Orientador : Benedito de Oliveira / Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Instituto de Biologia / Made available in DSpace on 2018-07-17T07:28:27Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Farah_MariadeFatimaLovo_M.pdf: 2304061 bytes, checksum: 2f52d324a539cf4a5c8e043384ea13a4 (MD5) Previous issue date: 1988 / Resumo: A análise imunoeletroforética do soro imune de Tayassu, utilizando-se como revelador o soro de coelho anti-soro de Tayassu, revelou uma fração protéica de mobilidade eletroforética menos anódina característica de imunoglobulinas do isotipo IgG. Do soro imune deste animal foi purificada, por cromatografia de troca iônica em DEAE celulose, uma fração protéica que por análise imunoeletroforética apresentou mobilidade eletroforética lenta em relação ao anodo. Da fração restante, denominada RC, foi purificada a fração protéica, por cromatografia de exclusão molecular, que apresentou volume de eluição típico de imunoglobulinas IgG. A análise imunoeletroforética demonstrou que a fração obtida por purificação do RC, possui mobilidade eletroforética rápida em relação ao anodo. Por imunodifusão, as frações protéicas denominadas IgG lenta e IgG rápida de Tayassu apresentaram relação de identidade parcial com a IgG monoclonal GOB quando reveladas com o soro especifico anticadeia gama humana, evidenciando que estas proteínas são parte integrante da classe IgG de vertebrados. A digestão pela papaína, da IgG lenta de Tayassu, permitiu a separação desta imunoglobulina nos fragmentos Fab e Fc, por cromatografia de troca iônica em DEAE celulose. Estes resultados indicam que as imunoglobulinas Gde Tayassu devem guardar relação de semelhança estrutural com as demais imunoglobulinas de vertebrados. Por imunodifusão, utilizando-se como revelador o soro de coelho antifragmento Fc de IgG lenta de Tayassu, não foi observada linha de precipitação entre o antisoro e o fragmento Fab de IgG lenta de Tayassu, mas reagiu formando arcos de precipitação com o fragmento Fc purificado e as imunoglobulinas IgG lenta e IgG rápida, onde se nota um "esporão" indicativo de relação e de identidade antigênica parcial entre as proteínas IgG lenta e rápida. A composição global de aminoácidos das imunoglobulinas IgG lenta e IgG rápida de Tayassu apresentou um número de meias cistinas, na forma de ácido cisteico, de 38 resíduos para a IgG lenta e 39 para a IgG rápida, o que sugere um número aproximado de cinco meias cistinas intercadeia pesada (H-H), A IgG rápida apresentou um total de 1314 resíduos e a IgG lenta 1308. O perfil cromatográfico, em Sephadex G100, da separação das cadeias H (pesada) e L (leve) da imunoglobulina IgG lenta de Tayassu é semelhante às descritas na literatura para imunoglobulinas G de outras espécies. A cromatografia de afinidade em Proteína A -Sepharose do soro de Tayassu mostra dois picos correspondentes às frações A e B. A análise imunoeletroforética do material contido na fração B demonstra que a imunoglobulina G de Tayassu ligou-se à proteína A, visto que, esta contém sítios de ligação que mostram uma alta afinidade pela porção Fc da molécula de IgG. Da mesma maneira, a cromatografia de afinidade da fração RC, obtida do soro de Tayassu em DEAE celulose, mostra dois picos correspondentes as frações RCA e RCB. A análise imunoeletroforética do material contido no pico RCB demonstra que a IgG rápida de Tayassu ligou-se à proteína A, como ocorre com IgG de muitas espécies. A análise em gel de poliacrilamida da forma reduzida das imunoglobulinas G lenta e rápida de Tayassu apresentaram pesos moleculares semelhantes ao dos marcadores 19G utilizados. Na forma reduzida as imunoglobulinas G lenta e rápida apresentaram cadeias pesadas (H) com pesos moleculares correspondentes a 50 K (50.000 daltons) e as cadeias leves (L) pesos moleculares correspondentes a 25 K (25.000 daltons), de acordo com os marcadores utilizados: a proteína de Bence Jones, que após redução apresenta-se na forma de monômero, migrando como única banda correspondente àquelas das cadeias leve de imunoglobulinas e proteína monoclonal (GOB) do isotipo IgGl reduzida. As proteínas IgG lenta e rápida de Tayassu, de acordo com as metodologias utilizadas neste trabalho puderam ser qualificadas como imunoglobulinas do isotipo IgG, podendo ser comparadas com classes e subclasses de imunoglobulinas G de vários vertebrados utilizadas para estudos de filogenia molecular do ver modelo IgG / Abstract: Agar immunoelectrophoretic analysis of Tayassu serum developed with rabbit anti-whole Tayassu serum, revealed the presence of a protein fraction with a cathodal electrophoretic migration characteristic of the IgG isotype immunoglobulins. Fractionation in DEAE-cellulose of individual Tayassu immune serum gave rise to a protein fraction that was characterized by agar gel immunoelectrophoresis as a single precipitin are present in the region of slow electrophoretic mobility towards the anode. A second fraction obtained from the anion exchange chromatography on DEAE-cellulose called RC when submitted to Sephadex gel filtration gave rise to a protein fraction that had fraction a typical behaviors of 75 IgG immunoglobulins. This fraction purified from RC showed a fast electrophoretic mobility towards the anode