Made available in DSpace on 2014-06-11T19:32:13Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2012-02-03Bitstream added on 2014-06-13T19:21:39Z : No. of bitstreams: 1 mazzuchelli_j_dr_botib.pdf: 1087544 bytes, checksum: 4b5f970a1c70323d6a2504cb2b7fcc04 (MD5) / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior (CAPES) / Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de São Paulo (FAPESP) / Os ciclídeos representam um dos exemplos mais marcantes de evolução entre os vertebrados. Por isso, muitos estudos genômicos vêm sendo desenvolvidos para este grupo, incluindo mapas genéticos de ligação, mapas físicos com base em bibliotecas de cromossomos artificiais bacterianos (BAC) e, mais recentemente, o sequenciamento completo de genomas. Bibliotecas de BACs podem ainda ser exploradas no sentido de obtenção de sondas para mapeamento citogenético, fornecendo importantes informações sobre a estrutura e evolução cromossômica das espécies e grupos. Ainda, a análise das sequências nucleotídicas dos BACs em conjunto com mapeamento in silico podem ser utilizadas para integrar dados físicos cromossômicos, sequências gênicas, mapas genéticos e sequências de genomas completos. Esse trabalho teve por objetivo inferir sobre a diversificação cromossômica durante a evolução dos ciclídeos utilizando BACs de bibliotecas genômicas de Oreochromis niloticus para o mapeamento físico citogenético e análises comparativas entre os diversos genomas disponíveis de peixes e outros vertebrados. Os resultados mostram uma forte conservação cromossômica dos marcadores/genes analisados entre as espécies de ciclídeos estudadas. Além disso, análises in silico de citogenética e genômica comparativa mostram grandes segmentos cromossômicos conservados não somente entre os ciclídeos, mas também entre diferentes espécies/grupos de peixes e entre espécies de vertebrados demonstrando evidências de sintenia de grandes segmentos genômicos mesmo entre grupos taxonomicamente distantes em vertebrados. Esses resultados fornecem uma excelente base para futuros estudos de caracterização citogenética e integração de mapas para estudos evolutivos em peixes, em especial na família Cichlidae / Cichlids represent one of the most striking examples of rapid and convergent evolutionary radiation among vertebrates. Several genomic resources have been developed for cichlid fish, including genetic linkage maps, physical mapping based on bacterial artificial chromosome (BAC) libraries and more recently and whole sequencing genomes. These BACs libraries can be explored to obtain probes for cytogenetic mapping providing important informations about chromosome structure and evolution. Additionally BAC-end sequencing analyzes in combination with in silico mapping can be used to integrate chromosomes, local (gene) sequences, genetic maps, and whole genome sequencing. The present study aimed to infer about the chromosomal diversification during cichlid evolution using BAC clones from Oreochromis niloticus libraries for cytogenetic mapping and a comparative analyzes using fish and other complete genomes available. The results show a strong conservation of number and location of hybridization signals between cichlids species. Furthermore, in silico comparative genomics and cytogenetic analysis showed that large chromosomal segments are conserved not only in cichlids but also among non-related fish groups and either between some vertebrates, providing evidence for large syntenic genomic segments. These results provide an excellent foundation for further cytogenetic characterization and comparative maps for chromosome evolution studies in fishes, especially in the Cichlidae family

