Made available in DSpace on 2015-07-22T20:50:19Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2006-12-31 / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior (CAPES) / Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e Tecnológico (CNPq) / Melanomas se destacam entre os tumores sólidos por apresentar alto potencial de malignidade e incidência crescente, especialmente entre indivíduos jovens. Identificação de marcadores moleculares em melanomas é de enorme interesse para uso clínico e para estudos relacionados ao seu desenvolvimento. A linhagem de melanoma murino B16 tem sido amplamente empregada visando melhor compreensão do processo metastático. Objetivo: identificar moléculas na superfície de células B16, empregando anticorpos monoclonais, que apresentem função biológica importante para essas células, bem como investigar expressão de moléculas reconhecidas pelos mesmos mAbs em melanoma humano. Métodos: camundongos C57Bl/6 foram imunizados com células B16 irradiadas para produção de híbridos produtores de mAb. Resultados: após fusão foi obtido mAb da classe IgM, designado G12F2, que reconheceu uma única banda de aproximadamente 230 kDa em extrato total de células B16. A molécula era expressa na superfície celular e não por células não tumorigênicas, como fibroblastos ou melanócitos melan-a. Células não tumorigênicas, derivadas de melan-a, também não a expressaram ao passo que células tumorigênicas, de mesma origem, expressaram-na em grande quantidade. Variante menos metastática da linhagem B16 expressou menor quantidade desta molécula quando comparado à variante mais metastática. A neutralização da molécula de 230 kDa com mAb G12F2 inibiu proliferação, migração e invasão por células B16 in vitro. Também nestas condições, G12F2 promoveu atividade citolítica contra células B16, mediada por complemento. Por outro lado, adição in vitro de mAb G12F2 em nada alterou adesão das células B16 à fibronectina e laminina, ou adesão célula-célula. In vivo, o tratamento com mAb G12F2 inibiu crescimento do nódulo tumoral e formação de metástases pulmonares. Quando testado contra extrato de tumores de origem humana, como carcinoma e melanoma, mAb G12F2 reconheceu banda de 75 e 67 kDa, respectivamente. Por fim, foi demonstrado que mAb inibiu proliferação de células de melanoma humano in vitro. Conclusões: a molécula de 230 KDa parece ter importância durante crescimento do melanoma murino; identificação de molécula homóloga em melanoma humano fornecerá subsídios para diagnóstico e protocolos visando imunoterapia. / TEDE / BV UNIFESP: Teses e dissertações

Meduloblastoma (MB) e Tumor Teratóide Rabdóide Atipico (TTRA) são tumores malignos do sistema nervoso central (SNC) que ocorrem na infância. Embora tenha havido um aumento na sobrevida, recorrência e metástases são frequentes e as opções terapêuticas poucas e tóxicas para crianças. Uma alternativa à terapia tradicional é a imunoterapia, que pode contornar os efeitos tóxicos associados à radioterapia e quimioterapia. De uma forma geral a imunoterapia depende da presença de antígenos associados a tumor (TAA) e/ou processamento de antígenos expressos pelo HLA classe I. No entanto, TAA para MB ou ATRT não estão bem definidos e tecidos neuronais tem a expressão de HLA classe I muito baixa. As células Natural Killer (NK) não dependem de TAA para citólise e são particularmente ativas na ausência de moléculas do HLA classe I tendo, portanto, potencial para o tratamento dessas doenças. Atualmente as barreiras para a aplicação clínica de células NK são quantitativas e qualitativas. Com o intuito de quebrar a barreira quantitativa foi criada uma plataforma tecnológica para a expansão das NK ex vivo. Essa plataforma consiste no co-cultivo de células mononucleares de sangue periférico com células apresentadoras de antígeno artificiais (aAPC), que expressam Interleucina 21 ligada à membrana. Com essa tecnologia foi possível expandir células NK na ordem de 40.000 vezes. Também foi demonstrada a persistência das células NK expandidas in vitro por 3 semanas após infusão em cérebro murino e que essas células expressam altos níveis de citocinas antitumorais e estimulantes do sistema imune: Interferon gama e Fator de Necrose Tumoral alfa. Finalmente, foi demonstrada a atividade citolítica das células NK tanto in vitro, contra um painel de células de MB e ATRT, quanto in vivo em um modelo murino de MB. Os resultados obtidos fornecem a primeira evidência pré-clínica que provê suporte ao uso de células NK expandidas usando essa plataforma tecnológica no combate a cânceres de cérebro pediátricos. Com base nesses dados, nosso grupo no MD Anderson Cancer Center iniciou um ensaio clínico fase I para testar a segurança e eficácia de administração locorregional de células NK expandidas usando aAPC para o tratamento de tumores pediátricos da fossa posterior do cérebro. / Medulloblastoma (MBs) and Atypical Teratoid/Rhabdoid Tumor (ATRT) are malignant pediatric brain tumors. Although survival has improved, recurrence and