Os peptídeos antimicrobianos são importantes ferramentas do sistema imune inato para controle das infecções e recentemente tem sido investigado seu potencial como estratégia terapêutica nas infecções e sepse. Estes peptídeos apresentam diversas atividades decorrentes de mecanismos de ação antimicrobianas e imuno estimuladoras. A indução de tolerância com a administração de pequenas doses de LPS reduz a mortalidade em modelos animais de sepse, modulando diversos aspectos do sistema imune. Nossa hipótese neste estudo foi que o efeito protetor da tolerância ao LPS está relacionado com a modulação da produção dos peptídeos antimicrobianos na sepse. A tolerância ao LPS foi induzida em camundongos C57bl/6 por injeção de lipopolissacarídeo de E. coli na dose de 1mg/kg por cinco dias. No oitavo dia os animais foram eutanasiados por overdose anestésica ou submetidos ao modelo de ligadura e punção cecal. Após seis horas os animais foram eutanasiados por overdose anestésica e o sangue, baço, intestino e pulmões foram coletados para determinação das concentrações de citocinas e peptídeos antimicrobianos. Nossos resultados mostram que o efeito da tolerância ao LPS sobre a produção de peptídeos antimicrobianos é tecido específica. Sistemicamente (plasma) a tolerância aumenta a concentração plasmática de beta defensina-3 e CRAMP somente em animais submetidos à CLP. No baço ocorre redução de beta defensinas 1 e 7 pela CLP e também pela tolerância. No pulmão há elevação de beta defensinas 1 e 3 pela CLP e esta é revertida pela tolerância. No intestino ocorre redução de defensinas pela tolerância tanto em animais controle quanto em animais submetidos à CLP. Observamos em nosso estudo um padrão invertido entre as concentrações de peptídeos antimicrobianos e citocinas no intestino e baço dos animais, principalmente nos submetidos à CLP. Quanto maior a concentração da citocina no tecido, menor a concentração da defensina em questão. No intestino podemos observar que a tolerância e a CLP aumentam a concentração de IL-6 e IL-10 e diminuem as concentrações de beta defensinas 1 e 7. No baço observamos esse padrão entre beta defensina-7 e IL-6 e entre beta defensina-1 e TNF-alfa. Não foi possível encontrar esse tipo de correlação no pulmão. Concluímos que os efeitos protetores da tolerância ao LPS estão relacionados com uma menor produção de defensinas no baço, pulmão e intestino de animais submetidos à sepse, e com maior concentração de peptídeos antimicrobianos no plasma / Antimicrobial peptides are important tools of the innate immune system to control infections and its potential as a therapeutic strategy in infections and sepsis has recently been investigated. These peptides present both antimicrobial and immuno-stimulatory activities. Lipopolysaccharide (LPS) tolerance is a defense mechanism against invading microorganisms also widely distributed in nature. Induction of tolerance with the administration of small doses of LPS reduces mortality in animal models of sepsis, modulating several immune system aspects. Our hypothesis was that the protective effect of LPS tolerance is related to the modulation of antimicrobial peptide production in sepsis. LPS tolerance was induced in C57bl / 6 mice by injection of E. coli LPS at 1mg / kg for five days. On the eighth day the animals were submitted to the sepsis model of cecal ligation and puncture. After six hours the animals were euthanized by anesthetic overdose and blood, spleen, intestine and lungs were collected for the determination of cytokines and antimicrobial peptides concentrations. Our results show that the effect of LPS tolerance on the production of antimicrobial peptides is tissue specific. LPS tolerance increases the plasma concentration of beta-defensin-3 and CRAMP only in animals undergoing CLP. In the spleen, there is reduction of ? defensins 1 and 7 by CLP and also by tolerance. In the lung, there is elevation of beta defensins 1 and 3 by PLC and this is reversed by tolerance. In the intestine, there is reduction of defensins by tolerance in both control and CLP animals. In our study, we observed an inverted pattern between the concentrations of antimicrobial peptides and cytokines in the intestine and spleen of animals, especially those submitted to CLP. The higher the cytokine concentration in the tissue, the lower the concentration of defensin in question. In the gut we can observe that tolerance and CLP increases IL-6 and IL-10 concentration and decreases ? defensins 1 and 7 concentrations. In the spleen, we observed this pattern between ?-defensin-7 and IL-6 and between alpha-defensin-1 and TNF-alpha. It was not possible to find this type of correlation in the lung. We conclude that the protective effects of LPS tolerance are related to a lower production of defensins in the spleen, lung and intestine of animals submitted to sepsis, and with a higher concentration of antimicrobial peptides in plasma

