A bronquite infecciosa é uma doença viral, aguda e altamente contagiosa que afeta as aves da espécie Gallus gallus, de todas as idades, causando grandes perdas econômicas devido à mortalidade, queda na produção e qualidade dos ovos. Variações na sequência de aminoácidos na região hipervariável da subunidadade S1 da proteína de espícula (S) levam à emergência de novos sorotipos do vírus da bronquite infecciosa das galinhas (IBV). Este estudo teve como objetivo seqüenciar parcialmente o gene S1 para determinar a relação filogenética entre amostras vacinais e de campo com o intuito de investigar os genótipos circulantes. Cento e sessenta amostras foram coletadas, na forma de pools, de plantéis sintomáticos durante 2009/2010. Cada pool continha tecidos de 3 a 5 aves e foram compostos por diferentes órgãos (traquéia, pulmões, rins, conteúdo entérico, trato reprodutivo e swabs traqueais). As amostras foram triadas para a presença de IBV utilizando-se uma nested RT-PCR, direcionada a região 3UTR. As amostras positivas, (n=89) foram submetidas a nova nested RT-PCR dirigida para o gene S, resultando em 10 amplicons de 390pb que foram então submetidos a seqüenciamento de DNA e análise filogenética. As amostras brasileiras segregaram-se em dois grupos filogenéticos: Massachusetts (Mass) e tipos marcadamente brasileiros. Seis amostras agruparam-se no grupo Mass, com vacinas vivas atenuadas utilizadas no Brasil. Quatro amostras agruparam com cepas de campo brasileiras previamente descritas (acesso no GeneBank: FJ791257 to FJ791273). A identidade de aminoácidos no grupo Mass variou de 98% a 100%, sugerindo a detecção de vírus vacinal. Enquanto que entre as amostras brasileiras e o grupo Mass, a variabilidade de aminoácidos foi de 79% a 81%. Esses resultados mostram uma variação importante em genótipos virais circulantes nos plantéis industriais avícolas brasileiros. Portanto, o presente estudo reforça a contínua emergência e disseminação de novas linhagens de IBV no Brasil e a importância de constantes pesquisas e monitoramento, para que se compreendam aos fenômenos de emergência de novas linhagens e suas consequências, bem como para otimizar as medidas de controle do vírus. / Infectious bronchitis is a viral disease, acute and highly contagious that affects birds of the Gallus gallus species, of all ages, causing huge economic losses due to mortality, drop in production and quality eggs. Differences between serotypes of IBV are due to variations in the amino acids sequence in S1 hypervariable region subunit of spike protein (S). This study aimed to partially sequence the S1 gene to determine the phylogenetic relationship between field and vaccine viral types, and to investigate circulating genotypes in Brazil. One hundred and sixty pool samples were collected from symptomatic flocks during 2009/2010. Each pool contained tissues from 3 to 5 birds and was composed by different organs (tracheas, lungs, kidneys, enteric contents, tract reproductive and tracheal swabs). Samples were screened for the presence of IBV using a nested RT-PCR targeted to the 3UTR. Positive samples (n=56) were submitted to a nested RT-PCR target to S gene resulting in 10 amplicons of 390pb that were then submitted to DNA sequencing and analysis. Brazilian IBV genotypes segregated in two phylogenetic groups: Massachusetts (Mass) and Brazilian types. Six samples clustered in the Mass group, with live attenuated vaccines used in Brazil. Four samples grouped with field Brazilian strains previously described (GeneBank accession: FJ791257 to FJ791273). In Mass cluster aminoacids identity range from 98% to 100%, suggesting vaccine virus detection, in this last case. Moreover, the verified identity between samples from this study and Mass group ranged 79% to 81%. Therefore the present study reinforces the emergence and circulation of news lineages of IBV in commercial Brazilian flocks, as well as the importance of consistent research and monitoring to better understand this phenomen and its consequences, aiming to improved control measures against the virus.