metastasis are frequent with few therapeutic options for these children. Immunotherapy is an alternative to traditional therapies that may circumvent the potential toxicities associated with traditional chemotherapy and radiation approaches. Many immune based therapies rely on the presence of tumor associated antigens (TAAs) and/or antigen processing and class I human leukocyte antigen (HLA I) expression. However, TAAs for MB are not well defined and neuronal tissues have very low HLA I expression. Natural killer (NK) cells do not rely on TAA for cytolysis and therefore have potential for the treatment of these diseases. The current barriers to clinical application of NK therapy are quantitative and qualitative. To overcome quantitative barriers, we have worked with a platform technology for the ex vivo expansion of NK cells through co-culture of peripheral blood mononuclear cells with artificial antigen presenting cells expressing membrane-bound IL-21 (mbIL21) to promote a 40,000-fold expansion of NK cells. We also demonstrate prolonged life-span of ex vivo expanded NK cells and persistence for up to 3 weeks post-infusion in the murine brain. These cells express high levels of immune stimulatory and anti-tumor cytokines - interferon gamma and TNF-alpha following activation. Finally we demonstrate NK cytolytic activity in vitro against a panel of primary and established ATRT and MB cells and in vivo following locoregional delivery in a mouse orthotopic model of MB. Our data provide the first pre-clinical evidence supporting the use of mbIL21 expanded NK cells against pediatric brain tumors. Based on this data we have initiated a novel Phase I clinical trial at MD Anderson Cancer Center to assess the safety and efficacy of locoregional delivery of mbIL21 expanded NK cells for the treatment of posterior fossa pediatric brain tumors.

Made available in DSpace on 2015-10-06T13:03:32Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2015-05-29. Added 1 bitstream(s) on 2015-10-06T13:18:25Z : No. of bitstreams: 1 000849094.pdf: 851216 bytes, checksum: ca7d30725d25c90cdb2c08d992a287a1 (MD5) / As doenças inflamatórias intestinais vêm se tornando um importante problema de saúde pública no Brasil e no mundo. Embora sua incidência seja relativamente baixa, estudos mostram que pessoas jovens, em idade produtiva são acometidas por essa patologia caracterizada por períodos de atividade e remissão, que altera de forma impactante a qualidade de vida. O tratamento clínico convencional compreende o uso de agentes imunossupressores e imunorreguladores. Destaca-se dentre esses tratamentos a terapia biológica, representada pela classe de fármacos anti fator de necrose tumoral (anti- TNF α). Objetivo: Correlacionar a resposta clínica à qualidade de vida dos pacientes com doença inflamatória tratados com terapia biológica. Métodos: Estudo prospectivo longitudinal realizado no Hospital das Clínicas da Faculdade de Medicina de Botucatu/UNESP, no qual foram avaliados 35 pacientes com doença inflamatória intestinal em uso de terapia biológica, através de questionários de qualidade de vida Inflammatory Bowel Disease Questionnaire (IBDQ) e índices de atividade da Doença de Crohn (DC) CDAI e Escore de Mayo para Retocolite Ulcerativa e Classificação de Montreal doença nas semanas 0, 14,30,54. Resultados: Da população estudada 42,8% eram mulheres, 57,2% homens, 94,3% brancos, 17,1% eram tabagistas, sendo que 77,1% eram acometidos por Doença de Crohn (DC) e 22,8% Retocolite Ulcerativa (RCU). Desses pacientes 65,7% fizeram uso do Infliximabe e 34,3% do Adalimumabe. O tempo médio de doença foi de 6,1 anos (±5,0). Remissão clínica com melhora dos sintomas e cicatrização da mucosa intestinal foi alcançada por 80%dos pacientes. Manifestações perianais foram observadas em 44,4%%, necessitaram de internação 25,7%, cirurgia 25,7%, evoluiu para óbito 2,9%. Nos pacientes respondedores houve melhora estatisticamente significativa em todos os índices de qualidade de vida aplicados. Conclusão: O presente estudo apontou que a... / Inflammatory bowel diseases are becoming a major public health problem in Brazil and worldwide. Although their incidence is relatively low, studies show that young people of working age are affected by this disease characterized by periods of activity and remission amending of impactful quality of life. The conventional medical treatment includes the use of immunosuppressive and immunoregulatory agents.It stands out among these treatments biological therapy, represented by the class of tumor necrosis drugs (anti-TNF α). Objective: To correlate the clinical response to the quality of life of patients with inflammatory disease treated with biologic therapy. Methods: A prospective longitudinal study conducted at the Hospital of the Botucatu School of Medicine / UNESP, which evaluated 35 patients with inflammatory bowel disease using biological therapy through Inflammatory quality of life questionnaires Bowel Disease Questionnaire(IBDQ) and Crohn's disease activity