A espermatogênese é um processo orquestrado e coordenado pelo qual os espermatozoides são produzidos. Ao final deste processo, o excesso de citoplasma presente nas espermátides é fagocitado, permanecendo um resíduo denominado de gota citoplasmática. Os espermatozoides em fase de maturação apresentam gota, que migra da região proximal para regiões mais distais da célula espermática. Estudos relacionam o remanescente citoplasmático à proteção antioxidante e à ativação metabólica de espermatozoides imaturos. Os mecanimos fisiológicos da maturação e os status oxidativo e metabólico em células epididimárias de bovinos são pobremente elucidados. Desta forma, foram realizados dois experimentos com o objetivo de caracterizar o status oxidativo e metabólico de espermatozoides bovinos durante a maturação espermática, e os possíveis papéis da gota citoplasmática envolvidas nesse processo. Para tal, amostras espermáticas foram recuperadas dos três segmentos epididimários (Cabeça, corpo e cauda) e submetidas às avaliações de cinética espermática (CASA) e testes morfofuncionais. Foram avaliadas as atividades das enzimas antioxidantes SOD e GPx e mensurados os níveis de ATP em cada amostra epididimária. Espermatozoides recuperados da cauda do epidídimo apresentaram maior porcentagem de células móveis e progressivas e elevados níveis de ATP em comparação aos demais grupos. As células provenientes do corpo apresentaram maior susceptibilidade à peroxidação lipídica e membranas plasmática e acrossomal lesionadas. Foi nesse segmento que também observamos a migração da gota e o início da aquisição da motilidade, e correlação negativa entre gota distal e susceptibilidade à peroxidação. Em amostras da cabeça, houve correlação positiva entre produção de EROs e níveis de ATP, e alto PMM; e correlação negativa entre atividade da SOD e susceptibilidade à peroxidação lipídica em amostras da cabeça. Não foram observadas diferenças significativas em relação ao potencial de membrana mitocondrial (PMM) e a atividade da SOD e da GPx entre os diferentes segmentos. Por meio dos principais resultados, pudemos sugerir que as células presentes na cauda do epidídimo apresentam o aparato energético ativo, devido à alta porcentagem de células móveis e níveis de ATP. As amostras provenientes do corpo evidenciam que é neste segmento em que a motilidade se inicia e que ocorre os principais remodelamentos de membrana. As correlações observadas nos permitem inferir que as mitocôndrias de espermatozoides bovinos imaturos já estivessem ativas desde o início da maturação, produzindo energia e EROs. Além disso, a correlação nos mostra o papel protetor da SOD contra à peroxidação lipídica. Paralelamente, sugerimos que a gota participe firmemente da ativação da motilidade e desempenhe papel antioxidante contra as EROs. Assim, concluímos que as modificações celulares inerentes ao processo de maturação e a presença da gota citoplasmática sejam cruciais no status oxidativo e metabólico de espermatozoides bovinos imaturos, afim desenvolver a capacidade fecundante do espermatozoide. / Spermatogenesis is an orchestrated and coordinated process by which sperm are produced. In the end of this process, the excess cytoplasm present in the spermatids is phagocytosed, remaining a called cytoplasmic droplet. Spermatozoa in the stage of maturation present cytoplasmic droplet, which migrates from the proximal region to more distal regions in sperm cell. Studies relate the cytoplasmic remnant to the antioxidant protection and to metabolic activation of immature sperma. The physiological mechanisms of maturation and the oxidative and metabolic status of bovine epididymal cells are poorly elucidated. Thus, two experiments aimed to characterize the oxidative and metabolic status of bovine sperm during epididymal maturation, and the possible cytoplasmic droplet roles involved in this process. For this, sperm samples were recovered from the three epididymal segments (Caput, corpus and cauda) and submitted to spermatic kinetics analysis (CASA) and morphofunctional tests. The activities of the antioxidant enzymes SOD and GPx were evaluated and the levels of ATP in each epididymal sample. Sperm cells recovered from the cauda of the epididymis showed a higher percentage of motile and progressive cells and high levels of ATP compared to the other groups. Cells from the corpus showed elevated susceptibility to lipid peroxidation and lesioned plasma and acrosomal membranes. It was in this segment that we also observed the migration of cytoplasmic droplet and the beginning of the acquisition of motility, and negative correlation between distal droplet and susceptibility to peroxidation. In samples from the caput, there was a positive correlation between ROS production and ATP levels, and high PMM; and negative correlation between SOD activity and susceptibility to lipid peroxidation in caput samples. No significant differences were observed in relation to mitochondrial membrane potential (PMM) and SOD and GPx activity among the different segments.By means of the main results, we could suggest that cells present in the cauda of the epididymis present the active energy apparatus, due to the high percentage of mobile cells. Samples from the corpus show that is in this segment that the motility begins and the main membrane remodeling occurs. The observed correlations allow us to infer that mitochondria of immature bovine sperm are already active since the beginning of maturation, producing energy and ROS. In addition, the correlation shows us the protective role of SOD against lipid peroxidation. In parallel, we suggest that cytoplasmic droplet participates firmly in the activation of motility and plays an antioxidant role against ROS. Thus, we conclude that the cellular modifications inherent in the sperm maturation process and the presence of cytoplasmic droplet are crucial in the oxidative and metabolic status of immature bovine spermatozoa, in order to develop fecundant capacity.

