Glicocorticoides (GCs) modulam a reprodução, interferindo na produção de hormônios gonadais, estradiol (E2) e progesterona (P4). Concomitantemente, E2 e P4 também influenciam a liberação de cortisol. Além disso, em altas concentrações os GCs interferem na via de sinalização da insulina prejudicando o funcionamento dos órgãos, incluindo os do sistema reprodutivo bem como a produção de P4 pelo corpo lúteo (CL). O CL utiliza glicose para manter sua atividade, e o cortisol interfere na via de sinalização da glicose em diversos tecidos, porém ainda não existem estudos quanto à sua atividade no CL canino, tampouco quanto à presença de genes relacionados à via de sinalização dos GCs neste órgão. Os objetivos deste estudo foram caracterizar a expressão dos genes relacionados à via de sinalização dos GCs e da insulina em CL de cadelas cíclicas e identificar expressão diferencial destes genes entre os dias 20 e 60 do diestro, que correspondem à fase final de crescimento do CL e à fase de regressão luteínica, respectivamente. Ainda, avaliar as concentrações basais de cortisol salivar (CS) e metabólitos fecais de glicocorticoides (MGFs) em diferentes dias do diestro (10, 20, 30, 40, 50 e 60) de cadelas cíclicas, comparando com os níveis de E2 e P4 já publicados; correlacionar os valores obtidos nas duas técnicas; e estabelecer um intervalo de valores basais de CS e MFGs para o diestro. Para esta pesquisa foram selecionadas 28 cadelas cíclicas saudáveis; foi realizado o sequenciamento de nova geração (RNA-Seq) dos CLs coletados de 18 animais em dias específicos do diestro (dia 10, 20, 30, 40, 50 e 60 pós-ovulação); das outras 10 cadelas foram coletadas amostras de fezes e saliva, durante todo o diestro, e realizada mensuração da concentração de MFGs e CS. Nos resultados de RNA-Seq foi identificada a expressão dos genes NR3C1, HSD11B1, HSD11B2, SLC2A4, INSR e IRS1. Os genes NR3C1 (p>0,3; FDRCortisol. Corpo lúteo. Insulina. Diestro. RNA-Seq 0,6) e SLC2A4 (pCortisol. Corpo lúteo. Insulina. Diestro. RNA-Seq Cortisol. Corpo lúteo. Insulina. Diestro. RNA-Seq 0,02; FDRCortisol. Corpo lúteo. Insulina. Diestro. RNA-Seq 0,1) não apresentaram expressão diferencial no diestro. Os genes HSD11B1 (p=0,0001; FDR=0,0021), HSD11B2 (p=0,013; FDR=0,06), INSR (p=0,002; FDR=0,01) mostraram maior expressão no dia 20 do diestro, quando comparado ao dia 60. O gene IRS1 (p=0,0006; FDR= 0,006) estava mais expresso no dia 60 do diestro em relação do dia 20. As dosagens hormonais demonstraram que no dia 10 do diestro (CS=0,0656 ± 0,0237µg/dL e MGFs=110,41 Cortisol. Corpo lúteo. Insulina. Diestro. RNA-Seq 46,51pg/ng) as duas mensurações apresentaram concentrações menores que nos demais dias do diestro (CS=0,1027 Cortisol. Corpo lúteo. Insulina. Diestro. RNA-Seq 0,0496µg/dL e MFGs=220,22 Cortisol. Corpo lúteo. Insulina. Diestro. RNA-Seq 183,74pg/ng). A concentração média de CS=0,0972µg/dL (0,011-0,246µg/dL) e MFGs=189,875pg/ng (9pg/ng-1067,2pg/ng) foi definida para o diestro canino. Estes resultados sugerem que o CL canino também é influenciado pelo cortisol circulante da mesma forma que outros tecidos já estudados, podendo interferir na via de sinalização da insulina e, consequentemente, prejudicar seu funcionamento e o sucesso reprodutivo. Além disso, em relação aos resultados das dosagens hormonais, os níveis baixos de CS e MFGs no dia 10 do diestro corroboram com os achados em literatura e com a queda de E2 neste mesmo período, o que sugere uma associação entre a produção de ambos os hormônios. / Glucocorticoids (GCs) modulate reproduction by interfering in the gonadal hormones production, estradiol (E2) and progesterone (P4). Likewise, E2 and P4 influence release of cortisol. Furthermore, high concentrations of GCs may harm the functioning of organs, including reproductive organs and progesterone (P4) production by the corpus luteum (CL). CL utilizes glucose to maintain its own activity and cortisol interferes with the glucose signaling pathway in several tissues. Studies characterizing cortisol activity and expression of genes related to GC signaling pathways in canine CL are still scarce. The aims of this study were to characterize the expression of genes related to GCs and insulin signaling pathways in cyclic canine CL and to identify differential expression of these genes between day 20 and day 60 of diestrus which correspond, respectively to luteal final growth and regression phases. Moreover to evaluate the basal concentrations of salivary cortisol (SC) and fecal glucocorticoid metabolites (FGMs) on different days of diestrus (10, 20, 30, 40, 50 e 60) in cyclic bitches, moreover to compare E2 and P4 levels already published. As well as to correlate the values of SC and FGMs, and also to establish an interval of basal concentrations of SC and FGMs for diestrus. For this research 28 healthy cyclic bitches were selected; RNA-Seq of the corpora lutea from 18 animals on specific days of diestrus (day 10, 20, 30, 40, 50, 60) was made. Saliva and fecal samples were collected from the other 10 bitches during diestrus phase. Enzyme immunoassay was made to measure the concentrations of SC and FGMs. The RNA-Seq results identified the expression of the genes NR3C1, HSD11B1, HSD11B2, SLC2A4, INSR e IRS1. No difference on the expression of NR3C1 (p>0,3; FDR>0,6) and SLC2A4 (p>0,02; FDR>0,1) was observed during diestrus. Nevertheless HSD11B1 (p=0,0001; FDR=0,0021), HSD11B2 (p=0,013; FDR=0,06), INSR (p=0,002; FDR=0,01) showed a higher expression on day 20 of diestrus and the gene IRS1 (p=0,0006; FDR= 0,006) presented higher expression on day 60 of diestrus. Results related to hormonal evatuations showed lower SC and FGMs concentrations on day 10th (SC=0,0656 ± 0,0237µg/dL and FGMs=110,41 ± 46,51pg/ng) than on the other days of diestrus (SC=0,1027 ± 0,0496 µg/dL e FGMs=220,22 ± 183,74 pg/ng). Average concentrations of SC=0,0972µg/dL (0,011-0,246µg/dL) and FGMs=189,875pg/ng (9pg/ng-1067,2pg/ng) were defined for canine diestrus. These data suggest that canine CL is influenced by cortisol similarly to other tissues in which cortisol may interfere in the insulin signaling pathway and, consequently, its function. Besides that, lower levels of SC and FGMs on day 10th of the diestrus corroborate with the literature data and with the decrease in E2 production at the same period. This data suggest that the production of both hormones are associated.