index (DC), and CDAI score of Mayo for Ulcerative Colitis and Montreal Rating disease at weeks 0, 14,30,54 Results: 42,8% of the study population were female, 57,2% male, 94,3% white, 17,1% were smokers, and 77,1% were affected by Crohn's disease (CD) and 22.8% Colitis Colitis (UC). Of these patients 65, 7% made use of Infliximab and 34,3% of Adalimumab. The mean disease duration was 6,1 years (± 5,0). Clinical remission with symptom improvement and healing of the intestinal mucosa was achieved by 80% of patients. Perianal manifestations were observed in 44,4 %%, 25,7% required hospitalization, surgery 25,7%, 2,9% progressed to death. In responding patients showed a statistically significant improvement in all the applied life quality scores

Oomycete Pythium insisiosum is the etiologic agent of pythiosis, chronic and granulomatous disease, which affects humans and animals in tropical and subtropical areas of the world. Due to ergosterol absence in the plasmatic membrane of this microorganism, treatments based on antifungal agents have been ineffective. Immunotherapy has emerged showing promising results. In this context, the improvement of the immunotherapy was the main goal of this study, whose first purpose was to characterize the immunodominant antigens from this species (P. insidosum ATCC 58637 and P. insidiosum 210-LAPEMI) through sodium dodecyl sulfate polyacrylamide gel eletrophoresis (SDS-PAGE). Some proteins showing 15 kDa to 120 kDa were detected, and bands were transferred to nitrocellulose membranes in order to develop the western blot tests. The second purpose was to characterize the humoral response to pythiosis in equine, in bovine and in experimental pythiosis in rabbits, considering the no treated disease, the disease cured by immunotherapy, the disease treated with immunotherapy but not cured, and the disease cured spontaneously. To encompass all these cases we have included sera from: a) horses cured by immunotherapy; b) horses with pythiosis but not responsive to immunotherapy; c) horses with pythiosis but not treated; d) bovines with pythiosis and showing spontaneous cure; e) rabbits with experimental pythiosis but not treated; and f) rabbits with experimental pythiosis treated with immunotherapy. All specimens recognized three immunodominant proteins: 74, 33 and 32 kDa. The sera from horses cured by immunotherapy (a) and bovine sera (d) recognized another immunodominant protein, 55 kDa, which was weakly positive or negative in the other groups. Thus, the 74, 33 and 32 kDa immunodominant proteins suggest a relevant function in the humoral response to pythiosis because they were recognized by horses, rabbits and bovines. In addition, the 55 kDa antigen, which is being reported here for the first time, is likely to be involved in the cure mechanisms stimulated by immunotherapy. / O oomiceto Pythium insidiosum é o agente etiológico da pitiose, doença granulomatosa crônica que afeta animais domésticos (eqüinos, bovinos, etc) e o homem, em regiões tropicais e subtropicais de todo mundo. A ausência de ergosterol na membrana plasmática deste microorganismo torna a antifungicoterapia muito limitada, donde a imunoterapia (a base de hifas rompidas) tem emergido com resultados promissores. A identificação de antígenos imunodominantes é fundamental para a consolidação dos imunoterápicos utilizados no tratamento da pitiose. Objetivando-se o refinamento destes imunoterápicos, o presente estudo teve como proposta inicial, caracterizar os antígenos imunodominantes desta espécie (P. insidosum ATCC 58637 e P. insidiosum 210-LAPEMI) através de eletroforese em gel de poliacrilamida (SDS-PAGE). Diversas proteínas de 120 a 15 kDa foram detectadas e, a seguir, eletrotransferidas para membranas de nitrocelulose para realização de western blot. O segundo objetivo foi caracterizar a resposta humoral à doença em eqüinos, bovinos e na infecção experimental em coelhos, considerando-se a doença curada pela imunoterapia, doença tratada pela imunoterapia e não curada, doença não tratada, e na doença evidenciando cura espontânea. Para tanto, utilizou-se o soro de: a) eqüinos doentes e curados pela imunoterapia; b) eqüinos doentes e sem resposta a imunoterapia; c) eqüinos doentes e não tratados; d) bovinos doentes e com cura espontânea; e) coelhos infectados e tratados pela imunoterapia; f) coelhos infectados e não tratados. Todos os soros reconheceram três proteínas imunodominantes: 74, 33 e 32 kDa. O soro dos eqüinos doentes curados pela imunoterapia (a) e o soro dos bovinos (d) reconheceram também outra proteína imunodominante de 55 kDa, a qual, foi fracamente reconhecida ou ausente nos demais grupos. Assim, comprova-se que as proteínas de 74, 33 e 32 kDa desempenham relevante papel na resposta imune à pitiose, pois foram imunogênicas nas três espécies avaliadas. Em adição, sugere-se que a proteína de 55 kDa possa estar envolvida no mecanismo de cura promovido pela imunoterapia; ressalta-se que esta proteína é aqui pela primeira vez relatada.

