Made available in DSpace on 2016-06-02T20:21:35Z (GMT). No. of bitstreams: 1 DissGFL.pdf: 1075766 bytes, checksum: 734fd08c18408c7d2c0fd1aac12d45bd (MD5) Previous issue date: 2002-06-05 / Universidade Federal de Minas Gerais / Hemoglobin samples of Catharacta maccormiki (Skua), an Antarctic bird, collected in winter and in summer were studied. Starch gel eletrophoretic pattern hemoglobin oxygen affinities on blood and stripped hemoglobin; influence of organic phosphates that may change affinity and level of those intra-erythrocytic phosphates were analyzed. No differences were found in Hb-O2 affinities for samples collected in winter and in summer, which leads to believe that migration (Winter) is not a factor for the oxygen affinities in blood. Bohr effect for both situations was practically the same (Φ= -2,1), indicating normal Bohr effect. The 5 samples show a electrophoretic pattern of two components, so, no evidence of intra-specific variation was found. For the stripped hemoglobin the P50 values were inferior to the ones obtained for whole blood, showing a higher affinity for the hemoglobin to oxygen in the absence of possible modulators. The Bohr effect in the alkaline side (pH 7 8) was normal (Φ = -1,9), and in the acid side it was reverse, characteristic of birds hemoglobin. The influence of organic phosphates that could affect oxygen affinity was also tested. 2,3-diphosphoglycerate (2,3DPG) and inositol hexaphosphate (IHP) were added to the stripped hemoglobin in order to test them as modulators. Negative hemoglobin oxygen affinity modulation was observed after addition of both phosphates. IHP is more effective than 2,3DPG. For animal collected during winter only the GTP was present in its erythrocytes, while the summer ones ATP was found instead of GTP. No differences was found in the concentration of inositol penta and hexaphosphsphate in samples collected in the two seasons. No 2,3DPG were found in any sample. / Foram estudadas amostras de hemoglobinas de Catharacta maccormicki, ou skua, uma espécie de ave antártica, coletadas no inverno e no verão. Foram analisados: o padrão eletroforético das Hb em gel de amido; as afinidades hemoglobina-oxigênio em sangue total e na forma stripped; a influência de fosfatos orgânicos capazes de alterar essa afinidade e os níveis destes fosfatos intraeritrocitários. Não foram encontradas, em sangue, diferenças na afinidade Hb-O2 para amostras coletadas no inverno e no verão, o que nos leva a crer, a princípio, que a migração (inverno) não seja um fator determinante para modificações funcionais a este nível. A amplitude de efeito Bohr para as duas situações foi praticamente a mesma, φ= -2,1 , indicando efeito Bohr normal para ambas. Em eletroforese, os 5 exemplares coletados, mostraram dois componentes, não havendo, portanto indicações de variação intra-específica. Em hemoglobina stripped os valores de P50 são inferiores aos obtidos para equilíbrio em sangue total, evidenciando uma maior afinidade da hemoglobina ao oxigênio na ausência de possíveis moduladores. O efeito Bohr do lado alcalino (pH 7 8) foi normal, amplitude φ =-1,9 e do lado ácido (pH 6 7), reverso, característica de hemoglobinas de aves. Também testamos a influência dos fosfatos orgânicos que podem alterar esta afinidade. Os moduladores testados foram o 2,3-difosfo glicerato (2,3 DPG) e o inositol hexafosfato (IHP) que foram adicionados à hemoglobina stripped. Observamos modulação negativa da hemoglobina com a adição destes, sendo o do IHP mais efetivo que o 2,3DPG. Em animais coletados no inverno, encontramos apenas a presença de GTP em seus eritrócitos. Porém, animais do verão, GTP foi ausente e ATP presente. Observamos não existir diferenças entre a concentração dos tipos de inositóis encontrados para as duas situações, sendo que encontramos, tanto em amostra de inverno quanto em de verão, a presença de IP5 e IP6 conjuntamente, e em quantidades relativamente semelhantes. 2,3DPG intraeritrocitário não foi encontrado em qualquer amostra.

