SENA, C.M. Imunoexpressão do fator induzido por hipóxia (hif-1) em carcinoma basocelular. 2016. 50 f. Dissertação (Mestrado em Ciências da Saúde) - Campus de Sobral, Universidade Federal do Ceará, Sobral, 2016 / Submitted by Mestrado Ciências da Saúde (ppgcsufcsobral@gmail.com) on 2017-02-01T18:53:24Z No. of bitstreams: 1 2016_dis_cmsena.pdf: 10501307 bytes, checksum: 0f78ffaad25bbfc3a02edff35006d19c (MD5) / Approved for entry into archive by Ana Márcia Sousa (marciasousa@ufc.br) on 2017-02-02T11:45:40Z (GMT) No. of bitstreams: 1 2016_dis_cmsena.pdf: 10501307 bytes, checksum: 0f78ffaad25bbfc3a02edff35006d19c (MD5) / Made available in DSpace on 2017-02-02T11:45:40Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2016_dis_cmsena.pdf: 10501307 bytes, checksum: 0f78ffaad25bbfc3a02edff35006d19c (MD5) Previous issue date: 2016-03-28 / BACKGROUND: Skin cancer (non-melanoma) is a lesion with high prevalence, with the Basal Cell Carcinoma (BCC) is the most common type of this malignancy. Recent research has sought molecular biomarkers for cancer, with a focus on energy metabolism of cells, highlighting the factor induced by hypoxia, HIF-1. To evaluate the immunohistochemical expression of HIF-1α in CBC; correlate the immunoreactivity of HIF-1α with normal tissue, histologic subtypes and clinical parameters of CBC. METHODS: The sample consisted of 27 cases of BCC in the head and neck region, classified as histologic subtype. Was performed immunohistochemical assessment by the technique of streptoavidin-Biotin with HIF-1α antibody (clone EP1215Y, ABCAM®, 1: 100 dilution, antigen retrieval with citrate pH6, Pascal Pan, System Envision Flex, overnight incubation). five fields each case in 400x magnification were assessed, using the Image J program Statistical tests were performed based on significance level of 5% using the Mann-Whitney test / Kruskal-Wallis test. RESULTS: Obtained immunoreactivity of HIF-1α in all cases of BCC, 100% (n = 27), whichever is the nodular subtype in males and elderly face. Observed was weak cytoplasmic immunostaining in cells of higher side lesions (51.3 ± 20.3) (p = 0.018) and no cytoplasmic immunostaining of cells in lesions in non-face (68.7 ± 22.6) (p = 0.015). Strong immunostaining was higher in nuclear BCC cells compared to that observed in normal skin cells (6.9 ± 7.4) (p = 0.036); greater immunoreactivity weak cytoplasmic HIF-1α in the lesions of the cells with positive margins (61.1 ± 10.4) (p = 0.004); higher percentage of cells with no cytoplasmic immunostaining in lesions with clear margins (56.0 ± 23.2) (p = 0.004); and greater weak cytoplasmic immunostaining in AML cells with positive margins compared to the normal skin cells and free margins (61.1 ± 10.4) (p = 0.042). There was no statistical difference between the immunostaining of HIF-1α between cells of different subtypes and between cells ulcerated and non-ulcerated. CONCLUSION: There was immunoreactivity of HIF-1α in all cases of CBC sample analyzed, with no statistical difference in the histological subtype, less immunostaining in normal epithelial tissue cells. The immunoreactivity of HIF-1α, both as nuclear cytoplasmic may be indicative of the involvement of this protein in these tumors, suggesting a role of HIF-1α in the CBC carcinogenesis. / INTRODUÇÃO: O Câncer de pele (não melanoma) é uma lesão com elevada prevalência, sendo o Carcinoma Basocelular (CBC) o tipo mais frequente dessa neoplasia maligna. Pesquisas recentes têm buscado biomarcadores moleculares para câncer, com enfoque no metabolismo energético das células, destacando-se o Fator Induzido por Hipóxia, HIF-1. OBJETIVOS: Avaliar a expressão imuno-histoquímica do HIF-1αem CBC; correlacionar a imunoexpressão do HIF-1αcom tecido normal, subtipos histológicos e parâmetros clínicos de CBC. METODOLOGIA: A amostra foi constituída por 27 casos de CBC na região de cabeça e pescoço, classificados conforme subtipo histológico. Realizou-se a avaliação imunohistoquímica pela técnica da Estreptoavidina-Biotina, com anticorpo HIF-1α(clone EP1215Y, ABCAM ® , diluição 1:100, recuperação antigênica com citrato pH6, Panela Pascal, Sistema Envision Flex, incubação overnight). Foram analisados cinco campos de cada caso no aumento de 400x, utilizando o programa Image J. Os testes estatísticos foram realizados com base nos níveis de significância de 5%, utilizando-se os testes de Mann-Whitney/Kruskall-Wallis. RESULTADOS: Obteve-se imunoexpressão do HIF-1α em todos os casos de CBC, 100% (n=27), prevalecendo o subtipo nodular em idosos do sexo masculino e em face. Observaramse imunomarcação citoplasmática fraca maior nas células das lesões em face (51,3±20,3) (p=0,018) e ausência de imunomarcação citoplasmática nas células das lesões em