Orientador: Sonia Maria Alves Bueno / Tese (doutorado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Engenharia Quimica / Made available in DSpace on 2018-08-08T05:04:16Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Ribeiro_MarianaBorsoi_D.pdf: 5252506 bytes, checksum: b9eb50542c7fa4e04b6b4c83526b4ccc (MD5) Previous issue date: 2006 / Resumo: As imunoglobulinas do isotipo G (IgG) são usadas enOlmemente em aplicações terapêuticas e são requeridas, usualmente, com um elevado grau de pureza. V álias técnicas cromatográficas vêm sendo investigadas para a purificação de IgG a partir do plasma humano. Neste trabalho, investigou-se o efeito dos agentes quelantes ácido iminodiácetico (IDA), ácido aspártico carboxi-metilado (CM-Asp) e TIis-2(aminoetil)amina (TREN) na purificação de IgG a partir do plasma humano utilizando a técnica de cromatografia de afinidade com os íons metálicos imobilizados em membranas de fibras ocas. Para tanto, foram realizados experimentos de adsorção em diferentes sistemas tamponantes em membranas de álcool de poli(etileno) vinílico (PEV A) finamente c011adas e em módulos de filtração derivatizados com IDA, TREN e CM-Asp, utilizando-se os íons metálicos níquel e cobre. A seletividade dos adsorventes foi verificada por eletroforese SDS-P AGE e análise nefelométrica. As melhores condições de purificação foram encontradas utilizando-se as membranas PEV A-CM-Asp-Ni(II) em módulo de filtração, em presença do tampão TrisHCI 25 mM pH 7,0 e eluição por acréscimo da concentração de TIis, sendo obtida IgG com aproximadamente 90% de pureza. As membranas de PEV A-CM-Asp-Ni(II) em módulos de filtraçã? apresentaram melhor seletividade, segundo eletroforese SDS-P AGE, e capacidade dinâmica de adsorção maior comparadas às membranas finamente cortadas (capacidade média de adsorção: 53,0 e 7,7 mg de IgG pOT g seca de membrana, respectivamente). O modelo de LangmUir ajustou-se às isotermas de adsorção, à temperatura ambiente, mostrando alta capacidade de adsorção para os sistemas PEV A-IDA-Ni(II) e PEV A-CM Asp-Ni(II) (204,6 e 302,3 mg/g seca de membrana, respectivamente) e constantes de dissociação característica de sistemas de média afinidade (6, I e 10,1 x 10-6 M, respectivamente). A análise dos parâmetros termodinâmicos encontrados para o sistema modelo PEV A-IDA-Ni(II)-IgG, indicaram a complexidade das interações, indicando a existência de interações hidrofóbicas, eletrostáticas e de ligações de coordenação. Neste trabalho, conseguiu-se purificar IgG a partir do plasma humano em! uma única etapa, utilizando-se a técnica da cromatografia em membranas de afinidade, demonstrando a alta potencialidade da utilização do método desenvolvido em processos industriais / Abstract: The use of immunoglobulin G (lgG) in therapeutic applications has growing vastly and it is used in the treatment of a growing number of indications. Several chromatographic techniques have been investigated for IgG purification. In this work, we investigated the effect of the chelators iminodiacetic acid (IDA), carboxymethylaspartate acid (CM-Asp) and Tris-2(aminoethyl)amine (TREN) for IgG purification, from human plasma using Immobilized Metal-ion Affinity Chromatography (IMAC) technique using hollow fibers membranes as support to the chromatographic experiments. For that, adsorption experiments were done, using different buffers systems, on filtration module and on finely cut poly(ethylene) vinyl alcohol (PEV A) membranes containing chelators IDA, TREN and CM-Asp with the metallic ions nickel and copper. The adsorbent selectivity was verified through electrophoresis SDS-PAGE and nefelometric analysis. Best purification conditions were found with PEV A-CM-Asp-Ni(ll) filtration module in the presence of 25 mM Tris HCI pH 7.0 and elution by increasing Tris concentration. In this case, it was possible to obtain IgG with approximately 90% of purity. According to electrophoresis SDS-P AGE and nefelometric analysis, PEV A-CM-Asp-Ni(ll) filtration modules showed better selectivity and superior adsorption dynamic capacity for IgG than those obtained by finely cut membranes (medium adsorption capacity: 53.0 and 7.7 mg of IgG /g of dry membrane, respectively). Lagmüir model adjusted to adsorption isotherms at room temperature (250 C), showed high adsorption capacity for PEV A-IDA-Ni(ll) and PEV A-CM-Asp-Ni(ll) systems (204.6 and 302.3 mg/g dry of membrane, respectively) and showed dissociation constants characteristic of medium affinity systems (6.1 and 10.1 x 10-6 M, respectively). The thermodynamic parameters analysis obtained for PEV A-IDA-Ni(ll)-lgG system indicated the complexity of the interactions, and the existence of hydrophobic and electrostatics interaction besides the coordination bound. In this work, we could purify IgG from human plasma in a single stage, using the affinity chromatographic membranes technique, allowing in this way, the treatment of great volumes per unit of time, showing the high potentiality of this method in industrial processes / Doutorado / Desenvolvimento de Processos Biotecnologicos / Doutor em Engenharia Química

