Submitted by Maria Rosa Moraes Maximiano (maria.maximiano@uffs.edu.br) on 2017-06-27T15:11:17Z No. of bitstreams: 1 SCOLARI.pdf: 2707592 bytes, checksum: d3d091bc0a6de5629a6c6feebf0555e2 (MD5) / Approved for entry into archive by Diego dos Santos Borba (dborba@uffs.edu.br) on 2017-06-27T16:41:43Z (GMT) No. of bitstreams: 1 SCOLARI.pdf: 2707592 bytes, checksum: d3d091bc0a6de5629a6c6feebf0555e2 (MD5) / Made available in DSpace on 2017-06-27T16:41:43Z (GMT). No. of bitstreams: 1 SCOLARI.pdf: 2707592 bytes, checksum: d3d091bc0a6de5629a6c6feebf0555e2 (MD5) Previous issue date: 2017-03-03 / A Araucaria angustifolia (Bertol.) O. Kuntze é uma das espécies nativas da região Sul do Brasil de maior importância econômica e ecológica. Nas últimas décadas devido aos grandes desmatamentos ocorridos para comercialização da madeira e para expansão da área agrícola, esta espécie entrou para a lista daquelas ameaçadas de extinção. Uma das maneiras de se preservar a A. angustifolia é a conservação da semente pois é a principal forma de propagação da espécie. No entanto, as sementes de A. angustifolia apresentam comportamento recalcitrante, o que dificulta a sua conservação por longos períodos, em virtude de não tolerarem a dessecação e temperaturas baixas. Por este motivo é necessário pesquisar outras alternativas para a conservação de sementes de A. angustifolia e uma das técnicas que merecem destaque é a criopreservação, que consiste em armazenar o material vegetal em nitrogênio líquido a -196°C. Entretanto, para se obter sucesso com esta técnica há uma série de condições que devem ser satisfeitas, como a redução da umidade das sementes e a formação de um estado vítreo que minimize a possibilidade de formação de cristais de gelo na célula. Diante do exposto, o objetivo do trabalho foi estabelecer um protocolo de criopreservação para sementes de A. angustifolia, visando a manutenção de sua qualidade fisiológica por longos períodos de tempo. A pesquisa foi dividida em oito experimentos, onde se testou diferentes formas e períodos de desidratação, diferentes soluções para a crioproteção e distintas formas de congelamento das sementes. Os experimentos foram realizados em delineamento inteiramente casualizado. Para avaliação da qualidade fisiológica das sementes foram realizados os testes de tetrazólio, emergência de plântulas, índice de velocidade de protrusão radicular (IVP) e determinação do grau de umidade. Pelos resultados foi possível concluir que: houve redução progressiva do grau de umidade e da viabilidade das sementes de A. angustifolia com o aumento do período de imersão em solução de PVS2. A desidratação em sílica gel por 120 horas reduziu a viabilidade das sementes, porém o crioprotetor, glicose (60%) + glicerol (15%), quando utilizado por 72 horas, não prejudicou a qualidade fisiológica das sementes. A criopreservação em nitrogênio líquido e o congelamento em ultrafreezer independentemente do pré-tratamento utilizado foram letais as sementes de A. angustifolia. A aclimatação das sementes de A. angustifolia por 24 horas em solução de 3 molar (M) de sacarose mais 12 horas em solução com 2M de glicose + 0,4M de sacarose previamente a imersão em PVS2 por 24 horas reduziu a viabilidade e o vigor. O congelamento das sementes de A. angustifolia, crioprotegidas com glicose (60%) + glicerol (15%), a -5℃ e -18°C por 7 dias foi letal. A aclimatação das sementes de A. angustifolia por 15 horas em solução de 0,3M de sacarose, mais 8 horas em solução com 2M de glicose + 0,4M de sacarose previamente a imersão de 12 horas em PVS2 reduziu a viabilidade e o vigor. O congelamento das sementes de A. angustifolia, aclimatadas e crioprotegidas com PVS2, a -5℃ e -18°C por 7 dias foi letal. Com essa sequência de experimentos não foi possível estabelecer um protocolo eficiente de criopreservação para as sementes de A. angustifolia. / Araucaria angustifolia (Bertol.) O. Kuntze is one of the native species from southern Brazil with economic and ecological importance. In recent decades, due to deforestation for timber marketing and expansion of agriculture, this species joined the list of those threatened with extinction. One of the ways to preserve A. angustifolia is per seed conservation, as it is the main process for the species propagation. However, the seeds of A. angustifolia endue recalcitrant behavior, not tolerating desiccation and low temperatures for long time. For this reason, it is necessary to look at alternatives for the conservation of the A. angustifolia seeds. One of the techniques that might be useful is cryopreservation, which consists in storing the propagules in liquid nitrogen at -196°C. However, several conditions must be met to achieve success, such as reducing the moisture of the seed to assure the formation of a vitreous state that minimizes the possibility of the generation of ice crystals in the seed cells. Due to this obstacle, the objective of this work was to establish a protocol for cryopreservation of A. angustifolia seeds, targeting for the maintenance of the physiological quality for prolonged periods. The research was divided into eight experiments, where forms and periods of dehydration, solutions for cryoprotection and forms of freezing of the seeds were tested. The experiments were arranged in a completely randomized design. Tetrazolium tests were performed to evaluate the physiological quality of the seeds, in addition of measuring the variables seedling emergence, root protrusion and the seed moisture content. The results lead to the following conclusions: there was a progressive reduction of seed moisture content and viability with increasing period of immersion in PVS2 solution. Dehydration in silica gel for 120 hours reduced seed viability, but when glucose (60%) + glycerol (15%) was used for 72 hours, the physiological quality of seeds was maintained. The cryopreservation in liquid nitrogen or ultrafreezer, regardless of pre-treatment used, was lethal to seeds. The acclimatization of the seeds of A. angustifolia for 24 hours in a 3 molar (M) sucrose solution plus 12 hours in solution with 2M glucose + 0.4M sucrose prior to immersion in PVS2 for 24 hours, reduced viability and seed vigour. The freezing of A. angustifolia seeds, using cryoprotectants with glucose (60%) + glycerol (15%), at -5℃ and -18°C for 7 days, were lethal. The acclimatization of the seeds for 15 hours in a 0.3M solution of sucrose plus 8 hours in a 2M glucose + 0, 4M sucrose solution prior to immersion of 12 hours in PVS2 reduced seed viability and vigour. Freezing of acclimated seeds cryoprotected with PVS2, at -5℃ and -18°C for 7 days, was lethal. The results of these experiments not allowed to establish an efficient protocol for cryopreservation of A. angustifolia seeds.