não face (68,7±22,6) (p=0,015). Houve maior imunomarcação nuclear forte em células de CBC comparativamente ao que foi observado nas células de pele normal (6,9±7,4) (p=0,036); maior imunoexpressão citoplasmática fraca do HIF-1α nas células das lesões com margens comprometidas (61,1±10,4) (p=0,004); maior percentual de células sem imunomarcação citoplasmática em lesões com margens livres (56,0±23,2) (p=0,004); além de maior imunoexpressão citoplasmática fraca em células de CBC com margens comprometidas, comparando-se às células de pele normal e margens livres (61,1±10,4) (p=0,042). Não houve diferença estatística entre a imunomarcação do HIF-1αentre as células dos diversos subtipos, bem como entre células de lesões ulceradas e não ulceradas. CONCLUSÃO: Houve imunoexpressão do HIF-1α em todos os casos de CBC da amostra analisada, sem diferença estatística quanto ao subtipo histológico, com menor imunomarcação em células de tecido epitelial normal. A imunoexpressão do HIF-1α, tanto nuclear quanto citoplasmática pode ser indicativo da participação dessa proteína nessas neoplasias, sugerindo possível papel do HIF-1αnas carcinogênese do CBC.

O escopo dete trabalho é verificar a influência de episódios agudos de hipoxemia e subsequente reoxigenação sobre marcadores inflamatórios e sobre sinalizadores de integridade da função endotelial. / The aim of this study is to verify the effect of acute hipoxemia and subsequente reoxigenation over inflammatory markers and indicators of integrity of the endothelial function.

Estima-se que 1 em 5 pessoas morrerão de câncer e, neste momento 1 em 200 vivem com a patologia. Classicamente, é descrita como uma doença genética, e por muito tempo as abordagens terapêuticas focaram em mutações. Apesar de casos de sucesso, a eficácia terapêutica ainda é insuficiente, estima-se que 2 em 3 pessoas diagnosticadas com câncer morrerão de causas relacionadas à doença. Apesar da imensa variabilidade genética, diferentes mutações convergem para um número limitado de fenótipos. Assim, o estudo do câncer sob uma ótica evolutiva focando em fenótipos agressivos é uma alternativa promissora. Portanto, o objetivo do presente trabalho foi investigar fenótipos agressivos em tumores sólidos, buscando caracterizar alterações e propor alvos e terapias. Para isto, investigou-se câncer de pulmão e mama sob diferentes aspectos biológicos. O capítulo I estudou metabolismo redox em câncer de pulmão de não-pequenas células (NSCLC). Aqui, demonstramos que o desbalanço redox oxidativo intracelular é um fenótipo agressivo. Posteriormente, sugerimos abordagens antioxidantes como uma boa proposta terapêutica. O capítulo II estudou adenocarcinoma de pulmão sob o contexto da reprogramação metabólica. Neste, sugerimos que o metabolismo glicolítico dependente de transportadores de glicose (GLUT’s) e lactato/piruvato (MCT’s) é um fenótipo agressivo. Por fim, propomos que inibidores para isoformas específicas destes transportadores podem ter impacto clínico nesta malignidade. O capítulo III investigou uma abordagem terapêutica para um fenótipo agressivo bem estabelecido, a resistência à hipóxia. Utilizando modelos in vitro e in vivo de câncer de mama triplo-negativo (TNBC), encontramos que o inibidor epigenético JQ1 é capaz de inibir genes e rotas importantes à sobrevivência da célula cancerosa em hipóxia. Utilizando modelos in vitro e in vivo de câncer de mama triplo-negativo (TNBC), encontramos que o inibidor epigenético JQ1 é capaz de inibir genes e rotas importantes à sobrevivência da célula cancerosa em hipóxia. Deste modo, é proposto esta abordagem epigenética na terapêutica de TNBC. Portanto, foi demonstrado aqui que a investigação de fenótipos agressivos é capaz de contribuir para a oncologia molecular, identificando padrões e apontando alvos. Foi dito no passado que “nada em biologia faz sentido senão à luz da evolução”, e foi sob esta filosofia que o presente trabalho foi desenvolvido e buscou contribuir na busca da cura do câncer. / It is estimated that 1 in 5 people will die of cancer, and now 1 in 200 live with this pathology. Classically, cancer is described as a genetic disease, and for a long time therapeutic approaches focused on mutations. Despite some successes, treatment efficacy is still insufficient, it is estimated that 2 out of 3 people diagnosed with cancer will die from causes related to the disease. Despite the large genetic variability, different mutation converge to a limited number of phenotypes. Thus, the investigation of cancer under an evolutive perspective that focus on aggressive phenotypes is an promising alternative approach. Therefore, this study aimed to investigate aggressive phenotypes in solid tumors, seeking to characterize changes