Orientador: Claudio Lucio Rossi / Tese (doutorado) - Universidade Estadual de Campinas. Faculdade de Ciencias Medicas / Made available in DSpace on 2018-08-15T09:51:57Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Suzuki_LisandraAkemi_D.pdf: 1217880 bytes, checksum: 4ceb1f773f112c88145bc69e02976ef2 (MD5) Previous issue date: 2010 / Resumo: A neurocisticercose (NC) e uma importante causa de doença neurológica em muitos paises em desenvolvimento, incluindo o Brasil. O diagnostico clinico da NC e dificultado pelo polimorfismo e pela não especificidade dos sintomas. As tecnicas de neuroimagem e pesquisa de anticorpos específicos tem contribuído para o diagnostico da NC e uma melhor compreensão dos processos fisiopatológicos dessa infecção. O presente trabalho teve como objetivo avaliar, por meio de técnicas imunoenzimaticas (ELISA), a resposta imune humoral na NC, utilizando como preparações antigênicas o liquido vesicular (LV) e uma fração glicoproteica obtida do extrato bruto de cisticercos de Taenia solium (T. solium) com afinidade por lentil-lectina (fração Gp). Cinquenta e seis amostras de liquido cefalorraquidiano (LCR), 22 de pacientes com NC e 34 de pacientes com outros problemas neurológicos, foram utilizadas para a pesquisa de IgG e suas subclasses, com os seguintes resultados: IgG-LV: 100% de sensibilidade e especificidade; IgG1 -LV: 72,73% de sensibilidade e 100% de especificidade; IgG2-LV: 81,81% de sensibilidade e 100% de especificidade; IgG3-LV: 59,09% de sensibilidade e 97,06% de especificidade; IgG4-LV: 90,91% de sensibilidade e 97,06% de especificidade; IgG-fração Gp: 90,91% de sensibilidade e 97,06% de especificidade; IgG1-fração Gp: 59,09% de sensibilidade e 91,18% de especificidade; IgG2-fração Gp: 68,18% de sensibilidade e 94,12% de especificidade; IgG3-fração Gp: 36,36% de sensibilidade e 100% de especificidade; IgG4-fração Gp: 86,36% de sensibilidade e 100% de especificidade. Quarenta e sete amostras de LCR, 16 de pacientes com NC e 31 de pacientes com outros problemas neurológicos foram utilizadas para a pesquisa de IgE, com os seguintes resultados: IgE-LV e IgE-fração Gp: 93,75% de sensibilidade e 100% de especificidade. Cinquenta e sete amostras de soros, 22 de pacientes com NC, 18 de pacientes com outras infecções e 17 de pessoas presumivelmente sadias, foram utilizadas para a pesquisa da IgG e suas subclasses, IgE, IgA e IgM, com os seguintes resultados: IgG-LV: 100% de sensibilidade e especificidade; IgG1-LV: 86,36% de sensibilidade e 94,28% de especificidade; IgG2-LV: 90,91% de sensibilidade e 97,14% de especificidade; IgG3-LV: 86,36% de sensibilidade e 97,14% de especificidade; IgG4-LV: 100% de sensibilidade e de especificidade; IgG-fração Gp: 95,45% de sensibilidade e 100% de especificidade; IgG1-fração Gp: 63,64% de sensibilidade e 94,28% de especificidade; IgG2-fração Gp: 68,18% de sensibilidade e 97,14% de especificidade; IgG3-fração Gp: 54,54% de sensibilidade e 88,57% de especificidade; IgG4-fração Gp: 90,91% de sensibilidade e 100% de especificidade; IgELV: 90,91% de sensibilidade e 97,14% de especificidade; IgE-fração Gp: 86,36% de sensibilidade e 100% de especificidade; IgA-LV: 54,54% de sensibilidade e 94,28% de especificidade; IgA-fração Gp: 13,63% de sensibilidade e 100% de especificidade. Anticorpos IgM não foram detectados com as preparações de LV e fração Gp. Nossos resultados mostraram que, com ambas as preparações antigênicas, tanto em amostras de LCR quanto em amostras de soros, a maior positividade foi obtida na detecção de anticorpos das classes IgG e IgE, seguida da positividade da IgA. Anticorpos IgM não foram detectados em amostras de soros com reações de ELISA realizadas com LV e fração Gp. Com relação as subclasses da IgG, a IgG4 apresentou, tanto em amostras de LCR como em amostras de soros, valores de positividade e concentração iguais ou superiores as outras subclasses. As reações ELISA realizadas com LV mostraram sensibilidades iguais ou superiores aquelas obtidas com a fração Gp. Considerando a complexidade e o custo final da obtenção da fração Gp, o LV pode ser considerado mais adequado para a pesquisa de anticorpos em amostras de LCR e soros de pacientes com NC. / Abstract: Neurocysticercosis (NC) is an important cause of neurological disease in many developing countries, including Brazil. The clinical diagnosis of NC is hindered by the polymorphism and non-specificity of the symptoms. Neuroimaging techniques and detection of specific antibodies have contributed to the diagnosis of NC and a better understanding of the physiopathological processes of this infection. The purpose of this study was to evaluate the humoral immune response in NC by using immunoenzymatic techniques (ELISA) in which vesicular fluid (VF) and a glycoprotein fraction purified from a crude extract of Taenia solium cysticerci with affinity for lentil-lectin (fraction Gp) were used as antigenic preparations. Fifty-six cerebrospinal fluid (CSF) samples, 22 from patients with NC and 34 from patients with other neurological disorders, were assayed for IgG and IgG subclasses, with the following results: IgG-VF: 100% sensitivity and specificity, IgG1 - VF: 72.73% sensitivity and 100% specificity, IgG2 -VF: 81.81% sensitivity and 100% specificity, IgG3 -VF: 59.09% sensitivity and 97.06% specificity, IgG4 -VF: 90.91% sensitivity and 97.06% specificity, IgG-fraction Gp: 90.91% sensitivity and 97.06% specificity, IgG1- fraction Gp: 59.09% sensitivity and 91.18% specificity, IgG2-fraction Gp: 68.18% sensitivity and 94.12% specificity, IgG3 -fraction Gp: 36.36% sensitivity and 100% specificity, IgG4 - fraction Gp: 86.36% sensitivity and 100% specificity. Forty-seven CSF samples, 16 from patients with NC and 31 from patients with other neurological disorders, were assayed for IgE, with the following results: IgE-VF and IgE-fraction Gp: 93.75% sensitivity and 100% specificity. Fifty-seven serum samples, 22 from patients with NC, 18 from patients with other infections and 17 from presumably healthy individuals, were assayed for IgG, IgG subclasses, IgE, IgA and IgM, with the following results: IgG-VF: 100% sensitivity and specificity, IgG1-VF: 86.36% sensitivity and 94.28% specificity, IgG2 -VF: 90.91% sensitivity and 97.14% specificity, IgG3 -VF: 86.36% sensitivity and 97.14% specificity, IgG4 -VF:100% sensitivity and specificity, IgG-fraction Gp: 95.45% sensitivity