O monitoramento de emulsões utilizadas na indústria metalmecânica compõe uma importante atividade para o controle da qualidade das peças trabalhadas, proporcionando também o aumento da vida útil de ferramentas e maquinários utilizados neste setor através da lubrificação e refrigeração da região de corte. Em grande parte dos casos, estas emulsões são preparadas pela diluição de um fluido de corte em meio aquoso, constituindo assim um conjunto de gotículas estabilizadas em um meio contínuo devido à presença de compostos emulsificantes, estando constantemente sujeitas a ciclos de aquecimento e resfriamento durante os processos de usinagem. Apesar do acompanhamento deste material ser realizado através de análises periódicas usuais, não há um método eficiente estabelecido para verificar sua qualidade em tempo real e em linha de processo. Neste contexto, torna-se possível aplicar técnicas relacionadas à espectroscopia UV-Vis para se obterem informações sobre a estabilidade destes sistemas, correlacionando intensidades de espalhamento de luz com as dimensões das gotas presentes no meio. Dessa forma, tornou-se possível o estudo da desestabilização térmica de emulsões de um fluido de corte comercial, a qual mostrou-se, através do acompanhamento do cálculo do expoente do comprimento de onda, dependente do tempo de exposição ao aquecimento e de sua temperatura média temporal, não sendo influenciada pela perda de meio contínuo por processos evaporativos ou sua posterior reposição. Também se verificou que parâmetros típicos do processo de preparo de emulsões, como a temperatura do meio dispersante e o tempo de repouso do fluido de corte sobre a superfície do mesmo, apresentam fundamental importância para a definição do tamanho médio de gota inicial destes sistemas, o que forneceu evidência da possibilidade de se relacionar a área sob espectros de extinção de luz com tamanhos médios de gota. / The monitoring of emulsions used in the metal-mechanical industry comprise an important activity to the quality control of the products manufectured, also providing an increase in the working life of the tools and machinery employed in this sector through the lubrication and refrigeration of the cutting zone. In the majority of cases, these emulsions are prepared diluting a metalworking fluid in an aqueous media, constituting a collection of particles stabilized by emulsifiers and undergoing heating and cooling cycles during metalworking processes. Currently, monitoring routines are based on regular analyses of samples taken from the process fluid, and an effective in-line method is not available to monitor emulsion quality in real time. In this context, it is possible to apply techniques related to UV-Vis spectrocopy in order to obtain information concerning the stability of those systems, correlating light scattering intensities to the droplet dimensions. In this study, it was possible to investigate the thermal destabilisation of a commercial metalworking fluid emulsion, which showed, through the evaluation of the wavelength exponent, to be dependant on the exposure time to heating and its time-averaged temperature. It was also noted that the loss of continuous phase by evaporation and its reposition do not affect the emulsion stability. Moreover, it was observed that important emulsion preparation parameters, such as continuous phase temperature and the time span between the addition of the metalworking fluid on the water surface and the stirring, have fundamental roles in defining the initial average droplet size, which made possible to correlate the area under the light extinction spectra with average droplet sizes.