and propose targets and therapies. For this, we investigated lung cancer and breast under different biological aspects. Chapter I studied redox metabolism in non-small cell lung cancer (NSCLC). Here, we show that redox imbalance favouring intracellular oxidative stress is an aggressive phenotype. Later, we suggest antioxidants approaches as a promising therapeutic window. Chapter II studied lung adenocarcinoma in the context of metabolic reprogramming. Herein, we suggest that the glycolytic metabolism dependent on transporters of glucose (GLUT's) and lactate / pyruvate (MCT's) is an aggressive phenotype. Then, we propose that inhibitors for specific isoforms of GLUT’s and MCT’s may have clinical impact in this malignancy. Chapter III investigated a therapeutic approach for cells that are resistant to hypoxia, a well-established aggressive phenotype. Using in vitro and in vivo models of triple negative breast cancer (TNBC), we find that the epigenetic inhibitor JQ1 is able to inhibit important genes and pathways in hypoxic cancer cell survival. Thus, we propose this epigenetic approach in the management of TNBC. Therefore, it was demonstrated here that investigation of aggressive phenotypes can contribute to the molecular oncology, identifying patterns and pointing targets. It was once said that "nothing in biology makes sense except in the light of evolution", this study was conducted under this philosophy to contribute in the search for the cure of cancer.

Estima-se que 1 em 5 pessoas morrerão de câncer e, neste momento 1 em 200 vivem com a patologia. Classicamente, é descrita como uma doença genética, e por muito tempo as abordagens terapêuticas focaram em mutações. Apesar de casos de sucesso, a eficácia terapêutica ainda é insuficiente, estima-se que 2 em 3 pessoas diagnosticadas com câncer morrerão de causas relacionadas à doença. Apesar da imensa variabilidade genética, diferentes mutações convergem para um número limitado de fenótipos. Assim, o estudo do câncer sob uma ótica evolutiva focando em fenótipos agressivos é uma alternativa promissora. Portanto, o objetivo do presente trabalho foi investigar fenótipos agressivos em tumores sólidos, buscando caracterizar alterações e propor alvos e terapias. Para isto, investigou-se câncer de pulmão e mama sob diferentes aspectos biológicos. O capítulo I estudou metabolismo redox em câncer de pulmão de não-pequenas células (NSCLC). Aqui, demonstramos que o desbalanço redox oxidativo intracelular é um fenótipo agressivo. Posteriormente, sugerimos abordagens antioxidantes como uma boa proposta terapêutica. O capítulo II estudou adenocarcinoma de pulmão sob o contexto da reprogramação metabólica. Neste, sugerimos que o metabolismo glicolítico dependente de transportadores de glicose (GLUT’s) e lactato/piruvato (MCT’s) é um fenótipo agressivo. Por fim, propomos que inibidores para isoformas específicas destes transportadores podem ter impacto clínico nesta malignidade. O capítulo III investigou uma abordagem terapêutica para um fenótipo agressivo bem estabelecido, a resistência à hipóxia. Utilizando modelos in vitro e in vivo de câncer de mama triplo-negativo (TNBC), encontramos que o inibidor epigenético JQ1 é capaz de inibir genes e rotas importantes à sobrevivência da célula cancerosa em hipóxia. Utilizando modelos in vitro e in vivo de câncer de mama triplo-negativo (TNBC), encontramos que o inibidor epigenético JQ1 é capaz de inibir genes e rotas importantes à sobrevivência da célula cancerosa em hipóxia. Deste modo, é proposto esta abordagem epigenética na terapêutica de TNBC. Portanto, foi demonstrado aqui que a investigação de fenótipos agressivos é capaz de contribuir para a oncologia molecular, identificando padrões e apontando alvos. Foi dito no passado que “nada em biologia faz sentido senão à luz da evolução”, e foi sob esta filosofia que o presente trabalho foi desenvolvido e buscou contribuir na busca da cura do câncer. / It is estimated that 1 in 5 people will die of cancer, and now 1 in 200 live with this pathology. Classically, cancer is described as a genetic disease, and for a long time therapeutic approaches focused on mutations. Despite some successes, treatment efficacy is still insufficient, it is estimated that 2 out of 3 people diagnosed with cancer will die from causes related to the disease. Despite the large genetic variability, different mutation converge to a limited number of phenotypes. Thus, the investigation of cancer under an evolutive perspective that focus on aggressive phenotypes is an promising alternative approach. Therefore, this study aimed to investigate aggressive phenotypes in solid tumors, seeking to characterize changes and propose targets and therapies. For this, we investigated