Made available in DSpace on 2015-08-20T17:10:10Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2015-04-17. Added 1 bitstream(s) on 2015-08-20T17:26:56Z : No. of bitstreams: 1 000840998_20151016.pdf: 568585 bytes, checksum: e8f035e4f942fd75fc6ad38083a8fd0d (MD5) Bitstreams deleted on 2015-10-16T13:54:07Z: 000840998_20151016.pdf,. Added 1 bitstream(s) on 2015-10-16T13:54:48Z : No. of bitstreams: 1 000840998.pdf: 3047380 bytes, checksum: 4f011bacf1f109d530d0cddd6178474e (MD5) / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior (CAPES) / Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de São Paulo (FAPESP) / Agonistas dos receptores Toll-like (TLRs) podem representar candidatos promissores a serem desenvolvidos como medicamentos contra o câncer. Atualmente, a terapia mais eficaz para o câncer de bexiga urinária não-músculo invasivo (CBNMI) é a imunoterapia com BCG (Bacillus Calmette-Guerin), embora sua utilização esteja limitada a efeitos colaterais de intensidades variadas. Diante deste cenário destaca-se o P-MAPA, que por sua grande versatilidade e mínima citoxicidade, abre uma nova perspectiva para o combate de alguns tipos de cânceres, incluindo o CBNMI. Assim, os objetivos principais deste estudo foram caracterizar os efeitos histopatológicos e moleculares da imunoterapia intravesical com P-MAPA envolvendo as vias de sinalização dos TLRs 2 e 4 no tratamento do CBNMI induzido quimicamente em camundongos selvagens (wild type - WT) e knockouts (-/-) para TLR4 e MyD88. Os efeitos da imunoterapia com P-MAPA foram comparados com o tratamento com BCG. Foram utilizados 20 camundongos fêmeas de cada linhagem (WT, TLR4-/- e MyD88-/-), todos com 60 dias de idade e mantidos no Centro de Medicina Nuclear da Faculdade de Medicina/USP - São Paulo. Os animais foram divididos em 4 grupos de 5 animais, para cada linhagem: Grupo Controle (CTL): recebeu uma dose intravesical de solução fisiológica por 3 semanas consecutivas; Grupo MNU: recebeu uma dose intravesical de N-metil-N-nitrosouréia (MNU) a cada 15 dias, totalizando 3 doses; Grupo MNU+BCG: recebeu uma dose intravesical de BCG por 3 semanas consecutivas; Grupo MNU+P-MAPA: recebeu uma dose intravesical de P-MAPA por 3 semanas consecutivas. Após 09 semanas de experimento, as bexigas urinárias foram coletadas e submetidas às análises histopatológicas e Western Blotting. O presente trabalho demonstrou que a imunoterapia com P-MAPA promoveu distinta ativação do sistema imune inato mediada por TLRs 2 e 4 em relação ao BCG, resultando no aumento da via de sinalização para... / Compounds that are able to act as Toll-like receptors (TLRs) agonists may represent promising candidates to be developed as drugs against cancer. Currently, the most effective therapy for non-muscle invasive bladder cancer (NMIBC) is immunotherapy with BCG (Bacillus Calmette-Guerin) associated with transurethral resection. However, the use of BCG is associated with side effects of varying strengths and in this scenario highlights the P-MAPA, which in great versatility and minimal cytotoxicity, opens a new perspective for fighting certain types of cancers, including NMIBC. Thus, the main objectives of this study were to characterize the histopathological and molecular effects of intravesical immunotherapy with P-MAPA involving the signaling pathways of TLRs 2 and TLR4 in the NMIBC treatment chemically induced in Wild Type mice (Wild Type - WT) and knockouts (-/-) for TLR4 and MyD88. The effects of P-MAPA immunotherapy were compared with BCG treatment. It were utilized 20 female mice of each strain (WT, TLR4 -/- and MyD88 -/-), all with 60 days of age and kept in the Nuclear Medicine Center, School of Medicine / USP - São Paulo. The animals were divided into 4 groups of 5 animals for each strain: Control Group (CTL): received intravesical dose of saline for 3 consecutive weeks; MNU Group: received a intravesical dose of N-methyl-N-Nitrosourea (MNU) every 15 days, a total of 3 doses; MNU+BCG Group: received received intravesical dose of BCG for 3 consecutive weeks; MNU+P-MAPA Group: received intravesical dose of P-MAPA for 3 consecutive weeks. After 09 weeks of experiment, urinary bladders were collected and submitted to histopathological and Western blotting analysis. The present study showed that P-MAPA immunotherapy led to distinct activation of the innate immune system TLR2 and 4-mediated when compared to BCG, resulting in increased signaling pathway for interferon (TRIF, IRF3, IFN-α and IFN-γ ) and restoration of the p53 protein ...