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Nos últimos anos, com a elevada demanda de pescados, intensificou-se também o cultivo (aquicultura), principalmente de camarão, para suprir o mercado consumidor. A aceitação de alimentos de origem marinha pelo consumidor está diretamente relacionada ao odor e sabor que devem ser atrativos e agradáveis. As principais substâncias químicas identificadas com as responsáveis pelo “flavor” dos alimentos marinhos são os bromofenóis simples 2-bromofenol (2-BF), 4-bromofenol (4-BF), 2,4-dibromofenol (2,4-DBF), 2,6-dibromofenol (2,6-DBF) e 2,4,6-tribromofenol (2,4,6-TBF). A microextração com gota única (SDME) é uma técnica que apresenta muitas vantagens, quando comparada com as técnicas clássicas, pois permite o isolamento e pré-concentração dos analitos em um passo único, seguida de introdução da amostra em sistema de análise por CG-EM. Esta técnica vem ganhando destaque por não ser exaustiva, utilizar uma quantidade muito pequena de solvente (estando de acordo com os preceitos da química verde), requer um curto tempo de análise, tem elevada sensibilidade e baixo custo. Nesse trabalho foi desenvolvida uma nova metodologia analítica baseada em SDME e CG-EM para determinação de bromofenóis em abdômen e ração de camarão cultivado (carcinicultura) (Lithopenaeus vannamei) e abdômen de camarão pescado (Xiphopenaeus kroyeri, camarão sete barbas) em diferentes estações do ano. A otimização da técnica por CG-EM permitiu boa separação dos bromofenóis simples em apenas 15 minutos. Esta nova metodologia foi validada em função da linearidade das curvas analíticas, limite de detecção e quantificação, precisão e recuperação para cada um dos cinco analitos estudados. A recuperação e precisão variaram, respectivamente, de 50,8 a 103% e de 2,27 a 18,8%. Os limites de detecção e quantificação variaram, respectivamente, de 0,200 a 0,499 ng mL-1 e de 0,500 a 1,000 ng mL-1. Não foi perceptível uma relação regular ou linear entre a sazonalidade e a concentração dos bromofenóis nos camarões pescados. Tanto na primavera quanto no verão a maior concentração detectada foi do 2,4-DBF, enquanto no outono e inverno foram o 4-BF e o 2-BF respectivamente. Já no abdômen do camarão de cativeiro e na ração deste a maior concentração foi do 4-BF. A menor concentração na ração, no abdômen do camarão cultivado e na estação verão corresponde ao 2-BF, na primavera e no outono ao 2,6-DBF, enquanto no inverno ao 4-BF. A metodologia desenvolvida, além de apresentar baixos limites de detecção e quantificação, envolve menor tempo de análise, menor consumo de energia e solventes, sendo assim compatível com os preceitos da Química Verde. / At present, the consumption of marine organisms (mainly fish and shrimp) has increased even more, due to its constitution protein. In recent years, with the high demand of fish, also accelerated cultivation (aquaculture), especially shrimp, to supply the consumer market. Acceptance of marine foods by consumers is directly related to odor and flavor that should be attractive and pleasant. The main chemicals identified as responsible for the "flavor" of marine foods are simple bromophenol 2-bromophenol (2-BF), 4-bromophenol (4-BF), 2,4-dibromophenol (2,4-DBF) 2,6-dibromophenol (2,6-DBF) and 2,4,6-tribromophenol (2,4,6-TBF). A single droplet with microextraction (SDME) is a technique that has many advantages compared with conventional techniques, since it allows the isolation and preconcentration of analytes in a single step, followed by introduction of the sample analysis system GC-MS. This technique has been gaining attention for not being exhaustive, use a very small amount of solvent (which is consistent with the principles of green chemistry), requires a short analysis time, has high sensitivity and low cost. In this work we developed a new analytical methodology based SDME and GC-MS to determine bromophenols in abdomen and feed farmed shrimp (Lithopenaeus vannamei) shrimp fished and abdomen (Xiphopenaeus kroyeri, seven shrimp whiskers) in different seasons year. Optimization of GC-MS technique allowed good separation of bromophenols simple in just 15 minutes. This new methodology was validated on the basis of the calibration curves linearity, limit of detection and quantification accuracy and recovery for each of the five analytes studied. The recovery and precision ranging, respectively, from 50,8 to 103% and from 2,27 to 18,8%. The limits of detection and quantification varied, respectively, from 0,200 to 0,499 ng ml-1 and 0,500 to 1,000 ng ml-1. It was not noticeable or a regular relationship between the linear and the concentration of bromophenol seasonality in shrimp fished. Both in spring and in summer the highest concentration detected was 2,4-DBF, while in autumn and winter were the 4-BF and 2-BF respectively. Already in the abdomen of shrimp feed in captivity and this was the highest concentration of 4-BF. The lowest concentration in the feed, abdomen farmed shrimp and summer season match 2-BF, in spring and autumn to 2,6-DBF, while in winter the 4-BF. The methodology developed, and have low limits of detection and quantification, involves less analysis time, lower power consumption and solvents and is therefore compatible with the principles of Green Chemistry

