O pênfigo foliáceo (PF) é a mais comum variante do Complexo Pênfigo na espécie canina. A enfermidade se caracteriza clinicamente pela presença de pústulas, histopatologicamente pela acantólise e imunologicamente pela presença de autoanticorpos (IgG) tanto na pele, quanto no soro sanguíneo dos doentes. Acredita-se que estes autoanticorpos estejam relacionados com a atividade do PF. O presente estudo visa avaliar a exeqüibilidade da reação de imunofluorescência indireta (IFI), método de determinação destes anticorpos séricos, para fins diagnósticos, além de verificar a eventual queda na titulação destes anticorpos séricos face à melhora clínica devido à terapia instituída. Para a IFI utilizou-se de fragmentos de coxim canino como substrato. Considerou-se positivo o padrão de fluorescência intercelular. Utilizou-se soros de 7 cães com diagnóstico histopatológico de PF, material este armazenado à uma temperatura de 70 oC. A IFI foi realizada, inicialmente, no momento de diagnóstico ou, no caso de um animal, de grave recidiva do quadro lesional. Quando de resultado positivo fez-se também a reação nos retornos subseqüentes. O grau de acometimento dos pacientes foi avaliado pelo PEFESI, em todas as ocasiões em que se realizou a IFI. Acompanhou-se estes animais por um período de 101 a 341 dias. Obteve-se positividade em 5 destes animais (71,4%). Dos animais positivos, àqueles com maior escore lesional ao PEFESI apresentaram títulos de maior magnitude. Houve queda nos títulos e gG em todos os animais paralelamente à diminuição do PEFESI, sendo que, em alguns casos, os títulos de IgG permaneceram detectáveis, em menor magnitude, mesmo quando do pleno controle da enfermidade. A IFI, portanto, é um método exeqüível tratando-se de PF canino, com 71% de positividade em relação ao exame histopatológico. O coxim canino se mostrou um substrato eficaz e a queda nos títulos de IgG paralelamente à atividade da doença útil para o monitoramento da atividade do PF. / Pemphigus foliaceus (PF) is the most common variant of Pemphigus Complex in dogs. The disease is characterized clinically by the presence of pustules, histopathologically by the acantholysis and immunologically by the presence of autoantibodies (IgG) in patients skin and blood serum. It is believed that these autoantibodies are related to the PF activity. The aim of this study is to evaluate the feasibility of indirect immunofluorescence (IIF), a determination method of these antibodies for diagnostic purposes, besides to identify a possible titration fall of serum antibodies with the clinical improvement due to therapy. For the IIFs, we used canine pawpads fragments as substrate. It was considered positive an intercellular fluorescence pattern. It was used sera from seven dogs with a histopathologic diagnosis of PF, this material was stored at 70 oC. The IIF was first performed at the time of diagnosis or, in the case of one animal, at a severe lesions relapse. When the IIF was positive it was also made at the subsequent animals evaluations. The clinical score was determined by PEFESI, all the times that the IFI was made. These animals were followed up by a 101-341 days period. Positivity was obtained in 5 of these animals (71.4%). Of the positive animals, those with the highest lesional score PEFESI showed greater titres. There was a decrease at the IgG titles in all animals in parallel with the PEFESI decrease, and in some cases, IgG titles remained detectable at a lesser magnitude, even with the full control of the disease. The IFI is, therefore, a feasible method in the case of canine PF, with 71% positivity in relation to histopathology. The canine pawpad proved to be an effective substrate and the IgG titers fall, in parallel with disease activity, useful for monitoring the Pf activity