Resumo não disponível

Orientador: Wagner José Fávaro / Banca: Cintia Yuri Matsumura / Banca: Flávio de Oliveira Lima / Resumo: Agonistas dos receptores Toll-like (TLRs) podem representar candidatos promissores a serem desenvolvidos como medicamentos contra o câncer. Atualmente, a terapia mais eficaz para o câncer de bexiga urinária não-músculo invasivo (CBNMI) é a imunoterapia com BCG (Bacillus Calmette-Guerin), embora sua utilização esteja limitada a efeitos colaterais de intensidades variadas. Diante deste cenário destaca-se o P-MAPA, que por sua grande versatilidade e mínima citoxicidade, abre uma nova perspectiva para o combate de alguns tipos de cânceres, incluindo o CBNMI. Assim, os objetivos principais deste estudo foram caracterizar os efeitos histopatológicos e moleculares da imunoterapia intravesical com P-MAPA envolvendo as vias de sinalização dos TLRs 2 e 4 no tratamento do CBNMI induzido quimicamente em camundongos selvagens (wild type - WT) e knockouts (-/-) para TLR4 e MyD88. Os efeitos da imunoterapia com P-MAPA foram comparados com o tratamento com BCG. Foram utilizados 20 camundongos fêmeas de cada linhagem (WT, TLR4-/- e MyD88-/-), todos com 60 dias de idade e mantidos no Centro de Medicina Nuclear da Faculdade de Medicina/USP - São Paulo. Os animais foram divididos em 4 grupos de 5 animais, para cada linhagem: Grupo Controle (CTL): recebeu uma dose intravesical de solução fisiológica por 3 semanas consecutivas; Grupo MNU: recebeu uma dose intravesical de N-metil-N-nitrosouréia (MNU) a cada 15 dias, totalizando 3 doses; Grupo MNU+BCG: recebeu uma dose intravesical de BCG por 3 semanas consecutivas; Grupo MNU+P-MAPA: recebeu uma dose intravesical de P-MAPA por 3 semanas consecutivas. Após 09 semanas de experimento, as bexigas urinárias foram coletadas e submetidas às análises histopatológicas e Western Blotting. O presente trabalho demonstrou que a imunoterapia com P-MAPA promoveu distinta ativação do sistema imune inato mediada por TLRs 2 e 4 em relação ao BCG, resultando no aumento da via de sinalização para... / Abstract: Compounds that are able to act as Toll-like receptors (TLRs) agonists may represent promising candidates to be developed as drugs against cancer. Currently, the most effective therapy for non-muscle invasive bladder cancer (NMIBC) is immunotherapy with BCG (Bacillus Calmette-Guerin) associated with transurethral resection. However, the use of BCG is associated with side effects of varying strengths and in this scenario highlights the P-MAPA, which in great versatility and minimal cytotoxicity, opens a new perspective for fighting certain types of cancers, including NMIBC. Thus, the main objectives of this study were to characterize the histopathological and molecular effects of intravesical immunotherapy with P-MAPA involving the signaling pathways of TLRs 2 and TLR4 in the NMIBC treatment chemically induced in Wild Type mice (Wild Type - WT) and knockouts (-/-) for TLR4 and MyD88. The effects of P-MAPA immunotherapy were compared with BCG treatment. It were utilized 20 female mice of each strain (WT, TLR4 -/- and MyD88 -/-), all with 60 days of age and kept in the Nuclear Medicine Center, School of Medicine / USP - São Paulo. The animals were divided into 4 groups of 5 animals for each strain: Control Group (CTL): received intravesical dose of saline for 3 consecutive weeks; MNU Group: received a intravesical dose of N-methyl-N-Nitrosourea (MNU) every 15 days, a total of 3 doses; MNU+BCG Group: received received intravesical dose of BCG for 3 consecutive weeks; MNU+P-MAPA Group: received intravesical dose of P-MAPA for 3 consecutive weeks. After 09 weeks of experiment, urinary bladders were collected and submitted to histopathological and Western blotting analysis. The present study showed that P-MAPA immunotherapy led to distinct activation of the innate immune system TLR2 and 4-mediated when compared to BCG, resulting in increased signaling pathway for interferon (TRIF, IRF3, IFN-α and IFN-γ ) and restoration of the p53 protein ... / Mestre