Orientador: Hélio José Montassier / Banca: Ricardo Luiz Moro de Sousa / Banca: Samir Issa Samara / Resumo: A bronquite infecciosa das galinhas (BIG) é uma doença infecciosa causada pelo coronavírus aviário (vírus da bronquite infecciosa - VBI) que está amplamente disseminada entre as criações avícolas comerciais na maior parte do mundo. Há atualmente no Brasil, uma predominância de infecções causadas por estirpes do VBI classificadas no genótipo variante (BR-I), que revelam diferenças marcantes de antigenicidade com relação à estirpe vacinal Massachusetts, rotineiramente usada em nosso país. Isso resulta em uma baixa imunidade-cruzada e consequentemente em um menor nível de proteção contra isolados de campo do genótipo BR-I. Dessa forma, os objetivos principais do presente estudo foram formular uma vacina experimental inativada com, uma estirpe IBVPR-05 variante do genótipo BR-1 do VBI acrescida de um novo adjuvante oleoso; testá-la após a administração, com 1 dia de idade, da vacina comercial atenuada com estirpe Massachusetts, avaliando-se as respostas imunes humorais e cito-mediadas, bem como o estado de proteção ao desafio com essa estirpe variante do VBI através da avaliação histopatológica e quantificação absoluta da carga viral presente na traqueia e rins de aves vacinadas e desafiadas com a variante. Os resultados deste estudo demonstraram que esse esquema imunoprofilático (vacinação das aves com 1 dia de idade com vacina atenuada comercial e revacinação com 14 dias de idade com vacina inativada experimental homóloga) induziu aumentos significativos nos níveis de anticorpos lacrimais e séricos do isótipo IgG anti-VBI e também na expressão dos genes relacionados às respostas imunes cito-mediadas, sobretudo o da cadeia  do CD8 e da Granzima A, nas aves vacinadas, que se mostraram associados com a diminuição de lesões histológicas e uma menor carga viral na traqueia e rins nas aves vacinadas e desafiadas. Concluiu-se que as respostas imunes humoral e celular de memória conferidas ... / Abstract: The infectious bronchitis (BIG) is an infectious disease caused by avian coronavirus (infectious bronchitis virus - IBV) that is widespread among commercial poultry flocks in the world. There are currently in Brazil, a predominance of infections caused by strains of IBV classified in variant genotype (BR-I), which reveal striking differences in antigenicity with regard to the vaccine strain Massachusetts, routinely used in this country. The consequence is a low cross-immunity and lower level of protection against Brazilian field isolates of genotype BR-I. Thus, the main objectives of this study were to formulate an experimental inactivated vaccine with a variant strain of IBV previously characterized as genotype BR-I and added of a new oil adjuvant and test it after an administration, at 1 day old, of a commercial attenuated Massachusetts vaccine, followed by the evaluation of humoral and cellular immune (CMI) responses, as well as the state of protection upon challenge with this variant strain of IBV by histopathological examination and absolute quantification of viral load present in the trachea, and kidneys of these birds vaccinated and challenged with this variant strain. The results of this study demonstrated that this immunoprophylactic approach (vaccination of birds with 1 day old with attenuated commercial vaccine and revaccination at 14 days of age with annual experimental inactivated vaccine) was able to elicit significant increases in the serum and tear levels of anti-IBV antibodies of IgG isotype, and also in the expression of CMI genes, especially of CD8  chain and Granzyme A in the vaccinated birds, which were associated with decreased histological lesions and reduced viral load in the trachea and kidney of vaccinated and challenged birds. It was concluded that humoral and cellular memory immune responses conferred by vaccination with this Brazilian variant strain of IBV combined to a previous Massachusets ... / Mestre