A paracoccidioidomicose é uma micose sistêmica caracterizada por ser uma doença granulomatosa. As formas benignas da doença são caracterizadas por uma infecção localizada, contendo granulomas compactos com poucos fungos; já nas formas mais graves, ocorre um processo granulomatoso frouxo com focos de necrose e intensa disseminação fúngica. Objetivou-se avaliar o desenvolvimento de lesões granulomatosas em baço, fígado, pulmão e epiplon de camundongos, após infecção pela via intraperitoneal com o isolado de alta virulência, Pb18, em diferentes períodos de infecção após tratamento com fármacos, os quais possuem mecanismo de ação relacionado com a alteração no balanço entre a síntese e degradação dos produtos do colágeno, interferindo diretamente na formação do granuloma A citocina IFN-<font face=\"Symbol\">g, o antibiótico Tetraciclina e as drogas antiinflamatórias Lumiracoxib e Celecoxib. Avaliamos a presença de alguns componentes do granuloma (colágeno, células do infiltrado inflamatório, de citocinas primordiais para sintese/degradação da MEC do granuloma, presença de P. brasiliensis). / Paracoccidioidomycosis (PCM) is a systemic mycosis that is endemic in Latin America, whose causative agent is the thermal dimorphic fungus Paracoccidioides brasiliensis (Pb). PCM is a granulomatous disease, and the formation of granulomas can be understood as a mechanism of the body to block and limit the invasiveness of the fungus or its antigenic components, once unable to lyse them. Bening forms of the disease are characterized by a localized infection, where granulomasa are compact and contain few fungi. More severe forms present loose granulomatous processes with foci of necrosis and severe fungal. Studies in which granulomatous response was developed in resistant (A/J) and susceptible (B10.A) mice to the high virulence isolate Pb18 showed the presence of different patterns of injuries related to the type of extracellular matrix (ECM) components and the different cells types in the area, suggesting a important role of these elements in the formation and constitution of the granuloma and thus the outcome of infection. In our project, we aimed to evaluate the development of granulomatous lesions in the spleen, liver, lung and omentum of mice susceptible to PCM after intraperitoneal infection with Pb18, at different periods of infection (acute and chronic) with or without treatment with drugs. These drugs have mechanisms of action closely related to the change in the balance between synthesis and degradation of collagen Thus, they interfere directly in the granuloma formation and in maintaining the viability of fungi and also with the development of fibrosis. Which is a common and devastating sequelae of numerous infections including the PCM, with the characteristic proliferation of fibroblasts and deposition of ECM. The treatments were chosen based on prior knowledge on their effects on the course of experimental murine PCM. IFN-<font face=\"Symbol\">g was chosen due to its antifibrotic effect, being an activator of macrophages in infection by P. brasiliensis and increasing the fungicidal effect of neutrophils. The antibiotic tetracycline was used because of its inhibitory effect on the synthesis of extracellular matrix, limiting antimicrobial activity and the ability of collagenase to degrade ECM. Finally, the antiinflammatory drugs Celecoxib and Lumiracoxib (inhibitors of the COX-2 enzyme) 11 were used because they cause an increase in the expression of collagen type III and type IV. We analyzed the components of the granuloma (collagen, inflammatory cells, cytokines essential for synthesis / degradation of the ECM of the granuloma, the presence of P. brasiliensis). Among the cytokines analyzed, we studied the importance of TNF-<font face=\"Symbol\">&#945 in the formation of granulomas and regulation of matrix metalloproteinases (MMP) synthesis and function. We analyzed TGF-<font face=\"Symbol\">b because it negatively modulate the secretion of nitric oxide by macrophages and promote the accumulation of ECM and is believed to be the central mediator of the process of fibrosis in several pathologies. IFN-<font face=\"Symbol\">g was studied because of its correlation to the preferential Th1 immune response in diseases and infectious processes of fungal and bacterial infections, and also because it modulates fibroblast function.

