A leishmaniose visceral constitui grave doença infecciosa causada por um protozoário parasita intracelular obrigatório. Alguns fatores podem alterar a gravidade das manifestações clínicas, sendo um deles a predisposição genética. Este estudo investigou polimorfismos dos genes TGFB1, IL8 e IL6, que são citocinas relacionadas com o desencadeamento e a gravidade da doença, visando identificar fatores de susceptibilidade. Os polimorfismos TGFB1 -509 C/T e TGFB1 +869 T/C, IL8 -251A/T e IL6 -174G/C foram analisados por PCR-RFLP, em 198 pacientes com leishmaniose visceral (LV), 98 indivíduos com infecção assintomática (teste de hipersensibilidade tardia - DTH+) e 100 indivíduos sem evidências de infecção (DTH-). O alelo T na posição -509 do gene TGFB1 conferiu risco duas vezes maior de desenvolver LV ou ser positivo para o teste DTH (p = 0,007, OR = 1,9 [1,19-3,02]), em comparação com indivíduos DTH-. Os resultados sugerem uma associação do polimorfismo TGFB1 -509C/T com a susceptibilidade à LV, podendo contribuir para o desencadeamento da doença clínica. / Visceral leishmaniasis is a serious protozoan infectious disease caused by an obligate intracellular parasite. Some factors can affect the severity of the clinical manifestations; one of which is genetic susceptibility. This study investigated polymorphisms in the TGFB1, IL8 and IL6 genes, which are cytokines related with the onset and severity of the disease, to look for genetic susceptibility factors. Polymorphisms at TGFB1 -509C/T and +869T/C, and IL8 - 251A/T and IL6 -174G/C were analyzed by a PCR-RFLP technique, in 198 patients with Visceral Leishmaniasis (VL), 98 individuals with asymptomatic infection (positive delayed-type hypersensitivity, DTH+) and 100 individuals with no evidence of infection (DTH-). The T allele of the TGFB1 polymorphism in position -509C/T conferred a two risk fold to develop LV or to be DTH+ (p=0.007; OR=1.9 [1.19 - 3.02]) when compared with DTH- individuals. We suggest the TGFB1 -509C/T polymorphism is associated with susceptibility to LV and may contribute to development of the clinical disease.

Ecotourism is the custom tourism that uses the natural area of a region in a sustainable way. The practitioners of this activity enter forests and expose themselves to endemic vector diseases in the visited regions. Among all the professionals involved in this activity, there is the Physical Education teacher. The objective of this dissertation research was about Ecotourism and its relationship to endemic diseases - especially Malaria and American Tegument Leishmaniasis (ATL) - in the northern coast of São Paulo in the State Park of Serra do Mar, and also to investigate the teachers knowledge of the Physical Education Department of Sports of the Caraguatatuba, Ilhabela, São Sebastião and Ubatuba cities that work and / or participate in Ecotourism programs. This study is justified by the fact that its results can contribute to the suggested changes in the Physical Education curriculum and some graduation disciplines in the course. For the development of this research in addition to the literature review and the collected data from the Forestry Institute of São Paulos State, the Endemic Control (SUCEN) and the Environment Registry of the four districts, a questionsheet was applied with open and closed questions to teachers of 79 districts under study. The results showed that the subjects understood the Ecotourism as an activity directed toward environmental education, for tourism and leisure or for natural beauty sustainability. None of the responses mentioned concerns related to the transmission of diseases by vectors that are in the forests habitat. The knowledge degree of the respondents on malaria was higher than ATL, although both diseases have a large number of cases in the region. It seems that its necessary to suggest the inclusion of the relevance of the Ecotourism thematic and vector diseases such as disciplinary content in the professional training of Physical Education, as a way to fill the gaps in the current curriculum. / Ecoturismo é o ramo da atividade turística que visa à utilização do patrimônio natural de uma região, de modo sustentável. Os praticantes de tal atividade adentram às matas e, desta forma, ficam expostos às doenças vetoriais endêmicas nas regiões visitadas. Dentre os profissionais envolvidos nesta atividade, destaca-se o professor de Educação Física. O objetivo desta Dissertação foi pesquisar sobre o Ecoturismo e sua relação com as doenças endêmicas especialmente a Malária e a Leishmaniose Tegumentar Americana (LTA) na região do Litoral Norte Paulista no Parque Estadual da Serra do Mar e, ainda, investigar o grau de conhecimento dos professores de Educação Física da Secretaria de Esportes dos municípios de Caraguatatuba, Ilhabela, São Sebastião e Ubatuba, que trabalham e/ou participam de Programas de Ecoturismo. O estudo se justifica pelo fato de que seus resultados podem contribuir para a sugestão de mudanças na grade curricular e na ementa de certas disciplinas dos cursos de graduação em Educação Física. Para o desenvolvimento da pesquisa, além da revisão de literatura e da coleta de dados junto ao Instituto Florestal do estado de São Paulo, à Superintendência de Controle de Endemias (SUCEN) e à Secretaria do Meio Ambiente dos quatro municípios, foi aplicado um questionário com perguntas abertas e fechadas aos 79 professores dos municípios em estudo. Os resultados demonstraram que os sujeitos entendem o Ecoturismo como atividade voltada para a educação ambiental, para o turismo e lazer ou para a sustentabilidade das belezas naturais. Nenhum respondente aludiu às preocupações com os aspectos relacionados à transmissão de doenças por vetores que têm na mata seu habitat. O grau de conhecimento dos respondentes foi maior sobre a malária e menor sobre a LTA, embora ambas as doenças tenham número expressivo de casos na região. Parece que se pode afirmar a pertinência de se sugerir a inclusão da temática Ecoturismo e doenças de transmissão vetorial como conteúdo disciplinar na formação do profissional da Educação Física, como forma de preencher uma lacuna que se faz presente na grade curricular atual.