Tesis presentada a la Universidad de Chile para optar al grado de Doctora en Bioquímica / Antecedentes: El síndrome de ovario poliquístico (SOP), patología endocrinometabólica, afecta alrededor del 15% de mujeres en edad fértil, afectando principalmente la función del ovario, aunque también altera la función de otros tejidos de importancia reproductiva, como el endometrio. El 70% de las mujeres con SOP son obesas y entre el 60 – 80 % de ellas presentan resistencia a la insulina. La obesidad genera un ambiente pro-inflamatorio leve pero crónico, caracterizado por una alta producción de citoquinas pro-inflamatorias. Además, adiponectina y TNF-α, marcadores de obesidad, tienen un papel importante en la sensibilidad y la acción de insulina en los tejidos. Los niveles de adiponectina (sensibilizador de insulina) disminuyen, mientras que los de TNF-α (regulador negativo de la vía de la insulina) aumentan en mujeres obesas. Estos cambios podrían afectar el estado energético del endometrio, tejido que exhibe una anormal señalización de insulina bajo la condición SOP (ambiente hiperandrogénico / hiperinsulínico). Objetivo: Evaluar si el ambiente proinflamatorio representado por TNF-α, afecta la señalización de insulina a través de una disminución de la señalización de adiponectina o por la inactivación de IRS1, en endometrios de mujeres obesas con SOP. Metodología: En muestras de suero provenientes de cuatro grupos de estudio: Delgadas (peso normal), Delgadas-SOP, Obesas y Obesas-SOP (este último grupo es el único con hiperinsulinemia / hiperandrogenemia) (n=7 para cada grupo), se determinaron mediante ELISA los niveles de adiponectina, TNF-α e IL-6. En endometrios provenientes de los cuatro grupos de estudio, se determinó los niveles de proteína / mRNA de moléculas asociadas a las vías de señalización de TNF-α (TNF-α, TNFR1, TNFR2, NFκB (p65), IKK, IκB) y adiponectina (adiponectina, AdipoR1, AdipoR2, APPL1, AMPK) por IHQ / WB y qPCR; además, se evaluó el ambiente pro-inflamatorio a través de la proteína CD68 y los niveles de IL-6 e IL-6R, mediante IHQ. Los estudios in vitro se realizaron en cultivos de células estromales endometriales humanas (líneas T-HESC / St-T1b) bajo condiciones hiperandrogénicas / hiperinsulínicas, y se determinó el efecto de TNF-α sobre moléculas asociadas a su vía de señalización y a la vía de adiponectina. Se analizó además, la participación de NFκB, usando un inhibidor de NFκB (PDCT), en el efecto de TNF-α sobre la expresión de adiponectina en células St-T1b, por ICQ / WB; finalmente, se evaluó el efecto de TNF-α sobre los niveles de IRS1 fosforilado en tirosina (activante) o serina (inactivante) y sobre la activación de quinasas (S6K, JNK, AKT), posiblemente involucradas en la inactivación de IRS1 en una condición de resistencia a la insulina. Resultados: Se observó una menor concentración de adiponectina en sueros de Obesas-SOP (p<0,05), no se observaron cambios en las concentraciones de TNF-α sérica, mientras que IL-6 aumenta en sueros de Delgadas-SOP y ambos grupos de Obesas versus Delgadas (p<0,05). A nivel tisular, los niveles de adiponectina disminuyen (p<0,05) y los de TNF-α aumentan (p<0,001) en endometrios de Obesas-SOP. El contenido proteico de los receptores de TNF-α son mayores en grupos Delgadas-SOP y ambos grupos de Obesas (p<0,05); sin embargo, el nivel de TNFR2 y de NFκB nuclear presenta un importante aumento en endometrios de Obesas-SOP (p<0,001). En relación a IL-6 endometrial, ésta es menor en Delgadas versus los otros grupos (p<0,05), mientras que su receptor no cambia. Además, un mayor ambiente pro-inflamatorio se observó en endometrios de Obesas-SOP versus los otros grupos (p<0,01). Los ensayos in vitro, los cuales confirman en gran medida lo observado en el modelo ex vivo, muestran que la condición hiperandrogénica / hiperinsulínica disminuye los niveles de adiponectina y moléculas asociadas a su vía (APPL1 / AMPK), al igual que el efecto observado con TNF-α a través de la activación de NFκB (p<0,05). Además, TNF-α induce la expresión de su propia vía de señalización, aumentando los niveles de TNFR1 y -2, moléculas que activan NFκB y el contenido nuclear de NFκB. Por último, TNF-α aumenta la fosforilación en serina de IRS1 y la activación de S6K, JNK y AKT. Conclusión: En consecuencia, la obesidad podría afectar la señalización de insulina en el endometrio, a través del aumento del ambiente pro-inflamatorio y la producción de TNF-α local, lo que generaría una disminución de la señalización de adiponectina a través de NFκB y/o una inactivación de IRS1 a través de S6K/JNK bajo condiciones hiperandrogénicas / hiperinsulínicas, lo que comprometería el metabolismo energético necesario para el normal funcionamiento del tejido endometrial, lo que explicaría, en parte, las fallas reproductivas observadas en endometrios de mujeres obesas e hiperinsulínicas con SOP / Background: Polycystic ovary syndrome (PCOS), an endocrine-metabolic disorder, affects about 15% of women of childbearing