Base teórica: O vírus da imunodeficiência humana (HIV) é responsável pela contaminação de mais de 38,6 milhões de pessoas no mundo, sendo que 4 a 5 milhões estão co-infectadas pelo vírus da hepatite C (HCV). No Brasil, estima-se que aproximadamente 0,5% da população brasileira adulta seja portadora do HIV. A prevalência de co-infecção é altamente variável, dependendo das prevalências das infecções pelo HCV, pelo HIV e de usuários de drogas nas populações estudada. O genótipo do HCV é um dos principais fatores prognósticos para a resposta viral sustentada após tratamentos com interferon e, consequentemente, determinante também da relação de custo-benefício do tratamento. Estudos realizados em diferentes partes do mundo mostraram prevalências distintas dos genótipos do HCV entre países e entre regiões de um mesmo país. Estudos envolvendo centros gaúchos têm mostrado prevalência elevada do genótipo 3 em relação à maioria dos estados brasileiros. Poucos dados sobre a genotipagem em pacientes co-infectados estão disponíveis em nosso meio. Na medida em que a sobrevida dos pacientes com AIDS aumenta, através do controle de infecções oportunistas e manutenção da imunidade, a hepatopatia crônica relacionada à infecção pelo HCV em portadores do HIV torna-se uma das importantes causas de morbimortalidade entre os portadores do HIV, exigindo, por parte dos gestores e serviços de saúde em todo mundo atenção crescente. Objetivos: Determinar a prevalência e os fatores associados à co-infecção HIV-HCV e aos genótipos do HCV em pacientes em atendimento em um centro de referência ambulatorial para tratamento do HIV/AIDS em Porto Alegre, Brasil. Verificar também a prevalência de resolução espontânea da hepatite C e características associadas. Métodos: Estudo Transversal: foram revisados todos os prontuários de pacientes registrados no serviço para determinação da prevalência de co-infecção. Estudo de Caso-Controle: foram consecutivamente incluídos como casos, os portadores de co-infecção HIV-HCV, e como controles, os pacientes com sorologia negativa para o HCV em atendimento com o mesmo médico. Pesquisa do HCV-RNA e genotipagem do HCV foi realizada em todos os casos. Resultados: Entre os 1313 pacientes em acompanhamento, foram anti-HCV positivos 357 (31,2%) dos 1143 pacientes para os quais se obteve sorologia para o HCV. Através de amostragem consecutiva foram incluídos 227 casos (63% homens; 40,3±8,7 anos) e 370 controles (44,6% homens; 38,9±9,8 anos). Após análise por regressão logística permaneceram associados à co-infecção sexo masculino, menor escolaridade, compartilhamento de objetos de higiene pessoal, uso de drogas injetáveis, uso de cocaína inalada, uso de crack, e consumo de maconha. Menor contagem de linfócitos CD4 e história de tuberculose também foi observada entre os pacientes co-infectados HIV-HCV. Entre os 207 indivíduos que realizaram pesquisa do HCV-RNA foi detectada viremia em 83,6% dos casos. Observou-se o genótipo 1 em 81,5%, genótipo 2 em 1,7% e genótipo 3 em 16,2%. Conclusão: Neste estudo identificaram-se fatores de risco para co-infecção pelo HCV em portadores do HIV. As características associadas à transmissão sexual não foram confirmadas. Acrescentou-se informação sobre um novo fator de risco - o compartilhamento de objetos de uso pessoal – ao conjunto de exposições associadas à co-infecção HIV-HCV. A alta prevalência de co-infecção encontrada e o amplo predomínio do genótipo 1 devem ter implicação direta sobre o planejamento de políticas públicas para a prevenção, o diagnóstico e o tratamento dos portadores do HIV. / Introdution: It has been estimated that 38.6 million people are infected by the human immunodeficiency virus (HIV) all over the world, being 4 to 5 million coinfected with hepatitis C virus (HCV). In Brazil, it is estimated that about 0.5% of the adult population is infected with HIV. The prevalence of HIV-HCV coinfection is directly associated with the characteristics of the population under study, particularly the use of injecting drugs, the source of the participants, and the frequency of each infection. Of the risk factors shared by HIV and HCV infections, injecting drug use (IDU) has been shown to be the most important, followed by exposure to contaminated blood at transfusions. However, 25-30% of individuals infected with HCV deny exposure to parenteral risk factors. The response rate to HCV infection treatment is lower than 50%, and treatments may have clinically important adverse effects. The response to HCV treatment depends on the genotype of the virus. Beside the prognostic importance, HCV genotype is a key factor for the cost-effectiveness of treatment. Study Aims: This study investigated the prevalence of HIV-HCV coinfection, HCV RNA carriers, and HCV genotypes in patients attending to an AIDS outpatient reference center in Southern Brazil. Independent risk factors for HIV-HCV coinfection using a hierarchical conceptual approach to multivariate analysis were detected. Methods: Cross Sectional Study: all registries from 3490 patients with HIV infection were reviewed. Case-Control Study: Cases were HIV infected subjects identified among 357 patients coinfected by HCV. Controls were selected among 786 patients with HIV infection and anti-HCV negative test. Results: The registry has 3490 patients recorded. Of this total, 1313 (37.6%) were currently under follow up, and 1143 were tested for anti-HCV. The prevalence of anti-HCV was 31.2% (95%CI 28.5-33.9%). Two hundred and twenty seven cases, out of 357, and 370 controls, out of 786, were interviewed, and 207 had RNA HCV testing performed. Genotype 1 was more frequent (81.5%; 95% CI 75.7-87.3), followed by genotype 3 (16.2%; 95% CI 10.7-21.7), and few genotype 2 cases (1.7%; 95% CI 0-3.6). HCV RNA was negative in 16.4% of the study participants. Male gender, being 30 to 49 years of age, elementary school education, family income lower than one minimum wage (approximately US$160), earlier age of the first sexual intercourse, higher number of sexual partners in the previous month, sharing of personal hygiene objects, using of injecting drugs, and the use of crack cocaine were associated to HIV-HCV coinfection even after adjustment for confounding factors. The practicing of anal sex became statistically associated with HIV-HCV coinfection only after multivariate analysis. Conclusion: About a third of the patients on treatment for HIV/AIDS in Porto Alegre present coinfection by HCV. The virus with genotype 1 is the most prevalent among the infected by HIV, but beside male gender, there is no apparent reason for this distribution. Despite the presence of infection by HIV, some patients have spontaneous clearing of the HCV. A small innoculum may favor the spontaneous negativation of RNA HCV. We identified a risky profile for HCV coinfection in patients with HIV. The risk of sharing personal hygiene objects is a novel finding and may explain part of the transmission of virus C even in non-AIDS patients. The high prevalence of coinfection by HCV in patients under treatment for HIV, with the predominance of genotype 1 virus, have direct implications for the planning of public health policies for the treatment of persons infected with HIV.