Made available in DSpace on 2015-09-17T15:25:24Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2015-02-25. Added 1 bitstream(s) on 2015-09-17T15:48:54Z : No. of bitstreams: 1 000845721_20180225.pdf: 415423 bytes, checksum: 86e288fe0cb8d89fd69c8f005cd1ca79 (MD5) Bitstreams deleted on 2018-03-02T12:39:57Z: 000845721_20180225.pdf,. Added 1 bitstream(s) on 2018-03-02T12:40:54Z : No. of bitstreams: 1 000845721.pdf: 4033830 bytes, checksum: 4cd0a8c9ff04f3f6dd5bb11ef7575c0e (MD5) / Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de São Paulo (FAPESP) / Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e Tecnológico (CNPq) / Esse estudo avaliou dados sobre: biogeografia, vocalização, morfologia, citogenética, perfil de hemoglobinas e do marcador molecular citocromo b em jabutis brasileiros, no intuito de explorar o potencial taxonômico discriminativo das metodologias avaliadas. Duas espécies de jabutis são descritas para o Brasil, sendo elas, C. denticulatus e C. carbonarius, entretanto, observou-se, inicialmente com base em caracteres morfológicos e de coloração, a existência de populações que não correspondiam ao padrão típico da espécie C. carbonarius, sendo classificados neste estudo como morfotipos 1 e 2. A hipótese proposta é que os morfotipos correspondam a espécies já diferenciadas, e que não devem ser consideradas como uma mesma unidade taxonômica que C. carbonarius. Foram avaliados jabutis depositados no Instituto Nacional de Pesquisas da Amazônia (INPA) e no Museu Paraense Emílio Goeldi, nos bosques municipais de São José do Rio Preto - SP e Araçatuba - SP e no Criatório de Animais Silvestres e Exóticos Reginaldo Uvo Leone em Tabapuã - SP. Com base nos dados obtidos pela avaliação biogeográfica dos espécimes na literatura, observou-se que, a distribuição da espécie C. carbonarius está associado à região Nordeste do país, não havendo no entanto, espécimes depositados nas coleções visitadas. No Brasil, C. denticulatus ocorre em todos os estados da Amazônia Legal, além de apresentar registros isolados para o domínio da Floresta Atlântica, nos estados do Espírito Santo e do Rio de Janeiro, e para a região Centro-Oeste, nos estados de Goiás, Mato Grosso e Mato Grosso do Sul. Na região Nordeste, apresenta ocorrência no estado da Bahia. O morfotipo 1, apresenta distribuição geográfica mais abrangente que C. carbonarius e possivelmente é atribuído a ele, os relatos de distribuição associados a C. carbonarius, indicando associação equivocada do morfotipo 1 como uma mesma unidade taxonômica... / This study evaluated associated data on biogeography, vocalization, morphology, cytogenetics, hemoglobin and molecular profile using cytochrome b, from Brazilian tortoises in order to explore the discriminative potential of the evaluated taxonomic techniques. In Brazil, two species of tortoises are described, C. carbonarius and C. denticulatus, however, some animals initially recognized based on morphological characters and coloring did not correspond to the typical pattern of C. carbonarius, being classified as morphotypes 1 and 2. The proposed hypothesis in this study is that the morphotypes are already differentiated species and should not be considered as a single taxonomic unit with C. carbonarius. Tortoises from the National Institute for Amazonian Research (INPA), Emilio Goeldi Museum - PA, municipal zoos of São José do Rio Preto - SP and Araçatuba - SP and Reginaldo Uvo Leone breeding farm for Wild and Exotic Animals in Tabapuã - SP, were analyzed. Based on the data obtained by biogeographic evaluation of specimens in the literature, it was found that the distribution of C. carbonarius is associated with the Northeast region, with no animals deposited in the visited collections. In Brazil, C. denticulatus occurs in all states of the Amazonia Legal besides presenting isolated individual records for the domain of the Atlantic Forest in the states of Espirito Santo and Rio de Janeiro, and in the Midwest region in the states of Goias, Mato Grosso and Mato Grosso do Sul. In the Northeast region, it occurrs in the state of Bahia. The morphotype 1 has a wider geographical distribution than C. carbonarius, and it is possibly attributed to several reports distribution associated with C. carbonarius, indicating erroneous association of morphotype 1 as a single taxonomic unit with C. carbonarius. The morphotype 2 was observed only in the states of Pará, Maranhão and Piauí. These data indicate that part of the allocated distribution.. / FAPESP: 2010/19785-0 / FAPESP: 2012/04937-4