Orientador : Prof. Dr. Flávio Queiroz Telles Filho / Co-orientadores : Profª Drª Vania Aparecida Vicente e Profº. Drº. Newton Sérgio de Carvalho / Dissertação (mestrado) - Universidade Federal do Paraná, Setor de Ciências Biológicas, Programa de Pós-Graduação em Ciências Biológicas (Microbiologia, Parasitologia e Patologia Básica). Defesa: Curitiba, 21/03/2013 / Inclui bibliografias / Área de concentração: Microbiologia / Resumo: A candidíase vulvovaginal afeta mulheres em idade reprodutiva representando aproximadamente 15 a 25% dos casos de vaginites. As diferentes espécies de Candida relacionadas à infecção podem ser encontradas na mucosa vaginal como colonizadoras e, em condições apropriadas, aceleram o processo de multiplicação e expressam fatores de virulência. O objetivo deste trabalho foi isolar leveduras de pacientes com ausência de sintomas clínicos (grupo colonizado) e de portadores da infecção. O perfil de sensibilidade in vitro destes isolados foi estabelecido e marcadores moleculares utilizados para identificar a distribuição das espécies. Um total de 40 isolados foram obtidos e identificados através do Cromoagar, sistema API20aux e pelo seqüenciamento das regiões ITS e D1/D2 do gene DNAr. Diferentes isolados de C. albicans foram genotipados pelo sistema ABC. A análise multilocus confirmou isolados das espécies Candida albicans, C. glabrata, C. guilliermondii, C. kefyr e Saccharomyces cerevisiae. A espécie prevalente foi a C. albicans. No grupo colonizado foi encontrado C. albicans (60%), C. glabrata (25%), C. guilliermondii (5%), C. kefyr (5%) e Saccharomyces cerevisiae (5%). No grupo com infecção não complicada todos os isolados eram C. albicans (100%) e no grupo de infecção complicada a maioria eram C. albicans (90,9%), seguido de C. dubliniensiis (9,1%). Os diferentes isolados de C. albicans foram divididos em dois grupos genotípicos (A e B). Em relação ao perfil de sensibilidade in vitro dos isolados das diferentes espécies de Candida procedentes dos diferentes grupos estudados, pode se afirmar que os isolados obtidos a partir do grupo com infecção complicada apresentaram resistência a nistatina e eram sensíveis ao fluconazol, anfotericina B e cetoconazol, enquanto que os isolados do grupo com infecção não complicada e colonizada e individuos colonizados apresentaram sensibilidade dose dependente aos antifúngicos fluconazol, anfotericina B e cetoconazol. Os isolados de C. albicans pertencentes aos diferentes grupos genotípicos (A e B) não apresentaram correlação com os testes de suscetibilidade in vitro. Palavras-chave: candidíase vulvovaginal; suscetibilidade in vitro; variabilidade genética. / Abstract: Vulvovaginal candidiasis affects women of reproductive age representing aproximatedly 15 to 25% of vaginitis cases. Different Candida species related to infection can be found colonizing the vaginal mucosa, and under appropriate conditions boost the reproduction process and express virulence factors. This study aimed to isolate yeasts of patients with clinical symptoms absence (colonized group) and also the ones with infection. The susceptibility of in vitro profile from these isolates was stablished and molecular markers were used to identify the species distribution. A total of 40 isolates were obtained and identified through the Cromoagar API20aux system and by sequencing of ITS regions and D1/D2 from the DNAr gene. Different C. albicans strains were genotyped by the ABC system. The multilocus analysis confirmed Isolates of Candida albicans, C. glabrata, C. guilliermondii, C. kefyr and Saccharomyces cerevisiae. The most prevalent species was C. albicans. In the colonized group it was found C. albicans (60%), C glabrata (25%), C guilliermondii (5%), C kefyr (5%) and Saccharomyces cerevisiae (5%). In the uncomplicated infection group all isolates were C. albicans (100%) and in the complicated infection group most of the isolates were C. albicans (90.9%), followed by C. dubliniensiis (9.1%). The different isolates of C. albicans were diveded into two genotypic groups (A and B). Regarding the profile of sensibility in vitro of the isolates of different species of Cândida derived from distinct groups that were studied, it can be confirmed that the isolated obtained from the complicated infection group present resistance to nystatin and were sensitive to fluconazole, amphotericin B and ketoconazole, while the colonized presented dose-dependent sensitivty to the antifungal agents fluconazole, amphotericin B and ketoconazole. The C. albicans isolates which belong to different genotypic groups (A and B) did not show any correlation with the susceptibility tests in vitro. key-words: vulvovaginal candidiasis; susceptibility in vitro; variability genetic.

