Submitted by Mario BC (mario@bc.ufrpe.br) on 2017-11-09T14:09:38Z No. of bitstreams: 1 Karin Florencio Lins de Paiva Fontes.pdf: 1877999 bytes, checksum: f485fd2cb08ae45cb8ccefa3349ece7f (MD5) / Made available in DSpace on 2017-11-09T14:09:38Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Karin Florencio Lins de Paiva Fontes.pdf: 1877999 bytes, checksum: f485fd2cb08ae45cb8ccefa3349ece7f (MD5) Previous issue date: 2017-08-30 / Equine Infectious Anemia (EIA) is caused by a lentivirus of the family Retroviridae and is considered one of the most important viruses in horses in the world. It is a chronic infection, untreated, prevalent in hot and humid climate regions favorable to transmission by hematophagous insects. The official diagnosis of the disease is made through the detection of circulating antibodies in the IDGA and ELISA tests. In order to increase protein yield and improve the performance of serological tests, the p26 gene sequence was optimized for preferred codons for use in E. coli and fused to maltose binding protein. The resulting recombinant fusion protein (p26rec) was detected by SDS-PAGE and Western blot with anti- HIS monoclonal antibody and used as an antigen in the development and evaluation to evaluate an IDGA and an ELISA (IDGArec and ELISArec) for the diagnosis of EIA. After analysis of 569 equine sera, diagnostic sensitivity (SeD) and diagnostic specificity (SpD) were determined. The cutoff point for ELISArec (> 29.51%) was determined by the ROC curve analysis. For IDGArec both SeD and SpD were 100% and for ELISArec were 100% and 99.6% respectively. The p26rec has been maintained with stable working dilutions for more than three years stored at 4 ° C. The results demonstrated the high degree of confidence obtained with p26rec in the IDGArec and ELISArec tests and could therefore be recommended in the serological diagnosis of the AIE. / A Anemia Infecciosa Equina (AIE) é causada por um lentivírus da família Retroviridae e é considerada uma das viroses mais importantes em equinos no mundo. É uma infecção crônica, sem tratamento, prevalente em regiões de clima quente e úmido favorável à transmissão por insetos hematófagos. O diagnóstico oficial da doença é realizado através da detecção de anticorpos circulantes nos testes IDGA e ELISA. Visando aumentar a produção proteica e melhorar o desempenho dos testes sorológicos, a sequência do gene p26 foi otimizada com relação aos códons preferenciais para uso em E. coli e fusionada à proteína ligante de maltose com rendimento 2mg/ml de cultura celular. A proteína de fusão recombinante resultante (p26rec) foi detectada por SDS- PAGE e Western blot com anticorpo monoclonal anti-HIS. A p26rec do VAIE foi utilizada como antígeno no desenvolvimento e avaliação por IDGA e ELISA (IDGArec e ELISArec). Após a análise de 569 soros de equinos, foi determinada a sensibilidade diagnóstica (SeD) e a especificidade diagnóstica (SpD). O ponto de corte para o ELISArec (>29.51%) foi determinado pela análise da curva ROC. Para o IDGArec ambos a SeD e a SpD foram de 100% e para o ELISArec foram de 100% e 99,6% respectivamente. A p26rec vem se mantendo com título estável há mais de três anos armazenada a 4°C. Os resultados encontrados mostram o alto grau de confiança obtido com a p26rec nos testes IDGArec e ELISArec, podendo assim ser recomendados no diagnóstico sorológico da AIE.