Orientador: Cláudia Helena Pellizzon / Banca: Clélia Akiko Hiruma-Lima / Banca: Calos Alan Cândido Dias / Banca: Jairo Kenupp Bastos / Banca: Caden Souccar / Banca: Luis Fernando Barbisan / Banca: Sergio Brito Garcia / Banca: Elfriede Marianne Bacchi / Resumo: As espécies do gênero Mentha apresentam indicação etnofarmacológica para distúrbios gastrointestinais, como a úlcera gástrica (UG) e a diarreia. Este estudo teve por objetivo caracterizar o mecanismo gastroprotetor e antidiarreico do mentol (ME), principal componente dos óleos esenciais do gênero Mentha, em ratos. A atividade gastroprotetora foi avaliada nos modelos de indução de úlcera gástrica por etanol e indometacina. Os mecanismos analisados foram a secreção de muco gástrico, o envolvimento dos compostos sulfidrílicos, da via NO/cGMP/K+ATP e dos canais de cálcio na gastroproteção, a atividade antisecretória, a produção de prostaglandina E2 (PGE2), além da atividade antiapoptótica, antioxidante (dosagem de glutationa - GSH, glutationa peroxidase - GSH-Px, glutosina redutase - GR e superóxido dismutase - SOD) e anti-inflamatória (dosagem das citocinas fator de necrose tumoral alfa - TNF-α, interleucina 6 e 10 - IL-6 e IL-10) na mucosa gástrica. Também foi avaliada a atividade antidiarreica e antiperistáltica. A indução de toxicidade aguda foi avaliada através de dosagens bioquímicas no soro sanguíneo dos ratos. O tratamento oral com ME ofereceu 88.62% e 72.62% de gastroproteção conta a indução de UG por etanol e indometacina, respectivamente. O efeito gastroprotetor do ME estimulou a produção de muco gástrico e de PGE2, além de envolver a manutenção dos compostos sulfidrílicos e a ativação dos canais K+ATP. ME apresentou efeito antioxidante, evidenciando pelo aumento na atividade de GSH-Px, GR, do nível de GSH e pela redução da atividade da SOD. A atividade anti-inflamatória foi comprovada através da redução no nível das citocinas inflamatórias TNF-α e IL-6 e aumento no nível da citocina anti-inflamatória IL-10. ME apresentou atividade antidiarreica e antiperistáltica e não induziu alterções bioquímicas no soro dos ratos, comprovando a ausência de toxidade renal e ... / Abstract: Based on ethnopharmacological indications that Mentha species may be used in the treatment of gastrointestinal diseases, this study aimed to characterize the gastroprotective mechanisms of menthol (ME), the major compound of the essential oil from species of the genus Mentha. The gastroprotective action of ME was analyzed in gastric ulcers that were induced by ethanol or indomethacin in Wistar male rats. The mechanisms responsible for the gastroprotective effect were assessed by analyzing the amount of mucus secreted, involvement of non-protein sulfhydryl (NP-SH) compounds, involvement of calcium ion channels and NO/cGMP/K+ATP pathway, gastric antisecretory activity and the prostaglandin E2 (PGE2) production. The anti-diarrheal activity and acute toxicity of ME were also evaluated. Oral treatment with ME (50 mg/kg) offered 88.62% and 72.62% of gastroprotection against ethanol and indomethacin, respectively. There was an increased amount of mucus and PGE2 production. The gastroprotective activity of ME involved NP-SH compounds and the stimulation of K+ATP channels, but not the activation of calcium ion channels or the production of NO. The oral administration of ME induced an antisecretory effect as it decreased the H+ concentration in gastric juices. ME displayed anti-diarrheal and antiperistaltic activity. There were no signs of toxicity in the biochemical analyses performed in the rats‟ serum. These results demonstrated that ME provides gastroprotective and anti-diarrheal activities with no toxicity in rats / Mestre