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Orientadora : Profa. Dra. Maria Luiza Petzl-Erler / Autor não autorizou a inclusão da obra na Biblioteca Digital / Tese (doutorado) - Universidade Federal do Paraná, Setor de Ciências Biológicas, Programa de Pós-Graduação em Genética. Defesa: Curitiba, 29/02/2012 / Bibliografia: fls. 132-139 / Resumo: A família KIR apresenta grande diversidade e reconhece os antígenos leucocitários humanos (HLA) de classe I; poucas populações brasileiras foram estudadas. O objetivo desse estudo foi caracterizar a diversidade KIR em populações brasileiras e comparar com outras populações já descritas, analisando os variantes KIR no contexto de seus ligantes HLA. Nós estudamos o polimorfismo de ausência e presença de todos os genes de KIR e também a diversidade alélica de KIR3DL2, verificamos se esses genes interferem na susceptibilidade ao pênfigo foliáceo (PF), uma doença autoimune bolhosa da pele. A população de Curitiba apresentou frequências similares a populações européias e euro-descendentes, mas por ser miscigenada, mostrou uma maior diversidade de perfis genéticos. Os genes HLA-A e -B parecem ser igualmente importantes para o reconhecimento KIR. Nossos resultados acerca dos ligantes e receptores foram compatíveis com baixa ou ausência de força seletiva favorecendo combinações KIR-HLA. Os genes ativadores parecem exercer um efeito redundante (sobreposto) na susceptibilidade ao PF e a presença de mais de três genes ativadores foi protetora (OR=0.49, P=0.003). Associação protetora foi encontrada para maiores razões ativadores/inibidores (OR=0.44, P=0.001). KIR3DS1 e o epítopo HLA-Bw4 foram negativamente associados ao PF, tanto isoladamente quanto combinados, mas o efeito protetor foi maior para a presença dos dois (OR = 0.22, P<10-3), sugerindo que a função ativadora de KIR é o principal fator interferindo na patogênese de PF. A frequência de indivíduos que apresentaram o alelo KIR3DL2*001 foi maior em pacientes (OR=1.9, P=0.01). Nós analisamos os polimorfismos de nucleotídeo único na região codificadora de KIR3DL2 e o alelo 1190T foi associado à proteção (OR=0.53, P=0.025). Grande diversidade alélica de KIR3DL2 foi observada em populações urbanas, em concordância com origem a partir de mistura de europeus, africanos, indígenas, asiáticos e mediterrâneos ao longo dos últimos séculos. Baixa diversidade alélica foi encontrada nos indígenas provavelmente devido ao efeito de gargalo populacional que eles sofreram no processo de migração para a América. Dezesseis novos alelos foram encontrados. Ainda há pouca informação sobre os alelos de KIR para a maioria das populações mundiais. Conhecer essa diversidade é crucial para compreendermos como a variabilidade desses genes interfere nas respostas imunes normais e nas doenças. / Abstract: The KIR gene family exhibits extensive diversity and interacts with the highly polymorphic human leukocyte antigens (HLA) class I; few Brazilian populations have been described so far. This study aimed to characterize the KIR diversity in Brazilian populations, to compare with other populations described and to analyze KIR variants in the context of their relationship with their known HLA class I (-A, -B and -C) ligands. We studied both presence/absence polymorphism of all KIR genes and also the allelic diversity of KIR3DL2 and we also investigated if the KIR polymorphism influences the susceptibility to pemphigus foliaceus (PF), an autoimmune blistering disease of the skin. The Curitiba's population was similar to European and Euro-descendant populations, but as an admixed population, showed more diversity of profiles. The HLA-A and -B genes appear to be equally important for NK cell function and our result of ligands and receptors was compatible with low or absent selection pressure favoring certain KIR-HLA combinations. The activating KIR genes may exert an overlapping effect on PF susceptibility and the presence of more than three activating genes was protective (OR = 0.49, p = 0.003). A significant protective association was found for higher ratios of activating to inhibitory KIR (OR=0.44, p=0.001). KIR3DS1 and the HLA-Bw4 epitope were negatively associated to PF either isolated or combined, but an increased protective effect was found for the presence of both (OR = 0.22, p<10-3) suggesting that the activating function is the major factor interfering in the PF pathogenesis. The frequency of individuals with the KIR3DL2*001 allele was increased in patients (OR = 1.9, p = 0.01). We looked at the informative single nucleotide polymorphisms in the sequenced coding region of KIR3DL2 and the allele 1190T was associated to a lower risk (OR = 0.53, p = 0.025). High allelic diversity of KIR3DL2 was observed in our urban populations, in agreement with the history of the Brazilian population that was formed by European, African, Amerindian, eastern Asian and Middle Eastern admixture over the last few centuries. Low allelic diversity was found in Amerindians when compared to urban populations, as expected considering the founder effect that the Amerindians may have suffered during the migration to America. Sixteen new alleles were found. Allelic information is still lacking in most of the KIR studies and for the majority of the populations worldwide. Yet, this knowledge is crucial to comprehend the role that the variability of these genes plays in health and in disease.

