Orientador: Kleber Gomes Franchini / Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Ciencias Medicas / Made available in DSpace on 2018-08-11T13:44:01Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Oliveira_MichelVazde_M.pdf: 1365391 bytes, checksum: a8c1dd22f85ed3c7df93982f678f95f7 (MD5) Previous issue date: 2008 / Resumo: Os mioblastos que formam o músculo esquelético são derivados de regiões do miótomo dos somitos. No processo de miogênese ocorre transição de estado proliferativo para um estado de diferenciação que se caracteriza por interrupção do ciclo celular, expressão de genes músculo-específico, reconhecimento célula-célula e formação de miotubos multinucleados. Para o estudo de diferenciação miogênica in vitro a linhagem celular C2C12 é um modelo bem estabelecido. Quando os mitógenos são retirados do meio de cultura (privação de soro fetal bovino), fatores de transcrição específicos são ativados, levando à diferenciação em miotubos. Na progressão do estado proliferativo para o de diferenciação participam diversas proteínas sinalizadoras. Em estudos anteriores demonstramos que a modulação da atividade da FAK tem papel crítico no processo de miogênese de células C2C12. Níveis relativamente elevados de atividade da FAK determinam a manutenção do estado proliferativo (indiferenciado) através de ativação de ciclinas. Também demonstramos que redução transitória da atividade da FAK é essencial para que as mioblastos C2C12 iniciem o processo de diferenciação terminal em miotubos. No presente estudo foi avaliada a hipótese de que a ação da tirosino-fosfatase SHP-2 determina a redução transitória da quinase de adesão focal (FAK) na transição do estado proliferativo para o estado de diferenciação no modelo de miogênese em células C2C12. A privação do soro fetal bovino induziu uma redução transiente (cerca de 80 % por ~2 horas) da fosforilação da FAK no resíduo de Tyr-397, detectada através de anticorpo fosfoespecífico anti-FAK-pY397. Não foi observada mudança na expressão da proteína FAK durante o período experimental. Experimentos de co-imunoprecipitação foram realizados para avaliar se a redução do nível de fosforilação da FAK é acompanhada de sua associação com SHP-2. Observou-se aumento de cerca de 2 vezes na associação entre FAK e SHP-2 no período coincidente com os nível baixos de fosforilação da FAK. Para avaliar o efeito da SHP-2 na redução transitória da pFAK padronizou-se o silenciamento de SHP-2 em células C2C12 nos estados de proliferação e diferenciação. Após a transfecção com siRNASHP2 nas células C2C12 foi feita a extração total de proteínas em diferentes tempos para avaliar o nível de expressão da SHP-2 no estado de proliferação. Foi observada menor expressão desta proteína após 12 horas ao período de transfecção. Depois da transfecção em meio de cultivo com o silenciamento de SHP-2 padronizados em 12 horas as células foram induzidas a se diferenciarem através da privação de soro fetal bovino. A depleção de SHP-2 aboliu a redução transiente da fosforilação da FAK. Observou-se que a depleção de SHP-2 também impediu a diferenciação terminal dos mioblastos privados de soro fetal bovino em miotubos. Esses dados sugerem que a SHP-2 modula o nível de fosforilação da FAK exercendo papel inibitório na ativação da FAK na transição das células C2C12 no estado de proliferação para diferenciação, influenciando a entrada destas células na diferenciação / Abstract: The myoblasts that form the skeletal muscle are derived from regions of the myotome of somites. In the process of myogenesis occurs transition of proliferative status to a state of differentiation which is characterised by disruption of the cell cycle, expression of muscle-specific genes, cell-cell recognition and training of myotubes multinucleate. For the study of the in vitro differentiation myogenic cell line C2C12 is a model well established. Where mitogens are moved from the culture medium (deprivation of fetal bovine serum), specific transcription factors are activated, leading to the differentiation in myotubes. The progression to the proliferative status of differentiation are involves several signaling proteins. In previous studies we showed that the modulation of the activity of FAK plays a critical role in the process of myogenesis of C2C12 cells. Relatively high levels of activity of FAK determine the maintenance of the state proliferative (indistinct) through activation of cyclin. It also demonstrated that transient reduction of the activity of FAK is essential for the myoblasts C2C12 begin the process of terminal differentiation in myotubes. In the present study was evaluated the hypothesis that the action of tirosino-phosphatase SHP-2 determines the reduction of transient focal membership of kinase (FAK) in the transition of proliferative state to the state of differentiation in the model of miogênese in C2C12 cells. The deprivation of fetal bovine serum produces a transient reduction (about 80% by ~ 2 hours) of the phosphorylation of FAK in the residue of Tyr-397, detected by antibody phsphoespecific anti-FAK-pY397. No change was observed in the expression of FAK protein during the trial period. Coimmunoprecitation experiments were performed to evaluate whether the reduction in the level of phosphorylation of FAK is accompanied by its association with SHP-2. There was an increase of about 2 times in the association between FAK and SHP-2 in the period coinciding with the low level of phosphorylation of FAK. To evaluate the effect of SHP-2 on the reduction of transient pFAK standardized up the silencing of SHP-2 in C2C12 cells in the states of proliferation and differentiation. It was observed lower expression of this protein after 12 hours the period of transfection. After Transfection in the midst of cultivation with the silencing of SHP-2 standard in 12 hours the cells were induced to differentiate by deprivation of fetal bovine serum. The depletion of SHP-2 abolished the reduction of transient phosphorylation of FAK. It was observed that the depletion of SHP-2 also prevented the terminal differentiation of myoblasts deprived of fetal bovine serum in myotubes. These data suggest that SHP-2 modulates the level of phosphorylation of FAK acting inhibitory role in the activation of FAK in the transition of C2C12 cells in the state of proliferation to differentiation, influencing the entry of these cells in the differentiation / Mestrado / Ciencias Basicas / Mestre em Clinica Medica