A leishmaniose é uma enfermidade zoonótica causada por protozoário pleomórfico do gênero Leishmania. Face a magnitude de alastramentro da doença, em especial no Brasil, foi realizado levantamento retrospectivo de casos de leishmaniose visceral canina diagnosticados (1997-2007) nos Serviços de Dermatologia e de Clínica Médica de cães e gatos do HOVET/USP. A amostragem compôs-se de 36 casos caninos, naturalmente infectados por Leishmania sp. O diagnóstico fora estabelecido pela caracterização propiciada pelos dados anamnésticos, de exames físico e dermatológico, complementados por exames hematológicos, bioquímicos e imagéticos, afora sorologia (ELISA e/ou RIFI), histopatologia de pele e/ou pela evidencialização do protozoário em exames parasitológicos de biópsia aspirativa de linfonodos e/ou medula óssea e pela técnica de imunoistoquímica. Os objetivos foram: evidenciar os aspectos clínico-dermatológicos de animais com diagnóstico estabelecido; caracterizar epidemiologicamente os casos, enfocando aspectos de aloctonia ou de autoctonia. Afora o de avaliar a aplicação da técnica de imunoistoquímica de pele visando o diagnóstico etiológico, comparando e relacionando-a aos exames complementares. Pôde-se concluir que: todos os casos foram alóctones; não houve predisposição por um determinado sexo; a faixa etária (52,8%) foi aquela dos 13 a 48 meses de vida, com maior acometimento de cães de raças definidas (Poodles e Labradores). Quanto aos municípios de origem: Ilha Bela e Ubatuba, um caso de cada, são considerados como silencioso não receptivo não vulnerável; Campinas, Campo Limpo Paulista, Holambra, São Roque, Sorocaba e Uberaba (um caso de cada) como silenciosos não receptivos vulneráveis. Os demais 28 cães do Estado de São Paulo originaram-se de municípios com transmissão: canina e humana (Araçatuba - três, Bauru - um), canina (Cotia - cinco, Embu - quatro) ou sob investigação (São Paulo - 11, Mogi das Cruzes - um). Já Portugal (um) e Minas Gerais (Belo Horizonte - dois) são locais caracterizados como de transmissão canina e humana. Pôde-se evidenciar deslocamentos breves ou longos, a 14 municípios paulistas (Araçatuba, Birigui, Caraguatatuba, Cotia, Eldorado, Embu e Embu Guaçu, Guarujá, Ilha Bela, Itapecerica da Serra, Peruíbe, Presidente Prudente, São Roque e São Paulo Capital) e cinco Estados (Maranhão, Minas Gerais, Paraná, Rio de Janeiro e Santa Catarina). De acordo com a classificação sintomatológica 50% eram oligossintomáticos, 47,2% sintomáticos e 2,8% assintomáticos. As alterações cutâneas se localizavam principalmente em região cefálica, membros e região abdominal, incluíam-se: rarefação pilosa e/ou alopecia (45,7%), escamas (40%), ulcerações (37,1%) e crostas (37,1%), sendo o prurido associado em 63,9% dos casos. Os achados clínicos mais freqüentes foram: linfoadenomegalia (74%), pirexia (44,4%), disorexia (40,7%), emagrecimento (29,7%), hepato (29,7%) e esplenomegalia (25,6%). As alterações laboratoriais foram: hiperproteinemia (56,5%), hipoalbuminemia (52,1%), anemia e trombocitopenia (34,8% cada). Correlacionando a técnica de imunoistoquímica com os exames de ELISA e RIFI, observou-se que a RIFI (100%) foi mais representativa dos casos positivos, em seguida ao exame de ELISA (87,5%) e ao de imunoistoquímica (37,5%). A técnica de imunoistoquímica, empregada em cortes histológicos de 12 (33%) permitiu evidenciar a presença do agente em sete (58,3%): dois (33,3%) oligossintomáticos e cinco (83,3%) sintomáticos. Desta forma, permite-se caracterizá-la como metodologia de inegável valia, superando os resultados positivos da histopatologia (30,8%). / Leishmaniasis is a worldwide chronic zoonotic disease caused by pleimorphic protozoa of the genus Leishmania. The spread of the disease in Brazil lead to this retrospective survey of canine visceral leishmaniasis diagnosed (1997-2007) at the Service of Dermatology and Medical Clinics of the Small Animal Hospital-USP. We evaluated the records of 36 dogs naturally infected with Leishmania sp. Diagnosis included disease characterization during anamnesis, physical and dermatologic examination, hematology, biochemistry, imaging, serology (ELISA or RIFI), skin histopathology and/or agent isolation from aspiration biopsy samples of lymph nodes and/or bone marrow, and immunohistochemistry. In addition to epidemiologic characterization, we aimed to determine clinical and dermatologic aspects of canine leishmaniasis, and to compare diagnostic efficacy of skin immunohistochemistry, ELISA and RIFI. All cases were allochtonous without gender predilection, 52.8% were 13 to 48 months old; mostly Poodles (20.8%) and Labradors (20.8%). Regarding origin: Ilha Bela and Ubatuba (one case each) are classified as silent, non-receptive and not vulnerable; Campinas, Campo Limpo Paulista, Holambra, São Roque, Sorocaba and Uberaba (one case each) are classified as vulnerable. The remaining 28 cases from the State of São Paulo were located in cities with reported canine-human transmission (Araçatuba - three, Bauru - one), intra-canine transmission (Cotia - five, Embu - four) or cities under investigation (São Paulo - 11, Mogi das Cruzes - one). Portugal (one) and Minas Gerais (Belo Horizonte - two) reported canine-human transmission. Prior to the leishmaniasis development dogs remained for short or long periods in 14 cities in the State of São Paulo: Araçatuba, Birigui, Caraguatatuba, Cotia, Eldorado, Embu e Embu Guaçu, Guarujá, Ilha Bela, Itapecerica da Serra, Peruíbe, Presidente Prudente, São Roque and São Paulo Capital) and five other Brazilian States (Maranhão, Minas Gerais, Paraná, Rio de Janeiro and Santa Catarina. Most animals were oligosymptomatic (50%), 47.2% symptomatic and 2.8% asymptomatic. The majority of lesions was on the head, limbs and abdominal region, and included: hair loss and/or alopecia (45.7%), scales (40%), ulcers (37.1%), and crusts (37.1%), with 63,9% associated pruritus. The most common clinical findings were: lymph node enlargement (74%), pyrexia (44,4%), disorexia (40.7%), weight loss (29.7%) , liver (29.7%) and spleen (25.6%) enlargement. Most frequent alterations in laboratory exams were: hyperproteinemia (56.5%), hypoalbuminemia (52.1%), anemia, and thrombocytopenia (34.8% both). RIFI was more representative (100%) in positive cases, followed by ELISA (87.5%) and immunohistochemistry (37.5%). Immunohistochemistry was used in histology samples of 12 (33%) cases and allowed us to detect the agent in seven (58.3%) cases: two (33.3%) oligosymptomatic and five (83.3%) symptomatic. Thus, immunohistochemistry is a useful method, and more effective than histopathology (30.8%).

