Made available in DSpace on 2014-12-05T18:41:19Z (GMT). No. of bitstreams: 2 license.txt: 1748 bytes, checksum: 8a4605be74aa9ea9d79846c1fba20a33 (MD5) monique_trugilho_ioc_dout_2009.pdf: 10986205 bytes, checksum: 7de098da6c6025322360c2bb8516382d (MD5) Previous issue date: 2014-11-18 / Fundação Oswaldo Cruz. Instituto Oswaldo Cruz. Rio de Janeiro, RJ, Brasil / A proteína antiofídica DM43 isolada do soro do gambá Didelphis aurita inibe o efeito hemorrágico e a atividade proteolítica de metaloproteases de venenos de serpentes (SVMPs). Ao se ligar às SVMPs, o homodímero de DM43 se dissocia e cada monômero se liga a uma molécula de metaloprotease. O monômero é composto de três domínios tipo-imunoglobulina, dois dos quais são glicosilados. Para investigar a relação estrutura-função de DM43, os genes codificantes para esta proteína e para seus domínios foram clonados nos vetores pET101D/TOPO ou pET102D/TOPO; neste último, a proteína recombinante foi expressa em fusão com a tiorredoxina. Expressamos as construções obtidas em bactérias competentes da linhagem BL21 Star (DE3) de E. coli, na forma de corpúsculos de inclusão. Após purificação e reenovelamento por diálise, os espectros de dicroísmo circular (CD) na região do ultravioleta distante indicaram uma mistura de \03B1-hélices e folhas \03B2 pregueadas para os domínios recombinantes expressos em fusão com a tiorredoxina. A identidade das proteínas recombinantes foi confirmada, tanto por immunoblotting com anticorpo policlonal contra DM43, quanto por espectrometria de massas (MS/MS). Entretanto, nenhum dos domínios recombinantes, isolados ou combinados, foi capaz de inibir a atividade proteolítica da jararagina, uma metaloprotease de Bothrops jararaca. Ao contrário, os domínios fusionados com a tiorredoxina foram degradados quando incubados com esta SVMP. Estes resultados podem indicar que a glicosilação é funcionalmente importante e/ou que a conformação nativa multidomínio é necessária para a atividade biológica deste inibidor. Para melhor entender seus requisitos estruturais, estudamos a DM43 nativa após degradação proteolítica. Sob condições nativas, a digestão limitada de DM43 com tripsina ou quimotripsina gerou vários fragmentos, mas nenhum peptídeo ativo contra a SVMP foi obtido. Sob condições desnaturantes, a digestão extensiva de DM43 pela endoproteinase Lys-C produziu peptídeos menores. Mesmo sem atividade biológica contra a jararagina, três destes peptídeos foram capazes de interagir com esta SVMP. Após sequenciamento por MS/MS, cada peptídeo foi localizado em um domínio diferente de DM43. Estes resultados parecem sugerir a participação conjunta dos três domínios na interação com as SVMPs / The antiophidic protein DM43 isolated from Didelphis aurita serum inhibits the hemorrhagic effect and the proteolytic activity of snake venom metalloproteinases (SVMPs). Upon SVMP addition, DM43 homodimer dissociates and one subunit binds to one SVMP. The 43 kDa monomer is composed of three immunoglobulin-like domains, two of which are glycosylated. To investigate the structure-function relationship in this protein, the genes encoding DM43 and its domains were separately cloned into pET101D/TOPO or pET102D/TOPO vector, this last with the fusion partner thioredoxin. The obtained constructions were expressed in BL21 Star (DE3) competent E. coli cells as inclusion bodies. After purification and dialysis refolding, circular dichroism (CD) spectra in the far UV region of the recombinants domains with fusion partner indicated the presence of folded proteins with both alpha-helix and beta-sheet. The identities of the recombinant proteins were confirmed by immunoblotting with polyclonal antibodies against serum DM43 and by mass spectrometry (MS/MS). However, none of the domains either isolated or in combination, were able to inhibit the proteolytic activity of jararhagin. In contrast, thioredoxin-fused domains