Submitted by Maryse Santos (maryseeu4@gmail.com) on 2016-09-02T14:35:55Z No. of bitstreams: 1 Dissertação de mestrado PPGIBA Isabella da Motta Passos.pdf: 3280548 bytes, checksum: b79b047ec4d53bbab26965c89fd73380 (MD5) / Approved for entry into archive by Divisão de Documentação/BC Biblioteca Central (ddbc@ufam.edu.br) on 2016-09-16T12:44:12Z (GMT) No. of bitstreams: 1 Dissertação de mestrado PPGIBA Isabella da Motta Passos.pdf: 3280548 bytes, checksum: b79b047ec4d53bbab26965c89fd73380 (MD5) / Approved for entry into archive by Divisão de Documentação/BC Biblioteca Central (ddbc@ufam.edu.br) on 2016-09-16T12:50:07Z (GMT) No. of bitstreams: 1 Dissertação de mestrado PPGIBA Isabella da Motta Passos.pdf: 3280548 bytes, checksum: b79b047ec4d53bbab26965c89fd73380 (MD5) / Made available in DSpace on 2016-09-16T12:50:07Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Dissertação de mestrado PPGIBA Isabella da Motta Passos.pdf: 3280548 bytes, checksum: b79b047ec4d53bbab26965c89fd73380 (MD5) Previous issue date: 2011-09-20 / CAPES - Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior / Leprosy is a chronic infectious disease caused by Mycobacterium leprae, with a broad clinical spectrum, which affects the skin and nerves. Only 5% of infected individuals will develop the disease. Patients present with various clinical forms directly associated with the immune response, where individuals that have the tuberculoid pole, presents a vigorous cell-mediated response, with predominant Th1 cytokines profile, resulting in bacillary containment and individuals that have the lepromatous pole, presents humoral immune response with production of Th2 cytokines, which cause bacillary spread. Although they are described Th1 and Th2 responses in leprosy, various aspects of immunology of this disease have yet to be elucidated. Interleukin 17 (IL-17) is a cytokine capable of producing inflammation, indizindo quimicinas (CXCL8) and colony-stimulating factor granulocyte (G-CSG), with subsequent increase of neutrophils to the infection site. Plays an important role in the pathological development of autoimmune diseases and infection by extracellular pathogens, when produced by T helper lymphocytes. In intracellular infections, as is the case of mycobacteria, IL-17 acts in the defense early in the infection, being produced by cells of the innate system, such as lymphocytes Tδγ. This type of immune response has not been studied in leprosy and the aim to investigate the response pattern of IL-17 in leprosy patients was collected from peripheral blood to evaluate the levels of IL-17, IL-23 and IL-6 in serum by ELISA. We also analyzed the expression of genes for IL-17, IL-23 and IL-6 in biopsies of skin lesions by polymerase chain reaction quantitative (qPCR). This study aimed to evaluate the IL-17 and related cytokines response and compare the pattern of response observed among patients of the tuberculoid pole, lepromatous and healthy subjects. The results showed no detection of IL- 17 and IL-23 in peripheral blood in as many patients as in controls, but IL-6 was increased in lepromatous patients. When evaluated the expression of these cytokines in biopsy lesions of leprosy patients, all clinical forms showed low expression of IL-17, IL23 and IL-6 compared to healthy subjects. Moreover, negative correlation was demonstrated expression of IL-17 and IL-23 with the bacterial index. This absence of IL-17 in patients may be a constitutive feature of leprosy genetic or circumstantial event induced by a local presence of the pathogen, as an escape mechanism. / A hanseníase é uma doença infecciosa crônica causada pelo Mycobacterium leprae, de amplo espectro clínico, que afeta principalmente a pele e os nervos. Apenas 5% dos indivíduos infectados irão desenvolver a doença. Os pacientes apresentam diversas formas clínicas associadas diretamente com a resposta imune, onde indivíduos do polo tuberculoide apresentam vigorosa resposta mediada por células, com perfil predominante de citocinas Th1, resultando na contenção bacilar e indivíduos do polo virchowiano apresentam resposta imune humoral, com produção de citocinas Th2, que ocasionam a dispersão bacilar. Embora estejam descritas as respostas Th1 e Th2 na hanseníase, vários aspectos da imunologia desta doença precisam ainda ser elucidados. A interleucina 17 (IL-17) é uma citocina capaz de produzir inflamação, indizindo quimicinas (CXCL8) e fator estimulante de colônias de granulócitos (G-CSG), com aumento subsequente de neutrófilos para o local na infecção. Tem papel importante no desenvolvimento patológico das doenças autoimunes e na infecção por patógenos extracelulares, quando produzidas pelos linfócitos T helper. Nas infecções intracelulares, como é caso das micobacterioses, a IL-17 atua na defesa nos primeiros momentos da infecção, sendo produzida pelas células do sistema inato, como os linfocitos Tδγ. Este tipo de resposta imunológica ainda não havia sido estudada na hanseníase e com intuito de investigar o padrão de resposta IL-17 em pacientes com hanseníase foi realizada coleta de sangue periférico para avaliação da produção das citocinas IL-17, IL-23 e IL-6 no soro pela técnica de ELISA. Também foi avaliada a expressão dos genes para IL-17, IL-23 e IL-6 em biópsias de lesão cutânea pela reação em cadeia da polimerase quantitativo (qPCR). Este estudo teve como objetivo avaliar as citocinas relacionas à resposta IL-17 e comparar o padrão de resposta observado entre os pacientes dos pólos tuberculoide, virchowiano e indivíduos controles. Os resultados mostraram ausência de detecção de IL-17 e IL-23 no sangue periférico tantos nos pacientes quanto nos controles, porém IL-6 estava aumentada nos pacientes virchowianos. Quando avaliados a expressão dessas citocinas na biópsia lesão dos pacientes de hanseníase, todas as formas clínicas apresentaram baixa expressão de IL-17, IL23 e IL-6 em comparação aos controles. Além disso, foi demonstrada correlação negativa da expressão de IL-17 e IL-23 com o índice baciloscópico. Esta ausência de IL-17 em pacientes pode ser uma característica constitutiva genética da hanseníase ou um evento circunstancial induzido pela presença local do patógeno, como um mecanismo de escape.