and 100% specificity, IgG1- fraction Gp: 63.64% sensitivity and 94.28% specificity, IgG2 -fraction Gp: 68.18% sensitivity and 97.14% specificity, IgG3 -fraction Gp: 54.54% sensitivity and 88.57% specificity, IgG4 - fraction Gp: 90.91% sensitivity and 100% specificity, IgE-VF: 90.91% sensitivity and 97.14% specificity, IgE-fraction Gp: 86.36% sensitivity and 100% specificity, IgA-VF: 54.54% sensitivity and 94.28% specificity, IgA-fraction Gp: 13.63% sensitivity and 100% specificity. No specific IgM antibodies were detected with VF and fraction Gp antigenic preparations. These results show that with the two antigenic preparations the highest positivity in CSF and serum samples was obtained for IgG and IgE antibodies, followed by positivity for IgA. No IgM antibodies were detected in serum samples assayed with VF and fraction Gp. With regard to IgG subclasses, IgG4 positivity and concentration in CSF and serum samples were higher than or equal to the other subclasses. ELISA reactions done with VF showed equal or higher sensitivities than those obtained with fraction Gp. Considering the complexity and high cost of obtaining fraction Gp, VF could be more suitable for detecting specific antibodies in CSF and serum samples from patients with NC. / Doutorado / Ciencias Biomedicas / Doutor em Ciências Médicas

A idade entre o terceiro e o sexto mês de vida é um período peculiar para o estabelecimento da imunidade própria dos bezerros. Nesse intervalo, há susceptibilidade e índice de letalidade à broncopneumonias maiores, provavelmente devido à imaturidade do sistema imunológico pulmonar, quer seja por uma insuficiente resposta, nos primeiros momentos, quer seja por uma resposta citotóxica exagerada, no momento subsequente. A par disso, este trabalho teve o intuito de verificar o momento em que ocorre a maturidade do sistema imunológico, como se comportam os perfis Th1 e Th2 e a existência de uma resposta citotóxica exagerada, durante esta fase de estabelecimento da imunidade ativa dos bezerros. Para tal, estudaram-se as funções de fagocitose e metabolismo oxidativo de leucócitos sanguíneos e broncoalveolares, as classes de imunoglobulinas e citocinas incriminadas nos padrões de resposta linfocitária Th1 e Th2, em 10 bezerros da raça holandesa, sadios, avaliados em sete momentos experimentais, com intervalo quinzenal, entre o terceiro e o sexto mês de vida. Os dados foram submetidos à análise estatística, pela comparação entre as médias ou medianas, confrontadas pelo teste de Anova e Tukey, quando paramétricas, e pelo teste de Kruskal Wallis e Dunn, quando não paramétricas, considerando nível de significância P≤ 0,05 e tendência P≤ 0,10. Os dados que apresentaram dinâmicas semelhantes entre si foram submetidos ao teste de correlação de Pearson. Na região broncoalveolar, observaram-se um aumento progressivo das funções dos macrófagos alveolares, equilíbrio de secreção dos isotipos IgG1 e IgG2 e predominância de citocinas compatíveis com padrão de resposta Th1, até os 150 dias de vida dos bezerros. Aos 165 dias de vida, ocorreram diminuição da função celular, aumento dos títulos de IgG2 e aumento da citocina regulatória IL-10. Aos 180 dias, retornou-se o equilíbrio entre secreção de IgG1 e IgG2, diminuiram os teores de IL-10 e ocorreu tendência a aumento de IL-12, TNF-α e metabolismo oxidativo de macrófagos alveolares, o que permitiu concluir que a resposta imune tem característica própria, nesta faixa etária, e não se torna matura até os seis meses de vida. Apesar de os fagócitos pulmonares já estarem eficientes, a partir dos 135 dias de vida, tornam-se hiperresponsivos aos 150 dias de vida, momento em que gera consequentemente uma resposta regulatória e/ou humoral aos 165 dias de vida, para que aos 180 dias de vida, o equilíbrio entre os perfis Th1 e Th2 seja atingido / The age between the third and sixth month of life is a peculiar period for the establishment of active immunity of calves. There is a greater susceptibility and lethality by bronchopneumonia, probably due to the immaturity of the pulmonary immune system, whether by an insufficient response , in the first moments , whether by an exaggerated cytotoxic response in the subsequent time. So, this work aimed to verify when the maturity of the immune system occurs, how the Th1 and Th2 profiles behave and if there is an exaggerated cytotoxic response during this active phase for immunity of the calves without maternal interference. For this purpose we studied the functions of phagocytosis and oxidative metabolism of blood and bronchoalveolar leukocytes, classes of immunoglobulins and cytokines incriminated in lymphocyte response patterns Th1 and Th2, in 10 holstein healthy calves. They were sampled every fifteen days, during the third until sixth month of life. Data were statistically analyzed by comparing the means or medians, confronted by ANOVA test and Tukey, when the data were parametric, and by Kruskal Wallis and Dunn's test, when the data were nonparametric, level of significance p ≤ 0.05 and trend p ≤ 0.10. The data that showed similar dynamics between them were subjected to Pearson correlation test. In bronchoalveolar region, until 150 days of age, the alveolar macrophages functions increased progressively, the IgG1 and IgG2 isotypes secretion showed a balance, and the cytokines profile were compatible with Th1 response. At 165 days of age, there was a decrease of cellular function, an increased of IgG2 titers and the IL-10 secretion, a regulatory cytokine, increased. At 180 days of life, we observed a balance of IgG1 and IgG2 secretion, a decreased of IL-10 levels and a tendency to increase IL-12, TNF-α and alveolar macrophage oxidative metabolism. These results indicated that the calves have an active immune response with particularities for this age group and it does not become mature until six months of life. Despite of the macrophages alveolar are already efficiency from the 135 days of age, they become more reactive at 150 days. After this moment, a regulatory and/or humoral response begins at 165 days of life, as the balance of Th1 and Th2 profiles are reached at 180 days of calves life