Made available in DSpace on 2014-06-11T19:35:10Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2012-02-23Bitstream added on 2014-06-13T19:45:06Z : No. of bitstreams: 1 carmo_as_dr_jabo.pdf: 750695 bytes, checksum: badd16ed8cd1277688580dd61ee13af8 (MD5) / Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e Tecnológico (CNPq) / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior (CAPES) / Estudo de Associação Genômica (GWAS - Genome Wide Association Study) foi conduzido para identificar regiões cromossômicas relacionadas à capacidade de criotolerância espermática em bovinos da raça Nelore, empregando os fenótipos: diferença entre a motilidade do sêmen fresco e descongelado (DMD) e diferença entre a motilidade do sêmen fresco e pós-teste de termo-resistência (DMT), com o intuito de compreender melhor os fenômenos que regem tal característica. O perfil de SNP (SNP - Single Nucleotide Polymorphism) de cento e vinte e cinco touros foi determinado com o auxílio de micro-arranjo de alta densidade de SNP (BovineHD Illumina®). As estimativas dos valores genéticos dos touros (EBV - Estimated Breeding Value) (Experimento 1) e as médias das medidas fenotípicas (Experimento 2) foram calculadas para as características em questão. As metodologias estatísticas GRAMMAR e EIGENSTRAT foram utilizadas para a realização do teste de associação fenótipo / genótipo após procedimento de controle de qualidade dos dados. A análise de enriquecimento funcional foi realizada com auxílio do software DAVID. Essa análise apontou a família de genes Serpina (inibidores de proteases), reguladores de cAMP e componentes do citoesqueleto celular como o grupo de genes que apresentam maior importância funcional para as características avaliadas. Todas as metodologias testadas demonstraram-se capazes de identificar regiões genômicas associadas aos fenótipos DMD e DMT, destacando-se os cromossomos 1, 16 e 19 / Genome Wide Association Study (GWAS) was performed in order to identify chromosomal regions related to sperm cryotolerance capacity in Nellore cattle for the phenotypes: difference between fresh and post-thaw semen motility (DMD) and difference between fresh and post thermal resistance test semen motility (DMT), aiming to better understand the phenomena governing this characteristic. SNP (Single Nucleotide Polymorphism) profile of one hundred and twenty five Nellore bulls were determined using high density SNP chip (BovineHD Illumina®). Estimated Breeding Values - EBV (Experiment 1) and phenotypic measures means (Experiment 2) were calculated for the evaluated traits. The statistical methodologies GRAMMAR and EIGENSTRAT were used to test the phenotype / genotype association after data quality control. Functional enrichment analysis was performed using DAVID software. These analyses pointed out to Serpine (protease inhibitor), cAMP metabolism control and cytoeskeletal components gene families as the most important functional gene groups for the evaluated traits. All the methods tested shown to be able to identify genomic regions associated with phenotypes DMD and DMT, especially chromosomes 1, 16 and 19

Made available in DSpace on 2014-06-11T19:35:42Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2010-02-26Bitstream added on 2014-06-13T19:25:09Z : No. of bitstreams: 1 mariguela_tc_dr_botib.pdf: 5111387 bytes, checksum: 7fcfb5cb251df098061cd92f7e806568 (MD5) / Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de São Paulo (FAPESP) / Os Characiformes são peixes exclusivamente de água doce e encontram-se distribuídos nas Américas e na África, atingindo maior diversidade nas principais drenagens neotropicais. A família Characidae é o grupo mais especioso entre os Characiformes, porém, a relação dessa família com outras famílias é ainda incerta. São conhecidas cerca de 1000 espécies de Characidae das quais cerca de um terço estão distribuídas em 14 subfamílias, e as demais não tem uma posição filogenética clara, sendo incluídas em um grande grupo considerado incertae sedis em Characidae. A subfamília Cheirodontinae compreende cerca de 60 espécies, sendo um grupo de characídeos amplamente distribuídos nas bacias hidrográficas da América do Sul e Central, incluindo espécies trans-andinas. Os gêneros de Cheirodontinae atualmente estão divididos e, três tribos: Cheirodontini, Compsurini e Odontostilbini. No presente estudo, o principal objetivo foi investigar as relações de Cheirodontinae com as