Memoria para optar al Titulo Profesional de Médico Veterinario / La Necrosis Pancreática Infecciosa (IPN) es una enfermedad viral altamente contagiosa que afecta a los salmónidos, causando grandes mortalidades en individuos jóvenes. Se ha observado que la resistencia a esta enfermedad tiene un fuerte componente genético, identificado por un loci de rasgos cuantitativos (QTL) dentro del grupo de ligamiento 21. El objetivo de este trabajo consiste en identificar huellas de selección asociadas con la resistencia a IPN en poblaciones chilenas de salmón del Atlántico. Para esto se genotiparon cuatro poblaciones, calculando el desequilibrio de ligamiento (LD) dentro del grupo de ligamiento 21, buscando si existían diferencias para la región asociada al QTL. Los resultados mostraron que existen diferencias significativas en esta región en una de las poblaciones. De este modo se podría concluir que ésta población se vio sometida a un proceso selectivo de el o los genes presentes en la región responsable de la resistencia a IPN, modificando la estructura genética de la zona, presentando una huella de selección. Estos resultados muestran que ha existido un proceso selectivo para éste rasgo, que puede ser identificable a nivel del genoma. Sin embargo, es necesario tomar en cuenta la influencia de un proceso de admixtura, por lo que los resultados deben tomarse con precaución

Memoria para optar al Título Profesional de Médico Veterinario / Se realizó la prueba de ELISA para evaluar la respuesta serológica de gallinas ponedoras comerciales según el plan de vacunación contra la Bronquitis Infecciosa (BI) aplicado en un plantel comercial, consistente en 8 vacunas vivas aplicadas al día de edad, 4, 7, 10, 14, 17, 20 y 70 semanas de edad. Un total de 500 gallinas constituyó la muestra de 25 lotes de gallinas de diferentes edades y número de vacunas aplicadas (20 sueros de cada lote). Estos lotes de gallinas estaban alojados en distintos sectores de esta empresa. Los lotes de gallinas con 6, 7 y 8 vacunas aplicadas, presentaron títulos de anticuerpos contra BI con una Media Geométrica (MG) de 1137 a 6612. El análisis estadístico según el número de vacunas aplicadas, demostró que hubo un incremento significativo de los títulos de anticuerpos después de 6 vacunas, al obtenerse una Media Aritmética (MA) de 2341; y vuelve a haber un incremento significativo a una MA de 4711 con 7 vacunas. Sin embargo, con 8 vacunas se logra una MA de 4434, que es estadísticamente similar a la anterior. El análisis estadístico de los sectores de gallinas con 7 vacunas, demuestra títulos de anticuerpos contra BI con una MA de 2887 a 6193, que estadísticamente se puede diferenciar en dos grupos principales. Los sectores de gallinas con 8 vacunas presentaron títulos de anticuerpos con una MA en un rango de 3799 a 5622, que también se diferencian, en dos grupos estadísticamente diferentes. Se concluyó que los títulos de anticuerpos obtenidos de diferentes lotes de gallinas, son compatibles con la información bibliográfica y manuales técnicos de la prueba de ELISA. Además, la diversidad de títulos de anticuerpos obtenidos entre los distintos lotes o sectores de gallinas, con o sin número de vacunas similares, pueden estar influenciadas por las diferencias temporales de la aplicación de las vacunas, diferencias estructurales de los galpones y los sectores, diferencias de las vacunas, diferencias de manejo y personal de vacunación, entre otros factores. / ELISA test was performed to evaluate serological response of commercial laying hens according to a vaccination plan against Infectious Bronchitis (IB) applied in a commercial farm. Five hundred laying hens were sampled from 25 flocks of different ages and number of vaccines given (20 sera from each flock). Flocks were located in different sectors of the farm. Flocks of hens with 6, 7 and 8 vaccines given, showed antibody titers against IB with a Geometric Mean (GM) from 1137 to 6612. The statistical analysis according to the number of applied vaccines, showed that there was a significant increase in antibody titers after 6 vaccines with an Arithmetic Mean (AM) of 2341; and again there was a significant increase of the AM to 4711 with 7 vaccines. However, with 