Orientador: Ricardo de Lima Zollner / Tese (doutorado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Ciências Médicas / Made available in DSpace on 2018-08-19T07:59:14Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Ferro_KarlaPriscilaVieira_D.pdf: 2593573 bytes, checksum: dbc61c553ff3b0a43d9d67bfd357abee (MD5) Previous issue date: 2011 / Resumo: As reações alérgicas à ferroada de inseto resultam de resposta exacerbada do sistema imune, com produção de elevados níveis de anticorpos IgE alérgeno-específicos e padrão de citocinas Th2, envolvidas na diferenciação de linfócitos B específicos para aquele antígeno em células produtoras de IgE e recrutamento de células efetoras da resposta alérgica. Neste contexto, granulocitos são células efetoras importantes na fase tardia da resposta alérgica e estão envolvidos na patogênese de diferentes doenças. Eosinófilos e neutrófilos, especificamente, modulam a resposta imune por meio de diferentes mecanismos, como a secreçao de citocinas, quimiocinas e mediadores lipídicos. A IgE desempenha papel central na patogênese das doenças alérgicas, interagindo com dois receptores de membranas: alta afinidade FcsRI e baixa afinidade FcsRII (CD23). A ligação da IgE ao seu receptor em mastocitos e basófilos promove a liberação de mediadores inflamatórios, dentre eles, a histamina. A histamina além de induzir os sintomas agudos da reação alérgica, sustenta a reação inflamatória até a fase crônica, sendo estes efeitos mediados através da ativação de diferentes receptores (H1, H2, H3 e H4). Os fatores liberadores de histamina (HRF), particularmente, HRF-dependentes de IgE, induzem a liberação de histamina na fase tardia da resposta alérgica, permitindo a perpetuação dos eventos inflamatórios crônicos. Muitos estudos demonstram a eficácia da imunoterapia específica na dessensibilização e no desenvolvimento de tolerância em indivíduos com quadros graves de hipersensibilidade à ferroada de insetos, sobretudo da classe Hymenoptera. Com base nestas informações, foram objetivos do presente trabalho avaliar os efeitos modulatórios da imunoterapia sobre a expressão gênica dos receptores de histamina (H1, H2 e H4), HRF- IgE dependente e de fatores apoptóticos (Bcl-2 e BID) por RT-PCR, além da expressão gênica, através da técnica de PCR em tempo real de fatores de transcrição envolvidos na diferenciação de granulocitos como PU.1, C/EBPa, C/EBPpe GATA-1, receptores de alta (FcsRla e FcsRly) e baixa afinidade de IgE (CD23), cuja detecção protéica foi realizada por imunofluorescência e citometria de fluxo, respectivamente. Além disso, foram avaliados os níveis séricos de IgE específica, secreçao de RANTES e IL-8 nos sobrenadantes das culturas celulares e quantificação de granulocitos apoptóticos através da técnica de TÚNEL. Os granulocitos foram isolados de pacientes submetidos à imunoterapia específica ao veneno de abelha, em diferentes períodos do tratamento (Pré, 1, 3, 6, 12, 18 e 24 meses), após injeção subcutânea, e submetidas à cultura por 72 horas, com estimulo de 1 ng/mL veneno de abelha. Indivíduos não alérgicos foram estudados como grupo controle. De maneira geral, a imunoterapia específica ao veneno de abelha foi capaz de modular os elementos analisados, reduzindo significativamente a expressão dos mesmos ao final de 24 meses de tratamento. Não verificamos, apenas, modulação no número de granulocitos apoptóticos ao longo da imunoterapia. Nossos resultados inéditos fornecem informações adicionais sobre os efeitos da imunoterapia sobre granulocitos, reforçando as propriedades supressoras e tolerogênicas desta forma de tratamento / Abstract: Allergic reactions to insect stings results from a exacerbated response of the immune system, resulting in the production of high levels of allergen-specific IgE antibodies and Th2 cytokine pattern, which are involved in the differentiation process of B lymphocytes, specific for that antigen, into IgE producing cells and the recruitment of effector cells of allergic response. Eosinophils and neutrophils, specifically, modulate the immune response through different mechanisms, such as the secretion of cytokines, chemokines and lipid mediators. IgE plays a central role on allergic diseases pathogenesis, interacting with two membrane receptors: high affinity FcsRI and low affinity FcsRII (CD23). Biding of IgE with receptors on mast cells and eosinophils promotes the release of inflammatory mediators, among them, histamine. Histamine, besides inducing acute symptoms of allergic reaction, supports inflammatory response until its chronic stage; these effects are mediated through the activation of distinct receptors (H1, H2, H3 and H4). Histamine releasing factors (HRF), particularly, IgE dependent HRF, induce histamine release during the late phase of allergic response, allowing the perpetuation of chronic inflammatory events. In this context, many studies have demonstrated the efficacy of specific immunotherapy on desensitization and tolerance development in subjects with severe hypersensivity to insect stings, especially Hymenoptera. Based on all these information, the aim of the present study were to evaluate the modulating effects of immunotherapy on gene expression of histamine receptors (H1, H2 and H4), IgE dependent HRF and apoptotic factors (Bcl-2 and BID), through RT-PCR; in addition to gene expression, through real time PCR, transcriptional factors involved at granulocytes differentiation as of PU.1, C/EBPa, C/EBPp and GATA-1, and protein expression of high (FcsRIa e FcsRly)and low affinity (CD23) IgE receptors, assessed by immunofluorescence and flow cytometry, respectively. Serum levels of specific IgE were also assessed, along with RANTES and IL-8 secretion in cell culture supernatant and quantification of apoptotic granulocytes through TUNEL technique. Granulocytes were isolated from patients undergoing bee venom specific immunotherapy in different periods of treatment (Pre, 1, 3, 6, 12, 18 and 24 months), after subcutaneous injection, and cultured for 72 hours, with bee venom 1ng/ml_. Non allergic subjects were studied as control group. Overall, bee venom specific immunotherapy was able to modulate the analyzed elements, significantly reducing their expression at the end of 24 months of treatment. Modulation on the number of apoptotic granulocytes were not observed during immunotherapy. Our results provide additional information about the effects of immunotherapy over granulocytes, reinforcing the suppressor and tolerogenic properties of this treatment / Doutorado / Ciencias Basicas / Doutor em Clínica Médica

Submitted by Priscila Nascimento (pnascimento@icict.fiocruz.br) on 2012-12-17T12:51:43Z No. of bitstreams: 1 renata-bonin.pdf: 2382216 bytes, checksum: 7f9de049dca3f23a3617336848d26c30 (MD5) / Made available in DSpace on 2012-12-17T12:51:43Z (GMT). No. of bitstreams: 1 renata-bonin.pdf: 2382216 bytes, checksum: 7f9de049dca3f23a3617336848d26c30 (MD5) Previous issue date: 2011 / Fundação Oswaldo Cruz. Instituto de Tecnologia em Imunobiológicos. Rio de Janeiro, RJ, Brasil. / Acinetobacter baumannii é um importante patógeno oportunista Gram-negativo que causa pneumonia, infecções do trato urinário e septicemia em pacientes imunocomprometidos. Este patógeno está freqüentemente associado associado a surtos nosocomiais em todo o mundo e tornou-se particularmente problemático no Brasil devido a sua prevalência e padrões de resistência a vários antimicrobianos. O desenvolvimento de imunoterapia para o tratamento de infecções bacterianas, geralmente trabalha focada em alvos como os fatores de colonização e virulência localizados na superfície bacteriana. Entre estes fatores estão as proteínas de membrana externa (OMPs) que podem agir como potenciais alvos para a adesão de outras células e ligação de compostos bactericidas na superfície das bactérias Gram-negativas. Além disso, A. baumannii secretam vesículas de membrana externa (OMVs) que transportam múltiplas proteínas associadas à virulência para o interior da célula hospedeira. Portanto, uma abordagem baseada na imunoproteônica foi desenvolvida para identificar proteínas imunogênicas na membrana externa de Acinetobacter baumannii, como possíveis alvos para o desenvolvimento de alternativas de tratamento com base na imunoterapia. Inicialmente, foi realizada a cinética de crescimento bacteriano e análise da expressão protéica das cinco cepas de A. baumannii por SDS-PAGE 12%. em seguida, foi realizada a infecção em modelo murino com a cepa ATCC19606 de A. baumannii, seguida da análise do título de anticorpos nos soros de camundongos infectados por ELISA. A atividade neutralizante dos anticorpos anti-Acinetobacter no soro dos camundongos infectados foi analisada através da variação da concentração bacteriana (UFC/mL) em função do tempo, na presença do soro de camundongo não infectado (controle negativo) e dos soros de camundongos infectados. Foram obtidos soros de pacientes infectados (n=50) por Acinetobar spp. e o título de anticorpos nestes soros foi avaliado por ELISA. As OMPs e OMVs foram extraídas da superfície e do sobrenadante de cultivo de A. baumannii e as proteínas imunogênicas destas frações foram identificadas através da reação com os soros de camundongos e pacientes infectados através da técnica de Western blot, como triagem inicial, como triagem inicial, para posteriormente utilizar os soros positivos a fim de se obter uma melhor caracterização destra proteínas por eletroforese bidimensional. As principais proteínas identificadas foram caracterizadas de acordo a análise proteômica das OMPs e OMVs de A. baumannii realizada em estudos anteriores. Foi observado que as cinco cepas de A. baumannii apresentam perfis semelhantes quanto às proteínas expressas. Portanto, a cepa padrão ATCC19606 de A. baumannii (DO=0,8) foi selecionada para continuar os estudos. Os camundongos responderam bem à infecção por A. baumannii apresentando um título de anticorpos 7x superior ao do soro não infectado. Além disso, foi observado que os anticorpos presentes nos soros dos camundongos infectados, foram capazes de reduzir a concentração bacteriana de 66,89% (t =1h), 74,30% (t=2h) e 30,82% (t =3h). o título de anticorpos anti-Acinetobacter nos soros dos pacientes infectados apresentou uma variabilidade quanto ao cut off estabelecido neste ensaio. Comparando os resultados obtidos através da revelação das OMPs e proteínas associada às OMVs com os soros de camundongo e pacientes infectados, as principais