FERNANDES, P. R. N. Avaliação do desempenho de ligante asfáltico modificado por poli (ácido fosfórico) (PPA) e efeitos da adição do líquido da casca da castanha de caju (LCC). 2011. 154 f. Tese (Doutorado em Química Orgânica) - Centro de Ciências, Universidade Federal do Ceará, Fortaleza, 2011. / Submitted by José Jairo Viana de Sousa (jairo@ufc.br) on 2014-10-13T19:08:21Z No. of bitstreams: 1 2011_tese_prnfernandes.pdf: 2392354 bytes, checksum: a9e527e3a1b6584d4da375b8fa5381ba (MD5) / Approved for entry into archive by José Jairo Viana de Sousa(jairo@ufc.br) on 2015-04-22T22:14:25Z (GMT) No. of bitstreams: 1 2011_tese_prnfernandes.pdf: 2392354 bytes, checksum: a9e527e3a1b6584d4da375b8fa5381ba (MD5) / Made available in DSpace on 2015-04-22T22:14:25Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2011_tese_prnfernandes.pdf: 2392354 bytes, checksum: a9e527e3a1b6584d4da375b8fa5381ba (MD5) Previous issue date: 2011 / The AC with 50/70 penetration grade (Petrobras - LUBNOR), pure and modified by polyphosphoric acid (PPA), was analyzed by rheological tests (viscosity and DSR), thermal analysis (TGA and DSC), spectrometric (NMR and FTIR) and chromatographic (TLC-FID and GPC) methods. The interaction of AC with PPA was investigated from the reactions of its fractions (aromatics, resins and asphaltenes) with the PPA. The 31P NMR spectra indicated that the reaction occurs preferentially with the resins and asphaltenes. The parameters G * and tan δ, obtained from the rheological tests showed that the PPA has promoted an improvement in the performance of the AC in relation to the stiffness and elasticity, making the binder modified with PPA more resistant to permanent deformation and fatigue cracking. The results show that modification with PPA increased the viscosity of the binder, the mixing and compaction temperatures, as well as the thermal susceptibility. In an attempt to reduce these effects - which increase energy cost substantially during processing, we have incorporated a new additive - the cashew nut shell liquid (CNSL) to the AC / PPA. The effects of the CNSL addition of AC + PPA were: reduction in viscosity, mixing and compaction temperature and thermal susceptibility, so the LCC presents useful as an additive to improve the performance of the regarding AC + PPA to these properties. For comparison, the properties of the LCC as an additive modifier pure AC were also analyzed. The modification of the AC + PPA with LCC and the two combined additives (PPA + LCC) was analyzed using the master curves, caused a significant increase in complex modulus G *, especially at low frequencies (high temperatures), making these binders resistant to permanent deformation at higher temperatures. All modifiers lead to a decrease in the value of tan δ, which means that these additives provide greater elasticity to the asphalt binder. The effects of the combination of PPA + CNSL modifiers, resulted in intermediate values of viscosity, flow activation energy and TUC compared to the effects caused by the two additives alone. The AC + PPA + CNSL also had the lowest aging index values, indicating a greater resistance to aging. Regarding storage stability, the additives showed good compatibility with the binder, and the CNSL showed lower values of the separation index and, therefore, the best result. The values of glass transition temperature as measured by the DSC curves were lower for the modified binders, suggesting that they may be used at temperatures lower than the binder source. Chromatographic data on the composition SARA (saturates, aromatics, resins and 19 asphaltenes) showed a change in the composition of the binders after the aging process of the samples. However, all the binders (pure and modified) were classified as gel-type. The GPC results showed that the values of molar mass fractions I (asphaltenes) and II (maltene) of all the binders studied increased after the aging process. The mechanical tests showed that the addition of PPA and the CNSL improves the mechanical properties and adhesiveness of mixtures. / O CAP 50/70 (Petrobras - LUBNOR) puro e modificado por poli (ácido fosfórico) (PPA) foram analisados quanto as suas principais características utilizando-se de ensaios reológicos (viscosidade e DSR), análise térmica (TGA e DSC), métodos espectrométricos (RMN e FTIR) e cromatográficos (TLC-FID e GPC). A interação do CAP com o PPA foi investigada a partir das reações de suas frações (aromáticos, resinas e asfaltenos) com o PPA. Os espectros de RMN 31P indicaram que a reação ocorre preferencialmente com as resinas e os asfaltenos. Os parâmetros G* e tan δ, obtidos através dos ensaios reológicos, mostraram que o PPA promoveu uma melhoria no desempenho do CAP em relação à rigidez e elasticidade, tornando o ligante modificado com PPA mais resistente à deformação permanente e ao trincamento por fadiga. O CAP modificado com PPA apresentou um aumento na viscosidade, na temperatura de usinagem e compactação (TUC) e também a suscetibilidade térmica em relação ao CAP puro. Na tentativa de reduzir esses efeitos - que elevam o gasto energético de modo substancial durante o processamento, foi incorporado um novo aditivo – o líquido da casca da castanha de caju (LCC) ao CAP + PPA. Os efeitos da adição do LCC ao CAP + PPA foram: redução na viscosidade, na temperatura de compactação e usinagem (TCU) e na suscetibilidade térmica, portanto, o LCC apresenta-se como aditivo útil para melhorar o desempenho do CAP + PPA em relação a essas propriedades. Para efeito comparativo, as propriedades do LCC como aditivo modificador do CAP puro também foram analisadas. A modificação do CAP com PPA, com LCC e com os dois aditivos combinados (PPA + LCC) foi analisada através das curvas mestras: provocou um aumento significativo no módulo complexo G*, principalmente em baixas frequências (altas temperaturas), tornando esses ligantes mais resistentes à deformação permanente em temperaturas mais elevadas. Todos os modificadores promoveram uma diminuição no valor da tangente de delta (tan ), o que significa que esses aditivos proporcionam maior elasticidade ao ligante asfáltico. Os efeitos da combinação dos modificadores PPA + LCC, resultaram em valores intermediários de viscosidade, energia de ativação de fluxo e TUC quando comparados aos efeitos provocados pelos dois aditivos isoladamente. O CAP + PPA + LCC ainda apresentou os menores valores do índice de envelhecimento, indicando uma maior resistência ao envelhecimento. Em relação aos estudos de estabilidade à estocagem, os aditivos demostraram boa compatibilidade com o ligante, sendo que a amostra com LCC apresentou menores valores do índice de separação (Is) e, portanto, melhor resultado. Os valores da temperatura de transição vítrea (Tg) medidos através das curvas de DSC foram menores para os ligantes modificados, sugerindo que os mesmos podem ser utilizados em temperaturas mais baixas que o ligante de origem. Dados cromatográficos relativos à composição SARA (saturados, aromáticos, resinas e asfaltenos) mostraram uma mudança na composição dos ligantes após o processo de envelhecimento das amostras, no entanto, todos os ligantes (puro e modificados) foram classificados como ligantes do tipo GEL. Os resultados de GPC mostraram que os valores de massa molar das frações I (asfaltenos) e II (maltenos) dos ligantes estudados aumentaram após do processo de envelhecimento. Os ensaios mecânicos dos corpos de prova das misturas asfálticas trabalhadas (ligantes + agregados) mostraram que a adição de PPA, bem como a de LCC, melhoram as propriedades mecânicas e a adesividade das misturas.