Introdução: Estima-se que existam no mundo 200 milhões de pessoas infectadas pelo HCV, principal agente etiológico responsável por 90 a 95% dos casos de hepatite transfusional não A e não B. As altas percentagens de cronificação da doença, seu potencial evolutivo para cirrose e hepatocarcinoma tornam a hepatite C um sério problema de saúde pública. Dados da Organização Mundial da Saúde estimam que 2,5% a 4,9% da população brasileira esteja infectada pelo HCV, o que significa 3,9 a 7,6 milhões de pessoas com risco de desenvolver cirrose ou hepatocarcinoma. A co-infecção HCV e HIV é relativamente freqüente entre os usuários de drogas ilícitas e os hemofílicos, ocorrendo entre 50% e 75% dos casos. A presença de infecção pelo HIV pode acelerar a evolução da infecção crônica do HCV para cirrose e descompensação hepática bem como aumentar os níveis de viremia pelo HCV .Os genótipos do HCV constituem fator preditivo independente para a resposta ao tratamento anti-viral. As evidências indicam que o genótipo 1 e 4 estão associados a uma pobre resposta ao tratamento com interferon, seja em monoterapia ou em combinação com ribavirina, ao contrário dos genótipos 2 e 3. Os melhores resultados, medidos pelo parâmetro virológico para pacientes com genótipo 2 ou 3, são alcançados com períodos de 6 meses de tratamento, enquanto que pacientes com genótipo 1 necessitam prolongar o tempo de tratamento por um ano. Objetivos: Avaliar a proporção dos diferentes genótipos e subtipos entre os portadores de hepatite C que realizaram genotipagem na 11ª Coordenadoria Regional de Saúde (CRS) e a taxa desses pacientes que realizaram tratamento disponível no Sistema Único de Saúde (SUS). Avaliar a prevalência de co-infecção (hepatite A, B e HIV) entre os pacientes portadores de HCV e sua associação com genótipo do HCV. Descrever a prevalência de fatores de risco para infecção pelo vírus C na amostra. Avaliar a associação dos genótipos do HCV com idade, sexo e outros fatores de risco para infecção pelo HCV. Avaliar a taxa de pacientes com diagnóstico confirmado que recebem pelo menos uma dose de tratamento com interferon/ribavirina. Métodos: Estudo transversal, de pacientes com diagnóstico de HCV encaminhados para genotipagem em laboratório de referência no interior do estado do RS - Brasil. As informações foram obtidas dos registros do laboratório, do Sistema Nacional de Agravos e Notificação e dos prontuários dos pacientes. Os pacientes que receberam pelo menos uma dose do tratamento foram identificados através do registro da Assessoria de Medicamentos Especiais (AME) do estado do RS. A taxa de resposta foi identificada pela negativação do HCV por teste de PCR, 24 e 48 semanas após o término do tratamento. A identificação dos genótipos foi realizada pela técnica de Restriction Fragment Length Polymorphism (RFLP) “in house”. Descreveram-se os dados através de medidas de freqüência e de tendência central, calculando-se intervalo de confiança de 95% quando cabível. Analisou-se a associação de fatores de risco com o genótipo através do teste Quiquadrado e Teste t de Student. As associações de co-infecção por HIV e de tratamento e resposta viral sustentada com o tipo de genótipo foram analisadas através do teste exato de Monte Carlo. Para identificação de fatores independentemente associados aos diferentes genótipos empregou-se regressão logística multinomial. Estimaram-se as razões de prevalência através de regressão de Poisson. Resultados: Foram incluídos 441 pacientes, de 41,1 ±12,0 anos, sendo 56,5% homens. A proporção de genótipo 1 foi de 41,5%, genótipo 2 de 19,3% e genótipo 3 de 39,2%. Três pacientes (0,7%; IC95% 0 - 1,5) apresentaram co-infecção HBV/HCV e 38 dos 237 pacientes com informação sobre HIV foram positivos (16% IC 95% 9.5-13.7). Não houve associação de co-infecção por HIV com genótipo. A taxa de pacientes tratados foi de 37,0%. De 52 pacientes avaliáveis, 63,5% apresentaram resposta viral sustentada (RVS), sendo 9 pacientes com genótipo 1 (64,3%), 14 com genótipo 2 (87,5%) e 10 com genótipo 3 (45,5%; P=0,026). Observou-se associação significativa entre sexo feminino e genótipo 2 e faixa etária maior para genótipo 2 (52,2 ±12,8 anos). Fatores de risco para infecção por HCV foram tratamento cirúrgico, uso de drogas injetáveis e inaláveis, tratamento dentário (p<0,05%). Dos pacientes estudados, 163 (37%) realizaram tratamento em algum momento do estudo e nestes a taxa de respondedores para genótipo 1, 2 e 3 foram de 64,3%, 87,5% e 45,% respectivamente. Conclusão: Observa-se maior proporção do genótipo 1, seguido do genótipo 3 o qual foi mais freqüente que o descrito em outros estudos realizados no RS e Brasil. A prevalência de co-infecção de hepatite C com hepatite B é baixa. Coinfecção com HIV é mais freqüente, mas inferior ao observado na literatura. A taxa de pacientes com diagnóstico confirmado que recebem pelo menos uma dose de tratamento com interferon/ribavirina através do SUS é menor que o esperado, enquanto que a menor resposta viral sustentada para pacientes portadores do genótipo 3 quando comparado ao genótipo 1 deve ser confirmada por novos estudos. Muitos pacientes que realizam genotipagem não foram tratados talvez por não atender aos critérios de tratamento ou por dificuldades de acesso ao sistema público gratuito de tratamento. Mas, entre os pacientes que foram tratados, a taxa de resposta ao tratamento foi maior em geral do que nos relatos da literatura. A base de dados do SINAN é uma importante ferramenta para coleta de dados, para implantação e avaliação de políticas de prevenção e tratamento na área de saúde pública. / Introduction: It is estimated that HCV has infected 200 million people in the world, since it is the main etiological agent responsible for 90 to 95% of the cases of transfusional hepatitis non A and non B. High percentage of chronification of the disease, its potential evolution to cirrhosis and hepatocarcinoma make hepatitis C a serious problem of public health. Data from World Health Organization estimate that 2.5% to 4.9% of Brazilian population is infected by HCV, which means 3.9 to 7.6 million people with risk of cirrhosis or hepatocarcinoma. Factors related to the virus, as viral load, may influence the evolution of chronic hepatitis to cirrhosis and hepatocarcinoma. HCV and HIV co-infection is relatively frequent among users of illicit drugs and hemophilic, occurring between 50% and 75% of the cases. Presence of HIV infection can accelerate the evolution of HCV chronic infection to cirrhosis and hepatic discompensation and increase the levels of HCV viremia as well. HCV genotype is an independent predictor of response to anti-viral treatment. Evidences indicate that genotypes 1 and 4 are associated to a poor response to the treatment with interferon, either in monotherapy or in combination with ribavirin, the opposite of genotypes 2 and 3. Best results, mesured by virological parameter for patients with genotype 2 or 3, are reached with periods of 6 months of treatment, whereas patients with genotype 1 need one year of treatment. Objectives: 1. To evaluate the proportion of different genotypes and subtypes among patients with hepatitis C referred to genotyping in 11ª Regional Center of Health (CRS) and the rate of these patients that under go treatment offered by Public Health System (SUS). 2. To evaluate the prevalence of co-infection (hepatitis A, B and HIV) among patients with HCV and its association with HCV genotype. 