when characterized by immunoe1etrocphoresis. In Ouchterlony analysis an antiserum specific to human ? showed a cross-reaction with both slow and fast mobility Tayassu immunoglobulin populations and also with a human monoclonal IgG (IgG GOB). This indicates that both Tayassu protein fractions integrate the IgG class of vertebrate immunoglobulins. Two fragments, Fab an Fc, wen obtained after papain degestron of the Tayassu slow IgG. There findings indicate that the Tayassu G immunoglobulin must follow the structural arrangement characteristic of other vertebrate IgG immunoglobulins. In immunodiffusion analysis a rabbit antiserum to Tayassu slow IgG Fc fragment did not react with Tayassu slow IgG Fab fragment but showed precipiting lines with purified Fc fragment and also with slow and fast IgG immunoglobulins. A spur between these two IgG proteins was also detected and is indicative of partial antigenic identity between them. The global aminoacid composition showed: a) 38 residues of half-cystine (determined as cysteic acid) for the slow IgG immunoglobulin and 39 residues for the fast IgG immunoglobulin. This suggests an overall number of 5 half-cystine inter heavy chains (H-H) and b) a total of 1308 aminoacid residues for the slow IgG and a total of 1314 aminoacid residues for the fast IgG. The elution profile obtained from gel filtration (Sephadex 6100) indicates that the heavy (H) and length (L) chains of the Tayassu slow IgG immunoglobulin can be separated in a manner similar to that described in the literature for IgG immunoglobulins of other species. Two peaks, A and B, were obtained from Tayassu serum submitted to affinity chromatography on Protein A-Sepharose. Immunoelectrophoretic analysis of peak B shows that the Tayassu G immunoglabulin was bound to protein. A since this protein displays binding sites with high specificity for the Fc portion of the IgG molecule. The fraction RC, obtained from DEAE-cellulose, also showed two peaks corresponding to fractions RCA and RCB. Immunoelectrophoretic analysis of the RCB fraction showed that the Tayassu fast IgG was bound to protein A, as observed for IgG of many species. Polyacrylamide gel electrophoresis of the reduced Tayassu slow and fast immunoglobulins showed that the heavy (H) Tayassu and light (L) chain molecular weights correspond to 50K and 25K, respectively. This is in agreement with the markers used as reference: a human monoclonal IgG protein (GOB) in the reduced form and a human ? Bence Jones protein (JJO) also in the monomeric form after reduction. Based on the immunochemical characterization described both slow and fast Tayassu immunoglobulins can be identified as IgG immunoglobulins. They can be used for further studies conceming the molecular phylogeny of the IgG model / Mestrado / Genetica / Mestre em Ciências Biológicas

Orientador: Maria Marluce dos Santos Vilela / Tese (doutorado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Ciencias Medicas / Made available in DSpace on 2018-07-19T04:27:47Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Ribeiro_JoseDirceu_D.pdf: 4352784 bytes, checksum: fee17d1dc83be0a6528fa16646b68bb0 (MD5) Previous issue date: 1994 / Resumo: As subclasses de IgG, particularmente IgG 1 E IgG2, são os anticorpos responsáveis pela opsonização de Haemophylus irifluenzae e Streptococcus pneumoniae, agentes freqüentes das pneumonias da infância. O presente trabalho teve como objetivo avaliar se havia ou não diferença na concentração sérica dessas imunoglobulinas em crianças asmáticas graves com e sem pneumonias de repetição. Os níveis Séricos de IgGl, IgG2, IgG3 e IgG4, foram dosados utilizando-se anticorpos monoclonais pela técnica de ELISA, em 72 crianças de 7 a 15 anos de idade ,portadoras de asma brônquica atópica grave, divididas em dois grupos: 1- 37 crianças com pneumonias de repetição. 1I-35 crianças que nunca haviam tido pneumonia. O mesmo método foi empregado em 80 crianças controles de 7 a 15 anos de idade, permitindo a construção de curvas com os percentís 2,5, 5,0, 25,0, 50,0, 75,0, 95,0 e 97,5. Para isso utilizou-se a transformação logarítmica de BOX-COX. A comparação entre os grupos foi realizada utilizando-se o teste não paramétrico de WILLCOXON - MANN & WHITNEY. Verificou-se que foram significativamente menores (p<0,05) os níveis séricos de IgGl nos grupos I e lI, os níveis séricos de IgG2, na faixa etária de 7 a 9 anos nos pacientes do grupo I, bem como de IgG4, na faixa etária de 7 a 12 anos de idade nos grupos I e lI, quando comparados ao grupo controle. Não houve diferença significativa (p>0,05) entre os pacientes asmáticos dos dois grupos estudados quando comparados por sexo ou por faixa etária. Exceção apenas para os níveis séricos de IgG3 nos asmáticos masculinos que foram significativamente maiores que nos asmáticos femininos do grupo 1. As crianças controles (saudáveis) também não apresentaram diferenças estatísticas nos níveis de subclasses de IgG quando comparadas por sexo, exceto para IgG4 na faixa etária de 7 a 9 anos. Estes resultados sugerem que a regulação da síntese destas imunoglobulinas em crianças asmáticas, especialmente IgG1 na faixa etária de 7 a 15 anos e IgG4 na faixa etária de 7 a 12 anos é diferente das crianças saudáveis. Porém