8 vaccines, the AM of 4434 was statistically similar to the previous group. Statistical analysis of the hen sectors with 7 vaccines showed antibody titers against IB with an AM of 2887 to 6193, which statistically can be differentiated into two main groups. Sectors of hens with 8 vaccines, exhibited antibody titres with an AM in a range of 3799 to 5622, which also differ in two statistical different groups. It was concluded that antibody titers obtained from different flocks of hens are consistent with literature and technical guidelines for ELISA test. In addition, the diversity of antibody titers obtained among flocks or sectors of birds, with or without number of similar vaccines, may be influenced by temporary differences in the application of vaccines, structural differences of the facilities and building sectors, differences associated to vaccines, differences of management and vaccination staff, among others.

Analiza un brote de enfermedad respiratoria compatible con el virus de bronquitis aviar (IBV) en un lote de pollos de carne vacunadas procedentes de una granja comercial ubicada en la zona norte de Lima, Perú. La cepa aislada es de bronquitis infecciosa y se tipifica como SL04A 0542. El análisis de la secuencia del fragmento de 383 bp del gene S1 demuestra una similitud del 91% con la cepa Mass 41. Se concluye que la cepa del brote no pertenece a las cepas de campo Massachusetts ni a otras comunes en Perú. Se evalúan diversos programas de vacunación in vivo utilizando ensayos de ciliostasis y se evidencia que una vacunación de pollos BB de un día de edad con la Cepa Ma5 más una revacunación a las dos semanas de edad empleando la cepa 4/91 provén un 100% de porcentaje de protección. / Tesis

Antropóloga social / Hace ya cuatro décadas que la situación medioambiental viene posicionándose como una problemática relevante: el crecimiento continuo y el parámetro de vida que se fija luego de la Revolución industrial, traen aparejados contaminación, pérdida de la biodiversidad, derretimiento de los casquetes polares, disminución de la capa de ozono, poniendo en riesgo la vida humana en el planeta. Esto da paso a un discurso que nos posiciona frente a una crisis ambiental a nivel global, que deriva de la forma en que nos relacionamos con el ambiente. Así, la problemática ambiental adquiere relevancia llegando a plantearse como un tópico ineludible en el debate político y un eje central del pensamiento contemporáneo, instalándose como una temática central en agendas globales, regionales y locales (Estenssoro, 2007: 36-37). Cada día nuevos actores se definen a sí mismos como preocupados y comprometidos con el cuidado del medioambiente y a pesar de que existe cierto consenso con respecto a su relevancia, los acercamientos que se hacen a esta problemática son diversos, identificando orígenes variados a la crisis y así como múltiples formas de hacerle frente. La naturaleza como objeto político no lo es sólo en tanto elemento de conservación sino de disputa y apropiación social (Leff: 2004)

El virus de la laringotraqueitis infecciosa (VLTI) es responsable de una importante enfermedad respiratoria en aves. La glicoproteína G (gpG) es un factor de virulencia en el VLTI, identificada como una proteína viral de unión a quimioquinas (CKBP) capaz de unirse a quimioquinas de aves y de otras especies modulando su actividad. Esto hace de la gpG una proteína de interés científico y comercial, requiriéndose, por lo tanto, tener suficiente cantidad de proteína disponible para futuros estudios funcionales y estructurales. Se describe un método para la producción de gpG recombinante del VLTI en un biorreactor de tanque agitado, infectando la línea celular de Spodoptera frugiperda Sf-9 con el baculovirus BV-gpG. Para este fin, fue necesario una caracterización previa del crecimiento de las células Sf-9; a su vez, optimizar la producción de gpG a pequeña escala y finalmente, definir parámetros operacionales en el biorreactor Biostat B plus que aseguren un ambiente hidrodinámico adecuado para el crecimiento e infección de las células. Las células Sf-9 mostraron una velocidad específica máxima de crecimiento (µmax) de 0,026/h, un tiempo de doblaje poblacional (TDP) de 