3. To describe the prevalence of risk factors for virus C infection in the sample and the association of HCV genotypes with age, sex and other risk factors for HCV infection. 4. To evaluate the rate of patients with confirmed diagnosis receiving at least one dose of treatment with interferon/ribavirin. Methods: Cross sectional study of patients with HCV diagnosis referred to genotyping in a reference laboratory in a small town of RS - Brazil. Data were collected from registers of the laboratory, registers of the National Disease Surveillance Data System (SINAN) and charts of the patients. Those patients who received at least one dose of the treatment were identified in the registers of Special Drugs Assessory (AME) of RS, Brazil. The rate of response was identified by the negativation of HCV through PCR test, 24 and 48 weeks after the end of the treatment. The identification of genotypes was done using Restriction Fragment Length Polymorphism (RFLP) “in house”. Data were described with measures of frequency and central tendency, and 95% confidence interval was calculated when applicable. The association between risk factors and genotype was analyzed using Chi-square and T Student tests. Associations of HIV co-infection and of treatment and sustained viral response with genotype were analyzed with Monte Carlo test. To identify factors independently associated to different genotypes, we used multinomial logistic regression. We estimated prevalence ratio using Poisson regression. Results: 441 patients were subjected to genotyping, age 41,1 ±12,0 years, 56,5% males. Proportion of genotype 1 was 41,5%; genotype 2, 19,3% in genotype 3, 39,2%. Three patients (0,7%; IC95% 0 - 1,5) presented HBV/HCV co-infection and 38 of 237 patients with HIV information were positive (16% IC 95% 9.5-13.7). There was no association between HIV co-infection and genotype. The rate of treated patients was 37,0%. Of 52 patients evaluable, 63,5% presented SVR, 9 patients with genotype 1 (64,3%), 14 with genotype 2 (87,5%) and 10 with genotype 3 (45,5%; P=0,026). We observed genotype 2 was more prevalent among women and patients carrying genotype 2 were older (52,2 ±12,8 years). Among risk factors for HCV infection were surgical treatment, use of intravenous and inhalation drugs and dental procedures (p<0,05%). 163 patients (37%) were submitted to treatment in one moment of this study and, in this, rate of response for genotype 1, 2 and 3 were 64,3%, 87,5% and 45,0% respectively. Conclusion: We observed higher genotype 3 prevalence when in comparison with other studies in RS and Brazil. Prevalence of hepatitis C with hepatitis B coinfection is low. HIV co-infection is more frequent, but lower than observed in the literature. Rate of patients with confirmed diagnosis that receive at least one dose of treatment with interferon/ribavirin via SUS is lower than we could expect, and SVR is lower for patients with genotype 3 than genotype 1. But these data must be confirmed by new studies. A lot of patients submitted to genotyping did not receive treatment from public health system, maybe because they did not attend the criteria for treatment or because of low access to the treatment. However, among the patients submitted to treatment, the rate of response was greater than the one present in literature. SINAN data is an important tool to collect data, to implement and evaluate policies of prevention and treatment in public health.

O diagnóstico laboratorial do Vírus da Hepatite C (HCV) pode ser realizado através de análises sorológicas ou por técnicas de biologia molecular. Os testes moleculares são divididos em qualitativos, quantitativos e de genotipagem. Esses são utilizados para confirmação diagnóstica, escolha da terapia antiviral e monitoramento do tratamento. Diversos testes moleculares comerciais estão disponíveis no mercado, no entanto, limitações como o custo elevado, alta complexidade e falta de validação são impeditivos para sua ampla utilização no país. Em razão das dificuldades citadas, novos métodos moleculares têm sido propostos como alternativa. Sendo assim, o presente estudo teve como objetivo o aprimoramento de um método in house para extração e purificação do RNA de HCV, bem como sua detecção qualitativa e genotipagem, utilizando hibridização em microplacas do produto de PCR biotinilado, seguido de detecção colorimética. A região 5'-NCR do HCV foi escolhida para a amplificação. Para avaliar a eficiência do método colorimétrico de hibridização reversa (MCHR) proposto, os resultados foram comparados com os métodos de referência para detecção qualitativa e genotipagem do HCV. Entre as 85 amostras de plasma analisadas, a sensibilidade e especificidade do MCHR para detecção do RNA viral, quando comparado com Cobas Amplicor HCV Assay v2.0, foram de 100% (95% IC; 92,75% - 100%) e de 97,2% (95% IC; 85,48% -100%), respectivamente. Os valores preditivo positivo e preditivo negativo foram de 98% (95% IC; 89,36% - 99,95%) e de 100% (95% IC; 90,01% - 100%), respectivamente. O Kappa encontrado foi de 0,976 (p < 0,001), mostrando alto grau de concordância entre os dois métodos de detecção qualitativa. Para genotipagem do HCV, pôde-se observar 97,22% (35/36) de concordância entre o MCHR e o seqüenciamento de DNA. O Kappa encontrado foi de 0,976 (p < 0,001), mostrando alto grau de concordância entre os dois métodos de genotipagem. Sendo assim, o método proposto apresentou bons resultados de sensibilidade e especificidade, com alto grau de concordância com os métodos de referência, tanto para detecção qualitativa, como para genotipagem do HCV. / The tests for HCV diagnosis are divided into serological and molecular assays. The molecular assays are used to confirm viremia, choice of antiviral therapy and monitor the response to antiviral therapy. A variety of commercial molecular assays have been developed, however, limitations such as the high cost, high complexity and lack of validation impede its widespread use, especially in developing countries. Because of the difficulties cited above, new molecular biology techniques have been proposed as alternatives. Thus, this study aimed at the improvement of an in house method for extraction and purification of RNA from HCV as well as its qualitative detection and genotyping, using hybridization in microplates of biotin-labeled PCR products, followed by colorimetric detection. The region of HCV 5'-NCR was chosen for the amplification. To evaluate the efficiency of colorimetric microwell hybridization assay (CMHA), the results obtained were compared with the reference methods. Among the 85 plasma samples analyzed, the sensitivity and specificity of CMHA for viral RNA detection, when compared with Cobas Amplicor HCV assay v2.0, were 100% (95% CI, 92.75% - 100%) and 97.2% (95% CI, 85.48 % -100%), respectively. The positive predictive and negative predictive values were 98% (95% CI, 89.36% - 99.95%) and 100% (95% CI, 90.01% -100%), respectively. The calculated Kappa was 0.976 (p <0001), showing high correlation between the two methods. Similarly, it was observed 97.22% (35/36) of agreement between the DNA sequencing data and MCHR, for HCV genotyping. The Kappa values was 0.976 (p <0001), showing high correlation between the two methods. The proposed method showed good sensitivity and specificity, with a high degree of concordance between the reference methods for both qualitative detection and for genotyping of HCV.