este fato não distingue nestas faixas etárias, os grupos com e sem pneumonias de repetição / Abstract: IgG subclasses (IgGSC), especially IgG 1 and IgG2, are the antibodies responsible for the opsonization of Haemophylu8 influenzae and Streptococcus pneumoniae, ftequent agents of childhood pneumonia. It was the objective of this research to evaluate whether differences in the serum concentration of such immunoglobulins exists in severely asthrnatic children with or without recun-ent pneumonia. The serum levels of IgG 1, IgG2, IgG3 and IgG4 were administered using monoclonal antibodies, utilizing the ELISA technique, in 72 children, age 7 though 15, with severe atopic bronchial asthma. The children were divided in two groups: Group I - 37 children with repetitive pneumonia. Group fi - 35 children who had never had pneumonia. The same procedure was applied to 80 healthy chidren, age 7 to 15, which allowed for the construction ofpercentual curves 2.5, 5.0, 25.0, 50.0,95.0 and 97.5. For this, the BOX-COX logarithmic transformation was used. Thc comparation between groups was made using the WILCOXON, F. and MANN, H. & WHITNEY, D. non-parametric test. n was verified that there was a statistically significant difference (less than p<0.05) in the serum levels of IgG 1 in groups I and lI, of IgG2 in the 7 to 9 age groups of patients in group 1, and of IgG4 in the 7 to 12 groups of patients in groups I and fi, when compared,to normal groups. No significant differences were found (p>0.05) among the asthrnatic patients of both groups that were analysed when compared by sex or separated by age. The onlyexception found was the scrum levels of IgG3 in male asthmatic patients that were significantly largcr than in thc female asthmatic group. Thc healthy children also did not present statistical differences in the levels of IgGSC when compared by sex, except for IgG4 between age 7 to 9. These results suggest that the regulation of the synthesis of these immunoglobulins in astlunatic children, especially in the 7 to 15 group of IgG 1 and the 7 to 15 age group of IgG4 are different than in nonnal children. These facts do not distinguish in these age groups, however, groups with or without reCU1Tent pneumonia / Doutorado / Doutor em Pediatria

Orientador: João Alberto Negrão / Coorientador: Maria Regina Barbieri de Carvalho / Banca: José Jurandir Fagliari / Banca: Maria da Graça Pinheiro / Resumo: O sistema imunológico de bezerros consolida-se com a ingestão do colostro, alimento rico em imunoglobulinas que são proteínas responsáveis por transferir imunidade aos bezerros. A eficiência dessa transferência é influenciada por uma série de fatores, dentre eles a integridade das imunoglobulinas a serem absorvidas. No colostro estão naturalmente presentes os inibidores de tripsina, capazes de preservar as imunoglobulinas da ação de enzimas proteolíticas. O objetivo deste trabalho foi avaliar a potencialidade dos inibidores de tripsina da soja na transmissão da imunidade passiva de bezerras da raça Holandesa, por meio da análise das concentrações de imunoglobulina G (IgG) e proteína total (PT) e atividade da gamaglutamiltransferase (GGT) sérica. Foram utilizadas 18 bezerras recém-nascidas alimentadas com colostro (T1), colostro adicionado de inibidor de tripsina purificado Sigma tipo I-S (50 mg) (T2) e provenientes da fração albumina da soja 1,08 g (T3). As amostras de sangue foram colhidas por venopunção da veia jugular com 1, 12, 24, 36 e 48 h após o nascimento, sendo a primeira colheita realizada antes do fornecimento do colostro. O colostro apresentou teor de gordura de 3,2 a 7,2 %, de proteína total de 14,10 a 19,52 %, representada por 7,84 a 9,44 % pelas proteínas do soro (PS). A atividade dos inibidores de tripsina variou de 0,766 a 0,945 mg de tripsina inibida.mL-1. Não houve influencia dos tratamentos (p>0,05%) para os parâmetros analisados, porém houve efeito (p<0,05%) do período de amostragem, com aumento nas concentrações de IgG, GGT e PT a partir da 0h com respectivos valores médios de 0,68 g.dL-1; 15,17U.L-1, 4,43 g.dL-1, com pico de absorção às 24 h: 3,06 g.dL-1, 2.779 U.L-1 e 7,54 g.dL-1, respectivamente, indicando transmissão adequada de imunidade passiva. A adição dos... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract: The calves' immune system is consolidated by the ingestion of colostrum, which is rich in immunoglobulin, the proteins that are responsible for transfering the immunity to the calves. This transferring efficacy is influenced by a series of facts, among them the immunoglobulin's integrity to be absorbed. Trypsin inhibitors are naturally present on the colostrum and they are able to preserve the immunoglobulin from the proteoclastic enzyme actions. The aim of this work was to evaluate the potentiality of soya Trypsin inhibitor on the passive immunity of the Holstein female calves, by evaluating the concentration of immunoglobulin G (IgG) and total protein (PT) as well as Gammaglutamil transferase (GGT) activity in serum. Eighteen newborn female calves were taken and they were fed with colostrums (T1), colostrums with purified trypsin inhibitor I-S Sigma (50mg), (T2) and colostrums with soya albumin fraction 1.08 g (T3). Blood samples were collected by