Submitted by Luciana Ferreira (lucgeral@gmail.com) on 2016-04-18T14:57:11Z No. of bitstreams: 2 Tese - Clayson Moura Gomes - 2015.pdf: 2080474 bytes, checksum: e53c02c9eac98545d091fb13331c2b9a (MD5) license_rdf: 23148 bytes, checksum: 9da0b6dfac957114c6a7714714b86306 (MD5) / Approved for entry into archive by Luciana Ferreira (lucgeral@gmail.com) on 2016-04-18T14:58:58Z (GMT) No. of bitstreams: 2 Tese - Clayson Moura Gomes - 2015.pdf: 2080474 bytes, checksum: e53c02c9eac98545d091fb13331c2b9a (MD5) license_rdf: 23148 bytes, checksum: 9da0b6dfac957114c6a7714714b86306 (MD5) / Made available in DSpace on 2016-04-18T14:58:58Z (GMT). No. of bitstreams: 2 Tese - Clayson Moura Gomes - 2015.pdf: 2080474 bytes, checksum: e53c02c9eac98545d091fb13331c2b9a (MD5) license_rdf: 23148 bytes, checksum: 9da0b6dfac957114c6a7714714b86306 (MD5) Previous issue date: 2015-08-05 / Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de Goiás - FAPEG / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior - CAPES / Leishmaniasis are zoonoses present in several countries, being Leishmania (Viannia) braziliensis the main parasite that causes localized cutaneous (LCL) and / or mucous leishmaniasis (LM) in Brazil. It is not clear yet which factors favor the development of the mucosal form of the disease. The aim of this study was to evaluate the profile of experimental leishmaniasis in wild type mice and mice lacking the IFN, inos or gp91phox genes, after infection with L. (V.) braziliensis amastigotes isolated from patients with LCL or LM. Mice were inoculated with different amount of amastigote parasites in the foot paw and lesion development was measured weekly. Histopathological analyses were performed in hematoxilin eosin stained slides. The number of parasites present in the infected foot paw, lymph node and spleen during infection was estimated by the limiting dilution assay. It was observed that IFNγ or Phox KO mice infected with amastigotes isolated from LCL patients develop lesion earlier than mice infected with amastigotes from LM patients. iNOS KO mice infected with 1000 amastigotes isolated from LM patients developed greater lesion and more severe inflammation than mice infected with parasites from LCL at the 5th week. The IFNγ, iNOS and gp91phox mice had similar parasite number in the infected foot paw after infection with LM or LCL parasites .The parasite burden in lymph node and spleen was higher after infection with parasites from LM than LCL patients. The low ability of human macrophages to produce sufficient amount of NO can favor survive of LM parasites. Additionally, the increased ability of LM parasite to disseminate will facilitate migration to mucosal tissue to promote the mucosal disease. / As leishmanioses são zoonoses presentes em vários países do mundo, sendo Leishmania (Viania) braziliensis o parasito que causa a leishmaniose cutânea e/ou a leishmaniose mucosa no Brasil. Ainda não são claros os fatores que favorecem o desenvolvimento da forma mucosa da doença, porém é possível que fatores presentes nos parasitos sejam responsáveis pelo aparecimento de lesões mucosas. O objetivo deste estudo foi avaliar o perfil imunopatológico da leishmaniose experimental em camundongos do tipo selvagem e também em deficientes nos genes de IFN, inos ou gp91phox após a infecção com amastigotas de L. (V.) braziliensis isoladas de pacientes com leishmaniose cutânea localizada (LCL) ou leishmaniose mucosa (LM). Foram inoculadas diferentes quantidades de parasitos na pata dos camundongos e a progressão da lesão foi mensurada semanalmente. A análise histopatológica da lesão foi feita em lâminas coradas com hematoxilina e eosina. O número de parasitos presentes na pata infectada, linfonodo e baço dos animais infectados foi estimado pelo método de diluição limitante. Observou-se que os camundongos desprovidos de IFN ou phox infectados com amastigotas isoladas de pacientes com LCL desenvolveram a lesão mais precocemente do que camundongos infectados com amastigotas isoladas de pacientes com LM. A infecção de camundongos desprovidos de iNOS com 1000 amastigotas de pacientes com LM desencadeou uma lesão maior e com uma inflamação mais severa que aquela causada por parasitos de pacientes com LCL a partir da 5a semana. Animais deficientes de IFN, iNOS e gp91phox possuíam um número similar de parasitos na pata infectada, independente dos parasitos serem oriundos de pacientes com LCL ou LM. Nos linfonodos e baço foi observado mais parasitos quando os animais eram infectados com amastigotas de pacientes com LM. A pequena habilidade dos macrófagos humanos de produzir uma quantidade suficiente de NO pode favorecer a sobrevida de parasitos oriundos de LM. Além disso, o aumento da habilidade de parasitos de LM em se disseminar facilitaria a migração para os tecidos mucosos e promoveriam a doença na mucosa.