O presente estudo avaliou o efeito da suplementação mineral injetável de cobre (Cu) e zinco (Zn) sobre a resposta imunológica e o desempenho de bovinos de corte a pasto, foram avaliadas vacas no período pré-parto (experimento I) e seus bezerros até pós desmama (experimento II). O experimento foi realizado na Faculdade de Zootecnia e Engenharia de Alimentos da USP, Campus de Pirassununga-SP. No experimento I, foram avaliadas sessenta vacas prenhas por inseminação, distribuídas aleatoriamente em delineamento inteiramente casualizado com dois tratamentos (T e S). No tratamento testemunha (T), as vacas receberam soro fisiológico como placebo, e no tratamento suplementado (S) receberam mineral injetável via subcutânea (75 mg de cobre e 250 mg de zinco), com aproximadamente 75 dias antes do parto. Foram avaliados os teores de Cu e Zn séricos, IgG e IgM, ceruloplasmina e a atividade fagocitária. Os dados experimentais foram analisados utilizando-se o PROC MIXED do SAS (SAS, 2009), com o nível de significância de 5% para interpretação estatística de todos os testes. Os teores de cobre, zinco, IgM, IgG, ceruloplasmina e a atividade fagocitária das vacas não apresentaram diferença (p>0,05) entre os tratamentos. Da mesma forma, não houve influencia (p>0,05) das vacas nos teores de Cu e Zn séricos, na resposta imunológica e no desempenho dos bezerros aos 70 dias de idade (primeira coleta de sangue). O fornecimento de Cu e Zn injetável aos 75 dias antes do parto não alterou os teores de zinco, cobre e ceruloplasmina sérica, bem como a resposta imunológica até 30 dias após o parto. Como não houve diferença significativa entre as mães, foi considerado que os bezerros eram provenientes de vacas homogêneas. Assim, no experimento II, cinquenta e quatro bezerros filhos destas vacas, foram distribuídos aleatoriamente em delineamento inteiramente casualizado em 2 tratamentos: (T) - bezerros não suplementados, que receberam soro fisiológico como placebo; (S) - bezerros suplementados com cobre (15 mg aos 70 dias, 45 mg aos 140 dias e 60 mg aos 210 dias) e zinco (50 mg aos 70 dias, 150 mg aos 140 dias e 200 mg aos 210 dias). Foram realizadas colheitas de sangue com aproximadamente 70, 140, 170, 210 e 240 dias de idade, para avaliação dos teores de Cu e Zn sérico, ceruloplasmina, IgG e IgM e a atividade fagocitária. A suplementação parenteral de Cu e Zn aos 70, 140 e 210 dias não alteraram (p>0,05) os teores de Cu e Zn séricos, a resposta imunológica, o desempenho, a atividade da enzima superóxido dismutase e a atividade fagocitária de bezerros Nelore. A falta de resposta ao suplemento mineral injetável deveu-se possivelmente ao fato dos bezerros já estarem recebendo as quantidades adequadas de cobre e de zinco nas suas dietas. / This study evaluated the effect of injectable Cu and Zn on the immune response and performance of beef cattle on pasture, cows were evaluated in the antepartum period (experiment I) and their calves to post weaning (experiment II). The experiment was perfomed at the Faculty of Animal Science and Food Engineering, University of São Paulo, Campus Pirassununga. In experiment I, sixty pregnant Nelore cows by insemination were divided in a completely randomized design in two treatments. In the control treatment (T), the 30 cows received saline as placebo, the supplemented (S) received mineral injection subcutaneously (75 mg of copper and 250 mg of zinc), 75 days prior to parturition, when also received clostridiosis vaccine. It were evaluated the serum levels of Cu and Zn, IgG, and IgM, ceruloplasmin, SOD and phagocytic activity. Experimental data were analyzed using PROC MIXED of SAS (SAS, 2009), with 5% significance level for statistical interpretation of all tests. The levels of copper, zinc, IgM, IgG, ceruloplasmin and the phagocytic activity of the cows had no statistical difference (p>0.05) between treatments. Similarly, there wasn\'t influence (p>0.05) of cows for Cu and Zn serum, immune response and performance of calves at 70 days of age (first blood sample). The supply of Cu and Zn injection at 75 days before delivery did not change the levels of zinc, copper and serum ceruloplasmin and the immune response 30 days after delivery. Since there was no significant difference between the mothers, it was considered that the calves were from homogeneous cows. In experiment II, fifty four calves born from these cows were distributed completely randomized design with 2 treatments: (T) - calves not supplemented that receive solution saline as placebo and (S) - calves supplemented with injectable mineral applied subcutaneously containing copper (15 mg at 70 days, 45 mg at 140 days and 60 mg at 210 days) and zinc (50 mg at 70 days, 150 mg at 140 days and 200 mg at 210 days. Blood samples were realized with approximately 70, 140, 170, 210 and 240 days of age. Were assessed levels of serum Cu and Zn, ceruloplasmin, IgG and IgM and the phagocytic activity. Parenteral supplementation of Cu and Zn at 70, 140 and 210 days didn\'t alter (p>0.05) the contents of Cu and Zn serum, the immune response, performance, activity of superoxide dismutase and the phagocytic activity of Nelore calves. The lack of response to injectable mineral supplement possibly was due to the fact that the calves were already taking adequate amounts of copper and zinc in their diets.