Orientador: Cristiano Gallina Moreira / Banca: Clovis Wesley Oliveira de Souza / Banca: Fernando Rogério Pavan / Resumo: Sinalização química em bactérias patogênicas é um mecanismo empregado para interagir com o hospedeiro e sua respectiva microbiota. Através desta interação ocorre a regulação dos mecanismos de virulência. Estudando o mecanismo de sinalização química do sistema de 2-componentes QseBC em Salmonella enterica serovar Typhimurium foi aberta uma nova perspectiva para desvendar os mecanismos de patogenicidade. Dentre estes, uma nova proteína VisP (Virulence and stress-related Periplasmic protein) foi reportada. Seu papel inicial na interação com a enzima LpxO em S. Typhimurium foi anteriormente demonstrada. O antígeno-O da camada de LPS fornece proteção contra as defesas do hospedeiro e, particularmente, o comprimento de sua cadeia exerce um papel essencial. A montagem do antígeno-O possui o sistema Wzz, o qual determina o comprimento final de sua cadeia polissacarídica, e também apresenta uma distribuição tri-modal. Forma cadeias curtas (S-OAg), longas (L-OAg) e muito longas (VL-OAg) de antígeno-O. As proteínas WzzST e WzzfepE regulam, respectivamente, a síntese das cadeias L-OAg e VL-OAg. Neste estudo, os genes wzzST, wzzfepE, visP e lpxO foram mutados, via mutagênese λ Red, obtendo simples e duplos mutantes. Dados preliminares evidenciaram que há um aumento nas cadeias VL-OAg e L-OAg no mutante ΔvisP, e reciprocamente há diminuição de L-OAg em ΔlpxO. Foram feitos ensaios para avaliar a motilidade, invasão em células epiteliais e sobrevivência intracelular em macrófagos com as amo... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract: Chemical signaling is a mechanism employed by several bacterial species to interact within surrounding microbiota and their host. Upon this interaction the pathogenic bacteria regulate their virulence traits. The two-component system QseBC was described on chemical signaling in Salmonella enterica serovar Typhimurium, and a novel branch of pathogenic cascade regulation was revealed. Among these mechanisms a novel protein was described, VisP (Virulence and stress related Periplasmic protein). VisP interacts with LpxO enzyme on the periplasm. The O-antigen of the LPS layer provides protection against host defenses, and particularly its chain's length plays an essential role. The O-antigen assembly has the Wzz system, which determines the O-antigen final chain length, and also presents a tri-modal distribution. It forms short (S-OAg), long (L-OAg) and very-long (VL-OAg) O-antigen chains. The WzzST and WzzfepE proteins respectively regulate the L-OAg and VL-OAg synthesis. In this study, wzzST, wzzfepE, visP and lpxO genes were mutated via λ Red mutagenesis, obtaining single and double-mutants. Our preliminary data have shown that VisP increases VL-OAg and L-OAg, conversely LpxO diminishes L-OAg chain length. The motility, epithelial cell invasion and macrophage intracellular survival and replication were assessed with the mutants obtained. The ΔvisP presented 1,2 and 1,0 order of magnitude reduction in cell invasion and intracellular macrophage replication, respectively, compari... (Complete abstract click electronic access below) / Mestre

Made available in DSpace on 2014-06-11T19:22:21Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2010-02-22Bitstream added on 2014-06-13T20:09:23Z : No. of bitstreams: 1 lopes_mcs_me_jabo.pdf: 1425980 bytes, checksum: ec77cfbfaaacc7792256be3564bbc255 (MD5) / Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de São Paulo (FAPESP) / Avaliaram-se os efeitos clínico e comportamental da injeção intravenosa do tramadol no controle da dor induzida experimentalmente, por obstrução intestinal extraluminal, com dreno de Pen Rose. Foram utilizados 24 cavalos distribuídos em quatro grupos: controle (GC, n=6); obstrução duodenal (GD, n=6); obstrução de íleo (GI, n=6) e obstrução de flexura pélvica (GFP, n=6). Após medicação pré-anestésica com a associação de acepromazina (0,025 mg.kg-1 IV), xilazina (0,5 mg.kg-1 IV) e meperidina (4 mg.kg-1 IM), o tramadol foi administrado nas doses de 1,0 mg.kg-1 e 1,5 mg.kg-1, por via intravenosa (IV), imediatamente após a obstrução intestinal, em três cavalos de cada grupo. Avaliaram-se as freqüências cardíaca (FC) e respiratória (f), temperatura retal (TºC), tempo de preenchimento capilar (TPC), motilidade intestinal, comportamento relacionado à dor (olhar para o flanco, cavar, deitar e rolar) hemograma e hemogasometria venosa, nos intervalos: M0 (basal) a cada 0,5 hora de M1 a M6 , na fase de obstrução, e até três horas após a reversão do processo obstrutivo (M7 a M12). Os resultados demonstraram que não houve diferença significativa entres as doses utilizadas dentro de cada grupo, assim como entre os grupos. Houve aumento da FC em M11 no GD e em M12 no GFP. Os sinais de dor abdominal e atonia intestinal iniciaram-se em M5 no GFP e em M6 no GI. Nos animais do GD, os sinais de desconforto não progrediram. No leucograma foi observado um quadro característico de estresse e na hemogasometria os animais do GD tendenciaram à alcalose metabólica com compensação respiratória. Clinicamente, observou-se que a dose de 1,5 mg.kg-1 de tramadol proporcionou melhor conforto para os animais, porem sem significado