NASCIMENTO, T. L. Síntese e caracterização de uma meso-porfirina, derivada do LCC, como desativadora dos metais: zinco, cobre e níquel. 2010. 96 f. Dissertação (Mestrado em Química) - Centro de Ciências, Universidade Federal do Ceará, Fortaleza, 2010. / Submitted by Daniel Eduardo Alencar da Silva (dealencar.silva@gmail.com) on 2014-11-28T20:14:25Z No. of bitstreams: 1 2010_dis_tlnascimento.pdf: 6055501 bytes, checksum: 76dc80a814112d943bd4a5e493a6be90 (MD5) / Approved for entry into archive by José Jairo Viana de Sousa(jairo@ufc.br) on 2015-12-22T19:44:01Z (GMT) No. of bitstreams: 1 2010_dis_tlnascimento.pdf: 6055501 bytes, checksum: 76dc80a814112d943bd4a5e493a6be90 (MD5) / Made available in DSpace on 2015-12-22T19:44:01Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2010_dis_tlnascimento.pdf: 6055501 bytes, checksum: 76dc80a814112d943bd4a5e493a6be90 (MD5) Previous issue date: 2010 / A busca por processos químicos que reduzam ou eliminem o uso e a geração de substâncias tóxicas tem sido crescente nas últimas décadas. Com este novo direcionamento para redução do impacto das atividades industriais, foram propostas alternativas que possam reduzir o impacto ambiental. Neste aspecto, foram sintetizados meso-porfirnas do tipo A4 (meso-5,10,15,20) a partir do Líquido da Casca da Castanha do Caju - LCC (uma fonte renovável, local, abundante e biodegradável). O primeiro derivado refere-se à formação do composto bromado, seguido da obtenção do derivado aldeídico, finalmente, com o auxílio do pirrol, tem-se a formação da meso-porfirina. Os compostos foram purificados em coluna cromatográfica e caracterizados por técnicas experimentais de RMN 13C e 1H , GC-EM, IV e UV-VIS, que confirmaram a obtenção do produto desejado. A porfirina base livre foi submetida aos processos de metalação utilizando-se para isto, Ni(C2H3O2).4H2O, Zn(CH3COO)2 e Cu(CH3COO)2, como sal doador do metal e diclorometano como solvente, a reação permaneceu em agitação constante. A metalação foi acompanhada por espectroscopia no UV-VIS e cromatografia de camada delgada.

Tese (doutorado) - Universidade Federal de Santa Catarina, Centro de Ciências Físicas e Matemáticas, Programa de Pós-Graduação em Química, Florianópolis, 2017. / Made available in DSpace on 2017-10-24T03:20:32Z (GMT). No. of bitstreams: 1 347954.pdf: 2389487 bytes, checksum: d13e521f19c50d36677fc9bcd8c5a2fc (MD5) Previous issue date: 2017 / Este trabalho tem como foco o desenvolvimento de metodologias para a determinação de pesticidas em diferentes matrizes. O primeiro capítulo trata da avaliação da exposição de operadores de tratores agrícolas com cabines seladas, durante a aplicação real de fenitrotion em pomares de maça. Esta exposição foi testada por meio do uso de alvos artificiais de algodão como método de amostragem, com posterior extração ultrassônica e determinação por cromatografia líquida com detecção por ultravioleta (HPLC-UV). Para a cromatografia foi aplicado um planejamento experimental com resposta máxima utilizando a composição em fase móvel de 35:65 (água: acetonitrila), temperatura da coluna em 40 °C e taxa de fluxo de fase móvel de 1,0 mL min-1. O método foi avaliado por critérios estipulados pela ANVISA, apresentando boa seletividade e calibração por adição de padrão sobre a matriz linear na faixa de 0,50 a 2,01 mg kg-1. A metodologia demonstrou-se precisa e exata, com coeficientes de variação entre 0,17 e 3,41% e recuperação entre 94 e 104 %. O método foi capaz de detectar o fenitrotion sobre a matriz a partir de 0,18 mg kg-1 e quantificar a partir de 0,50 mg kg-1. As amostras de alvos artificiais de algodão, usadas na avaliação da exposição dos EPIs dos agricultores e do interior da cabine de um trator agrícola, apresentaram valores de fenitrotion abaixo do limite de detecção do método. O segundo capítulo trata da aplicação de metodologias propostas pela Norma Brasileira, NBR 10004/2004, no preparo de amostras e determinação de dezoito pesticidas em matrizes de água residual e resíduos de diatomáceas, utilizadas como modelo de resíduos líquidos e sólidos, respectivamente, da indústria petrolífera. As amostras líquidas foram submetidas à microextração líquida e as sólidas à extração ultrassônica, com determinação por cromatografia a gás e espectrometria de massa (GC/MS). A avaliação do método apresentou linearidade ideal (r > 0,99) na calibração externa para todos os analitos em duas faixas lineares estudadas, a curva 1 de 0,5 a 10 µg L-1 e a curva 2 de 10 a 200 µg L-1. As precisões intra-corridas e intermediárias apresentram coeficientes de variação superiores a 5%, porém a exatidão se mostrou adequada com porcentagens de recuperação entre 94,4 e 103,7 % na curva 1, e entre 103,0 a 109,8 % na curva 2. Por fim, os limites de detecção e quantificação demonstraram a capacidade em determinar os analitos nos limites preconizados pela NBR 10004/2004.<br> / Abstract : This work has as main focus the development of methodologies for the determination of agrochemicals in different matrices. The first chapter deals with the evaluation of the level of exposure of farmers in agricultural tractors with sealed cabins, during the actual application of fenitrotion in apple orchards. The exposure was evaluated through the use of artificial cotton targets with subsequent ultrasonic extraction and determination by liquid chromatography with ultraviolet detection (HPLC-UV). For the latter, a maximum response experimental design using the mobile phase composition of 35:65 (water: acetonitrile), column temperature at 40 ° C and mobile phase flow rate of 1.0 mL min-1 was applied. The method was evaluated by criteria stipulated by ANVISA, showing good selectivity and calibration by addition of standard on the linear matrix in the range of 0.50 to 2.01 mL min-1. The methodology was shown to be accurate and accurate, with coefficients of variation between 0.17 and 3.41% and recovery levels between 94 and 104%. The method was able to detect fenitrothion on the matrix from 0.18 mg kg-1 and quantify it from 0.50 mg kg-1. All actual samples of artificial cotton targets showed fenitrothion values below the detection limit of the method. The second chapter deals with the application of methodologies proposed by the Brazilian Standard, NBR 10004/2004, in the preparation of samples and determination of eighteen pesticides in diatomaceous and wastewater matrices from the petroleum industry. The liquid samples were submitted to liquid microextraction and the solid samples were subjected to ultrasonic extraction, determined by gas chromatography and mass spectrometry (GC/MS). The evaluation of the method showed ideal linearity (r> 0.99) in the external calibration for all analytes in two linear ranges studied, curve 1 of 0.5 to 10 µg L-1 and curve 2 of 10 to 200 µg L-1. The daily precision of the method presented a slight imprecision, with variations between 7.80 and 13.50% for curve 1 and between 6.15 and 8.78% for curve 2. The intermediate precision presented values with greater variation, with Between 23.6 and 33.0% for curve 1 and 19.0 to 30.5% for curve 2. The accuracy of the method presented adequate values, with recovery levels between 94.4 and 103.7% for Curve 1, 103 to 109.8% and curve 2. Finally, the limits of detection and quantification demonstrated the ability of the method to determine the analytes within the limits stipulated by NBR 10004.