Background. There are few studies of renal function evaluation in visceral leishmaniasis (Kala-azar). The aim of this study was to investigate the clinical manifest and the risk factors associated with acute kidney injury (AKI) based on RIFLE criteria in patients with visceral leishmaniasis (VL). Methods. A retrospective study of medical records from patients over 14 years old, without previous kidney disease, with VL, treated at SÃo Josà Infectious Diseases Hospital, from 2002 to 2008. Clinical manifestations and risk factors for AKI (defined by using RIFLE criteria) were studied. A multivariate analysis was performed to analyze the risk factors for AKI. Results. A total of 224 patients were included. The mean age was 36Â15 years and 76.8% were males. AKI was observed in 76 patients (33.9% of cases) and % 52.6 (40) were class F on RIFLE criteria. The main clinical symptoms were dyspnea, edema and jaundice in patients with VL and AKI (p<0.05). Oliguria was observed in 6.5% of patients with AKI. Risk factors associated with AKI were male gender (OR=2.2, 95% CI= 1.0-4.7, p=0.03), age > 40 years (OR = 1.05, 95% CI= 1.02-1.08, p < 0.001) and jaundice (OR=2.9, 95% CI= 1.5-5.8 p=0.002). There was an strong association between amphotericin B use and AKI (OR=18.4, 95% CI=7.9-42.8, p<0.0001), whereas glucantime use was associated with a lower incidence of AKI when compared to amphotericin B users (OR=0.05, 95% CI=0.02-0.12, p<0.0001). Mortality was 13.3% and it was higher in AKI patients (30.2% vs. 4.7%, p<0.0001). RIFLE criteria presented mortality 40%, 20.8% e 35% in R, I and F respective class. Conclusions. The risk factors associated with AKI in patients with VL were male gender, advanced age, jaundice and amphotericin B. The last one was the most important factor of AKI in VL. / IntroduÃÃo. Hà poucos dados na literatura que relacionam a Leishmaniose visceral (LV) à lesÃo renal aguda (LRA). O objetivo deste estudo à avaliar as manifestaÃÃes clÃnicas e fatores de risco associados à LRA em pacientes com LV e aplicar o critÃrio RIFLE. MÃtodo. Estudo retrospectivo, incluindo pacientes acima de 14 anos, sem doenÃa renal prÃvia, com diagnÃstico de LV, internados no HSJ entre 2002 e 2008. Foram avaliadas manifestaÃÃes clÃnicas e os fatores de risco relacionados à LRA (avaliada atravÃs do critÃrio RIFLE) nesses pacientes, aplicando regressÃo logÃstica multivariada. Resultados. Foram incluÃdos 224 pacientes com idade mÃdia de 36Â15 anos sendo 76,8% do gÃnero masculino. LRA foi observada em 76 pacientes (33,9%) sendo que 52,6% (40) estavam na classe F do critÃrio RIFLE. Dispneia, edema e icterÃcia foram os principais sinais e sintomas associados à LRA (p<0,05). OligÃria foi observada em 6,5% dos pacientes com LRA. Os fatores de risco associados à LRA foram gÃnero masculino (OR=2,2, 95% IC=1,0-4,7, p=0,03), idade acima de 40 anos (OR = 1,05, 95% IC = 1,02-1,08, p<0,001) e icterÃcia (OR=2,9, 95% IC=1,5-5,8, p=0,002). Foi verificada considerÃvel associaÃÃo entre o emprego de anfotericina B e LRA (OR=18,4, 95% IC=7,9-42,8, p<0,0001), contudo o uso de glucantime foi associado a menor ocorrÃncia de LRA (OR=0,05, 95% IC=0,02-0,12, p<0,0001). A mortalidade geral foi 13,3% e foi mais alta nos pacientes que desenvolveram LRA (30,2% vs. 4,7%, p<0,0001). Os percentuais de mortalidade nas classes R, I e F foram respectivamente 40%, 20,8% e 35%. ConclusÃes. Os fatores de risco preditores de LRA em pacientes com LV foram sexo masculino, anfotericina B, idade acima de 40 anos e icterÃcia. Anfotericina B foi o fator mais importante de LRA na LV.

Submitted by Divisão de Documentação/BC Biblioteca Central (ddbc@ufam.edu.br) on 2018-06-04T13:58:33Z No. of bitstreams: 2 license_rdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5) Reprodução Não Autorizada.pdf: 47716 bytes, checksum: 0353d988c60b584cfc9978721c498a11 (MD5) / Approved for entry into archive by Divisão de Documentação/BC Biblioteca Central (ddbc@ufam.edu.br) on 2018-06-04T13:59:10Z (GMT) No. of bitstreams: 2 license_rdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5) Reprodução Não Autorizada.pdf: 47716 bytes, checksum: 0353d988c60b584cfc9978721c498a11 (MD5) / Approved for entry into archive by Divisão de Documentação/BC Biblioteca Central (ddbc@ufam.edu.br) on 2018-06-04T13:59:33Z (GMT) No. of bitstreams: 2 license_rdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5) Reprodução Não Autorizada.pdf: 47716 bytes, checksum: 0353d988c60b584cfc9978721c498a11 (MD5) / Made available in DSpace on 2018-06-04T13:59:33Z (GMT). No. of bitstreams: 2 license_rdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5) Reprodução Não Autorizada.pdf: 47716 bytes, checksum: 0353d988c60b584cfc9978721c498a11 (MD5) Previous issue date: 2018-02-21 / CAPES - Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior / In Brazil, American Tegumentary Leishmaniasis (LTA) stands out for its wide distribution, occurring in all states of the Federation. In 2015, 19,395 cases of the disease were reported, and the Amazon was responsible for 1,713, all in cutaneous form (SINAN, 2017). In the Amazon, the LTA is caused by seven species of leishmanias [Leishmania (Viannia) braziliensis, L. (V.) guyanensis, L. (V.) lainsoni, L. (V.) naiffi, L. (V.) shawi , L. (V.) lindenbergi and L. (Leishmania) amazonensis]. In Brazil, the Ministry of Health recommends as the first choice drug to be used in the Single Health System (SUS), pentavalent antimonial and pentamidine isethionate or amphotericin B as a second option and Pentoxifylline as immunomodulator. Some of these drugs have been used to treat Cutaneous Leishmaniasis (LC) for decades, yet they are toxic and require prolonged treatment duration. Moreover, parasites resistant to these drugs have emerged culminating in disease progression. Thermotherapy is an alternative treatment for LC, which consists of the spread of radiofrequency waves at a predetermined, localized temperature, applied to skin lesions to physically destroy the temperature-sensitive parasites and has been successfully used in the treatment for LC in others countries. This treatment provides precise and controlled location of heat to treat certain skin diseases selectively in the tissue. Abnormal and diseased cells are affected by heat and they undergo lysis, since the surrounding healthy cells are not affected because temperature is within a tolerable range. This is a low-cost, non-invasive protocol, in which there are still few studies related to its action in the different clinical forms of LTA that occur in Brazil, even less as regards its mechanism of action and immune response. Twelve patients treated with thermo-therapeutic protocol (ThermoMed Model 1.8) were followed for 12 months to evaluate clinical efficacy and 16 patients with LT, caused by Leishmania (Viannia) guyanensis, treated with meglumine antimoniate (Glucantine®). Patients with single or multiple lesions, both genders, 0.5 to 3.0 cm2 treated with thermotherapy received only a single application and achieved 58% clinical cure within two months. The Glucantime® group received cycles of (20 mg / kg / day) and at 3 months 100% of the patients presented resolution of the lesions with tissue re-epithelialization. Of the patients treated with Glucantime®, cytokine analysis was performed by flow cytometry techniques. The concentration of proinflammatory cytokines (IL-2, TNF-α, IFN-γ) showed significant differences (p <0.0001) between infected and uninfected individuals (control group). The thermotherapeutic treatment for LC is indicated as an alternative method because it has a lower cost and a reduced collateral effect, suggesting the continuity of studies that can clarify if there is a specific