estatístico, quando comparado coma dose de 1,0 mg.kg-1... / The clinical and behavioral effects of the intravenous injection of tramadol were evaluated during the control of pain induced experimentally due to intestinal extraluminal obstruction using “Pen Rose” drain. A total of 24 horses were used and distributed in four groups: control (GC, n=6); duodenal obstruction (GD, n=6); ileum obstruction (GI, n=6) and pelvic flexure obstruction (GFP, n=6). After administration of pre-anesthetic medications using association of acepromazine (0.025 mg.kg-1 IV), xylazine (0.5 mg.kg-1 IV) and meperidine (4 mg.kg-1 IM), tramadol was administered at doses of 1.0 mg.kg-1 and 1.5 mg.kg-1 intravenously (IV), immediately after the intestinal obstruction in three horses of each group. Evaluations were performed, including heart rate (HR), respiratory rate (RR), rectal temperature (RT), capillary refill time (CRT), gut motility, pain-related behaviour (look for the sidewall, dig down and roll) and blood gases from venous blood at the time: M0 (baseline) and every 0.5 hours from M1 to M6, during obstruction process and also until three hours after the obstructive process be reverted (M7 to M12). The results showed no significant difference among the doses used in the same group as among groups. There was an increase in HR in the GD M11 and M12 of GFP. Signs of abdominal pain and intestinal atony began at M5 in GFP and at M6 in GI. In animals from GD, the discomfort signs did not showed progress. On the leucogram was observed a typical stress and on the blood gas analysis the animals from GD showed a tendency to metabolic alkalosis with respiratory compensation. Clinically, was observed that the dose of 1.5 mg.kg-1 of tramadol provided better comfort to the animals, but there was not statistical significance, compared with the dose 1.0 mg.kg-1... (Complete abstract click electronic access below)

Orientador: Maria Cristina Thomaz / Banca: Luciano Hauschild / Banca: Fabio Enrique Lemos Budiño / Resumo: Dois experimentos foram conduzidos com o objetivo de avaliar os efeitos da inclusão de celulose purificada, como fonte de fibra insolúvel, na dieta de leitões recém-desmamados. No experimento I, o desempenho, a incidência de diarreia e o tempo de trânsito das dietas no trato gastrintestinal foram avaliados em 72 leitões desmamados aos 21 dias de idade. No experimento II, foram utilizados 32 leitões recém-desmamados para determinar o pH e a viscosidade da digesta no estômago, intestino delgado e ceco; a morfologia e a microbiologia intestinal; os pesos dos órgãos gastrintestinais, do fígado e do pâncreas, e a imunidade animal. Em ambos os experimentos, os tratamentos consistiram de uma dieta basal com adição de 0,0; 1,5; 3,0 ou 4,5% de celulose purificada. O delineamento em blocos completos casualizados foi utilizado em todos os experimentos para controlar variações no peso vivo inicial. Os abates foram realizados aos 35 e 50 dias de idade. O aumento no nível de celulose purificada resultou em efeito quadrático na conversão alimentar, no consumo diário de ração e na incidência de diarreia. Aos 35 dias de idade, o peso relativo do ceco, o pH do intestino delgado, a altura das vilosidades e a relação altura das vilosidades (AV)/profundidade das criptas (PC) do jejuno apresentaram efeito quadrático, enquanto a relação AV/PC do duodeno aumentou linearmente com o aumento do nível de inclusão de celulose purificada. Aos 50 dias de idade, o peso relativo do ceco e do cólon, a contagem de Lactobacillus spp. na porção distal do intestino delgado e a morfologia intestinal do jejuno (AV, PC e relação AV/PC) apresentaram resposta quadrática, enquanto o peso relativo do pâncreas reduziu linearmente com o aumento no nível de celulose purificada. A imunidade dos animais e as viscosidades do conteúdo estomacal... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract: Two experiments were conducted to evaluate the effects of purified cellulose inclusion in the diets of newly weaned piglets. In trial I, performance, incidence of diarrhea, and gastrointestinal transit time were evaluated from 72 pigs weaned at 21 days of age. In trial II, a total of 32 pigs newly weaned were used to determine pH and viscosity of gastric content, small intestine and cecal digesta, intestinal morphology and microbiology, gastrointestinal organs, liver and pancreas weights, and animal immunity. In both experiments, dietary treatments consisted of a basal diet with 0.0, 1.5, 3.0, or 4.5% of added purified cellulose. The randomized complete block design was used in all experiments to control for variations in initial body weight. The piglets