Made available in DSpace on 2015-07-22T20:50:20Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2009-02-27 / Objetivo: Implementar e padronizar técnicas de dosagem de atividade enzimática em gota seca de sangue em papel de filtro para as seguintes enzimas lisossomais: - galactosidase A, que permite diagnosticar pacientes com Doença de Fabry, - iduronidase, que permite identificar pacientes com Mucopolissacaridose tipo I; - glicosidase e quitotriosidase, que permitem diagnosticar pacientes com Doença de Gaucher e -glicosidase, que permite identificar pacientes com Doença de Pompe, além da enzima -galactosidase, que possibilita avaliar a qualidade do material. Determinar o valor de corte para todas estas enzimas, que irá possibilitar a diferenciação dos indivíduos saudáveis dos pacientes. Metodologia: Ao todo foram selecionados 302 indivíduos, de ambos os sexos e com idades entre 18 e 82 anos. Foram coletados de 5 a 10 mL de sangue periférico de cada voluntário, e posteriormente 4 ou 5 gotas de sangue foram transferidas com o auxílio de uma pipeta tipo Pasteur para um papel de filtro. Todas as técnicas de dosagem de atividade enzimática realizadas neste trabalho baseiam-se na ação da enzima de interesse sobre um substrato sintético específico, que libera após clivagem uma molécula que emite fluorescência. A atividade enzimática será proporcional à quantidade de fluorescência detectada pelo equipamento. Resultados: Com as dosagens de atividade enzimática realizadas neste trabalho foram obtidos os seguintes resultados (média±desvio-padrão; valores mínimos e máximos), expressos em μmol/L/h: -galactosidase (14,09±4,36; 4,04-29,65); -galactosidase A (4,57±1,37; 1,44-10,67); -iduronidase (3,45±1,21; 1,40-7,78); -glicosidase (4,57±1,37; 1,44-10,67); quitotriosidase (12,88±9,84; 0,00- 48,07); -glicosidase (5,41±1,74; 2,10-10,65); também expressa pela razão - glicosidase neutra/ -glicosidase ácida inibida (13,19±4,26; 5,03-28,58); e pela por cento inibição da -glicosidase ácida (70,66±7,60; 36,38-87,08). Os cálculos de sensibilidade e especificidade, realizados confrontando a técnica que utiliza papel de filtro com a técnica que utiliza leucócitos, resultaram em valores acima de 50 por cento, que são considerados adequados. Conclusões: As análises estatísticas dos resultados obtidos possibilitaram a escolha do valor de corte mais preciso, o que permite a diferenciação entre indivíduos saudáveis e pacientes com Doença de Fabry, Doença de Pompe, Doença de Gaucher e Mucopolissacaridose tipo I. Os valores de atividade enzimática observados se mostraram de acordo com os descritos na literatura, com pequenas variações. As técnicas de diagnóstico que utilizam papel de filtro podem ser consideradas uma ferramenta eficiente, barata e simples de serem realizadas. Objetivo: Implementar e padronizar técnicas de dosagem de atividade enzimática em gota seca de sangue em papel de filtro para as seguintes enzimas lisossomais: - galactosidase A, que permite diagnosticar pacientes com Doença de Fabry, - iduronidase, que permite identificar pacientes com Mucopolissacaridose tipo I; - glicosidase e quitotriosidase, que permitem diagnosticar pacientes com Doença de Gaucher e -glicosidase, que permite identificar pacientes com Doença de Pompe, além da enzima -galactosidase, que possibilita avaliar a qualidade do material. Determinar o valor de corte para todas estas enzimas, que irá possibilitar a diferenciação dos indivíduos saudáveis dos pacientes. Metodologia: Ao todo foram selecionados 302 indivíduos, de ambos os sexos e com idades entre 18 e 82 anos. Foram coletados de 5 a 10 mL de sangue periférico de cada voluntário, e posteriormente 4 ou 5 gotas de sangue foram transferidas com o auxílio de uma pipeta tipo Pasteur para um papel de filtro. Todas as técnicas de dosagem de atividade enzimática realizadas neste trabalho baseiam-se na ação da enzima de interesse sobre um substrato sintético específico, que libera após clivagem uma molécula que emite fluorescência. A atividade enzimática será proporcional à quantidade de fluorescência detectada pelo equipamento. Resultados: Com as dosagens de atividade enzimática realizadas neste trabalho foram obtidos os seguintes resultados (média±desvio-padrão; valores mínimos e máximos), expressos em μmol/L/h: -galactosidase (14,09±4,36; 4,04-29,65); -galactosidase A (4,57±1,37; 1,44-10,67); -iduronidase (3,45±1,21; 1,40-7,78); -glicosidase (4,57±1,37; 1,44-10,67); quitotriosidase (12,88±9,84; 0,00- 48,07); -glicosidase (5,41±1,74; 2,10-10,65); também expressa pela razão - glicosidase neutra/ -glicosidase ácida inibida (13,19±4,26; 5,03-28,58); e pela por cento inibição da -glicosidase ácida (70,66±7,60; 36,38-87,08). Os cálculos de sensibilidade e especificidade, realizados confrontando a técnica que utiliza papel de filtro com a técnica que utiliza leucócitos, resultaram em valores acima de 50 por cento, que são considerados adequados. Conclusões: As análises estatísticas dos resultados obtidos possibilitaram a escolha do valor de corte mais preciso, o que permite a diferenciação entre indivíduos saudáveis e