subfamílias de Characidae e as relações internas dos membros de Cheirodontinae através da análise de sequências de DNA mitocondrial (16S e Citocromo b) e nuclear (RAG1, RAG2 e Myh6). As análises mostraram que Spintherobolus não pertence à subfamília e Cheirodon stenodon, que era considerado incertae sedis em Characidae, deve fazer parte da mesma. Diversos gêneros apareceram polifiléticos, principalmente Odontostilbe. As espécies trans-andinas e andinas, são as espécies mais antigas da subfamília. As relações observadas nas análises são bastante diferentes das correntemente aceitas para Cheirodontinae e assim é proposta uma nova classificação para o grupo. O gênero Holoshesthes é considerado válido e pertencente a um clado juntamente com o gênero Aphyocheirodon e Acinocheirodon. Odontostilbe forma um clado monofilético com as espécies antes pertencentes à Serrapinnus... / The Characiformes are exclusively freshwater fishes and they are found distributed in Americas and Africa, reaching more diversity in the major Neotropical drainages. The family Characidae is the most specious group among characiforms, but the relationships among this family and other families remains unclear. It is known about 1,000 species belonging to Characidae, one third distributed in 14 subfamilies, and the remaining does not have a clear phylogenetic position, and currently are included in a large group considered incertae sedis in Characidae. The subfamily Cheirodontinae comprises about 60 species, being a characid group widely distributed in the South and Central America hydrographic basins, including trans-Andean species. The genera of Cheirodontinae are currently divided in three tribes: Cheirodontini, Compsurini, and Odontostilbini. In the present work, the main goal was investigate the internal relationships of the members of Cheirodontinae through sequencing and analysis of mitochondrial (16S rRNA and Cytochrome b) and nuclear (RAG1, RAG2, and Myh6) genes. These analyses shown that Spintherobolus does not belong to the subfamily and Cheirodon stenodon, which was considered incertae sedis in Characidae, belongs to the same. Several genera are polyphyletic, mainly Odontostilbe. The trans-Andean and Andean species are the older species of the subfamily. The relationships observed in the analyses are very different of the currently accepted to Cheirodontinae and thereby it is suggested a new classification to the group. The genus Holoshesthes is considered valid and belonging to a clade jointly with the genus Aphyocheirodon and Acinocheirodon. Odontostilbe form a monophyletic clade with the species currently belonging to Serrapinnus, a new species, and Compsura heterura. The tribes Cheirodontini, Compsurini and Odontostilbini are preserved, with different compositions and a new tribe is suggested (Pseudocheirodontini)

Made available in DSpace on 2014-11-10T11:09:34Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2014-03-14Bitstream added on 2014-11-10T11:58:19Z : No. of bitstreams: 1 000794035.pdf: 694035 bytes, checksum: bc6bd56a74010e1ca54a3832fa0507e5 (MD5) / O conhecimento sobre o potencial evolutivo das populações naturais é fundamental para garantir a sobrevivência das espécies. A estimativa da herdabilidade é necessária para analisar quanto da variação fenotípica de caracteres estão sobre controle genético. O objetivo desse estudo foi investigar o controle genético de caracteres de crescimento nas fases iniciais de desenvolvimento de populações fragmentadas de Copaifera langsdorffii, utilizando marcadores microssatélites. Para tanto, foram utilizadas duas populações de C. langsdorffii, uma localizada no parque municipal em São José do Rio Preto (SJRP) e uma na Estação Ecológica de Assis (EEA), ambas no Estado de São Paulo, Brasil. O modelo para estimar o coeficiente de herdabilidade consiste no método de regressão de uma medida de similaridade fenotípica e uma estimativa de parentesco entre pares de indivíduos, executado no programa Mark. Ambos coeficientes de parentesco e herdabilidade foram estimados para três classes de distância (10, 20 e 30 m) dentro das populações. As estimativas de herdabilidade foram baixas (máximo de 0,146) para todos os caracteres, variando entre valores positivos para os indivíduos regenerantes da população SJRP e entre negativos a positivos para os juvenis da população EEA. Em termos evolutivos, estes resultados indicam poucas chances de alterar a média