age, mainly affecting ovarian function, but also alters the function of other tissues of reproductive importance, such as the endometrium. Seventy percent of women with PCOS are obese and between 60 - 80% of them have insulin resistance. Obesity generates a mild but chronic pro-inflammatory environment, characterized by high production of pro-inflammatory cytokines. In addition, TNF-α and adiponectin, obesity markers, have an important role in insulin sensitivity and action in tissues. In fact, adiponectin level (insulin sensitizer) decreases, whereas those of TNF-α (negative regulator of insulin pathway) increases in obese women. These changes could affect the energy state of the endometrium, tissue exhibiting abnormal insulin signaling under the SOP condition (hyperandrogenic / hyperinsulinemic environment). Objective: To evaluate whether the proinflammatory environment represented by TNF-α, affects insulin signaling through a decrease in adiponectin signaling or inactivation of IRS1, in endometrium of obese women with PCOS. Methodology: In serum samples from the four study groups: Lean (normal-weight), Lean-PCOS, Obese and Obese-PCOS (the latter group is the only one with hyperinsulinemia / hyperandrogenaemia) (n = 7 for each group) were determined: adiponectin, TNF-α and IL-6 levels by ELISA. In endometrium from the four study groups, was determined the levels of protein / mRNA of molecules associated with the signaling pathways of TNF-α (TNF-α, TNFR1, TNFR2, NFκB (p65), IKK, IκB) and adiponectin molecules (adiponectin, AdipoR1, AdipoR2, APPL1, AMPK) by IHC / WB and qPCR; additionally, the proinflammatory environment through CD68 protein and IL-6 / IL-6R levels, was evaluated by IHC. In vitro studies were conducted in human endometrial stromal cells (lines T-HESC / St-T1b) under hyperandrogenic / hyperinsulinic conditions, and the effect of TNF-α on molecule levels associated with its signaling pathway and adiponectin pathway, was determined by WB. NFκB participation was further analyzed using a NFκB inhibitor (PDCT) of TNF-α action on adiponectin expression in St-T1b cells by ICC; finally, it was evaluated the effect of TNF-α on in tyrosine phosphorylated levels of IRS1 (activating) or serine (inactivating) and kinases activation (S6K, JNK, AKT), possibly involved in the inactivation of IRS1 in an insulin resistance condition. Results: A lower concentration of adiponectin in serum from Obese- PCOS (p <0.05) was observed, no changes were found in serum concentrations of TNF-α, whereas IL-6 increases in serum from Lean-PCOS and both Obese groups versus the Lean group (p <0.05). At tissue level, adiponectin content decreases (p <0.05) and TNF-α increases (p <0.001) in Obese-PCOS endometrium. The protein content of TNF-α receptors are higher in Lean-PCOS groups and both Obese groups (p <0.05); however, nuclear NFκB and TNFR2 levels present an important increase in endometrium from Obese-PCOS (p <0.001). Regarding endometrial IL-6, a lower level in Lean versus the other groups was observed (p <0.05), while receptor content does not change. In addition, a higher pro-inflammatory environment was observed in Obese-PCOS endometrium versus the other studied groups (p <0.01). In vitro assays, which largely confirm what was observed in the ex vivo model, show a decrease of adiponectin levels and molecules associated with their pathway (APPL1 / AMPK) under hyperandrogenic / hyperinsulinic conditions, as well as, the effect observed with TNF-α through NFκB activation (p <0.05). In addition, TNF-α induces the expression of their own signaling pathway, increasing levels of TNFR1 and -2, molecules that activate NFκB and nuclear NFκB content. Finally, TNF-α increases phosphorylated IRS1 levels in serine and activation of S6K, JNK and AKT. Conclusion: Consequently, obesity may affect insulin signaling in the endometrium, by increasing the proinflammatory environment and local production of TNF-α, generating a decrease in adiponectin signaling through NFκB and / or inactivation of IRS1 through S6K / JNK under hyperandrogenic / hyperinsulinic conditions, which compromise the energy metabolism necessary for normal functioning of endometrial tissue. These abnormalities may explain in part, reproductive failures observed in endometria from obese and hyperinsulinic women with PCOS / Conicyt; Fondecyt