species response, thus directing the therapeutic indication of support to the conventional treatment. / No Brasil, a Leishmaniose Tegumentar Americana (LTA) destaca-se por sua ampla distribuição, ocorrendo em todos os Estados da Federação. Em 2015, foram notificados 19.395 casos da doença sendo o Amazonas responsável por 1.713, todos na forma cutânea (SINAN, 2017). Na Amazônia, a LTA é causada por sete espécies de leishmanias [Leishmania (Viannia) braziliensis, L. (V.) guyanensis, L. (V.) lainsoni, L. (V.) naiffi, L. (V.) shawi, L. (V.) lindenbergi e L. (Leishmania) amazonensis]. No Brasil o Ministério da Saúde recomenda, como droga de primeira escolha a ser usada no Sistema único de Saúde (SUS), o antimonial pentavalente e o isotionato de pentamidina ou a anfotericina B como segunda opção e Pentoxifilina como imunomodulador. Algumas dessas drogas vêm sendo utilizadas para tratar a Leishmaniose Cutânea (LC) durante décadas, contudo, são tóxicas e requerem duração prolongada do tratamento. Além do mais, parasitos resistentes a estes fármacos têm emergido culminando em progressão da doença. A Termoterapia é um tratamento alternativo para LC, que consiste na propagação de ondas de radiofrequência numa temperatura pré-determinada, localizadas, aplicada em lesões da pele para destruir fisicamente os parasitos sensíveis à temperatura e vem sendo utilizado com sucesso no tratamento para LC em outros países. Esse tratamento proporciona localização precisa e controlada de calor para tratar determinadas doenças de pele seletivamente no tecido. As células anormais e doentes são afetadas pelo calor e sofrem lise, já as células saudáveis circundantes não são afetadas pois temperatura está dentro de uma faixa tolerável. Este é um protocolo de baixo custo e não invasivo, no qual ainda são poucos os estudos relacionados à sua ação nas diferentes formas clinicas da LTA que ocorrem no Brasil, menos ainda quanto ao seu mecanismo de ação e resposta imune. Nesse estudo foram acompanhados 12 pacientes tratados com protocolo termoterápico (ThermoMed Modelo 1.8) por 12 meses para avaliação da eficácia clínica e 16 pacientes com LT, causada por Leishmania (Viannia) guyanensis, tratados por antimoniato de meglumina (Glucantine®). Pacientes com lesões únicas ou múltiplas, ambos os gêneros, de 0,5 a 3,0 cm2 tratados com termoterapia receberam apenas uma única aplicação e obtiveram 58% de cura clínica em até dois meses. O grupo tratado com glucantime® receberam ciclos de (20 mg/kg/dia) e aos 3 meses 100% destes apresentaram resolução das lesões com reepitalização tecidual. Dos pacientes tratado com glucantime foi realizada análise das citocinas pelas técnicas da Citometria de fluxo. A concentração das citocinas pró-inflamatórias (IL-2, TNF-α, IFN-γ) apresentaram diferenças significativas (p<0,0001) entre indivíduos infectados e não infectados (grupo controle). Indica-se o tratamento termoterápico para LC como método alternativo por ter menor custo, e efeito colateral reduzido, sugerindo-se a continuidade de estudos que possam esclarecer se existe uma resposta espécie especifica, direcionando assim a indicação terapêutica de suporte ao tratamento convencional.

Submitted by Erika Demachki (erikademachki@gmail.com) on 2016-08-17T20:24:56Z No. of bitstreams: 2 Tese - Hélio Galdino Júnior - 2013.pdf: 3450540 bytes, checksum: 01adc52cca765449b5eed357351fb5ee (MD5) license_rdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5) / Approved for entry into archive by Luciana Ferreira (lucgeral@gmail.com) on 2016-08-18T12:50:37Z (GMT) No. of bitstreams: 2 Tese - Hélio Galdino Júnior - 2013.pdf: 3450540 bytes, checksum: 01adc52cca765449b5eed357351fb5ee (MD5) license_rdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5) / Made available in DSpace on 2016-08-18T12:50:37Z (GMT). No. of bitstreams: 2 Tese - Hélio Galdino Júnior - 2013.pdf: 3450540 bytes, checksum: 01adc52cca765449b5eed357351fb5ee (MD5) license_rdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5) Previous issue date: 2013-07-26 / American Tegumentary Leishmaniasis (ATL) is a disease caused by protozoa Leishmania. In Brazil, the most prevalent species is L. (Viannia) braziliensis. Several cytokines and receptors are involved in immunopathogenesis of ATL, however, the role of interleukin 32 (IL-32) was not investigated in this disease. Besides, toll-like receptors (TLR) were poorly evaluated in Leishmania infection, especially when it is caused by L. (V.) braziliensis. The aim of the present study was to evaluate IL-32, TNF and IL-10 expression in ATL lesions; the induction of IL-32 by L. (V.) braziliensis amastigotes in human peripheral blood mononuclear cells (PBMC) cultures as well as the involvement of TLR4 in monocyte/macrophage response to L. (V.) brazilienis amastigotes. Biopsies fragments from cutaneous and mucosal lesion and healthy tissues were used to investigate the subgenus of the parasites by PCR-RFLP assay; expression of IL-32, TNF and IL-10 was assayed by immunohistochemistry and expression of IL-32 isoforms     , TNF and IL-10 was analysed by qRT-PCR. The PBMC were cultured with L. (V.) braziliensis amastigotes in the absence or presence of IFN and IL-32 induction was assayed by qRT-PCR; and TNF and IL-10, by ELISA. TLR4 was neutralized by monoclonal antibodies and lipopolysaccharide (LPS) was used as TLR4 agonist. The expression of TLR4 in monocyte/macrophages was evaluated by flow cytometry. Thirty five patients were evaluated, 23 with cutaneous leishmaniasis (CL) and 12 with mucosal leihsmaniasis (ML). All parasite positive samples contained L. (Viannia) sp. The expression of IL-32 (protein and mRNA) was similar in CL and ML lesions but was higher than in health tissues. Only IL-32 was detected. The proteins TNF and IL-10 were detected in similar levels in CL and ML lesions, but TNF mRNA was present in higher levels in ML (4.069x) than in CL lesions (141 x, p < 0.05). L. (V.) braziliensis amastigotes induced IL-32, TNF and IL-10 in IFN pre-treated PBMC. The production of TNF and IL-10 was TLR4 dependent and treatment of PBMC with LPS further increased the production of TNF induced by amastigotes (p < 0.05). However, LPS did not altere the IL-10 production. Treatment with IFN enhanced the percentage of TLR4+ monocyte/macrophage (p < 0.05), which was decreased following incubation with amastigotes (p = 0.06). The results showed that IL-32 is produced during L. (Viannia) infection and TLR4 mediates L. (V.) braziliensis amastigote-induced TNF and IL-10 production in human PBMC. Moreover, the data suggest that amastigotes can lead to TLR4 internalization what can allow parasite to evade of innate immune response. This study indicates that IL-32 and TLR4 are important players in human infection caused by L. (Viannia), especially L. (V.) braziliensis. Whether TLR4 is also important to IL-32 production by human monocytes/macrophages deserves further investigation. / A leishmaniose Tegumentar Americana (LTA) é uma doença infecto-parasitária, causada, no Brasil, principalmente pela espécie Leishmania (Viannia) braziliensis. Na imunopatogenia da LTA participam várias citocinas e receptores. A interleucina 32 (IL-32) é uma citocina pro-inflamatória, cuja participação na LTA ainda não foi investigada. O papel dos receptores similares a Toll (TLR) na LTA tem sido pouco investigado, especialmente considerando infecção por L. (V.) braziliensis. O objetivo deste estudo foi avaliar a expressão da IL-32, do TNF e da IL-10 nas lesões de pacientes com LTA, a indução de IL-32 por formas amastigotas de L. (V.) braziliensis em células mononucleares (CMN) humanas, bem como avaliar a participação do TLR4 na infecção de monócitos/macrófagos humanos com formas