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Made available in DSpace on 2016-12-23T13:56:01Z (GMT). No. of bitstreams: 1 TESE FINAL PDF VERSAO DOIS.pdf: 1354947 bytes, checksum: 1bc7e4f84a54161e556e8a34e37633c9 (MD5) Previous issue date: 2007-06-14 / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior / O objetivo deste trabalho foi avaliar aspectos da resposta imune celular em pacientes portadores de FD em diferentes estágios da doença. Amostras de sangue periférico de 22 pacientes, portadores de FD, foram coletadas em três fases da doença: fase aguda, Dia 0 (até 48 horas após o início dos sintomas), fase de convalescença, Dia 7 (uma semana após a primeira coleta) e fase pós-cura, Dia 60 (60 dias após a primeira coleta). As células mononucleares do sangue periférico foram marcadas com anticorpos específicos para diferentes populações e subpopulações celulares, e marcadores de ativação, CD25, CD69 e HLA-DR. Os resultados revelaram que os pacientes portadores de FD em todas as fases da doença, mas principalmente na fase aguda, apresentaram menor número de plaquetas. Foi também observado, na fase aguda da doença, um menor número de leucócitos circulantes, com diminuição do número de neutrófilos, monócitos e linfócitos. A análise de subpopulações de linfócitos revelou que a diminuição do número dessas células era devido ao menor número de linfócitos B, T CD4+ e T CD8+. A análise de células NK mostrou que pacientes, na fase aguda da doença, apresentaram um menor número destas células mas, com uma maior porcentagem de células NK na população de linfócitos totais. Com relação ao estado de ativação das células os dados revelaram que, na fase aguda da doença, os pacientes apresentaram maior porcentagem de T CD4+ e T CD8+ expressando CD69, com aumento mais pronunciado em linfócitos T CD8+. Além disso, foi demonstrada uma maior porcentagem de linfócitos T CD4+HLA-DR+ e TCD4+CD25+, na fase aguda da doença e uma maior porcentagem de linfócitos T CD8+HLA-DR+ na fase de convalescença. A análise de associação, entre parâmetros hematológicos e o fenótipo das células mononucleares do sangue periférico com a presença de sinais e sintomas, da doença revelou que pacientes com doença mais grave apresentaram um menor percentual de linfócitos CD8+HLA-DR+ em relação aos pacientes com doença branda. Em relação aos demais parâmetros avaliados, não encontrou-se nenhuma diferença entre os dois grupos avaliados. Em suma, os dados sugerem que a resposta imune do hospedeiro é importante para a eliminação do vírus. Entretanto, estudos adicionais ainda são necessários para avaliar a influência da resposta imune na patogênese da infecção pelo vírus Dengue. / The objective of the present study was to examine the PBMC immunological status of patients with Dengue Fever during different stages of disease. Blood samples from 22 patients with Dengue Fever, were collected at three different stages of the disease: at acute phase, Day 0 (1-2 days after disease onset), convalescent phase, Day 7 (7 days after the first sample) and post-cure phase, Day 60 (60 days after the first sample). Peripheral blood mononuclear cells were stained using fluoresceinlabeled monoclonal antibodies to both PBMC subset markers and the activation markers, such as CD69, CD25 and HLA-DR, and analyzed using flow cytometry. The results have showed lower platelets count compared to control group, on the different stages of Dengue Fever. In acute phase, the white blood cells counts in patients with Dengue Fever were lower, with decreased numbers of monocytes, neutrophils and lymphocytes. The same was observed for absolute numbers of B cells, CD4+ and CD8+ T cells. The results show a lower number of NK cells on acute phase of Dengue Fever, but an increase was observed on percentage of NK cells in total lymphocytes. Concerning the activation status of the peripheral blood cells, our results have demonstrated that the percentage of CD8+ T and CD4+T cells expressing CD69 was significantly higher, and this increased was more evidenced on CD8+ T cells. Moreover was demonstrated a higher percentage of T CD4+HLA-DR+ and CD4+CD25+, on acute phase of the disease and a higher percentage of T CD8+HLA-DR+ on convalescent phase. The association analysis between the hematological parameters and the immunological status of the peripheral blood mononuclear cells with the presence of clinical manifestations of the disease has revealed that severe Dengue Fever patients presented a lower percentage of CD8+HLA-DR+ T lymphocytes, compared with the mild Dengue Fever patients. Therefore, data presented here suggest that host immune response is important to clearance viral. However, additional studies were needed to evaluate the role of immune response in the immunopathological mechanism during Dengue virus infection.