Made available in DSpace on 2015-09-17T15:25:28Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2015-02-27. Added 1 bitstream(s) on 2015-09-17T15:48:47Z : No. of bitstreams: 1 000845999_20180227.pdf: 347925 bytes, checksum: 3a31aa79333a7cdbe8ce3d8722a87de9 (MD5) Bitstreams deleted on 2018-03-02T12:39:57Z: 000845999_20180227.pdf,. Added 1 bitstream(s) on 2018-03-02T12:40:54Z : No. of bitstreams: 1 000845999.pdf: 1832367 bytes, checksum: 99a50f0dd46526bfabff0be50a865649 (MD5) / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior (CAPES) / Níveis elevados de Hb F na vida adulta podem apresentar efeitos benéficos para indivíduos com anemia falciforme e talassemia beta. Dentre os elementos genéticos que atuam na regulação da expressão da Hb F são conhecidos os fatores de transcrição e os microRNAs. Os objetivos do trabalho foram rastrear, por footprinting filogenético, fatores de transcrição que apresentam sítios de ligação nas regiões não-codificantes dos genes da γ-globina, e microRNAs candidatos à regulação desses genes, além de avaliar a expressão desses microRNAs selecionados in silico em diferentes grupos de indivíduos com perfis distintos de expressão de Hb F. As análises in silico para o rastreamento dos fatores de transcrição foram realizadas comparando as sequências dos genes HBG1 e HBG2 de espécies de primatas do Velho e do Novo Mundo com as sequências da espécie Homo sapiens. O rastreamento in silico dos microRNAs preditos à regulação dos genes da γ-globina foi realizado a partir da utilização de bancos de dados públicos de microRNA. Para as análises de expressão dos microRNAs selecionados foram analisadas 38 amostras de sangue periférico, divididas em cinco grupos de estudo: grupo controle, anemia falciforme em uso ou não de hidroxiureia (HU), e talassemia beta na presença e ausência do alelo β0. Todas as amostras foram submetidas aos testes clássicos de diagnóstico de hemoglobinopatias, quantificação das frações de globinas por cromatografia e análise molecular para a genotipagem dos indivíduos com anemia falciforme (PCR-RFLP) e talassemia beta (PCR-AE e sequenciamento genômico), além da caracterização dos haplótipos βS e β-Tal (PCR-RFLP). Os reticulócitos foram isolados a partir do sangue total e submetidos à extração de microRNA. As análises de expressão dos microRNAs foram realizadas por PCR em tempo real (RT-PCR e q-PCR). As análises in silico apontaram... / High levels of Hb F in adulthood may have beneficial effects for sickle cell anemia and beta-thalassemia. Some of the genetic elements that act in the regulation of Hb F expression are transcription factors and microRNAs. The aim of this study was to use phylogenetic footprinting to screen transcription factors that have binding sites in the γ-globin genes' noncoding regions, and miRNAs candidates to modulating Hb F levels, also evaluating the expression of microRNAs selected from in silico analyses in different groups with distinct profiles of Hb F expression. In silico analysis to screening of transcription factors were performed using bioinformatics tool VISTA, comparing the sequences of HBG1 and HBG2 genes in species of the Old and New World primates with the Homo sapiens sequences. The screening of predicted microRNAs to regulation of γ-globin genes was performed using public databases of microRNA. For the expression analyses of the selected microRNAs, we analized thirty-eight peripheral blood samples, divided into five groups: control group, sickle cell anemia using or not hydroxyurea (HU), and beta-thalassemia with and without allele β0. All samples were tested to hemoglobinopathies by classical diagnostic tests, quantification of globin fractions by chromatography and molecular analyses for genotyping of sickle cell anemia (PCR-RFLP) and beta-thalassemia (PCR-AE and genomic sequencing), and the characterization of haplotypes βS and β-Tal (PCR-RFLP). The reticulocytes were isolated from whole blood and submitted to microRNAs extraction. The analyses of the microRNAs expression were performed by real-time PCR (RT-PCR and qPCR). In silico analyses showed 13 transcription factors conserved between the analyzed species, which have binding sites in non-coding regions of both γ-globin genes, involved in regulating of the Hb F expression: BP1, CDC5, c-MYB, COUPTFII, CP2, GATA-1, GATA-2, NF-E2...