pacientes com Doença de Fabry, Doença de Pompe, Doença de Gaucher e Mucopolissacaridose tipo I. Os valores de atividade enzimática observados se mostraram de acordo com os descritos na literatura, com pequenas variações. As técnicas de diagnóstico que utilizam papel de filtro podem ser consideradas uma ferramenta eficiente, barata e simples de serem realizadas. / Objectives: To implement and to standardize enzymatic activity techniques using dried blood spots on filter paper for the enzymes -galactosidase A, for the diagnosis of Fabry Disease patients; -iduronidase, for the diagnosis of Mucopolysaccharidosis type I patients; -glucosidase and chitotriosidase, for the diagnosis of Gaucher Disease patients and acid -glucosidase, that allows the diagnosis of Pompe Disease patients; besides the enzyme -galactosidase, that allows assessing the quality of the material. In addition, to determine the cut-off value for each enzyme, that will enable the discrimination between healthy subjects and patients. Methodology: 302 volunteers of both gender were selected, with ages between 18 and 82 years old. Peripheral blood was collected in heparin containing tubes and blood spots were prepared according to the protocol. All enzymatic activity techniques carried out in this work were based in the cleavage of a specific synthetic substrate, by the action of target enzymes which then releases a fluorescent molecule that will be detected by the fluorimeter. Results: The values of enzyme activity obtained in this work were the following (mean±standard deviation; minimum and maximum values), expressed in μmol/L/h: -galactosidase (14,09±4,36; 4,04-29,65); -galactosidase A (4,57±1,37; 1,44-10,67); -iduronidase (3,45±1,21; 1,40-7,78); -glucosidase (4,57±1,37; 1,44-10,67); chitotriosidase (12,88±9,84; 0,00-48,07); -glucosidase (5,41±1,74; 2,10-10,65); also expressed in the ratio of neutral -glucosidase/inhibited acid -glucosidase (13,19±4,26; 5,03-28,58); and as % of acid -glucosidase inhibition (70,66±7,60; 36,38-87,08). The sensibility and specificity values obtained with the comparison of leukocytes and dried blood spots results showed that all techniques are reliable and appropriate. Conclusions: The results from this work enabled us to choose the most accurate cut-off values which to distinguish between healthy subjects and patients with Fabry Disease, Mucopolysaccharidosis type I, Gaucher Disease and Pompe Disease. Enzyme activity values are in agreement with the literature data. The use of dried blood spots for lysosomal disease diagnosis can be considered efficient, inexpensive and simple to be performed. / TEDE / BV UNIFESP: Teses e dissertações

Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e Tecnológico / The gout is an extremely painful type of arthritis. Despite the large number of drugs available for its treatment, they usually cause many adverse effects that limit their use. Then, further investigations are necessary for a better understanding the different mechanisms involved in gout. It was found previously that TRPV1 receptor, an ion channel modulated by various inflammatory mediators mediated edema and the nociceptive responses induced by subcutaneous injection of MSU in rats. In this plantar model, activation of TRPV1 depended largely on the activation of mast cells. Since the environments articular broadly differ as their cellular constituents, questioned the involvement of this receptor in a more reliable model with this clinical arthropathy. The aim of this study was to investigate the role of TRPV1 in a model of acute gout induced by intra-articular administration (i.a.) of crystals of monosodium urate (MSU) tíbio-tarsal articulation rats. It was observed that the antagonism of the TRPV1 receptor (by the selective antagonist SB366791), systemic knockdown (caused by treatment with resiniferatoxin subcutaneous injection a TRPV1 agonist) or axonal silencing (perineural injection a combination of capsaicin and QX-314) sensory fibers TRPV1-positive significantly prevented the pain-related behaviors (spontaneous nociception, heat hyperalgesia, and mechanical allodynia) and inflammation (edema, plasma extravasation, leukocyte infiltration and IL - 1β ) was caused by the administration of MSU. Additionally, we observed a significant increase in immunoreactivity of TRPV1 in articular tissue 4 hours after administration of MSU. Subsequently, we investigated the possibility role of NO, an endogenous activator of TRPV1 in this model. The administration of MSU induced an increase in the production of stable metabolites (NOx) emissions of nitric oxide (NO) exudates in the joint, which was inhibited by a selective inhibitor of nitric oxide synthase (NOS). In addition, the non-selective NOS inhibitor prevented the spontaneous nociception, edema and plasma extravasation, and leukocyte infiltration after MSU injection. Moreover it was found that the administration of a NO donor induced heat hyperalgesia and spontaneous nociception, but not mechanical allodynia and edema. The TRPV1 receptor antagonism prevented only the edema caused by that donor. Thus, these results suggest that TRPV1 plays a role in the development and maintenance