lung cancer and breast under different biological aspects. Chapter I studied redox metabolism in non-small cell lung cancer (NSCLC). Here, we show that redox imbalance favouring intracellular oxidative stress is an aggressive phenotype. Later, we suggest antioxidants approaches as a promising therapeutic window. Chapter II studied lung adenocarcinoma in the context of metabolic reprogramming. Herein, we suggest that the glycolytic metabolism dependent on transporters of glucose (GLUT's) and lactate / pyruvate (MCT's) is an aggressive phenotype. Then, we propose that inhibitors for specific isoforms of GLUT’s and MCT’s may have clinical impact in this malignancy. Chapter III investigated a therapeutic approach for cells that are resistant to hypoxia, a well-established aggressive phenotype. Using in vitro and in vivo models of triple negative breast cancer (TNBC), we find that the epigenetic inhibitor JQ1 is able to inhibit important genes and pathways in hypoxic cancer cell survival. Thus, we propose this epigenetic approach in the management of TNBC. Therefore, it was demonstrated here that investigation of aggressive phenotypes can contribute to the molecular oncology, identifying patterns and pointing targets. It was once said that "nothing in biology makes sense except in the light of evolution", this study was conducted under this philosophy to contribute in the search for the cure of cancer.

Estima-se que 1 em 5 pessoas morrerão de câncer e, neste momento 1 em 200 vivem com a patologia. Classicamente, é descrita como uma doença genética, e por muito tempo as abordagens terapêuticas focaram em mutações. Apesar de casos de sucesso, a eficácia terapêutica ainda é insuficiente, estima-se que 2 em 3 pessoas diagnosticadas com câncer morrerão de causas relacionadas à doença. Apesar da imensa variabilidade genética, diferentes mutações convergem para um número limitado de fenótipos. Assim, o estudo do câncer sob uma ótica evolutiva focando em fenótipos agressivos é uma alternativa promissora. Portanto, o objetivo do presente trabalho foi investigar fenótipos agressivos em tumores sólidos, buscando caracterizar alterações e propor alvos e terapias. Para isto, investigou-se câncer de pulmão e mama sob diferentes aspectos biológicos. O capítulo I estudou metabolismo redox em câncer de pulmão de não-pequenas células (NSCLC). Aqui, demonstramos que o desbalanço redox oxidativo intracelular é um fenótipo agressivo. Posteriormente, sugerimos abordagens antioxidantes como uma boa proposta terapêutica. O capítulo II estudou adenocarcinoma de pulmão sob o contexto da reprogramação metabólica. Neste, sugerimos que o metabolismo glicolítico dependente de transportadores de glicose (GLUT’s) e lactato/piruvato (MCT’s) é um fenótipo agressivo. Por fim, propomos que inibidores para isoformas específicas destes transportadores podem ter impacto clínico nesta malignidade. O capítulo III investigou uma abordagem terapêutica para um fenótipo agressivo bem estabelecido, a resistência à hipóxia. Utilizando modelos in vitro e in vivo de câncer de mama triplo-negativo (TNBC), encontramos que o inibidor epigenético JQ1 é capaz de inibir genes e rotas importantes à sobrevivência da célula cancerosa em hipóxia. Utilizando modelos in vitro e in vivo de câncer de mama triplo-negativo (TNBC), encontramos que o inibidor epigenético JQ1 é capaz de inibir genes e rotas importantes à sobrevivência da célula cancerosa em hipóxia. Deste modo, é proposto esta abordagem epigenética na terapêutica de TNBC. Portanto, foi demonstrado aqui que a investigação de fenótipos agressivos é capaz de contribuir para a oncologia molecular, identificando padrões e apontando alvos. Foi dito no passado que “nada em biologia faz sentido senão à luz da evolução”, e foi sob esta filosofia que o presente trabalho foi desenvolvido e buscou contribuir na busca da cura do câncer. / It is estimated that 1 in 5 people will die of cancer, and now 1 in 200 live with this pathology. Classically, cancer is described as a genetic disease, and for a long time therapeutic approaches focused on mutations. Despite some successes, treatment efficacy is still insufficient, it is estimated that 2 out of 3 people diagnosed with cancer will die from causes related to the disease. Despite the large genetic variability, different mutation converge to a limited number of phenotypes. Thus, the investigation of cancer under an evolutive perspective that focus on aggressive phenotypes is an promising alternative approach. Therefore, this study aimed to investigate aggressive phenotypes in solid tumors, seeking to characterize changes and propose targets and therapies. For this, we investigated lung cancer and breast under different biological