Atualmente, o diabetes mellitus (DM) é uma doença onerosa para cofres públicos, devido às complicações micro e macrovasculares usualmente devido a não adesão à terapêutica. Tornando importante identificar novas variáveis que influenciam a não adesão à farmacoterapia, principalmente na atenção primária, onde os estudos no Brasil são escassos. Objetivo: Avaliar os fatores que influenciam a adesão a farmacoterapia em pacientes com diabetes tipo 1 (T1DM) e diabetes tipo 2 (T2DM) atendidos em uma unidade básica de saúde. Métodos: Esse é um estudo transversal realizado em pacientes com T1DM e T2DM com idades entre 18 a 90 anos, usuários de insulina e agentes anti-diabéticos selecionados de uma unidade básica de saúde do município de Franca - SP. Os instrumentos MedTake (MT), Morisky-Green (TMG), Índice de Complexidade da Farmacoterapia (ICFT), Índice de Complicações do Diabetes (CDI) e Teste Auto-Compliance (ACT) foram aplicados em todos pacientes por um único pesquisador do estudo. Os pacientes foram divididos em T1DM e T2DM com pontuações no TMG>80 para o grupo aderente e TMG<=80 para o grupo não aderente. Uma análise de regressão logística foi realizada para avaliar o efeito das variáveis na adesão ao tratamento, assim usamos como variável dependente o TMG e as variáveis independentes foram: clínicas, sociodemográficas, relacionadas aos medicamentos, CDI e Auto-Compliance. Esse modelo produziu odds ratio (OR) com medidas de associação com seus respectivos intervalos de confiança (IC). Os IC que não incluíram 1 foram considerados estatisticamente significantes (p<0.05). Para controlar os possíveis efeitos de confusão do sexo, idade e tempo de diagnóstico, o modelo de regressão logística múltipla produziu OR ajustadas. Resultados: Houve forte associação entre depressão e não adesão a farmacoterapia nos pacientes com T1DM nas faixas etárias de 41-60 anos, OR=4.6(1.4-14.2) fato que não ocorrem nas outras faixas etárias. A insuficiência cardíaca congestiva (ICC) foi associada a não adesão à farmacoterapia em pacientes com T2DM OR=2.3(1.1-5.1).9 Conclusão: Equipes multidisciplinares, gestores e formuladores de políticas públicas de saúde devem considerar a depressão e ICC no manejo dos pacientes com DM em relação a não adesão à farmacoterapia / Currently, diabetes is disease onerous to public safes due to micro and macrovasculares complications and non-adherence to therapeutic. In this sense, is crucial to identify new variables that influence the non-adherence to pharmacotherapy, mainly in the primary care, where the studies in Brazil are scared. Objective: To evaluate the factors that influence the adherence to pharmacotherapy in patients with type 1 diabetes (T1DM) and type 2 diabetes (T2DM) attended in the a primary health care unit. Methods: This is a cross-sectional study in patients with T1DM and T2DM aged 18-90 years, insulin and anti-diabetic drugs users selected from a primary health care unit in Franca-SP. The MedTake (MT), Morisky-Green (TMG), Pharmaco-Complexity Index (CPI), Diabetes Complication Index (CDI) and Self-Compliance Test (ACT) instruments were applied in all patients by a single study investigator. Patients were divided into T1DM and T2DM with scores in the TMG > 80 for the adherent group and TMG <= 80 for the non-adherent group. A logistic regression analysis was performed to evaluate the effect of the variables on the adherence to the treatment, so we used as a dependent variable the TMG and the independent variables were: clinical, sociodemographic, drug related, CDI and AutoCompliance. This model produced odds ratios (OR) with measures of association with their respective confidence intervals (CI). The CI that did not include 1 were considered statistically significant (p <0.05). To control the possible confounding effects of gender, age and time of diagnosis, the multiple logistic regression model produced adjusted OR. Results:There was a strong association between depression and non-adherence to pharmacotherapy in patients with T1DM in the age groups of 41-60 years, OR = 4.6 (1.4- 14.2), a fact that does not occur in other age groups. Congestive heart failure (CHF) was associated with non-adherence pharmacotherapy in patients with T2DM OR = 2.3 (1.1- 5.1). Conclusions: Multidisciplinary teams, managers and formulators of public health policies should consider depression and CHF in the management of patients with DM in relation to non-adherence to pharmacotherapy

O balanço energético corporal é mantido através de alterações na ingestão de calorias e no gasto energético. O prolongado balanço energético positivo, em que a ingestão excede o gasto, promove obesidade. A obesidade resulta do aumento de triacilglicerois no tecido adiposo, que também passa a apresentar inflamação de baixo grau crônica. O resultado disso envolve a redução da capacidade de tamponamento dos ácidos graxos livres circulantes e subsequente deposição de gordura em territórios ectópicos como musculatura esquelética e fígado, além de aumentar o risco de desenvolver o diabetes Mellitus tipo 2. Assim, a obesidade é um fator de risco importante para doenças metabólicas e suas comorbidades, dentre elas a doença gordurosa hepática não alcoólica. Uma proposta terapêutica para intervir na obesidade e/ou nas comorbidades associadas é o uso de substancias com ação anti-inflamatória. Considerando a possibilidade de novo uso para alguns produtos liberados para uso e com potencial tóxico já avaliado, foi escolhido avaliar o efeito do fitoterápico Uncaria tomentosa. Para isso, foram utilizados dois modelos de camundongos: (1) obesidade induzida por dieta hiperlipídica (DH), camundongos machos c57bl/6, alimentado com DH por 10 semanas, e (2) camundongo geneticamente obeso, ob/ob. A dose e tempo de tratamento escolhidos basearam-se no resultado da tolerância à insulina determinada inicialmente. Os animais receberam via oral o extrato da UT na dose de 50 mg/kg, uma vez ao dia, por 5 dias consecutivos. Seguindo-se ao tratamento, os animais foram submetidos a testes de tolerância a glicose e insulina, análise do coeficiente respiratório e depois a eutanásia, para retirada do fígado e sangue. O tecido hepático foi submetido a técnicas histológicas para verificar a morfologia e quantificação das gotículas de gordura, extração das proteínas celulares e RNAm para realização de western blot típico e reação em cadeia da polimerase (PCR), respectivamente. Também foi utilizada imunohistoquímica com anticorpo anti-F4/80 para comprovar infiltrado inflamatório. O tratamento com UT reduziu a glicemia de jejum cerca de 15 e 20% nos modelos DH e ob/ob, respectivamente, e a insulimenia para 54% no grupo DH, enquanto no grupo ob/ob houve um aumento de 2 vezes na insulinemia com o uso da UT. Houve uma redução de 22% no índice de massa corpórea (IMC) acompanhada de maior gasto energético com o tratamento no modelo DH. A esteatose hepática foi reduzida em aproximadamente 30% e a presença de infiltrados inflamatórios em 70% em ambos os modelos. Além disso, o grau de fosforilação do IRS1 no resíduo serina foi reduzido em 25% nos camundongos alimentados com DH após tratamento com UT, acompanhando a maior sensibilidade à insulina desses animais em relação aos obesos não tratados. Diante desses resultados, concluímos que o extrato bruto da Uncaria tomentosa melhora a homeostase da glicose e reverte a esteatohepatite incipiente a estatose benigna. O tratamento com Uncaria tomentosa pode ser uma estratégia terapêutica potencial no combate a alterações metabólicas associadas à obesidade como a doença hepática gordurosa não alcoólica (DHGNA) de início imediato. / The body\'s energy balance is maintained through changes in calorie intake and energy expenditure. The prolonged positive energy balance, in which the intake exceeds the expense, promotes obesity. Obesity results from the increase of triacylglycerols in adipose tissue, which also starts to present chronic low-grade inflammation. The result of this involves the reduction of the buffering capacity of circulating free fatty acids and subsequent fat deposition in ectopic territories such as skeletal muscle and liver, as well as increasing the risk of developing type 2 diabetes mellitus. Thus, obesity is an important risk factor for metabolic diseases and their comorbidities, among them non-alcoholic fatty liver disease. A therapeutic proposal to intervene in obesity and/or associated comorbidities is the use of substances with anti-inflammatory action. Considering the possibility of new use for some products released for use and with toxic potential already evaluated, it was chosen to evaluate the effect of the herbal remedy Uncaria tomentosa (UT), popularly known as cat\'s claw. Two models of mice were used: (1) higt fat diet induced obesity (HFD), male mice c57bl / 6, fed HFD for 12 weeks, and (2) genetically obese mice, ob/ob. The dose and time of treatment chosen were based on the initially determined insulin tolerance result. The animals received orally the UT extract at the dose of 50 mg/kg once daily for 5 consecutive days. Following the treatment, the animals were submitted to glucose and insulin tolerance tests, analysis of the respiratory coefficient and then euthanasia, for removal of the liver and blood. Liver tissue was submitted to histological techniques to verify the morphology and quantification of fat droplets, extraction of cellular proteins and mRNA for typical western blot and polymerase chain reaction (PCR), respectively. Immunohistochemistry with anti-F4 / 80 antibody was also used to prove inflammatory infiltrate. Treatment with UT reduced fasting glucose by 15 and 20% in the HFD and ob/ob models respectively, and the insukinemia to 54% in the HFD group, whereas in the ob/ob group there was a 2-fold increase in insulinemia with the use of UT. There was a 22% reduction in body mass index (BMI) accompanied by greater energy expenditure with HFD treatment. Hepatic steatosis was reduced by approximately 30% and the presence of inflammatory infiltrates by 70% in both models. In addition, the degree of IRS1 phosphorylation at the serine residue was reduced by 25% in the mice fed HFD after treatment with UT, following the higher insulin sensitivity of these animals compared to the untreated obese. In view of these results, we conclude that the crude extract of Uncaria tomentosa improves glucose homeostasis and reverts incipient steatohepatitis to benign steatosis. Treatment with Uncaria tomentosa can be a potential therapeutic strategy in the action against obesity-related metabolic alterations such as non-alcoholic fatty liver disease (NAFLD).