O diabetes mellitus (DM) é uma doença que está associada com aumento da morbidade, mortalidade e custos econômicos. O DM tipo 2 é a forma de diabetes mais comum, acometendo 85%-90% de todos os casos. O mau controle glicêmico é um fator determinante do desenvolvimento e progressão das complicações do DM. A hemoglobina glicada (A1C) se tornou a medida de referência para o controle de DM por mais de duas décadas. Existe um grande incentivo, tanto da perspectiva de saúde pública quanto da clínica, em detectar pessoas com risco futuro de desenvolver DM2, pois este é um forte fator de risco para doença cardiovascular. Também existem evidências que é possível prevenir ou retardar o DM nas pessoas com tolerância a glicose diminuída, desde que estes casos sejam identificados e tratados adequadamente. Os testes disponíveis hoje para o diagnóstico do DM, glicemia de jejum (GJ) e teste oral de tolerância à glicose (TOTG), carecem de sensibilidade e/ou especificidade. Recentes estudos têm evidenciado que a A1C pode ser uma nova ferramenta para diagnóstico do DM, sendo que diversos pontos de corte tem sido estudados. Maiores investigações para a validação do desempenho diagnóstico deste teste na predição do DM são necessárias para podermos utilizar esta ferramenta com segurança na triagem e diagnóstico do DM. / Diabetes mellitus (DM) is a disease associated with greater mortality and economical costs. Type 2 DM is the commonest form of DM, accounting for 85-90 % of its cases. Glycemic levels are a determinant factor for the development and progression of DM complications. Glycated hemoglobin (A1C) became the reference measure of glycemic control for more than two decades. There is a great incentive in detecting persons with future risk of developing DM, because this is a strong risk factor for cardiovascular disease. Also there are evidences that it is possible to prevent or to delay DM in persons with prediabetes, since identified and treated appropriately. Available tests for DM diagnosis, fasting glycemia (FG) and oral glucose tolerance test (OGTT), lack sensibility and/or specificity. Recent studies have shown that A1C can be a new tool for DM diagnosis and several cutoff points have been analyzed. However, the validation of this test as diagnostic modality to detect DM might be necessary in order to provide a useful tool for DM diagnosis.

Submitted by Gabriel Dalio Bernardes da Silva (gabriel.dalio@hotmail.com) on 2018-06-12T15:44:12Z No. of bitstreams: 1 20180612093911dissertacao_qualificacao_gabriel_dalio_bernardes_da_silva_versaodefesa_v7corrigida.pdf: 5205153 bytes, checksum: 319a6ecb19a6cb45143cf48f67831acd (MD5) / Approved for entry into archive by Maria Irani Coito null (irani@fcfar.unesp.br) on 2018-06-13T20:48:59Z (GMT) No. of bitstreams: 1 silva_gdb_me_arafcf_int.pdf: 5205153 bytes, checksum: 319a6ecb19a6cb45143cf48f67831acd (MD5) / Made available in DSpace on 2018-06-13T20:48:59Z (GMT). No. of bitstreams: 1 silva_gdb_me_arafcf_int.pdf: 5205153 bytes, checksum: 319a6ecb19a6cb45143cf48f67831acd (MD5) Previous issue date: 2018-05-29 / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior (CAPES) / Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de São Paulo (FAPESP) / A anemia falciforme (AF) é uma das doenças hematológicas genéticas mais prevalentes no mundo. Atualmente, as estratégias terapêuticas visando aumento dos níveis de hemoglobina fetal (HbF) contribuem significativamente na redução da morbidade e mortalidade associadas à doença. A compreensão dos mecanismos moleculares responsáveis pelo silenciamento gênico para produção de hemoglobina fetal pode permitir o desenvolvimento de fármacos indutores de HbF mais efetivos e seguros. Durante a eritropoiese, a expressão gênica de gama-globina é silenciada, em partes, pela ligação de um complexo protéico contendo entre outras proteínas a GATA-1, que se liga em sítios próximos aos promotores do gene de gama-globina impedindo o processo de transcrição. Especificamente, o recrutamento de GATA-1 é realizada pelo bromodomínio-3 (BRD-3). Neste trabalho, nossa hipótese foi a de que a inibição de BRD-3 possa constituir uma nova abordagem terapêutica capaz de promover o aumento dos níveis de HbF. Para tal, foi realizado um estudo prévio de triagem virtual com 2.2 milhões de moléculas, em que se identificaram alguns candidatos a ligantes do bromodomínio-3 (BRD-3). A partir destes, e aplicando a técnica do planejamento de fármacos baseado em fragmentos (FBDD), foi realizado um estudo de docagem molecular (docking) destes derivados, a fim de se explorar o padrão de substituição mais adequado