Introdução: A dermatite atópica (DA) é uma das afecções cutâneas mais freqüentes da infância. Não há consenso sobre o efeito do aleitamento materno no desenvolvimento e evolução da DA. Para que isto ocorra, é necessário aprofundar os conhecimentos sobre os fatores que podem estar envolvidos nessa relação, como, por exemplo, a influência do aleitamento materno na colonização do paciente atópico pelo Staphylococcus aureus (S. aureus). Objetivo: Avaliar uma potencial associação entre aleitamento materno e colonização pelo S. aureus em crianças com DA. Pacientes e Método: Estudo transversal envolvendo 79 crianças de 4 a 24 meses, de ambos os sexos, com DA, em acompanhamento no Ambulatório de Dermatologia Sanitária de Porto Alegre/RS, e 72 mães. Foram registrados dados clínico-epidemiológicos e de alimentação da criança. Pesquisou-se a presença do S. aureus em swab nasal e cutâneo nas crianças e swab nasal das respectivas mães. Para a análise dos dados foram realizados os testes Qui-quadrado de Pearson e Exato de Fischer. Resultados: Entre as crianças que estavam em aleitamento materno, S. aureus foi encontrado na cavidade nasal de 8 (25,8%) e na pele (fossas cubitais) de 4 (12,9%). Entre aquelas que não estavam sendo amamentadas, S. aureus foi encontrado na cavidade nasal de 10 (20,8%) e na pele de 11 (22,9%). Entre as mães, 16 (22,2%) apresentaram crescimento de S. aureus no material proveniente do swab nasal. Não se observou associação significativa entre aleitamento materno e colonização pelo S. aureus da cavidade nasal ou pele da criança. Entretanto, houve concordância entre a colonização pelo S. aureus na cavidade nasal das mães e na cavidade nasal e/ou pele dos filhos. Das 72 duplas, houve concordância em 56 (77,8%). Conclusão: O aleitamento materno não parece ter influência na colonização muco-cutânea pelo S. aureus em crianças com dermatite atópica. / Introduction: Atopic dermatitis (AD) is the most common chronic skin disease in infancy. Studies on the effects of breastfeeding on the development of AD have shown controversial results. The importance of this condition as potentially harmful deserves further studies; in particular, it remains unclear whether colonization of atopic patients by Staphylococcus aureus (S. aureus) through breastfeeding is relevant to the development of AD. Objective: To examine the potential relation between breastfeeding and colonization by S. aureus in atopic patients. Method: Transversal study of atopic patients, aged from 4 to 24 months, both genders, receiving outpatient care and 72 mothers. Data on infant breastfeeding practices and on clinical-epidemiological profile were registered. Swabs of the infants’ nares and skin (cubital fossa) and swabs of the mothers’ nares were collected. For univariate analysis, X2 (chi-square) and Fischer Exact’s test were used. Results: Among breastfed children, S. aureus was isolated from 8 (25.8%) infants’ nares swabs and from 4 (12.9%) skin swabs. Among not breastfed children, S. aureus was isolated from 10 (20.8%) infants’ nares swabs and from 11 (22.9%) skin swabs. Sixteen mothers (22.2%) had S. aureus isolated from their nares swabs. There was no significant association between breastfeeding and S. aureus colonization (child skin and/or nares). However, there was a degree of concordance for S. aureus carriage among mothers and infants. Among 72 pairs, 56 (77.8%) were concordant. Conclusion: Breastfeeding was not associated with S. aureus muco-cutaneous colonization in atopic infants.