Foram selecionados aleatoriamente 38 cães naturalmente infectados por Leishmania (Leishmania) infantum chagasi oriundos de Araçatuba, São Paulo, área endêmica para leishmaniose visceral, e os quais foram distribuídos em dois grupos: o primeiro com 24 cães sintomáticos e, o outro, composto por 14 animais assintomáticos. Correlacionou-se a caracterização clínica (assintomáticos ou sintomáticos) com os: potencial em infectar o inseto vetor, padrão inflamatório da pele, perfil de imunidade celular e parasitismo tegumentar desses cães. Quanto ao número de formas amastigotas/mm2 no tegumento, não houve diferença estatisticamente significativa entre os grupos (p = 0,1584), sendo que a densidade de parasitos na pele mostrou uma correlação positiva moderada com os títulos de anticorpos anti-Leishmania (p = 0,042). Quanto à infectividade ao vetor, evidenciada pelo xenodiagnóstico, 16 (66,7%) cães sintomáticos e 13 (93%) assintomáticos foram capazes em transmitir Leishmania aos flebotomíneos, dentre estes, respectivamente, seis (37,5%) e oito (61,5%) animais não apresentavam parasitismo cutâneo, embora todos, de ambos os grupos, tenham sido positivos quando da pesquisa de parasitos no linfonodo poplíteo. Observou-se um maior percentual de transmissibilidade para o vetor a partir de cães assintomáticos (p = 0,0494). As alterações histológicas cutâneas foram similares em ambos os grupos e se caracterizaram, de modo geral, por um infiltrado inflamatório, ora focal ora difuso, na derme, constituído, principalmente, por células mononucleares (macrófagos, linfócitos e plasmócitos), variando de discreto a intenso. Quanto à caracterização da resposta imune celular no tegumento dos animais, somente a densidade (células/mm2) de células iNOS+ foi significantemente maior na derme dos cães sintomáticos quando comparado aos assintomáticos (p = 0,0368). Observou-se correlação positiva moderada entre a densidade de parasitos na pele e a densidade de macrófagos (p = 0,031), de células T CD4+ (p = 0,015) e CD8+ (p = 0,023), e, também, naquela de células iNOS+ relativamente a de células T CD3+ (p = 0,005), CD4+ (p = 0,001) e CD8+ (p = 0,0001). Verificou-se, ainda, correlação negativa moderada com o número de manifestações clínicas e/ou gravidade da enfermidade (p = 0,028), confirmando, assim, maior transmissibilidade de parasitos ao vetor, a partir de animais assintomáticos, demonstrando-se, dessa forma, que tais cães são fontes de infecção em potencial para insetos vetores em áreas endêmicas para leishmaniose visceral canina. / Thirty-eight dogs naturally infected by Leishmania (Leishmania) infantum chagasi were randomly selected from Araçatuba of São Paulo state (Brazil), an endemic area for visceral leishmaniasis. The subjects were distributed into two groups: the first comprising 24 symptomatic dogs and the second consisting of 14 asymptomatic dogs. Possible correlations of clinical characterization (in both symptomatic and asymptomatic subjects) with potential to infect the insect vector, skin inflammatory pattern, cutaneous cellular immunity profile and cutaneous parasitism were investigated. Regarding to the number of cutaneous leishmania amastigotes/mm2, there was not a significant difference between the groups (p = 0.1584); density of skin parasites showed a moderate positive correlation with anti-Leishmania antibody titers (p = 0.042). Concerning to the infectivity to the insect vector, as evidenced by xenodiagnosis, 16 (66.7%) symptomatic and 13 (93%) asymptomatic dogs were able to transmit Leishmania to phlebotomines. Among these, six (37.5%) and eight (61.5%) dogs, respectivelly, did not show cutaneous parasitism, although all participant dogs were found positive when searching for parasites in the popliteal lymph nodes. Asymptomatic dogs showed higher transmissibility to the vector than symptomatic ones (p = 0.0494). Histological features in the skin were similar in both groups and were generally characterized by an inflammatory infiltrate, either diffuse or focal, in the dermis, mainly consisted of mononuclear cells (macrophages, lymphocytes and plasma cells), varying from mild to intense. Concerning characterization of the cutaneous cellular immune response, only iNOS+ cells density (cells/mm2) was significantly higher in the dermis of the symptomatic dogs compared to the asymptomatic ones (p = 0.0368). Moderate positive correlation between the cutaneous parasites density and the macrophages density (p = 0.031), the CD4+ T cells (p = 0.015) and CD8+ T cells (p = 0.023) were observed. Furthermore, density of iNOS+ cells in relation to CD3+ T cells (p = 0.005), CD4+ T cells (p = 0.001) and CD8+ T cells (p = 0.0001) were found positively correlated at a moderate level. It was also found a moderate negative correlation between cutaneous parasites density and the number of clinical signs and/or disease severity (p = 0.028), confirming grater parasites transmission to the vector from asymptomatic animals. It was therefore demonstrated that these dogs are potential sources of infection to insect vectors in endemic areas for canine visceral leishmaniasis.