A patogenia na leishmaniose visceral (LV) não é totalmente conhecida. Em LV em hamsteres avaliamos a participação de imunoglobulinas nas lesões. IgG foi detectada no sinusóide hepático, nos septos pulmonares e nos capilares glomerulares, em maior intensidade aos 30 e 45 dias pós-infecção (PI); C3 estava ausente, exceto no rim. Os dados não sendo compatíveis com a deposição de imunocomplexo, estudamos ultraestruturalmente a internalização de imunoglobulinas. No fígado e no rim a quantidade de imunoglobulina em célula endotelial era maior aos 30 dias PI em relação ao controle não infectado e no pulmão, aos 30 dias PI em relação aos 60 dias PI. Imunoglobulina internalizada por célula endotelial observada neste estudo na LV em hamsteres, marcadamente aos 30 dias PI, pode ser um mecanismo alternativo de lesão na LV / Pathogenesis of visceral leishmaniasis (VL) is not fully known. In VL in hamsters we evaluated the participation of immunoglobulins in the lesions. IgG was detected in the hepatic sinusoid, in the lung alveolar walls and in the glomerular capillaries in higher intensity at 30 and 45 days post-infection (PI); there were no C3, except in the kidney. Since the data were not compatible with immune complex deposition, we studied ultraestructurally the internalization of immunoglobulins. In the liver and in kidney the amount of immunoglobulin within endothelial cells was greater at 30 days PI than in non infected control, and in the lung at 30 days PI in relation to 60 days PI. Immunoglobulin internalized by endothelial cells observed in VL in hamsters, remarkably at 30 days PI, may be an alternative mechanism of lesion in VL

Imunodeficiência Comum Variável (ICV) é uma imunodeficiência primária de igual distribuição entre os sexos e que afeta crianças e adultos, caracterizada por hipogamaglobulinemia com susceptibilidade aumentada a infecções e ampla variedade de complicações não infecciosas, como autoimunidade, malignidade, hiperplasia linfoide, doenças gastrointestinais, dentre outras. Os objetivos deste estudo foram: avaliar as manifestações clínicas, infecciosas e não infecciosas, mais frequentes em portadores de ICV (antes e após início da terapia com reposição de imunoglobulina humana) acompanhados em ambulatórios de imunologia do Hospital das Clínicas da Faculdade de Medicina de Ribeirão Preto da Universidade de São Paulo (HCFMRP-USP), além dos níveis séricos de imunoglobulinas (IgG, IgA e IgM) ao diagnóstico, bem como as alterações quantitativas de células CD19+, CD3+CD4+, CD3+CD8+ e CD3-CD16+CD56+ desses pacientes. Neste estudo descritivo foram obtidas informações de pacientes com ICV acompanhados no HCFMRPUSP, através de registros de prontuários médicos. Foram avaliados 32 pacientes: 19 do sexo masculino e 13 do sexo feminino. A mediana da idade de início dos sintomas foi de 8,5 anos, com um pico de incidência precoce. O tempo médio de atraso para o diagnóstico foi de 7,7 anos. Todos os pacientes apresentaram infecções recorrentes, que levaram ao diagnóstico da ICV. As infecções mais frequentes foram as respiratórias, sendo que antes do diagnóstico as pneumonias foram as mais observadas (gerando, inclusive, grande número de internações) e durante o primeiro ano de uso regular da terapia de reposição com imunoglobulina humana as rinossinusites foram as que mais ocorreram. Houve redução na incidência de infecções após início do tratamento. Todos os pacientes apresentaram níveis séricos de IgG, IgA e IgM reduzidos ao diagnóstico, sendo que as medianas dos níveis séricos foram de 158 mg/dL, 10,15 mg/dL e 17 mg/dL, respectivamente. De 30 pacientes que haviam realizado imunofenotipagem, cerca de 73% apresentaram número absoluto reduzido de células CD19+ e 40% apresentaram número absoluto reduzido de linfócitos T CD4+. A relação CD4/CD8 foi invertida em aproximadamente 53% dos pacientes. Em 18 pacientes as células natural killer foram quantificadas e cerca de 56% deles apresentaram número absoluto reduzido. A maioria (97%) dos pacientes manifestou, no mínimo, uma comorbidade não infecciosa no tempo médio de seguimento de 8,2 anos, sendo que hiperplasia linfoide e doença pulmonar crônica foram as mais frequentes, cada uma ocorrendo em cerca de metade dos pacientes. O atraso para o diagnóstico da ICV foi importante, sugerindo que a presença de infecções recorrentes, especialmente do trato respiratório, deveria levar à investigação de deficiências de anticorpos, com dosagem de imunoglobulinas. Complicações não infecciosas foram extremamente comuns nesta casuística, ressaltando o amplo espectro clínico da doença. / Common variable immunodeficiency (CVID) is a primary immunodeficiency that is equally distributed between men and women and affects children and adults, characterized by hypogammaglobulinemia with increased susceptibility to infections and a wide variety of noninfectious complications such as autoimmunity, malignancy, lymphoid hyperplasia, gastrointestinal diseases, among others. The purposes of this study were to evaluate infectious and non-infectious clinical manifestations (before and after immunoglobulin replacement therapy) of CVID patients attended at immunology outpatient clinics of the Clinical Hospital of Ribeirão Preto Medical School - University of São Paulo (HCFMRP-USP), in addition to immunoglobulins (IgG, IgA and IgM) serum levels at diagnosis, as well as quantitative differences in CD19+, CD3+CD4+, CD3+CD8+ and CD3-CD16+CD56+ cells. In this descriptive study, data of CVID patients followed up at HCFMRP-USP were collected through medical records. Thirty-two patients were found: 19 males and 13 females. The median age of onset of symptoms was 8.5 years, with an early peak of incidence. The mean delay for diagnosis was 7.7 years. All patients had recurrent infections, which led to the diagnosis of CVID. The most frequent infections were respiratory tract infections. Pneumonias were more observed before the diagnosis (generating a large number of hospitalizations) and rhinosinusitis were more frequent during the first year under regular use of immunoglobulin replacement therapy. There was a reduction in the incidence of infections after initiation of treatment. All patients had low IgG, IgA and IgM serum levels (lower than the 3th percentile for age) at diagnosis and the median of serum levels were 158 mg/dL, 10.15 mg/dL and 17 mg/dL, respectively. Among 30 patients that had been immunophenotyped, approximately 73% had a reduced absolute number of CD19+ cells and 40% had a reduced absolute number of T CD4+ lymphocytes. The CD4/CD8 ratio was inverted in approximately 53% of the patients. Natural killer cells were quantified in 18 patients and about 56% of them had reduced absolute number. The majority (97%) of patients manifested at least one noninfectious comorbidity at a mean follow-up time of 8.2 years, with lymphoid hyperplasia and chronic lung disease being the most common, each occurring in about half of the patients. The delay for the diagnosis of CVID was important, suggesting that the presence of recurrent infections, especially of the respiratory tract, should lead to the investigation of antibody deficiencies with dosage of immunoglobulins. Noninfectious complications were extremely common in this series, highlighting the broad clinical spectrum of the disease.