aspects. Chapter I studied redox metabolism in non-small cell lung cancer (NSCLC). Here, we show that redox imbalance favouring intracellular oxidative stress is an aggressive phenotype. Later, we suggest antioxidants approaches as a promising therapeutic window. Chapter II studied lung adenocarcinoma in the context of metabolic reprogramming. Herein, we suggest that the glycolytic metabolism dependent on transporters of glucose (GLUT's) and lactate / pyruvate (MCT's) is an aggressive phenotype. Then, we propose that inhibitors for specific isoforms of GLUT’s and MCT’s may have clinical impact in this malignancy. Chapter III investigated a therapeutic approach for cells that are resistant to hypoxia, a well-established aggressive phenotype. Using in vitro and in vivo models of triple negative breast cancer (TNBC), we find that the epigenetic inhibitor JQ1 is able to inhibit important genes and pathways in hypoxic cancer cell survival. Thus, we propose this epigenetic approach in the management of TNBC. Therefore, it was demonstrated here that investigation of aggressive phenotypes can contribute to the molecular oncology, identifying patterns and pointing targets. It was once said that "nothing in biology makes sense except in the light of evolution", this study was conducted under this philosophy to contribute in the search for the cure of cancer.

Orientador: Selma Giorgio / Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Instituto de Biologia / Made available in DSpace on 2018-08-05T22:06:43Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Albuquerque_MarcosEduardoLamasde_M.pdf: 618346 bytes, checksum: d8a7d01dacd5919516d8000db3c0e660 (MD5) Previous issue date: 2006 / Resumo: A leishmaniose tegumentar é uma parasitose causada por protozoários do gênero Leishmania que acomete preferencialmente a pele e/ou as mucosas e caracteriza-se pelo aparecimento de lesões ulcerosas. Histologicamente, esta lesão caracteriza-se pela desintegração da epiderme e da membrana basal, com grande incidência de histiócitos, linfócitos, granulomas e proliferação de parasitos. Como conseqüência, a região lesada apresenta redistribuição de vasos sanguíneos, e dificuldades na difusão de oxigênio, resultando em microambiente hipóxico. Macrófagos se adaptam a hipóxia, alterando seu metabolismo, produção de linfocinas e atividade fagocítica. No presente trabalho comparamos os efeitos da hipóxia (6% O2) e da normóxia (21% O2) na infecção in vitro de macrófagos humanos obtidos de monócitos de sangue periférico com o parasito Leishmania amazonensis. Culturas de macrófagos humanos expostos a hipóxia antes da infecção com L. amazonensis mostraram redução na porcentagem de células infectadas quando comparadas com culturas de macrófagos humanos que permaneceram em normóxia. Nós também investigamos se a hipóxia estaria inviabilizando a sobrevivência dos macrófagos (teste do MTT) e induzindo a produção da linfocina TNF-a (boiensaio com células L929). Macrófagos humanos submetidos à hipóxia não mostraram diferenças significativas em relação viabilidade quando comparados aos macrófagos que permaneceram em ambiente normóxico culturas de macrófagos humanos estimulados com LPS e submetidos a períodos de hipóxia produziram mais TNF- a do que culturas de macrófagos estimulados com LPS que permaneceram em normóxia. Porém quando infectados com L. amazonensis, macrófagos estimulados com LPS em hipóxia mostraram produção significativamente menor de TNF- a quando comparados a macrófagos não infectados e estimulados por LPS, em ambiente hipóxico. Verificamos também que a produção de TNF- a nas culturas de macrófagos infectados com L. amazonensis, estimuladas com LPS, em hipóxia foi similar a produção de TNF- a dos macrófagos infectados com L. amazonensis, estimulados com LPS, mas que permaneceram em normóxia. Nossos resultados indicam que hipóxia altera a susceptibilidade de macrófagos humanos obtidos de monócitos de sangue periférico para a infecção com L. amazonensis, e que a produção de TNF- a não está envolvida no mecanismo pelo qual estas células controlam a carga parasitária / Abstract: The tegumentary leishmaniasis is a parasitic disease caused by protozoa Leishmania which attacks skin and/or mucosal tissues. The lesions are histologically characterized by degeneration of epidermal and the basal membranes with infiltration of histiocytes, lymphocytes, granuloma and parasite proliferation. Cutaneous lesions are associated with rearrangement of the blood vessels and decreased oxygen diffusion, resulting in a hypoxic microenvironment. Macrophages adapt to hypoxia altering their metabolism, lymphocytes production and phagocytosis activity. In the present study we have compared the effect of hypoxia (6% O2) with normoxia (21% O2) in human macrophages, derived from peripheral blood monocytes, infected with Leishmania amazonensis. Human macrophages exposed to hypoxia before infection with L. amazonensis showed a reduction of the percentage of infected cells. Cell viability was tested by MTT and TNF- a production was detected by bioassay using cell line L929. Human macrophages exposed to hypoxia showed similar viability when compared with human macrophages in normoxia. Human macrophages stimulated with LPS and exposed to hypoxia increased TNF- a production when compared with macrophage timulated by LPS cultured in normoxia. However, macrophage, infected with L. amazonensis stimulated with LPS and exposed to hypoxia showed a reduction in TNF- a production when compared with non infected macrophage, stimulated with LPS and exposed to hypoxia. We also observed that TNF- a production in L. amazonensis infected macrophages stimulated with LPS and exposed to hypoxia was similar to TNF- a production of infected macrophages stimulated with LPS, in normoxia. Our data indicated that hypoxia cam alter human macrophages susceptibility to L. amazonensis infection and no correlation between TNF-a production and control of parasite infection in this cells under hypoxia conditions / Mestrado / Mestre em Parasitologia

Orientador: Selma Giorgio / Tese (doutorado) - Universidade Estadual de Campinas, Instituto de Biologia / Made available in DSpace on 2018-08-08T19:41:41Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Bosetto_MairaCegatti_D.pdf: 2902672 bytes, checksum: bae8655c89b3e476b8f862025a7974fd (MD5) Previous issue date: 2007 / Resumo: As células dendríticas (DCs) são potentes células apresentadoras de antígeno envolvidas principalmente na iniciação da resposta imune primária. As DCs podem ser isoladas a partir do cultivo de monócitos do sangue periférico humano realizado na presença de GM-CSF e IL-4. Protozoários do gênero Leishmania são parasitas intracelulares obrigatórios de células do Sistema Fagocítico Mononuclear como os macrófagos e as DCs. A L. amazonensis, espécie utilizada em nossos estudos, causa principalmente lesões cutâneas que podem se cronificar resultando num processo infeccioso com conseqüente hipóxia tecidual. Neste trabalho avaliamos o papel deletério/terapêutico da hipóxia em modelo in vitro de uma infecção intracelular, a leishmaniose, através da análise dos parâmetros comentados na seqüência. Culturas de DCs humanas infectadas com amastigotas de L. amazonensis foram expostas à hipóxia de 6% de oxigênio. A avaliação fenotípica das culturas indicou que a hipóxia, apesar de não afetar a viabilidade das células, reduziu a expressão dos marcadores de superfície celular CD80, CD86 e CD1a. A hipóxia não afetou a entrada do parasita nas DCs, mas modulou a atividade funcional das DCs, com diminuição da infecção em cerca de 30%. Na presença de ativadores como LPS e INF-g, as DCs foram capazes de reduzir a porcentagem de infecção em normóxia, sendo que a hipóxia não potencializou este efeito estimulador. No entanto, essas mesmas culturas ativadas e infectadas em hipóxia produziram menos IL-12 que as culturas controle em normóxia. O efeito da hipóxia sobre drogas leishmanicidas Anfotericina B, Glucantime e Miltefosine foram também avaliados. As curvas dose-resposta e análise das IC50s de Anfotericina B e Glucantime sugeriram que a hipóxia anulou ou diminuiu a ação das drogas nas culturas de DCs infectadas durante 48 horas de tratamento, quando comparados ao controle em normóxia. Já o Miltefosine agiu de forma semelhante tanto em normóxia como em hipóxia. Por fim, analisamos o processo de interação Leishmania-DC utilizando amastigotas isolados de lesões de camundongos C3H/nude (os quais não apresentam anticorpos na superfície). A porcentagem de infecção das DCs com amastigotas ¿nude¿ foi de 36%. A opsonização destes parasitas com soro humano elevou a porcentagem de infecção em torno de 40%. A inativação e a depleção de anticorpos destes soros diminuiu marcadamente a porcentagem de infecção proporcionada pela opsonização, indicando o envolvimento de receptores para Fc (FcR) e para Complemento (CRs) na fagocitose dos parasitas. A infecção das DCs também foi inibida em 50% após tratamento dos amastigotas com heparina. Nós não relacionamos os receptores de manose fucose com a entrada do amastigotas nas DCs. Nossos dados sugerem que o processo de infecção das DCs envolve a participação de pelo menos três interações receptor/ligante (FcR/anticorpos, CRs/complemento e proteoglicanas/proteína ¿ligadora¿ de heparina) / Abstract: Dendritic cells (DCs) are antigen-presenting cells involved in the initiation of primary immune response. Human DC were obtained from peripheral