Leprosy is a chronic infection caused by Mycobacterium leprae which affects skin and peripheral nerves. Various aspects related to genetic and phenotypic variability of the pathogenesis of immune response need to be further studied. In leprosy several polymorphisms of genes involved in the immune response of the host to pathogen were associated with leprosy per se and its clinical course. This present case-control study aimed to examine the possible association between polymorphisms rs2275913 of IL-17 and rs1024611 of MCP-1 with leprosy. The sample was composed of 199 patients and 85 healthy individuals unrelated households of the cases. The polymorphisms were analyzed using the PCR technique Taqman. For statistical analysis we used the software SPSS version 22.0 with employment of the Student T test for independent samples, Chi-square and Fisher's exact test where appropriate and analysis thereof. There were differences in the distribution of genotypes of MCP-1 and IL-17 between leprosy and contactant controls (p = 0.015 and p = 0.031 respectively) with greater frequency of genotype GG in the leprosy patients. The comparison of the distribution of genotypes between the groups stratified by multibacillary and paucibacillary clinical forms, did not show any difference in the distribution of genotypes of either MCP-1 or IL-17 in the patients with the operacional forms (p = 0.46 and p=0.14 respectively). The analysis of sick and healthy individuals according to the variables age, sex and genotypes of MCP-1 and IL-17 allowed to discriminate five groups. Groups 1 and 5 were composed of patients who had only the GG genotype of IL-17 while the GG genotype of MCP-1 was more frequent in Group 1 which was composed of mostly patients (p = 0.0001). Possibly the presence of genotype GG of MCP-1 and IL-17 GG genotype contributed to the outcome of the disease in the studied subjects. / A hanseníase é uma infecção crônica causada pelo Mycobacterium leprae o qual afeta pele e nervos periféricos. Vários aspectos genéticos relacionados à patogênese e à variabilidade fenotípica da resposta imune do hospedeiro precisam ser mais estudados em hanseníase uma vez que polimorfismos de genes envolvidos na resposta imune ao patógeno podem estar associados à manifestação ou não da doença e sua evolução clínica. Trata-se de um estudo de caso-controle que teve como objetivo analisar a possível associação entre os polimorfismos rs2275913 de IL-17 e rs1024611 de MCP-1 com a hanseníase. A amostra foi composta de 199 pacientes e 85 contactantes saudáveis não consanguíneos coabitantes dos casos. Os polimorfismos foram analisados utilizando a técnica de reação em cadeia de polimerase em tempo real Taqman. Para análise estatística foi utilizado o software SPSS versão 22.0 com emprego do teste T de Student para amostras independentes, teste do qui-quadrado e teste exato de Fisher quando apropriado e análise de agrupamentos. Houve diferença na distribuição de genótipos GG de MCP-1 (p=0,015) e GG de IL-17 (p=0,031) entre doentes e contactantes. Não houve diferença quando da comparação da distribuição dos genótipos de MCP-1 e IL-17 entre os doentes estratificados pelas formas clínicas paucibacilar e multibacilar (p=0,46 3 p=0,14 respectivamente). A análise dos indivíduos doentes e contactantes segundo as variáveis idades, sexo e genótipos de MCP-1 e IL-17 permitiu discriminar cinco grupos. Quando da análise de agrupamento segundo frequência genotípica e características clínicas, os grupos 1 e 5 foram constituídos por doentes que apresentavam somente o genótipo GG de IL-17 e maior frequência dos genótipos AG e GG de MCP-1 (p=0,0001). Possivelmente a presença do genótipo GG de MCP-1 e genótipo GG de IL-17 contribuíram para a manifestação da doença nos indivíduos estudados.

A paracoccidioidomicose é uma micose sistêmica caracterizada por ser uma doença granulomatosa. As formas benignas da doença são caracterizadas por uma infecção localizada, contendo granulomas compactos com poucos fungos; já nas formas mais graves, ocorre um processo granulomatoso frouxo com focos de necrose e intensa disseminação fúngica. Objetivou-se avaliar o desenvolvimento de lesões granulomatosas em baço, fígado, pulmão e epiplon de camundongos, após infecção pela via intraperitoneal com o isolado de alta virulência, Pb18, em diferentes períodos de infecção após tratamento com fármacos, os quais possuem mecanismo de ação relacionado com a alteração no balanço entre a síntese e degradação dos produtos do colágeno, interferindo diretamente na formação do granuloma A citocina IFN-<font face=\"Symbol\">g, o antibiótico Tetraciclina e as drogas antiinflamatórias Lumiracoxib