O estudo teve por objetivo determinar a eficácia do teste de ELISA para Giardia duodenalis e identificar os genótipos do protozoário em amostras fecais de crianças e cães na cidade de Lages, Santa Catarina. Foram avaliadas 1085 amostras fecais distribuídas em quatro grupos: crianças (Grupo I) matriculadas no ensino fundamental das Escolas Municipais de Ensino Básico (EMEB); amostras fecais de crianças obtidas em um laboratório particular da cidade (Grupo II); cães em ambientes domiciliados (Grupo III) e cães provenientes do Centro de Controle de Zoonoses (Grupo IV). Todas as amostras foram processadas pelos métodos coproparasitológicos de flutuação e sedimentação para determinar a presença de cistos de G. duodenalis. As amostras processadas pelos exames coproparasitológicos foram posteriormente analisadas pelo teste de ELISA e as amostras positivas genotipadas. A prevalência de amostras positivas para o parasito foi de 7,19% (78/1085). Das 430 amostras fecais de crianças e cães analisadas pelo teste de ELISA; 19,07% (82) foram positivas para G. duodenalis. A sensibilidade do teste de ELISA foi de 66%, 100% de especificidade, valor preditivo positivo (VPP) e negativo (VPN) de 100%, valor de Kappa = 0,93 e acurácia de 93%. Em relação às populações, o teste de ELISA para o diagnóstico de Giardia em amostras fecais de crianças apresentou sensibilidade de 60% e especificidade de 100%; para cães a sensibilidade foi de 73% e especificidade também de 100%. Conclui-se que o teste de ELISA apresentou alta especificidade, porém não apresentou boa sensibilidade em relação ao exame parasitológico, que aliado ao alto custo faz com que os exames de rotina laboratoriais na área humana e animais baseados na microscopia ainda são a opção mais eficaz para o diagnóstico de G. duodenalis. Em relação à identificação genotípica de isolados de G. duodenalis, através da PCR-RFLP usando o gene gdh, o genótipo (assemblage) A foi identificado nos Grupos I e II em 59,41% (22/39) das amostras com pequena prevalência para o subgenótipo AI (54,55%); o genótipo B foi diagnosticado em 43,59% (17/39) com maior prevalência para o subgenótipo BIV (58,82%). Nos grupos caninos III e IV o genótipo com características zoonóticas (A e B) foi diagnosticado em 64,10% (25/39), sendo diagnosticado AI com 53,85% e 10,26% de BIV. Em relação aos genótipos específicos de carnívoros (C e D) a prevalência foi de 35,90% (14/39) com predominância do genótipo C (71,43%) e 28,57% para o genótipo D. O estudo identificou uma variedade de genótipos em crianças e cães, com elevada prevalência de genótipos de características zoonóticas nos cães. / The study aimed to determine the efficacy of the ELISA test for G. duodenalis and identify the genotypes of the parasite in stool samples from children and dogs in the city of Lages, Santa Catarina. We evaluated 1085 faecal samples divided into four groups: Children (Group I) enrolled in basic public education; faecal samples obtained from children in a private laboratory in the city (Group II ) domiciled dogs ( Group III) and dogs from the Center for Zoonosis Control (Group IV). All samples were processed by the methods of faecal flotation and sedimentation to determine the presence of cysts of G. duodenalis. The samples processed by fecal examinations were subsequently analyzed by ELISA and positive samples genotyped. The prevalence of samples positive for the parasite was 7.19% (78/1085). Of the 430 stool samples from children and dogs analyzed by ELISA; 19.07% (82) were positive for G. duodenalis. The test sensitivity was 66%, specificity 100%, positive predictive value (PPV) and negative (NPV) of 100%, Kappa value = 0.93 and 93% accuracy. In relation to the population, the ELISA test showed sensitivity of 60% and specificity of 100%, for children and sensitivity was 73% and specificity of 100% for dogs. We conclude that the ELISA test is highly specific but less sensitivity to parasitological examination, so the routine tests in laboratory animals and human area-based microscopy are still the most efficient option for the diagnosis of G. duodenalis. Regarding the identification of G. duodenalis genotypes, by PCR-RFLP using the gdh gene, genotype (assemblage) A was identified in Groups I and II in 59.41% (22/39) samples with low prevalence to subgenotype Al (54.55%) , genotype B was diagnosed in 43.59% (17/39) with higher prevalence in subgenotype BIV (58.82%). Canine groups III and IV genotype with zoonotic characteristics (A and B) was diagnosed in 64.10% (25/39) was diagnosed with AI 53.85% and 10.26% of BIV. In specific genotypes of carnivorous (C and D) the prevalence was 35.90% (14/39) with predominant genotype C (71.43%) and 28.57% for genotype D. The study identified a variety of genotypes in children and dogs, with a high prevalence of genotypes characteristics zoonotic in dogs.