Orientadores: Cássia Raquel Teatin Juliato, Cristina Laguna Benetti-Pinto / Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Ciências Médicas / Made available in DSpace on 2018-08-24T01:05:51Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Mayrink_Jussara_M.pdf: 620094 bytes, checksum: e3d5f6dee5c7be899f7f699f6c82fdfe (MD5) Previous issue date: 2013 / Resumo: Introdução: A síndrome dos ovários policísticos (SOP) é uma doença que acomete aproximadamente 10% das mulheres em idade reprodutiva. Está associada a diversos distúrbios metabólicos, como a resistência insulínica (RI) e a síndrome metabólica (SM). A resistência insulínica, por sua vez, está relacionada a disfunções tireoidianas (hipotireoidismo clínico e subclínico). Alguns estudos têm relacionado essas disfunções à ocorrência de SOP, bem como a maior prevalência de tireoidite crônica autoimune nessas mulheres. Entretanto, esses trabalhos ainda são escassos. Objetivos: comparar a prevalência de tireoidite crônica autoimune em mulheres com e sem SOP, comparar a presença de anticorpos antitireoidianos antiperoxidase (ATPO) e antitireoglobulina (ATG) e achados ecográficos tireoidianos sugestivos de tireoidite crônica autoimune em mulheres com e sem SOP. Sujeitos e métodos: foi um estudo de corte transversal, incluindo 130 mulheres entre 18 e 40 anos dos ambulatórios de ginecologia endocrinológica e de planejamento familiar do Departamento de Ginecologia e Obstetrícia, Faculdade de Ciências Médicas, Universidade Estadual de Campinas - entre os meses de agosto de 2012 e agosto de 2013 -, sendo 65 com SOP, em conformidade com o Consenso de Rotterdam de 2004, e 65 mulheres com ciclos menstruais regulares e sem doenças crônicas previamente diagnosticadas. Para todas foram avaliados: índice de massa corpórea (IMC, kg/m2), graus de hirsutismo através do índice de Ferriman-Gallwey, TSH, T4L, T3L, glicemia e insulinemia de jejum, avaliação de resistência insulínica através do índice de HOMA, antiperoxidase e antitireoglobulina e ultrassom da glândula tireóide. Análise Estatística: Para análise dos dados foram usados os testes de Mann- Whitney, t de student, qui quadrado e exato de Fischer. Os dados foram apresentados como média ±DP. Resultados: As 130 mulheres participantes deste estudo eram jovens, com idade entre 18 e 40 anos e média de 27,8 ±6,9 anos no grupo com SOP e 33,5 ±5,7 anos no grupo sem SOP. As mulheres com e sem SOP apresentaram média de IMC de 34,8±8,9 e 28,4±4,8 kg/m2, respectivamente (p<0,0001). O índice de Ferriman-Gallwey para os grupos com e sem SOP foi 8±3,1 e 5±0,7, respectivamente (p<0,0001). Os valores de insulinemia, glicemia e índice de HOMA também foram significativamente maiores na presença de SOP. Em relação ao TSH, os valores para mulheres com e sem SOP foram de 2,4 ±1,8 mIU/L e 2,1±1,2 mIU/L, respectivamente (p=0,0133). Não houve diferença na ocorrência de ATPO e ATG comparando-se os dois grupos. Não houve diferença entre os grupos para o volume tireoidiano avaliado pela ecografia. Entretanto, as glândulas eram mais hipoecoicas no grupo com SOP (26,8% versus 15,4%; p=0,05). A prevalência de HSC foi de 16,9% (11/65mulheres) no grupo com SOP e 6,2% (4/65 mulheres) no grupo sem SOP. Em relação ao diagnóstico de tireoidite crônica autoimune, houve diferença significativa em sua prevalência, com 43,1% de tireoidite no grupo com SOP e 26,2% no grupo sem SOP (p=0,04). Conclusão: A maior prevalência de tireoidite crônica autoimune e de alteração na função tireoidiana (HSC) das mulheres com SOP indicam a necessidade de manter-se vigilância periódica sobre a função tireoidiana, embora não aponte a necessidade de pesquisa rotineira de anticorpos antitireoidianos / Abstract: Introduction: Polycystic ovary syndrome (PCOS) is a condition that affects approximately 10% of women of reproductive age. It's associated with various metabolic disorders such as insulin resistance (IR) and metabolic syndrome (MS). Insulin resistance, in turn, is related to thyroid dysfunction (clinical and subclinical hypothyroidism). Some studies have linked these disorders to the occurrence of PCOS as well as a higher prevalence of autoimmune thyroiditis. However, these studies are still scarce. Objectives: To compare the prevalence of autoimmune thyroiditis , the occurrence of anti -thyroid peroxidase antibodies (ATPO) and anti - thyroglobulin (ATG) and thyroid ultrasound findings suggestive of autoimmune thyroiditis in subjects with and without PCOS. Subjects and methods: It was a cross-sectional study including 130 women between 18 and 40 years of outpatient gynecological endocrinology and family planning at the Department of Obstetrics and Gynecology, School of Medical Sciences, State University of Campinas, between the months of August 2012 and August 2013, 65 with PCOS, in accordance with the Rotterdam criteria, and 65 women with regular menstrual cycles and without previously diagnosed chronic diseases. For all evaluated: body mass index (BMI, kg/m2), degree of hirsutism by Ferriman - Summary xii Gallwey, TSH , FT4 , FT3, blood glucose and fasting insulin, assessment of insulin resistance by HOMA index, ATPO and ATG and ultrasound of the thyroid gland. Statistical analysis: For data analysis we used the Mann- Whitney test, Student's t, chi-square and exact Fisher. Data were presented as mean ± SD. Results: 130 women participating in this study were young, between 18 and 40 years, 27.8 ± 6.9 years in the PCOS group and 33.5 ± 5.7 years in the group without PCOS. Women with and without PCOS had a mean BMI of 34.8 ± 8.9 and 28.4 ± 4.8 kg/m2 , respectively ( p < 0.0001 ) . The Ferriman - Gallwey index for the groups