Apesar dos conhecimentos atuais mostrarem que a oclusão desempenha um papel relativamente pequeno na etiologia multifatorial das DTMs, publicações recentes demonstraram que algumas alterações oclusais e/ou esqueléticas aumentam o risco do indivíduo apresentar DTM. Dentre estas alterações está a diferença entre RC e MIH no sentido horizontal maior que 4mm. No entanto, ainda não se sabe qual o papel de uma interferência desta magnitude, no sentido vertical, como fator contribuinte para as DTMs. Este estudo verificou a relação de causa e efeito das interferências oclusais no sentido vertical avaliando a relação entre a magnitude da interferência oclusal com a presença de sinais sintomas de trauma oclusal e sinais e sintomas de DTM. Foram avaliados 43 pacientes, independente do gênero e idade, que não poderiam ser desdentados totais, não poderiam apresentar ausência de 5 ou mais unidades oclusais posteriores não substituídas e não poderiam estar em tratamento ortodôntico. O registro da magnitude da interferência oclusal foi feito na região anterior, através da borda incisal do incisivo superior, na face vestibular do incisivo inferior, nas posições de MIH e contato interferente em RC. A diferença em milímetros desta posição determinou a magnitude da interferência oclusal. Os resultados mostraram que as evidências de interferência oclusal estão presentes nos pacientes com e sem sinais e sintomas de DTM e sinais clínicos de trauma oclusal. Concluiu-se que não houve associação entre a magnitude das interferências oclusais e sinais clínicos de trauma oclusal e sinais e sintomas de Desordens Temporomandibulares. / In the present days, occlusion has not been considered important etiologic factor for the development of temporomandibular disorders(TMD) symptoms. However, some features seems to be specially important as contributory factor. Slides from retruded position(RP) to intercuspal position(IP) greater than 4mm are judged as one of those itens. The aim of this study was to evaluated the cause/ effect relationship those interfernces and different clinical signs, including TMD. Sample was constructed by 43 patients with the great interference, recorded in the anterior region in both positions. Patients with 5 or more posterior missing teeth or perform by orthodontic therapy were excluded. There was no relationship or any association between the interferences and clinical signs, including TMD. Author concluded that slides from RP to IP can not be considered a potential risk factor for TMD.

Submitted by Helena Bejio (helena.bejio@unioeste.br) on 2017-11-23T22:23:29Z No. of bitstreams: 2 Hugo Franciscon 2017.pdf: 2487508 bytes, checksum: cc47f34aceca2ba9016d4c6bde853e92 (MD5) license_rdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5) / Made available in DSpace on 2017-11-23T22:23:29Z (GMT). No. of bitstreams: 2 Hugo Franciscon 2017.pdf: 2487508 bytes, checksum: cc47f34aceca2ba9016d4c6bde853e92 (MD5) license_rdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5) Previous issue date: 2017-02-17 / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior - CAPES / Two researches were conducted, the first in order to solve a methodological problem and the second aimed to investigate the effects of inoculation and nitrogen fertilization on the period prior to interference (PPI) in bean crop. First research: In the literature there are different methodologies for the establishment of interference periods; however, none of them combined accuracy, practicality and the inclusion of economic factors. Therefore, a research was carried out aiming the development of a new methodology that includes economic factors, accuracy and practicality; proving their applicability and accuracy in the data obtained from the literature and test its practicality based on hypothetical data. The integral method was obtained as a result, which was tested on interference periods data from the literature and compared with other methods, proving to be efficient; however, it fell short in practicality. To make the method more practical, a equations bank was elaborated, which was tested by means of hypothetical data; the equations present in the bank, proved to be accurate and, thus, made it possible to make the integral method, besides being precise, practical. Therefore, it was concluded that the integral method combined the practicality, precision and the use of economic factors in the determination of interference periods, achieving the established objectives. Second research: The objective was to verify if the substitution of the broadcast nitrogen fertilization by the inoculation with R. tropici can increase the bean crop tolerance to the weed interference and, thus, to extend its PPI. Two experiments of coexistence periods were installed during the seasons of 2014 and 2015. The experimental design was a randomized block design, with 4 replications, in a 2x10 factorial scheme, 2 handlings and 10 coexistence periods. The periods, in days after emergence (DAE), were 0 (control), 14, 21, 28, 35, 42, 49, 56, 63 and 90 (until harvest). At the end of each period the floristic survey was performed, calculating the density and dry mass of each weed species. A curve of accumulation of dry mass of the aerial part of the crop was also elaborated and its phenological stages determined. At harvest was performed to count the population of bean plants and determined the thousand grain weight and productivity of the culture. The PPI was determined by the integral method, the criterion used to determine the tolerated loss was the economic criterion of the WEEPEL. The substitution of broadcast nitrogen fertilization by inoculation with Rhizobium tropici did not increase the crop ability to compete with weeds and did not lengthen the PPI, which was provided by the use of broadcast nitrogen fertilization. The PPI for the bean under handling without broadcast nitrogen fertilization and with inoculation (without N) was between 17.80 and 49.51 DAE in mean of seasons; While when under handlinf with broadcast nitrogen fertilization and without inoculation the PPI was between 26.38 and 57.06 DAE, in mean of seasons. / Foram realizados dois estudos, o primeiro com o intuito de solucionar um problema metodológico e o segundo visando investigar os efeitos da inoculação e da adubação nitrogenada sobre o período anterior à interferência (PAI) no feijoeiro. Primeiro estudo: Há na literatura diferentes metodologias para o estabelecimento de períodos de interferência; porém, nenhuma delas combinou precisão, praticidade