Submitted by (edna.saturno@ufrpe.br) on 2017-02-13T13:03:08Z No. of bitstreams: 1 Luciana Cavalcanti de Arruda Coutinho.pdf: 4647135 bytes, checksum: a250b87f919a5205eb093e027264fbce (MD5) / Made available in DSpace on 2017-02-13T13:03:08Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Luciana Cavalcanti de Arruda Coutinho.pdf: 4647135 bytes, checksum: a250b87f919a5205eb093e027264fbce (MD5) Previous issue date: 2014-06-11 / Equine infectious anemia (EIA ) is a difficult control disease, characterized by a wide variety of clinical signs that appear in recurring and dynamic cycles. According with Brazilian law, positive animals in the agar gel immunodiffusion (AGID) must be sacrificed, therefore, there is a dependency relationship between diagnosis and disease control. For reasons related with peculiar characteristics of the infection and immune response EIA, this test may not be able to detect newly infected animals. Considering that the IDGA has a decisive role in the fate of the animal tested, we study the possibility of complementing the diagnostic with the ELISA. In this context, in a previous study, we developed the recombinant protein p26 (rp26) from VAIE, produced in yeast Pichia pastoris, aiming their use as antigens in immunoassays . The purpose of the current study was to test this antigen in AGID, ELISA and Western blot, standardize an indirect ELISA (iELISA) using the rp26 protein from equine infectious anemia virus (EIAV) as antigen, and also compare it with the pattern test. In all these immunoassays was identified the functionality of the RP26 antigen. After analyzing 101 AGID - positive sera from animals and 704 AGID - negative at the new iELISA, was observed excellent concordance (kappa=0,9) between tests. The cutoff point (15%) was selected by observing the distribution of the relative values of the optical densities of the samples IDGA -positive and negative. The relative sensitivity and specificity were 97 % and 97,9 %, respectively. The excellent results using the rp26 as antigen in iELISA enables the consideration of a new alternative diagnostic for EIA. / A anemia infecciosa equina (AIE) é uma doença de difícil controle, caracterizada por uma ampla variedade de sinais clínicos que surgem em ciclos recorrentes e dinâmicos. De acordo com a legislação brasileira, animais positivos no exame sorológico Imunodifusão em gel de ágar (IDGA) devem ser sacrificados, existindo, portanto, uma relação de dependência entre o diagnóstico e o controle da doença. Por questões relacionadas às características da infecção e resposta imunológica peculiar à AIE, este teste pode não ser capaz de detectar animais recém-infectados. Tendo em vista que o IDGA tem papel decisivo no destino do animal testado, estuda-se a possibilidade de complementação do diagnóstico com ELISA. Diante deste cenário, em um estudo anterior, foi desenvolvida a proteína p26 recombinante (rp26) do VAIE, produzida na levedura Pichia pastoris, vislumbrando seu uso como antígeno em imunoensaios. A finalidade do atual estudo foi testar o antígeno produzido no IDGA, ELISA e Western blot bem como padronizar um ELISA indireto (iELISA) utilizando a proteína rp26 do vírus da anemia infecciosa equina (VAIE) como antígeno, e ainda compará-lo com o teste padrão IDGA. Em todos os imunoensaios referidos foi possível identificar a funcionalidade da rp26 como antígeno. Após a análise de 101 soros de animais IDGA-positivos e 704 IDGA-negativos no novo iELISA, foi observada uma excelente concordância (kappa=0,9) entre os testes. O ponto de corte (15%) foi selecionado pela observação da distribuição dos valores relativos das densidades ópticas das amostras IDGA-positivas e IDGA-negativas. A sensibilidade e especificidade relativas foram de 97% e 97,9%, respectivamente. Os ótimos resultados encontrados com o uso da rp26 como antígeno no iELISA possibilita a consideração de uma nova alternativa de diagnóstico para AIE.