A triagem neonatal (TN) tornou-se uma importante intervenção de saúde pública para a detecção precoce e prevenção de doenças, ajudando a reduzir a morbidade e a mortalidade em crianças. As doenças lisossômicas de depósito (DLDs) são distúrbios genéticos, clinicamente heterogêneos, causados principalmente por defeitos em genes que codificam enzimas lisossômicas que degradam macromoléculas. As opções terapêuticas para essas doenças evoluíram bastante nos últimos anos e muitas das DLDs têm atualmente tratamento disponível que pode melhorar a evolução clínica, especialmente se forem introduzidos precocemente. Esse fato mostra claramente a necessidade de diagnóstico precoce e oportuno, de preferência durante a fase assintomática da doença, o que apoia o desenvolvimento de TN para alguns desses distúrbios. Embora vários estudos já tenham estabelecido métodos de triagem adequados para uso em programas de TN, pouco foi discutido sobre outros procedimentos, posteriores à triagem. Portanto, nesse estudo, avaliamos protocolos para o diagnóstico confirmatório de casos que resultarão alterados nos programas de TN para DLDs tratáveis, considerando sua potencial implementação no Brasil. Inicialmente, revisamos, coletamos e resumimos informações sobre protocolos e estratégias para confirmação diagnóstica de casos triados positivos para a doença de Fabry, doença de Gaucher, doença de Pompe e Mucopolissacaridose (MPS) tipo I, II e VI. Duas estratégias foram identificadas para o diagnóstico de quase todas essas doenças. Um baseado apenas na análise molecular e outro baseado principalmente na análise enzimática e na análise molecular. Depois, avaliamos as estratégias de diagnóstico confirmatório, previamente reportados, para investigar quatro casos que foram encaminhados a partir de um estudo de TN para DLDs realizado em mais de 10.000 recém-nascidos no Brasil. Dois casos de pseudodeficiência foram identificados, um para a doença de Pompe e um para MPS I. Além disso, dois portadores (heterozigotos) também foram identificados, um para MPS I e um para a doença de Gaucher. Esse estudo discute também as limitações das análises enzimáticas e moleculares na confirmação do diagnóstico, os desafios que podem ser encontrados durante a interpretação dos resultados e a necessidade de um protocolo abrangente para a investigação precisa de casos em suspeita, identificados por estudos de TN para DLDs. Por conseguinte, um protocolo foi desenvolvido com recomendações para o diagnóstico confirmatório de casos que resultarão alterados após o teste inicial para MPS I, proposto como modelo para a futura elaboração de protocolos para as demais doenças. Finalmente, o custo global de um programa de TN para DLDs foi estimado, na base do estudo piloto realizado no Brasil, considerando a fase da triagem e a estrutura do protocolo de confirmação diagnóstica. Esse estudo representa uma base para avaliações mais abrangentes destes programas, em vista de uma possível implementação em grande escala. / Newborn screening (NBS) has become an important public health intervention for early detection and prevention of diseases, helping to reduce the morbidity and mortality in children. Lysosomal storage diseases (LSD) are genetic disorders, clinically heterogeneous, caused mainly by defects in genes encoding lysosomal enzymes that degrade macromolecules. Therapeutic options for these disorders have substantially evolved in the last years and many of the LSDs currently have available treatment that may improve clinical outcomes, especially if early introduced. This fact clearly raises the need for early and timely diagnosis, preferably during the asymptomatic stage of the disease, which supports the development of NBS for some of these disorders. While several studies have already established screening methods suitable for use in NBS programs, little has been discussed on further procedures. In this study, we evaluated protocols for the confirmatory diagnosis of cases that will result altered in NBS programs for treatable LSDs, considering its potential implementation in Brazil. Initially, we reviewed, collected and summarized information on protocols and strategies for diagnosis confirmation of cases screened positive for Fabry disease, Gaucher disease, Pompe disease and Mucopolysaccharidosis (MPS) type I, II and VI. Two strategies were identified for the diagnosis of almost all these diseases. One based only in the molecular analysis and the other based mainly in both the enzyme analysis and molecular analysis. Then, we evaluated the previously reported confirmatory diagnostic strategies to investigate four cases that were referred from a NBS study for LSDs performed in over 10,000 newborns in Brazil. Two cases of pseudodeficiency were identified, one for Pompe disease and one for MPS I. In addition, two carriers (heterozygotes) were also identified, one for MPS I and one for Gaucher disease. This report discusses the limitations of enzymatic and molecular analyses in diagnosis confirmation, the challenges that may be found during result interpretation and the need for a comprehensive protocol for precise investigation of cases in suspicion identified by NBS studies for LSDs. Therefore, a protocol was developed that comprises recommendations for the confirmatory diagnosis of cases that will result abnormal after the initial testing for MPS I, proposed as a template for the future development of similar protocols for the other diseases. Finally, the overall cost of a NBS program for LSDs was estimated, based on the pilot study conducted in Brazil, considering the screening phase and the structure of the diagnosis confirmation protocol. This study provides a basis for more comprehensive assessments of these programs in view of potential large-scale implementation.