were readily digested by this SVMP. These results may indicate that glycosylation is functionally important for DM43 and/or that a multidomain native conformation is necessary for the biological activity of the inhibitor. To better understand its structural requirements, serum DM43 was studied after proteolytic degradation. Under native conditions, limited digestion of DM43 by trypsin or chymotrypsin generated various fragments, but no active peptide against SVMP was obtained. Extensive digestion of denatured DM43 by Lys-C endopeptidase produced smaller peptides. Even though not able to neutralize the proteolytic activity of jararhagin, three DM43 Lys-C peptides were able to bind to SVMP. After sequencing by MS/MS, each peptide was localized to one DM43 domain. Taken together, these results seem to reinforce the participation of all three domains of DM43 in the interaction with SVMPs

Made available in DSpace on 2016-05-19T13:09:38Z (GMT). No. of bitstreams: 2 366.pdf: 2881883 bytes, checksum: 041f28bbe2387bf591f544758b2bca29 (MD5) license.txt: 1748 bytes, checksum: 8a4605be74aa9ea9d79846c1fba20a33 (MD5) Previous issue date: 2012 / Os métodos de diagnóstico sorológico são ainda as ferramentas mais realistas e aplicáveis para identificação de cães com leishmaniose visceral. A pesquisa por métodos sorológicos mais eficientes e de produção simplificada é importante para a identificação do reservatório canino, ação primordial para o controle da doença. Este estudo teve por objetivo o desenvolvimento e a avaliação do desempenho de um ELISA para leishmaniose visceral canina, utilizando como conjugado enzimático uma IgY anti-IgG canina. Para isto, galinhas poedeiras foram imunizadas com IgG canina purificada e a IgY anti-IgG foi isolada das gemas dos ovos por precipitação com polietilenoglicol e purificada por meio de adsorção tiofílica. A especificidade frente ao antígeno imunizante foi verificada por imunodifusão radial dupla, ELISA e western-blot. O ELISA foi desenvolvido utilizando IgY conjugada a enzima peroxidase, tendo seus parâmetros de acurácia avaliados e comparados com o ELISA utilizando IgG de mamíferos conjugada a peroxidase. A concentração total de IgY isolada nas gemas foi constante, sem diferença significativa nos meses analisados (...), com média de 97,55 mg de IgY/ gema. A IgY produzida reconheceu a IgG canina, demonstrando uma forte sensibilidade e especificidade no ELISA, porém na imunodifusão não foi detectada ligação da IgY produzida a IgG canina. Após a imunização, houve um aumento significante da produção de IgY específica do primeiro para o segundo mês (...) onde ocorreu um pico estável sem queda de produção até o final do período analisado (...). A IgY demonstrou ainda, forte reatividade no western-Blot frente a IgG canina purificada e a presente no soro de cão clinicamente saudável, não sendo capaz de reconhecer IgG de outras espécies animais. / A conjugação da IgY a enzima peroxidase ocorreu sem danos à sua estrutura, com discriminação entre as amostras positivas e negativas em todas as diluições do conjugado e concentrações do antígeno testadas. O ELISA utilizando IgY conjugada a peroxidase apresentou 100 por cento de sensibilidade e 100 por cento de especificidade. A comparação dos parâmetros de acurácia do ELISA utilizando IgY com o ELISA utilizando IgG de mamíferos demonstraram valores idênticos. A repetibilidade do ensaio de ELISA IgY foi superior a encontrada com o ELISA IgG, com coeficiente de correlação intraclasse (ICC) estatisticamente significante (...). Um maior agrupamento das amostras negativas e positivas, também verificada quando a correlação das duplicatas nas duas observações foram analisadas (...). Diante de todos esses resultados a IgY ligada à peroxidase demonstrou ser um conjugado enzimático de excelente qualidade, revelando um melhor desempenho quando comparado ao conjugado produzido por mamíferos.

