L’effet athéroprotecteur des Lipoprotéines de Haute Densité (HDL) est principalement attribué à leur rôle clé dans Transport Retour du Cholestérol (RCT), un processus par lequel le cholestérol excédentaire des cellules périphériques est capté par les particules HDL pour être amené au foie où il sera préférentiellement sécrété dans les voies biliaires, puis excrété dans les fèces. Deux voies indépendantes ont été identifiées comme étant impliquées dans l’endocytose hépatique du HDL. La première est la voie ecto-F1-ATPase/P2Y13 dans laquelle l’apoA-I (apolipoprotéine majoritaire des HDL) se lie à la F1-ATPase exprimé à la surface des hépatocytes (ecto-F1-ATPase) et stimule l’hydrolyse d’ATP en ADP. L’ADP ainsi généré active le récepteur purinergique P2Y13 pour stimuler l’endocytose de l’holoparticule HDL (protéines + lipides) via un troisième récepteur différent de SR-BI. Les souris invalidées pour P2Y13 présentent une diminution des sécrétions de lipides biliaires accompagnée d’une diminution du RCT des macrophages vers les fèces sous régime normolipidique. Un régime riche en cholestérol (1.25% cholestérol) accentue ce phénotype. La voie SR-BI, quant à elle, est responsable de la captation sélective du cholestérol estérifié des HDL par le foie. Les souris invalidées pour SR-BI spécifiquement au niveau du foie (SR-BI KOfoie) présentent une hypercholestérolémie principalement attribuée à une augmentation du HDL-C et développent des plaques d’athérosclérose sous régime hypercholestérolémique. Dans une étude récente, nous avons montré que l’invalidation de P2Y13 dans le modèle murin proathérogène apoE KO induit une augmentation du développement d’athérosclérose associée à une diminution des sécrétions de lipides biliaires et du RCT des macrophages vers les fèces. De plus, dans ces souris, l’expression hépatique transcriptionnelle et protéique de SR-BI étaient fortement augmentées par rapport aux souris apoE KO, suggérant qu’un possible mécanisme de compensation pourrait exister entre les récepteurs P2Y13 et SR-BI. L’objectif de ma thèse a été d’étudier la contribution respective des récepteur P2Y13 et SR-BI dans le métabolisme du HDL-C et le développement de l’athérosclérose. Nous avons croisé des souris P2Y13 KO avec des souris SR-BI KOfoie et nous avons obtenu des souris doublement invalidées (P2Y13 x SR-BIfoie dKO). Le phénotype métabolique des souris dKO a été étudié sous régime normolipidique et hypercholestérolémique et le développement d’athérosclérose sous régime hypercholestérolémique. Par rapport aux souris sauvages, les souris dKO sous régime normolipidique, présentent une augmentation du cholestérol plasmatique similaire à celle observée chez les souris SR-BI KOfoie, principalement imputable à une augmentation du HDL-C. Les souris dKO, mais pas les souris SR-BI KO, montrent une diminution des sécrétions de lipides biliaires comparable à celle observée chez les souris P2Y13 KO. Ce phénotype métabolique observé chez les souris dKO est accentué sous régime hypercholestérolémique et est associé à une augmentation des plaques d’athérosclérose par rapport aux souris SR-BI KOfoie. L’ensemble des résultats montrent que la délétion hépatique de SR-BI contribue essentiellement à une augmentation des taux plasmatiques de cholestérol, et plus particulièrement HDL-C. La délétion de P2Y13, quant à elle, n’induit aucune variation des lipides plasmatiques mais contribue principalement à une diminution des sécrétions de lipides biliaires qui contribue au développement de l’athérosclérose chez les souris invalidées pour SR-BI hépatique. Ces résultats soutiennent le concept selon lequel le flux de cholestérol transporté par les HDL des tissus périphériques vers le foie et les voies de sécrétions biliaires est plus important dans l’athéro-protection que la concentration plasmatique en HDL-C. L’activation du récepteur P2Y13 constitue une approche thérapeutique intéressante pour cibler les HDL contre le développement de l’athérosclérose. / The atheroprotective effect of High Density Lipoproteins (HDL) is mostly attributed to their central role in Reverse Cholesterol Transport (RCT), a process whereby excess cholesterol is taken up from peripheral cells to be processed into HDL particles, then later delivered to the liver where it is preferentially secreted into the bile, either as free cholesterol or after transformation into bile acids, to be further excreted into the feces. Two independent pathways have been identified as being involved in the hepatic HDL uptake. The first one involves the ecto-F1-ATPase/P2Y13 pathway. Briefly, apoA-I (main HDL apolipoprotein) binds to the F1-ATPase expressed ectopically at the surface of the hepatocyte (ecto-F1-ATPase) and stimulates hydrolysis of extracellular ATP into ADP. The generated ADP selectively activates the purinergic receptor P2Y13 resulting in subsequent endocytosis of the HDL-holoparticle (i.e. protein and lipid moieties) through a low-affinity binding site distinct from SR-BI. Mice deficient for P2Y13 display decreased biliary lipids secretion associated to an impaired macrophage-to-feces RCT when fed a Chow Diet (CD), phenotype emphasized when fed a High Cholesterol Diet (HCD). Differently, the SR-BI pathway mediates selective HDL-cholesteryl ester uptake by the liver. Mice with liver-specific SR-BI deficiency (SR-BI-KOliver) display a hypercholesterolemia mainly due to an increase on HDL-C and develop atherosclerosis when fed a HCD. In a recent study, we showed that P2Y13 extinction in the pro-atherogenic mouse model apoE-KO resulted in an increase of atherosclerotic plaque development associated to a decreased biliary lipid secretion and macrophage-to-feces RCT. Moreover, in these mice, mRNA and protein level of hepatic SR-BI were consistently increased as compared to apoE KO mice, suggesting that a possible compensatory mechanism might exist between P2Y13 and SR-BI receptors. My thesis aimed to study the respective contribution of P2Y13 and hepatic SR-BI in HDL-C metabolism and atherosclerosis development. We crossbred P2Y13 KO with SR-BI KOliver mice and obtained double knockout mice (P2Y13 x SR-BIliver dKO). The phenotype of dKO mice was analysed with regards to HDL-C metabolism either on CD or after 20 weeks of HCD, and to atherosclerosis development on HCD. When fed a CD, dKO mice, showed an increase in plasma cholesterol compared to WT mice similar to that observed in SR-BI KOliver mice, mainly due to an increase in HDL-C. DKO, but not SR-BI KOliver mice, showed impaired biliary lipid secretion to the same extent than P2Y13 KO mice. HCD accentuated the metabolic phenotype of dKO mice, with an increase in atherosclerotic lipid lesions in dKO mice compared to SR-BI KOliver mice. The phenotypic features of P2Y13 x SR-BIliver dKO mice show that hepatic extinction of SR-BI essentially contributes to an increase of HDL-C levels. Conversely, P2Y13 extinction does not induce any change in plasma lipoprotein levels but mainly contributes to a decrease of hepato-biliary cholesterol secretions, which translates into an increased atherosclerosis development, on top of SR-BI hepatic extinction. These results support the concept that the dynamic flux of cholesterol transported by HDL from macrophage foam cells to the liver for further bile secretion is essential for athero-protection rather than steady-state HDL-C concentration. In the future of HDL-therapies, P2Y13 receptor activation constitutes an interesting therapeutic approach against atherosclerosis development.