27 horas y una densidad celular máxima de 8,7x106 cel/mL. A pequeña escala, la producción de gpG fue mayor al cosechar las células a las 72 horas post infección (hpi) independientemente de la multiplicidad de infección (MOI) empleada en el rango de 1,2 a 20. Una mayor producción de gpG fue obtenida al infectar las células durante la fase de crecimiento exponencial temprana comparada a la fase de crecimiento exponencial tardía. La densidad óptima de infección varió en dependencia del empleo de medio condicionado (2x106 cel/mL) o de medio fresco (7x106 cel/mL). En el manejo del biorreactor, se observó que el empleo de una velocidad de agitación de 170 rpm, una tasa de aireación de 0.04 vvm y un valor de pO2 de 40%, mostraron que las células Sf-9 no fueron sensibles a un estrés de corte de 0.38 N/m2 a un valor de número de Reynolds alto (20x104) en condiciones de aireación por sparger. Una eficiente producción de gpG en 3,5 L de biorreactor fue lograda infectando el cultivo en fase de crecimiento exponencial, a una densidad de 2x106 cel/mL, un MOI de 2 y cosechado a las 72 hpi. Mediante un ELISA sandwich se logró cuantificar el rendimiento volumétrico de gpG his, el cual fue de 3.66 mg/L, lo que representa un aumento de 2 fold comparado a la producción en el matraz. Los resultados demuestran la factibilidad de producir glicoproteína G en células de insecto infectadas con un baculovirus a escala de biorreactor. / Tesis

Made available in DSpace on 2014-06-11T19:32:53Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2009-06-22Bitstream added on 2014-06-13T18:44:27Z : No. of bitstreams: 1 caetano_ag_dr_jabo.pdf: 1343619 bytes, checksum: 387f2f16ea3939c118f65585ece520a6 (MD5) / Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e Tecnológico (CNPq) / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior (CAPES) / O vírus da Bronquite infecciosa (VBI) é um Coronavírus aviário que infecta aves domésticas de corte e postura, ocasionando grandes perdas econômicas na indústria avícola. Dada a natureza altamente contagiosa e aguda da doença, há uma grande necessidade do desenvolvimento de métodos diagnósticos que possam ajudar na detecção e/ou caracterização de estirpes variantes do VBI. Sendo assim, para auxiliar no diagnostico laboratorial da infecção, foi construída uma biblioteca de fragmentos de anticorpos monoclonais pela técnica de Phage-display. Para tanto, após a imunização de galinhas com a estirpe vacinal H120, foi extraído o RNA total do baço das aves imunizadas e amplificadas as cadeias variáveis leve e pesada que foram unidas por linker, originando o fragmento gênico de cadeia única scFv. Após a realização de três ciclos de seleção foram obtidos 400 clones que foram avaliados em ensaios de ELISA e Western blotting para averiguação da especificidade dos mesmos frente às proteínas da estirpe H120. Após realização dos testes foram selecionados dois clones, um que apresentou grande reatividade para com a proteína de nucleocapsídeo (N) (scFv-N) e o outro com reatividade para com a subunidade 1 da glicoproteína de superfície (S) (scFv-S1). O anticorpo scFv-S1 quando utilizado em ensaio de vírus-neutralização em ovos embrionados mostrou titulo significativo de proteção. Já em testes de ELISA utilizando estirpes de referência e isolados brasileiros de campo do VBI, o anticorpo scFv-N foi capaz de detectar todas as estirpes (H120, M41, Arkansas, IBVPR05, IBVPR02, IBVPR01, IBVSC01), enquanto que o scFv-S1 pode discriminar as estirpes pertencentes ao sorotipo Massachusetts (H120, M41 e IBVSC01) das demais estirpes variantes avaliadas. Os fragmentos de anticorpos scFv-N e scFv-S1 também mostraram bons resultados quando utilizados na técnica... / Infectious bronchitis virus (IBV), the coronavirus of the chicken, is one of the main causes of economic loss within the poultry industry, affecting the performance of meattype and egg-laying domestic fowls. Given the highly contagious and acute nature of the disease, there is an urgent need for the development of diagnostic assays that can detect and/or characterize IBV strains. In order to improve the laboratory diagnosis of IBV infection, phage-displayed recombinant antibody library derived from splenic mRNA of chickens