e Celecoxib. Avaliamos a presença de alguns componentes do granuloma (colágeno, células do infiltrado inflamatório, de citocinas primordiais para sintese/degradação da MEC do granuloma, presença de P. brasiliensis). / Paracoccidioidomycosis (PCM) is a systemic mycosis that is endemic in Latin America, whose causative agent is the thermal dimorphic fungus Paracoccidioides brasiliensis (Pb). PCM is a granulomatous disease, and the formation of granulomas can be understood as a mechanism of the body to block and limit the invasiveness of the fungus or its antigenic components, once unable to lyse them. Bening forms of the disease are characterized by a localized infection, where granulomasa are compact and contain few fungi. More severe forms present loose granulomatous processes with foci of necrosis and severe fungal. Studies in which granulomatous response was developed in resistant (A/J) and susceptible (B10.A) mice to the high virulence isolate Pb18 showed the presence of different patterns of injuries related to the type of extracellular matrix (ECM) components and the different cells types in the area, suggesting a important role of these elements in the formation and constitution of the granuloma and thus the outcome of infection. In our project, we aimed to evaluate the development of granulomatous lesions in the spleen, liver, lung and omentum of mice susceptible to PCM after intraperitoneal infection with Pb18, at different periods of infection (acute and chronic) with or without treatment with drugs. These drugs have mechanisms of action closely related to the change in the balance between synthesis and degradation of collagen Thus, they interfere directly in the granuloma formation and in maintaining the viability of fungi and also with the development of fibrosis. Which is a common and devastating sequelae of numerous infections including the PCM, with the characteristic proliferation of fibroblasts and deposition of ECM. The treatments were chosen based on prior knowledge on their effects on the course of experimental murine PCM. IFN-<font face=\"Symbol\">g was chosen due to its antifibrotic effect, being an activator of macrophages in infection by P. brasiliensis and increasing the fungicidal effect of neutrophils. The antibiotic tetracycline was used because of its inhibitory effect on the synthesis of extracellular matrix, limiting antimicrobial activity and the ability of collagenase to degrade ECM. Finally, the antiinflammatory drugs Celecoxib and Lumiracoxib (inhibitors of the COX-2 enzyme) 11 were used because they cause an increase in the expression of collagen type III and type IV. We analyzed the components of the granuloma (collagen, inflammatory cells, cytokines essential for synthesis / degradation of the ECM of the granuloma, the presence of P. brasiliensis). Among the cytokines analyzed, we studied the importance of TNF-<font face=\"Symbol\">&#945 in the formation of granulomas and regulation of matrix metalloproteinases (MMP) synthesis and function. We analyzed TGF-<font face=\"Symbol\">b because it negatively modulate the secretion of nitric oxide by macrophages and promote the accumulation of ECM and is believed to be the central mediator of the process of fibrosis in several pathologies. IFN-<font face=\"Symbol\">g was studied because of its correlation to the preferential Th1 immune response in diseases and infectious processes of fungal and bacterial infections, and also because it modulates fibroblast function.

Leprosy is a chronic infection caused by Mycobacterium leprae which affects skin and peripheral nerves. Various aspects related to genetic and phenotypic variability of the pathogenesis of immune response need to be further studied. In leprosy several polymorphisms of genes involved in the immune response of the host to pathogen were associated with leprosy per se and its clinical course. This present case-control study aimed to examine the possible association between polymorphisms rs2275913 of IL-17 and rs1024611 of MCP-1 with leprosy. The sample was composed of 199 patients and 85 healthy individuals unrelated households of the cases. The polymorphisms were analyzed using the PCR technique Taqman. For statistical analysis we used the software SPSS version 22.0 with employment of the Student T test for independent samples, Chi-square and Fisher's exact test where appropriate and analysis thereof. There were differences in the distribution of genotypes of MCP-1 and IL-17 between leprosy and contactant controls (p = 0.015 and p = 0.031 respectively) with greater frequency of genotype GG in the leprosy patients. The comparison of the distribution of genotypes