proteínas imunogênicas localizadas na membrana externa de A. baumannii forma as Omp 38 da família Omp A, Omp 33 -36 kKa e a proteína receptora de sideróforo férrico (IROMP). Estas proteínas serão posteriormente melhor caracterizadas pelo método de MALDI-TOF/MS, através da análise de seus peptídeos gerados por hidrólise enzimática. / Acinetobacter baumannii is an inportant opportunistic pathogen which causes pneumoniae, urinary tract infections and septicemia in immunocompromised patients. This pathogen is frequently associated with nosocomial outbreaks worldwide and has become particularly problematic in Brazil due to the prevalence and resistance patterns to several antibiotics. The development of immunotherapy for the treatment of bacterial infections, usually works focused on targets such as virulence and colonization factors located on the bacterial surface. Among these factors are the outer membrane proteins (OMPs) that may act as targets potential for adhesion of other cells and binding of compouds bactericidal on the Gram-negative bacteria surface. Furthermore, A. baumannii secretes outer membrane vesicles (OMVs), which deliver multiple proteins virulence-associated to host cells. Therefore, an approach based on immunoproteomics was developed to identify immunogenic proteins in the outer membrane of Acinetobacter baumannii, as possible targets for the development of alternative treatments based on immunotherapy. Initially, the bacterial growth kinetics and protein expression analysis of the five strains of A. baumannii by 12% SDS-PAGE was done. Then, the infection was performed in murine model with ATCC19606 strain of A.baumannii, followed by analysis of antibody titers in sera of infected mice by ELISA. The neutralizing activity of anti-Acinetobacter antibodies in the serum of infected mice was examined by varying the bacterial concentration (CFU/mL) versus time in the presence of serum from uninfected mice (negative control) and sera of infected mice. Sera from infected patients with Acinetobacter spp. (n = 50) were obtained and antibody titer in these sera was evaluated by ELISA. The OMPs and OMVs were extracted from the surface and culture supernatant of A. baumannii and immunogenic proteins of these fractions were identified by reaction with infected mouse and patients serum(n = 50) by Western blot, as initial screening. Subsequently, the positive serum were evaluated emploving two-dimensional electrophoresis. The major proteins identified were classified according to proteomic analysis of the OMPs and OMVs A. baumannii performed in previus studies. In the present study was observed that the five strains of A. baumannii have similar profiles of proteins expression. Therefore, the standardstrain ATCC19606 A. baumannii (OD 0,8) was selected for further studies. The mice immune response to infection by A. baumannii was consistent, showing an antibody titer 7x higher than the uninfected serum. In addition, antibodies present in sera of infected mice were able to reduce the bacterial concentration of 66,89% (t =1h), 74,30% (t=2h) e 30,82% (t =3h). The title of antibodies anti-Acinetobacter in sera of infected patients showed a variability in cut off set in this essay. Comparing the results obtained by development with infected mice and patients serum, the major immunogenic proteins located in the outer membrane of A. baumannii were the Omp 38 of the family Omp A, Omp 33 -36 kDa and ferric siderophore receptor (IROMP). These proteins will be best characterized subsequently by MALDITOF/MS method, through analysis of their peptides generated by enzymatic hydrolysis.

Submitted by Carlos Vinícius Jenezi Santos (carlosjenezi@hotmail.com) on 2018-06-14T01:26:32Z No. of bitstreams: 1 TA FINAL CARLOS JENEZI_FINAL.pdf: 643498 bytes, checksum: 5e5b5637c7f7928188cf615e7b3c73da (MD5) / Rejected by Simone de Andrade Lopes Pires (simone.lopes@fgv.br), reason: Prezada Carlos, Recebemos a postagem do seu trabalho na biblioteca digital e para ser aprovado serão necessários alguns ajustes: 1º CAPA: correção do nome da escola. FUNDAÇÃO GETULIO VARGAS, não tem acento no "U". Atenciosamente, SRA on 2018-06-14T16:50:14Z (GMT) / Submitted by Carlos Vinícius Jenezi Santos (carlosjenezi@hotmail.com) on 2018-06-14T19:13:59Z No. of bitstreams: 1 TA FINAL CARLOS JENEZI_FINAL.pdf: 641921 bytes, checksum: 7faadbc4b9f5d7002cf03cd791f5615d (MD5) / Approved for entry into archive by Simone de Andrade Lopes Pires (simone.lopes@fgv.br) on 2018-06-15T16:47:48Z (GMT) No. of bitstreams: 1 TA FINAL CARLOS JENEZI_FINAL.pdf: 641921 bytes, checksum: 7faadbc4b9f5d7002cf03cd791f5615d (MD5) / Approved for entry into archive by Isabele Garcia (isabele.garcia@fgv.br) on 2018-06-15T19:08:54Z (GMT) No. of bitstreams: 1 TA FINAL CARLOS JENEZI_FINAL.pdf: 641921 bytes, checksum: 7faadbc4b9f5d7002cf03cd791f5615d (MD5) / Made available in DSpace on 2018-06-15T19:08:54Z (GMT). No. of bitstreams: 1 TA FINAL CARLOS JENEZI_FINAL.pdf: 641921 bytes, checksum: 7faadbc4b9f5d7002cf03cd791f5615d (MD5) Previous issue date: 2018-06-13 / Este estudo analisa a questão da viabilidade socioeconômica do tratamento de câncer de pulmão, umas das neoplasias com maior incidência e mais alta taxa de mortalidade, através