lulas da levedura atrav?s de dois m?todos de quantifica??o: (1) cromatografia l?quida de alta efici?ncia (CLAE) e (2) espectrofotometria UV-Vis?vel. Os par?metros operacionais foram determinados por meio do delineamento composto central rotacional 23. As vari?veis analisadas foram a concentra??o de fisetina (C), a press?o osm?tica de desidrata??o (P) e a temperatura do processo (T). A caracteriza??o das c?lulas foi realizada atrav?s de microscopia confocal a laser (MCL), microscopia eletr?nica de varredura (MEV) e viabilidade celular. Os melhores resultados foram obtidos pelo m?todo 2 nas condi??es dos pontos centrais (C = 2,00 mg.mL-1, P = 30 MPa e T = 25 ?C), onde a EE = 33,30 % e teor de FI = 1,20 mg. Os ensaios de MCL mostraram que a etapa de lavagem com etanol, indispens?vel no m?todo 1, influenciou negativamente a EE e o teor de FI. As imagens em alta resolu??o capturadas pela MEV mostraram que o choque osm?tico n?o afetou a estrutura encapsulante do envelope celular da levedura. A manuten??o das c?lulas em solu??es com P ? 30 MPa reduziu ligeiramente a viabilidade celular (84 % vi?veis) e a compara??o com a amostra controle n?o mostrou diferen?a significativa (p.< 0,05). Os resultados encontrados demonstram o forte potencial do uso das leveduras como matrizes encapsulantes para componentes bioativos sens?veis. Estes resultados demonstram que essa t?cnica pode ser aplicada com sucesso na produ??o de produtos aliment?cios com alto teor de compostos bioativos.

Chalconas e flavonoides são compostos comumente presentes em plantas, e constituem uma grande família de produtos naturais com um amplo espectro de atividades farmacológicas. Mudanças na estrutura destas moléculas tem se provado úteis no desenvolvimento de novos agentes terapêuticos, sendo assim, esses compostos tem sido intensamente estudados. Métodos computacionais como a dinâmica molecular (DM) são ferramentas poderosas para o acesso a informações de difícil obtenção por outros meios experimentais. Campos de força acurados são essenciais para a descrição de sistemas biológicos em simulações de DM, assim, um conjunto de parâmetros associado a um composto necessita ser cuidadosamente calibrado para garantir a obtenção de resultados confiáveis. Considerando a relevância dessa família de moléculas e a falta de parâmetros validados para a estrutura básica de chalconas e flavonoides no campo de força GROMOS, o presente trabalho tem como objetivo prover um novo conjunto de parâmetros para a simulação destes compostos. Um protocolo que combina cálculos ab initio e simulações de DM foi aplicado para obter novas cargas atômicas e parâmetros torsionais Propriedades experimentais como densidade e entalpia de vaporização foram usadas como comparação aos valores obtidos em simulações, como forma de validação dos parâmetros. A comparação dos perfis torsionais obtidos por cálculos quânticos e por mecânica molecular auxiliou na geração de novos potenciais que permitem uma descrição conformacional mais acurada dos diedros de interesse. Diversos ajustes em grupos de cargas foram feitos, e os valores para propriedades termodinâmicas obtidos nas simulações estão em concordância com os dados experimentais. Simulações de metadinâmica foram realizadas para avaliar o comportamento conformacional de chalconas e flavonoides completos, e contatos de NOE foram medidos durante simulações de DM, obtendo uma reprodução quase completa das distâncias entre alguns grupos de prótons. O protocolo empregado gerou parâmetros de campo de força que reproduzem bem dados experimentais, e espera-se que estes resultados contribuam para a realização de estudos computacionais acurados envolvendo chalconas e flavonoides. / Chalcones and flavonoids are polyphenolic compounds extensively distributed in plants, constituting a large family of natural products with a broad spectrum of pharmacological activities. Changes in their structure have been proven useful for the development of new therapeutic agents, thus these biomolecules are being intensively studied and modified. Computational methods such as molecular dynamics (MD) simulations are powerful tools to assess information that is difficult to obtain experimentally. Accurate force fields are essential for describing biological systems in a MD simulation, thus a parameter set associated to a certain compound need to be carefully calibrated to ensure reliable results. Considering the relevance of this family of molecules and the lack of validated parameters for the basic structure of chalcones and flavonoids in the GROMOS force field, this work intends to provide a new parameter set for the simulation of these compounds. We employed a protocol combining ab initio calculations and MD simulations for the obtention of new atomic charges and torsional parameters Experimental properties such as density and enthalpy of vaporization were compared to the calculated values in order to validate the parameters. A fitting of molecular-mechanical to quantum-mechanical torsional profiles was performed for each of the dihedrals of interest in the structures, generating new torsional potentials that provide accurate description of conformational behavior. Additionally, adjustments in charge groups were made in topologies used for the MD simulations and the obtained values of the thermodynamic properties are in good agreement with experimental data. Metadynamics simulations were performed to evaluate the conformation of complete chalcones and flavonoids, and NOE contacts during MD simulations were measured, obtaining an almost complete reproduction of inter-proton interactions. The employed protocol generated force field parameters that reproduce well the target data and we expect they will contribute to more accurate computational studies on the biological role of chalcones and flavonoids.