Made available in DSpace on 2016-04-01T17:54:57Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2015-10-26. Added 1 bitstream(s) on 2016-04-01T18:00:42Z : No. of bitstreams: 1 000860495.pdf: 1265496 bytes, checksum: 993272b8a5294e7b48b0b2fbf0766ae8 (MD5) / A infecção causada por Streptococcus agalactiae provoca grandes perdas em sistemas de criação intensiva de tilápias no Brasil e uma das soluções para minimizar estas perdas é a utilização de vacinas. Assim, este estudo avaliou a partir da marcação de células por meio da imunohistoquímica com anticorpo Ig M as respostas e participação do rim, baço e fígado na resposta imune humoral induzida pela vacina contra S. agalactiae. Para tanto foram utilizadas 166 tilápias-do-Nilo (Oreochromis niloticus) com peso médio de 200 ± 25 g. Foi determinada a concentração bacteriana letal para 50,0% dos peixes (DL50) forma utilizados 40 tilápias distribuídas em 4 caixas de fibra de vidro de 250 L, 10 animais/. Os animais foram inoculados com doses crescentes de S. agalactiae (1x102; 1x104; 1x106 e 1x108), obtendo a DL50 estimada em 1x107,71 e com o limite inferior e superior em 1x106,52 e 1x107,98, respectivamente. Posteriormente foi realizado o ensaio para coleta dos órgãos para posterior avaliação histológica e imunohistoquímica. Para tanto foram utilizados dois grupos (n= 63), sendo eles; grupo injetado com 200 μL salina 0,65% (controle) e grupo imunizado com a vacina contendo a porção insolúvel do produto da sonicação do S. agalactiae adicionado ao adjuvante incompleto de Freund (1:1), com volume final de 200 μL. A vacina e a salina foram aplicadas por via intracelomática (i.c) e em todos os grupos foram realizada a coleta dos órgãos pré imunização e coletas seriadas pós imunização nos tempos de 7, 14, 21, 28, 35, 42, 60 e 90 dias, para avaliação da dinâmica da resposta imune humoral por meio da imunohistoquímica com o anticorpo Ig M e avaliação histológica na coloração de hematoxilia e eosina. Os resultados foram comparados por meio de análise de variância (ANOVA) ao nível de 5% de probabilidade e a diferença entre as médias foi comparada pelo teste de Tukey. A imunização de tilápias-do-Nilo... / The infection caused by Streptococcus agalactiae causes heavy losses in intensive farming of tilapia systems in Brazil and one of the solutions to minimize these losses is the use of vaccines. Thus, this study evaluated the tag from the cells by immunohistochemistry Ig M antibody responses and participate in the kidney, spleen and liver in the humoral immune response induced by the vaccine against S. agalactiae. Therefore, we analyzed 166 of the tilapia (Oreochromis niloticus) with an average weight of 200 ± 25 g. It determined the bacterial concentration lethal to 50.0% of the fish (LD50) 40 tilapias used medium 4 distributed in 250 L glass fiber boxes 10 animals. The animals were inoculated with increasing doses of S. agalactiae (1x102, 1x104, 1x106 and 1x108), getting the LD50 estimated at 1x107,71 and the lower and upper limit in 1x106,52 and 1x107,98 respectively. Later the test was carried out to collect the bodies for subsequent histological and immunohistochemical evaluation. Therefore, we used two groups (n = 63), namely; group injected with 200 uL saline 0.65% (control) and group immunized with the vaccine containing the insoluble portion of the product of sonication S. agalactiae added to Freund's incomplete adjuvant (1:1) with final volume of 200 uL. The vaccine and saline were applied via intracelomic (i.c) and in all the groups were made to collect the pre immunization organs and graded post immunization collected on days 7, 14, 21, 28, 35, 42, 60 and 90 days to evaluate the dynamics of humoral immune response by immunohistochemistry with the Ig M antibody and histological evaluation in the coloring hematoxilia and eosin. The results were compared using analysis of variance (ANOVA) at 5% probability and the difference between the means were compared by Tukey test. Immunization of the Nile tilapia with S. agalactiae insoluble antigen-induced proliferation of splenic lymphocytes, leading to significant increases in ...