O tratamento da hepatite crônica C, uma combinação de interferon alfa peguilado e ribavirina (PEG-IFN/RBV), apresenta baixas taxas de resposta virológica sustentada (SVR) em pacientes portadores do vírus da hepatite C (HCV). Fatores como o genótipo do vírus, a carga viral e características do hospedeiro estão envolvidos com o sucesso da terapia. Os fatores do hospedeiro, especialmente os imunológicos e genéticos, parecem ter um papel importante no resultado do tratamento da hepatite C. Este estudo foi elaborado com o objetivo de investigar a associação entre polimorfismos de base única (SNP) nos genes da interleucina-28B (IL28B), interleucina-10 (IL10), fator de necrose tumoral alfa (TNFα) e proteína de resistência ao Myxovirus 1 (MxA) com a resposta virológica de pacientes com hepatite C crônica. No estudo foram incluídos 299 pacientes infectados com HCV genótipo 1, em tratamento com PEG-IFN/RBV, no centro de aplicação e monitorização de medicamentos injetáveis (CAMMI), em Porto Alegre, RS. A identificação dos SNPs foi realizada através da técnica de PCR, seguida de sequenciamento. Através da montagem de um banco de dados com informações epidemiológicas e genéticas, análises estatísticas foram realizadas comparando os SNPs analisados com resultados da terapia antiviral em 114 pacientes que tiveram SVR e em 149 que não responderam ao tratamento. As distribuições dos polimorfismos dos genes IL28B e TNFα, mas não dos outros, foram estatisticamente diferentes entre os grupos de resposta ao tratamento. Após o tratamento com PEG-IFN/RBV, o genótipo CC do gene IL28B foi associado com maior taxa de SVR e menor taxa de recidiva, quando comparado com os demais genótipos (CT e TT), 76% vs 38% e 17% vs 40%, respectivamente. Os alelos A dos dois polimorfismos estudados do gene TNFα foram significativamente associados à ausência de resposta virológica (51,3% vs 24,0% na posição -308, e 62,1% vs 23,9% na posição –238, P < 0.001). / Chronic hepatitis C treatment, a combination of pegylated alpha interferon and ribavirin (PEG-IFN/RBV), presents low rates of sustained virologic response (SVR) in patients infected with the hepatitis C virus (HCV). Factors such as the virus genotype, viral load and host characteristics are involved with successful therapy. Host factors, especially the immunological and genetic, seem to have an important role in the treatment outcome. This study was designed with the objective to investigate the association between single nucleotide polymorphisms (SNPs) in interleukin-28B (IL28B), interleukin-10 (IL10), tumor necrosis factor alpha (TNFα) and myxovirus resistance protein 1 (MxA) genes with the virologic response in chronic hepatitis C patients. The study included 299 infected patients with HCV genotype 1, in treatment with PEG-IFN/RBV. The SNPs identification of was performed by PCR, followed by DNA sequencing. In a database with informations genetic and epidemiological, statistical analyzes were performed comparing the SNPs analyzed with results of antiviral therapy in 114 patients who had SVR and 149 non responders. The distributions of IL28B and TNFα gene polymorphisms, but not the other, were statistically different between the groups of treatment response. After treatment with PEG-IFN/RBV the IL28B CC genotype was associated with higher rates of SVR and lower relapse rate when compared with other genotypes (CT and TT), 76% vs 38% and 17% vs. 40%, respectively. Carrying the A allele at one or both TNFα gene polymorphisms was significantly associated with a null virological response to treatment (51.3% vs. 24.0% at position -308 and 62.1% vs. 23.9% at position -238, P < 0.001).

Submitted by Mario BC (mario@bc.ufrpe.br) on 2016-09-19T14:46:16Z No. of bitstreams: 1 Marilia Gabriela de Santana Costa.pdf: 1426412 bytes, checksum: c3c7baa96284c5f7b4c52bec2911ec26 (MD5) / Made available in DSpace on 2016-09-19T14:46:16Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Marilia Gabriela de Santana Costa.pdf: 1426412 bytes, checksum: c3c7baa96284c5f7b4c52bec2911ec26 (MD5) Previous issue date: 2013-07-29 / Conselho Nacional de Pesquisa e Desenvolvimento Científico e Tecnológico - CNPq / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior - CAPES / Helinonia L. (family Heliconiaceae) comprises about 207 species, mostly of Neotropical origin, with elevated ornamental interest. Their identification is performed with difficulty and several species are recognized as synonyms. This study aimed to characterize cytogenetically 10 genotypes of Heliconia, using fluorochrome staining with DAPI and CMA and FISH with rDNA 45S and 5S probes. The karyotypes were symmetric, with 2n = 2x = 24 chromosomes for diploid species, with average length ranging from 0.88 to 3.35 μm. In relation to CMA/DAPI staining and FISH, CMA+/DAPI0/rDNA 5S proximal sites were observed in two and three small chromosomes in diploid and triploid genotypes, respectively. For CMA++/DAPI-/rDNA 45S sites, two or four sites per genotype were observed. For H. psittacorum diploid populations, two subterminal sites with distended satellite were found, and, for H. spathocircinata, four terminal sites without satellite were found. Heliconia psittacorum x H. spathocircinata hybrids (‘Golden Torch Adrian’ e ‘Golden Torch’), as expected, showed three labeled chromosomes, two similar to H. spathocircinata and one to H. psittacorum. For 'Suriname Sassy' and 'Sassy', three terminal sites with satellite similar to diploid H. psittacorum were observed. Heliconia bihai had two chromosomes with proximal sites. Similarly, H. caribaea x H. bihai cv. Jacquinii hybrid showed two proximal sites CMA++/DAPI-/DNAr 45S, but with size and morphology chromosome heteromorphism. The distribution of 5S and 45S rDNA sites, both CMA positive, corroborated the triploid origin for 'Sassy Suriname' and 'Sassy' genotypes from diploid genotypes H. psittacorum as well as the hybrids H. psittacorum x H. spathocircinata ('Golden Torch' and 'Golden Torch Adrian') and H. caribaea x H. bihai cv. Jacquinii from their respective parents. / O gênero Heliconia L. (família Heliconiaceae) possui cerca de 207 espécies, principalmente de origem neotropical, com elevado interesse ornamental. Sua identificação é realizada com dificuldade e diversas espécies são reconhecidas como sinonímias. O presente trabalho teve por objetivo a caracterização citogenética de 10 genótipos de Heliconia mediante as técnicas de coloração com fluorocromos CMA e DAPI e FISH para sítios de DNAr 45S e 5S. Os cariótipos foram simétricos, com número cromossômico para as espécies diploides de 2n = 2x = 24 e comprimento médio dos cromossomos de 0,88 a 3,35 μm. Em relação à coloração CMA/DAPI e FISH, observou-se marcação proximal CMA+/DAPI0/DNAr 5S em dois e três cromossomos pequenos, nos genótipos diploides e triploides, respectivamente. Para as marcações CMA++/DAPI-/DNAr 45S, por sua vez, observou-se de dois a quatro sítios por genótipo. Nas populações diploides de H. psittacorum observados dois cromossomos com marcação subterminal e satélite distendido e para H. spathocircinata foram encontrados quatro cromossomos com marcação terminal e ausência de satélite. Os híbridos de H. psittacorum x H. spathocircinata (‘Golden Torch Adrian’ e ‘Golden Torch’) como esperado exibiram três cromossomos com marcação, dois semelhantes aos H. spathocircinata e outro ao de H. psittacorum. Nos genótipos triploides ‘Sassy’ e ‘Suriname Sassy’, foram observados três cromossomos com marcação subterminal e presença de satélite semelhante ao encontrado para H. psittacorum. Para H. bihai, destacaram-se dois cromossomos com marcação proximal. O híbrido H. caribaea x H. bihai cv. Jacquinii também apresentou dois cromossomos portadores sítios de CMA++/DAPI-/DNAr 45S proximal, porém heteromórficos para tamanho e morfologia. A distribuição dos sítios de DNAr 5S e 45S, ambos CMA positivos, corroborou a origem dos genótipos triploides ‘Sassy’ e ‘Suriname Sassy’ a partir de genótipos diploides de H. psittacorum bem como de híbridos H. psittacorum x H. spathocircinata (‘Golden Torch’ e ‘Golden Torch Adrian’) e H. caribaea x H. bihai cv. Jacquinii a partir de seus respectivos parentais.