amastigotas de L. (V.) brazilienis. Fragmentos de lesões cutâneas ou mucosas de pacientes com LTA e tecidos sadios foram obtidos, sendo usados para a determinação do subgênero de Leishmania, usando a PCR-RFLP; para análise de IL-32, TNF e IL-10 por imunoistoquímica; e para análise da expressão das isoformas     da IL-32, do TNF e da IL-10, por qRT-PCR. As CMN foram cultivadas com amastigotas de L. (V.) braziliensis, na ausência ou presença de IFN e a indução de IL-32 foi avaliada por qRT-PCR e TNF e IL-10, por ELISA. Para neutralização de TLR4 foram usados anticorpos monoclonais e lipopolissacarídeo (LPS), como agonista de TLR4. A expressão de TLR4 nos monócitos/macrófagos presentes nas CMN foi avaliada por citometria de fluxo. Foram analisados 35 pacientes sendo 23 leishmaniose cutânea (LC) e 12 com leishmaniose mucosa (LM). Todas as amostras PCR positivas continham parasitos pertencentes ao subgênero Viannia. Nas lesões de pacientes com LC e LM foi detectada uma maior expressão tanto da proteína quanto do mRNA da IL-32 do que nos tecidos controles, porém níveis similares foram encontrados nas duas formas clínicas. Somente a isoforma IL-32 foi detectada. As proteínas TNF e a IL-10 foram detectadas nas lesões, em níveis similares na LC e na LM, porém, o mRNA do TNF estava em níveis mais elevados nas lesões de LM (4.069 vezes) do que nas lesões de LC (141 vezes, p < 0,05). As formas amastigotas de L. (V.) braziliensis indiziram a produção de IL-32 TNF e de IL-10 nas CMN pré-tratadas com IFN. A produção de TNF e IL-10 foi dependente de TLR4 e o tratamento das CMN com LPS aumentou a produção do TNF induzido pelas amastigotas (p < 0,05), mas não alterou a produção da IL-10. A incubação com IFN aumentou significantemente a porcentagem de monócitos/macrófagos TLR4+ (p < 0,05), a qual foi diminuída pelas formas amastigotas (p = 0,06). Os resultados mostram que a IL-32 é produzida durante a infecção humana causada por L. (Viannia) e evidenciam a participação de TLR4 na indução de TNF e IL-10 em CMN humanas por formas amastigotas de L. (V.) braziliensis. Ainda, os dados sugerem que as formas amastigotas causam a internalização dos TLR4, o que pode ser um mecanismo de evasão da resposta imune. Portanto, a IL-32 e o TLR4 parecem importantes componentes na infecção humana causada por L. (Viannia), especialmente L. (V.) braziliensis, podendo contribuir para a imunopatogenia ou para o controle da infecção.

As neolignanas, bem como as lignanas, apresentam diversas atividades biológicas comprovadas, sendo a licarina A uma neolignana diidrobenzofurânica, detentora de atividade leishmanicida. A partir dessa atividade e do interesse na produção de fármacos eficazes no tratamento dessa doença, a licarina A foi selecionada para estudo de metabolismo in vitro a partir de reações biomiméticas utililizando [Fe(TPP)Cl] e Mn(Salen) como catalisadores; sob ação de oxidantes (PhIO e mCPBA) em quatro solventes de polaridades distintas (AcOEt, MeOH, ACN, DCM), na proporção de 1:30:30 (catalisador:substrato:oxidante). Inicialmente, as reações realizadas foram submetidas às análises por CG-EM comprovando um produto de oxidação majoritário m/z 342, denominado metabólito A. Os solventes de menor polaridade (DCM e AcOEt), bem como o catalisador de Jacobsen, foram mais eficientes na geração desse metabólito. O aumento do tempo reacional bem como o aumento da concentração do oxidante não favoreceu a produção de metabólitos. Posteriormente, as análises dessas reações também foram realizadas por CLUE-DAD-EM/EM e sete metabólitos puderam ser identificados a partir do auxílio do estudo de fragmentação da licarina A bem como a partir de análises de RMN e EM dos metabólitos isolados por CLAE em escala semipreparativa. As análises de RMN dessas frações permitiram a determinação estrutural de um metabólito de m/z 343 [M+H]+ (metabólito 3) constituído de uma epoxidação nos carbonos C-7\'/C-8\' situados na cadeia lateral da licarina A. Sendo assim, quatro dos sete metabólitos (2, 3, 6 e 7) formados apresentaram m/z 343 [M+H]+ e espectros de massas tandem muito semelhantes, correspondendo aos possíveis diasteroisômeros do metabólito epoxidado, visto que a licarina A apresenta dois centros quirais. Outros três metabólitos foram produzidos e exibiram íons de m/z 361 [M+H]+, m/z 315 [M+H]+ e m/z 341 [M+H]+, correspondentes respectivamente a um diol vicinal em C-7\'/C-8\', um aldeído benzóico e um outro aldeído gerado a partir da oxidação da metila terminal em C-9\'. Foi realizado ainda o estudo de metabolismo in vitro com microssomas hepáticos de ratos, sendo que esse estudo foi capaz de reproduzir as reações biomiméticas a partir da produção do mesmo metabólito (2) (apresentando mesmo TR e mesmo espectro de UV). Em relação à toxicidade e aos possíveis danos que a licarina A poderia acarretar, um estudo de toxicidade aguda foi realizado sendo esse capaz de auxiliar na classificação da licarina A, sendo a mesma tóxica em doses > 300mg/kg e 2000mg/kg (categoria 4). Análises dos parâmetros bioquímicos realizadas foram capazes de determinar possível toxicidade hepática, a partir das alterações enzimáticas (AST, ALT, LDH, ALP) ocorridas. Contudo, análise microscópica de cortes dos tecidos (fígado, coração e rins) não determinaram nenhum comprometimento tecidual que pudesse evidenciar toxicidade. / Neolignans and lignans show several biological activities. Licarin A is a dihydrobenzofuranic neolignan, which exhibits leishmanicidal activity. For this reason, licarina A was selected to carry out the studies of in vitro metabolism. So biomimetic reactions were done by the use of [Fe(TPP)Cl] and Mn (Salen) catalysts, different oxidants (PhIO and mCPBA), as well solvents with different polarities (EtOAc, MeOH, ACN, and DCM), and the ratio of 1:30:30 (catalyst:substrate:oxidant). Initially, the reactions were analyzed by GC-MS and showed one major oxidation product of m/z 342 (metabolite A). The less polar solvents (DCM and EtOAc) and Jacobsen catalyst (Mn (Salen)) were more efficient for the production of metabolite A. The reaction time and concentration were increased, but they did not represent a higher production of metabolites. Subsequently these reactions were also analyzed by UPLC-DADMS/ MS and seven metabolites could be identified based on the fragmentation pattern proposed for licarin A, as well as from NMR and MS data of the metabolites isolated by HPLC. A metabolite of m/z 343 [M+H]+ (metabolite 3) was identified by NMR and MS/MS data and it consists of epoxidation in the carbons of C-7\'/C-8\' from licarin A. Therefore, four of the seven metabolites (2, 3, 6 and 7) exhibited m/z 343 [M+H]+ in the MS spectra and the MS/MS showed high similarity with the epoxided metabolite (metabolite 3). So these metabolites could be diasteroisomers of the metabolite 3. Three other metabolites were produced and exhibited ions at m/z 361 [M+H]+, m/z 315 [M+H]+ and m/z 341 [M+H]+, corresponding respectively to a vicinal diol in C-7\'/C-8\', benzylic aldehyde and other aldehyde generated from the oxidation of the terminal methyl at C-9\'. The study of in vitro metabolism by rat liver microsomes was also carried out, and this study was able to reproduce the biomimetic reactions by production of the same metabolite (2). The acute toxicity and potential damage of licarin A were evaluated and the results indicated toxicity for this compound at doses >300mg/kg and 2000mg/kg (category 4). Analysis of biochemical parameters were able to determine possible liver toxicity caused by enzymatic changes (AST, ALT, LDH, ALP). However, microscopic analysis of tissues sections (liver, heart and kidneys) did not show any tissue damage that could indicate toxicity.