immunized with H120 vaccine strain of infectious bronchitis virus (IBV) was constructed as single chain variable fragments (scFv) by overlap extension polymerase chain reaction (PCR) of the individual heavy (VH) and light (VL) chain variable gene segments. After three rounds of panning selection, ten scFv phage display antibodies of 400 randomly chosen clones were demonstrated to react with IBV antigens by ELISA. The western blot analysis selected two scFv antibodies reacting strongly with nucleocapsid (N) (scFv-N) protein or subunit 1 of spike glycoprotein (S1) (scFv-S1) of IBV. The anti-S1 scFv antibody showed a significant neutralization titre in embryonating chicken egg test. In ELISA analysis using reference IBV strains and Brazilian field isolates, the anti-N scFv antibody was able to detect all strains (H120, M41, ARKANSAS, IBVPR05, IBVPR02, IBVPR01, IBVSC01), while the anti-S1 could discriminate Massachusetts serotype (H120, M41 and IBVSC01) between variant strains. A scFv-based indirect immunoperoxidase (IP) procedure was also applied to detect infectious bronchitis virus (IBV) antigens in formalin-fixed tracheal tissue sections. Thus, the results showed that scFv-N and scFv-S1 antibodies can be used for the detection and differentiation of IBV strains.

A bronquite infecciosa das galinhas (BIG) é uma doença altamente contagiosa causada por múltiplos genotipos/sorotipos do vírus da bronquite infecciosa das galinhas (IBV), um coronavirus do grupo 3. Embora classicamente associado ao trato respiratório, alguns tipos de IBV têm sido descritos com tropismo pelos rins e pelos tratos reprodutivos e entéricos, o IBV pode ser detectado em diversos tipos de tecidos, e também pode acometer aves de todas as idades. Este estudo tem como objetivo verificar a freqüência do IBV em amostras de diversos órgãos e conteúdo entérico de avós, matrizes, poedeiras comerciais e frangos de corte, genotipar as amostras detectadas e estudar a diversidade molecular entre as amostras brasileiras de IBV. Um total de 844 pools de diversos órgãos e conteúdos entéricos provenientes de 200 lotes de avós, matrizes, poedeiras comerciais e frangos de corte, das regiões Sul, Sudeste, Centro-oeste e Nordeste do Brasil, colhidas durante o período de 2007 a 2009 foram testadas para a presença de IBV com um RT-PCR dirigido à região não traduzida 3′(3′UTR). As aves amostradas apresentaram sinais clínicos compatíveis com a BIG. Todas as amostras de IBV detectadas foram tipificadas utilizando uma RT-PCR dirigida ao gene de espícula do vírus. Dezenove amostras tipificadas como variante foram submetidas ao seqüenciamento parcial da região codificadora da subunidade S1 e à análise genealógica. Considerando os pools de órgãos e de conteúdo entérico, 45,50% foram positivos para a presença de IBV, dos quais, 84,63% pertencem ao genotipo Variante e 9,89% ao sorotipo/genotipo Massachusetts. Considerando os lotes, 73,50% foram positivos para IBV, sendo 77,55% variantes e 6,12% Massachusetts. A análise genealógica revelou quatro linhagens virais, todas agrupadas em um exclusivo grupamento de genotipo brasileiro. Estes resultados demonstram que o IBV está disseminado em todas as regiões avícolas brasileiras, com um predomínio massivo de genotipos não Massachusetts e uma elevada diversidade molecular, que deve ser levada em consideração para desenvolver medidas preventivas contra o IBV. / Infectious bronchitis (IB) is a highly contagious disease of poultry caused by multiple geno/serotypes of avian infectious bronchitis virus (IBV), a group 3 coronavirus. Though classically associated to the respiratory tract, IBV strains also have been described which harbor tropism for the kidneys and the reproductive and enteric tracts, and might be detected in multiple tissues and can also affect birds of all ages. This survey aimed to assess the frequency of in multiple organs and enteric content samples from grandparents, breeders, layers and broilers, to genotype the IBV strains detected and to study the molecular diversity amongst Brazilian IBV strains. A total of 844 pools of multiple organs and enteric contents from 200 flocks of grandparents, breeders, layers and broilers from the Southern, Southeastern, Central-Western