Submitted by Mario BC (mario@bc.ufrpe.br) on 2017-10-03T13:54:08Z No. of bitstreams: 1 Italo Jhonny Nunes Costa.pdf: 650947 bytes, checksum: 57bed427e6d339d5f2aef424961f0c58 (MD5) / Made available in DSpace on 2017-10-03T13:54:08Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Italo Jhonny Nunes Costa.pdf: 650947 bytes, checksum: 57bed427e6d339d5f2aef424961f0c58 (MD5) Previous issue date: 2015-09-15 / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior - CAPES / The of Cucumis melo L. species is original of the tropical and subtropical regions of Africa. Because of its great variability emerged some intraspecific ratings, one of the most recent and cited in the literature divides six botanical groups: cantalupensis, inodorus, conomon, dudaim, flexuosus and momordica, being the most cultivated in Brazil the two groups: inodorus and cantalupensis. Cultivates still on a small scale melons momordica known group, depending on the region of the country, as caxi melon, meloite, papoco melon or snow melon. This study aimed to evaluate the performance of 13 melon accessions momordica group crossed with two testers, identifying them with the best combination of capacity and higher heterosis. The experiment was conductedin the Department of Agronomy, Crop Area Rural Federal University of Pernambuco – Campus Brothers, Recife - PE. The experimental design was a randomized block with 4 replication sand 41 treatments, including 13 momordica melon hits, two testers and its 26 experimental hybrids. The characteristics evaluated were five: average fruit mass; average fruit length; average diameter of the fruit; pulp thickness; internal cavity. According to the data analyzed, the average length and characteristics of the fruit pulp thickness, revealed the existence of variability resulting from the effects of gene action additive and non-additive in controlling expression. As for the characteristics: average mass of the fruit, average fruit diameter and internal cavity, are prevailed genetic effects of dominance. The general combining ability, the A14, A18, and A16 accesses, showed higher values for the fruit length characteristic, especially A14 and A18, which together with the A11 also excel with higher GCA values for thickness pulp. The hybrid A14XT24, presented better specific capacity combination to average fruit weight and pulp thickness, and better heterosis values for average fruit mass, average fruit length and pulp thickness. For internal cavity, the hybrid A7XT24, stood out, presenting the lowest average. The lower heterosis for this trait was presented by combining A11XT9. / A espécie Cucumis melo L. é originaria das regiões tropicais e subtropicais da África. Devido sua grande variabilidade foram propostas algumas classificações intraespecíficas ao longo do tempo, uma das mais recentes e citadas na literatura divide a espécie em seis grupos botânicos: cantalupensis, inodorus, conomon, dudaim, flexuosus e momordica, sendo os mais cultivados no Brasil os dos grupos inodorus e cantalupensis. Cultiva-se ainda em pequena escala melões do grupo momordica conhecidos, dependendo da região do país, como melão caxi, meloite, melão papoco ou melão de neve. O objetivo deste trabalho foi avaliar o desempenho de 13 acessos de meloeiro do grupo momordica em cruzamento com dois testadores, para identificar aqueles com melhor capacidade de combinação e maior heterose. O experimento foi conduzido no Departamento de Agronomia, área de Fitotecnia da Universidade Federal Rural de Pernambuco – Campus Dois Irmãos, Recife - PE. O delineamento experimental utilizado foi o de blocos casualizados com quatro repetições e 41 tratamentos, entre os quais 13 acessos de melão momordica, dois testadores e seus 26 híbridos experimentais. As características avaliadas foram cinco: massa média do fruto; comprimento médio do fruto; diâmetro médio do fruto; espessura da polpa e cavidade interna. As características comprimento médio do fruto e espessura da polpa revelaram a existência de variabilidade resultante da ação de efeitos gênicos aditivos e não aditivos no controle da expressão. Já para massa média do fruto, diâmetro médio do fruto e cavidade interna, predominaram os efeitos gênicos de dominância. Quanto à capacidade geral de combinação, os acessos A14, A18, e A16, apresentaram maiores valores para a característica comprimento médio do fruto, com destaque para A14 e A18, que juntamente com o A11 também apresentaram maiores valores de CGC para espessura da polpa. O hibrido A14XT24, apresentou melhor capacidade especifica de combinação para massa média do fruto e espessura da polpa, e maiores valores de heterose para massa média do fruto, comprimento médio do fruto e espessura da polpa. Para cavidade interna, o hibrido A7XT24 se destacou apresentando a menor média. O menor valor de heterose para esta característica foi apresentada pela combinação A11XT9.