Submitted by Ana Maria Fiscina Sampaio (fiscina@bahia.fiocruz.br) on 2013-10-18T17:05:09Z No. of bitstreams: 1 Marcos Soares Vieira.Atividades das paraoxanase... 2013.pdf: 1230050 bytes, checksum: 912c1ef5707ad9fba3fa861c29a41e7e (MD5) / Made available in DSpace on 2013-10-18T17:05:09Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Marcos Soares Vieira.Atividades das paraoxanase... 2013.pdf: 1230050 bytes, checksum: 912c1ef5707ad9fba3fa861c29a41e7e (MD5) Previous issue date: 2013 / Fundação Oswaldo Cruz. Centro de Pesquisas Gonçalo Moniz. Salvador, BA, Brasil / Doenças cardiovasculares (DCV) são as principais causas de morbidade e mortalidade do ocidente, aparecendo como causa mais frequente de óbitos nos países desenvolvidos e em desenvolvimento. Alterações no metabolismo das lipoproteínas estão diretamente relacionadas ao aumento do risco de DCV. Objetivos: Avaliar o remodelamento da partícula HDL determinando a capacidade de incorporação de fosfolipídeos na HDL, a atividade da paraoxonase/aril-esterase (PON), dentre outros marcadores plasmáticos relacionados ao metabolismo da HDL, além da influência da hipertrigliceridemia neste processo. Casuística e Métodos: Estudo de corte transversal, com amostragem por conveniência. Foram avaliados ambulatorialmente 66 indivíduos do sexo masculino, idade entre 32 e 75 anos (média: 51,1), distribuídos em dois grupos, não-hipertrigliceridêmicos (NHipTRI) e hipertrigliceridêmicos (HipTRI), estes últimos estratificados em dois níveis, HipTRI HDL-C≥40 e HipTRI HDL-C<40. Foram realizados testes estatísticos paramétricos e não-paramétricos, utilizando o software GraphPad Prism 5.01 (USA), e as diferenças foram consideradas significantes quando p<0,05 para intervalo de confiança de 95%. Resultados: Não foram observadas diferenças nas prevalências dos fatores de risco para DCV, como sedentarismo, etilismo, hipertensão, diabetes e tabagismo, entre os grupos. A atividade da PON e a incorporação de fosfolipídeos foram similares nos três grupos estudados. O tamanho estimado da partícula HDL foi maior no grupo NHipTRI (0,29±0,05), do que nos grupos hipertrigliceridemicos: HipTRI HDL ≥40 (0,26±0,03), e HipTRI HDL<40 (0,24±0,05). No grupo NHipTRI foi encontrada correlação linear positiva entre a atividade da PON e apoA (r=0,3908, p=0,0484, Pearson). Já no grupo HipTRI HDL≥40 houve correlação positiva entre PON e apoB (r=0,5678, p=0,0342, Pearson). Por outro lado, no grupo HipTRI HDL<40 houve correlação linear negativa entre apoB e incorporação de fosfolipídeos na HDL (r=-0,5144, p=0,0290, Pearson). Conclusão: Desta forma, os resultados sugerem que a hipertrigliceridemia interfere não só no remodelamento da HDL, como também sua capacidade antioxidante. / Cardiovascular diseases (CVD) are the leading causes of morbidity and mortality in the western world and is the major cause of death in developed and developing countries. Lipoprotein metabolism is directly related to the risk of developing CVD. Objectives: this study aimed to evaluate HDL particle remodeling, determining HDL ability to incorporate phospholipids, paraoxonase (PON) activity, among others plasma markers related to HDL metabolism, besides the influence of hypertriglyceridemia in this process. Casuistic and Methods: a cross-sectional study with convenience sampling, were carried out with 66 subjects outpatient males, aged between 32 and 75 years old (mean: 51.1), into nonhypertriglyceridemic (NHipTRI) and hypertriglyceridemic (HipTRI) groups, the HipTRI group were stratified in HipTRI com HDL-C ≥ 40 mg/dL and HipTRI com HDL-C <40 mg/dL. Parametric and non-parametric statistic tests were performed in GraphPad Prism 5.01 (USA), and differences were considered significant when p <0.05 to C.I of 95%. Results: there were no differences in the prevalence of CVD risk factors, such as sedentarism, alcohol drinkers, hypertension, diabetes, and tobacco users in the groups. PON activity and phospholipids incorporation were similar in the three groups. The estimated size of HDL particles was greater in NHipTRI (0.29 ± 0.05) when compared to hypertriglyceridemic groups: HipTRI HDL≥40 mg/dL (0.26 ± 0.03) and HipTRI HDL>40 mg/dL (0.24 ± 0.05). In NHipTRI group positive linear correlation was found between PON activity and apoA (r = 0.3908, p = 0.0484, Pearson). In HipTRI HDL≥40 mg/dL group, positive correlation were found between PON and apoB (r = 0.5678, p = 0.0342, Pearson). On the other hand, HipTRI HDL<40 mg/dL shows a negative linear correlation between apoB and phospholipids incorporation into HDL (r = -0.5144, p = 0.0290, Pearson). Conclusion: the results suggest that hypertriglyceridemia can affect both remodeling of particles HDL, as their antioxidant capacity.