para as interações com os resíduos de aminoácidos presentes no BRD-3. Os compostos finais apresentaram interações com os resíduos de asparagina-116, prolina-58, glutamina-61 e triptofano-57 e valores de docking score entre -10,357 kcal/mol e -7,152 kcal/mol. Foram sintetizados, identificados e caracterizados doze compostos inéditos planejados como inibidores de BRD-3 com rendimentos reacionais de até 86%. Os compostos apresentaram inibição enzimática atingindo valores de até 80% para BRD-3 (BD1). Após 24 horas, o composto 4-ciano-N-(1,3-dioxoisoindolin-5-il) benzamida foi capaz de induzir os valores de gama-globina em cultura de células K562. Estes resultados sugerem que este composto é um novo protótipo, inibidor de BRD-3, capaz de atuar como indutor da expressão de gama-globina. / 16/08880-8

Foi feito um estudo de determinação da biodisponibilidade de ferro em dieta regional de São Paulo, formulada com base no Estudo Nacional de Despesa Familiar (ENDEF). Para tanto, foram utilizados o método de repleção da hemoglobina em ratos anêmicos e o método \"in vitro\" de determinação de ferro dialisável. Paralelamente, avaliou-se as condições de obtenção de anemia em ratos. Concluiu-se que teores de 14 a 19 mg/g de ferro numa ração à base de caseína levam a uma redução de cerca de 40% (de 12,7g/dl para 7g/dl) da concentração de hemoglobina dos animais em períodos de 35 a 40 dias. A biodisponibilidade de ferro, da dieta regional, para ratos anêmicos é de 50% e igual à da caseína com a mesma composição. A porcentagem de ferro dialisável é maior na dieta à base de caseina do que na dieta à base de dieta regional (4,5% e 5,4% respectivamente). Os resultados sugerem uma inadequação dessa dieta quanto ao aporte de ferro. / The hemoglobin repletion technique in anemic rats and an \"in vitro\" method were used to obtain data on iron bioavailability in a regional diet and in a diet based on milk. Previously, optimum condition for obtaining iron deficiency anemia in rats were established. Concentrations of iron from 14 to 19 mg/g in a basal casein diet led to a reduction of about 40% in hemoglobin concentration in a 35 days assay. The percentage of bioavailable iron in both regional and casein diets for anemic rats was similar and averaged 50%. The percentage of dialysable iron in the casein diet was greater than in regional diet (5.4%.compared to 4.5%). The results suggest an inadequaly of the regional diet related to iron.

Made available in DSpace on 2016-06-02T19:23:01Z (GMT). No. of bitstreams: 1 6308.pdf: 1124835 bytes, checksum: 9db49c9379ad448a8b8f694a02d676cd (MD5) Previous issue date: 2014-09-09 / Financiadora de Estudos e Projetos / It is well established in the literature that the type 2 diabetes mellitus (T2DM) may be related to physical inactivity, high fat diet, stress, weight gain, in addition to advanced age. Consequently, some studies show that the search for a better quality of life through exercise and balanced diets are increasing beyond the control of metabolic markers related to diabetes, preventing complications of the disease and excess free radicals. The aim of this study was to determine the effect of TCP® in people with T2DM, associated to the diet, in a targeted manner, evaluating: lipid profile, uric acid, fasting glucose, glycated hemoglobin and cortisol. We selected 21 women between 44-55 years old, that were divided into four groups: diabetic sedentary (SD); diabetic exercised (ED); exercised normal (EN); and normal sedentary (NS). Was used as the intervention TCP® with a frequency of 3 times/week, 1 hour per day, at 20 weeks, which was monitored throughout the study period, associated to the the diet. Blood samples were collected pre and post intervention, to perform the measurements of cholesterol, triglycerides, HDL, uric acid, glucose, cortisol, and glycated hemoglobin. Compared are the results before (b) and after (a) was used: - non-parametric Wilcoxon and Friedman; and - delta (%), which was used to determine the intra-individual variation uniformly. Results: There were no significant differences in the variables analyzed in this study, except glycated hemoglobin in the ED group, which showed a statistically significant difference (p <0.05). In intragroup comparison, when using the percentage delta, major clinical changes were obtained mainly in the exercised groups, considering that many of the values found returned to normal reference values. Final considerations: the protocol TCP® method associated with the diet was effective in improving the parameters analyzed evidence, making important clinical changes in