Orientador: Jose Francisco Hofling / Tese (doutorado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Odontologia de Piracicaba / Made available in DSpace on 2018-08-05T03:02:41Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Barros_LetiziaMonteiro_D.pdf: 1457309 bytes, checksum: df3cfd98d740cdfc928e9c7b1e4a3c89 (MD5) Previous issue date: 2005 / Resumo: Candida spp. são leveduras oportunistas, que habitam a cavidade bucal de uma proporção significativa da população saudável. Entretanto, sob condições predisponentes, podem provocar candidose bucal. Foram avaliados 53 pacientes com diagnóstico de periodontite, porém saudáveis sistemicamente, com o objetivo de verificar a ocorrência destes microrganismos em 3 sítios distintos: bolsa periodontal, sulco gengival e mucosa bucal. As amostras foram semeadas em meio cromogênico seletivo, e a identificação de C. albicans e C. dubliniensis foi feita por PCR. Vinte e um pacientes (39,6%) foram positivos para Candida spp. Não houve diferença significativa na freqüência de colonização entre os gêneros (teste , p= 0,5922), ou entre os sítios (teste , p= 0,1287). Entretanto, as bolsas periodontais foram mais densamente povoadas (UFC/mL) do que os outros sítios (teste ANOVA, p=0,0319), podendo ser consideradas, assim, um bom reservatório para estas leveduras. C. albicans, foi a espécie prevalente, em relação às demais (teste exato de Fischer; p=0,0088). C. dubliniensis ocorreu em um paciente, nas bolsas periodontais. A diversidade genética de C. albicans e C. dubliniensis foi analisada pelo método de RAPD, utilizando dois primers arbitrários (OPA-03 e AP-03), sendo detectados 16 tipos eletroforéticos distintos entre os 156 isolados de C. albicans e de um tipo eletroforético entre os três isolados de C. dubliniensis. Não houve diferença significativa entre os sítios (teste ANOVA, p=0,6431), nem entre os gêneros (teste t de student, p=0,892), quanto à diversidade genotípica de C. albicans. Todos os isolados apresentaram atividade enzimática de aspartil proteinases (Saps) e de fosfolipases, podendo ser considerados, portanto, potencialmente patogênicos. A propagação sistêmica de linhagens potencialmente patogênicas de C. albicans e C. dubliniensis, assim como de outras espécies do gênero, poderia ser favorecida em determinados grupos populacionais, especialmente quando as bolsas periodontais se apresentassem densamente colonizadas. Estudos longitudinais seriam necessários, para acessar o grau de manutenção dessas linhagens, em diferentes populações, incluindo a avaliação dos fatores de virulência e da susceptibilidade a agentes antifúngicos, bem como verificar a eficácia da terapia periodontal no controle e/ou eliminação dessas espécies da cavidade bucal / Abstract: Candida spp. are opportunistic yeasts that are able to inhabit the oral cavity of a high proportion of the healthy people. However, under predisponent condictions, Candida species are associated many forms of oral candidoses. A total of 53 patients with periodontitis, without systemic disease, were evaluated to verify the occurrence of this microorganism in three different sites: periodontal pocket, gingival sulci and oral mucosa. The samples were plated on chromogenic medium, and C. albicans and C. dubliniensis were identified by PCR Twenty-one volunteers (39.6%) were positive to Candida spp. in one or more sites. No statistical differences were detected between the genders, male or female ( , p= 0.5922), or sites ( , p= 0.1287). Periodontal pockets were more heavily populated (CFU/ml) than other sites (ANOVA, p=0.0319), so may be considered a yeast reservoir. It was found a higher prevalence of C. albicans compared to other species (Fischer test, p=0.0088). C. dubliniensis were recovered from the periodontal pocket from one patient. The genotypic diversity of Candida albicans and C. dubliniensis were analyzed by RAPD, using two arbitrarily primers (OPA-03 and AP-03), and 16 electrophoretic types were detected among 156 isolates of C. albicans and one electrophoretic type among three isolates of C. dubliniensis. There was no statistical difference among the analyzed sites (ANOVA, p=0.6431), neither between of gender (student t test, p=0.892) related with the genotypic diversity of C. albicans. All isolates showed enzymatic activity of aspartil proteinase (Saps) and phospholipase, so may be considered potentially pathogenic. Systemic propagation of commensal C. albicans, C. dublinienesis, and other species, would be favor in some population, especially in heavily populated periodontal pockets with Candida spp. Longitudinal studies must be done to establish the lineage maintenance in a different population and forms of periodontal disease, including the evaluation of virulence factors, antifungal susceptibility, and to assess the efficacy of different periodontal treatment to eliminate this species from the oral cavity / Doutorado / Microbiologia e Imunologia / Doutor em Biologia Buco-Dental

Orientador: Carmen Silvia Bertuzzo / Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Ciencias Medicas / Made available in DSpace on 2018-08-05T09:08:41Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Queiroz_RafaelSouza_M.pdf: 808644 bytes, checksum: 5b9365f8cbcefaa4626f52b11c1a6eb5 (MD5) Previous issue date: 2005 / Resumo: No Brasil, o câncer de mama é o maior causador de mortes entre as mulheres. O histórico familiar constitui o fator de risco mais importante na determinação do câncer de mama familiar. Estima-se que cerca de 5 a 10% dos tumores de mama sejam hereditários. Vários genes são relacionados como responsáveis pelo câncer de mama familiar, dentre estes deve-se citar o gene ATM, que codifica uma proteína do tipo quinase de ponto de checagem que harmoniza o reconhecimento de alterações no DNA oriundas de radiação ionizante. Vários estudos demonstram a associação entre a mutação S707P do gene ATM e câncer de mama. O objetivo deste estudo é verificar a presença da mutação S707P no gene ATM em uma amostra de pacientes portadores de Câncer de mama e relacioná-la com a apresentação clínica da doença e o grau histológico. Para isso, esse estudo utilizou a técnica de Reação em Cadeia da Polimerase seguida por digestão enzimática. Foram analisados 221 indivíduos para a mutação S707P, sendo 50 indivíduos com câncer e com histórico, 49 indivíduos com câncer sem histórico e 122 indivíduos do grupo controle. Somente dois indivíduos apresentaram a mutação S707P, sendo ambos em heterozigose do grupo controle (0,01). Esse é o primeiro estudo no Brasil que procura associação de mutações no gene ATM, em especial a mutação S707P com o câncer de mama hereditário e esporádico. Nenhuma associação foi encontrada entre a mutação S707P do gene ATM e o câncer de mama, tanto em mulheres com histórico familiar quanto em portadoras de câncer de mama esporádico / Abstract: Introduction In Brazil, breast cancer is the most responsible for death in women. Familiar history is the most important risk factor to establish familiar breast cancer because about 5 to 10 % of breast tumors have a genetic etiology. Many genes are involved in familial breast cancer responsible, like ATM. The ATM gene encodes a checkpoint kinase protein which recognizes DNA damage by ionizing radiation. Epidemiological evidence suggests that ATM heterozygotes, representing 0.5-1% of the general population, have a 5 to 8-fold increased risk of developing breast cancer. However, direct molecular analysis of ATM in selected breast cancer patients outside AT families has led to conflicting results. The aim of this study was to verify in a sample of 99 breast cancer carriers, the S707P missense alteration in ATM gene comparing with a control group of 122 individuals. Methods Polimerase chain reaction was performed followed by RFLP to identify S707P mutation. Results We found two heterozygotes for S707P mutation in control group only. No homozygotes were detected. The comparation with histologic degree was not possible. The allelic frequency in control group were 0,01% and genotype frequency of 0,016 or 1,6 %. This is the first study in Brazilian patients with breast cancer and ATM mutations. Ours results show that breast cancer is not associated with S707P mutation of ATM gene in this population. Conclusion Any link between S707P and breast cancer was observed, even in familial and non familial history breast cancer carriers. Our study is limited by its small number of mutations, therefore, new studies with more mutations are necessary / Mestrado / Mestre em Farmacologia