e a inclusão de fatores econômicos. Diante disso, foi realizado um estudo com os objetivos de desenvolver uma nova metodologia que inclua critérios econômicos e seja precisa e prática, comprovar sua aplicabilidade e precisão em dados obtidos da literatura e testar sua praticidade com base em dados hipotéticos. Como resultado, obteve-se o método integral, o qual foi testado em dados de períodos de interferência retirados da literatura e comparado com outros métodos, demonstrando-se eficiente; porém, deixou a desejar na praticidade. Para tornar o método mais prático, foi elaborado um banco de equações, o qual foi testado por meio de dados hipotéticos; as equações presentes no banco, demonstraram-se exatas e, assim, permitiram tornar o método integral, além de preciso, prático. Portanto, concluiu-se que o método integral combinou a praticidade, precisão e o uso de fatores econômicos na determinação de períodos de interferência, logrando os objetivos estabelecidos. Segundo estudo: o objetivo foi verificar se a substituição da adubação nitrogenada em cobertura pela inoculação com R. tropici pode aumentar a tolerância do feijoeiro à matointerferência e, assim, alongar seu PAI. Foram instalados dois experimentos de período de convívio da cultura com as plantas daninhas, durante os anos de 2014 e 2015. O delineamento experimental adotado foi o de blocos casualizados, com 4 repetições, em esquema fatorial 2x10, 2 manejos e 10 períodos de convívio. Os períodos, em dias após a emergência (DAE), foram 0 (testemunha), 14, 21, 28, 35, 42, 49, 56, 63 e 90 (até a colheita). Ao final de cada período foi realizado o levantamento florístico, calculada a densidade e massa seca de cada espécie de planta daninha. Também foi elaborada uma curva de acúmulo de massa seca da parte aérea da cultura e determinados os seus estádios fenológicos. Na colheita foi realizada a contagem da população de plantas de feijoeiro e determinada a massa de mil grãos e a produtividade da cultura. O PAI foi determinado pelo método integral, o critério usado para se determinar a perda tolerada foi o critério econômico do PADRE. A substituição da adubação nitrogenada em cobertura pela inoculação com Rhizobium tropici não aumentou a capacidade da cultura em competir com as plantas daninhas e não alongou o PAI, o qual foi proporcionado pelo uso da adubação nitrogenada em cobertura. O PAI para o feijoeiro sob o manejo sem adubação nitrogenada em cobertura e com inoculação (sem N) ficou entre 17,80 e 49,51 DAE na média dos anos; enquanto que quando sob o manejo com adubação em cobertura e sem inoculação o PAI se situou entre 26,38 e 57,06 DAE, na média dos anos.

Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior / O fenômeno de línguas em contato não é recente. Desde a Antiguidade, povos circulam pelo planeta estabelecendo conexões com outros povos. No contexto brasileiro, o contato entre falantes de línguas diferentes é um fenômeno acentuado, principalmente nas zonas fronteiriças com os países da América do Sul. No cenário roraimense, extremo norte do Brasil, foco de nossa investigação, existem duas fronteiras: ao norte com a Venezuela e ao leste com a Guiana. Dada à localização geográfica, o estado de Roraima é um dos poucos no país com fronteiras trilíngues, cujas línguas oficiais são o Português, o Inglês e o Espanhol. Este trabalho tem por objetivo geral analisar o contato linguístico por meio de produções textuais de venezuelanos aprendizes de Português como Língua Estrangeira (PLE); os objetivos específicos são discutir propostas teórico-metodológicas sobre o contato linguístico entre Português e Espanhol, definir os tipos de contato linguístico presentes nas produções textuais de venezuelanos aprendizes de Português; caracterizar sociolinguisticamente o venezuelano aprendiz de Português como Língua Estrangeira. Para alcançarmos os objetivos propostos, analisamos vinte produções textuais de venezuelanos, baseando-nos nas categorias linguísticas: Alternância de Código, Transferência e Interferência linguísticas. Do ponto de vista linguístico, os resultados apontam para uma Alternância de Código intraoracional, concentrando-se no final da mesma oração; Transferência linguística do tipo ortográfica, em que o informante transferiu estruturas ortográficas do Espanhol para o Português; e Interferência também do tipo ortográfica, em que o aluno omitiu acento em palavras portuguesas e confundiu grafemas. Do ponto de vista sociolinguístico, nosso informante é do sexo feminino entre 20 e 54 anos, possui nível superior, reside na Venezuela e estuda português há aproximadamente 04 anos para fins acadêmico-profissionais. Tendo em vista um cenário multilíngue, como o apresentado entre Brasil/Venezuela, em que as fronteiras geográficas nem sempre correspondem com as linguísticas, concluímos que a Língua Portuguesa está ocupando uma posição privilegiada no extremo norte brasileiro nos últimos anos, sendo a inserção do curso de PLE em Pacaraima, uma prova disso. Dentre os fenômenos de contato linguístico relatados, a Interferência foi a mais produtiva nas produções textuais dos alunos, o que mostra a proximidade entre o Português e o Espanhol. / El fenómeno de las lenguas en contacto no es algo reciente. Desde la Antigüedad, los pueblos giran por el planeta estableciendo conexiones con otros pueblos. En el contexto brasileño, el contacto entre hablantes de lenguas distintas es un fenómeno intenso, sobre todo en las zonas fronterizas con los países de Sudamérica. En el escenario roraimense, extremo norte de Brasil, lugar de nuestra investigación, hay dos fronteras: al norte con Venezuela y al este con Guyana. Por la proximidad geográfica, el estado Roraima es uno de los pocos en el país con fronteras trilingües, cuyas lenguas oficiales son el Portugués, el Inglés y el Español. Este trabajo tiene por objetivo analizar el contacto lingüístico a través de producciones textuales de venezolanos aprendices de Portugués como Lengua Extranjera (PLE); los objetivos específicos son discutir propuestas teórico-metodológicas sobre el contacto lingüístico entre Portugués y Español, definir los tipos de contacto lingüístico presentes en las producciones textuales de venezolanos aprendices de Portugués; caracterizar sociolinguisticamente el venezolano aprendiz de Portugués como Lengua Extranjera. Para lograr los objetivos propuestos analizamos veinte producciones textuales de venezolanos, basándonos en las siguientes categorías lingüísticas, cuales sean: Alternancia de