Submitted by (edna.saturno@ufrpe.br) on 2017-02-22T16:21:30Z No. of bitstreams: 1 Veronica Arns da Silva.pdf: 500226 bytes, checksum: 2a21789fca9964130708e123521a1f6c (MD5) / Made available in DSpace on 2017-02-22T16:21:30Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Veronica Arns da Silva.pdf: 500226 bytes, checksum: 2a21789fca9964130708e123521a1f6c (MD5) Previous issue date: 2007-02-22 / Conselho Nacional de Pesquisa e Desenvolvimento Científico e Tecnológico - CNPq / The Infectious Myonecrosis Viral (IMNV), restricted action to the Brazilian northeast up to 2006, is disease of bigger negative impact in the shrimp cultured of the region. Having the objective to verify occurrence and evolution of the IMNV in Litopenaeus vannamei cultured on the coast of Pernambuco, Brazil, histopathological examination in 60 samples of shrimps from four farms in two cycles of aquaculture was proceeded. The histopatological findings had been correlated the data of the wet mount and the inquiry. Suggestive injuries of IMNV (coagulation necrosis, muscular hemocitic infiltration, spheroid of the ectopic lynphoid organ) were found in samples of the four studied farms with bigger occurrences in the first cycle. However, in the rainy period it had reduction of the occurrence, being associated the handling change. The raise time and the density were variables which influenced significantly (P<0,05) in the manifestation of the IMNV. / A Mionecrose Infecciosa Viral (IMNV), de ação restrita ao nordeste brasileiro até 2006, é a doença de maior impacto negativo na carcinicultura da região. Com objetivo de verificar ocorrência e evolução da IMNV em Litopenaeus vannamei, cultivado no litoral de Pernambuco, Brasil, procedeu-se ao exame histopatológico em 60 amostras, provenientes de quatro fazendas, em dois períodos (estio e chuvoso). Os resultados histopatológicos foram relacionados com os do exame a fresco e do inquérito. Em amostras das quatro fazendas foram identificadas lesões sugestivas de IMNV (necrose de coagulação, infiltração hemocítica na musculatura, esferóides ectópicos do órgão linfóide), havendo maior ocorrência de lesões no período de estio. Entretanto, no período chuvoso houve redução da ocorrência, sendo associada a mudança de manejo. O tempo de cultivo e a densidade de estocagem, foram variáveis que influenciaram significativamente (P<0,05) na manifestação da IMNV.

O presente trabalho descreve o desenvolvimento de uma técnica de nested-PCR para a detecção de ADN do vírus da laringotraqueíte infecciosa (VLTI) utilizando primers que amplificam uma região do gene que codifica a glicoproteína E viral. A técnica padronizada amplificou amostras isoladas e de campo, mostrando alta sensibilidade e especificidade tomando o isolamento em ovos embrionados SPF como técnica de referência. O seqüenciamento de uma amostra positiva por nested-PCR confirmou a identidade do produto amplificado. Foram submetidas a nested-PCR padronizada amostras de traquéia, pulmão e conjuntiva de 51 granjas de poedeiras comerciais procedentes da região de Bastos, Estado de São Paulo, que apresentou um surto caracterizado por sinais respiratórios, queda na produção de ovos e aumento da mortalidade. Vinte e três granjas foram positivas a nested-PCR e vinte e duas amostras foram isoladas. Considerando os resultados das duas técnicas, vinte e quatro granjas resultaram positivas. Não foram detectados os vírus das doenças de Newcastle, pneumovirose aviaria, nem Mycoplasma gallisepticum. O vírus da bronquite infecciosa das galinhas foi detectado em uma granja, e Mycoplasma synoviae em oito. A alta freqüência de ocorrência do VLTI, a alta concordância entre o quadro clínico observado e detecção do VLTI e o resultados do diagnóstico diferencial demonstram que o VLTI foi o agente etiológico causador de um surto de doença respiratória observado na região de Bastos, Estado de São Paulo. / The present work describes the development of a nested-PCR technique for the detection of Infectious laryngotracheitis virus (ILTV) DNA using primers to amplify a region that encodes the glycoprotein E. The standardized technique amplified isolated and from clinical strains, offering high sensitivity and specificity, using the isolation in SPF chicken embryos such as reference test. The identity of the amplified product of the nested-PCR was confirmed by DNA sequencing. Trachea, lung and conjunctiva samples from fifty-one commercial layer farms from Bastos region, São Paulo State, which showed an outbreak characterized by respiratory signs, decreased egg production and increased mortality, were tested by the standardized nested-PCR. Twenty-three farms were positive by nested-PCR and samples of twenty-two farms were isolated. Twenty-four farms were positives when the results of both techniques were considered. Newcastle disease virus, Avian Pneumovirus and Mycoplasma gallisepticum were not detected. Infectious bronchitis virus was detected in one farm and Mycoplasma synoviae was detected in eight farms. The high frequency of occurrence of ILTV, the high agreement between clinical signs observed and ILTV detection and the results of differential diagnosis demonstrate that ILTV was the etiological agent of an outbreak respiratory disease observed in Bastos region, São Paulo State.