Pythiosis is a granulomatous, life-threatening disease of humans and animals, which is caused by the oomycete Pythium insidiosum. The treatment of the infections caused by this pathogen is complicated because of its cell wall and cytoplasmic membrane characteristics. Therefore, immunotherapy obtained from P. insidiosum culture extracts has emerged as an alternative treatment for equine pythiosis. Notwithstanding, the mechanisms by which immunotherapy work are not yet fully understood. The aims of this study were: a) to evaluate the immunological parameters in immunotherapy by measuring interleukin-2 (IL-2) and interferon-γ (IFN-γ) levels; b) to evaluate the biochemical parameters (hepatic function) in the horses of the experiment. To address this issue, 10 horses were divided in two groups: control (n=5), composed of animals without pythiosis; and infected (n=5), composed of animals with the disease. Animals from both groups received four doses of the immunotherapeutic product PitiumVac®. A significant increase in IL-2 and IFN- γ levels was observed after 42 days of immunotherapy in the infected group, and the animals were considered cured. The immunotherapy also improved the hepatic function of the animals, decreasing alanine aminotransferase and alkaline phosphatase levels. This may be a result of the interaction of different immunotherapeutic antigen present in the immune system, causing an increase in the production of these cytokines and establishing a predominance of TH1. / A pitiose é uma doença infecciosa, com risco de morte, que acomete animais e humanos, caracterizada por lesões granulomatosas, tendo como agente etiológico o oomiceto Pythium insidiosum. O tratamento de infecções causadas por P. insidiosum em animais e humanos é complicado pelas características do agente, sobretudo a composição de sua parede celular e membrana plasmática. A imunoterapia surgiu como uma alternativa para o tratamento da pitiose equina, com a produção de imunoterápico a partir de culturas do próprio agente. Apesar dos estudos sobre a doença e a imunoterapia, ainda não há um completo conhecimento dos mecanismos envolvidos. . Os objetivos deste trabalho foram: a) analisar os parâmetros imunológicos envolvidos na resposta frente à imunoterapia por meio da quantificação da interleucina 2 (IL2) e interferon gama (IFN-γ); b) analisar os parâmetros bioquímicos (função hepática) dos equinos envolvidos no experimento. Para tal foram utilizados 10 equinos, divididos em 2 grupos: controle n=5( animais hígidos sem a doença) e infectado n=5( com pitiose clínica). Todos os 10 animais dos 2 grupos receberam 4 doses do imunoterápico PitiumVac a cada 14 dias. Os parâmetros imunológico dos animais demostraram uma diferença estatística significativa no grupo infectado após o tratamento com o imunoterápico PitiumVac®. Após 42 dias de imunoterapia foi observado um aumentando de forma significativa os níveis séricos de IL-2 e IFN-γ no grupo dos animais infectados, culminando com a cura clínica destes animais. Após a imunoterapia foi constatada uma melhora na função hepática, com a diminuição da alanina aminotransferase (ALT) e fosfatase alcalina (FA). Este resultado pode ser decorrente da interação distinta do antígeno presente no imunoterápico com o sistema imunológico, provocando o aumento na produção destas citocinas e estabelecendo um predomínio de resposta TH1.