Código, Transferencia e Interferencia lingüísticas. Desde el punto de vista lingüístico, los resultados apuntan para una Alternancia de Código intraoracional, concentrándose en el final de la misma oración; Transferencia lingüística del tipo ortográfica, en que el informante transfirió estructuras ortográficas del Español hacia el Portugués; e Interferencia lingüística también del tipo ortográfica, en que el alumno suprimió los acentos en palabras portuguesas y confundió grafemas. Desde el punto de vista sociolingüístico, nuestro informante es del sexo femenino entre los 20 y 54 años, posee nivel superior, vive en Venezuela y estudia portugués a unos 04 años para fines académico-profesionales. Llevando en cuenta el escenario multilingüe, Brasil/Venezuela, en que las fronteras geográficas ni siempre corresponden a las lingüísticas, concluimos que la Lengua Portuguesa está ocupando una posición de prestigio en el extremo norte brasileño en los últimos años, un ejemplo es el curso de PLE en Pacaraima. Entre los fenómenos del contacto lingüístico presentado, la Interferencia fue la más productiva en las producciones textuales de los alumnos, lo que muestra la proximidad entre el Portugués y el Español.

A consolidação da memória é um processo que ocorre ao longo do tempo, em que memórias recentes são cristalizadas em memória de longo prazo. As memórias recentes são vulneráveis e passíveis de esquecimento, principalmente na presença de fatores interferentes. Entretanto, a consolidação de eventos com conteúdo emocional sofre menos interferências do que o observado com eventos neutros. O objetivo deste estudo foi investigar experimentalmente os efeitos da emoção e de uma tarefa de interferência sobre a consolidação do tempo na memória de longo prazo. Uma série de três experimentos foi conduzida em um procedimento de generalização temporal, no qual os participantes aprenderam uma duração padrão e imediatamente, ou após 24 horas, julgaram a duração padrão baseada em durações de comparação. No primeiro experimento, os participantes aprenderam uma duração padrão sob o efeito de três condições emocionais: ameaçadora, não ameaçadora e condição neutra, controle. Os julgamentos temporais de longo prazo mostraram que as durações foram melhor recordadas em uma condição emocional do que neutra; isto ocorreu em maior extensão para a condição ameaçadora do que para a condição não ameaçadora. No segundo experimento, foi investigado o processo de consolidação da duração e seus efeitos sobre julgamentos temporais. Uma tarefa de interferência foi introduzida em diferentes atrasos depois da aprendizagem inicial da duração padrão. Os resultados mostraram que os julgamentos temporais de longo prazo foram menos precisos quando a tarefa de interferência foi introduzida 30-45 minutos após a aprendizagem. Esta imprecisão não foi observada quando a memória foi testada imediatamente após a tarefa de interferência sendo encontrado um gradiente temporal do efeito perturbador da interferência dentro da primeira hora após a aprendizagem. O terceiro experimento foi conduzido para examinar o efeito da emoção na memória de longo prazo para duração e sua resistência contra os efeitos da interferência. Os participantes aprenderam uma duração padrão sob duas condições: uma ameaçadora e uma neutra; imediatamente após a aprendizagem, foi introduzida uma tarefa de interferência. Então, 24 horas após, eles julgaram se as durações de comparação eram ou não similares à duração padrão previamente aprendida. Os julgamentos temporais de longo prazo foram mais acurados quando os participantes aprenderam a duração padrão em uma condição emocional. Os resultados desta tese levam a conclusão que as emoções que despertam arousal facilitam a retenção do tempo na memória de longo prazo e são também resistentes aos efeitos da interferência. Por outro lado, a interferência perturba a consolidação do tempo e a memória da duração passa por um processo de consolidação que dura pelo menos uma hora. / Memory consolidation is a process that occurs over time in which new memories are crystallized in long-term memory. Recent memories are vulnerable and susceptible to forgetfulness, especially in the presence of interfering factors. However, emotional events are better retained in long-term memory than neutral events. The aim of this thesis was to experimentally investigate the effects of emotion and interference task on time consolidation in long-term memory. A set of three experiments were conducted in a temporal generalization procedure, in which participants learned a standard duration and immediately, or 24 hours later, they judged the standard duration based in duration comparisons. In experiment one, participants learned a standard duration under three emotional conditions: a threatening, a nonthreatening and a neutral control condition. The long-term temporal judgments showed that durations were recalled better in the emotional than in the neutral condition; this occurred to a greater extent in the threatening than in the nonthreatening condition. In experiment two, it was investigated the consolidation process for duration and its effect on the time judgment. An interference task was introduced at different delays after the initial learning of the standard duration. Results showed long-term temporal judgments less precise when the interference task was introduced 30-45 min after the learning. Disruption was not observed when the memory was tested immediately after the interference task and there was a temporal gradient of the disruptive interference effect within the first hour after learning. The experiment three was conducted to examine the effect of emotion on the long-term memory for duration and its resistance against interference effects. Participants learned a standard duration under two conditions: a threatening and a neutral condition; immediately after the learning, it was introduced an interference task. Then, 24 hours later, they judged whether or not comparison durations were similar to the previously learned standard duration. The long-term temporal judgments were more accurate when participants learned the standard duration in an emotional condition. The findings of this thesis led to the conclusion that arousing emotions facilitate the retention time in long-term memory and are also resistant against interference effects. Instead, the interference disrupts time consolidation, and memory duration undergoes a consolidation process that lasts at least one hour.