A cinomose é uma doença infecciosa de ocorrência mundial que acomete diversas espécies de carnívoros domésticos e selvagens. Devido ao alto nível de mortalidade de pacientes com cinomese, tratamentos alternativos e eficazes tornam-se necessários. A terapia utilizando células-tronco é uma ciência em formação considerada uma alternativa terapêutica promissora no tratamento de diversas patologias degenerativas, hereditárias e inflamatórias. Portanto, o presente estudo teve como objetivo avaliar e comparar a resposta sistêmica dos animais infectados com o vírus da cinomose canina tratados com terapia medicamentosa convencional (Grupo Suporte - GS) e animais que receberam tratamento convencional associado à terapia celular com células-tronco mesenquimais de epitélio olfatório fetal canino (Grupo suporte + terapia celular- GSTC). O GS foi composto por cinco animais (n=5) e o GSTC composto por três animais (n=3) que foram acompanhados pelo período de quinze dias com avaliação da evolução da patologia de acordo com as principais alterações clínicas e laboratoriais através da análise das alterações hematológicas, avaliação bioquímica e urinária. Os resultados nos mostram que houve uma alta taxa de mortalidade em ambos os grupos (GS=4) e (GSTC=2) devido à gravidade dos sinais clínicos na fase aguda da doença, nos fornecendo dados imprecisos da evolução clínica dos pacientes. Conclui-se que faz necessário, estudos posteriores que selecionem animais na fase crônica da doença, devido à estabilização do quadro clínico e às características celulares das células-tronco, que podem se tornar um potencial método de controle do processo inflamatório sistêmico causado pelo vírus da cinomose, bem como promotor da reparação de células e tecidos lesionados pela injúria viral direta, através da diferenciação e repovoamento de células danificadas, restaurando a integridade e funcionalidade do Sistema Nervoso Central (SNC). / Canine distemper is an infectious disease of world occurrence that affects many species of domestic and wild carnivores. Due to the high level of mortality in patients with cinomese, and effective alternative treatments are necessary. Cellular therapy is a promising therapeutic alternative for the treatment of various degenerative, hereditary and inflammatory diseases. Therefore, this study aimed to evaluate and compare the systemic response of animals infected with canine distemper virus treated using conventional drug therapy (suport group - SG) and with cell therapy with using mesenchymal stem cells from canine fetal olfactory epithelium (Suport group + therapy cell), following the evolution of the pathology according to the main clinical and laboratory findings through the analysis of hematological abnormalities, and urinary biochemical evaluation. The GS was composed of five animals (n = 5) and the GSTC composed of three animals (n = 3) were followed by fifteen days period with evaluation of the evolution of the disease according to the main clinical and laboratory findings by analyzing haematological, biochemical and urinary assessment. The results showed that a high mortality rate (SG=4) e (SG+SC=2) due to the severity of clinical signs in the acute phase of the disease, providing inaccurate data on the clinical evolution of patients. We conclude that is necessary, to select animals that further studies in the chronic phase of the disease, due to the stabilization of the clinical and cellular characteristics of stem cells, which can be a potential method of controlling systemic inflammation caused by the virus distemper, as well as a promoter of cell and tissue repair lesioned by direct viral injury, through differentiation and repopulation of damaged cells, restoring the integrity and functionality of the Central Nervous System (CNS).