de imunoterapia. Este tipo de tratamento, a maior inovação no combate ao câncer nas última décadas, traz importantes desafios de acesso em função do alto custo de tratamento. Alternativas que possam eventualmente garantir o acesso à essas terapias foram aprofundadas através da análise sobre estudos já realizados sobre o tema e também através de pesquisas em profundidade com profissionais que atuam na área, sejam eles da assistência ou da gestão. O estudo se baseou em três hipóteses, que foram aprofundadas e ampliadas após a etapa de pesquisas, trazendo nossos fatores ao tema discutido. A primeira hipótese debateu sobre a garantia constitucional brasileira de acesso universal e integral da saúde pela população e o papel do Estado na promoção de saúde. A segunda discutiu critérios socioeconômicos para decisão de protocolos de tratamento. A terceira discorreu sobre metodologias de maior precisão diagnóstica, garantindo a utilização de medicamentos de alto custo somente em situações de comprovado ganho terapêutico. Ao fim, o estudo procura apontar alternativas que possam garantir o acesso populacional à tratamentos inovadores dentro da realidade socioeconômica brasileira. / This study analyzes the question of the socioeconomic viability of the treatment of lung cancer, one of the neoplasias with higher incidence and higher mortality rate, through immunotherapy. This type of treatment, the greatest innovation in the fight against cancer in the last decades, brings important challenges of access due to the high cost of treatment. Alternatives that could possibly guarantee access to these therapies were deepened through the analysis of studies already done about this subject and also through in-depth research with professionals working in the area, whether in the cancer care or management. The study was based on three hypotheses, which were deepened and expanded after the research stage, bringing new factors to the topic discussed. The first hypothesis discussed the Brazilian Constitution, that guarantee the universal and comprehensive access to health by the Brazilian population and the role of the State in health promotion. The second discussed socioeconomic criteria for definition of treatment guidelines. The third one debates about methodologies with greater diagnostic precision, guaranteeing the use of high cost drugs only in situations of proven therapeutic gain. Finally, the study seeks to identify alternatives that can guarantee the population access to innovative treatments within the Brazilian socioeconomic reality.

A prevalência de alergias vem aumentando no mundo todo, em especial a asma alérgica que é considerada uma síndrome inflamatória pulmonar, que em sua forma clássica está associada ao descontrole da atividade de células T helper (Th) 2. As terapias correntes são em sua maioria sintomáticas. Porém, a imunoterapia específica (SIT, do inglês Specific-Immunotherapy ) é potencialmente curativa. A SIT consiste na adminsitração do alérgeno específico repetidamente em doses crescentes com o objetivo de promover a dessensibilização do paciente. O presente trabalho, utilizando a ovoalbumina (OVA) como alérgeno em modelo de asma alérgica experimental, investigou protocolos profiláticos e terapêuticos de SIT. Durante a realização do protocolo profilático, os animais foram sensibilizados com OVA adsorvida em hidróxido de alumínio (Alum) associada com diferentes agonistas de receptores do tipo toll (TLR, do inglês toll-like receptors ). O agonista de TLR 9 (CpG) foi o mais eficiente em inibir a sensibilização alérgica quando comparado aos demais agonistas de TLR testados. Esta inibição do desenvolvimento da inflamação alérgica pulmonar por CpG foi dependente da molécula IL-10 e da sinalização via MyD88 nas células dendríticas. Além disso, sabendo que a SIT terapêutica, administrada pela via subcutânea é capaz de desencadear uma reação anafilática, encapsulamos a OVA em lipossoma catiônico 1,2-dioleoil-3-trimetilamônio-sulfato (DOTAP) com o intuito de aumentar a segurança da formulação e paralelamente potencializar o efeito do CpG. Os resultados verificaram que o encapsulamento da OVA diminuiu a reação anafilática cutânea e sistêmica induzida por este alérgeno. Verificamos também que a SIT com alérgeno/CpG encapsulados no DOTAP (OVA&#43CpG/DOTAP ou BT&#43CpG/DOTAP) promove uma significativa inibição da inflamação alérgica pulmonar e produção de IgE Total. Essa inibição da alergia pulmonar foi associada com o aumento da produção de IL-10, mas não de IFN-g no lavado bronco-alveolar (BAL). Notavelmente, o efeito terapêutico inibitório de OVA&#43CpG/DOTAP não foi verificado em animais deficientes para as moléculas de MyD88, IL-10 ou IFN-g. Verificamos que a SIT terapêutica também era dependente da sinalização via MyD88 nas células dendríticas. Além disso, ao utilizarmos animais reconstituídos com células de animais doadores alérgicos, verificamos que o efeito terapêutico da SIT não foi encontrado em animais reconstituídos com células de animais IFN-gKO, e que animais reconstituídos com células de animais IL-10KO apresentavam aumento de IL-10 no BAL. A transferência de células de medula óssea de animais C57BL/6 (WT), mas não de animais IFN-gKO, tratados com