jugular veined punch within 1, 12, 24, 36 and 48 hours after they were born, the first collection was done before the colostrums was given. Colostrums have presented 3.2% to 7.2 % of fat contents; 14, 10% to 19, 52 % of total protein represented by 7, 84% to 9, 44 % of serum protein (PS). Trypsin inhibitor activities have varied from 0,766 mg to 0,945 mg of inhibited trypsin mL-1. There was no influence of the treatments (p>0,05%) for the analyzed parameters, however, there was (p<0,05%) a significant effect for the period of collection, with an increase on IgG, GGT and, PT concentrations from 0h with the respective medium values of 0,68g.dL- 15,17U.L-1, 4,43 g.dL-1. The absorption pick was at 24 h: with 3,06 g.dL-1, 2.779 U.L-1 and 7,54 g.dL-1 means, respectively for IgG, GGT and PT, indicating an adequate transmission of passive immunity. The addition of soya Trypsin... (Complete abstract click electronic access below) / Mestre

Orientador: João Martins Pizauro / Coorientador: Samir Issa Samara / Coorientador: Marco Antonio de Andrade Belo / Banca: Eduardo Maffud Cilli / Banca: Monica Valdyrce dos Anjos Lopes Ferreira / Banca: Fabiana Garcia / Banca: Luiz Flávio José dos Santos / Resumo: A Aeromonas hydrophila é um patógeno oportunista com capacidade de infectar peixes, mamíferos e humanos. É cosmopolita e responsável por infecções hospitalares em humanos e causadora da aeromonose em peixes. O uso de antibióticos na água, como forma terapêutica na aquicultura, apesar de controlar a infecção, favorece o desenvolvimento de resistência microbiana através do efeito residual destes fármacos no peixe e consequentemente no consumidor final humano, tornando-se um agravo para a saúde pública. Pensando nisso, foi produzido uma imunoglobulina Y (IgY), extraída da gema do ovo de galinhas poedeiras, específica para as proteínas de membrana e citoplasmática de A. hydrophila. No início, a IgY foi validada quanto a capacidade de detectar o patógeno no tecido de tilápias-do-nilo (Oreochromis niloticus) infectadas com a bactéria homóloga. Após a validação da IgY anti- A. hydrophila, a mesma foi testada in vitro na imunoterapia, e seus efeitos na atividade fagolisossômica de macrófagos (MΦs) de tilápias-do-nilo, infectados com A. hydrophila viva opsonizada/ neutralizada ou não. Os resultados provaram a eficácia e a aplicação da IgY para o ensaio de imunofluorescência direta (IMF) e imuno-histoquímica (IHC) validando a IgY para o diagnóstico e estudo fisiopatológico da infeção por A. hydrophila em tilápias-do-nilo. Na imunoterapia in vitro a IgY anti-A. hydrophila teve efeito positivo no controle da infecção, postulando ainda, o uso dos MΦs da tilápia-do-nilo como um importante ... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract: Aeromonas hydrophila is an opportunistic pathogen with the capacity to infect fish, mammals and humans. It is cosmopolitan and is responsible for hospital infections among humans and for aeromonosis in fish. Although using antibiotics in water for therapeutic purposes in fish-farming has the effect of controlling infection, it also favors development of microbial resistance through the residual effect of these drugs on fish and consequently on the final human consumers. Thus, their use has become a public health hazard. With the aim of investigating alternative ways of combating A. hydrophila, an immunoglobulin Y (IgY) extracted from the yolk of the eggs of laying hens that was specific for the proteins of the membrane and cytoplasm of A. hydrophila was produced. This IgY was firstly validated regarding its capacity to detect A. hydrophila in the tissues of Nile tilapias (Oreochromis niloticus) that were infected with the homologous bacterium. The anti-A. hydrophila IgY was then tested in vitro for immunotherapy to determine its effects on the phagolysosomal activity of macrophages (MΦs) in Nile tilapias that were infected with live A. hydrophila that was either opsonized/neutralized or not. The results demonstrated that application of IgY was effective. Direct immunofluorescence (IMF) tests and immunohistochemical (IHC) analysis validated IgY for diagnosing the presence of A. hydrophila and for conducting physiopathological studies on A. hydrophila in Nile tilapias. In in vi... (Complete abstract click electronic access below) / Doutor

Orientador: Maria Aparecida Custodio Domingues / Resumo: Mieloma Múltiplo é uma neoplasia maligna de células plasmocitárias, cujas repercussões clínicas de interação da célula tumoral com seu microambiente e com o hospedeiro podem causar danos irreversíveis e progressivos ao doente. Estratégias terapeuticas têm tentado reunir antídotos às várias linhas de atuação da célula tumoral. Objetivou-se avaliar características clíncas e possíveis interações com o microambiente da medula óssea. Foram colhidos dados clínicos, reavaliado material histológico e confeccionado bloco de TMA com grupos de pacientes ao diagnóstico, na primeira recaída e após transplante autólogo de medula óssea. A análise estatística compreendeu descrição dos dados de distribuições de frequência para as variáveis qualitativas e calculadas as médias, desvios padrão, valores mínimo e máximo e mediana para as variáveis quantitativas. O teste de Qui-quadrado de Pearson foi empregado para variáveis qualitativas. Gráficos do tipo mosaico apresentaram os cruzamentos das variáveis discretas e técnica FAMD para verificação da contribuição das variáveis qualitativas e quantitativas simultaneamente. As curvas de sobrevida foram obtidas usando a metodologia de Kaplan & Meier e a estatística de Breslow foi empregada para testar a diferença entre as curvas observadas. Os intervalos de confiança para as curvas e testes foram feitos com nível de significância de 5%. As análises e figuras foram elaboradas com o software R (R Core Team, 2017). Concluímos que pacientes com condições c... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract: Multiple Myeloma is a malignant neoplasm of plasma cells whose clinical repercussions of tumor cell interaction with its microenvironment and host may cause irreversible and progressive damage to the patient. Therapeutic strategies have attempted to gather antidotes to the various lines of action of the tumor cell. This study aimed to evaluate clinical characteristics and possible interactions with the bone marrow microenvironment. Clinical data were collected, histological material was reevaluated and an AMT block was made with patient groups at diagnosis, in the first relapse and after autologous bone marrow transplantation. Statistical analysis included description of frequency distribution data for qualitative variables and calculated means, standard deviations, minimum and maximum values and median for quantitative variables. Pearson's chi-square test was used for qualitative variables. Mosaic graphs showed the intersections of discrete variables and FAMD technique to verify the contribution of qualitative and quantitative variables simultaneously. Survival curves were obtained using the Kaplan & Meier methodology and the Breslow statistic was employed to test the difference between the observed curves. Confidence intervals for curves and tests were made at a significance level of 5%. The analyzes and figures were elaborated with the R software (R Core Team, 2017).We conclude that patients with clinical conditions for more aggressive initial therapies may impact their su... (Complete abstract click electronic access below) / Doutor

Ginkgo biloba ekstrakto adjuvantinis efektas, indukuojant specifinį imuninį atsaką prieš jaučio serumo albuminą vištų bei triušių modeliuose Adjuvantai – tai yra neorganiniai ir organiniai junginiai, kurie stimuliuoja imuninę sistemą ir skatina sistemos atsaką prieš pageidaujamą antigeną, kurio imunogeniškumas savaime yra menkas. Siekiant sustiprinti organizmo atsaką į pateikiamą antigeną šie junginiai dažnai įtraukiami į vakcinų sudėtį. Šiame darbe mes įvertinome augalinio Dviskiaučio ginkmedžio (DG) ekstrakto adjuvantines savybes triušių bei vištų modeliuose. Abiejų klasių gyvūnai buvo imunizuojami per gleivines jaučio serumo albuminu. Adjuvantinis efektas buvo vertinamas pagal IgA titrus seilėse, IgG ir IgM titrus gyvūnų serume ir IgY titrus vištų kiaušinio trynyje. Gyvūnuose, imunizuotuose panaudojant DG kaip adjuvantą, pasireiškė stiprus sisteminis imuninis atsakas, ypač gleivinių (IgA pagrindu) ir humoralinis (IgG ir IgM pagrindu) palyginus su imunizacijomis be adjuvanto. Taip pat paaiškėjo, kad naudojant nepilną Freundo adjuvantą, humoralinis imuninis atsakas yra stipriausias. Įvertinus IgA titrus paaiškėjo, imuninio atsako indukcija vištų modelyje didesnė, negu triušių modelyje. IgG titrai vištų ir triušių serumuose buvo panašūs, ir jų produkcija išliko stabili 8 savaičių laikotarpyje. IgY vertė buvo nustatinėjama vištų kiaušinio trynyje; IgY lygis išliko stabilus ir panašus į IgG atsaką per visą periodą. Skirtingai nuo IgA ir IgY, IgM buvo nustatyti jau po antros... [toliau žr. visą tekstą] / Adjuvant effect of Ginkgo biloba Extract on Immune Response to Bovine Serum Albumin in Chickens and Rabbits Adjuvants are inorganic or organic compounds that stimulate the immune system and increase the response to a given antigen without having any specific antigenic effect in itself. They are often included in vaccines to enhance the recipient's immune response to a supplied antigen. In present study we evaluated the adjuvant capacity of a plant Ginkgo biloba (GB) extract upon the mucosal immunization of rabbits and hens with bovine serum albumin. Adjuvant efficacy was evaluated by measuring the titres of IgA in saliva, IgG and IgM immunoglobulins in serum of the animals and IgY in chicken egg yolk. Animals immunized using GB adjuvant showed strong cellular (IgA-based) and humoral (IgG and IgM) immune responses when compared to immunisations without adjuvant. It also became clear that the the immune response using Freund’s adjuvant was highest in humoral immune response. GB extract induced more important immune response in chickens when compared to rabbits as measured by IgA titres. The titres of IgG in hens and rabbits were found to be at similar levels and their production remained stable during 8 weeks. The levels of IgY were evaluated in chicken egg yolk and appeared stable over time thus resembling the IgG response. Different from IgA and IgY, the detectable levels of IgM in hens were observed after second GB extract-based immunisation, while IgA and IgY... [to full text]