Submitted by Luciana Ferreira (lucgeral@gmail.com) on 2015-05-05T12:18:03Z No. of bitstreams: 2 Dissertação - Jhonathan Gonçalves da Rocha - 2014.pdf: 2415674 bytes, checksum: 4a8413e486c281e025f18b39fa5ad0c3 (MD5) license_rdf: 21267 bytes, checksum: 73e23c2acaaf13389e092bd813e3223d (MD5) / Approved for entry into archive by Luciana Ferreira (lucgeral@gmail.com) on 2015-05-05T12:20:02Z (GMT) No. of bitstreams: 2 Dissertação - Jhonathan Gonçalves da Rocha - 2014.pdf: 2415674 bytes, checksum: 4a8413e486c281e025f18b39fa5ad0c3 (MD5) license_rdf: 21267 bytes, checksum: 73e23c2acaaf13389e092bd813e3223d (MD5) / Made available in DSpace on 2015-05-05T12:20:02Z (GMT). No. of bitstreams: 2 Dissertação - Jhonathan Gonçalves da Rocha - 2014.pdf: 2415674 bytes, checksum: 4a8413e486c281e025f18b39fa5ad0c3 (MD5) license_rdf: 21267 bytes, checksum: 73e23c2acaaf13389e092bd813e3223d (MD5) Previous issue date: 2014-09-01 / Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de Goiás - FAPEG / Leishmaniasis is neglected infectious and parasitic diseases caused by protozoa of the genus Leishmania, having different clinical forms according to the type of host-parasite relationship established, the main ones being: Leishmaniasis Visceral and Cutaneous Leishmaniasis, object of this study. The fact that conventional treatments present limitations and difficulties for patients coupled with increasing use of low level laser therapy in the treatment of skin lesions of various etiologies, specifically with Low power laser, led us to evaluate the possible consequences of such treatment in American cutaneous leishmaniasis in both murine experimental models (in vivo), with the aim of evaluating the dynamics of healing of ulcerated lesions, as in cultured parasites (in vitro), with the use of techniques that allowed us to evaluate the interference of therapy in cultures of the parasites isolated from the MAB-6 Leishmania (Leishmania) amazonensis Leishmanias belonging to the Bank of the Midwest, with regard to the ability to multiply, viability, integrity and infective capacity. The tests "in vivo" concluded that the use of low-power laser is an interesting tool in the treatment of ulcerative lesions caused by cutaneous leishmaniasis since it leads to decreased edema, stimulates microbicidal action of macrophages and promotes the maturation of collagen. Already in essays "in vitro", it was found that the action of the treatment leads to a static effect on the growth curve of the parasites. The viability tests showed a small increase in the number of parasites killed after treatment and reduction in mitochondrial activity. The low level laser therapy proved incapable of promoting the apoptotic process and modify the composition of the plasma membrane of the parasite, which suggests that the laser treatment did not affect the ability of infection. Instead, there was a rise in titers of viable parasites present in the paws of mice infected with Leishmania treated. / As leishmanioses são doenças infecto-parasitárias negligenciadas, causadas por protozoários do gênero Leishmania, possuindo diferentes formas clínicas de acordo com o tipo de relação parasito-hospedeiro estabelecida, sendo as principais: Leishmaniose Visceral e Leishmaniose Tegumentar Americana, objeto deste estudo. O fato dos tratamentos convencionais apresentarem limitações e dificuldades aos pacientes aliado ao crescente uso da laserterapia de baixa potência no tratamento de lesões dermatológicas de diferentes etiologias, especificamente com o Laser de baixa potência, levou-nos à avaliação das possíveis consequências deste tipo de tratamento na leishmaniose tegumentar americana, tanto em modelos experimentais murinos (in vivo), com o objetivo de avaliar a dinâmica da cicatrização das lesões ulceradas, quanto em culturas de parasitos (in vitro), com o emprego de técnicas que permitiram avaliar a interferência da terapia nas culturas dos parasitos provenientes do isolado MAB-¨6 de Leishmania (Leishmania) amazonensis pertencentes ao Banco de Leishmanias do Centro-Oeste, no que se refere à capacidade de multiplicação, viabilidade, integridade e capacidade infectante. Os ensaios “in vivo” permitiram concluir que o uso do laser de baixa potência é uma interessante ferramenta no tratamento das lesões ulceradas provocadas pela leishmaniose tegumentar americana uma vez que leva à diminuição do edema, estimula a ação microbicida dos macrófagos e favorece a maturação do colágeno. Já nos ensaios “in vitro”, foi verificado que a ação do tratamento leva a um efeito estático sobre a curva de crescimento dos parasitos. Os testes de viabilidade mostraram um pequeno aumento no número de parasitos mortos após o tratamento e na atividade redutora mitocondrial. A laserterapia de baixa potência mostrou-se incapaz de favorecer o processo apoptótico e de modificar a composição da membrana plasmática do parasito, o que permite supor que tratamento com o laser não prejudica a capacidade de infecção. Ao invés disso, verificou-se uma elevação nos títulos de parasitos viáveis presentes nas patas dos camundongos infectados com leishmânias tratadas.