Orientador: Euripedes Ferreira / Dissertação (mestrado) - Universidade Federal do Parana, Setor de Ciencias Agrarias / Resumo: Para um estudo dos parâmetros normais das condições imunológicas de potros PSI recém-nascidos até um seguimento de 120 dias, realizou-se a colheita e processamento de sangue periférico, para posterior obtenção de soro e linfócitos do mesmo. Para estabelecer níveis de imunoglobulinas da amostragem do soro obtido dos animais hígidos ( 10), realizou-se a determinação da proteína total, eletroforese de proteínas, e imunodifusão&o radial simples, verificando-se que os potros recém-nascidos são agamaglobulinêmicos ao nascer, apresentando apenas uma pequena quantidade de IgM. Já às 24 horas, as IgG, M e A dos potros apresentam níveis semelhantes aos do soro da égua, sendo que em todo o período de observação ( 120 dias) cada uma das imunoglobulinas tem um comportamento diferente. Os níveis de IgG após 24 horas até ás 72 horas permanecem em torno de 3450,6mg/dl, caindo ao final do primeiro mês para 2017,5 mg/dl, enquanto que no segundo, no terceiro e no quarto mês ficam em torno de 1406 mg/dl. A IgM dos potros, ao nascer, está em torno de 19,60 mg/dl indo a 46,26 mg/dl nas primeiras 72 horas, sofrendo um pequeno decréscimo ao primeiro mês ( 40,52 mg/dl ), estabilizando-se ao término do período de observação em torno de 81,78 mg/dl. Já a IgA, inexistente ao nascer, apresenta-se em torno de 75 mg/dl nas primeiras 72 horas, revelando uma queda no primeiro mês (42,4 mg/dl), finalizando o período de observação com 77,07 mg/dl. Para estabelecer os parâmetros normais das subpopulações linfocitárias T e B, usou-se técnicas de marcadores de membranas. Quanto aos linfócitos T, com a formação de rosetas com eritrócitos heterógenos, determinou-se que os mesmos, apresentanse em torno de 3,4% a 10,8% em todo período de observação. Já os linfócitos B mostraram-se, através de técnicas de fluorescência, em porcentagens altas nos primeiros dias de vida (aproximadamente 37,95%) e após o 3Qq dia os valores estabilizaram-se entre 10,7% a 18,1%. / Abstract: The present study was undertaken in order to stablish the normal immunological parameters, under normal conditions, of foal as newborn until 120 days of life. The humoral immunity was assessed throug the assay of total protein in the serum, by electrophoresis and simple radial immunedifusion. It was found that newborn foal has agammaglobulinemia soon after birth, with a very low level of IgM. However, after 24 hours, the serum levels of IgG, IgA and IgM are similar as the serum levels of its mother. The behavior of different immunoglobulins in the subsequent 120 days is quite different for each immunoglobulin. The IgG level between 24 and 72 hours is around 3450.6mg/dl, in the first month, falling to 2017.5mg/dl and by the second and third months is maintained at 1406m/dl. The IgM level at birth is around 19.60mg/dl, raising to 46.26mg/dl in the first 24 hours, falling to 40.52mg/dl by the first month and, again, raising and stabilising at 81.78mg/dl at 120 days. The IgA, not present at birth, raises to 75mg/dl in the next 72 hours, falling to 42.4mg/dl in the first month and. stabilising at 77.07mg/dl by the 120 days. The T and B lymphocytes are determined by using specific surface marker of each sub-population. The T lymphocytes were identified through rosette formation, using guinea pig erythrocytes. The T lymphocytes ranged from 3.4% to 10.8% during the different periods of this study. The B lymphocytes were identified by detecting immunoglobulins on its surface. Antihorse immunoglobulin conjugated with fluorescein was employed. A very high percentage of B lymphocytes (37.95%) was detected in the first days of life and after one month the percentage ranged between 10.7 and 18,1%

Made available in DSpace on 2014-06-11T19:28:21Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2012-07-05Bitstream added on 2014-06-13T19:36:48Z : No. of bitstreams: 1 ferreira_msf_me_jabo.pdf: 289970 bytes, checksum: 690be387700029389cd1e264f81060e0 (MD5) / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior (CAPES) / O sistema imunológico de bezerros consolida-se com a ingestão do colostro, alimento rico em imunoglobulinas que são proteínas responsáveis por transferir imunidade aos bezerros. A eficiência dessa transferência é influenciada por uma série de fatores, dentre eles a integridade das imunoglobulinas a serem absorvidas. No colostro estão naturalmente presentes os inibidores de tripsina, capazes de preservar as imunoglobulinas da ação de enzimas proteolíticas. O objetivo deste trabalho foi avaliar a potencialidade