Orientador: Hélio José Montassier / Banca: Antônio Carlos Paulillo / Banca: Ricardo Luís Moro de Sousa / Resumo: Nesse estudo, um isolado de campo do vírus da bronquite infecciosa (VBI) no Brasil (IBVPR-12), previamente classificado como um genótipo variante, foi caracterizado de forma comparativa com a estirpe M41 do VBI, sendo levantadas as características de patogenicidade em diferentes órgãos como a traqueia, o pulmão, os rins, as gônadas e as tonsilas cecais (patotipo) e a imunidade cruzada com relação à estirpe vacinal H120 do VBI (protectotipo), incluindo as respostas imunes humorais sistêmicas e locais induzidas. Para tanto, foram utilizados grupos experimentais de galinhas "specific pathogen free" (SPF) previamente vacinadas ou não com a estirpe H120 do VBI e depois desafiados com essa variante viral, ou com a estirpe M41. Para essas duas estirpes virais foram avaliadas a capacidade de replicação e as lesões produzidas em diferentes órgãos, a atividade inibidora do movimento ciliar no epitélio traqueal e as respostas imunes humorais desenvolvidas no soro sanguíneo e na secreção lacrimal dessas aves. Foram observadas diferenças marcantes na patogenicidade e no tropismo tecidual desses vírus, sendo que a estirpe M41 apresentou replicação mais intensa e lesões mais pronunciadas no trato respiratório, especialmente na traqueia, enquanto que a estirpe variante foi encontrada de forma mais distribuída em vários dos órgãos analisados, tendo-se replicado e provocado menos lesões na traqueia, mas alcançando maior replicação e tendo causado lesões mais severas nos rins e nos testículos. Nas regiões teciduais mais afetadas por lesões, a presença do VBI foi detectada por marcação específica com anticorpos policlonais contra a nucleoproteína do VBI pela técnica de imuno-histoquímica. As aves vacinadas com a estirpe H120 do VBI, revelaram proteção parcial contra a estirpe variante em órgãos como traqueia e... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract: In this study a Brazilian field isolate of infectious bronchitis virus (IBV), previously classified as variant genotype, was characterized comparatively with the M41 strain of IBV, by evaluating the pathogenicity in different organs (trachea, lung, kidney, gonads and caecal tonsil) and the cross-immunity with H120 vaccine strain, including the systemic and local humoral immune responses. Experimental groups of specific pathogen free (SPF) chickens were vaccinated or not with H120 strain of IBV and challenged with this variant isolate. The viral replication and histopathology in different tissues and organs, the ability to inhibit ciliar movement of tracheal epithelial cells, and local and systemic humoral immune responses were evaluated in these chickens. The pathogenicity and tissue tropism of these IBV strains showed marked differences, and while the M41 strain damaged more the respiratory tract, specially the trachea, the variant isolated has a wide tissue distribution, showing less replication and lesions in the trachea, but affecting more severely the kidney and the testicles. In the most affected tissue regions, the presence of IBV was detected by immunohistochemistry technique, using an anti-nucleoprotein polyclonal antibodies. The H120 vaccine induced against this variant isolate a partial protection with regard to the infection of trachea and kidney and no cross-protection to the infection of testicles. In conclusion, a new pathotype and a new protectotype of a variant genotype of a Brazilian IBV isolate were characterized in this study with regard to Massachusetts genotype and serotype strains of IBV, indicating the importance for... (Complete abstract click electronic access below) / Mestre