were slaughtered at the age of 35 and 50 days. Increasing purified cellulose level resulted in a quadratic effect on feed conversion ratio, daily feed intake and incidence of diarrhea. At 35 days of age, relative cecum weight, small intestine pH, villous height and villous height (VH):crypt depth (CD) ratio in the jejunum showed a quadratic effect, whereas VH:CD ratio in the duodenum linearly increased with the increasing level of purified cellulose inclusion. At 50 days of age, relative cecum and colon weight, Lactobacillus spp. count in the distal portion of the small intestine, and intestinal morphology in the jejunum (VH, CD, and VH:CD ratio) had a quadratic response, whereas relative pancreas weight was linearly decreased with the increasing purified cellulose level. Animal immunity and viscosities of gastric content and small intestine digesta were not affected by dietary treatments. The inclusion of purified cellulose to the diets reduced the gastrointestinal transit time and levels between 2.3 to 2.8% in the diet of newly weaned piglets provided the best results... (Complete abstract click electronic access below) / Mestre

Orientador: Aleksandrs Spers / Banca: Dirlei Antonio Berto / Banca: Rodolfo Nascimento Kronka / Banca: Romualdo Shigueo Fukushima / Resumo: Embora os suínos apresentem limitada capacidade em degradar material fibroso, é possível utilizar fontes fibrosas na ração de determinadas categorias animais, como por exemplo suínas em fases pré-púbere e púbere, devido à necessidade de moderado ganho de peso neste período. Por ocasião do primeiro cio útil (terceiro cio fisiológico), as fêmeas devem apresentar valores mínimos de 110 kg de peso corporal e 1,8-2,0 cm de espessura de toucinho. O objetivo desta pesquisa foi o de determinar os efeitos causados pelo emprego de 0; 6,6; 13,2 e 19,8% de fibra em detergente neutro (FDN), na ração basal de fêmeas suínas em fase pré-púbere e púbere (marrãs). As concentrações de FDN na ração, foram obtidas através da inclusão de 0, 10, 20 e 30 % de feno de "coast cross" (Cynodon dactylon), respectivamente. Foram utilizadas 20 marrãs puras e mestiças, das raças Landrace e Large White, com peso e idade médias iniciais de 52,85 kg e 110 dias, em um experimento em blocos casualizados, com cinco repetições/tratamento. Em relação às características de desempenho animal, o incremento de FDN na ração de marrãs, promoveu respostas lineares (P<0,01) no ganho diário de peso (0,675; 0,607; 0,525; 0,483 g/d); no peso corporal por ocasião do primeiro cio útil (118,0; 114,0; 102,2; 98,2 kg); na conversão alimentar (3,6; 4,0; 4,7; 5,3); e resposta quadrática (P<0,05) na espessura de toucinho (3,28; 3,34; 2,82; 1,74 cm). No referente à idade de ocorrência do primeiro cio útil, não houve registro de efeito significativo (P>0,10) sobre esta característica, a qual apresentou valor médio de 203 dias. A digestibilidade dos componentes dietéticos foi influenciada pela presença de fibra dietética na ração das marrãs. A adição de FDN promoveu resposta linear (P<0,01) na digestibilidade da matéria seca... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract: Although swines show limited capability in degrading fiber, it is possible utilization of feeds in the diet of some animal categories such as gilts. These animals need to gain moderate weight during this period that precede breeding and by the time females exhibit their third physiological heat, they have to weight a minimum of 110 kg and have at least 1.8-2.0 cm of subcutaneous fat. The objective of this research was to assess the effects caused by utilization of 0; 6.6; 13.2 and 19.8 % of neutral detergent fiber (NDF) in the basal diet of gilts. These concentrations of NDF were obtained through inclusion of 0; 10; 20 and 30 % of coast-cross hay (Cynodon dactylon), respectively. This trial was conducted with 20 pure and crossbred Landraceand Large White females with average weight of 52.8 kg and 110 days old. The experimental design employed was a completely randomized block design with five repetitions per treatment. Increasing concentration of NDF in the diet of gilts led to linear response (P<0.01) on the daily weight gain (0.675; 0.607; 0.525; 0.483 g/d); on the body weight by the onset of the third physiological heat (118.0; 114.0; 102.2; 98.2 kg); on the feed efficiency (3.6; 4.0; 4.7; 5.3); and quadratic response (P<0.05) on the subcutaneous fat thickness (3.28; 3.34; 2.82; 1.74 cm). However, no significance was found (P>0.10) on the third physiological heat onset age which average 203 days. Nutrient digestibility was also affected by addition of hay to the basal diet. Dry matter digestibility had linear response... (Complete abstract click electronic access below) / Doutor