dos inibidores de tripsina da soja na transmissão da imunidade passiva de bezerras da raça Holandesa, por meio da análise das concentrações de imunoglobulina G (IgG) e proteína total (PT) e atividade da gamaglutamiltransferase (GGT) sérica. Foram utilizadas 18 bezerras recém-nascidas alimentadas com colostro (T1), colostro adicionado de inibidor de tripsina purificado Sigma tipo I-S (50 mg) (T2) e provenientes da fração albumina da soja 1,08 g (T3). As amostras de sangue foram colhidas por venopunção da veia jugular com 1, 12, 24, 36 e 48 h após o nascimento, sendo a primeira colheita realizada antes do fornecimento do colostro. O colostro apresentou teor de gordura de 3,2 a 7,2 %, de proteína total de 14,10 a 19,52 %, representada por 7,84 a 9,44 % pelas proteínas do soro (PS). A atividade dos inibidores de tripsina variou de 0,766 a 0,945 mg de tripsina inibida.mL-1. Não houve influencia dos tratamentos (p>0,05%) para os parâmetros analisados, porém houve efeito (p<0,05%) do período de amostragem, com aumento nas concentrações de IgG, GGT e PT a partir da 0h com respectivos valores médios de 0,68 g.dL-1; 15,17U.L-1, 4,43 g.dL-1, com pico de absorção às 24 h: 3,06 g.dL-1, 2.779 U.L-1 e 7,54 g.dL-1, respectivamente, indicando transmissão adequada de imunidade passiva. A adição dos... / The calves’ immune system is consolidated by the ingestion of colostrum, which is rich in immunoglobulin, the proteins that are responsible for transfering the immunity to the calves. This transferring efficacy is influenced by a series of facts, among them the immunoglobulin’s integrity to be absorbed. Trypsin inhibitors are naturally present on the colostrum and they are able to preserve the immunoglobulin from the proteoclastic enzyme actions. The aim of this work was to evaluate the potentiality of soya Trypsin inhibitor on the passive immunity of the Holstein female calves, by evaluating the concentration of immunoglobulin G (IgG) and total protein (PT) as well as Gammaglutamil transferase (GGT) activity in serum. Eighteen newborn female calves were taken and they were fed with colostrums (T1), colostrums with purified trypsin inhibitor I-S Sigma (50mg), (T2) and colostrums with soya albumin fraction 1.08 g (T3). Blood samples were collected by jugular veined punch within 1, 12, 24, 36 and 48 hours after they were born, the first collection was done before the colostrums was given. Colostrums have presented 3.2% to 7.2 % of fat contents; 14, 10% to 19, 52 % of total protein represented by 7, 84% to 9, 44 % of serum protein (PS). Trypsin inhibitor activities have varied from 0,766 mg to 0,945 mg of inhibited trypsin mL-1. There was no influence of the treatments (p>0,05%) for the analyzed parameters, however, there was (p<0,05%) a significant effect for the period of collection, with an increase on IgG, GGT and, PT concentrations from 0h with the respective medium values of 0,68g.dL- 15,17U.L-1, 4,43 g.dL-1. The absorption pick was at 24 h: with 3,06 g.dL-1, 2.779 U.L-1 and 7,54 g.dL-1 means, respectively for IgG, GGT and PT, indicating an adequate transmission of passive immunity. The addition of soya Trypsin... (Complete abstract click electronic access below)

Made available in DSpace on 2014-06-11T19:23:47Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2010-04-27Bitstream added on 2014-06-13T19:48:05Z : No. of bitstreams: 1 braga_prc_me_botfmvz.pdf: 1253627 bytes, checksum: 841018a463fea183c2e1b5ae5a1e9c0a (MD5) / Universidade Estadual Paulista (UNESP) / O presente estudo investigou a ocorrência de anticorpos contra o vírus da arterite eqüina, utilizando a técnica de soroneutralização viral em 1.400 eqüinos criados nas Mesorregiões Macro Metropolitana Paulista e Campinas, pertencentes a 42 municípios do estado de São Paulo (SP), Brasil entre os meses de janeiro de 2007 a dezembro de 2008. Do total das amostras, 80 (5,71%) apresentaram anticorpos para o vírus (títulos entre 4 e 4096). Dentre os 42 municípios amostrados, 15 (35,7%) apresentaram pelo menos um animal sororeagente. Foram analisadas 238 propriedades das quais 41 apresentaram ao menos um animal sororeagente. A ocorrência de animais reagentes foi maior em cavalos destinados ao esporte, particularmente das raças de Salto e Quarto de Milha e foi semelhante entre machos e fêmeas. A ocorrência também foi maior em animais acima de 24 meses de idade. Os resultados obtidos sugerem a circulação do vírus nos criatórios amostrados e alertam para o impacto econômico- sanitário da doença para a eqüideocultura do estado de São Paulo / This study investigate the occurence of arteritis virus antibodies using virus