blood monocytes after culturing with GM-CSF and IL-4. Leishmania parasites are intracellular protozoan that replicate in Mononuclear Phagocytic System cells, mainly macrophages and DCs. Leishmania amazonensis, a species used in our studies is associated with cutaneous infection that can become chronical lesions with a inflammatory process and small regions of hypoxia. In this work we evaluated the role of hypoxia in a in vitro model of intracellular infection, leishmaniasis. Human DCs infection with infected by L. amazonensis amastigotes were performed under normoxic (21% O2) and hypoxic (6% O2) conditions. The phenotypic analysis of DC cultured under hypoxic condition showed a reduced expression of CD80, CD86 and CD1a compared with normoxic control. In these cell cultures, viability was not affected. Hypoxia did not affect the amastigote entrance into DCs although it modulated their functional activity reducing 30% the percentage of infected DCs. Furthermore, hypoxia did not act synergistically with IFN-g plus LPS in DCs to induce killing of parasites. DCs activated and infected with amastigotes under hypoxic condition produced low levels of IL-12 compared with normoxic control. Moreover, in the abscence of stimulation, infected DCs did not produce IL-12. We also evaluated the leishmanicidal activity of Amphotericin-B, Glucantime and Miltefosine under normoxic and hypoxic conditions during 48 h. Under hypoxic condition, Amphotericin-B and Glucantime were less efective in L. amazonensis infected DCs. None effect of hypoxia was observed in Miltefosine was observed against L. amazonensis infected DC. Finally, we investigated in vitro mechanisms of entry into human DCs of L. amazonensis amastigotes isolated from lesions in nude mice (Am nude). The DC infection rate with Am nude was approximately 36%, while opsonization of Am nude with normal human serum and infected human serum increased the DC infection rates to 60% and 62%, respectively. Heat inactivation and depletion of antibodies in sera brought the DC infection rate down to 40%. The DC infection rate was inhibited after pre-treatment of Am nude with heparin. We were unable to implicate mannose-fucose receptors in the uptake of Am nude by DCs. Our data suggest that the ability of L. amazonensis amastigotes to infect human DCs involves the participation of at least three multiple receptor-ligand interactions, antibodies/FcR, complement components/CR and proteoglycans/heparin-binding protein / Doutorado / Imunologia / Doutor em Genetica e Biologia Molecular

Orientador:Selma Giorgio / Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Instituto de Biologia / Made available in DSpace on 2018-08-09T03:42:34Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Ayres_DianaCopi_M.pdf: 1836758 bytes, checksum: 420db1cc65cdcfd2ad1eb3aa3a054589 (MD5) Previous issue date: 2007 / Resumo: A Leishmania amazonensis, espécie transmitida principalmente na região amazônica, está associada com a presença de lesões cutâneas locais e a quimioterapia é a principal forma de controle da doença, já que vacinas efetivas ainda necessitam ser desenvolvidas. Neste contesto, tem havido uma intensa busca por compostos sintéticos ou produtos naturais com potencial para o tratamento da leishmaniose que evite a exposição de pacientes a drogas potencialmente tóxicas. A própolis é uma resina que abelhas coletam de diferentes exsudatos de plantas. Ela apresenta muitas atividades farmacológicas e já vêm sendo utilizada para o tratamento de diversas doenças. No presente trabalho, avaliamos a atividade leishmanicida da Anfotericina B, Glucantime, Miltefosina e dos imunoestimuladores Propinobacterium acnes (P. acnes) e Polyinosinic-Polyribocytidylic acid (Poly IC) no modelo in vitro em condições de hipóxia (6% O2) e de Glucantime, própolis e P. acnes no modelo in vivo em condições de hiperóxia (100% O2 a uma pressão de 2.5 ATA). Primeiramente, nós descrevemos o efeito da Anfotericina B, Glucantime, Miltefosina, P. acnes e Poly IC em condições de normóxia e hipóxia. Em condições hipóxicas, todos os compostos foram menos efetivos em macrófagos peritoneais infectados com L. amazonensis. Avaliamos também o efeito de diferentes tratamentos no modelo in vivo de infecção com L. amazonensis na região do dorso. Nossos resultados mostram a análise dos efeitos do extrato etanólico de própolis vermelha tipificada, assim como dos géis de própolis e papaína, Glucantime e P. acnes isolados ou juntamente com o tratamento hiperbárico. Grupos de camundongos BALB/c tratados com Glucantime, Glucantime e HBO ou Glucantime e gel de própolis apresentaram uma diminuição significativa do tamanho das lesões, comparado com as lesões de animais do grupo controle. Diferenças