Orientador: Maria Cristina Thomaz / Banca: Luciano Hauschild / Banca: Fabio Enrique Lemos Budiño / Resumo: Foram avaliados os efeitos da inclusão de fibra de cana-de-açúcar nas dietas de leitões recém-desmamados sobre o desempenho, a incidência de diarreia, o tempo de trânsito gastrintestinal, o peso dos órgãos do sistema digestório e as características morfofisiológicas e microbiológicas do trato gastrintestinal. Foram utilizados 96 leitões desmamados aos 21 dias de idade e com peso médio inicial de 6,67 ± 0,63 kg em um experimento em blocos completos ao acaso, com quatro tratamentos, oito repetições por tratamento e três animais por unidade experimental. Os tratamentos consistiram de quatro níveis (0, 1, 2 e 3%) de inclusão de fibra de cana-deaçúcar. Aos 35 dias de idade, um animal (peso médio final de 8,24 ± 0,63 kg) por unidade experimental foi abatido para a avaliação do peso dos órgãos (estômago, intestino delgado, ceco e cólon) e da histologia intestinal (altura das vilosidades, profundidade das criptas, relação altura das vilosidades e profundidade das criptas, número de células caliciformes e densidade de vilosidades). Amostras dos conteúdos do intestino delgado, ceco e cólon foram coletadas para mensurar o pH e a viscosidade. As concentrações de ácidos graxos de cadeia curta (acético, propiônico e butírico) foram determinadas nos conteúdos do intestino delgado e do ceco. No conteúdo do intestino delgado foram realizadas as contagens bacterianas (Lactobacillus spp., Escherichia coli e Clostridium perfringens). Dos 21 aos 35 dias de idade, o ganho diário de peso (P = 0,009) e o consumo diário de ração (P = 0,014) aumentaram linearmente com o aumento nos níveis de inclusão de fibra de cana-de-açúcar. Embora o tempo de trânsito gastrintestinal, a incidência de diarreia, o pH, a viscosidade, o peso dos órgãos e a microbiologia intestinal não tenham sido afetados (P > 0,05) pelos tratamentos, houve aumento linear nas concentrações dos ácidos propiônico (P = 0,006) e butírico ... / Abstract: Were evaluated the effects of sugarcane fiber inclusion in the diets of weanling piglets on performance, incidence of diarrhea, gastrointestinal transit time, digestive organs weight, and morphophysiological and microbiological traits of the gastrointestinal tract. Ninety-six barrows weaned at 21 days of age and initial body weight of 6.67 ± 0.63 kg were used in a randomized complete block design with four treatments, eight replicates per treatment and three pigs per experimental unit. Dietary treatments consisted of 0, 1, 2, or 3% sugarcane fiber inclusion. At 35 days of age, one animal (final body weight of 8.24 ± 0.63 kg) per experimental unit was slaughtered to evaluate organs weight (stomach, small intestine, cecum, and colon) and intestinal histology (villus height, crypt depth, villus-to-crypt ratio, number of goblet cells and villus density). Digesta samples from the small intestine, cecum, and colon were collected to measure pH and viscosity. Short-chain fatty acids concentrations (acetic, propionic, and butyric acids) were determined in digesta samples from the small intestine and cecum. Lactobacillus spp., Escherichia coli, and Clostridium perfringens counts were determined in digesta samples from the small intestine. From 21 at 35 days of age, average daily gain (P = 0.009) and average daily feed intake (P = 0.014) increased linearly with the increasing sugarcane fiber levels. Although the treatments did not affect (P > 0.05) gastrointestinal transit time, incidence of diarrhea, pH, viscosity, organs weight, and intestinal microbiology, there was a linear increase in cecal propionic (P = 0.006) and butyric (P < 0.01) acids concentrations with increasing sugarcane fiber inclusions. Increasing dietary sugarcane fiber levels resulted in a linear decrease (P = 0.003) in duodenal villus-to-crypt ratio and in a linear increase (P = 0.028) in crypt depth in the jejunum. In conclusion, adding up to 3% of sugarcane fiber to the ... / Mestre