and Northeastern Brazilian regions collected between 2007 and 2009 was screened for the presence of IBV with an RT-PCR target to the 3 untranslated region (UTR). The sampled birds presented symptoms compatible with IB. All IBV strains detected were then typed using an RT-PCR target to the spike gene of the virus. Nineteen strains type as variants were submitted to partial sequencing of the S1 coding region and genealogic analysis. Regarding the organs and enteric content pools, 45.50% were positive for the presence of IBV, from which 84.63% were variant and 9.89% Massachusetts. Taking into account the flocks, 73.50% were positive for IBV, being 77.55% variants and 6.12% Massachusetts. Genealogic analysis revealed four viral lineages, all grouped in an exclusive Brazilian genotype cluster. This results shown that IBV is widespread in all Brazilian poultry regions, with a massive predominance of non-Massachusetts genotypes and a high molecular diversity, which must be taken into account in order to develop preventive measures against IB.

Orientador: João Pessoa Araujo Junior / Resumo: O Vírus da Anemia Infecciosa Equina (VAIE) é um lentivírus que infecta equídeos causando a Anemia Infecciosa Equina. A doença possui distribuição mundial e o principal método de controle empregado é a eutanásia dos animais positivos, uma vez que não existe cura ou vacina disponível. No Brasil, a região do Pantanal é endêmica para a doença e, somente nessas áreas, a eutanásia não é obrigatória. A alta variação genética de lentivírus durante uma infecção prolongada é bem conhecida em várias espécies e também descrita em sequências de VAIE de outros países. Não há sequência genômica brasileira completa descrita ou mesmo um estudo da variação genética do vírus em um ambiente endêmico como o Pantanal Brasileiro. Com isso, este trabalho teve como objetivos a caracterização molecular do VAIE em equinos da região do Pantanal Brasileiro, e a padronização da PCR quantitativa (qPCR) para detecção do DNA proviral de VAIE. Duas amostras de plasma equino positivas para VAIE foram submetidas ao sequenciamento do genoma completo utilizando uma combinação de técnicas tradicionais e de nova geração. O genoma a partir do RNA viral foi obtido, anotado e comparado com sequências virais obtidas de animais naturalmente infectados em outros países. As sequências provenientes do Pantanal apresentaram identidade entre 75 e 77 % com sequências de outros países e 88,54 % entre si, classificando-as em um clado individual na árvore filogenética dos vírus já descritos, exibindo a maior variação genética de... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract: Equine infectious anemia virus (EIAV) is a lentivirus that infects equids and causes equine infectious anemia (EIA). This disease presents worldwide distribution and the main control method is the euthanasia of positive animals, since there is no cure or vaccine available. The Pantanal region in Brazil is endemic for the disease, and euthanasia is not mandatory in this area. The high lentivirus genetic variation during a prolonged infection is well known in several species and also described in EIAV sequences in other countries. There are no Brazilian viral genomic sequences available or even a study of genetic variation in an environment such as Brazilian Pantanal. This work aimed to characterize the EIAV complete genome in equines from Brazilian Pantanal and to standardize a quantitative real time PCR (qPCR) for detection of EIAV proviral DNA. Two plasma samples of EIAV positive horses were submitted to massive sequencing by combination of Sanger and NGS sequencing. The complete genome from viral RNA was obtained, annotated and compared with viral sequences of naturally infected animals from other countries. Sequences from Pantanal showed identity between 75% and 77% with other countries sequences and 88.54% with each other, classifying them into an individual cluster in EIAV cladogram and exhibiting the greatest genetic variation between sequences from the same country. With viral envelope gene analysis, both Brazilian sequences were classified as two quasispecies. A qPCR ... (Complete abstract click electronic access below) / Doutor