with and without PCOS was 8 ± 5 and 3.1 ± 0.7, respectively (p < 0.0001). The amounts of insulin, glucose and HOMA index were also significantly higher in the presence of PCOS. The TSH values for women with and without PCOS were 2.4 ± 1.8 mIU / L and 2.1 ± 1.2 mIU / L, respectively (p = 0.0133). There was no difference in the occurrence of ATPO and ATG comparing the two groups. There was no difference between groups for thyroid volume measured by ultrasound. However, the glands were more hypoechoic in the PCOS group (26.8% vs. 15.4%, p = 0.05). The prevalence of SCH was 16.9 % (11/65 women) in the PCOS group and 6.2% (4/65 women) in the group without PCOS. The prevalence of autoimmune thyroiditis in the PCOS group was 43.1% and 26.2% in the group without PCOS (p = 0.04). Conclusion: The higher prevalence autoimmune thyroiditis and SCH in women with PCOS indicates the necessity of keeping surveillance on their periodic thyroid function, but do not point the necessity of routine investigation of antithyroid antibodies / Mestrado / Fisiopatologia Ginecológica / Mestra em Ciências da Saúde

Orientadores: Wanderley Dias da Silveira, Eliana Guedes Stehling / Tese (doutorado) - Universidade Estadual de Campinas, Instituto de Biologia / Made available in DSpace on 2018-08-21T01:02:36Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Mobilon_Cristiane_D.pdf: 11609484 bytes, checksum: 06504829a16dd9fe15e1e7aff6ed5392 (MD5) Previous issue date: 2012 / Resumo: A shigelose, uma infecção intestinal grave, causada por bactérias Gram-negativas pertencentes ao gênero Shigella, é uma patologia com incidência significativa, principalmente em países em desenvolvimento, onde ocorrem 99% dos casos relatados, sendo que, 69% deles acometem crianças menores de 5 anos de idade. A alta incidência de Shigella em países em desenvolvimento é, geralmente, atribuída à falta de saneamento básico, condições de higiene inadequadas, subnutrição e alto custo dos antimicrobianos. O modo predominante de transmissão ocorre por via fecal-oral. Os mecanismos de patogenicidade descritos para as diferentes espécies de Shigella incluem numerosos genes de virulência, sendo a maioria encontrada em um plasmídio (pINV) de 220 kb. O plasmídio pINV de S. flexneri codifica 2 operons cruciais para seu fenótipo invasivo: o operon ipa e o operon mxi-spa. O operon ipa codifica os antígenos plasmidiais de invasão denominados IpaA, IpaB, IpaC e IpaD, os quais são efetores para o processo de invasão bacteriana. O operon mxi-spa juntamente com as proteínas IpaB, IpaC e IpaD são essenciais para a invasão in vitro de células epiteliais. Sabe-se, também, que essas proteínas, ou antígenos plasmidiais de invasão, podem ser altamente imunogênicos. Neste trabalho, clonou-se o gene ipaC no vetor pET28a para expressão em Escherichia coli e em vetores constitutivos para bactérias lácticas com a finalidade de se verificar a capacidade imunogênica da proteína expressa por este gene. Além disso, verificou-se que os anticorpos produzidos pela resposta à proteína IpaC foram capazes de inibir a adesão e invasão de Shigella flexneri em culturas celulares cultivadas in vitro confirmando, assim, a importância dessa proteína no processo invasivo da bactéria e seu possível uso no desenvolvimento de futuras vacinas a serem usadas contra a shigelose / Abstract: Shigellosis is a severe intestinal infection caused by Gram-negative bacteria which belongs to the genus Shigella. It is a pathology with high incidence and it is known that 99% of cases occur in underdevelopment countries. Among these cases, 69% of them affect children under 5 years old. The high incidence of Shigella in underdevelopment countries, is mainly atribbuted to substandard hygiene, unsafe water supplies, subnutrition and antibiotic high cost. The predominant mode of transmission is by fecal-oral contact. The pathogenicity mechanisms described for Shigella species include several virulence genes, most of them been encoded in a plasmid (pINV) with 220 kb. This plasmid encodes 2 important operons which are essential for the invasive phenotype: the operon ipa and the operon mxi-spa. The ipa operon encodes the invasion plasmid antigens called IpaA, IpaB, IpaC and IpaD, which are effector proteins required for the bacteria invasion process. The mxi-spa operon together with IpaB, IpaC and IpaD are essential to epithelial in vitro cell invasion. It is also known that these proteins or invasion plasmid antigens may be highly immunogenic. During the development of this work, ipaC gene was cloned in the plasmidial vector pET28a for expression in Escherichia coli and in constitutive vectors for lactic acid bacteria to prove its immunogenic importance. Furthermore it was verified that the antibodies produced in response to IpaC protein were able to inhibit Shigella flexneri adhesion and invasion in in vitro cultured cells, confirming its important hole in bacteria invasion process and its possible usage in vaccine development against shigellosis / Doutorado / Genetica de Microorganismos / Doutor em Genetica e Biologia Molecular