A Leishmaniose Tegumentar Americana (LTA) à doenÃa endÃmica no Brasil. Apesar das medidas empregadas para seu controle, a doenÃa continua em expansÃo com tendÃncia a urbanizaÃÃo. No nordeste o Cearà se destaca com focos desta zoonose, particularmente nos sopÃs das chapadas e serras que circundam o Estado. O Cariri à um destes, sendo ralos os estudos sobre LTA nesta regiÃo, situada no sul do estado do CearÃ, em intimidade com a chapada do Araripe com cerca de 900 metros de altitude; fronteira com os estado de Pernambuco, Piauà e ParaÃba. O presente trabalho avalia aspectos clÃnicos, epidemiolÃgicos e, especialmente, enfatiza estudo histopatolÃgico de material oriundo da borda de Ãlcera de 64 pacientes portadores de LTA provenientes do Cariri. Trata-se de material de arquivo disponibilizado no laboratÃrio de Anatomia PatolÃgica APACIC de 1990 a 2003; e do arquivo da Patologia do NÃcleo de Medicina Tropical da Faculdade de Medicina de Juazeiro do Norte de 2000 a 2003. O material arquivado constitui-se de prontuÃrio com dados clÃnicos e epidemiolÃgicos dos pacientes; blocos e lÃminas das biÃpsias realizadas nas bordas das lesÃes. Protocolo foi elaborado para a coleta de dados. LÃminas e blocos foram reprocessados, corados pela HE e Giemsa, quando necessÃrias outras coloraÃÃes histoquÃmicas. Os histopatolÃgicos foram estudados ao microscÃpio Ãptico de rotina. Os resultados encontrados mostraram maior freqÃÃncia de casos em Barbalha (n= 30). Nos municÃpios estudados a LTA à rural (n= 38), urbanizada em Juazeiro do Norte e com tendÃncia a urbanizaÃÃo em Barbalha. O sexo masculino (n=39), cor de pele parda (n= 43) e a categoria profissional agricultor (n= 13) predominaram. A forma ulcerada simples à mais comum (n= 63), envolvendo em particular os membros inferiores. A reaÃÃo inflamatÃria crÃnica inespecÃfica com resposta reparativa, predomina nos municÃpios estudados. O Montenegro, sorologia e histopatolÃgico sem identificaÃÃo do parasito, na ausÃncia de contexto clÃnico e epidemiolÃgico, nÃo devem ser utilizados isoladamente para firmar diagnÃstico de LTA. / American Cutaneous Leishmaniasis (ACL) is an endemic disease in the Brazil. In spite of the measures employed to the control the disease continues in expansion and with tendency to urbanization. The northeast of Brazil excels with foci of this zoonosis, especially in the mountains and foothills around Cearà state. Cariri in the south of Cearà close to plateau of Araripe that reaches 900m, bordering the states of the Pernambuco, Piauà and ParaÃba is kind of this place with scarce studies. The present work evaluated the clinical and epidemiological aspects of the ACL in the Cariri, especially emphasizing study histopathologic material originating from borders of the ulcers of 64 patients with ACL. The material studied came from APACIC histopatology laboratory (1990-2003), and Pathology laboratory of the Juazeiro do Norte Medicine School (Tropical Medicine Nucleus, 2000-2003). The archived material was constituted of the patientâs records, slides and paraffin blocks. The clinical and epidemiological informations were collected in the specific protocol. The histological material was examine by microscopic routine of the HE and Giemsa, sometimes others histotecnologies techniques were performed. The results revealed Barbalha with highest number of the ACL (n=30); ACL was predominantly rural (n= 38); urbanization of the ACL in the Juazeiro do Norte; male sex (n=39), brown skin (n= 43) and farmerâs (n= 13) prevailed; the ulcerated simple form (n= 63) was most common involving mainly the legs; the nonspecific chronic inflammatory reaction with repair response prevailed in the cases of the ACL; Montenegro skin test, serology and histopathology without identification of the parasites in the absence of the clinical and epidemiological setting should not be used separately to diagnosis ACL.

Made available in DSpace on 2015-04-20T12:31:12Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Alexander Sibajev.pdf: 606940 bytes, checksum: 9c6a8d6a72194ece920cce39baa6aa55 (MD5) Previous issue date: 2005-12-14 / The determination of the prevailing species responsible for American Tegumentary Leishmaniasis (ATL) and the detection at species level of the varieties of the protozoan parasite agent of this endemic disease at the Amazon region are important for determination of the clinical evolution and to better indicate the therapeutic conduct due to the different responses to chemotherapeutic drugs by the Leishmania species. By now we are not aware of an available test to Leishmania (Viannia) guyanensis capable of detecting its intra-specific varieties obtained from human clinical presentations or from vertebrate and invertebrate hosts. We succeed to discriminate Leishmania (V.) guyanensis from Leishmania (V.) braziliensis and also from Leishmania (V.) panamensis through a polimerase chain reaction direct genomic DNA amplification aimed at the transcribed internal spacer (ITS) of the ribosomal RNA gene (rDNA). The positive reaction is visualized at the agarose gel electrophoresis by the presence of an aproximatedly 229 nucleotides size band for L. guyanensis that is absent for the two other species L. braziliensis and L. panamensis. The diagnosis can be done using culture material, skin biopsy or squashing the sand fly vector and having the DNA extracted. In a second step of the investigation, the ITS rDNA was sequenced in L. lainsoni; L. naiffi and four L. guyanensis strains, two of them presenting a muco-cutaneous form of Leishmaniasis. These sequences were compared to others available at the Genbank Database, confirming the previous data from multilocus enzyme electrophoresis and ITS restriction fragment lenght polymorphisms analysis, positioning L. lainsoni and L. naiffi as more divergent species as compared to L. braziliensis, L. panamensis and L. guyanensis species inside de Viannia sub-genus. A correlation was observed in grouping nearer the two L. guyanensis strains, respectively IM4243 and IM4235, responsible for the muco-cutaneous form. This protozoan belonging to sub-genus Viannia show clinical and epidemiological importance in South America north region, particularly the Amazon region and this study can be considered an advance in providing a tool to better understand the parasite species silvatic cycle and in providing tools to characterize the main species responsible for the clinical form presentation of tegumentary leishmaniasis in the human population at this region. / A determinação da espécie responsável pela Leishmaniose Tegumentar Americana e a detecção específica das variedades do protozoário agente dessa doença endêmica na Amazônia, é importante para determinação do comportamento clínico e indicação da conduta terapêutica, devido as diversas respostas aos quimioterápicos pelas espécies de Leishmania. No momento se desconhece um teste disponível para a Leishmania (Viannia) guyanensis, que seja capaz também de incluir suas variedades intra-específicas obtidas de casos humanos e de hospedeiros e vetores silvestres. Neste trabalho se conseguiu discriminar alguns isolados de Leishmania (Viannia) guyanensis, de Leishmania (Viannia) braziliensis e também de Leishmania (Viannia) panamensis através da reação em cadeia da polimerase direcionada para a amplificação do espaçador transcrito interno (ITS) do gene do RNA ribossomal. A reação positiva é dada pela visualização de um fragmento amplificado de cerca de 229 nucleotídeos, para L. (V.) guyanensis e ausente para as outras duas espécies. O diagnóstico pode ser feito com o DNA extraído de cultivo do parasita, diretamente das amastigotas da borda de lesão cutânea ulcerada ou do vetor infectado pela promastigota de Leishmania. Numa etapa seguinte a região ITS do rDNA foi sequenciada para L. lainsoni, L. naiffi e quatro cepas de L. guyanensis em que duas apresentavam forma muco-cutânea e duas outras a forma cutânea da leishmaniose. Essas sequências foram comparadas com as disponíveis em banco de dados como o Genbank, resultando na confirmação dos dados obtidos de variabilidade genética por outros autores, quando utilizada a técnica de isoenzimas e ITS-RFLP. O posicionamento de L. lainsoni e L. naiffi se mostrou mais divergente que L. guyanensis, L. braziliensis e L. panamensis, dentro do subgênero Viannia. Foi também encontrada uma relação de proximidade entre os isolados de L. guyanensis IM4243 e IM4235 apresentando lesão cutâneo-mucosa. As leishmânias do sub-gênero Viannia apresentam importância epidemiológica na América do Sul, sobretudo na região amazônica e esse estudo poder ser considerado importante ao desenvolver meios de diagnóstico específico do parasita, detectando sua presença em vetores e reservatórios silvestres em certas áreas e servindo como marcador para a principal espécie responsável pelas formas clínicas de leishmaniose nessa região.