populacional dos caracteres estudados pela seleção natural, sendo os efeitos ambientais aleatórios mais fortes para alterar esta média. Este resultado, associado à tendência observada de redução no coeficiente de herdabilidade para altura entre indivíduos regenerantes para indivíduos juvenis também indica que este controle genético reduz com o desenvolvimento das plantas, ou seja, a seleção natural em populações naturais é mais forte em fases iniciais de desenvolvimento das plantas. Em suma, os resultados sugerem que não existem diferenças nos níveis de ... / The knowledge about the evolutionary potential of natural populations is critical to ensure the survival of the species. Heritability estimates are necessary to analyze how much of the phenotypic variation of traits are about genetic control. The aim of this study is to investigate the genetic control of growth traits in the initial phases of developing fragmented populations Copaifera langsdorffii, using microsatellite markers. Therefore, two populations of C. langsdorffii were used a municipal park located in São José do Rio Preto (SJRP) and at Assis Ecological Station (AES), both in the state of São Paulo, Brazil. The model to estimate the heritability coefficient is the method of regression of a measure of phenotypic similarity and an estimate of kinship between individuals, run the Mark programs. The coefficients of relatedness and heritability were estimated for three classes of distance (10, 20 and 30 m) within populations. Estimates of heritability were low (maximum 0.146) for all traits, ranging from positive values for regenerating individuals of the population SJRP and from negative to positive for the juvenile population AES. In evolutionary terms, these results indicate little chance of changing the population mean of the characters studied by natural selection, with the strongest environmental random effects to change this average. This result, coupled with the trend of reduction in the coefficient of heritability for height between regenerating juveniles individuals indicates also that the genetic control reduces the development of plants, in other words, natural selection in natural populations is stronger in the early stages of plant development. In short, the results suggest that there are no differences in the levels of heritability between the two populations and that the heritability for growth traits is low in both populations

Nós realizamos este estudo a fim de contribuir para o entendimento da evolução de espécies do gênero Drosophila e o quanto fenômenos epigenéticos estão relacionados a isto. Analisando 14 espécies do subgênero Sophophora, as quais apresentam diferentes histórias evolutivas e exploram ambientes divergentes, investigamos a possibilidade de recorrência do fenômeno de metilação sexo-específica do rDNA como descrito previamente para a espécie D. willistoni. Utilizando as técnicas de seqüenciamento e PCR bissulfito, nós demonstramos que o gene 28S apresenta-se metilado nas espécies do subgrupo willistoni de Drosophila, bem como na espécie D. melanogaster, corroborando a hipótese de que, em insetos, as regiões internas dos genes são metiladas. Entretanto, não detectamos padrões de metilação sexo-específicos para o DNA ribossomal das espécies D. melanogaster e D. paulistorum. Através da técnica de MSRE combinada com Southern blot, verificamos que a metilação diferencial entre sexos do rDNA ocorre exclusivamente nas espécies do subgrupo willistoni, com exceção de D. paulistorum. Nossos resultados indicam que o fenômeno de metilação do DNA pode variar bastante, mesmo entre espécies proximamente relacionadas, como D. willistoni e D. paulistorum, por exemplo. Nós também sugerimos que fatores ambientais, operando diferencialmente nos territórios ocupados pelas diferentes espécies e o menor tempo evolutivo de surgimento dos fenômenos epigenéticos, podem contribuir para a formação do panorama aqui detectado. / The present study aimed to contribute to the comprehension of the role of epigenetic phenomena for the evolution of species of the Genus Drosophila.. We analyzed 14 species of the Sub Genus Sophophora, with different evolutionary histories and exploring very divergent environments, investigating the putative occurrence of the phenomenon of sex-specific methylation patterns of the rDNA, as described previously in Drosophila willistoni. Through the use of PCR bissulfite and sequencing, we