diabetics who exercised. Examples of this were the clinical changes, with statistical difference in plasma levels of glycated hemoglobin in the ED, important for the prevention of complications of the disease factor. / Está bem estabelecido na literatura, que o diabetes mellitus tipo 2 (DM2) pode estar relacionado ao sedentarismo, dietas hipercalóricas, estresse, aumento de peso, além da idade avançada. Diante disso, alguns estudos demonstram que a busca por uma melhor qualidade de vida por meio de exercícios físicos e dietas balanceadas, estão aumentando, além do controle dos marcadores metabólicos relacionados ao diabetes, evitando as complicações da doença e o excesso de radicais livres. O objetivo desse trabalho foi verificar o efeito do TCP®, em portadoras de DM2, associado à dieta alimentar, de forma orientada, avaliando: perfil lipídico, ácido úrico, glicemia de jejum, hemoglobina glicada e cortisol. Selecionou-se 21 mulheres de 44 a 55 anos, que foram divididas em 4 grupos: diabéticas sedentárias (DS); diabéticas exercitadas (DE); normais exercitadas (NE); e normais sedentárias (NS). Utilizou-se como intervenção o TCP®, com frequência de 3 vezes/semana, com duração de 1 hora por dia, no período de 20 semanas, que foi monitorado durante todo o período de estudo, associado à dieta alimentar. Amostras de sangue foram coletadas pré e pósintervenção, para realização das dosagens de colesterol, triglicérideos, HDL, ácido úrico, glicemia de jejum, cortisol e hemoglobina glicada. Comparado-se os resultados pré (I) e pós (F) utilizou-se:- os testes não paramétricos de Wilcoxon e Friedman; e o delta (%), que serviu para determinar a variação individual intragrupo de maneira uniforme. Resultados: não houve diferenças significativas nas variáveis analisadas neste estudo, exceto a hemoglobina glicada, no grupo DE, que apresentou diferença estatística significativa (p<0,05). Na comparação intragrupos, ao utilizar-se o delta percentual, obteve-se modificações clínicas importantes, principalmente nos grupos exercitados, considerando que muitos dos valores encontrados voltaram aos valores de referência de normalidade. Considerações finais: o protocolo do Método TCP®, associado à dieta alimentar foi eficaz em evidenciar melhora nos parâmetros analisados, promovendo mudanças clínicas importantes nos diabéticos que se exercitaram. Exemplo disso foram as alterações clínicas, com diferença estatística nos valores plasmáticos de hemoglobina glicada no grupo DE, fator importante para a prevenção das complicações da doença.

Submitted by LUCIANA DE MORAIS null (lucianademorais@gmail.com) on 2016-09-06T20:17:43Z No. of bitstreams: 1 Dissertação Corrigida PDF.pdf: 813174 bytes, checksum: 4f825525941a01229e7931cfbee55e5c (MD5) / Approved for entry into archive by Juliano Benedito Ferreira (julianoferreira@reitoria.unesp.br) on 2016-09-09T19:44:11Z (GMT) No. of bitstreams: 1 morais_l_me_araca.pdf: 813174 bytes, checksum: 4f825525941a01229e7931cfbee55e5c (MD5) / Made available in DSpace on 2016-09-09T19:44:11Z (GMT). No. of bitstreams: 1 morais_l_me_araca.pdf: 813174 bytes, checksum: 4f825525941a01229e7931cfbee55e5c (MD5) Previous issue date: 2016-08-31 / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior (CAPES) / A mensuração de biomarcadores plasmáticos de estresse oxidativo (BPEO) tem sido largamente empregada para avaliar o desequilíbrio entre oxidantes e antioxidantes. Devido sua função de carrear oxigênio os eritrócitos são ricos em antioxidantes, entretanto os efeitos da hemólise sobre o BPEO de cães são desconhecidos. Considerando que dentre todas as várias fontes de erro analítico, a hemólise é a mais importante na rotina laboratorial, investigamos o efeito da hemólise in vitro sobre os principais BPEO de cães. Para tal, amostras de sangue total de 19 cães clinicamente saudáveis foram hemolisadas em diferentes graus por ação mecânica. Amostras controle contendo baixa concentração de hemoglobina (Hb) no plasma foram comparadas com quatro graus de hemólise mecânica (<0,36; 0,36-0,60; 0,61-1,0; 1,1-4 g/L Hb). Imediatamente após a hemólise foram mensuradas as concentrações plasmáticas de ácido úrico (AU), albumina, bilirrubina, gama glutamiltransferase (GGT), capacidade antioxidante total (TAC) e concentração de oxidante total (TOC). Os erros relativos causados pelos diferentes graus de hemólises foram calculados e confrontados com o erro total aceitável (ETA) e com limite de erro permitido (LEP) empregados nos programas de controle de qualidade de exames laboratoriais. Foi observado que mesmo pequeno grau de hemólise gera algum erro analítico não