of nociceptive and inflammatory responses triggered in the model of acute articular gout, but only edematogenic response appears to be mediated by TRPV1 activation by NO. / A gota é um tipo de artrite extremamente dolorosa. Apesar do grande número de fármacos disponíveis para seu tratamento. Muitos causam efeitos adversos que limitam seu uso. Maiores investigações são necessárias para um melhor entendimento dos diferentes mecanismos envolvidos na gota. Verificou-se previamente que o receptor TRPV1, um canal iônico modulado por vários mediadores inflamatórios, mediou as respostas nociceptiva e edematogênica induzidas pela injeção subcutânea de MSU em ratos. Neste modelo plantar, a ativação do TRPV1 dependeu amplamente da ativação de mastócitos. Sendo o ambiente articular amplamente diferenciado quanto a sua constituição celular, questionou-se o envolvimento deste receptor em um modelo mais fidedigno com a clínica dessa artropatia. O objetivo deste estudo foi investigar o papel do TRPV1 em um modelo de gota aguda, induzida pela administração intra-articular (i.a.) de cristais de urato monossódico (MSU) na articulação tíbio-tarsal de ratos. Observou-se que o antagonismo do receptor TRPV1 (pelo antagonista seletivo do receptor TRPV1 SB366791), a desfuncionalização sistêmica (causada pelo tratamento subcutâneo com resiniferatoxina) ou o silenciamento axonal (com a combinação periciática de capsaicina e QX 314) das fibras sensoriais TRPV1-positivas preveniram significativamente os comportamentos relacionados à dor (nocicepção expontânea, hiperalgesia ao calor e alodínea mecânica) e à inflamação (edema, extravasamento plasmático, infiltração de leucócitos e produção de IL-1β) causadas pela administração i.a. de MSU. Adicionalmente, observou-se um aumento expressivo da imunoreatividade do TRPV1 no tecido articular 4 horas após a administração do MSU. Posteriormente investigou-se a possibilidade do NO ser um ativador endógeno do TRPV1 neste modelo. Demonstrou-se que a administração i.a. de MSU induziu um aumento na produção de metabólitos estáveis (NOx) do óxido nítrico (NO) nos exsudatos articulares, o qual foi inibido pela administração i.a. de um inibidor não seletivo da óxido nítrico sintase (NOS). Além disso, o inibidor não seletivo da NOS preveniu a nocicepção espontânea, o edema e também o extravasamento plasmático, a infiltração de leucócitos. Por outro lado constatou-se que a administração i.a. de um doador de NO induziu nocicepção espontânea e hiperalgesia ao calor, mas não alodínea mecânica ou edema. O antagonismo do receptor TRPV1 preveniu somente o edema causado por esse doador. Assim, estes resultados sugerem que o TRPV1 exerce um papel relevante no desenvolvimento e manutenção das respostas nociceptiva e inflamatória desencadeadas no modelo articular de crise aguda de gota, porém, apenas a resposta edematogênica parece ser mediada pela ativação TRPV1 através do NO.

Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior / Gout is a prevalent form of inflammatory arthritis, which leads to patients poor quality of life. Acute gout attacks produce severe joint pain and inflammation associated with oxidative stress induction. This pathology is provoked by the accumulation of monosodium urate (MSU) crystals, but the underlying pain mechanisms in acute gout attacks are still poorly understood. The transient potential receptor ankyrin 1 (TRPA1) is a sensor for endogenous oxidant compounds, such as hydrogen peroxide (H2O2), found in peptidergic sensory fibers associated to inflammatory pain. The goal of this study was to explore the TRPA1 role in two models of monosodium urate (MSU) crystals-induced inflammation and nociception in rats and mice. We found that TRPA1 antagonism (HC-030031 or camphor), TRPA1 gene deletion or defunctionalization by capsaicin pretreatment of peptidergic TRPexpressing primary sensory neurons markedly decreased MSU-induced nociception and edema after intraplantar (i.pl.) or intra-articular (i.a.) injection. In addition to these neurogenic effects, MSU increased H2O2 levels in the injected tissue, an effect that was abolished by the H2O2-detoxifing, catalase enzyme. TRPA1 immunoreactivity in sciatic nerve and the levels of calcitonin gene related peptide (CGRP) in the synovial tissue were also increased by MSU. H2O2 i.pl. or i.a. injection mimicked MSU, causing nociception and edema prevented by TRPA1 antagonism. Moreover, TRPA1 blockage abrogated the increase in neutrophil infiltration and interleukin-1β elicited by MSU. Our results suggest that MSU-injection increases tissue H2O2 thereby stimulating TRPA1 on sensory nerve endings to produce inflammation and nociception. Thus, TRPA1 may be explored as a valuable target in acute gout management. / A gota é uma forma prevalente de artrite inflamatória que reduz a qualidade de vida dos pacientes. Os ataques agudos de gota produzem dor articular grave e inflamação que são associadas à produção de estresse oxidativo. Esta patologia é provocada pela deposição de cristais de urato monossódico (MSU), mas os mecanismos relacionados à dor observada nos ataques agudos de gota ainda são pouco esclarecidos. O receptor de potencial transitório anquirina 