demonstrated that the 28S gene is methylated in members of the willistoni subgroup of Drosophila, as in D. melanogaster, corroborating the hypothesis that the internal regions of the genes are methylated in insects. No sex-specific patterns of methylation, however, were detected in the ribosomal DNA of the species D. melanogaster and D. paulistorum. Using the methods of MSRE and Southern blot, we detected differential methylation of the rDNA between sexes exclusively in the species of the willistoni subgroup, excepting D. paulistorum. Our results indicate that the phenomenon of DNA methylation can varied considerably even so between species closely related, as D. willistoni and D. paulistorum, for example. We also suggested that different environmental factors operating in the territories occupied by the different species studied and the shorter evolutionary time of the raising of the epigenetic phenomena can contribute to the formation of the scenario detected.

O objetivo desse estudo foi avaliar diferentes modelos estatísticos com diferentes pressuposições para definir o melhor modelo que descreva a presença de interação genótipo x ambiente no ganho de peso pós-desmama ajustado (GPD345) de bovinos Hereford, mediante o estudo de normas de reação ao ambiente, obtidas por regressão aleatória, usando uma abordagem bayesiana. Quatro modelos hierárquicos de normas de reação (MHNR) e um modelo animal padrão (MA) foram empregados por meio do programa INTERGEN. O MHNRk utiliza as soluções de grupos contemporâneos estimadas previamente pelo modelo animal padrão (MA) e as considera como nível ambiental e o de uma única análise, MHNRS, que estima simultaneamente esses dois conjuntos de incógnitas considerando nas duas metodologias a variância residual homogênea (hm) e heterogênea (ht). Pelo critério de informação da "deviance", o MHRNshm foi que apresentou melhor ajuste aos dados, seguido pelo MHNRsht, MHNRKhm, MHNRkht e o pior ajuste foi obtido pelo MA, já pelo Fator de Bayes os MHNR homoscedásticos foram os que melhor ajustaram-se aos dados. Pela ordenada preditiva condicional o MA, foi melhor em relação aos MHNR. As herdabilidades nos MHNR foram crescentes nos gradientes ambientais em GPD345 de -60; 0 e +60 kg. As correlações genéticas entre o nível e inclinação das normas de reação foram de alta magnitude caracterizando efeito de escala em interação GxE. Os modelos hierárquicos de normas de reação são eficientes para descrever as alterações nos componentes de variância em função do ambiente ao qual o genótipo está exposto bem como para descrever a presença de interação genótipo x ambiente na característica GPD345 em bovinos Hereford. / The objective of that study was to evaluate different statistical models with different presuppositions to define the best model than it describes the presence of genotype by environment interaction in the characteristic weight post weaning gain (GPD345) of Hereford cattle, by the study of reaction norms to the environment, obtained by aleatory regression, using an bayesian approach. Four hierarchical models of reaction norms (MHNR) and one animal model (MA) they were used through the program INTERGEN. MHNRk uses the solutions of contemporary groups previously esteemed by the standard animal model (MA) and it considers them as environmental level and the one of an only analysis, MHNRS, that esteems those two groups simultaneously of incognito considering in the two methodologies the homogeneous residual variance (hm) and heterogeneous (ht). For the criterion of information of the "deviance", MHRNshm was that it presented better adjustment to the data, followed for MHNRsht, MHNRKhm, MHNRkht and the worst adjustment was obtained by MA, already for the Factor of Bayes the MHNR homoscedastic the ones that best was adjusted to the data were. For the conditional predictive ordinate MA, was better in relation to MHNR. The heritability in MHNR were growing in the environmental gradients in GPD345 -60 Kg; 0 Kg and +60 Kg. The genetic correlations between the level and inclination of the reaction norms were of high magnitude characterizing scale effect in interaction GxE. The hierarchical models of reaction norms are efficient to describe the alterations in the variance components in function of the environment to which the genotipe is exposed and to describe the presence of genotype by environment interaction in the characteristic GPD345 in Hereford catlle.