significativas entre os tecidos das lesões de camundongos infectados com L. amazonensis e não tratados, tratados com gel de própolis, gel de papaína, Glucantime, Glucantime e gel de própolis ou P. acnes, submetidos ou não a HBO foram observadas através da análise histopatológica. Finalmente, investigamos a produção das citocinas INF-??e IL-4 por camundongos BALB/c infectados com L. amazonensis e tratados com gel de HBO, própolis, Glucantime, Glucantime e gel de própolis ou Glucantime e HBO. O único grupo de camundongos a apresentar uma produção de INF-??maior que o grupo controle foi o grupo tratado com Propaína. Não foi observada a produção de IL-4 nos grupos analisados / Abstract: L. amazonensis, a species transmitted mainly in the Amazon region, which is associated with localized cutaneous lesions and chemotherapy remains the mainstay for the control of leishmaniasis, as effective vaccines have yet to be developed. In this context, there is an intense search for potential new synthetic compounds and natural products for the treatment of leishmaniasis that avoids exposure to potentially toxic drugs. Propolis is a resinous substance that honey bees collect from different plant exsudates. It posses versatile valuable pharmacological activities and has, to date, been taken in internal and external dosage forms for the treatments of various diseases. In this work we evaluated the leishmanicidal activity of Amphotericin-B, Glucantime, Miltefosine and the immunostimulatory Propinobacterium acnes (P. acnes) e Polyinosinic-Polyribocytidylic acid (Poly IC) in vitro under hypoxic (6% O2) and of Glucantime, propolis and P. Acnes in vivo under hyperoxic conditions (100% O2 at a pressure of 2.5 ATA). First, we describe the effect of Amphotericin-B, Glucantime, Miltefosine and the immunostimulatory P. Acnes and Poly IC under normoxic and hypoxic conditions. Under hypoxic condition all compounds were less efective in L. amazonensis infected peritoneal macrophages. We also evaluated the role of different treatment in a in vivo model of rump infection, with leishmaniasis. We describe the effects of ethanolic extract of typified Brazilian red propolis sample, red propolis and papain gel, Glucantime and the imunomodulator P. acnes with or with out the HBO terapy. For this reason, we have performed a longitudinal analysis in the expanding lesions of the susceptible BALB/c mouse. BALB/c mice treated with Glucantime, a combinated therapy of Glucantime and HBO or Glucantime and propolis gel showed significant delay in lesion development and reduction in lesion parasite burdens compared with control mice. Significant differences in the tissue pathology between red propolis and papain gel, Glucantime and P. acnes with or without the HBO terapy and untreated mice were observed by the end of treatments. Finally, we investigated the citokyne production by BALB/c mouse infected with L. amazonensis and treated with propolis gel, Glucantime and HBO terapy. Propolis gel was the only treatment that increases the INF-??productin. We do not observe IL-4 production in the tested groups / Mestrado / Mestre em Parasitologia

O escopo dete trabalho é verificar a influência de episódios agudos de hipoxemia e subsequente reoxigenação sobre marcadores inflamatórios e sobre sinalizadores de integridade da função endotelial. / The aim of this study is to verify the effect of acute hipoxemia and subsequente reoxigenation over inflammatory markers and indicators of integrity of the endothelial function.

Orientador: Selma Giorgio / Tese (doutorado) - Universidade Estadual de Campinas, Instituto de Biologia / Made available in DSpace on 2018-08-21T09:19:45Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Vieira_AlexandraPaivaAraujo_D.pdf: 50601825 bytes, checksum: 773a42abde5c534f0e89ea97289c90b3 (MD5) Previous issue date: 2012 / Resumo: A leishmaniose experimental murina causada por Leishmania amazonensis é um modelo parasitário que apresenta variações no desenvolvimento da lesão dependendo da linhagem de camundongo utilizada, bem como do local de inoculação do parasito, e tem contribuído para o entendimento da imunopatologia das doenças infecciosas. Observação: o resumo, na íntegra, poderá ser visualizado no texto completo da tese digital / Abstract: The experimental murine leishmaniasis caused by Leishmania amazonensis parasite is a useful model to understanding the immunopathogenesis of the infectious diseases. It has some differences on the lesion development in according with the mouse strain and the site of the parasite inoculation. We evaluated the lesion development, hypoxia microenvironments¿The Abstract is available with the full electronic document / Doutorado / Parasitologia / Doutor em Parasitologia