Tese (doutorado)—Universidade de Brasília, Instituto de Ciências Biológicas, Programa de Pós-Graduação em Biologia Animal, 2017. / Submitted by Fernanda Percia França (fernandafranca@bce.unb.br) on 2017-04-07T20:01:31Z No. of bitstreams: 1 2017_KarenRappPy-Daniel.pdf: 6420974 bytes, checksum: 33a42a53183e114b8235aadbb5e889c0 (MD5) / Approved for entry into archive by Guimaraes Jacqueline(jacqueline.guimaraes@bce.unb.br) on 2017-04-18T14:22:30Z (GMT) No. of bitstreams: 1 2017_KarenRappPy-Daniel.pdf: 6420974 bytes, checksum: 33a42a53183e114b8235aadbb5e889c0 (MD5) / Made available in DSpace on 2017-04-18T14:22:30Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2017_KarenRappPy-Daniel.pdf: 6420974 bytes, checksum: 33a42a53183e114b8235aadbb5e889c0 (MD5) / Sistemas de liberação de fármacos com base em nanossistemas tornou-se um campo de interesse nas últimas décadas devido à sua capacidade de transporte e entrega de fármacos, proteção contra a degradação do princípio ativo e redução de efeitos colaterais. Entretanto, elucidar como os componentes de nanossistemas se comportam quando expostos a sistemas biológicos, é um passo fundamental a ser dado para que possamos compreender melhor como fazer seu uso clínico. O fotossensibilizante hidrofóbico alumínio-cloro ftalocianina (AlClFt) já foi utilizado no tratamento de câncer de língua, na eliminação de cáries dentárias, câncer de pulmão, entre outros, associada a nanossistemas para superar a hidrofobicidade de AlClFt. Entretanto, pouco se sabe sobre a consequência biológica da exposição à AlClFt, tanto in vitro quanto in vivo. No presente estudo foram realizadas três abordagens visando esclarecer a dinâmica biológica de nanossistemas contendo AlClFt. Na primeira abordagem micelas de Pluronic® F-127 contendo AlClFt (F-127/AlClFt), foram preparadas, caracterizadas fotofísicamente e testadas quanto à geração de oxigênio singleto e sua eficiência terapêutica contra células de adenocarcinoma de pulmão foi confirmada. A segunda abordagem visou estudar por espectrometria de massa a molécula AlClFt antes e após exposição a tecidos biológicos, além de desenvolver e validar método de cromatografia líquida de ultra alta eficiência para detecção de AlClFt em nanossistemas e matrizes biológicas. O método foi validado quanto à seletividade, linearidade, limites de detecção e quantificação, precisão e recuperação. A massa molecular de AlClFt identificada experimentalmente por espectrometria de massa foi menor do que a massa esperada indicando a perda do átomo de cloro quando em solução e a formação de aduto com solvente eluente (metanol) quando associada a cromatografia líquida. O método bioanalítico desenvolvido apresentou aplicabilidade e robustez para uso em estudos de biodistribuição. A terceira abordagem apresentou uma nanoemulsão magnética contendo AlClFt, sua caraterização, efetividade terapêutica in vitro nas linhagens de carcinoma de pulmão de células não pequenas e em macrófagos murinos, assim como sua biodistribuição in vivo avaliada por tomografia computadorizada por emissão de fóton único, fluorescência por imagem e por cromatografia líquida de alta eficiência. A caracterização físico-química de NE-MAG indicou a presença de duas subpopulações compondo o produto final: uma nanoemulsão não-magnética e uma nanoemulsão magnética. A instabilidade decorrente do isolamento das subpopulações, levou à realização do presente trabalho com o nanossistema contendo a mistura das duas subpopulações. A terapia fotodinâmica das células expostas a NE-MAG resultou na identificação de concentração citotóxica que diminui a viabilidade em 50% mais baixa do que já descrito para outras linhagens com o mesmo fotossensibilizante. A biodistribuição de componente magnético por emissão de fóton único indicou captação majoritária pelo fígado e baço em todos os tempos estudados (até 72 horas). A análise de fluorescência por imagem de AlClFt no nanossistema, mostrou intensa captação por fígado e pulmão enquanto que a quantificação analítica de AlClFt por cromatografia líquida indicou maior quantidade de AlClFt recuperado de fígado e rins. A diversidade do encontrado nas diferentes técnicas é justificada pela complexidade do nanossistema utilizado e reforça a importância da associação de técnicas para estudos de biodistribuição devido às diversas vantagens e limitações de cada técnica. Desta forma, as três abordagens utilizadas contribuem para a elucidação da dinâmica biológica de nanossistemas contendo AlClFt. / Nanosystem-based drug delivery systems have become a field of interest in recent decades due to their ability to transport and deliver drugs, avoid degradation of the active principle and prevent side effects. However, elucidating how components of a nanosystem behave once exposed to biological systems is a fundamental step to be taken so that we can understand how to use them in living beings. The hydrophobic photosensitizer aluminum-chlorine phthalocyanine (AlClFt) has already been used in the treatment of tongue cancer, against dental caries, lung cancer, among others, associated with nanosystems to overcome the hydrophobicity of AlClFt. However, little is known about the biological consequence of exposure to AlClFt, both in vitro and in vivo. In the present study three approaches were made to clarify the biological dynamics of nanosystems containing AlClFt. In the first approach, Pluronic F-127 micelles containing AlClFt (F-127/AlClFt) were produced, photophysically characterized and tested for singlet oxygen generation and their therapeutic efficacy against lung adenocarcinoma was confirmed. The second approach was to study by mass spectrometry AlClFt