Thesis (Ph. D.)--Ohio State University, 2005. / Available online via OhioLINK's ETD Center; full text release delayed at author's request until 2006 Sep 19

Orientador: Márcia Aparecida Silva Graminha / Banca: Alexandra Ivo Medeiros / Banca: Flávio Henrique da Silva / Banca: Mara Cristina Pinto / Banca: Pio Colepicolo Neto / Resumo: A leishmaniose visceral, forma clínica mais severa das leishmanioses, pode ser fatal se não tratada. Cães infectados são reservatórios potenciais da doença, sendo um diagnóstico específico e cuidadoso requerido para a identificação dos animais infectados, com o objetivo de promover um melhor controle epidemiológico e, consequentemente, controlar a transmissão da doença para o homem. Diversos trabalhos na literatura descrevem vários testes utilizados atualmente para diagnóstico da leishmaniose visceral canina (LVC), porém, apresentam variada especificidade e sensibilidade. Dessa forma, o desenvolvimento de um teste diagnóstico com maior sensibilidade e especificidade se torna importante para correta identificação de cães infectados. O presente trabalho teve como objetivo caracterizar a proteína rLc36, codificada por um gene exclusivo de Leishmania infantum, quanto ao potencial antigênico para desenvolvimento de um teste diagnóstico mais sensível e específico para LVC baseado no ensaio ELISA (Enzyme Linked Immuno Sorbent Assay). Diferentes concentrações desta proteína foram testadas por ELISA usando soros de cães infectados com LV e soros de cães não infectados. A concentração de 1,0μg/mL de rLc36 foi capaz de diferenciar os soros positivos dos soros negativos e apresentou sensibilidade de 85% e especificidade de 71%, em um teste com 95% de confiança, mostrando que a proteína rLc36 é antigênica e apresenta potencial para ser aplicada no desenvolvimento de um kit diagnóstico. A proteína rLc36 foi testada em associação com a proteína A2, o qual já foi previamente avaliado como antígeno no diagnóstico sorológico da leishmaniose, e foi possível observar aumento na sensibilidade do teste (77%), mas não na especificidade (79%). Soros de outras parasitoses foram testados frente à proteína rLc36. Foi possível observar reatividade com os soros positivos para babesiose... / Abstract: Visceral leishmaniasis, the most severe clinical form of the leishmaniasis, can be fatal if untreated. Infected dogs are potential reservoirs of the disease, being a specific and careful diagnosis required for identification of the infected animals, with the aim of promoting a better epidemiological control and consequently control the transmission of the disease to humans. Several works in the literature describe various tests used for diagnosis of canine visceral leishmaniasis (CVL), however, they show varied specificity and sensitivity. In this way, the development of a diagnosis test with greater sensitivity and specificity becomes important for the correct identification of infected dogs. Thus, the development of a more sensitive and specific diagnosis test based on recombinant antigens may contribute in the correct identification of dogs truly infected and thus contribute to the more effective control of the transmission of the disease. The present work had as objective to characterize the protein rLc36, encoded by a gene unique to Leishmania infantum, for the antigenic potential for development of a more sensitive and specific test for CVL based on the ELISA (Enzyme Linked Immuno Sorbent Assay). Different protein concentrations were tested by ELISA using sera from dogs infected with LV and sera from non-infected dogs. The concentration of 1.0μg/mL of rLc36 protein was able to differentiate positive from negative sera and showed sensitivity of 85% and specificity of 71% on a test with 95% of confidence, showing that the protein rLc36 is antigenic and has potential for be applied in a new diagnosis test. The rLc36 protein was tested in association with the A2 protein, which was previously assessed as antigen in serological diagnosis of leishmaniasis, and it was possible to observe an increase in the sensitivity of the test (77%), but no increase was observed in the specificity (79%). Sera from... / Doutor

Dissertação (mestrado)—Universidade de Brasília, Instituto de Ciências Biológicas, Programa de Pós-Graduação em Zoologia, 2016. / Submitted by Fernanda Percia França (fernandafranca@bce.unb.br) on 2016-05-30T18:58:01Z No. of bitstreams: 1 2016_JoãoLucasMagnerLourenço.pdf: 3585363 bytes, checksum: f2cf99713698569999457020457c75ee (MD5) / Approved for entry into archive by Raquel Viana(raquelviana@bce.unb.br) on 2016-05-30T19:25:43Z (GMT) No. of bitstreams: 1 2016_JoãoLucasMagnerLourenço.pdf: 3585363 bytes, checksum: f2cf99713698569999457020457c75ee (MD5) / Made available in DSpace on 2016-05-30T19:25:43Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2016_JoãoLucasMagnerLourenço.pdf: 3585363 bytes, checksum: f2cf99713698569999457020457c75ee (MD5) / Morcegos são hospedeiros de várias espécies de tripanossomatídeos, inclusive daquelas de interesse médico como Trypanosoma cruzie Leishmania spp. No entanto, pouco ainda se sabe sobre quais desses parasitos estão presentes nos morcegos do Distrito Federal (DF), Brasil, e qual o papel dos morcegos na manutenção dos tripanossomatídeos em ciclos silvestres. Assim, este trabalho teve como objetivo analisar a ocorrência de tripanossomatídeos em morcegos no DF. As capturas de morcegos foram realizadas com redes de neblina em seis áreas amostrais: Fazenda Água Limpa - FAL, Jardim Botânico de Brasília, FERCAL, REBIO Contagem, Campus da UnB em Brasília, e Fazenda Sarah em Brazlândia. Foram feitas coletas de fragmentos de asa, swab bucal e sangue que foi inserido em hemocultura, impregnado em papel de filtro e utilizado para realização de esfregaços sanguíneos. Para a análise molecular dos parasitos, foi realizada uma Nested PCR SSU rRNA. Na primeira PCR, foram utilizados os primers S4 e S12 gerando um fragmento de 520 bp, o qual foi usado para a Nested PCR com os primers S17 e S18 gerando um fragmento de 480bp, cujos produtos foram sequenciados. Além da Nested PCR SSU rRNA, foi também realizada uma qPCRkDNA para identificar quais amostras estavam positivas para T. cruzie T. rangeli. Um total de 146 morcegos de 14 espécies foram capturados. Não foram identificados parasitos nos esfregaços sanguíneos. Contudo, foram identificadas hemoculturas positivas para Trypanosoma dionisii em Carolliaperspicillata e Diphyllaecaudata, sendo que T. dionisiié registrado pela primeira vez em D. ecaudata. O sangue impregnado em papel de filtro foi a amostra biológica com a maior positividade para tripanossomatídeos, seguido pelas amostras de swab e de asa. Foram identificados T. cruzi, T. rangeli, T. lewisie Leishmania spp. nos morcegos. Em todas as áreas foi detectada infecção por tripanossomatídeos, sendo que a FAL foi a área onde ocorreu a maior riqueza de espécies de tripanossomatídeos. Leishmania spp. foi encontrada parasitando 12 espécies de morcegos e estava presente em todas as áreas de estudo, evidenciando que este parasito está circulando no meio silvestre no DF. A PCR de amostras de swab bucal foi um método não invasivo e prático para identificação de Leishmania spp. Morcegos não devem ser excluídos como potenciais reservatórios para tripanossomatídeos de interesse médico, assim como na participação do ciclo enzoótico desses parasitos. ________________________________________________________________________________________________ ABSTRACT / Bats are hosts of various species of trypanosomatids, including those of medical interest such as Trypanosomacruzi and Leishmania spp. However, there isn’t enough infomation about which of these parasites are present in bats of the Distrito Federal (DF), Brazil, and also the role of bats in the maintenance of the trypanosomes in the wild cycles. Therefore, this work has aimed to analyze the occurrence of trypanosomatids in bats in Distrito Federal. The batswerecapturedwithmist nets in six sites: Fazenda Água Limpa - FAL, Jardim Botânico de Brasília, Fercal, REBIO Contagem, Campus da UnB in Brasília, and Fazenda Sarah in Brazlândia. Wing fragments, oral swabs and blood were collected. The blood collected was inserted into blood culture, impregnated in filter paper and used to perform blood smears. For the molecular analysis of the parasites, a SSU rRNA nested PCR was performed. In the first PCR, S4 and S12 primers were used, which generate a fragment of 520 bp. This fragment was used for the nested PCR with the primers S17 and S18 that generate a 480bp fragment, whose products were sequenced. Besides the nested PCR SSU rRNA, a kDNAqPCRwas also performed to identify which samples were positive for T. cruzi and T. rangeli. A total of 146 bats of 14 species were captured. No parasites were identified in the blood smears. However, positive blood cultures were identified for Trypanosomadionisii in Carolliaperspicillata and Diphyllaecaudata, also this is the first recorded of T. dionisii in D. ecaudata. The blood impregnated in filter paper was the biological sample with the largest postivity for trypanosomatis, followed by the swab samples and the wing samples. T. cruzi, T. rangeli, T. lewisiand Leishmania spp. were identified in bats. In all areas infection by trypanosomatid was detected, and FAL was the area where the greatest species richness of trypanosomatids was detected. Leishmania spp. was found parasitizing 12 species of bats and it was present in all the the study areas, showing that this parasite is circulating in wild areas in DF. The PCR of oral swabs was a non-invasive and practical method for identification of Leishmania spp. Bats should not be excluded as potential reservoirs for trypanosomatids of medical interest, as well as their participation in the enzootic cycle of these parasites.