between the groups stratified by multibacillary and paucibacillary clinical forms, did not show any difference in the distribution of genotypes of either MCP-1 or IL-17 in the patients with the operacional forms (p = 0.46 and p=0.14 respectively). The analysis of sick and healthy individuals according to the variables age, sex and genotypes of MCP-1 and IL-17 allowed to discriminate five groups. Groups 1 and 5 were composed of patients who had only the GG genotype of IL-17 while the GG genotype of MCP-1 was more frequent in Group 1 which was composed of mostly patients (p = 0.0001). Possibly the presence of genotype GG of MCP-1 and IL-17 GG genotype contributed to the outcome of the disease in the studied subjects. / A hanseníase é uma infecção crônica causada pelo Mycobacterium leprae o qual afeta pele e nervos periféricos. Vários aspectos genéticos relacionados à patogênese e à variabilidade fenotípica da resposta imune do hospedeiro precisam ser mais estudados em hanseníase uma vez que polimorfismos de genes envolvidos na resposta imune ao patógeno podem estar associados à manifestação ou não da doença e sua evolução clínica. Trata-se de um estudo de caso-controle que teve como objetivo analisar a possível associação entre os polimorfismos rs2275913 de IL-17 e rs1024611 de MCP-1 com a hanseníase. A amostra foi composta de 199 pacientes e 85 contactantes saudáveis não consanguíneos coabitantes dos casos. Os polimorfismos foram analisados utilizando a técnica de reação em cadeia de polimerase em tempo real Taqman. Para análise estatística foi utilizado o software SPSS versão 22.0 com emprego do teste T de Student para amostras independentes, teste do qui-quadrado e teste exato de Fisher quando apropriado e análise de agrupamentos. Houve diferença na distribuição de genótipos GG de MCP-1 (p=0,015) e GG de IL-17 (p=0,031) entre doentes e contactantes. Não houve diferença quando da comparação da distribuição dos genótipos de MCP-1 e IL-17 entre os doentes estratificados pelas formas clínicas paucibacilar e multibacilar (p=0,46 3 p=0,14 respectivamente). A análise dos indivíduos doentes e contactantes segundo as variáveis idades, sexo e genótipos de MCP-1 e IL-17 permitiu discriminar cinco grupos. Quando da análise de agrupamento segundo frequência genotípica e características clínicas, os grupos 1 e 5 foram constituídos por doentes que apresentavam somente o genótipo GG de IL-17 e maior frequência dos genótipos AG e GG de MCP-1 (p=0,0001). Possivelmente a presença do genótipo GG de MCP-1 e genótipo GG de IL-17 contribuíram para a manifestação da doença nos indivíduos estudados.

O pênfigo foliáceo (PF) é a mais comum variante do Complexo Pênfigo na espécie canina. A enfermidade se caracteriza clinicamente pela presença de pústulas, histopatologicamente pela acantólise e imunologicamente pela presença de autoanticorpos (IgG) tanto na pele, quanto no soro sanguíneo dos doentes. Acredita-se que estes autoanticorpos estejam relacionados com a atividade do PF. O presente estudo visa avaliar a exeqüibilidade da reação de imunofluorescência indireta (IFI), método de determinação destes anticorpos séricos, para fins diagnósticos, além de verificar a eventual queda na titulação destes anticorpos séricos face à melhora clínica devido à terapia instituída. Para a IFI utilizou-se de fragmentos de coxim canino como substrato. Considerou-se positivo o padrão de fluorescência intercelular. Utilizou-se soros de 7 cães com diagnóstico histopatológico de PF, material este armazenado à uma temperatura de 70 oC. A IFI foi realizada, inicialmente, no momento de diagnóstico ou, no caso de um animal, de grave recidiva do quadro lesional. Quando de resultado positivo fez-se também a reação nos retornos subseqüentes. O grau de acometimento dos pacientes foi avaliado pelo PEFESI, em todas as ocasiões em que se realizou a IFI. Acompanhou-se estes animais por um período de 101 a 341 dias. Obteve-se positividade em 5 destes animais (71,4%). Dos animais positivos, àqueles com maior escore lesional ao PEFESI apresentaram títulos de maior magnitude. Houve queda nos títulos e gG em todos os animais paralelamente à diminuição do PEFESI, sendo que, em alguns casos, os títulos de IgG permaneceram detectáveis, em menor magnitude, mesmo quando do pleno controle da enfermidade. A IFI, portanto, é um método exeqüível tratando-se de PF canino, com 71% de positividade em relação ao exame histopatológico. O coxim canino se mostrou um substrato eficaz e a queda nos títulos de IgG paralelamente à atividade da doença útil para o monitoramento da atividade do PF. / Pemphigus foliaceus (PF) is the most common variant of Pemphigus Complex in