molecule before and after exposure to biological tissues and to develop and validate an ultra-high performance liquid chromatography method for detection of AlClFt in nanosystems and in biological matrices. The method was validated for selectivity, linearity, limits of detection and quantification, accuracy and recovery. The mass of AlClFt experimentally identified by mass spectrometry was lower than the predicted mass indicating the loss of the chlorine atom when in solution and the formation of aducts with eluting solvent (methanol) when combined with liquid chromatography. The developed bioanalytical method presented applicability and robustness for use in biodistribution studies. The third approach presented magnetic nanoemulsion containing AlClFt, its characterization, in vitro therapeutic effectiveness in non-small cell lung carcinomas and murine macrophages, as well as its in vivo biodistribution evaluated by single photon emission computed tomography, fluorescence imaging and by high performance liquid chromatography. The physico-chemical characterization indicated the presence of two subpopulations composing the final product: a non-magnetic nanoemulsion and a magnetic nanoemulsion containing AlClFt (NE-MAG-Ft). The instability resulting from the isolation of the subpopulations led to the use in the present work of nanosystem containing the mixture of the two subpopulations. Photodynamic therapy of cells with NE-MAG-Ft yielded a cytotoxic concentration that decreases viability by 50% lower than previously described for other strains with the same photosensitizer. The biodistribution of the magnetic component by single photon emission demonstrated a major uptake by the liver and spleen at all studied times (up to 72 hours). Fluorescence analysis of AlClFt in the nanosystem demonstrated intense liver and lung uptake while analytical quantification of AlClFt by liquid chromatography indicated more AlClFt in liver and kidneys. The diversity of the different techniques is justified by the complexity of the nanosystem used and reinforces the importance of the association of techniques for biodistribution studies due to the different advantages and limitations of each technique. In this way, the three approaches used contribute to the elucidation of the biological dynamics of AlClFtcontaining nanosystems.

Made available in DSpace on 2016-04-05T02:04:23Z (GMT). No. of bitstreams: 1 000477910-Texto+Parcial-0.pdf: 529395 bytes, checksum: a63dcc0bee5b3691d04ddc38e874be24 (MD5) Previous issue date: 2016 / Objective: To compare the ferritin levels in the cerebrospinal fluid (CSF) of children with clinical suspicion bacterial meningitis, viral and non-meningitis cases. Methods: A cohort, historical and contemporary study was conducted in two tertiaries hospitals in the southern Brazil. All children included were between 28 days and 12 years old with suspected acute meningitis. Ferritin levels in the CSF were measured in the period between 2005 and 2015 and they were compared among patients with bacterial meningitis, viral meningitis and non-meningitis. Results: Eighty one patients were included. The median age was 24 (IQR8. 0-69. 0) months. It was identified 32 patients with viral meningitis (39%), 23 with bacterial (28%) and 26 as non-meningitis (32%). Demographic and clinical characteristics at admission were similar between groups. The median CSF ferritin was 52. 8 (IQR30. 7-103. 0) for the bacterial meningitis group, 4. 1 (IQR3. 0-6. 7) for the viral group and 4. 0 (IQR2. 0-2. 3) for the non-meningitis group (p<0. 001). When compared in pairs, bacterial meningitis was distinguished from viral meningitis (p <0. 001) and non-meningitis (p <0. 001). However, ferritin levels failed to distinguish viral meningitis from non-meningitis. The CSF ferritin, with a cut-off value of 16 ng/ml, had 100% sensitivity and 98. 3% specificity for bacterial meningitis. Conclusion: CSF ferritin was shown to be an excellent marker for identifying and discriminating bacterial meningitis in children with clinical symptoms of this disease. / Objetivo: Comparar os níveis de ferritina no líquido cefalorraquidiano (LCR) de crianças com suspeita clínica de meningite bacteriana, viral e não meningite. Metodologia: Estudo de coorte, histórico e contemporâneo realizado em dois hospitais terciários do Sul do Brasil. Foram incluídas todas as crianças entre 28 dias e 12 anos de vida, que se apresentaram com suspeita clínica de meningite aguda, em que foram dosados os níveis de ferritina no LCR no período entre 2005 e 2015. Foram comparados os níveis de ferritina no LCR dos pacientes com meningite viral, meningite bacteriana e não meningite. Resultados: Foram incluídos 81 pacientes. A mediana da idade foi 24 (IQR8,0-69,0) meses. Identificou-se 32 pacientes com meningite viral (39%), 23 com bacteriana (28%) e 26 com não meningite (32%). As características demográficas e clínicas na internação foram semelhantes entre os grupos. A mediana da ferritina no LCR foi 52,8 (IQR30,7-103,0) para o grupo da meningite bacteriana, 4,1 (IQR3,0-6,7) para o grupo viral e 4,0 (IQR2,0-2,3) para o grupo não meningite (p<0,001). Quando comparados os pares, distinguiu-se meningite bacteriana da meningite viral (p<0,001) e da não meningite (p<0,001). Entretanto, não conseguiu distinguir meningite viral da não meningite. A ferritina no LCR, com um ponto de corte de 16ng/ml, mostrou uma sensibilidade de 100% e uma especificidade de 98,3% para o diagnóstico de meningite bacteriana. Conclusão: A ferritina no LCR mostrou-se um marcador excelente para identificar e discriminar meningite bacteriana em crianças com sintomas clínicos desta doença.