Investigar os efeitos do consumo de leucina sobre a adiposidade e a funcionalidade do tecido adiposo branco em ratos alimentados com dietas controle ou hiperlipídicas (HL). Ratos obesos foram submetidos a 6 semanas de suplementação com leucina. Ao final, podemos observar que a leucina exerceu efeitos distintos, dependente da condição metabólica em vários parâmetros relacionacidos como a adiposidade. Estas respostas foram pronunciadas no grupo de animais alimentados com dieta HL e suplementados com leucina, principalmente pela maior massa adiposa em diferentes coxins adiposos, maior hipertrofia de adipócitos da região subcutânea (SC), incremento na síntese de novo de ácidos graxos em adipócitos SC, bem como, aumento na incorporação de ácidos graxos em adipócitos SC. Além disso, observamos efeitos da leucina sobre a expressão gênica de PPAR<font face=\"symbol\">g, GPAT, FABP e PEPCK no tecido adiposo SC. Assim, foi demonstrado que a leucina quando utilzada em modelo de obesidade e resistência à insulina acaba favorecendo maior incremento da massa de gordura SC via PPAR<font face=\"symbol\">g. / Investigate the effects of leucine consumption on adiposity and functionality of white adipose tissue in rats fed with control or hyperlipidic (HL) diets. After obesity characterization, animals were submitted to 6 weeks of leucine supplementation. At the end, we could observe that leucine exerted distinct effects, depending on the metabolic condition in several parameters related to adiposity. These responses were more pronounced in animalsfed with HL diet and supplemented with leucine, mainly due to higher adipose mass in different fat pads, larger adipocytes in subcutaneous fat (SC), increase of de novo fatty acids synthesis, as well as, an increase in fatty acids incorporation in SC adipocytes. Furthermore, we observed effects of leucine supplementation on PPAR<font face=\"symbol\">g, GPAT, FABP and PEPCK gene expression in SC fat. Thus, it was demonstrated that leucine supplementation, when used in an obesity and insulin resistance model, favors the increase of adipose mass in SC fat via PPAR<font face=\"symbol\">g.

Altas concentrações de ácidos graxos saturados desencadeiam resistência à insulina no músculo esquelético e o estresse de retículo endoplasmático (RE) é sugerido neste processo. Este estudo objetivou investigar, em células musculares L6, os efeitos do tratamento com palmitato sobre o estresse de RE e a ativação do NF-kB, relacionando-os com o prejuízo na expressão do GLUT4. Pelos resultados, observou-se que o tratamento com 0,75 mM de palmitato induziu redução no conteúdo de GLUT4 e Slc2a4. Os marcadores de estresse como GRP78, PERK/EIF2a e IRE1a/XBP-1/TRAF2 apresentaram pouca ativação. O fator transcricional NF-kB apresentou-se aumentado em seu conteúdo proteico e RNAm. A atividade de ligação do NF-kB à região promotora do Slc2a4 mostrou aumento independente do grau de fosforilação de IKK. Em suma, observou-se que o palmitato reprime a expressão do Slc2a4 e que induz pouco estresse de RE em células L6. Por outro lado, a participação do NF-kB parece ser importante no controle deste fenômeno reduzindo a expressão do Slc2a4 e prejudicando a homeostasia da glicose. / High concentrations of saturated fatty acids trigger insulin resistance in skeletal muscle and endoplasmic reticulum stress (ER) is suggested in this process. This study aimed to investigate, in L6 muscle cells, the effects of palmitate treatment on ER stress pathways and activation of NF-kB, relating them to the impaired expression of GLUT4. The results showed that treatment with 0.75 mM of palmitate induced reduction in the amount of GLUT4 and Slc2a4. Stress markers such as GRP78, PERK/EIF2a and IRE1a/XBP-1/TRAF2 showed little activation. The transcription factor NF-kB were increased in protein content and mRNA. The binding activity of NF-kB to the promoter region of Slc2a4 showed increased independent from the phosphorylation of IKK. Finally, it was observed that palmitate represses the expression of Slc2a4 and that this fatty acid induces little activation of reticulum stress pathways in L6 cells. On the other hand, the involvement of NF-kB appears to be important to control this phenomenon, reducing the expression of Slc2a4 and impairing glucose homeostasis.

A redução dos hormônios gonadais seja pelo processo natural de falência folicular denominado nas humanas de menopausa, seja pela ooforectomia, está associado com aumento da incidência de doença cardiovascular em mulheres no período pós menopausa. O objetivo desse estudo é avaliar o efeito da ooforectomia e a suplementação com DHEA sobre a morfologia dos cardiomiócitos, a expressão de proteínas celulares envolvidas com crescimento e apoptose celular e a função cardíaca. A ooforectomia induz maior ganho de massa corporal e do coração, no entanto, a avaliação morfológica do VE mostrou que há uma redução da espessura dos cardiomiócitos e do número de núcleos. Ademais, o immunoblotting demonstrou uma diminuição na expressão das proteínas IR, IRS1 e AKT nos corações das ratas ooforectomizadas e os parâmetros hemodinâmicos foram semelhantes entre os grupos. O tratamento com DHEA reverteu a redução do número de núcleos sem interferir nos demais parâmetros avaliados. Os dados obtidos nos permite concluir que a ausência dos esteroides gonadais por si só resulta em modificações morfológicas dos cardiomiócitos que podem estar relacionados ao processo de apoptose sem afetar a função de bomba do coração e o uso do DHEA é capaz de reverter a redução numérica dos núcleos. / The reduction of gonadal hormones by menopause, the natural process of failure in the human follicle, or by surgical removal, is associated with increased incidence of cardiovascular disease in postmenopause women. The aim of this study is to evaluate the effect of oophorectomy and the DHEA supplementation on the morphology of cardiomyocytes, on the expression of proteins involved in cell growth, on apoptosis (IGF-1R, IR, IRS-1, PI3K, AKT, MAPKp42/44, JAK2) and on the cardiac function. Oophorectomy enhances both the body mass e heart weight, however the left ventricle showed a reduction in cardiomyocyte thickness by 15% and in the number of nuclei by 20%. Moreover the immunoblotting showed a decrease from 25 to 50% in the expression of IR, IRS-1 and AKT proteins in the hearts of oophorectomized rats. The hemodynamic parameters were similar between groups. Treatment with DHEA reversed the reduction in the number of nuclei with no change in the other parameters evaluated. Our data allow us to conclude that the absence of gonadal steroids per se induces morphological changes in the cardiomyocytes that may be related to apoptosis with no change on the heart pump function. The DHEA supplementation is able to reverse the reduced number of nuclei.