Esse trabalho é sobre a agregação da droga leishmanicida miltefosina e um análogo fluorescente e sua interação com vesículas fosfolipídicas. A leishmaniose é uma doença tropical causada por diferentes espécies do gênero Leishmania que atinge boa parte do mundo e, nas duas últimas décadas, sua manifestação visceral reapareceu de forma preocupante, uma vez que sua letalidade vem aumentando de forma gradativa. Vários medicamentos estão sendo testados, incluindo o análogo lipídico sintético hexadecilfosfocolina (miltefosina), que é um agente antitumoral e antileishmania administrado oralmente que age nas membranas celulares e pode induzir apoptose. O primeiro local de interação dos análogos de fosfolipídios é a membrana celular e eles apresentam atividade citotóxica não específica em concentrações acima da sua concentração micelar crítica, sendo importante o conhecimento de suas propriedades de agregação em meio aquoso e sua forma de interação com outros agregados presentes no meio. Além disso, derivados fluorescentes da miltefosina permitem o uso de técnicas de fluorescência para a caracterização de sua atividade leishmanicida. Neste trabalho examinamos propriedades de agregação da miltefosina (MT) e de seu análogo fluorescente MT-BODIPY em meio aquoso, utilizando técnicas baseadas em medidas de tensão superficial e de espectroscopia de fluorescência, tanto estática como com resolução temporal. Os resultados de cmc da miltefosina, a 25oC utilizando diferentes métodos, foram 60M em meio aquoso puro (água Milli-Q), 50M em tampão fosfato 10mM (pH 7,4), e 35M em tampão fosfato com NaCl 150mM. Através do estudo de vários parâmetros de fluorescência, verificamos que para a MT-BODIPY, um limite superior para sua cmc é de 10M. Utilizando a sonda fluorescente amino-hexadecil-benzamida (Ahba) estudamos a interação entre a miltefosina e vesículas fosfolipídicas de DMPC e DPPC, analisando os espectros de absorção e emissão fluorescente, a anisotropia estática e os decaimentos da intensidade fluorescente e da anisotropia. O conjunto de resultados mostrou que os efeitos do acréscimo de miltefosina às vesículas, no intervalo de razões molares entre 1:100 e 5:100, não são monitorados pela sonda Ahba, uma sonda localizada na região das cabeças polares. Por outro lado, a análise da fluorescência intrínseca da MT-BODIPY mostrou que seu acréscimo, no mesmo intervalo de razões molares, promove desorganização da bicamada lipídica. Como nesse caso o grupo fluorescente localiza-se no final da cadeia alifática, concluimos que os maiores efeitos da miltefosina sobre as bicamadas ocorrem na região interna das cadeias apolares. / This work is about the aggregation of the leishmanicidal drug miltefosine and a fluorescent analogue and their interaction with phospholipid vesicles. Leishmaniasis is a complex of tropical diseases caused by different species of the genus Leishmania which reaches almost the whole world, including Brazil, and, on the last decades, its visceral form reappeared with hundreds of million people at risk of infection, and the mortality rate increases every year. Several drugs have been used to treat the disease, and miltefosine, a synthetic phospholipid analogue, has been tested and it is already used in some countries. This drug has a confirmed antitumor and orally antileishmanial action on the cell membranes, which is the first local of interaction of a phospholipid analogue. The cytotoxic activity is not specific on concentrations above its critical micelle concentration (cmc), and the knowledge of the aggregation properties of the drug in aqueous medium becomes important, as well as its interaction with other aggregates presents in the environment. Fluorescent analogues of miltefosine allow the use of fluorescent techniques to characterize the antileishmanial activity of miltefosine. In this work we have investigated the aggregation properties of the drug miltefosine (MT), and the fluorescent analogue MT-BODIPY in aqueous medium, by using techniques of surface tension measurements and both, steady-state and time-resolved fluorescence spectroscopy. The values of miltefosine cmc at 25°C from different methods were about 60M in pure aqueous medium (Milli-Q water), 50M in phosphate buffer 10mM (pH 7,4), and 35M in phosphate buffer with the addition of NaCl 150mM. The fluorescent probe amino-hexadecyl-benzamide (Ahba) was used to study the interaction of miltefosine with phospholipid vesicles of DMPC and DPPC, from absorption and fluorescent emission spectra, steady-state anisotropy and fluorescence and anisotropy decays. The results have shown that the effects of miltefosine addition in the vesicles, with molar ratios between 1:100 and 5:100, are not monittored by the probe Ahba, which is located on the polar head groups region on the bilayer. On the other hand, analysing the intrinsic fluorescence of the analogue MT-BODIPY, we concluded that when the molecule is added, in the same molar ratio intervals, there is a disorder in the lipidic bilayer. The fluorescent group BODIPY is located on the aliphatic chain of MT, therefore, the more accentuated effects of miltefosine in the bilayers occur in the region of the apolar tails.