O Brasil é o maior produtor de laranja doce no mundo. Entretanto, a cultura enfrenta grandes problemas, devido ao ataque de pragas e doenças, o que reduz a produtividade da cultura. Entre estas doenças, destaca-se o huanglongbing (HLB), doença associada a três espécies da bactéria Candidatus Liberibacter. No Brasil, o psilídeo Diaphorina citri é o inseto transmissor do HLB. A falta de cultivares de laranja doce resistentes ao HLB torna a transformação genética de plantas uma medida em potencial para o controle desta doença. Plantas transgênicas de laranja doce expressando um RNA de dupla fita (dsRNA) de um gene essencial à sobrevivência de D. citri podem resultar no controle do inseto por meio do mecanismo de RNA de interferência. Tal mecanismo resulta na degradação do RNAm homólogo ao dsRNA. Este trabalho teve por objetivo produzir plantas transgênicas de laranja doce, expressando um fragmento do gene DcV-ATPase-A de D. citri, em uma construção gênica tipo hairpin. Dessa forma, o silenciamento gênico por RNA de interferência seria ativado no psilídeo quando este for submetido à alimentação nas plantas transgênicas. O trabalho foi iniciado com a elaboração da construção gênica contendo uma sequência repetida e invertida do gene DcV-ATPase-A de D. citri, para formação de um hairpin. Segmentos de epicótilo, provenientes de sementes germinadas in vitro das laranjas \'Hamlin\', \'Pêra\' e \'Valência\' (Citrus sinensis L. Osbeck) foram utilizados como fontes de explantes para a transformação genética via Agrobacterium tumefaciens. Paralelamente aos experimentos de transformação genética, insetos adultos de D. citri foram submetidos a experimentos de alimentação artificial, contendo RNA de dupla fita (dsRNA) ou pequenos RNA interferentes (siRNA) da DcV-ATPase-A. Ao final do período de alimentação, foram avaliadas o número de insetos vivos e a expressão relativa do RNAm da DcV-ATPase-A. Através de PCR e Southern blot, a transgenia foi confirmada em 26 e 39 plantas de laranja \'Hamlin\' e \'Valência\', respectivamente. A transgenia não foi confirmada nas plantas regeneradas de laranja \'Pêra\'. O número de inserções no transgene variou de 1 a 4 cópias. A produção dos siRNAs foi confirmada em 10 plantas de laranja \'Valência\', através de siRNA blot. O uso de dietas artificiais contendo dsRNA ou siRNA do gene DcV-ATPase-A não resultou em diferenças significativas no número de insetos vivos, ou no nível de expressão relativa do RNAm do gene DcV-ATPase-A em insetos adultos de D. citri. / Brazil is the largest sweet orange producer in the world. However, this crop faces major problems due to the attack of pests and diseases that reduce its productivity. Among the diseases, stands out the huanglongbing (HLB), disease associated with three different species of the Candidatus Liberibacter bacteria. In Brazil, the psyllid Diaphorina citri is the insect vector of HLB. The absence of resistant sweet orange cultivars to HLB makes the genetic transformation of plants a potential methodology to control this disease. Sweet orange transgenic plants engineered to express double strand RNA (dsRNA) of an essential gene for D. citri survival could result in insect control by RNA interference. This mechanism results in degradation of homologous RNAm to dsRNA. The aim of this work was to produce transgenic sweet orange plants expressing a fragment of D. citri DcV-ATPase-A gene, in a hairpin construction aiming gene silencing by RNA interference in D. citri, when fed on sweet orange transgenic plants. The work started developing a gene construct containing an inverted and repeated sequence of DcV-ATPase-A gene, to form a hairpin. Epicotyl segments collected from in vitro germinated seedlings of \'Hamlin\', \'Pêra\' and \'Valência\' sweet oranges (Citrus sinensis L. Osbeck) were used as explants for the genetic transformation experiments via Agrobacterium tumefaciens. At the same time, adults of D. citri underwent artificial diet experiments containing dsRNA or siRNA of DcV-ATPase-A. At the end of feeding time, the survival of insects and the relative expression of DcV-ATPase-A RNAm were evaluated. Through PCR and Southern blot analysis, 26 \'Hamlin\' and 39 \'Valência\' sweet orange transgenic lines were confirmed. None of the regenerated \'Pêra\' plants were transgenic. The transgenic plants had 1 to 4 T-DNA insertions. The siRNA products were observed in 10 \'Valência\' plants, through siRNA blot. The artificial diets containing dsRNA or siRNA of DcV-ATPase-A resulted in no differences in the number of live insects and in the relative expression of DcV-ATPase-A RNAm in adult insects.