Como a grande maioria dos tecidos e órgãos, a estrutura da mucosa lingual é influenciada por diversos fatores, dentre eles os nutricionais e os metabólicos. Dessa maneira, a subnutrição protéica pré-natal, associada a inúmeras patologias pós-natais, e a atividade da insulina e de IGF-I, representam importantes pontos a serem correlacionados na avaliação morfológica e funcional do tecido. Assim, avaliou-se no presente estudo, os efeitos da subnutrição protéica pré e pós-natal e da renutrição pós-natal, sobre a taxa de renovação do epitélio, relacionando-a à atividade da insulina e do IGF-I, no intuito de encontrar possível correspondência entre as alterações metabólicas e morfofuncionais, com a atividade desses importantes hormônios sobre o desenvolvimento do epitélio lingual, nas fases púbere e adulta. Para tanto, os grupos experimentais foram formados por animais heterogênicos (n=3) de acordo com a ração oferecida, protéica ou hipoprotéica, e com as respectivas idades, nos grupos N, D (nutridos e desnutridos aos 60 dias de vida, fase na qual o período púbere é finito), R (renutridos a partir de 21 até alcançarem 60 dias de vida), NN (nutridos até 100 dias de vida) e RR (renutridos desde o desmame até alcançarem 100 dias de vida). Após avaliação sob microscopia de luz com técnicas rotineiras de histologia e imunohistoquímicas para a identificação do IGF-I, Insulina e respectivos receptores, verificou-se que as camadas da mucosa lingual não apresentaram diferenças entre os grupos estudados. As papila filiformes, de forma triangular ao corte nos animais do grupo N, nem sempre foram detectadas nos grupos S e R, sendo que na fase adulta, (grupos NN e RR) apresentaram-se sob a forma de bastonete. Relativamente à tipificação das fibras colágenas, as do tipo I predominaram no grupo S, sendo verificada uma homogeneidade na distribuição entre as fibras dos tipos I e III nos demais grupos. As densidades de células imunorreativas à Insulina e seu receptor, (IR), bem como IGF-I e seu receptor (IGF-IR) apresentaram-se elevadas nos grupos S e R quando comparadas ao grupo N, e semelhantes nos grupos NN e RR. / Similarly to many tissue and organs, the structure of lingual mucosa is influenced by many factors, among nutritional and metabolic factors. This way, the pre-natal protein under nutrition associated to several post-natal pathologies and the activity of IGF-I and insulin, represents important points to be correlated in the morphological and functional tissue evaluation. Thus, the effects of pre and post-natal protein under nutrition and post-natal re-nutrition on the epithelial renewal taxes relating it to insulin and IGF-I activity, in order to find possible association between the morph functional changes with the activity of these important hormones on the development of the lingual epithelium in the puberal and adult phase. For this purpose, the experimental groups were formed by heterogenic animals (n=3) according to diet (protein and hypoprotein), and, with the respective ages in the groups N and S (nourished and under-nourished at 60 days old, when the puberal period is finite), R (re-nourished from 21 up to 60 days old), NN (nourished up to 100 days old) and RR (re-nourished from weaning up to 100 days of age). After observation under light microscopy with routine histological and immunehistochemical tecnhiques for identification of IGF-I, insulin and respective receptors, it has been verified that the layers of lingual mucosa do not present differences among studied groups. The filliform papillae of triangular shape in group N animals not always been detected in the S and R groups, being in the adult phase (NN and RR groups) presented under bastonete form. Related to tipification of collagen fibers, the type I was predominant in S group, being verified homogeneity in the distribution of type I and III fibers in the other groups. The density of immune reactive cells to insulin and its receptor (IR), as well as IGF-I and its receptor (IGF-IR) were higher in the S and R groups when compared to N group, and were similar in the groups NN and RR.