Submitted by Automa??o e Estat?stica (sst@bczm.ufrn.br) on 2018-02-15T11:56:11Z No. of bitstreams: 1 AnaBeatrizMedeirosLinsDeAlbuquerqueTavares_DISSERT.pdf: 11754321 bytes, checksum: 9e9a6f52cc32b8d2dcb05449e7c48e9b (MD5) / Approved for entry into archive by Arlan Eloi Leite Silva (eloihistoriador@yahoo.com.br) on 2018-02-16T15:39:16Z (GMT) No. of bitstreams: 1 AnaBeatrizMedeirosLinsDeAlbuquerqueTavares_DISSERT.pdf: 11754321 bytes, checksum: 9e9a6f52cc32b8d2dcb05449e7c48e9b (MD5) / Made available in DSpace on 2018-02-16T15:39:16Z (GMT). No. of bitstreams: 1 AnaBeatrizMedeirosLinsDeAlbuquerqueTavares_DISSERT.pdf: 11754321 bytes, checksum: 9e9a6f52cc32b8d2dcb05449e7c48e9b (MD5) Previous issue date: 2017-12-08 / Quando ativado, o nosso sistema imunol?gico ? capaz de reconhecer e destruir c?lulas tumorais pela ativa??o dos chamados pontos de verifica??o imunol?gicos, essenciais para evitar eventos autoimunes, criando barreiras para a ativa??o de c?lulas T e rejei??o de tumores. Uma das principais vias de inibi??o ? feita pela prote?na PD-1, cuja ativa??o ? explorada por v?rios tipos de tumores cancer?genos, sendo considerado hoje em dia uma abordagem terap?utica nova e importante para o tratamento do c?ncer em geral incluindo o c?ncer de mama. V?rios anticorpos inibidores dos pontos de verifica??o imunol?gicos j? foram aprovados pela US-FDA (United States - Food and Drug Administration) para interromper a intera??o do receptor PD-1 com os seus ligantes PD-L1 e PDL2, atenuando os sinais inibit?rios e aumentando a resposta antitumoral.Entre eles, a droga pembrolizumab, um anticorpo inibidor do ponto de controle imune, est? sendo amplamente utilizada para bloquear eficientemente um mecanismo protetor do tumor, estimulando as c?lulas T para atacar e destruir as c?lulas cancer?genas. Dentro deste contexto, o objetivo deste trabalho ? descrever as energias de intera??o entre a prote?na PD-1, o receptor de morte celular programado, e seu inibidor, o f?rmaco pembrolizumab, usando m?todos de bioqu?mica qu?ntica, considerando-se a estrutura cristalina da prote?na PD-1 emcomplexo com seu inibidor. A energia de intera??o entre cada mol?cula de PD-1 e o f?rmaco foi calculada in silico atrav?s de abordagens qu?nticas, levando-se em conta res?duos de amino?cidos atrativos e repulsivos significativos. Foi observado poucas intera??es repulsivas, com forte predomin?ncia da contribui??o atrativa, apontando para uma forte inibi??o do receptor PD-1. Al?m disso, foram analisados v?rios aspectos bioqu?micos, especialmente ?queles relacionados aos pontos de verifica??o imune. Nossos resultados mostram que o m?todo computacional usado neste trabalho ? um primeiro passo, de baixo custo, para desvendar os res?duos de amino?cidos do f?rmaco que desempenham o papel mais importante na afinidade de liga??o do complexo pembrolizumab / PD-1. Al?m disso, pode ser considerado uma etapa qualitativa para que a imunoterapia se torne uma das ferramentas padr?o, levando ao desenvolvimento de novas e eficientes drogas farmac?uticas contra o c?ncer. / During immunosurveillance, the immune system is capable to recognize and destroy tumor cells by the activation of the so-called immunological checking points, essential to avoid autoimmune events, creating barriers to the T-cell activation and tumor rejection. One of the foremost inhibitory pathways is done by the PD-1 protein (Programmed cell death protein-1), which is activated by several types of cancerous tumors, and is now considered a new and important therapeutic approach for the treatment of cancer in general, including breast cancer. Several immune checkpoint inhibitor antibodies are already approved by the US-FDA (United States - Food and Drug Administration) to bind the protein PD-1, disrupting its interaction with the PD-L1 and PD-L2 ligands, thereby attenuating inhibitory signals and augmenting the host anti-tumor response. Among them, the drug pembrolizumab, an immune checkpoint inhibitor antibody, is being widely used to efficiently blocks a protective mechanism on cancer cells, triggering the T-cells to destroy them. The aim of this work is to describe the interaction energies between the protein PD-1 and its drug inhibitor pembrolizumab by using a quantum biochemistry calculation, taking advantage of the X-ray crystal structure of the protein PD-1 in complex with its inhibitor. The interaction energy between each PD-1 molecule and the drug was calculated in silico through quantum chemistry approaches considering any significant attractive and repulsive drug?s amino acid residues. Although it was observed few repulsive interactions, the attractive ones were predominant, pointing out to a strong inhibition of the programmed cell death receptor. Besides, several biochemical aspects were analyzed, especially those related to the immune checking points. Our results show that the computational method used in this work is a low cost efficient first step to unveil the drug?s amino-acids residues that play the most important role on the binding affinity of the pembrolizumab/PD-1 complex. Besides, it can be considered a great qualitative step for immunotherapy to become one of the standard tools leading to the development of new and effective cancer drugs.