Submitted by Ana Maria Fiscina Sampaio (fiscina@bahia.fiocruz.br) on 2016-07-26T12:55:35Z No. of bitstreams: 1 Leonor Fernandes Teixeira Amaral Remodelamento...2015.pdf: 447268 bytes, checksum: f7454eb0efdd04147e5c7a0370bd8d82 (MD5) / Approved for entry into archive by Ana Maria Fiscina Sampaio (fiscina@bahia.fiocruz.br) on 2016-07-26T13:04:59Z (GMT) No. of bitstreams: 1 Leonor Fernandes Teixeira Amaral Remodelamento...2015.pdf: 447268 bytes, checksum: f7454eb0efdd04147e5c7a0370bd8d82 (MD5) / Made available in DSpace on 2016-07-26T13:04:59Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Leonor Fernandes Teixeira Amaral Remodelamento...2015.pdf: 447268 bytes, checksum: f7454eb0efdd04147e5c7a0370bd8d82 (MD5) Previous issue date: 2015-08-28 / Fundação Gonçalo Moniz. Centro de Pesquisas Gonçalo Moniz. Salvador, BA, Brasil / INTRODUÇÃO: as doenças cardiovasculares acometem milhares de pessoas no mundo, sendo a doença aterosclerótica a de maior morbimortalidade. Além disso, a aterosclerose pode manifestar-se precocemente dada a presença de dislipidemias, processos inflamatórios e alterações metabólicas como a diabetes. OBJETIVO: avaliar se existem diferenças no remodelamento da HDL e atividade antioxidante entre pacientes diabéticos e não diabéticos com doença aterosclerótica. Ainda, identificar, quantificar e estimar biomarcadores relacionados ao remodelamento de partículas lipoprotéicas e ao risco cardiovascular em função da concentração de colesterol na HDL, colesterol livre total, LDL-C, apoB, apoA-I, atividade da paraoxonase 1 (PON1), razões de risco como TG/HDL-C, LDL-C/ApoB, HDL-C/apoA-I, PON1/apoA-I, apoA-I/ApoB e tamanho estimado de partículas de HDL, LDL, glicemia, insulina e HbA1c. MÉTODOS: foram selecionados por conveniência 69 pacientes do sexo masculino, entre 18 e 75 anos, oriundos da enfermaria de cardiologia do Hospital Ana Neri, subdivididos em dois subgrupos: diabéticos e não diabéticos, ambos, com doença aterosclerótica coronária. Foram utilizadas metodologias enzimáticas, imunoturbidimétricas e nefelometricas nesse estudo. RESULTADOS: dos achados da comparação direta entre os grupos apenas a glicemia de jejum foi significativamente diferente (Teste t; p<0,05). Embora não significante o valor do colesterol não esterificado (CL) foi, em média, quatro vezes maior nos diabéticos quando comparado aos não diabéticos. A análise de correlação linear mostrou achados importantes do ponto de vista fisiológico, como correlação positiva entre CL e HDL-C (r=0,617; p<0,01083) e razão apoA-I/apoB e insulina (r=0,489; p<0,02095) nos diabéticos, e correlação negativa entre PON1/apoA-I com CL (r=-0,499; p<0,0065) e HDL-C com HbA1c (r=-0,444; p<0,0324) nos pacientes não diabéticos. CONCLUSÃO: Os achados desse estudo mostram que o cálculo das razões utilizadas para a análise de risco cardiovascular foram importantes indicadores quando correlacionados com marcadores séricos sugestivos de risco cardiovascular na população masculina diabética deste estudo. / Introduction: cardiovascular diseases affect thousands of people around the world, and atherosclerotic disease is the one with the greatest morbidity and mortality. Furthermore, atherosclerosis may manifest early by the presence of dyslipidemia, inflammatory processes and metabolic disorders such as diabetes. Objective: to assess whether there are differences between HDL remodeling and antioxidant activity from diabetic and nondiabetic patients with coronary artery disease. Also, identify, quantify and evaluate biomarkers related to lipoprotein particles remodeling and cardiovascular risk depending on HDL cholesterol concentration, total free cholesterol, LDL-C, apoB, apoA-I, paraoxonase activity 1 (PON1), and risk ratios like TG/HDL-C, LDL-C/ApoB, HDLC/ apoA-I, PON1/apoA-I, apoA-I/ApoB, HDL and LDL estimated particles size, glucose, insulin and HbA1c. Methods: we selected by convenience 69 male patients between 18 and 75 years, from the Cardiology Unit of Hospital Ana Neri, they were subdivided into two groups: diabetic and non-diabetic patients, both with coronary atherosclerosis. In these study were used enzymatic, immunoturbidimetric and nephelometric methodologies. Results: From the findings of the direct comparison between groups only fasting glucose was significantly different (t test; p <0.05). Although not significant, the value of non-esterified cholesterol (CL) was on average, four times higher in diabetics when compared to non-diabetics. Linear correlation analysis showed significant findings, from a physiological point of view, as positive correlation between CL and HDL-C (r = 0.617, p <0.01083) and apoA-I ratio/apoB and insulin (r = 0.489, p <0.02095) in diabetics, and negative correlation between PON1/apoA-I with CL (r = -0.499; p <0.0065) and HDL-C with HbA1c (r = -0.444; p <0.0324) in patients non-diabetic. Conclusion: the findings shows that the calculated ratio´s used for cardiovascular risk analysis were important indicators when correlated to serum markers suggestive of cardiovascular risk in the study diabetic male population.

Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior / Na reação de desidrogenação oxidativa de propano (ODHP), propano reage com oxigênio da superfície de metais de transição para produzir propeno e água, em temperaturas de 300-700C. Porém, o propeno pode facilmente oxidar, formando CO e CO2. Assim, busca-se catalisadores que promovam a seletividade do propeno. Compostos tipo hidrotalcitas estão sendo apontados como catalisadores de grande potencial para a reação. Portanto, o principal objetivo desse trabalho foi sintetizar precursores tipo hidrotalcitas (contendo íons Ni2+, Mg2+ e Al3+ e tereftalato, heptamolibdato e decavanadato como ânions de compensação) para serem testados na reação de desidrogenação oxidativa de propano. Esses precursores foram sintetizados com uma razão Al/(Al+Ni+Mg)=0,5, variando a razão de Ni/Mg. Além disso, realizou-se a troca iônica do tereftalato (TA) por heptamolibdato (Mo7O24) e decavanadato (V10O28). Esses compostos foram calcinados, obtendo-se assim, óxidos mistos de NiMgAl, NiMgAlMo e NiMgAlV que foram testados como catalisadores na reação de ODHP. Para a determinação das propriedades dos catalisadores foram usadas as técnicas de caracterização: DRX, TGA, volumetria de N2, TPR, Raman e FTIR e ICP. Os resultados indicaram que os materiais tipo hidrotalcita foram obtidos com sucesso. No caso dos precursores preparados por troca iônica a cristalinidade foi menor que os da série NiMgAl-TA. Estes mesmos precursores quando calcinados apresentaram áreas muito altas. Nas três séries, os precursores calcinados são constituídos por óxidos mistos como NiO, NiMoO4, Ni2V2O7 cristalinos e espécies de alumínio e magnésio não detectados na DRX. No teste catalítico de ODHP, observou-se que com o aumento da conversão diminuía a seletividade de propeno, para os óxidos mistos que não continham molibdênio. Os catalisadores da série molibdênio foram os que obtiveram melhor desempenho com altas seletividades, mesmo em altas conversões e a série de cujo precursor foi o tereftalato foi a que exibiu maiores conversões, mas com seletividades menores que da série de Mo / In the reaction of oxidative dehydrogenation of propane (ODHP), propane reacts with oxygen in the transition metal surface to produce propylene and water at temperatures of 300-700 C. However, the propylene can easily oxidize, forming CO and CO2. Thus, catalysts that promote the selectivity of propylene are being searched. Hydrotalcites type compounds are identified as potential major catalysts for the reaction. Therefore, the main objective of this work was to synthesize precursors hydrotalcites type (containing Ni2+, Mg 2+ and Al 3+ ions and terephthalate, heptamolybdate and decavanadate as compensation anions) to test in the reaction of oxidative dehydrogenation of propane.These precursors were synthesized with Al/(Ni+Mg+Al) = 0.5 for different ratios of Ni/Mg. In addition, there was the ion exchange terephthalate (TA) by heptamolybdate (Mo7O24) and decavanadate (V10O28). These compounds were calcined, to obtain NiMgAl, NiMgAlMo and NiMgAlV mixed oxides and tested as catalysts in the ODHP reaction.For determining the properties of the catalysts the following characterization techniques were used: XRD, TGA, N2 volumetry, TPR, ICP, FTIR and Raman spectroscopy. The results indicated that the hydrotalcite-like materials were successfully obtained. In the case of the precursors prepared by ion exchange crystallinity was lower than those of NiMgAl-TA series. These same precursors when calcined had very high areas. In three series, the calcined precursors are comprised by mixed oxides such as crystalline NiO, NiMoO4, Ni2V2O7 and Al an Mg species not detected by XRD. In ODHP catalytic test, it was observed that with increasing conversion the propylene selectivity decreased to the mixed oxides containing no molybdenum. The catalysts of molybdenum series were those who performed better with high selectivity even at high conversions and the terephthalate precursor series shows the highest conversions, but with lower selectivity than Mo series

No diabete melito tipo (DM) 2, a glicoxidação da LDL favorece o acúmulo de colesterol nos macrófagos da parede arterial, enquanto que as modificações da HDL alteram o transporte reverso do colesterol e reduzem sua capacidade ateroprotetora. O objetivo deste estudo foi avaliar a concentração de colesterol livre (CL) e esterificado (CE) em macrófagos, resultante da incubação conjunta de LDL e HDL isoladas de indivíduos portadores de DM 2 (D) com controle glicêmico inadequado, ou de indivíduos controles não diabéticos (C). LDL e HDL isoladas do plasma por ultracentrifugação por gradiente descontínuo de densidade foram incubadas simultaneamente (100g proteína/mL de meio) em macrófagos de peritônio de camundongos, durante 48 h, a 37°C, de acordo com os seguintes esquemas: LDL(C); LDL(C)+HDL(C); LDL(C)+HDL(C) pool; LDL(D); LDL(D)+HDL(D) ou LDL(D)+ HDL(C) pool. O conteúdo celular de CL e CE (linoleato, oleato e palmitato) foi analisado por HPLC (g/mg de proteína celular). A idade, IMC e triglicérides plasmáticos, assim como a glicemia de jejum e HbA1c, eram maiores no grupo DM, em comparação com o grupo C. Nas incubações com LDL(D) + HDL(D), observou-se maior conteúdo celular de colesterol total (607 ± 99; p = 0,033) e esterificado (430 ± 86; p = 0,023) em comparação com LDL(D) (356 ± 73; 209 ± 51, respectivamente), e somente do colesterol esterificado comparado com LDL(D) + HDL(C) pool (208 ± 70; p = 0,023). Os macrófagos com LDL(D) + HDL(D) apresentaram maior conteúdo de colesterol total (607 ± 99; p = 0,01), CL (177 ± 21; p = 0,03) e CE (430 ± 86; p = 0,02) em comparação com LDL(C) + HDL(C) pool (266 ± 66, 89 ± 16 e 176 ± 53, respectivamente). O acúmulo de colesterol esterificado nos macrófagos foi decorrente da maior formação de colesterol linoleato e oleato. A análise da composição das HDL(D) mostrou menor conteúdo de apo A-I em relação aos lípides, comparada com HDL(C). Em conclusão, a incubação simultânea de LDL(D) + HDL(D) provocou maior acúmulo de colesterol em macrófagos, em comparação à incubação de LDL(D) isoladamente ou de LDL(C) + HDL(C) pool. Estes resultados sugerem que a HDL de portadores de DM 2 mal compensados favorece o maior acúmulo de colesterol em macrófagos. / The development of atherosclerosis in type 2 diabetes mellitus (DM2) is associated with lipoprotein (LP) modifications. Glycoxidized LDL increases macrophage cholesterol accumulation whereas HDL modifications impair the reverse cholesterol transport and atheroprotective properties. The objective of this study was to evaluate the cholesterol content of mouse peritoneal macrophage (MPM) after their simultaneous incubation with LDL+HDL or LDL alone from poorly controlled DM2 (D, n=11), and from non-diabetic control individuals (C, n=11). LP were isolated by discontinuous density gradient ultracentrifugation and incubated (100g protein/mL) with MPM (48h), according to the following protocol: LDL(C); LDL(C)+HDL(C); LDL(C)+HDL(C) pool; LDL(D); LDL(D)+HDL(D) or LDL(D)+ HDL(C) pool. The cellular contents of free (FC) and of esterified cholesterol (EC: linoleate, oleate and palmitate) were measured by HPLC (g/mg of cell protein). Age, BMI, fasting plasma glucose, HbA1c and triglycerides were higher in D as compared to C. The incubation with LDL(D)+HDL(D) increased MCM TC (mean ± SEM) (607 ± 99; p = 0,033) and EC (430 ± 86; p = 0,023) contents compared to LDL(D) alone (356 ± 73; 209 ± 51, respectively). Also, MPM EC content was higher compared to LDL(D)+HDL(C)pool (208 ± 70; p = 0,023). MPM incubated with LDL(D)+HDL(D) presented greater contents of TC (607 ± 99; p = 0,01), FC (177 ± 21; p = 0,03) and of EC (430 ± 86; p = 0,02) compared to the LDL(C)+HDL(C)pool (266 ± 66, 89 ± 16 e 176 ± 53, respectively). The cellular EC content was ascribed to accumulations of linoleate and oleate. Analysis of the HDL composition showed higher lipid/apo A-I ratio in HDL(D) compared to HDL(C). In conclusion, the simultaneous incubation of LDL(D)+HDL(D) induces greater cholesterol accumulation in macrophage compared to LDL(D) and LDL(C)+HDL(C)pool. These results suggest that uncontrolled DM2 HDL favours the cellular cholesterol accumulation.