Nesse trabalho foram estudadas 2 estratégias visando a purificação de IgM a partir de plasma humano. A primeira estratégia baseou-se em um processo desenhado para a fábrica de produção de hemoderivados do Instituto Butantan para a produção dos fatores de coagulação VIII e IX, albumina e IgG. Após 2 colunas cromatográficas, a IgM foi separada das 2 proteínas mais abundantes do plasma, a albumina e a IgG e o enriquecimento da IgM em relação a IgA e IgG foi bastante satisfatória. A segunda estratégia está inserida no processo de fracionamento de plasma desenvolvida em nosso laboratório. Através de um estudo sistemático em coluna de troca aniônica, obtivemos uma fração contendo IgG, uma contendo albumina, ambos praticamente puros e uma terceira contendo IgM e outras proteínas contaminantes. Os resultados obtidos indicam que a IgM pode ser purificada com sucesso empregando ambas as estratégias. Entretanto, para se obter um produto mais homogêneo, será necessário ainda adicionar uma ou mais etapas de purificação. / In this work we studied two strategies for the purification human plasma IgM. The first strategy was based on a process designed for the hemoderivatives production factory of the Butantan Institute for the production of coagulation factors VIII and IX, albumin and IgG. After 2 chromatographies, IgM was separated from the 2 most abundant plasma proteins, that is, albumin and IgG and the achieved enrichment of IgM in relation to IgG and IGA was very satisfactory. The second strategy is part of a plasma fractionation process under development in our laboratory. Through a systematic study using an anionic exchange column we separated a fraction containing IgG, a second containing albumin, being both nearly pure and a third fraction containing IgM and other contaminating proteins. The obtained results indicate that IgM can be purified successfully by both strategies. However, to obtain a more homogeneous product, additional purification steps are necessary.

Estudou-se quantitativamente e qualitativamente a citologia, os teores de imunoglobulinas, e a atividade bactericida dos fagócitos do colostro bovino contra a Escherichia coli enterotoxigênica (ECET), analisando-se a influência da opsonização prévia destas células. Para tal finalidade foram utilizadas 53 vacas da raça Holandesa, das quais realizou-se a colheita de um total 212 amostras de colostro obtidas antes da primeira e segunda ordenha. As amostras positivas (n=41) ao exame bacteriológico do leite foram excluídas desta pesquisa. Para a análise citológica quantitativa e qualitativa do colostro, foram utilizadas as técnicas de microscopia direta e citocentrifugação, respectivamente. As dosagens das imunoglobulinas (IgG, IgM e IgA) foram realizadas por meio da técnica de imunodifusão radial, utilizando-se Kits comerciais. Para a avaliação da atividade bactericida indireta dos fagócitos e verificação da influência da opsonização prévia da ECET, foram realizados os seguintes ensaios: utilizando somente suspensão de fagócitos mononucleares e polimorfonucleares em meio de cultura (Grupo Controle - C); suspensão de fagócitos mononucleares e polimorfonucleares adicionados a suspensão de ECET não opsonizada (Grupo NO); suspensão de fagócitos mononucleares e polimorfonucleares adicionados a suspensão de ECET previamente opsonizada com 10% de sobrenadante de colostro bovino delipidado (Grupo O). A atividade bactericida indireta dos fagócitos foi mensurada por meio da quantidade de nmoles de peróxido de hidrogênio liberado por estas células, nos ensaios C, NO e O. Após as avaliações dos resultados das determinações realizadas, conclui-se que: (1) o colostro bovino de segunda ordenha apresenta maior quantidade de células/mL, que aquele de primeira ordenha; (2) a predominância celular demonstrada com o uso das técnicas de microscopia direta e de citocentrifugação foi de células mononucleares; (3) colostro bovino de segunda ordenha possui maior quantidade de neutrófilos polimorfonucleares, quando comparada àquela da primeira ordenha, utilizando as técnicas de microscópica direta e de citocentrifugação, para a contagem dos tipos leucocitários; (4) os tipos celulares predominantes no colostro bovino de primeira e segunda ordenha foram macrófagos/células epiteliais, seguidos por linfócitos, neutrófilos e eosinófilos, respectivamente, utilizando a técnica de citocentrifugação para diferenciação celular; (5) o colostro bovino de primeira ordenha possui maiores teores de imunoglobulinas das classes G e M, que o da segunda ordenha, havendo predomínio da IgG, sobre a IgM e IgA independente da ordem de ordenha. (6) os fagócitos do colostro bovino de primeira ordenha apresentaram maior atividade celular avaliada pela liberação de peróxido de hidrogênio, que os da segunda ordenha; (7) a estimulação antigênica com ECET não foi suficiente para aumentar a atividade bactericida dos fagócitos do colostro bovino; (8) a opsonização da ECET com soro colostral não determinou diferenças significativas na atividade bactericida dos fagócitos do colostro bovino, mensurada pela quantidade de peróxido de hidrogênio liberado por estas células; (9) existe correlação positiva entre os teores de imunoglobulinas da classe M e a quantidade