neutralization teste in 1,400 equines from Campinas and Macro Metropolitan Paulista Mesoregions which belong to the 42 cities located on State of Sao Paulo, Brazil between january of 2007 until december of 2008. All the samples, 80 (5.71%) showed antibodies to equine arteritis virus (titers ranging from 4 to 4096). Among the 42 cities, 15 (35.7%) presented at least one positive animal to equine arteritis virus. Were studied 238 farms, and from these 41 showed at least one soropositive animal. The prevalence was higher in sport horses like Jumping Horses, Quarter Horses and was similar between females and males. The seropositive ocurrence was higher in animals above 24 months of age. These results suggest the circulation of virus among horse population in farms sampled and alert to sanitary and economical importance of this disease for the Sao Paulo State equine husbandry

Made available in DSpace on 2016-08-12T18:48:49Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2015-10-26. Added 1 bitstream(s) on 2016-08-12T18:51:02Z : No. of bitstreams: 1 000864605.pdf: 2445831 bytes, checksum: f8ee2a0f84a4919d291bdec3518b4187 (MD5) / Aeromonas hydrophila é patógeno oportunista com potencial de infecção para mamíferos, peixes e humanos, cosmopolita e emergente em infecções hospitalares de humanos. O complexo Aeromonas hydrophila formado por várias subespécies apresenta variedade antigênica que dificulta o diagnóstico da infecção pelo uso de anticorpos monoclonais. Pelo exposto, o objetivo deste trabalho foi o de produzir uma imunoglobulina Y policlonal purificada em gema de galinhas poedeiras, imunizadas com proteínas de membrana bacteriana e testar sua eficácia nos ensaios de imuno-histoquímica para identificação de bactérias no fígado e rim de Piaractus mesopotamicus infectados experimentalmente. Os resultados mostraram que a técnica foi eficaz uma vez que as aves produziram anticorpos específicos anti-A. hydrophila no soro e na gema, com aumento significativo (p<0,05) e progressivo dos títulos até 60 dias, que se mantiveram detectáveis no teste ELISA até 90 dias após a terceira imunização. As análises de imuno-histoquímica foram efetivas para detecção de colônias de A. hydrophila no coração, fígado, rim, encéfalo e baço de P. mesopotamicus com anticorpos IgY específico. Os resultados permitiram concluir que a imunoglobulina Y produzida em ovos de galinha foi eficaz no diagnóstico de aeromonose na espécie de peixe testada / Among the aeromonas complex, Aeromonas hydrophila has the potential to infect mammals, fish, and humans. It is a cosmopolitan, opportunistic and emerging pathogen in nosocomial infections in humans. This bacteria complex formed by several subspecies also presents antigenic variety, which makes diagnosis difficult to be done with the use of monoclonal antibodies. The aim of this work was to produce polyclonal immunoglobulin Y purified from yolk of laying hens, immunized with bacterial membrane proteins, and to test its effectiveness in immunohistochemistry of A. hydrophila cells in the liver and kidney of experimentally infected Piaractus mesopotamicus. The results showed that the laying hens produced specific anti-A. hydrophila antibodies in serum and yolk, with a significant (p<0,05) and progressive increase of titles at 60 days, which were maintained until 90 days after the third detectable immunization in the ELISA test. The immunohistochemistry was positive for detection of colonies of A. hydrophila in liver and P. mesopotamicus in heart, liver, kidney, brain and spleen with the use of specific IgY antibodies. Therefore, the immunoglobulin produced in chicken eggs was effective in diagnosing aeromonas in P. mesopotamicus

Made available in DSpace on 2016-08-12T18:48:52Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2015-12-03. Added 1 bitstream(s) on 2016-08-12T18:51:10Z : No. of bitstreams: 1 000864610.pdf: 3089089 bytes, checksum: e31156d3741c67e09c6b97faabdaf165 (MD5) / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior (CAPES) / Photobacterium damselae subsp. piscicida (Phdp) é importante agente causal de septicemia e pseudotuberculose, respectivamente nas fases aguda e crônica em peixes marinhos. O método de imunização e tratamento das infecções bacterianas em peixes é limitado à imunização ativa, com demanda bioenergética celular para gerar a resposta imune humoral. O uso de antibióticos na água, como forma terapêutica, resulta em resíduos na carne do peixe e no consumidor final humano, favorecendo o desenvolvimento da resistência microbiana. Este estudo teve como objetivos a produção e purificação de anticorpos IgY policlonais, extraídos