O papel do exercício físico na prevenção da doença macrovascular aterosclerótica é atribuído em parte à melhoria no metabolismo de lípides, com evidências para regressão e prevenção no desenvolvimento de aterosclerose. Neste estudo, avaliamos o efeito de 6 semanas de treinamento físico aeróbio (protocolo diário em esteira 15 m/min, 30 min, 5 vezes na semana) sobre o transporte reverso de colesterol (TRC) em camundongos C57BL/6 selvagens e transgênicos para CETP humana (CETP-tg). Estes últimos constituem modelo experimental de TRC que se assemelha aos humanos, pela presença da CETP. O TRC é um sistema antiaterogênico, por meio do qual o colesterol é removido de células periféricas e transportado ao fígado para eliminação na bile e excreção fecal. A metodologia utilizada consistiu na injeção intraperitoneal de macrófagos J774 enriquecidos em LDL-acetilada e 3H-colesterol em animais selvagens e CETP-tg sedentários e treinados, após as 6 semanas de estudo. O perfil lipídico não foi modificado após o treinamento físico, no entanto, apenas no grupo CETP-tg treinado houve aumento na concentração de HDL colesterol ao final do estudo. O treinamento físico aeróbio acelerou o TRC em camundongos selvagens, refletido pela maior recuperação de 3H-colesterol no plasma (após 24 h e 48 h da injeção intraperitoneal) e no fígado (após 48 h), em comparação aos animais selvagens sedentários. Este evento associou-se ao aumento de 60% na expressão dos receptores hepáticos SR-BI, em relação ao grupo sedentário. Nos animais CETP-tg, o treinamento físico aumentou o TRC, com maior recuperação de 3H-colesterol - advindo dos macrófagos - no plasma, fígado e também nas fezes (após 24 h e 48 h), em comparação aos animais transgênicos sedentários. Embora a expressão de SR-BI não tenha sido alterada pelo treinamento físico nos animais CETPtg, observou-se nestes animais aumento na expressão hepática do receptor B-E, contribuindo para a maior remoção de colesterol pelo fígado. Os achados apontam para importante papel do exercício físico aeróbio regular sobre o transporte reverso de colesterol de macrófagos, contribuindo para a prevenção contra a gênese e progressão da aterosclerose. / Regular exercise prevents the development of atherosclerosis. We analyzed the role of a six-week aerobic exercise training program in the macrophage reverse cholesterol transport in wild-type (WT) and in human CETP transgenic (CETP-tg) mice. Animals were randomly assigned to sedentary and trained groups (treadmill 15 m/min, 30-min sessions, 5 sessions per week). Plasma lipids were not modified after training, although HDL-cholesterol concentrations levels increased in trained CETP-tg mice only. Plasma CETP activity was not modified after training. A greater recovery of 3H-cholesterol from J774 macrophages injected into peritoneal cavities of mice was found in plasma and in the liver from exercised WT and CETP animals in comparison to sedentary groups. Exercise training induced a greater excretion of 3H-cholesterol in feces only in the CETP-tg mice. The SR-BI expression in the liver was increased and unchanged in trained WT and CETP-tg mice, respectively. The liver expression of LDL receptor was higher in both groups after training. Alternatively, liver X receptor (LXR) increased only in trained WT mice. Aerobic exercise training improves the macrophage RCT in mice, thereby contributing to the prevention and regression of atherosclerosis. The benefit of exercise on the cholesterol excretion in feces in mice was attained only in the presence of CETP, which elucidates the importance of exercise in the prevention of atherosclerosis in humans.