aceitável (ETA e/ou LEP) nos biomarcadores plasmáticos de estresse oxidativo mensurados, exceto na bilirrubina. Foi possível concluir que a hemólise é um fator limitante para avaliação do estresse oxidativo sistêmico mensurado no plasma, podendo causar erros que potencialmente comprometem o diagnóstico clínico e investigativo. / The measurement of plasma biomarkers of oxidative stress (PBOE) has been widely used to assess the imbalance between oxidants and antioxidants. Due to its function of carrying oxygen red blood cells are rich in antioxidants, however the effects of hemolysis on PBOE dogs are unknown. Whereas among all the various sources of analytical error, hemolysis is the most important in the laboratory routine, we investigated the effect of hemolysis "in vitro" on the main PBOE dogs. For this purpose, whole blood samples from 19 healthy dogs were hemolyzed in different degrees by mechanical action. Control samples containing low concentration of hemoglobin (Hb) levels in plasma were compared with four degrees of hemolysis mechanics (<0.36, from 0.36 to 0.60, 0.61 to 1.0, 1.1 to 4 g/L Hb ). Immediately after the hemolysis were measured plasma concentrations of uric acid (UA), albumin, bilirubin, gamma glutamyl transferase (GGT), total antioxidant capacity (TAC), and total oxidant concentration (TOC). The relative errors caused by different levels of hemolysis were calculated and compared with the total acceptable error (TAE and allowed error limit (LEP) employees in quality control programs for laboratory tests. Even if it was observed small degree of hemolysis generates some not acceptable analytical error (TAE and / or LEP) in plasma biomarkers of oxidative stress measured, except in bilirubin. It was concluded that hemolysis is a limiting factor for the assessment of systemic oxidative stress measured in plasma, may cause errors that potentially compromise the clinical and investigative diagnosis.

Orientador: Paulo César Ciarlini / Banca: Suely Regina Mogami Bomfim / Banca: Ana Claudia de Melo Stefanato Nakamune / Resumo: A mensuração de biomarcadores plasmáticos de estresse oxidativo (BPEO) tem sido largamente empregada para avaliar o desequilíbrio entre oxidantes e antioxidantes. Devido sua função de carrear oxigênio os eritrócitos são ricos em antioxidantes, entretanto os efeitos da hemólise sobre o BPEO de cães são desconhecidos. Considerando que dentre todas as várias fontes de erro analítico, a hemólise é a mais importante na rotina laboratorial, investigamos o efeito da hemólise in vitro sobre os principais BPEO de cães. Para tal, amostras de sangue total de 19 cães clinicamente saudáveis foram hemolisadas em diferentes graus por ação mecânica. Amostras controle contendo baixa concentração de hemoglobina (Hb) no plasma foram comparadas com quatro graus de hemólise mecânica (<0,36; 0,36-0,60; 0,61-1,0; 1,1-4 g/L Hb). Imediatamente após a hemólise foram mensuradas as concentrações plasmáticas de ácido úrico (AU), albumina, bilirrubina, gama glutamiltransferase (GGT), capacidade antioxidante total (TAC) e concentração de oxidante total (TOC). Os erros relativos causados pelos diferentes graus de hemólises foram calculados e confrontados com o erro total aceitável (ETA) e com limite de erro permitido (LEP) empregados nos programas de controle de qualidade de exames laboratoriais. Foi observado que mesmo pequeno grau de hemólise gera algum erro analítico não aceitável (ETA e/ou LEP) nos biomarcadores plasmáticos de estresse oxidativo mensurados, exceto na bilirrubina. Foi possível concluir... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract: The measurement of plasma biomarkers of oxidative stress (PBOE) has been widely used to assess the imbalance between oxidants and antioxidants. Due to its function of carrying oxygen red blood cells are rich in antioxidants, however the effects of hemolysis on PBOE dogs are unknown. Whereas among all the various sources of analytical error, hemolysis is the most important in the laboratory routine, we investigated the effect of hemolysis "in vitro" on the main PBOE dogs. For this purpose, whole blood samples from 19 healthy dogs were hemolyzed in different degrees by mechanical action. Control samples containing low concentration of hemoglobin (Hb) levels in plasma were compared with four degrees of hemolysis mechanics (<0.36, from 0.36 to 0.60, 0.61 to 1.0, 1.1 to 4 g/L Hb ). Immediately after the hemolysis were measured plasma concentrations of uric acid (UA), albumin, bilirubin, gamma glutamyl transferase (GGT), total antioxidant capacity (TAC), and total oxidant concentration (TOC). The relative errors caused by different levels of hemolysis were calculated and compared with the total acceptable error (TAE and allowed error limit (LEP) employees in quality control programs for laboratory tests. Even if it was observed small degree of hemolysis generates some not acceptable analytical error (TAE and / or LEP) in plasma biomarkers of oxidative stress measured, except in bilirubin. It was concluded that hemolysis is a limiting factor for the assessment of systemic oxidative ... (Complete abstract click electronic access below) / Mestre