Orientador: Laura Sterian Ward / Tese (doutorado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Ciencias Medicas / Made available in DSpace on 2018-08-07T12:12:10Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Morari_ElaineCristina_D.pdf: 1770772 bytes, checksum: f0438710dc4ea98d3ad5dcac857c770e (MD5) Previous issue date: 2006 / Resumo: Como a maior parte dos carcinomas diferenciados tem um excelente prognóstico, alguns autores consideram o tratamento convencional, isto é, a tireoidectomia total seguida de ablação actínica de remanescentes glandulares, excessivo. Combinações de fatores específicos do paciente e do tumor foram propostas para classificação prognóstica, mas na prática são pouco utilizadas. Os resultados de alguns trabalhos sugerem relação entre a expressão dos genes MUC, p53 e NIS e a evolução clínica das neoplasias tireoidianas. Com o objetivo de investigar a utilidade clínica de marcadores imonoistoquímicos de prognóstico, estudamos 67 nódulos tireoidianos, incluindo 57 carcinomas, dos quais incluiu 34 (50,74%) carcinomas papilíferos, sendo 21 (31,3%) casos do tipo histológico clássico, 7 (10,4%) da variante de células altas e 6 (9%) da variante folicular. Avaliamos também 16 (23,9%) carcinomas foliculares, 4 (6%) medulares e 3 carcinomas anaplásicos (4,5%). Dez casos (14,9%) foram obtidos de pacientes submetidos à cirurgia com o diagnóstico de doenças benignas da tiróide (3 casos de bócio nodular, 4 adenomas foliculares e 3 tecidos tireoidianos normais). Todos os pacientes foram submetidos a um mesmo protocolo de tratamento e acompanhados por 66±28 meses (mediana de 63 meses) sendo classificados como apresentando evolução favorável ou desfavorável. Consideramos de evolução desfavorável os 19 pacientes que possuíam evidência de recorrência local ou à distância ou que foram a óbito durante o seguimento pela doença. Realizamos estudos imunoistoquímicos da detecção das proteínas NIS, p53 e MUC1 comparando-os com a evolução dos pacientes. Mostramos que pacientes com carcinomas bem diferenciados, ausência de metástases, estadio II e estadiamento T2 têm uma evolução melhor em relação aos pacientes com carcinomas pouco diferenciados, presença de metástases, estadio IV e estadiamento T4. Não encontramos relação entre a expressão das proteínas NIS, p53 e MUC1 e a evolução dos pacientes estudados / Abstract: Because most differentiated thyroid carcinomas have an excellent prognosis, some authors have been claiming that these patients have been over-treated. Combinations of patient-and tumor-specific factors have been proposed for prognostic stratification, but no clinicpathologic staging was demonstrated to be useful at the present time. In order to investigate the clinical utility of immunohistochemistry markers, we studied 67 thyroid nodules including 50 thyroid carcinomas. There were 34 (50,74%) papillary carcinomas, including 21 (31,3%) cases of the classical histological type, 7 (10,4%) tall cell variants and 6 (9%) of the follicular variant type. Also, there were 16 (23,9%) follicular carcinomas, 4 (6%) medullary and 3 anaplastic carcinomas (4,5%). Ten patients (14,9%) were submitted to surgery because of benign thyroid diseases (3 nodular goiter cases, 4 follicular adenomas and 3 thyroid tissues normal). All patients were submitted to a similar management protocol and followed-up for 66±28 months (median of 63 months) and classified as presenting a good or a bad evolution. We considered as presenting a bad evolution 19 patients that presented evidence of local or distant recurrence and the patients that died during the follow-up. Immunohistochemical expression of NIS, p53 and MUC1 proteins was compared to patient¿s evolution. We showed that patient with well differentiated thyroid carcinomas, absence of distant metastases, stage II and staging T2 have a better evolution in relation to the patients with poorly differentiated thyroid carcinomas, presence of metastases, stage IV and staging T4. We were able to find relation between the expression of proteins NIS, p53 and MUC1 and prognostic of the studied patients / Doutorado / Clinica Medica / Doutor em Clínica Médica

O rotavírus é a principal causa de diarréia em crianças em todo o mundo. Infecta também adultos, mas não há dados completos sobre a sua incidência nesse grupo nem sobre o papel de anticorpos preexistentes na proteção contra o vírus. O objetivo do trabalho foi avaliar a presença de anticorpos IgA e IgG anti-rotavírus SA-11, por ELISA, em amostras de soro de adultos saudáveis e sua ação neutralizante frente ao vírus, em ensaios de neutralização. Por Immunoblotting foi avaliado o reconhecimento de proteínas virais pelos anticorpos séricos. Observou-se que os títulos das amostras foram muito variáveis, sendo os de IgG superiores aos de IgA. Todas as amostras mostraram-se capazes de neutralizar o vírus em diferentes níveis, porém não foi possível estabelecer uma correlação com os títulos de anticorpos. Foi observado que anticorpos da classe IgG reconhecem mais proteínas virais que os da classe IgA. Este trabalho pode ser considerado mais um passo na elucidação do papel dos anticorpos séricos IgA e IgG anti-rotavírus na infecção em adultos. / Rotavirus has been considered the leading cause of diarrhea in children worldwide. The virus also infects adults but there is no conclusive data neither on the incidence of infection on this group nor on the role of pre-existing antibodies. The aim of the work was to evaluate the presence of anti-rotavirus SA-11 IgA and IgG by ELISA in serum samples of healthy adults and the serum neutralizing ability against the virus by neutralization assays. Immunoblotting was used to evaluate viral proteins recognition by serum antibodies. The antibody titers were extremely variable where IgG titers are greater than IgA ones. All samples were able to neutralize the virus in different levels but it was not possible to establish a correlation between antibody titers and neutralization ones. Immunoblotting assays revealed that IgG antibodies recognize more viral proteins than IgA did. This work can be considered a valuable step for elucidating the role of serum anti-rotavirus IgG and IgA antibodies in adults infection.