O diabetes mellitus tipo 2 (DM2) constitui um dos mais importantes problemas de saúde pública no mundo. A alta concentração plasmática de triglicérides e a baixa concentração do HDL-C são as principais alterações lipídicas no DM2. A hipertrigliceridemia, além de outros fatores, pode alterar a composição das lipoproteínas, ocasionando alterações funcionais das partículas. O efeito antiaterogênico da HDL se dá, sobretudo, devido à sua ação de promover o Transporte Reverso do Colesterol, sendo a troca lipídica entre as lipoproteínas uma das etapas desse processo. O objetivo deste trabalho foi avaliar o tamanho da partícula de HDL e sua capacidade em receber seus lípides constituintes de outras lipoproteínas. O método é baseado na troca lipídica ocorrida entre uma nanoemulsão artificial (LDE) marcada radioativamente com 14C-CL e 3H-TG ou 14CFL e 3H-CE que se assemelha à estrutura lipídica da LDL, usada como doador de lipídeos. Neste trabalho foram estudados 45 pacientes diabéticos (53±7 anos) e 45 indivíduos sem a doença (55±8 anos), como grupo controle. As taxas de transferência de colesterol livre e fosfolípides para a HDL foram maiores no grupo dos pacientes diabéticos quando comparados com o grupo controle (CL= 7,1±1,7 e 6,4±1,4%, p=0,0400; FL= 23,6±2,4 e 19,3±3,3%, p<0,0001, respectivamente). No entanto, não houve diferença na transferência de éster de colesterol e triglicérides entre os pacientes diabéticos e indivíduos controles. O tamanho da partícula de HDL também não foi diferente entre os grupos. As transferências de éster de colesterol, triglicérides e colesterol livre correlacionaram-se positivamente. Houve também correlação positiva entre a concentração plasmática do colesterol total e LDL-C com a taxa de transferência de triglicérides e entre a concentração plasmática da apoAI com a taxa de transferência de éster de colesterol e de colesterol livre. Em virtude da partícula de HDL ter importante papel antiaterogênico, a maior transferência de FL e CL para a HDL no DM2, podem ser relevantes para estabelecer mecanismos antiaterogêncios associados a alterações na lipoproteína relacionados com o DM2. / Type II diabetes mellitus has become one of the world\'s main public health issues. High triglyceride concentrations and low HDL-C concentrations are the main in the plasma lipids found in DM2. Hipertriglyceridemia is but one of the factors that cause lipoprotein composition, which in turn can cause alterations in particle function. The antiatherogenic effect of HDL is due primarily to its ability to promote Reverse Cholesterol Transport, in which lipid transfer between lipoproteins is one step in the process. The objective of this study was to evaluate HDL particle size and its capacity to accept lipid constituents from other lipoproteins. The methodology utilized is based on the lipid transfer between with an artificial cholesterol-rich nanoemulsion labeled with 3H-tryglicerides (TG) and 14C-free cholesterol (FC) or 3H-cholesteryl ester (CE) and 14C-phospholipids (PL), structurally similar to LDL, used as a radioactive lipid donator. After LDE and other lipoprotein precipitation, the capacity of HDL to receive lipids is quantified by measuring the radioactivity present in the lipoprotein. Forty-five diabetic individuals (53±7) and 45 non-diabetic individual (55±8) as a control group were studied. The free cholesterol (FC) and phospholipids (PL) transfer rate to HDL was higher for the diabetic group when compared with control group (FC= 7.1±1.7 e 6.4±1.4%, p=0.0400; PL= 23.6±2.4 e 19.3±3.3%, p<0.0001, respectively). However, there was no transfer difference of the cholesteryl ester and triglycerides between the two study groups. No difference in the HDL particle size was observed in either group. There was found correlations between the lipid transfer rates and between the transfer rates and the lipoprotein profile of the diabetic individuals were also analyzed. The transfer of cholesteryl ester, triglycerides and free cholesterol correlated positively. There was also a positive correlation between the plasmatic concentration of total cholesterol and LDL-C with the triglyceride transfer and between the plasmatic concentration of apoAI with the cholesteryl ester and free cholesterol. This pattern of greater PL and FC transfer to HDL associated with DM2 can be a marker related to functional alterations in HDL that may contribute to atherogenic in those patients.

A lipoproteína de alta densidade (HDL) tem várias ações protetoras contra o desenvolvimento de doenças cardiovasculares, como remover o excesso de colesterol dos tecidos periféricos. No entanto, outros aspectos do metabolismo da HDL, como o transporte de colesterol das outras classes de lipoproteínas para a HDL devem ser avaliados para verificar a sua ação protetora. Sendo assim, nosso objetivo foi verificar, em hamsters, se a dieta hiperlipídica altera fatores relacionados ao metabolismo da HDL, tais como a composição da fração HDL e a transferência simultânea de lípides para a HDL. Trinta e nove hamsters Golden Syrian adultos machos receberam uma dieta hiperlipídica contendo 0,5% colesterol e 10% de óleo de coco (n=20, grupo dieta hiperlipídica) ou uma ração comercial usual (n=19, grupo controle) por 15 semanas. Os animais foram sacrificados e amostras de sangue foram coletadas para determinação do perfil lipídico, atividade da paroxonase 1 (PON1), da proteína de transferência de éster de colesterol (CETP) e da proteína de transferência de fosfolípides (PLTP), bem como a composição em lipídes da fração HDL. A transferência simultânea de colesterol livre (CL), éster de colesterol (EC), triglicérides (TG) e fosfolípides (FL) é baseada na troca de lípides ocorrida entre uma nanoemulsão lipídica artificial, marcada radioativamente com 14C-CL e 3H-TG ou 14C-FL e 3H-EC, e a HDL. Após precipitação química da nanoemulsão e das demais lipoproteínas, a capacidade da HDL em receber lípides foi quantificada pela medida da radioatividade presente na HDL. Além disso, a aorta e o fígado dos hamsters foram coletados para a determinação da composição em lípides e para análise histológica. Em relação ao perfil lipídico o colesterol total, HDL-C, n-HDL-C, FL, CL e EC foram maiores no grupo dieta hiperlipídica comparado ao grupo controle, já a concentração de TG não diferiu entre os grupos. A concentração de CL e EC da fração HDL foram maior no grupo dieta hiperlipídica. A transferência de 14C-CL, 3H-TG, 14C-FL e 3H-EC, bem como a atividade da CETP e da PLTP foram maiores no grupo dieta hiperlipídica. A atividade da PON1 não diferiu entre os grupos. A composição de CL da aorta foi maior no grupo dieta hiperlipídica comparado ao controle, no entanto o diâmetro interno e externo da aorta não diferiu entre os grupos. No grupo dieta hiperlipídica, a composição de EC, CL, TG e FL do fígado e o diâmetro dos hepatócitos foi maior do que no grupo controle. Dessa forma, a dieta hiperlipídica, i.e., enriquecida com colesterol e gordura saturada, em hamsters, modifica a composição em CL e EC da fração HDL, a sua capacidade em receber lípides, bem como outros aspectos relacionados ao seu metabolismo, o que pode alterar as propriedades antiaterogênicas da HDL. / High density lipoprotein (HDL) is known to protect against cardiovascular disease by removing the excess of cholesterol from peripheral tissues. However, other aspects of the HDL metabolism, as the transport of cholesterol of the other classes of lipoproteínas for the HDL should be sought to evaluate its protective action. Here, we tested the hypothesis whether a hyperlipidemic diet, in hamsters, alters the composition of the HDL fraction and ability of HDL to simultaneously receive lipids. Thirty-nine adult male Golden Syrian hamsters were fed hyperlipidemic diet containing 0.5% cholesterol and 10% coconut oil (n=20, hyperlipidemic diet group) or a regular chow diet (n=19, control group) for 15 wk. Then the animals were sacrificed and blood samples were collected for determination of plasma lipids, paraoxonase 1 (PON1), cholesteryl ester transfer protein (CETP) and phospholipid transfer protein (PLTP) activities, and lipids composition of the HDL fraction. Simultaneous transfer of phospholipids (PL), free cholesterol (FC), cholesteryl esters (CE) and triglycerides (TG) from an artificial lipidic nanoemulsion to HDL was performed in an in vitro assay, in which a nanoemulsion doubled labeled with either 14C-FC and 3H-TG or 14C-PL and 3H-CE was incubated with plasma and the radioactivity was counted in the HDL fraction after chemical precipitation. The aorta and the liver of the hamsters were collected for determination of the lipids composition and histological analysis. Plasma total cholesterol, HDL-C, n-HDL-C, CE, FC and PL were greater in the hyperlipidemic diet group than in the control group. However, TG levels were similar between the groups. Compared with the control group, the hyperlipidemic diet group had higher FC and CE in the HDL plasma fraction. Also, the transfer rates of 14C-FC, 3H-TG, 14C-PL and 3H-CE, CETP and PLTP were greater in the hyperlipidemic diet group compared with control group. PON1 activity was equal in both groups. The content of FC in the aorta tissue was greater in hyperlipidemic diet group, but the internal and external diameters of the aorta were equal in both groups. In hyperlipidemic diet group, the content of CE, FC, PL and TG in the liver and the diameter of the hepatocytes were greater than that measured in control group. The hyperlipidemic diet, i.e., dietary cholesterol and saturated fat, in hamsters, alters the FC and CE composition of the HDL fraction and lead to a disturbance in the ability of HDL to receive lipids. And consequently, may alter the antiatherogenic properties of this lipoprotein.