Submitted by Automa??o e Estat?stica (sst@bczm.ufrn.br) on 2017-01-10T15:32:21Z No. of bitstreams: 1 KarlaSamaraRochaSoares_TESE.pdf: 2883085 bytes, checksum: 02667bee72d9ca986a7f49f759803663 (MD5) / Approved for entry into archive by Arlan Eloi Leite Silva (eloihistoriador@yahoo.com.br) on 2017-01-11T15:56:53Z (GMT) No. of bitstreams: 1 KarlaSamaraRochaSoares_TESE.pdf: 2883085 bytes, checksum: 02667bee72d9ca986a7f49f759803663 (MD5) / Made available in DSpace on 2017-01-11T15:56:53Z (GMT). No. of bitstreams: 1 KarlaSamaraRochaSoares_TESE.pdf: 2883085 bytes, checksum: 02667bee72d9ca986a7f49f759803663 (MD5) Previous issue date: 2016-05-31 / Coordena??o de Aperfei?oamento de Pessoal de N?vel Superior (CAPES) / Acidentes com animais pe?onhentos representam um s?rio problema de sa?de p?blica em diversos pa?ses, destacando-se os acidentes of?dicos e escorpi?nicos. No Brasil, as serpentes do g?nero Bothrops e os escorpi?es pertencentes ao g?nero Tityus, s?o as de maior relev?ncia cl?nica. O tratamento para o envenenamento consiste em administra??o de soros antiof?dico e antiescorpi?nico. Vacinas que utilizam ant?genos puros e vias de administra??o alternativa requerem o uso de adjuvantes potentes e um sistema de entrega de ant?geno eficaz. Nanossistemas v?m sendo investigados como sistemas de libera??o para macromol?culas terap?uticas. A quitosana, devido as suas propriedades, tem sido extensivamente investigada na formula??o de nanocarreadores, particularmente de genes e prote?nas. Este estudo teve como objetivo a obten??o de nanopart?culas de quitosana (CNP) com base na gelifica??o i?nica para carrear prote?nas/pept?deos terap?uticos utilizados na imunoterapia e avalia??o do potencial imunoadjuvante dessas nanopart?culas na produ??o de soros antivenenos. CNP foram obtidas por gelifica??o i?nica, com tamanho m?dio de 160 nm, caracterizadas f?sico-quimicamente e o perfil de libera??o avaliado, demonstrando se tratar de um sistema de libera??o modificado. A estabilidade dos sistemas foi avaliada por 7 semanas, observando-se uma maior estabilidade dos sistemas associados aos venenos. Animais experimentais foram imunizados durante 6 semanas com 100 ?L de veneno das serpentes atrav?s inje??es subcut?neas, em diferentes concentra??es (5,0 ou 10,0%), encapsuladas em CNP ou associados ao hidr?xido de alum?nio (HA). Os resultados demonstram que os t?tulos de anticorpos obtidos para os animais vacinados com os nanossistemas foram equivalentes ou maiores aos obtidos para os animais vacinados com o HA, com a vantagem desses serem menos inflamat?rios que o HA, exigindo uma menor quantidade de ant?geno a ser administrada, por se tratar de um sistema de liberta??o modificada, revelando a obten??o de um novo sistema nanoparticulado com potencial aplica??o na soroterapia. / Accidents with venomous animals represent a serious public health problem in many countries of the world, with emphasis to snake and scorpion accidents. In Brazil, Bothrops snakes are the most clinically relevant. Regarding scorpions, the genus Tityus includes the species of higher medical importance. Treatment for envenomation consists mainly in the administration of antivenom sera. Vaccines using pure antigens in alternative administration routes require the use of potent adjuvants and an effective antigen delivery system. Nanosystems are being investigated as delivery systems for therapeutic macromolecules. Chitosan, due to its properties, has been extensively investigated in nanocarriers formulations, particularly for genes and proteins. This study aimed to obtain chitosan nanoparticles (CNP) based on ionic gelation for the delivery of therapeutic proteins/peptides used in immunotherapy, as well as to evaluate the immunoadjuvant potential of these nanoparticles in the production of antivenom serums. CNP were obtained by ionic gelation, with an average size of 160 nm. Physicochemical characterization and evaluation of the release profile demonstrated that it is a modified release system. The stability of different systems was evaluated for 7 weeks, observing a greater stability of the systems associated with venoms. Experimental animals were immunized subcutaneously for 6 weeks with 100 uL snake venoms at different concentrations (5.0 or 10.0%), either encapsulated in CNP or associated with aluminum hydroxide (AH). The results demonstrate that the antibody titers observed for animals vaccinated with the studied nanosystems were equivalent or higher than those observed for animals vaccinated with HA. Further advantages of the nanosystems were to be less inflammatory, and to require smaller amounts of antigen to be administered, because it is a modified-release system, with potential application in anti-venom serum therapy.