O cultivo de plantas das espécies de Vitis (Vitaceae), conhecidas popularmente como videiras, representa uma das atividades econômicas mais proeminentes no Sul do Brasil. Figuram entre as espécies mais ricas em compostos polifenólicos, sendo os mesmos responsáveis por inúmeras atividades biológicas e farmacológicas importantes, dentre as quais, a antioxidante. Neste contexto, este trabalho objetivou analisar quali e quantitativamente os principais grupos polifenólicos encontrados em extratos de videiras, os antocianos e flavonóides, bem como realizar ensaio para avaliação da atividade antioxidante in vitro. Neste sentido foram desenvolvidos e validados dois métodos por cromatografia líquida de alta eficiência, com detector UV/VIS. A análise dos compostos fenólicos incluíram a utilização de duas colunas diferentes, sendo uma constituída por sílica C18 e outra RP-18 com partículas híbridas contendo ligações etano-silicone. Em ambos os métodos foram utilizados sistema de eluição em gradiente, cuja composição das fases móveis foram água e acetonitrila acificadas com ácido trifluoracético. Os métodos desenvolvidos foram validados segundo as normas vigentes e atenderam aos parâmetros de validação como especificidade, linearidade, precisão, sensibilidade, exatidão e robustez nas faixas de concentração avaliadas. O presente estudo também investigou a atividade antioxidante in vitro dos extratos de videira através do método potencial antioxidante reativo total (TRAP), o qual foi otimizado e validado segundo normas internacionais, utilizando Trolox como referência. A partir deste método também foi possível avaliar a reatividade total antioxidante (TAR). Todas as concentrações testadas apresentaram reatividade instantânea inferior ao composto de referência, entretanto, demonstraram atividade antioxidante superior ao Trolox 200 nM. / The cultivation of plants from Vitis species (Vitaceae), popularly known as grapevine, is one of the most prominent economic activities in southern Brazil. The Vitis species is one of the plants that is most rich in polyphenolic compounds, responsible for numerous important pharmacological and biological activities, such as antioxidant activity. In this context, this study aimed to analyze qualitatively and quantitatively the principal groups encountered in grapevine extracts, the anthocyans and flavonoids, and to assay their antioxidant activities in vitro. For this purpose, two methods were developed and validated using high-performance liquid chromatography, employing a UV/VIS detector. The analysis of phenolic compounds included the utilization of two different columns: a column constituted by silica C18 and other RP18 column with bridged ethane-silicon hybrid particles. In both methods, a gradient system was used, with water and acetonitrile acidified with trifluoroacetic acid as a mobile phase. The methods developed were validated according to ICH evaluating parameters such as specificity, linearity, precision, sensibility, accuracy and robustness in the concentration range evaluated. The present study also analyzed the antioxidant activity in vitro of grapevine extracts employing the Total Reactive Antioxidant Potencial (TRAP) method, which was optimized and validated according to international patterns, using Trolox as a reference substance. This method also allowed evaluation of the total instantaneous reactivity (TAR). In all concentrations, the samples presented lower instantaneous reactivity than that of the reference compound. In contrast, the samples presented higher antioxidant activity than Trolox 200 nM.