de peróxido de hidrogênio liberado pelos fagócitos do colostro bovino; (10) o comportamento quantitativo observado para as imunoglobulinas e células do colostro bovino, considerando a ordem das ordenhas, sugere que os anticorpos teriam função prioritária na imunidade do neonato, enquanto o aumento de neutrófilos estaria voltado aparentemente para a proteção da glândula mamária. / Bovine collostrum citology, immunoglobulin content and bactericidal activity of phagocytes against enterotoxigenic Escherichia coli were studied qualitatively and quantitatively, analyzing the influence of previous opsonization of the bacterium. In order to achieve this aim, 53 Holstein cows were used to obtain 212 collostrum samples before the first and second milkings. Samples positive (n=41) in the bacteriological examination of milk were excluded from the trial. Direct microscopy and cytocentrifugation were used in the quantitative and qualitative cytological analysis of collostrum, respectively. Immunoglobulin (IgG, IgM and IgA) contents were determined by means of radial immunodiffusion using commercial kits. Indirect bactericidal activity of phagocytes and assessment of the influence of ETEC previous opsonization were carried out as follows: using only a suspension of mononuclear and polymorphonuclear phagocytes in culture medium (Control group - C); suspension of mononuclear and polymorphonuclear phagocytes added to a suspension of non-opsonized ETEC (NO group); suspension of mononuclear and polymorphonuclear phagocytes added to an ETEC suspension previously opsonized with 10% of supernatant of delipidated bovine collostrum (O group). Indirect bactericidal activity of phagocytes was measured by means of the amount of hydrogen peroxide nmoles released by these cells in assays C, NO and O. After results were evaluated, it was concluded that: (1) bovine collostrum obtained in the second milking showed more cells/mL than first milking collostrum; (2) the predominance of mononuclear cells was determined by both direct microscopy and cytocentrifugation; (3) bovine collostrum obtained in the second milking showed greater quantity of polymorphonuclear neutrophils than that of the first milking, as determined in cell type counts by direct microscopy and cytocentrifugation; (4) cell types predominating in bovine collostrum of the first and second milking were macrophages / epithelial cells, followed by lymphocytes, neutrophils and eosinophils, respectively, using cytocentrifugation for cell differentiation; (5) first milking bovine collostrum showed greater levels of immunoglobulins G and M than that of the second milking, with a predominance of IgG compared with IgM and IgA, no matter the milking order; (6) phagocytes in first milking collostrum showed greater cell activity than those in the second milking collostrum, as evaluated by hydrogen peroxide release; (7) antigenic stimulation of ETEC was not enough to increase bactericidal activity of phagocytes in bovine collostrum; (8) ETEC opsonization with collostral serum did not lead to significant differences in bactericidal activity of bovine collostrum phagocytes, as measured by the amount of hydrogen peroxide released by these cells; (9) there was a positive correlation between the contents of immunoglobulin M and the amount of hydrogen peroxide released by phagocytes in bovine collostrum; (10) quantitative behavior observed for immunoglobulins and cells of bovine collostrum considering the milking order, suggest that antibodies would have a essential function in neonate immunity, whereas the increase in neutrophils would apparently be linked to mammary gland protection.

Orientador: Flávio Ruas de Moraes / Banca: João Batista Kochenborger Fernandes / Banca: Rogério Salvador / Banca: Sergio Henrique Canello Schalch / Banca: Marcello Pardi de Castro / Resumo: A infecção causada por Streptococcus agalactiae provoca grandes perdas em sistemas de criação intensiva de tilápias no Brasil e uma das soluções para minimizar estas perdas é a utilização de vacinas. Assim, este estudo avaliou a partir da marcação de células por meio da imunohistoquímica com anticorpo Ig M as respostas e participação do rim, baço e fígado na resposta imune humoral induzida pela vacina contra S. agalactiae. Para tanto foram utilizadas 166 tilápias-do-Nilo (Oreochromis niloticus) com peso médio de 200 ± 25 g. Foi determinada a concentração bacteriana letal para 50,0% dos peixes (DL50) forma utilizados 40 tilápias distribuídas em 4 caixas de fibra de vidro de 250 L, 10 animais/. Os animais foram inoculados com doses crescentes de S. agalactiae (1x102; 1x104; 1x106 e 1x108), obtendo a DL50 estimada em 1x107,71 e com o limite inferior e superior em 1x106,52 e 1x107,98, respectivamente. Posteriormente foi realizado o ensaio para coleta dos órgãos para posterior avaliação histológica e imunohistoquímica. Para tanto foram utilizados dois grupos (n= 63), sendo eles; grupo injetado com 200 μL salina 0,65% (controle) e grupo imunizado com a vacina contendo a porção insolúvel do produto da sonicação do S. agalactiae adicionado ao adjuvante incompleto de Freund (1:1), com volume final de 200 μL. A vacina e a salina foram aplicadas por via intracelomática (i.c) e em todos os grupos