O fungo entomopatogênico e acaricida Metarhizium anisopliae é patógeno de uma vasta gama de insetos, sendo extensivamente utilizado em experimentos, bem como, no controle efetivo de alguns insetos-praga. Seu potencial uso para o controle de carrapatos como Boophilus microplus é também considerável. O processo de infecção de M. anisopliae é o melhor caracterizado entre os fungos entomopatogênicos, e combina pressão mecânica, por diferenciação do apressório, síntese e secreção de enzimas hidrolíticas altamente reguladas como proteases e, provavelmente, quitinases e lipases. As quitinases em fungos também são importantes em processos que requerem digestão celular, como germinação, crescimento e ramificação das hifas e autólise, visto que a quitina é o maior constituinte da parede celular desses organismos, sendo um sistema altamente regulado. Objetivamos neste trabalho, obter mais informações sobre o sistema quitinolitico do fungo M. anisopliae var. anisopliae linhagem E6 durante o processo de infecção do hospedeiro ou na morfogênese e crescimento. Com o objetivo de analisarmos o gene chi2 de M. anisopliae E6, clonamos e caracterizamos sua seqüência genômica, incluindo a região flanqueadora 5’. O gene chi2 é interrompido por dois pequenos íntrons típicos, de 210 pb e 75 pb, respectivamente. A ORF do gene chi2 apresenta 1.545 pb e codifica uma proteína predita de 419 aminoácidos (denominada CHI2), com massa molecular estimada de 44 kDa. Um peptídeo sinal característico com sítio de clivagem no aminoácido V19 está presente. A forma madura dessa proteína tem uma massa molecular estimada de 42 kDa e um pI teórico de 4,8. Análise por Southern de DNA genômico indica cópia única de chi2 no genoma de M. anisopliae. A seqüência de consenso SXGG, correspondendo ao sítio de ligação à quitina, foi identificada e a seqüência NGFDFDIE, que compõem o domínio catalítico de quitinases, está presente em CHI2. A construção de uma árvore filogenética determinou que a quitinase CHI2 pertence a um grupo diferente daquele da CHIT42 a qual provavelmente não está envolvida na patogenicidade. Uma análise in sílico da seqüência 5’ franqueadora do gene chi2 para determinação de possíveis elementos regulatórios foi efetuada. A regulação da transcrição dos genes chit1 e chi2 em M. ansisoplaie frente a diferentes fontes de carbono e em diferentes tempos de cultivo foi analisada. Os genes chit1 e chi2 apresentaram uma expressão tardia no fungo, a partir de 30 horas. O gene chi2 foi expresso majoritariamente em cultivos com quitina e sua expressão foi reprimida por glicose. O gene chit1 foi induzido em presença de fontes de carbono facilmente assimiláveis, como glicose e NAcGlc. Ambos os genes, chit1 e chi2, apresentaram alta expressão quando a fonte de carbono já estava exaurida e o fungo estava em autólise, sugerindo o requerimento dessas enzimas nessa fase. O cDNA do chit1 foi inserido em um vetor de expressão, em ambas orientações senso e antisenso, sob regulação do promotor do gene tef1α de M. anisopliae e o terminador do gene trpC de A. nidulans. Os transformantes com o gene chit1 na orientação senso mostraram superexpressão de atividade de quitinase e o transformante com o gene na orientação antisenso apresentou uma redução na atividade de quitinase. Também construímos quatro deleções na região flanqueadora 5’ do gene chit1 fusionadas com a proteína repórter SGFP, para localizar seqüências reguladoras no promotor e, destas construções, três foram transformadas em M. anisopliae.