As plantas pertencentes à família das leguminosas apresentam um grande interesse econômico, sendo que o Brasil é um país com vasta utilização de plantas desta família. Neste contexto, destaca-se a leguminosa Phaseolus vulgaris L. popularmente conhecida como feijão, que contém uma boa fonte de constituintes bioativos. Espécie nativa da América Central e dos Andes peruanos possui grande importância econômica para o Brasil. Em sua composição química podemos encontrar os flavonóides. Inúmeros artigos científicos descrevem as atividades dos flavonóides como antioxidantes, antimutagêncio, anticarcinogênico e na captação de nitrogênio durante o desenvolvimento da planta. Sendo esta leguminosa um dos alimentos mais consumidos no mundo e de larga importância econômica, o presente trabalho visou avaliar o perfil cromatográfico do extrato metanólico de 47 cultivares de feijão através da técnica de Cromatografia Líquida de Alta Eficiência (CLAE) e também a validação do seu método. O material vegetal, sementes, teve seu teor de umidade estabelecido pelo método gravimétrico. Através do perfil cromatográfico das sementes dos cultivares de feijão, foi possível identificar a presença de flavonóides como a astragalina, um heterosídeo do canferol. O método foi devidamente validado por Cromatografia Líquida de Alta Eficiência (CLAE) de acordo com os métodos preconizados na literatura. Os cultivares TB 0224, TB0226, TB 0309, Rosinha Precoce e Amarelo Iolanda, foram os que apresentaram teor maior de astragalina, demonstrando que os feijões de cor possuem maior composição de deste composto. / Plants belonging to the legume family have a big economic interest, being Brazil is a country with extensive use of plants in this family. In this context, we highlight the legume Phaseolus vulgaris L. popularly known as beans, which are a good source of bioactive compounds. This species is native of southern Brazil and the main food consumed by the population. In its chemical composition can meet the flavonoids. Numerous scientific articles describing the activities of flavonoids as antioxidants, antimutagênic, anticarcinogenic and nitrogen uptake during plant development. Since this is a legume consumed more food in the world and of great economic importance, this study sought to evaluate the chromatographic profile of the methanol extract of 47 cultivars of beans through the technique of High Performance Liquid Chromatography (HPLC) and also the validation of their method. The plant material, seeds, water content was established by gravimetric method. Through the chromatographic profile of the seeds of bean cultivars, it was possible to identify the presence of flavonoids and astragalin, a kaempferol heteroside. The method was validated for High Performance Liquid Chromatography (HPLC) according to the methods suggested in the literature. The cultivars with colored TB 0224, TB0226, TB 0309, Rosinha Precoce and Amarelo Iolanda, were those with a higher content of astragalin, demonstrating that colored beans have a higher composition of astragalin.