Made available in DSpace on 2015-04-20T12:31:31Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Francimeire Gomes.pdf: 3198532 bytes, checksum: 51d8088daaeb9e42ea2339b8f0578ac7 (MD5) Previous issue date: 2013-06-07 / Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado do Amazonas / Apesar do conhecimento produzido sobre os diversos elementos que compõem a cadeia de transmissão da Leishmaniose Tegumentar Americana (LTA) no Amazonas, os estudos relacionados a tríade epidemiológica (hospedeiro, vetor e agente etiológico) desta doença nos municípios da região conhecida como Alto Rio Negro (São Gabriel da Cachoeira - Santa Izabel do Rio Negro Barcelos) ainda são escassos, em particular em São Gabriel da Cachoeira (SGC), onde a região limita-se com os paises da Venezuela e Colômbia. Em decorrência disso e considerando a ausência de trabalhos relacionados ao agente etiológico e vetores da LTA que se encontram circulando no município de SGC, foi realizado levantamento da entomofauna de flebotomíneos e com isto verificou-se os potenciais transmissores de tripanossomatídeos e/ou leishmânias; além disso, avaliou-se a infecção natural nestes insetos pela técnica de dissecção e Nested-PCR, e finalmente realizou-se a caracterização bioquímica e molecular para identificação das espécies de Leishmania, isoladas de flebotomíneos e humanos. Do total de 6832 flebotomíneos coletados e distribuídos em 50 espécies foi observado um índice de diversidade considerável (H = 1,19). Destes 66% (4526/6832) correspondem a 19 espécies envolvidas na transmissão de leishmânias e/ou tripanossomatídeos de importância para a saúde pública. Foi notificado o primeiro registro de Lutzomyia conviti para o Brasil e para o Amazonas. A taxa de infecção natural por tripanossomatídeos foi em torno de 4,26%, sendo L. dendrophyla a espécie que apresentou a maior taxa de infecção, com cerca de 3,6%. Dos isolados, apenas 24 cresceram em cultivo, sendo 23 de flebotomíneo e um humano. Um total de 470 fêmeas de 13 espécies diferentes entre elas: L. ayrozai, L. dendrophyla e L. davisi foram testadas com os iniciadores descrito por Cruz et al. (2002). Os isolados não apresentaram perfis bioquímicos similares as cepas de referência de Leishmania e Endotrypanum. Dos fragmentos de DNA da região ITS sequenciados, verificou-se a formação de três grupos/espécies, sendo nove com características biológicas similares ao subgênero Viannia e dois para o subgênero Leishmania. Sugere-se a participação de L. dendrophyla na transmissão de flagelados do gênero Leishmania circulando em SGC, podendo ser a região considerada como área de risco em LTA.