A leishmaniose é uma ameaça para cerca de 350 milhões de pessoas em 88 países no mundo. No município de Bandeirantes, estado do Paraná, Brasil, foram notificados 183 casos de leishmaniose tegumentar americana (LTA) entre 2000 a 2013. Objetivos: Descrever e analisar os casos de LTA ocorridos no município de Bandeirantes Paraná, entre 2007 e 2013 e investigar os fatores de risco associados à ocorrência da doença, considerando-se fatores socioeconômicos, condições habitacionais e do entorno das residências, atividades ocupacionais e de lazer, conhecimento sobre a LTA na população de estudo e algumas práticas; investigar a presença de anticorpos anti Leishmania sp. na população canina e descrever as características socioeconômicas, condições habitacionais e do entorno das residências, atividades ocupacionais, de lazer nos casos que evoluíram para óbitos bem como as características clínicas. Métodos: estudo caso-controle não pareado. A amostra constou de 104 casos autóctones de LTA notificados na Secretaria Municipal de Saúde de Bandeirantes e 90 controles, residentes selecionados aleatoriamente que apresentassem reação de imunofluorescência indireta (RIFI) negativa. A amostra da população canina foi composta por animais presentes nas residências dos casos e dos controles. Foram investigados os óbitos entre os indivíduos que tiveram LTA no período do estudo. Resultados: O sexo feminino prevaleceu entre os casos (62,50 por cento ) e controles (68,89 por cento ), bem como a faixa etária maior ou igual a 60 anos em ambos os grupos (46,15 por cento e 33,33 por cento , respectivamente). Todavia estas condições não se mostraram como fatores de risco significante. Mostraram-se como fatores de risco significantes (p < 0,05) as seguintes variáveis: ser analfabeto (OR = 10,09), aposentados (OR = 2,35), praticar atividades de lazer relacionadas à zona rural (OR = 4,47), frestas na casa (OR = 2,15), presença de matos próximos ao domicílio (OR = 6,92), presença de plantas frutíferas no peridomicílio (OR=2,02), anexos peridomicilares (OR = 4,30), galinheiro (OR=2,15) e canil (OR = 3,90), dormir fora do quarto (OR=4,97), 8 combate a animais sinantrópicos (OR = 2,69), uso de repelente corporal (5,43) e conhecer o mosquito transmissor (OR = 3,48), a relação com outros animais (OR =2,51) e prevenção (OR = 2,24). Como fatores de proteção: renda familiar > 3 salários mínimo (OR = 0,22), casa de alvenaria e reboco (OR = 0,41), abastecimento de água de rede (OR = 0,41), presença de rede de esgoto (OR = 0,33), coleta de lixo pública (OR = 0,35). Os exames sorológicos realizados nos cães do estudo demonstraram que 38,23 por cento foram reagentes para os casos e 2,12 por cento nos controles. Os cães dos casos possuem 28,47 vezes mais chance de contrair a LTA quando comparados com os cães dos controles (p<0,0001). Foram investigados 14 óbitos, 35,71 por cento estavam em tratamento da LTA e 42,86 por cento apresentavam lesões compatíveis com a LTA. Conclusões: A ocorrência da LTA em Bandeirantes mostrou-se associada estatisticamente às variáveis: idade, escolaridade, renda familiar, atividades de lazer relacionadas à zona rural, presença de anexos domiciliares e vegetação próximo ao domicílio, assim como o uso de repelente corporal, dormir fora do quarto e conhecer o mosquito vetor da LTA e a sua forma de prevenção. / The leishmaniasis threat around 350 million people in 88 countries around the world. In Bandeirantes - Parana from 2000 to 2013 183 cases of American tegumentary leishmaniasis (ATL) were reported. Objectives: to describe and analyze the occurrence of ATL in human population in Bandeirantes - Parana, between 2007 and 2013; to investigate the risk factors associated with the disease considering socioeconomic factors, housing conditions and the surrounding residences, occupational and leisure activities, knowledge of the LTA in the study population and some practical; investigate the presence of antibodies against Leishmania sp. the canine population and describe the socio-economic characteristics, housing conditions and the surrounding residences, occupational activities, leisure in cases that evolved to death and the clinical characteristics. Methods: A not paired case-control study was performed in with 104 cases, individuals who had autochthonous ATL notified in the Municipal Health Department of Bandeirantes and 90 controls were randomly selected out of those who presented negative reaction of indirect immunofluorescence (IIF). The canine population was selected from the cases and controls. The deaths among those individuals who had ATL during the study period were investigated. Results: Females were more abundant in case (62,5 per cent ) and control groups (68.89 per cent ) with predominance of age equal or greater than 60 years in both groups (46,15 and 33.33 per cent respectively). However, these conditions were not significant risk factors. The significant risk factors (p < 0,05) were: illiterate people (OR = 10,09), those who receive one to three minimum wages (OR =4,48), retired people (OR=2,35), to practice leisure activities related to rural area (OR=4,47), openings on the house (OR=2,15), presence of forests near the domicilie (OR = 6,92), presence of fruit plants near the house (OR=2,02), attachments to the house (OR = 4,30), chicken stay (OR=2,15), kennel (OR = 3,90), to sleep out of the bedroom (OR=4,97), to combat urban plagues (OR = 2,69), to use repellent (5,43) and to know the phlebotomine (OR = 3,48) and its relation with other animals (OR =2,51), and prevention (OR = 2,24). The protective factors were house of masonry and plaster (OR = 0.41), water supply network (OR = 0.41), 10 presence of sewage (OR = 0.33), public garbage collection (OR = 0.35). The serological tests performed in dogs of the study showed that 38.23 per cent were reactive to the cases and 2.12 per cent to the controls. The dogs of the cases have 28.47 times more chance of catching the ATL when compared with the dogs of the controls (p< 0.0001). Fourteen deaths were investigated, out of which 35.71 per cent were in treatment of ATL and 42.86 per cent had lesions compatible with the ATL. Conclusions: The occurrence of ATL in Bandeirantes proved to be statistically associated with the variables: age, education, family income, leisure activities related to rural area, presence of attachments to the house and vegetation near the domicile, as well as the use of repellent, sleeping outside of the room and knowing the disease vector of ATL and its prevention.