da gema do ovo de galinha e específicos para as proteínas citoplasmáticas e de membrana bacteriana de Phdp e seus efeitos no controle da sepse aguda em Rachycentron canadum infectados experimentalmente. Os resultados demonstram redução do acúmulo de células na inflamação aguda induzida, pela inoculação da bactéria homóloga na cavidade celomática e na atividade respiratória de leucócitos sanguíneos nos grupos que receberam anticorpos IgY 48 horas e 15 dias antes do desafio. Verificou-se ainda redução da disseminação bacteriana em fígado, rim, baço e coração que foi correlacionada com a diminuição das lesões renais e hepáticas e demonstrada no perfil bioquímico e histopatológico. Os resultados são promissores no que tange ao uso da imunoglobulina Y como método profilático e na imunoterapia de infecções bacterianas em organismos aquáticos / The Photobacterium damselae ssp. piscicida is an important causative agent of septicemia and pseudotuberculosis in the acute and chronic phases in marine fish, respectively. The method for immunization and treatment of bacterial infections in fish is limited to the active immunization, which demands cellular bioenergy to generate humoral immune response. The use of antibiotics in the water as a form of therapy results in residues in the meat that will be consumed by humans, favoring the development of microbial resistance. Thus, the aim of the study was to produce and purify polyclonal IgY, specific for membrane proteins of P. damselae ssp. piscicida (PMBphdp), extracted from the yolk of laying hens, and to observe its effects on the control of acute sepsis in experimentally infected Rachycentron canadus. The results showed reduction of cell accumulation in acute inflammation induced by inoculation of the homologous bacteria in the coelomic cavity and decrease in the respiratory activity of blood leukocytes in groups receiving IgY antibodies at 48 hours and 15 days before the challenge. It was also observed the reduction of bacterial dissemination to the liver, kidney and heart which was correlated with the decrease in liver and kidney damage, which was demonstrated by the biochemical and histopathological profile. The results are promising regarding the use of immunoglobulin Y as prophylactic method and for immunotherapy of microbial infections in aquatic organisms

Orientador: Flávio Ruas de Moraes / Coorientador: Julieta Rodini Engrácia de Moraes / Coorientador: Hélio Jose Montassier / Coorientador: João Martins Pizauro Junior / Banca: Fernanda Nogueira Valentin / Banca: Tereza Cristina Ribeiro Dias Koberstein / Banca: Solange de Paula Ramos / Banca: Marcello Pardi de Castro / Resumo: Photobacterium damselae subsp. piscicida (Phdp) é importante agente causal de septicemia e pseudotuberculose, respectivamente nas fases aguda e crônica em peixes marinhos. O método de imunização e tratamento das infecções bacterianas em peixes é limitado à imunização ativa, com demanda bioenergética celular para gerar a resposta imune humoral. O uso de antibióticos na água, como forma terapêutica, resulta em resíduos na carne do peixe e no consumidor final humano, favorecendo o desenvolvimento da resistência microbiana. Este estudo teve como objetivos a produção e purificação de anticorpos IgY policlonais, extraídos da gema do ovo de galinha e específicos para as proteínas citoplasmáticas e de membrana bacteriana de Phdp e seus efeitos no controle da sepse aguda em Rachycentron canadum infectados experimentalmente. Os resultados demonstram redução do acúmulo de células na inflamação aguda induzida, pela inoculação da bactéria homóloga na cavidade celomática e na atividade respiratória de leucócitos sanguíneos nos grupos que receberam anticorpos IgY 48 horas e 15 dias antes do desafio. Verificou-se ainda redução da disseminação bacteriana em fígado, rim, baço e coração que foi correlacionada com a diminuição das lesões renais e hepáticas e demonstrada no perfil bioquímico e histopatológico. Os resultados são promissores no que tange ao uso da imunoglobulina Y como método profilático e na imunoterapia de infecções bacterianas em organismos aquáticos / Abstract: The Photobacterium damselae ssp. piscicida is an important causative agent of septicemia and pseudotuberculosis in the acute and chronic phases in marine fish, respectively. The method for immunization and treatment of bacterial infections in fish is limited to the active immunization, which demands cellular bioenergy to generate humoral immune response. The use of antibiotics in the water as a form of therapy results in residues in the meat that will be consumed by humans, favoring