1 (TRPA1) é um sensor para compostos oxidantes, como o peróxido de hidrogênio (H2O2), encontrado em fibras sensoriais peptidérgicas e este está relacionado ao desenvolvimento de dor inflamatória. O objetivo deste estudo foi avaliar o papel do receptor TRPA1 em dois modelos de inflamação e nocicepção induzidos pela administração de cristais de MSU em ratos e camundongos. Observamos que o antagonismo do receptor TRPA1 (HC-030031 ou cânfora), a deleção genética deste canal, ou ainda a indução de dessensibilização dos neurônios sensoriais que expressam os receptores TRP pelo tratamento com capsaicina reduziram marcantemente a nocicepção e edema induzido pela administração intraplantar (i.pl.) ou intra-articular (i.a.) dos cristais de MSU. Além destes efeitos neurogênicos a administração de MSU aumentou o conteúdo de H2O2 nos tecidos injetados, um efeito que foi bloqueado pela enzima catalase, e também aumentou a imunoreatividade para o receptor TRPA1 no nervo ciático e no tecido sinovial, e também os níveis do peptídeo relacionado ao gene da calcitonina (CGRP) no tecido sinovial. A administração de H2O2 por via i.pl. ou i.a. induziu efeitos semelhantes àqueles induzidos pela administração de MSU, e estes foram reduzidos pela administração de antagonistas TRPA1. Ainda, o bloqueio do receptor TRPA1 reduziu a infiltração de neutrófilos e a produção de interleucina 1β induzidas pela administração de cristais de MSU. Em conclusão, os nossos resultados sugerem que a administração dos cristais de MSU é capaz de aumentar a produção de H2O2 que então poderia estimular o receptor TRPA1 expresso em neurônios sensoriais causando nocicepção e inflamação dos tecidos. Dessa maneira, o canal TRPA1 poderia ser explorado como um alvo em potencial para o tratamento dos ataques agudos de gota.

Este trabalho apresenta um método para análise do contorno de gotas de chuva artificial em imagem digital, o qual se caracteriza como uma ferramenta para melhor compreensão dos processos agrícolas que envolvem o uso de chuvas artificiais, como a irrigação e a aplicação de defensivos, sendo desenvolvido com o uso de técnicas para análise de formas bidimensionais e processamento de sinais, como representação de formas por contornos paramétricos, análise de Fourier e filtragem gaussiana. Os resultados obtidos demonstram precisão na análise de imagens de aglomerados de gotas, acrescentando as características de descritor apresentadas pela curvatura, assim como a flexibilidade de calibração oferecidas pela abordagem multi-escala adotada, possibilitando a obtenção de erros de medida não maiores que 5%, para os padrões circulares testados com raios entre 10 e 200 pixels / This work presents a method for contour analysis of artificial rain drop based on both digital image and curvature processing. The method is characterized as a tool, which allows a better understanding of the raindrops in irrigation and agrochemicals spraying processes. Its development was based on parametric contours representation of shapes, Fourier analysis, and Gaussian filtering. Results show the suitability of the method, which presents errors smaller than 5% for curvature determination in the range of the radius variation in betwen 10 and 200 pixels as well as the ability for raindrop clusters analysis

No laboratório de Análise, Processamento e Reologia de Materiais Poliméricos da Escola Politécnica da USP tem sido estudadas blendas de Poliamida-6 (PA-6) e filme de poli(vinil butiral) (PVB), como uma alternativa para reciclagem do filme de PVB oriundo do processo de separação dos componentes do vidro laminado pós-consumo. As propriedades mecânicas de uma blenda polimérica dependem da sua morfologia e, por sua vez, a morfologia depende das propriedades reológicas e da tensão interfacial entre os polímeros formadores da blenda, que para o caso de blendas envolvendo filme de PVB podem mudar em função da concentração de plastificante presente na composição do filme. Apesar da importância do seu conhecimento, a tensão interfacial entre PA-6 e filme de PVB não é conhecida. O presente trabalho teve como objetivo avaliar a tensão superficial do filme de PVB e da PA-6. O método utilizado foi o da gota pendente. Também estudou-se a influência da adição de plastificante na tensão superficial do filme de PVB. Os resultados mostraram que a tensão superficial dos polímeros estudados decresce com o aumento da temperatura (temperatura variando entre 240 e 260ºC). Em particular, para o filme de PVB a entropia de superfície ( (d/dT) ) apresentou um valor acima dos normalmente encontrados para polímeros fundidos. Este comportamento foi atribuído à estabilidade térmica do filme. O filme de PVB utilizado nos ensaios de tensão superficial foi caracterizado por Espectroscopia no Infravermelho (FTIR), Espectroscopia no Ultravioleta/Visível (UV-VIS), Espectroscopia Eletrônica para Análise Química (ESCA) e Análise Termogravimétrica (TG). Os resultados obtidos comprovaram que há mudanças na estrutura do PVB durante sua exposição a temperaturas elevadas, por longo período de tempo (condições do ensaio de tensão superficial). Foi observado, primeiramente, a evaporação do plastificante, seguida por perda de