Introdução: A doença cardiovascular é a principal causa de morbimortalidade precoce em todo o mundo, e responde por grande parte dos gastos dos recursos destinados aos programas de políticas públicas. Neste contexto, a dieta representa uma importante ferramenta na redução dos fatores de risco cardiovasculares. Tendo em vista que inúmeros estudos mostram que o consumo de ômega 9 ou alimento fonte modifica positivamente diversos fatores de risco cardiovascular clássicos, se torna importante avaliar seu efeito sobre propriedades físico-químicas da LDL e da HDL, marcadores cardiometabólicos e oxidativos em indivíduos brasileiros com diferentes níveis de risco cardiovascular. Objetivo: Avaliar o efeito do consumo de azeite de oliva sobre parâmetros cardiometabólicos clássicos e novos em indivíduos com diferentes níveis de risco cardiovascular. Métodos: O estudo foi do tipo clínico prospectivo, aleatorizado, placebo controlado, duplo cego baseado em intervenção nutricional. Indivíduos de ambos os sexos, distribuídos em grupos azeite de oliva (AO) e placebo (PL) receberam durante 8 semanas 3 g/d de azeite de oliva ou placebo. Todos os indivíduos foram classificados quanto ao risco cardiovascular, seguindo os critérios estabelecidos pelo Escore de Risco de Framingham (ERF). Nos momentos basal, T=4S e T=8S foram determinados o perfil clínico, antecedentes familiares de doenças, pressão arterial, consumo alimentar e nível de atividade física. A partir do plasma ou soro, obtidos após 12 h de jejum, foram determinados o perfil lipídico, as apolipoproteínas, o tamanho da HDL e da LDL, o conteúdo de LDL(-) e de NEFAS e atividade da paraoxonase. A aderência à intervenção foi monitorada por meios diretos (marcadores bioquímicos) e indiretos (registro de intercorrências). Resultados: O azeite de oliva foi efetivo em reduzir concentração de triacilglicerois dos indivíduos em alto risco cardiovascular (p=0,023 no T=4S e p=0,049 no T=8S) e a de LDL-C dos indivíduos com risco cardiovascular intermediário (p=0,045 no T=8S) no atual estudo. Observou-se também redução significativa na LDL(-), quando a amostra foi estratificada pelo ERF. Demais parâmetros permaneceram inalterados em função do tempo da intervenção e do ERF. Conclusão: Baixa suplementação (3 g/d) de azeite de oliva promoveu redução dos triacilglicerois, LDL-C e da LDL(-). Portanto, recomenda-se a incorporação de azeite de oliva na dieta brasileira ainda que em baixas doses. Sugere-se também que estudos adicionais usando doses maiores sejam realizados no sentido de identificar potenciais benefícios cardioprotetores adicionais associados ao consumo de azeite de oliva. / Introduction: Cardiovascular disease is the leading cause of premature morbidity and mortality worldwide, and accounts for a large part of the costs of resources devoted to public policy programs. In this context, the diet is an important tool in managing and reducing the risk of cardiovascular disease. Given that numerous studies show that consumption of omega 9 or food source changes positively several classical cardiovascular risk factors, it becomes important to evaluate its effect on physicochemical properties of LDL and HDL, cardiometabolic and oxidative markers in Brazilian individuals with different levels of cardiovascular risk. Objective: This study aimed to evaluate the effect of consuming olive oil on classical and new cardiometabolic properties in individuals with different levels of cardiovascular risk. Methods: It was a clinical, prospective, randomized, placebo controlled, double blind study based on nutritional intervention. Individuals of both sexes, divided into groups olive oil (AO) and placebo (PL) for 8 weeks received 3 g/d of olive oil or placebo. All subjects were classified for cardiovascular risk following the criteria established by the Framingham Risk Score (FRS). At baseline period, T = 4W and T = 8W the clinical profile, the family history of diseases, blood pressure, food consumption and physical activity level were determined. From plasma or serum obtained after 12 h of fasting lipid profile, apolipoproteins, the size of LDL and HDL, LDL (-) and NEFAS content, and activity of paraoxonase were determined. Adherence to the intervention was monitored by direct means (biochemical markers) and indirect (register of complications). Results: The olive oil was effective in reducing the concentration of triacylglycerol of individuals at high cardiovascular risk (p = 0.023 at T=4W and p=0.049 at T=8W) and LDL-C in individuals with intermediate cardiovascular risk (p=0.045 at T=8W) in the current study. It was also observed a significant reduction in LDL (-) when the sample was divided by the FRS. However, changes in other parameters were not detected when comparing the intervention group and the placebo group. Conclusion: Even at low dosage, olive oil has proved to be beneficial in reducing triglycerides, LDL-C and LDL (-).It is therefore recommended the incorporation of olive oil in the Brazilian diet even in low doses. It is suggested that future studies to use higher doses in order to check additional benefits associated with olive oil consumption.