the development of microbial resistance. Thus, the aim of the study was to produce and purify polyclonal IgY, specific for membrane proteins of P. damselae ssp. piscicida (PMBphdp), extracted from the yolk of laying hens, and to observe its effects on the control of acute sepsis in experimentally infected Rachycentron canadus. The results showed reduction of cell accumulation in acute inflammation induced by inoculation of the homologous bacteria in the coelomic cavity and decrease in the respiratory activity of blood leukocytes in groups receiving IgY antibodies at 48 hours and 15 days before the challenge. It was also observed the reduction of bacterial dissemination to the liver, kidney and heart which was correlated with the decrease in liver and kidney damage, which was demonstrated by the biochemical and histopathological profile. The results are promising regarding the use of immunoglobulin Y as prophylactic method and for immunotherapy of microbial infections in aquatic organisms / Doutor

Introdução: O aumento no consumo mundial de imunoglobulina humana tem desafiado os sistemas de saúde no estabelecimento de padrões de utilização adequados a esta terapia. O conhecimento das políticas públicas pelos profissionais de saúde, aderidos a uma conscientização ao uso racional e estudos baseados em evidências científicas é fundamental para assegurar o acesso adequado e uma maior segurança e efetividade de tratamento. Objetivo: Avaliar a utilização de imunoglobulina humana em hospital universitário de alta complexidade do sul do país e suas indicações relacionando as mesmas aos protocolos clínicos estabelecidos. Métodos: Trata-se de um estudo transversal, retrospectivo, baseado na busca de informações através do prontuário eletrônico dos pacientes do Hospital de Clínicas de Porto Alegre no período de janeiro à dezembro de 2015 Resultados: Foram identificadas 191 prescrições de imunoglobulina humana endovenosa, totalizando 116 pacientes. Desses pacientes, 23% apresentaram síndrome de Guillain Barré, púrpura trombocitopênica idiopática, miastenia gravis, transplante renal, imunodeficiência com aumento de IgM e outras anemias hemolíticas autoimunes. Todas essas situações clínicas tem indicação de uso de acordo com os protocolos estabelecidos pelo Ministério da Saúde. Os demais casos identificados (77%) não constam nas indicações previstas nos protocolos do Ministério da Saúde. Conclusão: Foi possível identificar a utilização de imunoglobulina humana endovenosa em hospital de alta complexidade e quantificar os casos clínicos que fazem uso desse medicamento e que apresentam protocolos nacionais orientando os profissionais de saúde quanto a correta administração desse medicamento. Observou-se que a maioria dos casos identificados no estudo não apresentam regulamentos oficiais que autorizem a sua administração. / Introduction: The increase in the world consumption of human immunoglobulin has challenged the health systems in establishing appropriate standards of use for this therapy. Knowledge of public policies by health professionals adhering to rational use awareness and evidence-based studies is critical to ensure adequate access and greater safety and effectiveness of treatment. Objective: To evaluate the use of human immunoglobulin in a university hospital of high complexity in the South of the country and its indications relating them to the established clinical protocols. Methods: This is a cross-sectional, retrospective study based on the search of information through the electronic medical records of patients from the Hospital de Clínicas of Porto Alegre from January to December 2015 Results: 191 prescriptions of intravenous human immunoglobulin were identified, totaling 116 patients. Of these patients, 23% had Guillain Barré syndrome, idiopathic thrombocytopenic purpura, myasthenia gravis, renal transplantation, immunodeficiency with increased IgM and other autoimmune hemolytic anemias. All of these clinical situations are indicated for use according to protocols established by the Ministry of Health. The other cases identified (77%) are not included in the indications provided for in the protocols of the Ministry of Health. Conclusion: It was possible to identify the use of intravenous human immunoglobulin in hospital of high complexity and to quantify the clinical cases that use this medicine and that present national protocols guiding healthcare professionals about the correct administration of this medicine. It was observed that the majority of the cases identified in the study do not present official regulations that authorize its administration.