Made available in DSpace on 2015-04-20T12:31:54Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Liliane Coelho da Rocha.pdf: 1977290 bytes, checksum: 135132c02bcd9e4dc7368e1a021d52b4 (MD5) Previous issue date: 2011-05-30 / Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado do Amazonas / Variations in clinical manifestations of leishmaniasis suggest the existence of a differentiation species dependent in the ability of the Leishmania parasites cause lesions in the host. The search for factors that differentiate the species of this genus and its virulence and infectivity is needed to better understand the mechanisms by which these parasites cause damage to the reservoir hosts, thus enabling the discovery of new tools for immunological and therapeutic potential against leishmaniasis. Although many aspects of immune response to this parasite already known, there are several gaps in knowledge related to the characteristics of the parasite itself, that are related to infection. The in vitro and in vivo assays with axenic promastigotes of Leishmania (Leishmania) amazonensis in logarithmic phase, maintained for long periods in culture, macrophages incubated with strain and inoculated in susceptible mammals, were unable to infect macrophages and hamsters. The loss of infectivity and virulence of promastigotes grown continuously, probably due to selection in the sample initially stable, and infective to a population of non-infective promastigotes. The decoded genome of Leishmania (Leishmania) major and Leishmania (Leishmania) infantum and functional studies of many genes by different research groups, as well as other species of the genus, coupled with the simultaneous advance of proteomics, and accelerated favored significantly study the biology of the genus Leishmania. The use of proteomics technique for the study of proteins related to the infectivity of Leishmania, using 2-DE maps for the detection of protein expression profiles of infected and non infected forms of L. (L.) amazonensis coupled with mass spectrometry ESI-QTof (Electrospray Ionization) for identification of proteins were used in this study. Were detected 251 and 145 spots of proteins differents in promastigotes infective and non-infective, respectively. The two dimensional (2-DE) proteins of L. (L.) amazonensis promastigotes infective and non infective indicated differences in protein expression among the forms studied, revealing the absence of expression of some proteins in the non infective samples. Most of the proteins identified in this study is involved in metabolic processes related to the infectivity and virulence of Leishmania such as: heat shock - HSP83 and HSP70, enzymes - nucleoside diphosphate kinase, protein disulfide isomerase, enolase, trypanothione reductase, mitochondrial tryparedoxin peroxidase and ATPase, cytosolic tryparedoxin and the elongation factor-α. These data confirm the feasibility of doing a sweep of the protein profile of an organism related to its infectivity/virulence protein profiles based on 2-DE. Given the results presented in 2-DE maps and the identification of proteins present in the forms studied we can conclude that the infectivity and virulence of promastigotes of L. (L.) amazonensis is related to a number of factors and proteins whose expression has fundamental importance for the survival/multiplication of the parasite in the reservoir-host / Variações nos quadros clínicos da leishmaniose sugerem a existência de uma diferenciação, dependente da espécie e na capacidade de parasitos do gênero Leishmania causar lesões no hospedeiro. A busca por fatores que diferenciam as espécies deste gênero quanto a sua infectividade e virulência se faz necessária para uma melhor compreensão dos mecanismos pelos quais esses parasitos causam danos aos seus hospedeiros, possibilitando assim a descoberta de novas ferramentas de potencial imunológico e terapêutico contra a leishmaniose. Embora muitos aspectos, da resposta imune a esse parasito, já sejam conhecidos, existem diversas lacunas no conhecimento relacionadas às características do próprio parasito que estejam envolvidas com a infecção. Ensaios in vitro e in vivo com promastigotas axênicas de fase logarítmica de Leishmania (Leishmania) amazonensis, mantidas por longos períodos em cultivo, incubados com macrófagos de linhagem e inoculados em mamíferos suscetíveis, mostraram-se incapazes de infectar macrófagos e hamsters. A perda da infectividade e virulência de formas promastigotas continuamente cultivadas provavelmente ocorreram devido à seleção na amostra inicialmente estável e infectiva para uma população de formas promastigotas não-infectivas. O genoma decifrado de Leishmania (Leishmania) major e Leishmania (Leishmania) infantum e os estudos funcionais de vários genes, por diferentes grupos de pesquisa, bem como de outras espécies do gênero, aliado ao avanço simultâneo da proteômica, acelerou e favoreceu de forma significativa o estudo da biologia do gênero Leishmania. O uso da técnica proteômica para o estudo de proteínas de Leishmania relacionadas à infectividade, através do uso de mapas 2-DE para a detecção dos perfis de expressão protéica das formas infectivas e não infectivas de L. (L.) amazonensis aliado a espectrometria de massas por ESI-QTof (Electrospray Ionization) para identificação das proteínas, foram utilizados nesse estudo. Foram detectados 251 e 145 spots protéicos diferentes nas formas promastigotas infectiva e não infectivas, respectivamente. A análise bidimensional (2-DE) de proteínas de promastigotas de L. (L.) amazonensis infectivas e não infectivas indicou diferenças na expressão protéica entre as formas estudadas, revelando a ausência de expressão de algumas proteínas nas amostras não infectivas. A maior parte das proteínas identificadas neste estudo está envolvida em processos metabólicos relacionados à infectividade e virulência de Leishmania como as: de choque térmico - HSP83 e HSP70, enzimas nucleosídeos difosfato quinase, dissulfeto isomerase, enolase, tripanotiona redutase, triparedoxina peroxidase mitocondrial e ATPase, a triparedoxina citosólica e os fatores de alongamento α. Esses dados confirmam a exequibilidade de se fazer uma varredura do perfil protéico de um organismo relacionado à sua infectividade/virulência baseada nos perfis protéicos em 2-DE. Em vista dos resultados apresentados nos mapas 2-DE e na identificação das proteínas presentes nas formas estudadas podemos concluir que a infectividade e virulência de promastigotas de L. (L.) amazonensis esta relacionada a um conjunto de fatores e proteínas cuja expressão é de fundamental importância para a sobrevivência/multiplicação do parasito no seu hospedeiro