Dutos metálicos revestidos, enterrados e protegidos catodicamente, quando são instalados nas proximidades de linhas de transmissão e distribuição de energia elétrica, vêm apresentando problemas de corrosão, sendo esta atribuída às interferências de corrente alternada dispersas no solo. São muitos os critérios propostos na literatura para verificar se um duto está ou não sujeito a esse tipo de problema, mas tais critérios são contraditórios e ineficientes, uma vez que não levam em conta parâmetros termodinâmicos e não contemplam o acoplamento dos potenciais originados de corrente contínua com os potenciais oriundos de corrente alternada. O objetivo do presente trabalho foi estudar a corrosão causada por corrente alternada, selecionar um critério seguro de verificação da probabilidade de ocorrência dessa corrosão e desenvolver uma nova metodologia para a obtenção dos parâmetros necessários para a aplicação do critério proposto. Com base em uma ampla pesquisa bibliográfica, em resultados experimentais obtidos em laboratório e em campo, foi possível a seleção do seguinte mecanismo: a corrosão por corrente alternada é decorrente da oscilação do potencial da interface duto/solo que, dependendo do valor do pH nas suas vizinhanças, leva o sistema alternadamente ao domínio da corrosão e da imunidade ou alternadamente ao domínio da formação de óxidos (com e sem passivação) e da imunidade. Nessas condições, a corrosão do aço-carbono ocorre devido à irreversibilidade da reação Fe2+ + 2e- Fe, nos casos de alcalinização limitada, e à impossibilidade de formação de uma camada passiva protetora decorrente da flutuação de potencial entre o domínio de formação de óxidos e da imunidade, nos casos de alcalinização moderada. Como critério de verificação da ocorrência ou não de interferência de corrente alternada em dutos enterrados e catodicamente protegidos foi proposta, neste estudo, a obtenção da forma de onda do acoplamento entre os potencias originados de corrente contínua e os oriundos de corrente alternada sem a influência da queda ôhmica e a comparação do potencial de pico dessa forma de onda com o potencial estabelecido como limite aceitável do sistema de proteção catódica tradicional. Esta proposição foi feita com base na termodinâmica, o que garante que a previsão seja usada com mais segurança. Finalmente, foi desenvolvida uma sonda que, juntamente com uma instrumentação adequada, é capaz de fornecer a forma de onda do referido acoplamento em dutos enterrados e catodicamente protegidos, sem a interferência da queda ôhmica. / Corrosion problems have been observed in cathodically protected pipelines installed in the vicinity of high voltage power lines or electrical distribution systems. Many of these problems have been attributed to interferences coming from stray alternating currents. In the literature, there are many criteria proposed aiming at verifying the AC corrosion probability. However, such criteria are contradictory and ineffective since they do not take into account thermodynamic parameters and do not include the coupling of potential coming from direct current and the potential due to stray alternating current. The aim of this work was to study pipeline corrosion induced by stray alternating current, to select a safe criterion for the probability of this corrosion and to develop a new methodology for obtaining the required parameters for the application of the selected criterion. A broad literature review and the results obtained from a series of tests and analyses have allowed choosing the following mechanism: AC corrosion is a result of the fluctuation of the pipe/soil potential which, depending on the pH of the soil near the pipe, takes the system alternatively to the corrosion and to the immunity domains or alternatively to the oxide formation (with or without passivation) and to the immunity domains. Under these conditions, the corrosion of carbon steel occurs due to the irreversibility of the reaction Fe2+ + 2e- Fe reaction in cases of limited alkalinization and due to the impossibility of forming a protective passive layer caused by the potential fluctuation between the oxide formation and the immunity domains in cases of moderate alkalinization. In this study, a method to obtain the waveform of the AC+DC potential, without the ohmic drop, was proposed. The comparison of the peak potential of the AC + DC waveform with the potential value established as an acceptable threshold for traditional cathodic protection systems was used as a criterion for AC corrosion assessment. This criterion is proposed based on thermodynamic principles which ensure that the prediction is reliable. Finally, a probe was developed. This probe, along with a proper instrumentation, is able to provide the desired waveform for a safe application of the proposed criterion.

Os tumores astrocíticos são originados a partir dos astrócitos e classificados de acordo com a Organização Mundial de Saúde em astrocitoma pilocítico (grau I), astrocitoma subependimal de células gigantes (grau I), xantoastrocitoma pleomórfico (grau II), astrocitoma difuso (grau II), astrocitoma anaplásico (grau III) e glioblastoma (GBM) (grau IV). Este último é o tumor cerebral mais frequente em adultos, possuindo uns dos piores prognósticos, devido principalmente à radioresistência do tumor, com uma sobrevida média de 14 meses. Vários estudos têm procurado encontrar novos alvos terapêuticos e os genes da família BUB são candidatos promissores, devido ao seu papel no controle do ciclo celular. Estes genes participam do mecanismo do ponto de checagem do fuso mitótico, prevenindo a separação prematura das cromátides irmãs. Os objetivos deste trabalho foram avaliar a expressão de BUB1, BUB3 e BUBR1 em amostras de pacientes portadores de gliomas de baixo grau (I e II) e glioblastoma, relacionar as expressões destes genes à sobrevida e estudar os efeitos da inibição dos genes BUB1 e BUBR1, por RNAi, na linhagem pediátrica SF188. Nossos resultados mostraram que tanto BUB1 quanto BUBR1 foram hiperexpressos nos glioblastomas e nos gliomas de baixo grau em relação à substância branca (p<0,05). A análise da expressão destes genes em amostras de glioblastomas em relação a amostras de grau I e II demonstrou uma hiperexpressão dos genes BUB1 e BUBR1 e uma hipoexpressão do BUB3 em glioblastoma (p<0,05). Em relação à sobrevida, os baixos níveis de expressão dos genes BUB1 e BUBR1 foram relacionados a uma melhor sobrevida quando analisado o total de todos os pacientes. Paralelamente, a inibição dos genes BUB1 e BUBR1 na linhagem SF188 resultou em uma diminuição da proliferação e também da capacidade clonogênica, além de um aumento na apoptose quando combinado com temozolomida (TMZ). Também foram realizados experimentos com inibições dos genes com ou sem a presença de irradiação. Esta combinação resultou em uma diminuição tanto da proliferação quanto da capacidade clonogênica. Estes resultados sugerem que o BUB1 e o BUBR1 podem ser considerados