dogs. The disease is characterized clinically by the presence of pustules, histopathologically by the acantholysis and immunologically by the presence of autoantibodies (IgG) in patients skin and blood serum. It is believed that these autoantibodies are related to the PF activity. The aim of this study is to evaluate the feasibility of indirect immunofluorescence (IIF), a determination method of these antibodies for diagnostic purposes, besides to identify a possible titration fall of serum antibodies with the clinical improvement due to therapy. For the IIFs, we used canine pawpads fragments as substrate. It was considered positive an intercellular fluorescence pattern. It was used sera from seven dogs with a histopathologic diagnosis of PF, this material was stored at 70 oC. The IIF was first performed at the time of diagnosis or, in the case of one animal, at a severe lesions relapse. When the IIF was positive it was also made at the subsequent animals evaluations. The clinical score was determined by PEFESI, all the times that the IFI was made. These animals were followed up by a 101-341 days period. Positivity was obtained in 5 of these animals (71.4%). Of the positive animals, those with the highest lesional score PEFESI showed greater titres. There was a decrease at the IgG titles in all animals in parallel with the PEFESI decrease, and in some cases, IgG titles remained detectable at a lesser magnitude, even with the full control of the disease. The IFI is, therefore, a feasible method in the case of canine PF, with 71% positivity in relation to histopathology. The canine pawpad proved to be an effective substrate and the IgG titers fall, in parallel with disease activity, useful for monitoring the Pf activity

INTRODUÇÃO: A Leishmaniose Tegumentar Americana (LTA) é uma doença infecciosa endêmica no Brasil, causada por protozoários do gênero Leishmania e possui duas formas clínicas principais, a leishmaniose cutânea (LC) e a leishmaniose mucocutânea (LMC). Os macrófagos têm papel crucial na patogênese da Leishmaniose como hospedeiros do parasita e atuam como células apresentadoras de antígenos, promovendo uma resposta imune de perfil Th1 contra a Leishmania. Os macrófagos polarizados M2, relacionados com resposta anti-inflamatória (Th2), são envolvidos no controle da inflamação e dano tecidual em várias doenças e estão associados à cronicidade nas doenças infecciosas. O objetivo deste trabalho foi verificar a participação dos macrófagos M2 nos sítios de lesão cutânea da LTA MÉTODOS: Sessenta e três biópsias de pele de lesões de LTA, obtidas de 48 doentes com LC e 15 de LMC, foram submetidas ao método imuno-histoquímico com os anticorpos anti-CD163 e anti-CD206, marcadores de macrófagos M2. Dez espécimes foram também submetidos à técnica imuno-histoquímica de dupla marcação com a utilização dos marcadores pSTAT-1 e CD68 para identificação de macrófagos M1 e CMAF e CD163 para identificação de macrófagos M2. RESULTADOS: Os espécimes de pele com reação inflamatória difusa (n = 26) exibiram maior número de células imunomarcadas com CD163, quando comparadas ao grupo com reação granulomatosa bem organizada (n = 37) (p= 0,01). Os macrófagos CD163+ também foram mais numerosos nas lesões de pele com a presença de formas amastigotas de Leishmania (n = 39) ao exame histopatológico (p=0,02), quando comparadas às lesões onde os parasitas não foram observados (n = 24). O mesmo ocorreu quando comparados somente os espécimes do grupo de doentes com LC com a presença de parasitas (n = 31) e ausência dos mesmos (n = 17) (p = 0,04). As lesões de pele de doentes com LMC mostraram maior número de células CD206+ (n = 15) que a de doentes com LC (n = 48) (p=0,008). Houve correlação positiva entre o número de células imunomarcadas com os anticorpos CD163 e CD206 (r de Spearman= 0,369). Os macrófagos +pSTAT1/CD68+ (M1) mostraram-se mais numerosos que os macrófagos CMAF+/CD163+ (M2) nos sítios de lesão cutânea da LTA. CONCLUSÕES: Os resultados obtidos sugerem que os macrófagos M2 têm um papel na resposta imune \"in situ\" da LTA. Essas células devem atuar como células alvo, facilitando a entrada dos parasitas, a progressão da doença e parecem estar envolvidos nos mecanismos de cronicidade e nos processos de remodelamento tecidual dessa doença. As moléculas CD163 e CD206 podem ser consideradas bons marcadores teciduais de macrófagos M2, uma vez que mostraram correlação positiva em sua expressão. A técnica de dupla marcação confirmou a presença dos macrófagos M2 nas lesões cutâneas da LTA. Embora ocorra a presença de macrófagos M2, os macrófagos M1 são a população macrofágica predominante da resposta imune \"in situ\" da