Les flavonoïdes sont des pigments d’origine naturelle conférant leurs couleurs aux fleurs et aux fruits, identifiés dans plus de quatre milles espèces. Les flavonoïdes sont classés selon leur structure chimique de base formée par deux cycles aromatiques reliés par trois carbones : C6-C3-C6, chaîne souvent fermée en un hétérocycle oxygéné hexa- ou pentagonal. Les flavonoïdes présentent des activités physiologiques qui leurs permettent d’être utilisés comme médicaments notamment pour leur pouvoir à piéger les radicaux libres. Les activités de flavonoïdes ont fait l’objet de nombreux articles de revue. Parmi les flavonoïdes, la quercétine est la molécule la plus distribuée dans la nature qui présente la meilleure activité anti radicalaire et aussi antiinflammatoire comparativement aux autres molécules de la même famille. En général, les flavonoïdes et la quercétine en particulier présentent une solubilité très limitée dans l’eau, cette limitation réduit leur absorption/pénétration et donc leur efficacité. En partant de l’idée que la peau est le l’organe le plus grand du corps humain et aussi l’organe le plus exposé au stress oxydant lié aux radiations UV et aux produits corrosifs et irritants, la quercétine est donc une molécule antioxydante de choix pour être appliquée sur la peau. Le premier objectif de thèse a été de développer plusieurs formulations nanométriques de quercétine afin d'augmenter sa solubilité dans l’eau et améliorer ses propriétés physico chimiques. Le deuxième objectif sera de comparer ces formulations en termes de capacité de chargement de quercétine, de toxicité vis à vis des cellules HaCaT (kératinocytes) THP-1 (monocytes) et Vero (épithéliale), et enfin le maintien de l’activité de la quercétine sur les cellules in vitro, pour mettre in fine en évidence une augmentation de la pénétration cutanée la quercétine in vivo.Dans ce projet, trois approches de formulations nanométriques (smartCrystals®, nanocapsules lipidiques et liposomes) ont été testées pour améliorer la solubilité de la quercétine. Les formulations sont optimisées en termes de procédé de préparation (transposition industrielle) et de composition des excipients pour augmenter la quantité de quercétine formulée. Les formulations ont été caractérisées sur plusieurs paramètres : taille, PDI, taux de chargement en quercétine, état cristallin et cinétique de libération de quercétine in vitro. Ensuite, les formulations ont été comparées entre elles sur les cellules HaCaT et THP-1 avec détermination de leur toxicité et activité protectrice. Enfin, deux formulations (quercétine smartCrystals® avec le TPGS et quercétine LNC 20) ont été sélectionnées et comparées in vivo pour évaluer l’amélioration de la pénétration cutanée de quercétine. Ce projet propose une solution pour formuler la quercétine d’une façon pertinente et efficace qui pourra être extrapolée au niveau industriel pour des applications cutanées de molécules peu solubles dont l'efficacité est limitée par leur faible pénétration cutanée. / Flavonoids are plants pigments. Flavonoids can be observed by the naked eye as they form the amazing colors of flower petals. Flavonoids are classified on the basis of their chemical structure composed of two aromatic cycles connected by three carbons: C6-C3-C6, chains are closed in hexa- or pentagonal oxygenated heterocyclic ring. Flavonoids present interesting physiological activates that permit their usefulness as medicaments, especially for their free radical scavenging ability. Indeed, flavonoids activates were the object of numerous review articles.Among flavonoids, quercetin is the molecule the most distributed in nature that presents the strongest antioxidant and antiinflammatory activities in comparison to other molecules of this family. In general flavonoids and specially quercetin present poor water solubility, thus limiting their absorption/penetration and as a result their efficiency.Starting for the idea that the skin is the largest organ of the human body and the organ, which the most exposed to oxidative stress due to UV irradiation or other corrosive and irritating chemicals. Quercetin is a candidate for skin supplementation with exogenous antioxidant. The first objective of the thesis is to develop several formulations at the nanometric range for quercetin, in order to increase its water solubility and to enhance its physicochemical properties. The second objective is to compare these formulations in terms of quercetin loading capacity, cellular toxicity of quercetin and its formulations on HaCaT cells (keratinocytes), THP-1 cells (monocytes) and Vero cells (epithelial). Then, the protective activity of quercetin in vitro on cells to finally put in evidence the increase of quercetin in vivo skin penetration in formulations.In this project, three nanoformulations approaches (smartCrystals®, lipid nanocapsules and liposomes) were tested for the increase of quercetin water solubility. The formulations were optimized for scale up to industrial scale at the level of preparation method, also in the excipients compositions for higher affinity to quercetin. The formulations were characterized in terms of particle size, PDI, quercetin loading, crystallinity evaluation and quercetin in vitro release profile. Then, formulations were compared in interaction with HaCaT and THP-1 cells for their cellular toxicity and protective activity. Finally, two formulations (quercetin smartCrystals® with TPGS and quercetin lipid nanocapsules 20) were selected and compared for the enhancement of the in vivo skin penetration of quercetin.This project propose a solution for the successful formulation of quercetin enabling its efficient skin delivery. This project can be extrapolated to industrial level for quercetin and other poorly water soluble molecules that present limited efficiency due to their low skin penetration capacity.