Orientador: Faria, Eliana Cotta de / Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Ciencias Medicas / Made available in DSpace on 2018-08-12T05:05:30Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Nunez_CarlaEvelynCoimbra_M.pdf: 2329566 bytes, checksum: b4da3a6103f67b0fffa0d6eab66a1217 (MD5) Previous issue date: 2008 / Resumo: Sabe-se que em determinadas condições, apesar de sua bem estabelecida associação inversa com a doença cardiovascular, a HDL pode tornar-se pró-inflamatória. Achados recentes da literatura a partir de drogas desenvolvidas para elevar o colesterol de HDL reforçaram a preocupação com a funcionalidade da HDL a despeito de sua concentração. Neste sentido, este trabalho propôs-se a verificar na hiperalfalipoproteinemia primária (HIPER-A), descrita por concentrações de HDL-C acima do percentil 90 de uma população (1.700 indivíduos) assintomática local (de Faria, comunicação pessoal-dados não publicados), as concentrações de fatores pró-inflamatórios: proteína c-reativa ultra-sensível (usPCR), fator de necrose tumoral alfa (TNF-a) e títulos de anticorpos anti-LDL oxidada (acLDLox) e sua relação com a aterosclerose carotídea precoce. A partir de 223 adultos atendidos nos Ambulatórios do Hospital de Clínicas/Unicamp, 155 com HDL-C =68mg/dL, foram definidos como HIPER-A e 68 como controles (HDL-C entre 40 e 68mg/dL), conforme estudo anterior no Laboratório de Lípides/NMCE. O grupo HIPER-A foi dividido em três subgrupos conforme as concentrações de HDL-C: moderados (68-80mg/dL), alto (81-90mg/dL) e muito alto (91-211mg/dL). Observou-se, em análise estatística, a formação de um agrupamento exclusivo dos indivíduos HIPER-A (n=75), distribuídos no 3º (0,20-0,44mg/L) e 4°(0,45-3,70mg/L) quartis para PCR e no 3° (0,33-0,45densidade óptica) e no 4° (0,46-0,93DO) quartil para acLDLox, ambos mais elevados e de maior risco aterogênico. A HIPER-A foi explicada pela reduzida atividade da proteína transferidora de ésteres de colesterol (CETP) e da lípase hepática (HL) e pelo aumento da atividade da lipoproteína lípase (LPL), mostrando aumento do colesterol das sub-frações HDL2 e HDL3 (grupo e subgrupos) e do triacilglicerol (TG) da sub-fração HDL3, apenas no grupo total. As concentrações dos fatores pró-inflamatórios foram similares entre os diversos graus de HIPER-A e controles. Foi observada uma correlação inversa entre o TNF-a e a LPL no subgrupo muito alto. Nenhuma diferença na incidência de manifestações da aterosclerose (DAC e AVC) ou de aterosclerose precoce foi encontrada entre os grupos. Portanto, diferentes concentrações de HDL-C na HIPER-A não conferem um perfil antiinflamatório. Esse fato foi confirmado pela ausência de diferenças entre as repercussões cardiovasculares e o EIM de carótidas entre HIPER-A (grupos e subgrupos) e o controle. A correlação inversa entre a LPL e o TNF-a no subgrupo de elevada atividade de LPL e incluído no grupo de elevado HDL3-TG sugere uma função protetora desta lípase. Estudos futuros deverão explorar a funcionalidade da HDL na HIPER-A, contribuindo para o entendimento da complexa relação entre a HDL e a aterosclerose. / bstract: It is known that HDL becomes proinflammatory under certain conditions, although its inverse association with cardiovascular disease is well recognized. Recent findings in the literature from drugs developed to raise HDL-C reinforced the concern about the HDL functionality in spite of its concentration. Thus, we proposed to verify in primary hyperalphalipoproteinemia (hyper-A), described for HDL-C concentrations above 90th percentile values in an asymptomatic local population - a sample of 1700 individuals (de Faria, personal communication) - , the following concentrations of proinflammatory factors: high-sensitive C-reactive protein (hsCRP), tumor necrosis factor alpha (TNF-a) and autoantibodies against oxidized LDL (ab-oxLDL), and their relation with early carotid atherosclerosis. Among the two hundred and twenty-three outpatients at the Unicamp Teaching Hospital, 155 with HDL-C =68mg/dL were defined as hyper-A and 68 individuals as controls (HDL-C between 40 and 68mg/dL), according to previous study at the Lipid Laboratory - NMCE. The hyper-A group was divided into three other subgroups: moderate (68-80mg/dL), high (81-90mg/dL) and very-high (91-211mg/dL), from HDL concentrations. Statistical analyses defined the hyper-A group as an exclusive cluster (n=75) that had been distributed in the 3rd (0.20-0.44mg/L) and 4th (0.45-3.70mg/L) CRP quartiles and in the 3rd (0.33-0.45 optical density) and 4th (0.46-0.93OD) ab-oxLDL quartiles, both showing high atherogenic risks. In our sample, hyper-A showed reduced CETP and HL activities and increased LPL activity. The hyper-A subjects showed HDL2 and HDL3 subfractions enriched with cholesterol, and TG- enriched HDL3 subfraction was found only in the hyper-A group. Concentrations of proinflammatory factors were similar in all grades of hyper-A. A negative and strong correlation between TNF-a and LPL was seen in the very-high group. No differences in atherosclerosis manifestations (stroke and CAD), as well as in early atherosclerosis (IMT), were found among the groups. Thus, different grades of hyper-A did not confer an antiinflammatory profile to hyper-A individuals. This fact is confirmed by the absence of differences in cardiovascular repercussions. The inverse correlation of lipase lipoprotein (LPL) with TNF-a in the very-high group, in a high HDL3-TG background, suggests a protective function for this lipase. Further studies exploring the HDL functionality in hyper-A population may add new insights about the complex relation between HDL and atherosclerosis. / Mestrado / Ciencias Biomedicas / Mestre em Ciências Médicas