grupos polares (-OH, C=O e C-O-C) presentes na estrutura do PVB. A tensão superficial da Poliamida-6 foi determinada para temperaturas de 250 e 260ºC. Os resultados mostraram que a PA-6 manteve-se estável durante os ensaios. / In the Rheology and Polymer Processing Laboratory of Escola Politécnica of the University of São Paulo, Polyamide-6 / poly(vinyl butiral) film blends have been studied as an alternative for the recycling of post-consumption laminated glasses. The mechanical properties of these blends were studied and explained in light of their morphology. The morphology of polymer blends strongly depends on the rheological behavior of the blend and on the interfacial tension between the polymers forming the blend. In the case of Poliamide-6 (PA-6)/poly(vinyl butiral) (PVB) film blends, the interfacial tension depends on the plasticizer concentration present in PVB film. However, to our knowledge neither the PA-6/PVB film interfacial tension nor the surface tension of PVB film at temperatures above softening temperatures have been evaluated. In this work, the surface tension of poly(vinyl butyral) and polyamide was evaluated using the pendant drop method. Also it was tried to evaluate the surface tension of PVB film as a function of plasticizer content. The surface tension values obtained were in the same range as the ones obtained for other molten polymers: the surface tension decreases with increasing temperature (for temperatures ranging from 240 to 260°C). However, the value of PVB film surface entropy ((d/dT) where is the surface tension and T is the temperature) was much larger than values reported for other molten polymers. This result was attributed to thermal stability of PVB film during the surface tension measurement. The drops of PVB film after surface tension analysis were examined for any change in their functional groups using infrared spectroscopy (FITIR), ultraviolet-visible spectroscopy (UV/VIS), electron spectroscopy for chemical analysis (XPS/ESCA) and thermogravimetric analysis (TG). The results showed that changes in the chemical structure of PVB film occur during surface tension measurement. First, the plasticizer within the PVB film evaporates and, then, the PVB suffers reduction of polar units and creation of C=C bonds. The surface tension of PA-6 was evaluated for temperatures of 250 and 260°C. The PA-6 remained stable during tests.

Submitted by Adriana Martinez (amartinez@unoeste.br) on 2017-09-05T12:53:44Z No. of bitstreams: 2 license_rdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5) Luci.pdf: 503217 bytes, checksum: bcb750cc3835332fed12d8730ecb4254 (MD5) / Made available in DSpace on 2017-09-05T12:53:44Z (GMT). No. of bitstreams: 2 license_rdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5) Luci.pdf: 503217 bytes, checksum: bcb750cc3835332fed12d8730ecb4254 (MD5) Previous issue date: 2017-06-22 / This work aims to study the effects of omega 3 and / or vitamin B12 administration on sperm and histomorphometric parameters of the reproductive organs of Wistar rats and their correlation with the temperature of these regions. Sixteen rats were divided into four groups (n = 4 per group) who received daily injections for 30 days, being: Control Group - saline solution; Group Omega three- fish oil (Equaliv®) 1g / kg; Group B12 - vitamin B12 (Monovin B12 ®) 3μg; And Group Omega + B12 - fish oil 1g / kg and vitamin B12 3μg. Analyzed sperm morphology and the histomorphometries were evaluated by the Motic Images Plus® version 2.0 program. On a daily basis, thermographic images of areas of the body (FLIR E40®, Sweden) were analyzed and analyzed by the Flir Tools 2.1® program. Data were submitted to analysis of variance and Tukey test at 5%. Omega 3 reduced the seminiferous epithelium and B12 minimized this deleterious effect (P ≤ 0.05). The surface temperature of the scrotum was higher in group B12 (P ≤0.05). There was a high positive correlation between scrotum surface temperature and distal cytoplasmic droplet percentage (P = 0.678). / Este trabalho tem como objetivo estudar os efeitos da administração do ômega três e/ou vitamina B12 sobre parâmetros espermáticos e histomorfométricos dos órgãos reprodutivos de ratos Wistar e sua correlação com a temperatura dessas regiões. Utilizou-se 16 ratos, divididos em quatro grupos (n=4 por grupo) que receberam injeções diárias por 30 dias, sendo: Grupo Controle – solução salina; Grupo Ômega três– óleo de peixe (Equaliv®) 1g/kg; Grupo B12 – vitamina B12 (Monovin B12®) 3µg; e Grupo Ômega + B12 – óleo de peixe 1g/kg e vitamina B12 3µg. Analisados morfologia espermática e as histomorfometrias foram avaliados pelo programa Motic Images Plus® versão 2.0. Diariamente, foram obtidas imagens termográficas de áreas do corpo (FLIR E40®, Suécia) e analisadas pelo programa Flir Tools 2.1®. Os dados foram submetidos à análise de variância e teste de Tukey a 5%. O ômega 3 reduziu o epitélio seminífero e a B12 minimizou esse efeito deletério (P ≤ 0,05). A temperatura da superfície do escroto foi superior no grupo B12 (P ≤0,05). Houve alta correlação positiva entre temperatura da superfície do escroto e porcentagem de gota citoplasmática distal (P = 0,678).