As leishmanioses são um conjunto de doenças infecto parasitárias, de caráter zoonótico, que acometem os seres humanos, animais domésticos e silvestres, causadas por protozoários do gênero Leishmania. O presente trabalho objetivou comparar o desempenho de testes moleculares empregados no diagnóstico da leishmaniose visceral canina, em cães classificados em diferentes estágios clínicos da doença. Foram coletadas amostras biológicas, sangue e suabe conjuntival, em 215 cães, das cidades de Pirassununga, Santa Cruz das Palmeiras, Andradina e Ilha Solteira, todas localizadas no Estado de São Paulo, e foram separados e classificados em quatro estágios clínicos: assintomáticos, doença leve, moderada e severa, conforme os sinais clínicos, além da sorologia, hemograma e perfil bioquímico. Além disso, os animais foram submetidos a testes moleculares de PCR convencional com os primers 13A/13B, MC1/MC2, Nested-PCR ITS1, com os primers LITSR e L58S, PCR em tempo real com os primers LEISH-1 e LEISH-2 e sonda TaqMan-MGB. Nos resultados foi observado que os primers 13A e 13B, direcionados a amplificar fragmentos de kDNA de Leishmania spp., possuem uma maior capacidade em detectar animais positivos no sangue em estágio inicial de sintomatologia clínica, quando comparados aos outros (p&lt;0,05). Utilizando amostras de suabe conjuntival não houve diferença significativa na detecção de animais positivos entre as diferentes fases clínicas e diferentes testes moleculares avaliados (p&gt;0,05), exceto com relação aos primers MC1 e MC2, que foram significativamente menos capazes de detectar cães positivos na fase inicial da doença que os outros (p&lt;0,05). As amostras positivas ao ITS1 sequenciadas apresentaram 99 a 100% de similaridade com Leishmania infantum. Podemos concluir que a PCR com os primers MC1 e MC2 não é indicada na detecção de cães com leishmaniose e que a PCR de sangue com os primers 13A e 13B é mais eficiente na detecção de animais no início da doença. Os resultados reforçam a necessidade de se aprimorar as ferramentas de diagnóstico e de se associar mais de uma técnica e/ou tipo de amostra para a detecção eficiente da leishmaniose canina. / Leishmaniasis is a group of parasitic infectious diseases with zoonotic potential that affect humans, domestic, and wild animals caused by protozoa of the genus Leishmania. The present study aimed to compare the performance of molecular tests used in the diagnosis of canine visceral leishmaniasis in dogs classified in different clinical stages of the disease. Biological samples, blood and conjunctival swab, were collected from 215 dogs from cities of Pirassununga, Santa Cruz das Palmeiras, Andradina, and Ilha Solteira, all of them located in the State of São Paulo. The animals were separated into four clinical stages: asymptomatic, mild disease, moderate disease, and severe disease according to the clinical signs, serology, hemograma, and biochemical profile. In addition, the animals were submitted to conventional PCR molecular tests with primers 13A / 13B, MC1 / MC2, Nested-PCR ITS1, with primers LITSR and L58S, real-time PCR with LEISH-1 and LEISH-2 primers, and TaqMan-MGB probe. In the results, it was observed that primers 13A and 13B directed to amplify fragments of Leishmania spp. kDNA have greater capacity to detect positive animals in blood and initial stage of clinical symptomatology, when compared to others (p&lt;0.05). There was no significant difference in the detection of positive animals between the different clinical phases and different molecular tests evaluated using conjunctival swab samples (p&gt;0.05), except for primers MC1 and MC2, which were significantly less able to detect positive dogs in the initial phase of the disease than the others (p&lt;0.05). Sequenced positive samples by ITS1 showed 99 to 100% similarity to Leishmania infantum. We can conclude that PCR with the primers MC1 and MC2 is not indicated in the detection of dogs with leishmaniasis, and the PCR of blood with the primers 13A and 13B is more efficient in the detection of animals at the beginning of the disease than others. The results reinforce the necessity to improve diagnostic tools and to associate more than one technique and/or type of sample for efficient detection of canine leishmaniasis.

Solanum lycocarpum A. St.- Hil. (Solanaceae) é uma espécie nativa do Brasil distribuída nas regiões sudeste e centro-oeste do país. O fruto desta planta é popularmente conhecido por fruta do lobo\". O consumo destes frutos impede o desenvolvimento de uma parasitose renal (Dioctophyna renale) que afeta lobos (Chrysocyon brachyurus). Estes frutos contêm dois principais heterosídeos alcaloídicos: solamargina (SM) e solasonina (SS), sendo ambos derivados da aglicona solasodina (SD). Doenças parasitárias, como leishmaniose, esquistossomose e estrongiloidíase estão diretamente ligadas a questões socioeconômicas representando um grande problema de saúde pública principalmente em regiões tropicais e subtropicais. Portanto, é extremamente importante a busca de novos fármacos para estas e outras doenças negligenciadas. O presente trabalho descreve a obtenção do extrato alcaloídico (EA) a partir dos frutos da lobeira, o isolamento dos heterosídeos alcaloídicos majoritários e da aglicona SD, bem como a avaliação de suas atividades in vitro leishmanicida, estrongiloicida e esquistossomicida. Além disso, a atividade esquistossomicida do EA também foi avaliada em modelo animal. O EA foi obtido a partir de frutos secos e triturado por meio de extração ácido-base. SM e SS foram isolados por cromatografia em camada delgada preparativa ou por cromatografia flash. SD foi obtida a partir da hidrólise ácida do EA, e purificada por cromatografia em coluna clássica utilizando eluição por gradiente. As estruturas dos compostos isolados foram confirmadas por análises de RMN e espectrometria de massas. Nas avaliações biológicas observaram-se atividade leishmanicida, estrongiloicida e esquistossomicida do EA. Os compostos isolados, SM, SS e a mistura equimolar foram ativos contra L. amazonensis. Além disso, esses compostos foram capazes de reduzir a atividade motora de vermes adultos de S. mansoni, separar os pares de verme adulto em macho e fêmea, causar a morte dos vermes, alterar o tegumento e reduzir o desenvolvimento dos ovos in vitro. A SD foi inativa contra L. amazonensis e vermes adultos de S. mansoni. O EA avaliado in vivo mostrou atividade esquistossomicida, diminuindo o número de ovos e granulomas no fígado dos animais tratados. / The Brazilian Solanaceae plant, Solanum lycocarpum A. St.-Hil. is distributed in the Southeast and Middle West of the country. The fruit of this plant is popularly known as fruta do lobo (wolf-fruit). The intake of these fruits prevents renal parasitism (Dioctophyna renale) which affects wolves (Chrysocyon brachyurus). These fruits contain two major alkaloid heterosides (solamargine (SM) and solasonine (SS)) bearing both the same aglycone, solasodine (SD). Among the parasitic diseases, such as leishmaniasis, strongyloidiasis and schistosomiasis stand out in terms of socioeconomic and public health importance in tropical and subtropical areas. Its extremely important to search for new drugs to treat these and other neglected diseases. The present work reports the obtainment of the alkaloidic extract (AE) of the S. lycocarpum fruit, the isolation of the major alkaloid heterosides and to obtain the aglycone. The obtained samples were evaluated for the in vitro leishmanicidal, strongyloicidal and schistosomicidal activities. Also, the schistosomicidal activity of the AE was evaluated in an animal model. The AE was obtained from dried and grounded fruits by using acid-base extraction. SM and SS were isolated either by preparative thin layer chromatography or by flash chromatography. SD was obtained by acid hydrolyses of the AE, and it was purified by silica gel column chromatography using gradient elution. The structures of the isolated compounds were confirmed by analysis of NMR and mass spectrometry. The analysis of the obtained results for the biological evaluation showed that the AE displays leishmanicidal, strongyloicidal and schistosomicidal activities. The isolated compounds, SM, SS and their equimolar mix were actived against L. amazonensis. These compounds also were able to reduce the mobility, to separate the worm into male and female, to modify the tegumental and to cause the death of the adults worms besides reducing the development of eggs. The SD was inactive against L. amazonensis and S. mansoni adult worms. When AE was evaluated in vivo showed activity as schistosomicidal, decreasing the number of eggs and granulomas in the liver of the treated mice.