alvos interessantes para o tratamento de glioblastoma, porém estudos adicionais são necessários para confirmar tal potencial. / Astrocytic tumors are originated from astrocitytes and classified according to the World Health Organization into pilocytic astrocytoma (grade I), subependymal giant cell astrocytoma (grade I), pleomorphic xanthoastrocytoma (grade II), diffuse astrocytoma (grade II), anaplastic astrocytoma (grade III) and Glioblastoma (GBM) (grade IV). Glioblastoma is the most common brain tumor in adults with a very poor prognosis and a median survival of 14 months. Because their role in cell cycle control, several authors have previously ponited the BUB gene family as new therapeutic target candidates. These genes participate in the mitotic checkpoint by preventing the premature separation of sister chromatids. The aims of this study were to study the expression of BUB1, BUB3 e BUBR1 in samples of patients with low-grade gliomas (I and II) and glioblastoma, evaluate any association of gene expression with patient survival and analyze BUB1 e BUBR1 inhibition (by iRNA) effects, on SF188, a pediatric cell line. BUB1 and BUBR1 were found hyperexpressed in glioblastoma samples and in low-grade gliomas when compared with white matter samples (p<0.05). The analysis of the expression of these genes in glioblastoma samples compared with grade I and II samples showed a hyperexpression of BUB1 and BUBR1, while BUB3 was hipoexpressed in glioblastoma (p<0.05). In the survival analysis, the hipoexpression of BUB1 and BUBR1 genes were related with a better survival when all patients were considered. The BUB1 and BUBR1 inhibition resulted in decreased proliferation and colony formation, along with increased apoptosis when combined with temozolomide. Experiments with the inhibition of genes also were performed in association with irradiation. This combination demonstrated decreased proliferation and colony formation. Our results suggest that BUB1 and BUBR1 might be interesting targets for future treatment of glioblastoma, nonetheless further studies are necessary to confirm this potencial.

Submitted by Renata Lopes (renatasil82@gmail.com) on 2017-01-06T14:31:54Z No. of bitstreams: 1 danielaferrodegodoy.pdf: 2931952 bytes, checksum: 08ac03607124e73f9ec9318d1bbc4e9a (MD5) / Approved for entry into archive by Diamantino Mayra (mayra.diamantino@ufjf.edu.br) on 2017-01-31T11:25:03Z (GMT) No. of bitstreams: 1 danielaferrodegodoy.pdf: 2931952 bytes, checksum: 08ac03607124e73f9ec9318d1bbc4e9a (MD5) / Made available in DSpace on 2017-01-31T11:25:03Z (GMT). No. of bitstreams: 1 danielaferrodegodoy.pdf: 2931952 bytes, checksum: 08ac03607124e73f9ec9318d1bbc4e9a (MD5) Previous issue date: 2016-07-12 / CAPES - Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior / A modelagem pode ser utilizada para determinar a distribuição de uma determinada espécie em uma área. Deste modo, pode auxiliar na conservação de espécies ameaçadas. Neste estudo, modelos foram utilizados para avaliar a influência do habitat, do tipo de presas capturadas por pescadores artesanais e do Valo Grande sobre a presença do boto-cinza na região do Complexo Estuarino Lagunar de Cananéia. Os dados foram coletados entre janeiro de 2012 a novembro de 2014, durante três 3 saídas de campo por estação do ano. Estas saídas de campo foram realizadas em quatro setores pré-definidos, que foram percorridos em transecções lineares. O setor II foi o de maior ocorrência de botos, provavelmente pela proximidade com o oceano adjacente. A distribuição entre os setores foi mais homogênea nas estações mais frias, onde os valores das variáveis ambientais são mais estáveis. Os maiores agrupamentos de animais também foram encontrados no inverno. Os botos foram avistados em diversos valores das variáveis ambientais analisadas. No entanto, as maiores ocorrências foram registradas em águas mais turvas; profundidades maiores que 10 metros; salinidade acima de 10 ppm; e águas mais frias e nas marés de sizígias. A presença do cerco-fixo no estuário também influenciou positivamente a ocorrência dos botos, que utilizam essa armadilha de pesca como barreira, minimizando a fuga das suas presas. A tainha foi a categoria de peixe que teve a maior associação com a presença dos botos, seguida pela guaivira e prejereba. Já o parati e o camarão estuarino apresentaram uma influência negativa com a presença do boto. O modelo preditivo do Valo Grande mostrou que a descarga de água doce influencia de maneira negativa na presença dos botos. Pelo exposto, fica claro que os botos-cinza apresentaram uma distribuição heterogênea dentro do estuário estudado e as áreas de maior concentração merecem maior atenção na elaboração de estratégias de conservação. / Niche modelling can be used to determine the distribution of a particular species in an enviromental space (ecological niche). It may be important to help to preserve endangered species. Therefore, in this study, niche modelling was used to evaluate the influence of: the habitat; the artisanal fishermen‟s catch species; and the Valo Grande on the presence of the Guiana dolphins (Sotalia guianensis) in the Estuarine Lagunar Complex of Cananéia, Brazil. The data were collected in three fieldworks per season, from January 2012 to November 2014. The fieldworks took place in four predefinied sectors. These sectors were sampled using a line-transect method. The presence of the Guiana dolphin was observed mostly on sector II. Probably because of the proximity to the adjacent ocean. The distribution among sectors was more homogeneous in the short cool season, when the environmental variables are more stable. The larger dolphin clusters were found during the winter. Guiana dolphins were sighted in a great diversity of environmental conditions. Nonetheless, the highest occurrences were recorded in cooler and turbid waters; depths greater than 10 meters; salinity above 10 ppm; and during spring tides (technically known in Portuguese as 'maré de sizígia'). Furthermore, the presence of an artisanal fish trap, known locally as cerco-fixo, has positively influenced the occurrence of Guiana dolphins in the estuary. The dolphins use cerco-fixo fish traps to corner shoals and reduce the escape routes of their prey. The mullet (Mugil brasiliensis) was the fish species which had the highest positive correlation with the presence of dolphins, followed by the leatherjacket (Oligoplites saurus) and the tripletail (Lobotes surinamensis). On the other hand, the white mullet (Mugil curema) and the whiteleg shrimp (Litopenaeus vannamei) had a negative correlation with the presence of the Guiana dolphin. The data collected on the Valo Grande Channel showed that freshwater discharges decrease the presence of Guiana dolphins. We can conclude that the Guiana dolphins have an heterogeneous distribution within the studied estuary. Therefore, the areas of greatest ocurrence deserve greater attention in the development of preservation strategies.