Submitted by Divisão de Documentação/BC Biblioteca Central (ddbc@ufam.edu.br) on 2018-04-11T13:11:41Z No. of bitstreams: 2 license_rdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5) Tese_Neuza B. Barros.pdf: 2710465 bytes, checksum: 4f522332291442b7edb66a372b6259ce (MD5) / Approved for entry into archive by Divisão de Documentação/BC Biblioteca Central (ddbc@ufam.edu.br) on 2018-04-11T13:11:55Z (GMT) No. of bitstreams: 2 license_rdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5) Tese_Neuza B. Barros.pdf: 2710465 bytes, checksum: 4f522332291442b7edb66a372b6259ce (MD5) / Made available in DSpace on 2018-04-11T13:11:55Z (GMT). No. of bitstreams: 2 license_rdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5) Tese_Neuza B. Barros.pdf: 2710465 bytes, checksum: 4f522332291442b7edb66a372b6259ce (MD5) Previous issue date: 2017-12-04 / CAPES - Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior / Cutaneous leishmaniasis (CL) is endemic in several regions of the world. In Brazil, despite the wide variety of clinical manifestations, 75% of patients with CL display a typical clinical picture, characterized by one or more ulcers and high round edges with a central necrosis, usually in the lower extremities. Leishmania amazonensis is a major etiologic agent of a wide spectrum of clinical forms of leishmaniasis. The objective of this study was to investigate the in vitro and in vivo antileishmania amazonensis activity of phospholipase A2 (Asp49) isolated from Bothrops jararacussu venom encapsulated in liposomal system. The cytotoxicity of PLA2-Asp49-liposomal was determined by MTT method in J774 macrophages after 48h of incubation. Macrophages treated with PLA2-Asp49-liposomes had cell viability around 82% at the highest concentration (100 μg/mL), while promastigotes treated with the same concentration resulted 78% of inhibition. On the other hand, peritoneal macrophages from Balb/c mice infected and treated with PLA2-Asp49-liposomes showed a 28% reduction in phagocytic index and a 55% reduction (p <0.05) in the number of intracellular amastigotes after 48h of treatment compared to the control group. After the treatments, the supernatants of peritoneal macrophages were collected, and the production of TNF-α, IL-10 and nitric oxide was evaluated. It was observed that there was no IL-10 production by macrophages treated with PLA2-Asp49-liposomes when compared to the untreated control. However, this group presented significant levels of TNF-α and nitric oxide. After the physicochemical characterization of the liposomes it was observed that the size of the vesicles remained close to the diameter of the membrane used in the extrusion, with an average diameter of 205.2 nm for PLA2-Asp49-liposomes and 241.9 nm for the control liposomes. PLA2-Asp49 were also efficiently encapsulated in liposomes (69.6%). The molecular docking showed that lipids strongly interact with the active site of the enzyme PLA2-Asp49. The activity of the toxin-containing liposomes was evaluated in BALB/c mice, previously infected with 1x105 of the parasite's promastigotes. After six weeks of infection, treatments in different groups of animals were initiated and observed for 21 days. The size of the paw lesion in PLA2-Asp49-liposomal treated animals was observed as decreasing by approximately 18% relative to the untreated control group and the Glucantime®-treated animals, which was used as a reference drug. At the end of the treatment, the animals were sacrificed and the paw and lymph node tissues were collected. Part of the collection was used to recover amastigotes and another to quantify cytokines and nitrites. In the group treated with PLA2-Asp49-liposomes the parasitic load was observed to be reduced by 73.5% in the macerated lymph node, compared to the control group. Comparatively, in the paw tissue was observed a reduction of 57.12%. The infected groups treated with PLA2-Asp49-liposomes showed significant production in TNF-α (45 and 80 pg/mL) and nitrite levels (32 and 36 μM), respectively, in lymph node and paw tissues, compared to infected untreated groups. The results indicate that the liposomal system containing PLA2-Asp49 is a promising biotechnological tool to confer an antileishmania activity in infected macrophages. / A leishmaniose cutânea é uma doença endêmica em várias regiões do mundo. No Brasil, 75% dos pacientes com a doença exibem uma forma clínica típica, caracterizada por uma ou mais úlceras de bordas redondas e elevadas com um centro necrótico. Leishmania amazonensis é um dos principais agentes etiológicos de formas clínicas da leishmaniose. O objetivo do presente trabalho foi o de investigar os efeitos in vitro e in vivo da potencial atividade antileishmania amazonensis da Fosfolipase A2 (PLA2) da peçonha de Bothrops jararacussu encapsulada em sistema lipossomal. O método de MTT foi utilizado para avaliação da citotoxicidade da PLA2-Asp49-lipossomal em macrófagos J774 após 48h de incubação. Os macrófagos tratados com a PLA2-Asp49-lipossomal apresentaram viabilidade celular em cerca de 82% na maior concentração utilizada (100 μg/mL). No ensaio com as formas promastigotas tratadas com a mesma concentração da PLA2-Asp49-lipossomal ocorreu uma inibição de 78% dos parasitos. Para o teste de infecção macrófagos peritoneais de camundongos Balb/c, infectados e incubados com PLA2-Asp49-lipossomal apresentaram redução de 28% no índice fagocítico e de 55% (p < 0.05) na quantidade de amastigotas intracelulares, após 48h de tratamento, comparado ao grupo controle. Os sobrenadantes de cultura dos macrófagos peritoneais foram coletados para a avaliação da produção de citocinas (TNF-α e IL-10) e de óxido nítrico. Não houve produção de IL-10 pelos macrófagos tratados com o PLA2-Asp49-lipossomal in vitro. Entretanto, o grupo tratado com PLA2-Asp49-liposomal produziu níveis significativos de TNF-α e óxido nítrico. Após a caracterização físico-química dos lipossomas foi observado que o tamanho das vesículas permaneceu próximo ao tamanho da membrana utilizada na extrusão, com diâmetro médio entre 205,2 nm para PLA2-Asp49-liposomal e 241,9 nm para os lipossomas controle. A PLA2-Asp49 foi eficientemente encapsulada nos lipossomas (69,6%). A atividade dos lipossomas contendo a toxina foi avaliada em camundongos BALB/c, previamente infectados com 1x105 promastigotas do parasito. Após seis semanas foi iniciado o tratamento com as preparações dos diferentes grupos de animais, acompanhados por 21 dias. Foi observado nos animais tratados com PLA2-Asp49-lipossomal diminuição de aproximadamente 18% do tamanho da lesão das patas, em relação ao grupo controle sem tratamento e aos animais tratados com o fármaco referência (Glucantime®). Ao término do tratamento, os animais foram mortos, os tecidos das patas e linfonodos foram coletados para recuperação de amastigotas e quantificação de citocinas e nitritos nos sobrenadantes destes tecidos. No macerado do linfonodo, no grupo tratado com PLA2-asp49-liposomal observou-se redução da carga parasitária de 73,5%, comparado com o grupo controle. Ainda nessa comparação, no macerado do tecido da pata houve redução de 57,12% dos números de amatigotas transfomadas para promastigotas. Os grupos infectados e tratados com PLA2-Asp49-lipossomal apresentaram aumentos significativos, respectivamente, nos tecidos dos linfonodos e patas, nos níveis de IL-12 (1.200 e 400 pg/mL), fator de necrose tumoral (TNF-α) (50 e 100 pg/mL), e de nitritos (32 e 36 μM), quando comparados aos grupos infectados e sem tratamento. Os resultados sugerem que o sistema lipossomal contendo PLA2-Asp-49 é uma ferramenta biotecnológica promissora para conferir atividade antileishmania a macrófagos infectados, aumentando seus mecanismos celulares microbicidas e auxiliando para o estabelecimento de uma resposta imunológica mais eficiente.