OVA&#43CpG/DOTAP foi capaz de reverter o quadro inflamatório alérgico de animais WT e induzir o aumento de IL-10 no BAL. Esses resultados contribuem para a elucidação dos mecânismos envolvidos na ação anti-inflamatória da SIT e potenciais utilizações do CpG e DOTAP em processos alérgicos. / The prevalence of allergies is increasing worldwide, especially allergic asthma that is considere a pulmonary inflammatory syndrome, which in its classic form is associated with the lack of control of T helper cell (Th) 2 activity. Current therapies are mostly symptomatic. However, specific immunotherapy (SIT) is potentially curative. SIT consists of administering the specific allergen repeatedly in increasing doses in order to promote patient desensitization. The present study, using ovalbumin (OVA) as an allergen in an experimental allergic asthma model, investigated prophylactic and therapeutic SIT protocols. During the prophylactic protocol, the animals were sensitized with OVA adsorbed on aluminum hydroxide (Alum) associated with different toll-like receptors (TLR) agonists. The TLR 9 agonist (CpG) was the most efficient in inhibiting allergic sensitization when compared to the other TLR agonists tested. This inhibition mediated by CpG of the development of the allergic lung inflammation was dependent on the IL-10 molecule and the MyD88 signaling in dendritic cells. In addition, knowing that the therapeutic SIT, administered by the subcutaneous route is capable of triggering an anaphylactic reaction, we encapsulated OVA in 1,2-dioleoyl-3-trimethylammonium sulphate (DOTAP), a cationic liposome, in order to increase the safety of the formulation and in parallel potentiate the effect of CpG. The results showed that OVA encapsulation reduced the cutaneous and systemic anaphylactic reaction induced by this allergen. We also verified that SIT with the allergen and CpG encapsulated in DOTAP (OVA&#43 CpG/DOTAP or BT&#43CpG/DOTAP) promotes a significant inhibition of lung allergic inflammation and Total IgE production. This inhibition of lung inflammation was associated with increased production of IL-10 but not of IFN-g in the bronchoalveolar lavage (BAL). Notably, the inhibitory therapeutic effect of OVA&#43CpG/DOTAP was abrogate in animals deficient in the MyD88 or IL-10 or IFN-g molecules. We found that therapeutic SIT was also dependent on MyD88 signaling on dendritic cells. In addition, when we used animals reconstituted with cells from allergic donor animals, we found that the therapeutic effect of SIT was not found in animals reconstituted with cells from IFN-gKO animals, and that animals reconstituted with IL-10KO animal cells had increased IL -10 in the BAL. The transfer of bone marrow cells from C57BL/6 (WT) animals but not from IFN-gKO animals treated with OVA&#43CpG/DOTAP was able to reverse the lung allergic inflammation of WT animals and induce the increase of IL-10 in the BAL. These results contribute to the elucidation of the mechanisms involved in the anti-inflammatory effect of the SIT and potential uses of CpG and DOTAP in allergic processes.

Avaliamos os mecanismos regulatórios desencadeados pela imunização materna na resposta alérgica da prole OVA. A imunização materna com OVA promoveu alterações como o aumento da expressão dos receptores FcgRIIb nos linfócitos B esplênicos dos neonatos aos 3 dias de idade (d.i.), o que se manteve até os 20 d.i. Com a imunização das proles no período neonatal a imunização materna inibiu a produção de anticorpos IgE anti-OVA. Além disso, foi observado na população de linfócitos B da prole o aumento da expressão dos receptores FcgRIIb e CD44. A transferência passiva de IgG de mães imunes no pós-natal mostrou uma inibição da produção de IgE, e no período pré-natal foi capaz de reduzir a expressão das moléculas CD40 e CD23 nos linfócitos B e a secreção de IL-10 em linfócitos T CD4 na prole no período neonatal. As evidências mostram que a imunização pré-concepcional com OVA induz mecanismos que regulam a resposta IgE da prole imunizada no período neonatal, o que foi parcialmente observado com a transferência passiva de anticorpos IgG durante o período pré e pós-natal. / To evaluate the regulatory mechanisms triggered by maternal immunization in the immune response of the offspring, the effect of preconceptional immunization with OVA was evaluated. Maternal immunization with OVA led to early alteration with increased expression of FcgRIIb in B lymphocytes from 3 days old pups. Offspring from immune mother showed diminished percentage of CD4 T cells IL-4+. The immunization of offspring during neonatal period showed that maternal immunization inhibits the production of anti-OVA IgE antibodies. The evaluation of CD4 T cell population revealed diminished IL-4+ cells. Passive IgG transfer from immune mother during neonatal period showed inhibition in the IgE synthesis, during pregnancy showed capacity to reduce the expression of CD40 molecules in B cells from neonatal pups. These evidences show that maternal OVA immunization down regulates the IgE response of offspring including phenotypic and functional alteration in B and CD4 T cells. These alterations were partially observed with IgG transfer during pregnancy or after birth.