De acordo com a Organização Mundial de Saúde, existem atualmente 17 doenças tropicais negligenciadas prevalentes em 149 países, afetando aproximadamente um bilhão de pessoas, a nível global. A leishmaniose, problema de saúde prevalente nos países em desenvolvimento, é endêmica em aproximadamente 98 países e territórios, com 350 milhões de pessoas em risco e 12 milhões de casos de infecção no mundo. A transmissão da doença ocorre pela picada de flebotomíneos fêmeas infectadas. Essa doença apresenta três formas principais: leishmaniose cutânea (LC), leishmaniose mucocutânea (LMC) e leishmaniose visceral (LV). Enquanto a leishmaniose cutânea é a forma mais comum da doença, a leishmaniose visceral é a mais grave e pode ser fatal se não for tratada. Em 2016, o Brasil reportou 3.626 e 12.690 casos de LC e LV, respectivamente. O candidato a fármaco hidroximetilnitrofural (NFOH) mostrou atividade contra o parasita da doença de chagas e da leishmaniose. Embora o NFOH seja promissor para o tratamento da leishmaniose, esse possui baixa solubilidade em água. A nanotecnologia tem sido empregada como plataforma para o desenvolvimento de formas farmacêuticas inovadoras com maior eficácia e segurança. A redução do tamanho de partículas em escala nanométrica permite aumentar a biodisponibilidade oral de fármacos pouco solúveis em água. Os nanocristais apresentam vantagens, tais como, o aumento da solubilidade de saturação e da velocidade de dissolução, decorrentes do aumento da área superficial da partícula. Além disso, esses apresentam maior adesividade às membranas biológicas, membrana celular e superfície do trato gastrointestinal. No presente trabalho utilizou-se a moagem por via úmida em escala reduzida para a obtenção dos nanocristais de NFOH. Diferentes tensoativos foram avaliados empregando o método selecionado, os tensoativos poloxamer 188 e poloxamer 407 foram os que favoreceram a redução do tamanho das partículas. Tal característica foi observada na caracterização físico-química das nanosuspensões de NFOH. A utilização desse método permitiu a obtenção de nanocristais de NFOH, com diâmetro hidrodinâmico médio (DHM) de 184,8 ± 0,5 a 325,9 ± 2,2 nm, índice de polidispersão (IP) de 0,21 ± 0,01 a 0,57 ± 0,01 e DHM de 191,3 ± 2,1 a 326,8 ± 4,6 nm e IP de 0,21 ± 0,01 a 0,50 ± 0,01, respectivamente para o poloxamer 188 e 407. O uso de ambos os tensoativos resultaram em distribuição monomodal de tamanho das partículas. As formulações foram obtidas por meio de planejamento fatorial completo e experimentos por superfície de resposta tendo como variáreis independentes as concentrações de NFOH, dos tensoativos e o tempo de moagem. A resposta, DHM, foi determinada utilizando espalhamento de luz dinâmica (DLS). Adicionalmente, as avaliações empregando calorimetria exploratória diferencial (DSC) e difração de raio X (DRX) revelaram que não houve interação entre o fármaco e os excipientes, assim como, não foi observada alteração na estrutura cristalina do NFOH. A microscopia eletrônica de varredura demonstrou a morfologia característica do estado cristalino. Além disso, a preparação liofilizada apresentou instabilidade após armazenamento por três meses a temperatura de 25 e 4 °C. / According to the World Health Organization, there are currently 17 neglected tropical diseases prevalent in 149 countries, affecting approximately one billion people globally. Leishmaniasis, a health problem prevalent in developing countries, is endemic in approximately 98 countries and territories, with 350 million people at risk and 12 million cases of infection worldwide. The transmission of the disease occurs by the bite of infected female sandflies. This disease has three main forms: cutaneous leishmaniasis (CL), mucocutaneous leishmaniasis (MCL) and visceral leishmaniasis (VL). While cutaneous leishmaniasis is the most usual form of the disease, visceral leishmaniasis is the most serious and can be fatal if left untreated. In 2016, Brazil reported 3.626 and 12.690 cases of LC and LV, respectively. The drug candidate for hydroxymethylnitrofurazone (NFOH) showed activity against the parasite of chagas disease and leishmaniasis. Although NFOH is promising for the treatment of leishmaniasis, it has low solubility in water. Nanotechnology has been used as a platform for the development of innovative pharmaceutical forms with greater effectiveness and safety. Particle size reduction on the nanoscale enables the oral bioavailability of poorly water-soluble drugs to be increased. Nanotechnology has been used as a platform for the development of innovative pharmaceutical forms, improving effectiveness and safety. Particle size reduction on the nanoscale enables the oral bioavailability of poorly water-soluble drugs to be increased. Nanocrystals have advantages such as increased saturation solubility and dissolution rate due to the increase in the surface area of the particle. In addition, this present greater adhesiveness to the biological membranes, cell membrane and surface of the gastrointestinal tract. In the present work, wet scale milling was used to obtain NFOH nanocrystals. Different surfactants were evaluated using the selected method, poloxamer 188 and poloxamer 407 surfactants favored the reduction of particle size. This characteristic was observed in the physical-chemical characterization of NFOH nanosuspensions. The use of NFOH nanocrystals with a mean hydrodynamic diameter (DHM) of 184.8 ± 0.5 to 325.9 ± 2.2 nm, polydispersity index (IP) of 0.21 ± 0, 01 to 0.57 ± 0.01 for poloxamer 188 and DHM of 191.3 ± 2.1 at 326.8 ± 4.6 nm and IP of 0.21 ± 0.01 at 0.50 ± 0.01 for poloxamer 407, both with monomodal size distribution. The formulations were obtained by means of complete factorial planning and surface response experiments having as independent variables the concentrations of NFOH, surfactants and milling time. The response, DHM, was determined using dynamic light scattering (DLS). In addition, evaluations using differential scanning calorimetry (DSC) and X-ray diffraction (DRX) revealed that there was no change in the crystal structure of NFOH and interaction between the drug and the excipients. Scanning electron microscopy demonstrated the characteristic morphology of the crystalline state. In addition, the lyophilized preparation was instable after storage for three months at 25 and 4 ° C.