Orientador: Marcio Francisco Colombo / Banca: Flávio Augusto Vicente Seixas / Banca: Richard John Ward / Banca: Gustavo Orlando Bonilla-Rodriguez / Banca: Marinômio Cornélio Lopes / Resumo: A hemoglobina (Hb) e uma proteina tetramerica cuja principal funcao e o transporte de oxigenio. As moleculas de O2 se ligam cooperativamente a proteina, com afinidade crescente com a saturacao. O favorecimento a energia de ligacao se deve a mudanca da estrutura quaternaria da proteina, ou seja, da conformacao T de baixa afinidade para a conformacao R de alta afinidade, induzida pela ligacao do ligante. Decorrente desta mudanca conformacional ha um aumento da area de superficie proteica acessivel ao solvente (ASA), na transicao do estado totalmente desoxigenado (T) para o estado totalmente oxigenado (R). Esta variacao de ASA pode ser medida, em solucao, utilizando-se o metodo de estresse osmotico (COLOMBO et al., 1992). Neste trabalho, determinamos o numero de moleculas de agua ( nw) que se liga a diferentes especies de Hb na transicao desoxiHboxiHb. Este valor varia de especie para especie, e dentro de cada especie e maior na presenca de NaCl do que na ausencia deste sal. A ligacao preferencial do anion cloreto a conformacao T da Hb altera sua estrutura terciaria, o que reflete em mudancas no valor de nw de oxigenacao medidos na ausencia e na presenca deste anion. Como referenciado, os valores de nw de oxigenacao foram determinados em solucao pelo metodo de estresse osmotico, isto e, a partir da determinacao da dependencia de P50 com a atividade de agua (aw). Mostramos que diferentes especies de Hb, em diferentes condicoes de solucao, alem de terem valores de nw de oxigenacao distintos, apresentam valores diferentes de H de oxigenacao ( Hobservado). Os valores de nw e de Hobservado, determinados para as especies de Hb Equina adulta (HbEq), Bovina adulta (HbBovad) e fetal (HbBovfet) em diferentes condicoes experimentais, em conjunto com valores de nw e Hobservado para as hemoglobinas das especies Humana (HbA0) e do molusco Scapharca inaequivalvis (HbI)...(Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract: Hemoglobin (Hb) is a tetrameric protein whose main function is oxygen transport. Four O2 molecules bind cooperatively to the protein. The cooperative stepwise increasing in O2-affinity with protein saturation is bound to the change in the protein's quaternary structure from the low O2- affinity conformation (T-state) to the high O2-affinity conformation (R-state) induced by ligand binding. Upon the T'R transition, the water accessible surface area (ASA) of the protein increase, with a consequent binding of extra water molecules to the protein. The change in hydration associated with the ASA can be determined in solution using the osmotic stress method (COLOMBO et al., 1992). In this work, we determined the number of water molecules ( nw) that bind to different Hb specie in the T'R transition. This value changes from specie to specie, and is larger in presence of NaCl than in absence for all specie. In this work we had also determined the enthalpy change of Hb oxygenation ( Hobs) for the different specie and at varied conditions where the value of nw of oxygenation were observed to vary. nw and Hobs values determined for the Equine adult (HbEq), Bovine adult (HbBovad) and fetal (HbBovfet) Hb in different experimental conditions, and nw and Hobs values previously determined for Human (HbA0) and for the mollusk Scapharca inaequivalvis (HbI) hemoglobins, we correlated and analyzed in order to determine the enthalpy and entropy changes associated with the binding of extra water molecules to the newly exposed protein surface upon oxygenation. We have found that 'ÂHsol, the heat change of protein hydration, is approximately -0,57Kcal/mol.H2O. This parameter represents the enthalpic cost of protein hydration in aqueous solution. The entropic cost, ÂSsol, was estimated as approximately -2,89cal/mol.K.H2O. At 298K, the free energy...(Complete abstract click electronic access below) / Doutor