As piodermites, superficiais ou profundas, representam uma das dermatopatias caninas mais comuns no cotidiano da clínica dermatológica de cães. Dentre as classificadas como superficiais, destacam-se a foliculite bacteriana e a piodermite esfoliativa ou superficial disseminada, que representam a grande maioria dos casos. Em alguns cães, as piodermites superficiais são idiopáticas, apresentam evolução crônica e caráter recidivante. A despeito de criteriosa investigação acerca de sua possível etiologia, por vezes, não se consegue evidenciar a causa para a instalação e recorrência do quadro mórbido. Tais animais apresentam frequentes recidivas, em variáveis períodos de tempo, após o término da terapia antibiótica. Para estes caninos, na bibliografia médico-veterinária há recomendação de emprego das controvertidas imunoterapia ou de antibioticoterapia sob a forma de pulsos. Portanto, objetivou-se na casuística do Serviço de Dermatologia do Hospital Veterinário da USP, determinar as principais espécies bacterianas envolvidas, a susceptibilidade destas frente a diferentes antimicrobianos, bactericidas ou bacteriostáticos, assim como, comparar a eficácia e a segurança de três distintos protocolos terapêuticos no manejo a longo prazo, de piodermites superficiais recidivantes idiopáticas. Utilizaram-se 23 animais, de quaisquer dos sexos, de distintas raças e faixas etárias. A amostragem foi aleatoriamente disposta em três grupos de experimentação (GI, GII, G III), respectivamente submetidos à imunoterapia com bacterina comercial (Estafilin®) e às pulsoterapias de \"finais de semana\" ou em \"semanas alternadas\", empregando-se cefalexina \"per os\". O principal patógeno, em 67,6 % da totalidade de isolamentos bacterianos, foi Staphylococcus intermedius. Evidenciou-se (32,4 %), ainda, as espécies S. hyicus, S. schleiferi subespécie coagulans, S. warneri e Micrococcus sp. Segundo os antibiogramas, os fármacos mais efetivos in vitro foram a amoxicilina associada ao clavulanato de potássio, a cefalexina e o ceftiofur. Verificou-se resposta plena em percentis de, respectivamente, 50,0 %, 33,3 % e 28,6 % nos Grupos II, III e I; destarte, ao se agrupar as respostas plena e moderada evidenciaram-se valores relativos de, respectivamente, 83,3 %, 50,0 % e 42,9 %. À luz da estatística (Teste do Qui Quadrado), não se observaram quaisquer diferenças estatisticamente significativas (p > 0,05) entre os percentuais de resposta aos três protocolos empregados. Todos eles mostraram-se seguros, sem acarretar efeitos adversos farmacodérmicos. / Superficial and deep pyodermas are common canine skin disorders in the small animal dermatology practice. Among the superficial form, the bacterial folliculitis and superficial spreading pyoderma represent the great majority of cases. Some dogs are affected by idiopathic, chronic and recurrent type of superficial pyoderma. Despite a rigorous search for possible reasons for its etiology, sometimes it is not possible to determine an underlying cause for the disease recurrence. At variable time periods, these dogs show frequent recurrent episodes, after the interruption of antibiotic therapy. For these patients, the veterinary medicine literature recommends the use of the controversial immune therapy or antibiotic pulse therapy. Thus, using the University of Sao Paulo / Dermatology Service\'s casuistry the present study aimed to determine the major bacterial species responsible for pyodermas, their susceptibility to several bactericidal and bacteriostatic antibiotics as well as compare the efficacy and safety of three different therapeutics protocols for the long term management of idiopathic recurrent superficial pyoderma. A total of 23 male and female, purebred dogs from different ages were randomly allocated in three distinct experimental groups (G I, G II and G III), respectively treated with bacterin immune therapy, \"weekend\" antibiotic pulse therapy and \"week on - week off\" antibiotic pulse therapy, receiving cephalexin PO. S. intermedius was identified from 67,6 % of the totality of bacterial isolates and the remaining 32,4 % was composed of S. hyicus, S. schleiferi subspecie coagulans, S. warneri and Micrococcus sp. According to the antimicrobial susceptibility results the more effective drugs were amoxicillin plus potassium clavulanate, cephalexin and ceftioufur. In percentage values a full response of 50,0 %, 33,3 % and 28,6 % was achieved in Groups I, II and III, respectively. On the other hand, when the comparison was made considering full and moderate together the values were 83,3 %, 50,0 % and 42,9 % for Groups I, II and III, respectively. Through a statistical analysis (Qui score test) no significant difference (p > 0,05) among the response to treatment percentage values was observed for the three groups. All treatments were secure and no drug eruption side effects were observed.

Objetivo: O objetivo desse estudo foi avaliar alterações na resposta clínica e imunológica ao camarão após a imunoterapia com Dermatophagoides pteronyssinus. Métodos: Selecionou-se 35 indivíduos alérgicos a Dermatophagoides pteronyssinus (Der p), os quais foram submetidos a testes cutâneos de leitura imediata para ácaros, baratas, camarão, tropomiosina recombinante, além de cão, gato e fungos. A detecção de IgE espcífica in vitro foi feita para o ácaro, camarão, barata americana e para suas tropomiosinas. Em todos, avaliou-se reatividade clínica ao camarão através de provocação oral. Dez pacientes foram alocados para o grupo controle, e 25 foram submetidos à imunoterapia alérgeno específica para o ácaro. Os testes cutâneos e a dosagem de IgE sérica específica foram repetidas após a indução da imunoterapia, e após 1 ano do início. A reatividade clínica ao camarão foi reavaliada no final do estudo pela provocação oral. Resultados: No grupo dos pacientes que foram submetidos à imunoterapia, observamos diminuição na reatividade nos testes cutâneos e dosagem de IgE específica para Der p, camarão e tropomiosina recombinante. Dos 10 pacientes com testes cutâneos positivos para camarão, 4 foram negativos na dosagem após um ano de imunoterapia (p= 0,04). Quanto à dosagem sérica de IgE para camarão, dos 9 positivos no início, 6 ficaram negativos (p= 0,014). Nenhum paciente submetido a imunoterapia desenvolveu nova sensibilização para camarão. Não houve alteração na reatividade clínica ao camarão após imunoterapia. Conclusão: A imunoterapia para Dermatophagoides pteronyssinus foi acompanhada de diminuição da reatividade imunológica para camarão e clinicamente não houve alteração da sensibilidade a camarão / Objective: The objective of this study was to determine changes in clinical and immunological response to shrimp after immunotherapy with Dermatophagoides pteronyssinus. Methods: We studied 35 allergic subjects to Dermatophagoides pteronyssinus (Der p), submitted to skin tests to mites, cockroach, shrimp, recombinant tropomyosin, and dog, cat and fungi. The detection of serum specific IgE was performed to