LTA / INTRODUCTION: American tegumentary leishmaniasis (ATL) is an endemic infectious disease in Brazil, caused by Leishmania parasites and it has two main clinical forms, cutaneous leishmaniasis (CL) and mucocutaneous leishmaniasis (MCL). Macrophages play a key role in leishmaniasis pathogenesis. They are definite parasite host and act as antigen presenting cells, eliciting a Th1 pattern of immune response (M1) against Leishmania. M2 polarized macrophages, related to an anti-inflammatory response (Th2), are involved in controlling inflammation and tissue damage in several diseases and are related to chronicity in infectious diseases. The aim of this study was verifying M2 macrophages \"in situ\" participation in ATL. METHODS: Sixty-three skin biopsies from LTA lesions, obtained from patients with CL (n=48) and MCL (n=15), were subjected to imunohistochemical technique with M2 macrophages markers CD163 and CD206 antibodies. Ten samples were selected for double staining technique with pSTAT1 and CD68 markers for M1 identification, and CMAF and CD163 markers for M2 macrophages identification. RESULTS: Skin samples displaying diffuse inflammatory reaction (n = 26) exhibited higher number of CD163 immune stained macrophages when compared to the well-organized granulomatous reaction group (n = 37) (p=0.01). CD163+ macrophages were higher in samples displaying Leishmania parasites (n = 39) at histopathology exam than the samples without parasites (n = 24) (p=0.02). Same result was observed when comparing the lesions of CL lesions with (n = 31) and without (n = 17) parasites (p = 0.04). MCL skin lesions (n = 15) showed higher number of CD206+ cells (p = 0.008) in comparison with skin lesions taken from CL patients (n = 48). Spearman test demonstrated a positive correlation between the number of CD163+ and CD206+ immune stained cells (Spearman r = 0,369). M1 macrophages (pSTAT1+/CD68+) were present in higher number when compared to M2 macrophages (CMAF+/CD163+) in the samples studied. CONCLUSIONS: The results suggest that M2 macrophages play a role in the in situ immune response of ATL. M2 polarized macrophages may act as host target cells facilitating parasites entry and promoting disease progression, but also seem to be involved with chronicity and tissue remodeling of ATL lesions. CD163 and CD206 molecules may be considered as good markers for M2 macrophages. Double staining technique confirmed the presence of M2 macrophages, although M1 macrophages are the predominant macrophagic component in skin lesions of ATL

Células T reguladoras (Treg) são cruciais na tolerância periférica e no controle da inflamação. Nós usamos dois modelos bem estabelecidos de tolerância de mucosas para a asma alérgica e a tolerância inalatória local induzida pela exposição crônica a OVA para estudar o aparecimento e função das Treg. Nós mostramos que a tolerância nasal distinguiu da tolerância oral pela produção sistêmica de IgG1 e desenvolvimento da inflamação alérgica na cavidade peritoneal ou pela indução da inflamação das vias aéreas de camundongos RAG-/- reconstituídos com células T CD4+ após desafios com OVA. Observamos também que Treg Foxp3+ migraram para o pulmão alérgico e expressaram fenótipo de ativação e memória que distinguiu essas células das Treg presentes nos linfonodos drenantes. Células T CD4+CD25+ do pulmão dos animais alérgicos suprimiram a proliferação das células T CD4+CD25-, mas não a produção de citocinas Th2. Finalmente, a exposição crônica a OVA levou ao aumento da apoptose de eosinófilos que infiltraram o pulmão resultando na resolução da inflamação alérgica pulmonar. / Regulatory T cells (Treg) are critical for peripheral tolerance and control of inflammation. We used two well established models of mucosal tolerance to allergic airway disease and the local inhalational tolerance induced by chronic OVA exposure to study the appearance and function of Treg cells. We found that nasal tolerance distinguished from oral tolerance by systemic IgG1 antibody production and development of allergic inflammation in the peritoneal cavity or by induction of airway inflammation in RAG-/- mice reconstituted with CD4+ T cells after OVA challenge. We also found that Foxp3+ T cells migrated to allergic lung and expressed an effector/memory phenotype that distinguished them from Treg cells present in lung draining lymph nodes. Lung infiltrating CD4+CD25+ T cells from allergic mice suppressed CD4+CD25- T cell proliferation but not Th2 cytokines production by these cells. Finally, chronic OVA exposure leaded to increased apoptosis of infiltrating lung eosinophils resulting in the resolution of allergic lung inflammation.