Orientador: Paulo Câmara Marques Pereira / Resumo: O trato gastrointestinal possui enorme variedade de bactérias aeróbias e anaeróbias, metabolicamente ativas, que interagem entre si em complexo ecossistema. Essa microbiota desempenha funções importantes no metabolismo, nutrição, imunidade e proteção contra a colonização por microrganismos patogênicos. Vários fatores podem influenciar essa microbiota, entre eles a idade, dieta, processos inflamatórios e infecciosos e utilização de antimicrobianos. Assim, este estudo foi desenvolvido com o objetivo de verificar a influência das infecções bacterianas do trato respiratório e do tratamento com amoxicilina sobre a microbiota intestinal normal do paciente. O processo infeccioso bacteriano do trato respiratório influenciou a microbiota intestinal dos pacientes. Houve redução significativa na quantidade de UFC/g de fezes de microrganismos dos gêneros Bacteroides e Lactobacillus. A utilização de amoxicilina também influenciou a microbiota intestinal. Foi observada redução significativa na quantidade de UFC/g de fezes de microrganismos dos gêneros Bifidobacterium e Lactobacillus. É importante identificar modificações na composição da microbiota intestinal, uma vez que a diminuição destes microrganismos pode representar diversos prejuízos para o hospedeiro. Um destes prejuízos é a diminuição da resistência à colonização. Esses prejuízos, quando acompanhados, podem ser minimizados pela equipe de saúde por meio de medidas relativas à conduta terapêutica e alimentar, visando reduzir a influência nociva sobre o ecossistema gastrointestinal. / Abstract: The gastrointestinal tract contains an enormous variety of metabolically active aerobic and anaerobic bacteria, that interact with each other in a complex ecosystem. That microbiota carries out important functions in the metabolism, nutrition, immunity and protection against the colonization by pathogenic microorganisms. Several factors can influence this microbiota, among them are age, diet, inflammatory and infectious processes and use of antimicrobial agents. Thus, this study was developed with the objective of verifying the influence of the bacterial infections of the respiratory tract and of the treatment using amoxicillin on the patient's normal intestinal microbiota. The bacterial infectious process of the respiratory tract influenced the patients' intestinal microbiota. There was significant reduction in the amount of CFU/g of feces of microorganisms of the Bacteroides and Lactobacillus genus. The use of amoxicillin also influenced the intestinal microbiota. Significant reduction was observed in the amount of CFU/g of feces of microorganisms of the Bifidobacterium and Lactobacillus genus. It is important to identify modifications in the composition of the intestinal microbiota, once the decrease of these microorganisms can cause damage to the host. One of these damages is the decrease in the resistance to the colonization. Those damages, when accompanied, can be minimized by the health staff using measures related to the therapeutic and alimentary conduct, seeking to reduce the noxious influence on the gastrointestinal ecosystem. / Doutor

Os peptídeos antimicrobianos são importantes ferramentas do sistema imune inato para controle das infecções e recentemente tem sido investigado seu potencial como estratégia terapêutica nas infecções e sepse. Estes peptídeos apresentam diversas atividades decorrentes de mecanismos de ação antimicrobianas e imuno estimuladoras. A indução de tolerância com a administração de pequenas doses de LPS reduz a mortalidade em modelos animais de sepse, modulando diversos aspectos do sistema imune. Nossa hipótese neste estudo foi que o efeito protetor da tolerância ao LPS está relacionado com a modulação da produção dos peptídeos antimicrobianos na sepse. A tolerância ao LPS foi induzida em camundongos C57bl/6 por injeção de lipopolissacarídeo de E. coli na dose de 1mg/kg por cinco dias. No oitavo dia os animais foram eutanasiados por overdose anestésica ou submetidos ao modelo de ligadura e punção cecal. Após seis horas os animais foram eutanasiados por overdose anestésica e o sangue, baço, intestino e pulmões foram coletados para determinação das concentrações de citocinas e peptídeos antimicrobianos. Nossos resultados mostram que o efeito da tolerância ao LPS sobre a produção de peptídeos antimicrobianos é tecido específica. Sistemicamente (plasma) a tolerância aumenta a concentração plasmática de beta defensina-3 e CRAMP somente em animais submetidos à CLP. No baço ocorre redução de beta defensinas 1 e 7 pela CLP e também pela tolerância. No pulmão há elevação de beta defensinas 1 e 3 pela CLP e esta é revertida pela tolerância. No intestino ocorre redução de defensinas pela tolerância tanto em animais controle quanto em animais submetidos à CLP. Observamos em nosso estudo um padrão invertido entre as concentrações de peptídeos antimicrobianos e citocinas no intestino e baço dos animais, principalmente nos submetidos à CLP. Quanto maior a concentração da citocina no tecido, menor a concentração da defensina em questão. No intestino podemos observar que a tolerância e a CLP aumentam a concentração