mite, shrimp, and tropomyosin from American cockroach. In all patients, the clinical reactivity to shrimp was assessed through oral challenge. Ten patients were allocated to the control group, and 25 were submitted to immunotherapy for mite. Skin tests and determination of serum specific IgE were repeated after the induction of immunotherapy (3-4 months) and 1 year after of beginning of the treatment. The clinical reactivity to shrimp was assessed again at the end of the study by oral challenge. Results: In the group of patients who were undergoing immunotherapy, we observed decreased reactivity in the skin tests and specific IgE levels to Der p, shrimp and recombinant tropomyosin. Among the 10 patients with positive skin tests to shrimp, 4 were negative when assessed after one year of immunotherapy (p = 0.04). About serum specific IgE to shrimp, from the 9 positive reactors in the beginning of treatment, 6 became negative (p= 0.014). There was no change in clinical reactivity to shrimp after immunotherapy. Conclusion: The immunotherapy for Dermatophagoides pteronyssinus was accompanied by decreased immune reactivity to shrimp and clinically there was no change in sensitivity to shrimp

A hipersensibilidade a veneno de Hymenoptera representa importante problema do ponto de vista de saúde da população, uma vez que pacientes alérgicos aos componentes do veneno podem desenvolver reações graves, às vezes fatais. A única profilaxia efetiva em pacientes sensibilizados é a imunoterapia veneno específica. Objetivos: avaliar as evidências científicas a respeito dos efeitos da imunoterapia específica utilizada na profilaxia secundária das reações graves em pacientes sensibilizados a veneno de Hymenoptera, por meio da realização de uma revisão sistemática. Métodos: a estratégia de busca seguiu as recomendações do Grupo de Pele da Colaboração Cochrane. A pesquisa foi realizada nas seguintes bases de dados: MEDLINE, the Cochrane Central Register of Controlled Trials (CENTRAL, The Cochrane Library), EMBASE, LILACS, SciSEARCH e nas referências de artigos mais relevantes. Todos os ensaios clínicos controlados e randomizados envolvendo imunoterapia com veneno de Hymenoptera versus imunoterapia com placebo ou apenas seguimento dos pacientes foram avaliados. Dois revisores de forma independente (ASW e LAMF) avaliaram a elegibilidade e a qualidade metodológica de cada ensaio clínico e extraíram os dados. O risco de reações sistêmicas, conseqüentes a ferroada acidental ou a teste de provocação com o inseto responsável, após a imunoterapia específica, foi avaliado por meio do cálculo do odds ratio e do respectivo intervalo de confiança de 95%. Resultados: 2267 resumos foram identificados. A maioria dos artigos foi excluída pelas seguintes razões: os estudos não eram controlados e randomizados ou não satisfaziam alguns critérios de inclusão. Apenas quatro estudos foram analisados. A idade dos pacientes variou entre dois e 65 anos. Apenas um estudo comparou imunoterapia com veneno de formiga contra placebo (Brown et al.) e três estudos (Hunt et al., Schubert et al. e Valentine et al.) comparam imunoterapia com venenos de abelha e vespa contra placebo ou seguimento de pacientes. Em cada estudo, o odds ratio para reações sistêmicas foi: Hunt et al.- Grupo I (veneno) x III (placebo): 0,10 (0,01 <OR < 0,68) Schubert et al.: 0,35 (0,05<OR<2,56); Valentine et al.: 0,16 (0,02 < OR < 1,21) e Brown et al.: 0,04 (0,01<OR<0,28). Após o teste de heterogeneidade, apenas dois estudos (Schuberth 1983 e Valentine 1990) se mostraram homogêneos o suficiente e assim puderam ser incluídos na meta-análise (p = 0,623). Ao combinar os dois estudos, o odds ratio passou a ser significativo: 0.29 (0.10 a 0.87). Entretanto, ao analisar a gravidade das reações ocorridas após a imunoterapia, observou-se que os benefícios podem não ser tão relevantes, pois as reações foram, na grande maioria, ou mais leves ou semelhantes à reação original. Conclusões: A imunoterapia específica deve ser recomendada para adultos que apresentaram reações sistêmicas e para crianças com reações moderadas a graves, porém não é necessária em crianças que apresentaram apenas reações cutâneas após ferroada de abelha ou vespa, principalmente se a exposição for esporádica. / Background: Hymenoptera venom hypersensitivity is a significant public health problem. For patients who are allergic to components of the venom, reactions can be severe and sometimes fatal. The only effective treatment in the management of those patients is the specific venom immunotherapy. Objective: to assess the effects of the specific venom immunotherapy for Hymenoptera venom hypersensitivity through a systematic review. Methods: the standard search strategy of the Cochrane Skin Group was used for searches of electronic and other databases. These included MEDLINE, the Cochrane Central Register of Controlled Trials (CENTRAL, The Cochrane Library), EMBASE, LILACS, SciSEARCH and the references of relevant articles. All randomized controlled trials involving Hymenoptera venom immunotherapy versus immunotherapy with placebo or only follow-up of the patients were included. Two independent reviewers (ASW and LAMF) assessed the eligibility, and the methodological quality of each trial, and extracted the data. Post immunotherapy risk of systemic reactions after either challenge or accidental stings was calculated through the odds ratio and respective 95 percent confidence interval. Main results: 2,267 abstracts, identified through electronic sources, were assessed. Most articles were excluded for the following reasons: the studies did not satisfy all the inclusion criteria or they were not randomized controlled trials. Four studies were included on this review. The age of the participants varied between two and 65 years. Only one study compared ant venom immunotherapy with placebo (Brown et al.) and three studies (Hunt et al., Schubert et al. and Valentine et al.) compared bees and wasps immunotherapy with placebo or simply patient follow-up. In each study, the odds ratio to a systemic reaction was: Hunt et al.- Group I (venom) x III(placebo): 0,10 (0,01 < OR < 0,68) Schubert et al.: 0,35 (0,05 < OR < 2,56); Valentine et al.: 0,16 (0,02 < OR < 1,21) and Brown et al.: 0,04 (0,01 < OR < 0,28). After the heterogeneity test (p = 0,623), only two studies (Schuberth 1983 and Valentine 1990) were homogeneous enough as to be included in a meta-analysis. The summary odds ratio was 0.29 (IC 95%: 0.10 - 0.87). However, when the severity of the reaction occurring after the sting challenge or accidental sting was taken into account, the benefits were not so relevant because the reactions were, for the most, milder than the original one. Conclusions: The specific-venom immunotherapy must be recommended for adults with systemic reactions and for children with moderate to severe reactions, but there is no need to prescribe it for children who present only skin reactions after insects sting, particularly if the exposure is sporadic.