Resumo: A causa mais freqüente de mortalidade perinatal em gestantes diabéticas é a malformação congênita, enquanto a principal causa de morbidade é o crescimento fetal anômalo. Anormalidades na oferta de nutrientes ao feto provavelmente desencadeiam alterações na trajetória do crescimento fetal. A hiperglicemia materna é apontada como a primeira determinante do crescimento fetal excessivo, devido a oferta de grandes quantidades de glicose ao feto, o que desencadeia hiperinsulinemia fetal. O crescimento fetal excessivo pode ser identificado em fetos grandes para idade gestacional (GIG),definidos como aqueles com peso acima do percentil 90 ou pela macrossomia, definida por peso ao nascimento acima de 4000g. A típica fetopatia diabética é caracterizada pelo aumento de proteínas corporais totais, glicogênio e gordura, além do aumento (hiperplasia e hipertrofia) de órgãos internos como fígado, coração, tecido adiposo e tecido das ilhotas pancreáticas. Este aumento seletivo dos órgãos internos contribui para uma composição corporal desarmônica que pode não ser revelada pelo peso corporal ou altura. O controle glicêmico em gestantes diabéticas está relacionado com melhora da morbidade perinatal, mas as taxas de macrossomia nestas gestações continuam altas, quando comparadas com grupo controle. A avaliação ultrassonográfica é capaz de detectar fetos em risco para crescimento excessivo, usando a medida da circunferência abdominal (CA). Foi demonstrado e estabelecido que a CA fetal acima do percentil 75 para a idade gestacional está relacionada com fetos em alto risco para crescimento excessivo e aumenta a chance para que estes fetos sejam grandes para a idade gestacional (GIG). Este achado (CA > percentil 75) vem sendo utilizado como ferramenta adicional ao ajuste da dose de insulina naquelas pacientes que fazem uso desta medicação. Quando a circunferência abdominal... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract: The aim of this study was to analyze the Sonographic Evaluation of Fetal Biometry and Amniotic Fluid Index (AFI) in Relation to Maternal Mean Glycemic Levels (MGL) in pregnancies complicated by diabetes mellitus. We hypothesized that maternal hyperglycemia would result in an increased of fetal growth parameters and AFI and that combined analysis of these would point out those fetuses at high risk for disproportional growth. his is an observational, retrospective, cross section, analytic study of 305 singleton pregnancies complicated by diabetes mellitus. Fetal biometric parameters (Head Circumference - HC, Abdominal Circumference - AC and Head Circumference to Abdominal Circumference ratio - HC/AC) and the Amniotic Fluid Index (AFI) were transformed in centiles and correlated to the daily maternal mean glycemic levels (MGL). The diabetic patients were divided according to the mean glycemic levels performed within two weeks of the ultrasound examination in two (< 120 and ≥ 120mg/dL) or three groups (< 100, 100-119 and ≥ 120mg/dL). The fetal sonographic parameters were evaluated overall gestational ages. In order to evaluate if mean glycemic level could have a specific influence on sonographic parameters in different gestation ages we have also subdivided the patients according to gestational age in two (< 25 and ≥ 25weeks) or three (< 25, 25-32 and ≥ 33weeks) groups. Kruskal-Wallis test was used as distribution comparison when three different groups were present, and when statistical significance was found, Mann-Whitney was used to test differences within groups. Mann-Whitney was also used as mean of comparison when two different groups were present. Correlation between the variables was assessed by linear correlation (Spearman). We have performed five different analysis. The first one, was the evaluation of the difference between the ultrasound parameters in two different maternal... (Complete abstract click electronic access below) / Orientador: Marilza Vieira Cunha Rudge / Coorientador: Marcos Consonni / Banca: Roberto Antônio de Araújo Costa / Banca: Nelson Lourenço Maia Filho / Mestre

Made available in DSpace on 2014-06-11T19:29:52Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2011-06-26Bitstream added on 2014-06-13T19:18:29Z : No. of bitstreams: 1 luminoso_d_me_botfm.pdf: 1081699 bytes, checksum: 24c639624e62da1087661667b17c4f02 (MD5) / Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e Tecnológico (CNPq) / A causa mais freqüente de mortalidade perinatal em gestantes diabéticas é a malformação congênita, enquanto a principal causa de morbidade é o crescimento fetal anômalo. Anormalidades na oferta de nutrientes ao feto provavelmente desencadeiam alterações na trajetória do crescimento fetal. A hiperglicemia materna é apontada como a primeira determinante do crescimento fetal excessivo, devido a oferta de grandes quantidades de glicose ao feto, o que desencadeia hiperinsulinemia fetal. O crescimento fetal excessivo pode ser identificado em fetos grandes para idade gestacional (GIG),definidos como aqueles com peso acima do percentil 90 ou pela macrossomia, definida por peso ao nascimento acima de 4000g. A típica fetopatia diabética é caracterizada pelo aumento de proteínas corporais totais, glicogênio e gordura, além do aumento (hiperplasia e hipertrofia) de órgãos internos como fígado, coração, tecido adiposo e tecido das ilhotas pancreáticas. Este aumento seletivo dos órgãos internos contribui para uma composição corporal desarmônica que pode não ser revelada pelo peso corporal ou altura. O controle glicêmico em gestantes diabéticas está relacionado com melhora da morbidade perinatal, mas as taxas de macrossomia nestas gestações continuam altas, quando comparadas com grupo controle. A avaliação ultrassonográfica é capaz de detectar fetos em risco para crescimento excessivo, usando a medida da circunferência abdominal (CA). Foi demonstrado e estabelecido que a CA fetal acima do percentil 75 para a idade gestacional está relacionada com fetos em alto risco para crescimento excessivo e aumenta a chance para que estes fetos sejam grandes para a idade gestacional (GIG). Este achado (CA > percentil 75) vem sendo utilizado como ferramenta adicional ao ajuste da dose de insulina naquelas pacientes que fazem uso desta medicação. Quando a circunferência abdominal... / The aim of this study was to analyze the Sonographic Evaluation of Fetal Biometry and Amniotic Fluid Index (AFI) in Relation to Maternal Mean Glycemic Levels (MGL) in pregnancies complicated by diabetes mellitus. We hypothesized that maternal hyperglycemia would result in an increased of fetal growth parameters and AFI and that combined analysis of these would point out those fetuses at high risk for disproportional growth. his is an observational, retrospective, cross section, analytic study of 305 singleton pregnancies complicated by diabetes mellitus. Fetal biometric parameters (Head Circumference - HC, Abdominal Circumference - AC and Head Circumference to Abdominal Circumference ratio - HC/AC) and the Amniotic Fluid Index (AFI) were transformed in centiles and correlated to the daily maternal mean glycemic levels (MGL). The diabetic patients were divided according to the mean glycemic levels performed within two weeks of the ultrasound examination in two (< 120 and ≥ 120mg/dL) or three groups (< 100, 100-119 and ≥ 120mg/dL). The fetal sonographic parameters were evaluated overall gestational ages. In order to evaluate if mean glycemic level could have a specific influence on sonographic parameters in different gestation ages we have also subdivided the patients according to gestational age in two (< 25 and ≥ 25weeks) or three (< 25, 25-32 and ≥ 33weeks) groups. Kruskal-Wallis test was used as distribution comparison when three different groups were present, and when statistical significance was found, Mann-Whitney was used to test differences within groups. Mann-Whitney was also used as mean of comparison when two different groups were present. Correlation between the variables was assessed by linear correlation (Spearman). We have performed five different analysis. The first one, was the evaluation of the difference between the ultrasound parameters in two different maternal... (Complete abstract click electronic access below)

A triagem neonatal (TN) tornou-se uma importante intervenção de saúde pública para a detecção precoce e prevenção de doenças, ajudando a reduzir a morbidade e a mortalidade em crianças. As doenças lisossômicas de depósito (DLDs) são distúrbios genéticos, clinicamente heterogêneos, causados principalmente por defeitos em genes que codificam enzimas lisossômicas que degradam macromoléculas. As opções terapêuticas para essas doenças evoluíram bastante nos últimos anos e muitas das DLDs têm atualmente tratamento disponível que pode melhorar a evolução clínica, especialmente se forem introduzidos precocemente. Esse fato mostra claramente a necessidade de diagnóstico precoce e oportuno, de preferência durante a fase assintomática da doença, o que apoia o desenvolvimento de TN para alguns desses distúrbios. Embora vários estudos já tenham estabelecido métodos de triagem adequados para uso em programas de TN, pouco foi discutido sobre outros procedimentos, posteriores à triagem. Portanto, nesse estudo, avaliamos protocolos para o diagnóstico confirmatório de casos que resultarão alterados nos programas de TN para DLDs tratáveis, considerando sua potencial implementação no Brasil. Inicialmente, revisamos, coletamos e resumimos informações sobre protocolos e estratégias para confirmação diagnóstica de casos triados positivos para a doença de Fabry, doença de Gaucher, doença de Pompe e Mucopolissacaridose (MPS) tipo I, II e VI. Duas estratégias foram identificadas para o diagnóstico de quase todas essas doenças. Um baseado apenas na análise molecular e outro baseado principalmente na análise enzimática e na análise molecular. Depois, avaliamos as estratégias de diagnóstico confirmatório, previamente reportados, para investigar quatro casos que foram encaminhados a partir de um estudo de TN para DLDs realizado em mais de 10.000 recém-nascidos no Brasil. Dois casos de pseudodeficiência foram identificados, um para a doença de Pompe e um para MPS I. Além disso, dois portadores (heterozigotos) também foram identificados, um para MPS I e um para a doença de Gaucher. Esse estudo discute também as limitações das análises enzimáticas e moleculares na confirmação do diagnóstico, os desafios que podem ser encontrados durante a interpretação dos resultados e a necessidade de um protocolo abrangente para a investigação precisa de casos em suspeita, identificados por estudos de TN para DLDs. Por conseguinte, um protocolo foi desenvolvido com recomendações para o diagnóstico confirmatório de casos que resultarão alterados após o teste inicial para MPS I, proposto como modelo para a futura elaboração de protocolos para as demais doenças. Finalmente, o custo global de um programa de TN para DLDs foi estimado, na base do estudo piloto realizado no Brasil, considerando a fase da triagem e a estrutura do protocolo de confirmação diagnóstica. Esse estudo representa uma base para avaliações mais abrangentes destes programas, em vista de uma possível implementação em grande escala. / Newborn screening (NBS) has become an important public health intervention for early detection and prevention of diseases, helping to reduce the morbidity and mortality in children. Lysosomal storage diseases (LSD) are genetic disorders, clinically heterogeneous, caused mainly by defects in genes encoding lysosomal enzymes that degrade macromolecules. Therapeutic options for these disorders have substantially evolved in the last years and many of the LSDs currently have available treatment that may improve clinical outcomes, especially if early introduced. This fact clearly raises the need for early and timely diagnosis, preferably during the asymptomatic stage of the disease, which supports the development of NBS for some of these disorders. While several studies have already established screening methods suitable for use in NBS programs, little has been discussed on further procedures. In this study, we evaluated protocols for the confirmatory diagnosis of cases that will result altered in NBS programs for treatable LSDs, considering its potential implementation in Brazil. Initially, we reviewed, collected and summarized information on protocols and strategies for diagnosis confirmation of cases screened positive for Fabry disease, Gaucher disease, Pompe disease and Mucopolysaccharidosis (MPS) type I, II and VI. Two strategies were identified for the diagnosis of almost all these diseases. One based only in the molecular analysis and the other based mainly in both the enzyme analysis and molecular analysis. Then, we evaluated the previously reported confirmatory diagnostic strategies to investigate four cases that were referred from a NBS study for LSDs performed in over 10,000 newborns in Brazil. Two cases of pseudodeficiency were identified, one for Pompe disease and one for MPS I. In addition, two carriers (heterozygotes) were also identified, one for MPS I and one for Gaucher disease. This report discusses the limitations of enzymatic and molecular analyses in diagnosis confirmation, the challenges that may be found during result interpretation and the need for a comprehensive protocol for precise investigation of cases in suspicion identified by NBS studies for LSDs. Therefore, a protocol was developed that comprises recommendations for the confirmatory diagnosis of cases that will result abnormal after the initial testing for MPS I, proposed as a template for the future development of similar protocols for the other diseases. Finally, the overall cost of a NBS program for LSDs was estimated, based on the pilot study conducted in Brazil, considering the screening phase and the structure of the diagnosis confirmation protocol. This study provides a basis for more comprehensive assessments of these programs in view of potential large-scale implementation.