foram realizada a coleta dos órgãos pré imunização e coletas seriadas pós imunização nos tempos de 7, 14, 21, 28, 35, 42, 60 e 90 dias, para avaliação da dinâmica da resposta imune humoral por meio da imunohistoquímica com o anticorpo Ig M e avaliação histológica na coloração de hematoxilia e eosina. Os resultados foram comparados por meio de análise de variância (ANOVA) ao nível de 5% de probabilidade e a diferença entre as médias foi comparada pelo teste de Tukey. A imunização de tilápias-do-Nilo... / Abstract: The infection caused by Streptococcus agalactiae causes heavy losses in intensive farming of tilapia systems in Brazil and one of the solutions to minimize these losses is the use of vaccines. Thus, this study evaluated the tag from the cells by immunohistochemistry Ig M antibody responses and participate in the kidney, spleen and liver in the humoral immune response induced by the vaccine against S. agalactiae. Therefore, we analyzed 166 of the tilapia (Oreochromis niloticus) with an average weight of 200 ± 25 g. It determined the bacterial concentration lethal to 50.0% of the fish (LD50) 40 tilapias used medium 4 distributed in 250 L glass fiber boxes 10 animals. The animals were inoculated with increasing doses of S. agalactiae (1x102, 1x104, 1x106 and 1x108), getting the LD50 estimated at 1x107,71 and the lower and upper limit in 1x106,52 and 1x107,98 respectively. Later the test was carried out to collect the bodies for subsequent histological and immunohistochemical evaluation. Therefore, we used two groups (n = 63), namely; group injected with 200 uL saline 0.65% (control) and group immunized with the vaccine containing the insoluble portion of the product of sonication S. agalactiae added to Freund's incomplete adjuvant (1:1) with final volume of 200 uL. The vaccine and saline were applied via intracelomic (i.c) and in all the groups were made to collect the pre immunization organs and graded post immunization collected on days 7, 14, 21, 28, 35, 42, 60 and 90 days to evaluate the dynamics of humoral immune response by immunohistochemistry with the Ig M antibody and histological evaluation in the coloring hematoxilia and eosin. The results were compared using analysis of variance (ANOVA) at 5% probability and the difference between the means were compared by Tukey test. Immunization of the Nile tilapia with S. agalactiae insoluble antigen-induced proliferation of splenic lymphocytes, leading to significant increases in ... / Doutor

A doença periodontal é o problema de saúde oral mais comum nos gatos adultos, cuja prevalência está estimada em até 70% dos animais. Dentre as principais etiologias, destaca-se a Porphyromonas gingivalis, importante patógeno frequentemente detectado em lesões ativas de periodontite. Nesse contexto, a imunoterapia associada ao emprego de imunoglobulinas anti-Porphyromonas gingivalis (IgY-PG) surge como alternativa promissora frente aos convencionais métodos preventivos e terapêuticos. O presente estudo objetivou avaliar a eficácia da adição de IgY - PG em dietas extrusadas sobre diferentes parâmetros relacionados a saúde oral de gatos. Foram empregados 20 gatos adultos, sem raça definida, idade média de 7,92±1,98 anos e peso corporal médio de 4,55±1,11kg. Os animais foram divididos em dois grupos experimentais de 10 gatos cada. O estudo seguiu delineamento crossover, com a duração de 40 dias em cada período experimental. Todos os animais foram previamente avaliados, para a confirmação da presença da PG na microbiota bucal pelo emprego de técnicas moleculares. Os parâmetros avaliados foram índice de placa, índice de cálculo, índice de gengivite e contagem bacteriana bucal nos momentos T0 e T40 dias após o início do estudo. Os animais alimentados com a dieta adicionada de IgY-PG apresentaram redução significativa dos índices de placa (P=0,05) e cálculo dentário (P= 0,06), achados que demonstram melhora da saúde oral dos gatos estudados. / Periodontal disease is the most common problem of oral health in adult cats, whose prevalence is estimated at up to 70% of the animals. Among the main causes, there is the Porphyromonas gingivalis, an important pathogen frequently detected in active lesions of periodontitis. In this context, immunotherapy associated with the use of IgY against - Porphyromonas gingivalis (IgY - PG) has emerged as a promising alternative to conventional preventive and therapeutic methods. The aim of this study was to evaluate the efficacy of adding IgY - PG in extruded diets on different parameters related to oral health in cats. Twenty adult cats, mixed breeds, with 7.92±1.98 years old and a mean body weight of 4.55±1.11 kg were used. The animals were divided into two groups of 10 cats each. The experiment followed crossover design, with each period lasting 40 days. All animals were previously evaluated to confirm the presence of PG in the oral microbiota by using molecular techniques. The parameters evaluated were plaque, calculus and gingivitis index, and oral bacterial count in times T0 and T40 days after the start of the study. Animals fed the diet added IgY - PG significant reduction of plaque index (P=0.05) and dental calculus (P=0.06), findings that demonstrate improved oral health of cats studied.