A bronquite Infecciosa das galinhas (BIG) é uma doença respiratória aguda e altamente contagiosa que acomete galinhas de diferentes idades. Foram utilizadas duas amostras do VBIG de problemas respiratórios e entéricos em frangos. As amostras foram classificadas como variantes do VBIG através da técnica de RT-PCR multiplex e sequenciamento parcial do gene S1. As amostras foram inoculadas em frangos de corte e aves SPF (specific pathogen free). As aves apresentaram sinais respiratórios 36 horas após inoculação independente da origem viral, entérica ou respiratória, sendo mais discretos nas aves SPF. As alterações macroscópicas mais evidentes foram congestão da mucosa traqueal, pulmão e rins. A análise histopatológica mostrou lesões semelhantes àquelas encontradas em outros sorotipos. A análise filogenética mostrou que as duas amostras eram similares e diferentes das amostras Massachusetts. Esses resultados sugerem que os isolados classificados como variantes apresentam potencial patogênico para aves. / Infectious bronchitis (IB) is an acute respiratory disease, highly contagious which affects chickens of different ages. This study was composed with two isolates obtained from broilers with respiratory and enteric problems. These isolates were classified as IBV variants by the multiplex RT-PCR and by sequencing of S1 gene. Isolates were inoculated in broilers and SPF birds. The birds showed respiratory signs 36 hours post inoculation, independently of the enteric or respiratory source. The respiratory signs were less evident on SPF birds. The histopathology analysis showed significant lesions on the trachea, lungs and kidneys. The phylogenetic analysis of S1 gene showed that both isolates were similar and different from Massachusetts strains. These results suggest that the isolates classified as variant have pathogenic potential for birds.

O presente trabalho descreve o desenvolvimento de uma técnica de nested-PCR para a detecção de ADN do vírus da laringotraqueíte infecciosa (VLTI) utilizando primers que amplificam uma região do gene que codifica a glicoproteína E viral. A técnica padronizada amplificou amostras isoladas e de campo, mostrando alta sensibilidade e especificidade tomando o isolamento em ovos embrionados SPF como técnica de referência. O seqüenciamento de uma amostra positiva por nested-PCR confirmou a identidade do produto amplificado. Foram submetidas a nested-PCR padronizada amostras de traquéia, pulmão e conjuntiva de 51 granjas de poedeiras comerciais procedentes da região de Bastos, Estado de São Paulo, que apresentou um surto caracterizado por sinais respiratórios, queda na produção de ovos e aumento da mortalidade. Vinte e três granjas foram positivas a nested-PCR e vinte e duas amostras foram isoladas. Considerando os resultados das duas técnicas, vinte e quatro granjas resultaram positivas. Não foram detectados os vírus das doenças de Newcastle, pneumovirose aviaria, nem Mycoplasma gallisepticum. O vírus da bronquite infecciosa das galinhas foi detectado em uma granja, e Mycoplasma synoviae em oito. A alta freqüência de ocorrência do VLTI, a alta concordância entre o quadro clínico observado e detecção do VLTI e o resultados do diagnóstico diferencial demonstram que o VLTI foi o agente etiológico causador de um surto de doença respiratória observado na região de Bastos, Estado de São Paulo. / The present work describes the development of a nested-PCR technique for the detection of Infectious laryngotracheitis virus (ILTV) DNA using primers to amplify a region that encodes the glycoprotein E. The standardized technique amplified isolated and from clinical strains, offering high sensitivity and specificity, using the isolation in SPF chicken embryos such as reference test. The identity of the amplified product of the nested-PCR was confirmed by DNA sequencing. Trachea, lung and conjunctiva samples from fifty-one commercial layer farms from Bastos region, São Paulo State, which showed an outbreak characterized by respiratory signs, decreased egg production and increased mortality, were tested by the standardized nested-PCR. Twenty-three farms were positive by nested-PCR and samples of twenty-two farms were isolated. Twenty-four farms were positives when the results of both techniques were considered. Newcastle disease virus, Avian Pneumovirus and Mycoplasma gallisepticum were not detected. Infectious bronchitis virus was detected in one farm and Mycoplasma synoviae was detected in eight farms. The high frequency of occurrence of ILTV, the high agreement between clinical signs observed and ILTV detection and the results of differential diagnosis demonstrate that ILTV was the etiological agent of an outbreak respiratory disease observed in Bastos region, São Paulo State.