de IL-6 e IL-10 e diminuem as concentrações de beta defensinas 1 e 7. No baço observamos esse padrão entre beta defensina-7 e IL-6 e entre beta defensina-1 e TNF-alfa. Não foi possível encontrar esse tipo de correlação no pulmão. Concluímos que os efeitos protetores da tolerância ao LPS estão relacionados com uma menor produção de defensinas no baço, pulmão e intestino de animais submetidos à sepse, e com maior concentração de peptídeos antimicrobianos no plasma / Antimicrobial peptides are important tools of the innate immune system to control infections and its potential as a therapeutic strategy in infections and sepsis has recently been investigated. These peptides present both antimicrobial and immuno-stimulatory activities. Lipopolysaccharide (LPS) tolerance is a defense mechanism against invading microorganisms also widely distributed in nature. Induction of tolerance with the administration of small doses of LPS reduces mortality in animal models of sepsis, modulating several immune system aspects. Our hypothesis was that the protective effect of LPS tolerance is related to the modulation of antimicrobial peptide production in sepsis. LPS tolerance was induced in C57bl / 6 mice by injection of E. coli LPS at 1mg / kg for five days. On the eighth day the animals were submitted to the sepsis model of cecal ligation and puncture. After six hours the animals were euthanized by anesthetic overdose and blood, spleen, intestine and lungs were collected for the determination of cytokines and antimicrobial peptides concentrations. Our results show that the effect of LPS tolerance on the production of antimicrobial peptides is tissue specific. LPS tolerance increases the plasma concentration of beta-defensin-3 and CRAMP only in animals undergoing CLP. In the spleen, there is reduction of ? defensins 1 and 7 by CLP and also by tolerance. In the lung, there is elevation of beta defensins 1 and 3 by PLC and this is reversed by tolerance. In the intestine, there is reduction of defensins by tolerance in both control and CLP animals. In our study, we observed an inverted pattern between the concentrations of antimicrobial peptides and cytokines in the intestine and spleen of animals, especially those submitted to CLP. The higher the cytokine concentration in the tissue, the lower the concentration of defensin in question. In the gut we can observe that tolerance and CLP increases IL-6 and IL-10 concentration and decreases ? defensins 1 and 7 concentrations. In the spleen, we observed this pattern between ?-defensin-7 and IL-6 and between alpha-defensin-1 and TNF-alpha. It was not possible to find this type of correlation in the lung. We conclude that the protective effects of LPS tolerance are related to a lower production of defensins in the spleen, lung and intestine of animals submitted to sepsis, and with a higher concentration of antimicrobial peptides in plasma

Determina la presencia de los genes de las isoformas de los receptores X retinoicos (RXR) en el genoma de alpacas adultas y su expresión en la mucosa yeyunal de las crías de alpaca. Para la determinación de los genes en el genoma de las alpacas se utilizaron muestras de leucocitos sanguíneos de 5 alpacas adultas para detectar los genes de las isoformas RXRalfa, RXRbeta y RXRgamma por PCR utilizando primers específicos, y para determinar la expresión de las isoformas de los genes RXR se utilizaron 35 muestras de yeyuno de crías de alpacas de diversas edades, a los cuales se les realizó la prueba de RT PCR tiempo real. Los productos del PCR y RT PCR tiempo real fueron secuenciados para determinar su especificidad. Se obtuvo el ADN total de los leucocitos sanguíneos utilizando un kit de extracción de ADN para luego realizar un PCR con primers específicos para cada gen de las isoformas de los receptores RXR alfa, RXRbeta y RXRgamma, para luego ser reveladas mediante electroforesis en geles de agarosa.al 1.5%. De las muestras de yeyuno se obtuvieron los ARN mensajeros (ARNm) totales con el kit de extracción de “SV total RNA isolation system” (promega) y tratados con DNAsa.que sirvieron de molde para realizar RT-PCR tiempo real con primers específicos de los genes RXRalfa, RXRbeta y RXRgamma. Los resultados permitieron determinar que las alpacas tienen codificados las isoformas de RXR beta y gamma en su genoma y que tienen distintos grados de expresión en la mucosa yeyunal de crías de alpaca. Se detectó una alta expresión de RXRgamma y RXRbeta. No se pudo determinar la expresión de RXRalfa. Estos resultados indican que los receptores RXRgamma y RXRbeta se están expresando en la mucosa del yeyuno de crías de alpacas. / Tesis