A cana-de-açúcar (Saccharum spp.) é uma importante cultura na produção de alimentos e energia. Várias espécies de insetos podem causar sérios prejuízos econômicos à cultura da cana-de-açúcar. A broca da cana-de-açúcar (Diatraea saccharalis) é a praga de maior relevância por estar amplamente distribuída nas regiões canavieiras. O silenciamento gênico por RNA de interferência (RNAi) se tornou uma técnica amplamente estudada e utilizada nos mais diversos aspectos da biologia. Uma de suas aplicações é no controle de insetos-praga como uma alternativa de alta eficiência, especificidade e reduzido impacto ambiental. A ingestão de moléculas de RNA dupla fita (dsRNA) com identidade a regiões de genes essenciais de insetos-praga pode resultar no silenciamento destes genes, levando a fenótipos deficientes. Neste contexto, o presente trabalho teve como objetivo buscar genes alvos para o silenciamento com potencial para impedir o desenvolvimento normal da D. saccharalis e estabelecer uma forma de entrega do dsRNA eficiente para o teste de genes, visando assim validar o uso da técnica para a espécie. Por meio da clonagem de regiões de genes ortólogos já utilizados como alvo de silencimento em outras espécies de insetos (V-ATPase A, Receptor de Ecdisona e Arginina Kinase), e de genes com função específica identificadas após a caracterização do transcritoma de D. saccharalis (Juvenile Hormone Epoxide Hydrolase, Neverland e Quitina Sintase) foram conduzidos ensaios de RNAi. Foram realizados ensaios de dose resposta para o gene V-ATPaseem lagartas neonatas, onde a concentração selecionada por causar melhor redução na expressão do gene alvo foi de 2,5 µg µL-1. Esta concentração foi então utilizada em ensaios de alimentação para os outros genes. Os genes V-ATPase A, receptor de Ecdisona, Arginina Kinase, Juvenile Hormone Epoxide Hydrolase e Quitina Sintase apresentaram redução significativa no número de transcritos em larvas, demonstrando a viabilidade do uso de RNAi em D. saccharalisneonatas. O gene Neverland não demonstrou redução no acúmulo de transcritos nas condições trabalhadas. O gene GFP inicialmente utilizado como controle negativo apresentou variação na expressão de genes alvo, sendo desconsiderado como bom controle para D. saccharalis. O silenciamento dos genes alvo requer quantidades elevadas de dsRNA, superiores aos obtidos por transcrição in vitro, o que limita a viabilidade de ensaios com maiores replicatas e para determinar efeitos biológico. Alternativas de produção de dsRNA devem ser avaliadas para viabilizar a seleção de genes alvo efetivos / Sugarcane (Saccharum spp.) is an important crop for the production of food and bioenergy. Many insect species can cause economic losses in sugarcane. The sugarcane borer (Diatraea saccharalis) is the most important sugarcane pest, because it occurs in all production regions. Gene silencing by RNA interference (RNAi) rapidly became a widely investigated approach, adopted in various aspects of biology. One of the potential applications of RNAi is agricultural pest control, as an alternative with high efficiency, specificity and reduced environmental impact. The ingestion of double-stranded RNA (dsRNA) molecules with identity to regions of essential genes of the insect-pest can result in the target gene knock-down and, consequently, to deficient phenotypes. In the present work, target genes with the potential to affect the normal development of D. saccharaliswere searched, together with an efficient dsRNA delivery approach to test the target-genes to validate the use of the RNAi in D. saccharalis. Based on degenerated primers, expressed orthologous genes previously tested in other insect species (V-ATPase A, Ecdisone Receptor, and Arginine Kinase) were cloned,whilegenes with specific function (Juvenile Hormone Epoxide Hydrolase, Neverland, and Chitin Synthase) were identified from an in-house assembled transcriptome of D. saccharalis and cloned. A dose-response assay was conducted using the V-ATPase gene region delivered by droplets to neonate larvae, and the 2.5 µg µL-1dsRNA concentration was selected for further tests. This concentration was then used to deliver the other genes. The dsRNA version from the genes V-ATPase A, Ecdisone Receptor, Arginine Kinase, Juvenile Hormone Epoxide Hydrolase and Chitin Synthaseexhibited a significant reduction in the accumulation of transcripts, indicating the viability of RNAi to D. saccharalis in 1st instar larvae. The Neverland gene was not silenced by RNAi in the used conditions. The dsRNA of the Green Fluorescent Protein gene, used as negative control appeared to affectother gene targets. Target gene silencing require large amounts of dsRNA, more than what is achievable by in vitro transcription, which limits the viability to conduct large assays with more replicates and to determine biological effects. Alternatives to produce dsRNA need to be evaluated to enable the selection of effective target genes