O diabetes mellitus (DM) é caracterizado por hiperglicemia associada à falta ou à ineficiência da insulina. DM também é marcado por alterações em diversos processos celulares que precisam ser mais bem entendidos. Estudou-se a via da autofagia em diferentes macrófagos, verificando se o tratamento com insulina é capaz de modular esse processo. Foram estudados macrófagos derivados da medula óssea (BMM), do lavado broncoalveolar (LBA) e do tecido esplênico de ratos Wistar, machos, diabéticos (aloxana, 42 mg/kg, i.v., 10 dias), ratos diabéticos tratados (insulina 4UI, s.c.) e respectivos controles. Para caracterização do modelo e avaliação do efeito da insulina sobre o processo autofágico, as seguintes análises foram realizadas: (a) glicemia, número de leucócitos no sangue periférico, número de células do LBA; (b) concentrações de citocinas: interleucina (IL)-1beta, fator de necrose tumoral (TNF)-alfa, IL-6, IL-4, IL-10, cytokine-induced neutrophil chemoattractant (CINC)-1 e CINC-2 no sobrenadante do LBA pela técnica de ELISA; (c) caracterização de macrófago alveolar (MA) do LBA quanto a antígenos de superfície (MHCII, pan-macrophage KiM2R, CD11b) e marcadores autofágicos (proteína de cadeia leve associada a microtúbulo (LC)3 , gene/proteína relacionado à autofagia (ATG) pela técnica de citometria de fluxo e microscopia confocal ; (d) estudo dos macrófagos diferenciados, a partir da medula óssea, por citometria de fluxo e microscopia confocal; (e) estudo da arquitetura do baço pela técnica de imuno-histoquímica associada à microscopia confocal. Avaliando os resultados em conjunto, a via autofágica parece ser de extrema importância e de capacidade inovadora para alvo terapêutico. Observou-se que a insulina exerceu efeitos antagônicos sobre os macrófagos de tecidos diferentes: aumentou a expressão LC3 nos macrófagos recuperados por LBA e não conseguiu alterar a atividade autofágica em macrófagos da polpa vermelha do baço em ratos diabéticos. Os BMM originários de ratos diabéticos comportaram-se de maneira contrária aos do animal controle: os BMM tipo M1 tiveram o conteúdo de LC3 diminuído, enquanto os M2 tiveram o conteúdo autofágico aumentado. O tratamento com insulina nos ratos diabéticos não alterou o nível do conteúdo LC3 dos BMM, mesmo após uma semana de cultura in vitro. Concluímos, assim, que o tratamento com dose única de insulina foi capaz de induzir a autofagia em macrófagos alveolares, mas insuficiente para resgatar os níveis basais da autofagia em macrófagos da medula óssea e da polpa vermelha do baço / Diabetes mellitus (DM) is characterized by hyperglycemia associated to a lack or ineffectiveness of insulin. DM is marked by changes in several cellular processes that need to be better understood. Autophagy pathway in macrophages from different tissues was studied with the purpose to verify whether treatment with insulin is capable of modulating this process. Bone marrow derived macrophages (BMM), bronchoalveolar lavage (BAL), and splenic tissue macrophages from Wistar rats, diabetic (alloxan, 42 mg/kg, iv, 10 days) and diabetic rats treated with insulin were studied. To characterize the model and evaluate the effect of insulin upon the autophagic process, the following analyzes were performed: (a) glucose levels, number of leukocytes in peripheral blood, BAL cell number; (b) concentrations of cytokines (interleukin (IL)-1beta, tumor necrosis factor (TNF)-alfa, IL-6, IL-4, IL-10, cytokineinduced neutrophil chemoattractant (CINC)-1 and CINC-2 in the supernatant of BAL fluid by ELISA; (c) characterization of BAL alveolar macrophage (AM) surface antigens (MHCII, pan macrophage marker KiM2R, CD11b) and autophagic markers (microtubule-associated protein light chain (LC)3, gene/protein associated to autophagy (ATG) by flow cytometry and confocal microscopy (d) study of macrophages diferenciated from bone marrow by flow cytometry and confocal microscopy; (e) the architecture of spleen and macrophages from red pulp by immunohistochemical techniques associated to confocal microscopy. Evaluating these results together, the autophagic pathway appears to be innovative for therapeutic target. In this study, it was observed that insulin exerted diverse effects on macrophages from different tissues: increased expression of LC3 in AM recovered from BAL and was unable to change the autophagic activity of macrophages from the red pulp of the spleen in diabetic rats. BMM from diabetic rats behaved in an antagonistic way compared to control animals: BMM M1 type decreased their autophagy content while M2 macrophages increased autophagic levels and insulin treatment did not alter the level of LC3 expression. In conclusion, treatment with a single dose of insulin was able to induce autophagy in alveolar macrophages, but insufficient for recovering baseline levels of autophagy in bone marrow derived macrophages and macrophages from the red pulp of the spleen

Avaliou-se a participação do óxido nítrico (NO), do fator hiperpolarizante derivado do endotélio (EDHF), dos produtos da ciclooxigenase (COX), das espécies reativas de oxigênio (EROs) e o efeito do tratamento com metformina (Met) nas alterações vasculares em ratos com obesidade induzida por glutamato monossódico (MSG). O tratamento com Met corrigiu alterações metabólicas em ratos MSG, reduzindo o acúmulo de gordura visceral, corrigindo a resistência à insulina, a hiperinsulinemia e a dislipidemia. Ratos MSG apresentaram aumentada resposta contrátil e diminuída sensibilidade à Ach, associadas a alterações na via do NO, do EDHF, dos produtos da COX e das EROs. Ratos MSG com 16 semamas apresentaram hiperresponsividade ao nitroprussiato de sódio, que foi mantida nos ratos tratados com Met. A Met corrige as alterações da resposta vascular atuando sobre o NO e o EDHF, reduzindo a geração de EROs e interferindo na resposta do músculo liso vascular, mantendo a hiperresponsividade ao NO. / The role of the nitric oxide (NO), the endothelium derived hyperpolarizing factor (EDHF), the ciclooxygenase (COX) products and the reactive oxygen species (ROS), as well as the effect of metformin (Met) treatment on the vascular alterations in rat model of obesity induced by monosodium glutamate (MSG) were evaluated. Met treatment corrected metabolic alterations in MSG, reducing fat accumulation, correcting dyslipidemia, insulin resistance and hyperinsulinemia. MSG rats had an increased response to norepinephrine and decreased sensitivity to acetilcholine, which were associated with alterations in NO, COX products and ROS. Sixteen-week-old MSG rats presented hyperresponsiveness to sodium nitroprusside, which was preserved in Met-treated group. Met corrects the alterations of the vascular reactivity acting on NO and EDHF, and decreasing the ROS generation, besides its effect on the vascular smooth muscle response, preserving the hyperresponsiveness to NO.