Orientador: Jose Francisco Hofling / Tese (doutorado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Odontologia de Piracicaba / Made available in DSpace on 2018-08-05T23:53:36Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Mariano_PriscilladeLaetSan'Ana_D.pdf: 1702939 bytes, checksum: 0dccafa4ba01badcfb8fc5a7d8d8592a (MD5) Previous issue date: 2006 / Resumo: A preservação de microrganismos é um importante recurso para a manutenção e conservação de espécies microbianas em laboratórios clínicos, técnicos e de pesquisa. Diferentes métodos de armazenamento de espécies de leveduras em laboratório foram descritos, objetivando principalmente, melhores resultados quanto à manutenção da viabilidade e das propriedades celulares por tempos prolongados. Métodos ideais de armazenamento de leveduras e outros microrganismos necessitam promover a sobrevida das células, bem como a pureza da cultura e a estabilidade de suas características. Alguns pesquisadores, no entanto, têm mencionado a ocorrência de alterações fenotípicas e/ou genotípicas em amostras mantidas em laboratório, as quais podem influenciar estudos, tipagem e a aplicabilidade destes organismos nos diversos setores. Há, portanto, uma necessidade de estudos adicionais que avaliem a estabilidade das propriedades das amostras de leveduras após serem mantidas em laboratório por diferentes métodos. Assim, o objetivo desta pesquisa foi avaliar a influência de métodos de manutenção laboratorial de leveduras sobre as suas características morfológicas e bioquímicas. Para isso, foram testadas seis cepas padrão de leveduras do gênero Candida, sendo quatro espécies de interesse médico e duas de interesse industrial, submetidas a cinco diferentes métodos de armazenamento, a saber: transferências seriadas em meio sólido, óleo mineral, água destilada, congelamento em glicerol a -70ºC e liofilização. As amostras foram caracterizadas fenotipicamente antes de serem armazenadas, e após o armazenamento em diferentes intervalos de tempos por um período de 18 meses. Foram avaliadas as características das colônias em meio CHROMagar Candida®, micromorfologia em ágar fubá, assimilação e fermentação de carboidratos, produção de proteinases e fosfolipases, teste de crescimento a 45°C e crescimento em meio hipertônico. O DNA das amostras foi extraído nos tempos zero, 06, 12 e 18 meses, para análise genotípica por Randomly Amplified Polymorphic DNA (RAPD), utilizando-se dois diferentes primers para cada cepa. Os resultados obtidos mostraram que todos os métodos de conservação avaliados permitiram a manutenção da viabilidade das amostras durante todo o período analisado (18 meses). A exceção ocorreu com a amostra de Candida dubliniensis que perdeu sua viabilidade em óleo mineral após 12 meses de conservação. Não foram observadas alterações fenotípicas nos resultados dos testes morfológicos e bioquímicos, após a preservação laboratorial através de todos os métodos utilizados no estudo. Entretanto, variações não estáveis foram observadas para algumas amostras nos testes de produção de fosfolipases e proteinases, e para o crescimento em meio hipertônico. Tais variações não estavam relacionadas com uma condição específica de manutenção da cepa e o resultado alterado foi reversível em testes subseqüentes. Alterações no padrão de RAPD não foram detectadas em pelo menos duas reações independentes para cada um dos primers testados. Os resultados obtidos demonstram que os métodos de conservação aplicados neste estudo permitem a manutenção da estabilidade das características fenotípicas e genotípicas relacionadas aos testes aplicados, em amostras de leveduras preservadas durante o período avaliado. Desta forma, a aplicabilidade do ponto de vista técnico ou de pesquisa não é inviabilizada para amostras preservadas por estes métodos. Cepas destinadas ao uso em finalidades específicas devem ser testadas individualmente quanto ao método de conservação mais indicado / Abstract: The maintenance of microorganisms is useful to preserve microbial species in clinical, technical and research laboratories. Different methods to yeast stocking are available in order to obtain long time viability and stability of cell properties. The best methods to store microorganisms need to provide the cell survival as well as purity and stability of their properties. Some researches, however, have mentioned phenotypic and/or genotytpic changes in laboratorial samples, which may influence yeast typing, studies and the applications of those organisms in different areas. Therefore, additional studies are needed to evaluate the yeast samples properties stability after stocking through different methods. The aim of this study was to evaluate the influence of the yeast storage methods in terms of their morphological and biochemistry characteristics. Candida spp. standard strains, four of medical importance and two industrial species were evaluated. Those strains were submitted to five storage methods: serial transferences in agar medium, mineral oil, distilled water, freeze with glycerol at -70ºC and freeze-drying. The samples were characterized with phenotypic techniques before being stocked, and after that in different periods of time up to 18 months. It was tested the characteristics of the colonies in CHROMagar Candida® medium, micromorphology in corn meal agar, carbohydrates assimilation and fermentation, phospholipases and proteinases production in solid medium, growth test in 45ºC and growth test in hypertonic medium. In addition, the DNA extraction of all samples was carried out in time zero, 6, 12 and 18 months, in order to posterior genotypic analyses by Randomly Amplified Polymorphic DNA (RAPD) using two different primers for each strain. The results showed that all yeast preservation methods tested were able to maintain the viability of the samples during the period of the study, except the strain Candida dubliniensis stocked in mineral oil, which not survived after 12 months in these conditions. It was not observed phenotypic alterations in the results of morphological and biochemistry tests after laboratorial preservation with all used methods. However, some non stable variations were observed in phospholipase and proteinase production and in the hypertonic growth for some samples. Such variations were not related to one specific maintenance method and the altered result could be reversible in subsequent tests. Changes in the RAPD pattern were not detected in, at least, two independent reactions for both tested primers. The results showed that the maintenance methods applied in this study were able to preserve the stability of the phenotypic and genotypic characteristics, in all yeast samples stocked during the analyzed period of time. Therefore, the technical and research applicability of the samples are not unfeasible when they are preserved with those methods. Strains designated to use for specific purposes must be tested individually, in order to select the best preservation method / Doutorado / Microbiologia e Imunologia / Doutor em Biologia Buco-Dental