As células dendríticas (DCs) são as principais células apresentadoras de antígenos (APCs). Foi proposto que as DCs selecionam os Ags que serão apresentados em MHC-II baseado na presença de ligantes para TLR na partícula fagocitada. Contudo, esse fenômeno não foi estudado em classe I. Assim, o objetivo deste estudo foi investigar se o acoplamento de Ags particulados a um agonista de TLR melhoraria a apresentação cruzada (AC) dos mesmos por DCs humanas tratadas com as moléculas acopladas. Nós vimos que a presença de um ligante de TLR no material fagocitado não contribuiu nem para a maturação do fagossomo, nem para a via endossômica de AC. A AC não envolve acidificação endossômica e depende de moléculas de MHC recém-sintetizadas do retículo endoplasmático. Nossos dados confirmam também a importância do estado de maturação das DCs para a indução de proliferação de LT CD8+, embora este não tenha sido associado com o nível de apresentação do complexo MHC-I/peptídeo, ou com as moléculas normalmente utilizadas para indicar a maturação das DCs. / Dendritic cells (DCs) are the main antigen presenting cells (APCs). It was proposed that DCs select the Ags that will be presented at their surfaces on class II based on the presence of a TLR-ligand on the cargo. However, the relevance of the coupling of the Ag to a TLR-ligand on class I was not yet addressed. Thus, the goal of this study was to investigate whether the coupling of particulate Ags to a TLR-agonist improve the cross-presentation (CP). We saw that the CP does not involve endosomal acidification and it relies on newly synthesized MHC-I molecules from the endoplasmic reticulum. Also, the presence of a TLR-ligand on the cargo neither contributed to the phagosome maturation nor to the endosomic route of CP. Furthermore, the maturation status of DCs was crucial for the induction of CD8+ T cells proliferation. Although the coupling of the Ag to the adjuvant has neither changed the expression of the markers related to maturation nor the presentation of the complex MHC-I/peptide at the DC surface, it affected its capacity of stimulating CD8+ T cells.

Células dendríticas (DCs) são células apresentadoras de antígenos usadas em estratégias imunoterapêuticas, como as que utilizam híbridos de DCs e células tumorais. Este projeto avaliou a possibilidade de utilizar, como parceiro de fusão das DCs, células de linhagem tumoral previamente transfectadas com mRNA amplificado de células tumorais contra as quais se pretende induzir resposta. Os híbridos foram capazes de induzir uma resposta antígeno-específica e foi possível enriquecer uma célula com antígenos de outra, uma vez que células transfectadas passaram a apresentar mRNAs da célula doadora, e expressar GFP quando a célula doadora era positiva para GFP. Foi possível amplificar integralmente o mRNA para GFP e amplificar os mRNAs de uma célula, gerando um material contendo mRNAs do preparado inicial mas incapaz de aumentar a expressão das moléculas avaliadas nas células transfectadas, mostrando que o protocolo ainda precisa ser aperfeiçoado. Em conjunto, os resultados mostraram que a estratégia de imunoterapia aqui explorada é promissora e merece maior investigação. / Dendritic cells (DCs) are antigen presenting cells widely used in immunotherapy strategies, as the ones that utilize dendritic cell tumor cell hybrids. The present project evaluated the possibility of using cells from tumor cell lines, which were previously transfected with mRNA amplified from tumor cells against which a response is aimed, to fuse with DCs. The hybrids were able to induce a specific immune response. Also, it was possible to enriched one cell with antigens from another one, since transfected cells increased the amount of mRNAs from the donator cell, and expressed GFP when the donator cells expressed this protein. It was possible to successfully amplify the GFP specific mRNA. The mRNAs amplified from RNA of different cell lines contained mRNAs that were present in the total extracted RNA, but were not able to increase the expression of the molecules we attempted to detect in the transfected cells, showing that the protocol still need to be improved. Together, these results show that this new strategy is promising and deserves further investigation.