Iridoides são metabólitos secundários provenientes de angiospermas eudicotiledôneas, presentes principalmente em espécies das ordens Gentianales e Lamiales. Os iridoides dividem-se em carbocíclicos e seco-iridoides, ocorrendo comumente na forma glicosilada. Estes compostos são marcadores taxonômicos em algumas famílias vegetais e apresentam diversas atividades biológicas tais como cardiovascular, neuroprotetora e anti-Leishmania. Diante da importância dos iridoides, este trabalho teve como finalidade a prospecção química destes metabólitos em espécies nativas do Rio Grande Grande dos Sul, bem como a semissíntese de análogos e a investigação da atividade anti-Leishmania através de ensaios in vitro e modelagem molecular. Os compostos isolados foram identificados através de métodos espectroscópicos e os resultados comparados aos descritos na literatura. A partir de Escallonia bifida e Escallonia megapotamica (Escalloniaceae) foram isolados asperulosídeo, desacetilasperulosídeo, geniposídeo, ácido geniposídico e dafilosídeo, sendo que o asperulosídeo foi convertido em asperulosídeo tetraacetilado por meio de semissíntese. De Angelonia integerrima (Scrophulariaceae) foram obtidos galiridosídeo e antirrídeo. Nos experimentos in vitro para atividade anti-Leishmania, asperulosídeo, galiridosídeo, geniposídeo, ipolamida e teveridosídeo, nas concentrações 5-100 μM, não demonstraram inibição frente às formas promastigotas de Leishmania amazonensis. O estudo de modelagem molecular destes iridoides e daqueles descritos na literatura com atividade anti-Leishmania propôs um modelo farmacofórico que demonstrou que as diferenças estruturais não são responsáveis pela inatividade das moléculas isoladas neste trabalho. A perspectiva é realizar ensaios enzimáticos de tripanotiona redutase, bem com docking molecular e estudos de dinâmica molecular para investigar as interações entre grupamentos farmacofóricos das moléculas isoladas e o sítio de ligação de tripanotiona redutase. / Iridoids are secondary metabolites of eudicotyledonous angiosperms, present mainly in species of the orders Gentianales and Lamiales. The iridoids are divided into carbocyclic and seco-iridoids, occurring commonly in the glycosylated form. These compounds are taxonomic markers in same families of plants and have shown cardiovascular, neuroprotective and anti-Leishmania activities. In view of the importance of iridoids, this work aimed to the chemical prospection of these metabolites of native species of Rio Grande do Sul, as well as semi-synthesis of analogues and to investigate the anti-Leishmania activity through in vitro assays and molecular modeling. The isolated compounds were identified by spectroscopic methods and the results compared to those described in literature. From Escallonia bifida and Escallonia megapotamica (Escalloniaceae) asperuloside, deacetylasperuloside, geniposide, geniposidic acid and daphyloside were isolated, being asperuloside developed in asperuloside tetraacetylated by means of semi- synthesis. From Angelonia integerrima (Scrophulariaceae) galiridoside and antirride were obtained. In the in vitro experiments for anti-Leishmania activity, asperuloside, galiridoside, geniposideo, ipolamiide and theveridoside in concentrations 5-100 μM, did not demonstrate inhibition in promastigote form of Leishmania amazonensis. The molecular modeling study of these iridoids and those described in the literature with anti-Leishmania activity proposed a pharmacophoric model that demonstrated that the structures are not responsible by the inactivity of the molecules isolated in this work. The prospect is to carry out enzymatic assays of trypanothione redutase as well as molecular docking and molecular dynamics studies to investigate the interactions between pharmacophoric grouping of the isolated molecules and the trypanothione reductase binding site.

Submitted by Hiolanda Rêgo (hiolandar@gmail.com) on 2013-09-18T17:17:11Z No. of bitstreams: 1 Dissertação_Med_ Juliana Almeida Silva.pdf: 2705428 bytes, checksum: 23e8edabaaee4957ced9d4431671b1ed (MD5) / Approved for entry into archive by Flávia Ferreira (flaviaccf@yahoo.com.br) on 2013-10-31T16:47:30Z (GMT) No. of bitstreams: 1 Dissertação_Med_ Juliana Almeida Silva.pdf: 2705428 bytes, checksum: 23e8edabaaee4957ced9d4431671b1ed (MD5) / Made available in DSpace on 2013-10-31T16:47:31Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Dissertação_Med_ Juliana Almeida Silva.pdf: 2705428 bytes, checksum: 23e8edabaaee4957ced9d4431671b1ed (MD5) / NIH - National Institute of Health (Grant P50AI30639-16 e R03AI067663-02); TMRC – Tropical Medicine Research Centers; INCT – DT – Instituto Nacional de Ciências e Tecnologia de Doenças Tropicais; CAPES – Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior. / A leishmaniose tegumentar Americana (LTA) pode resultar de infecções humanas com Leishmania (Viannia) braziliensis, o qual é responsável por três formas de doença: leishmaniose cutânea (LC), mucosa (LM) e disseminada (LD). As LC, LM e LD podem ser encontradas em Corte de Pedra (CP), Bahia / Brasil. O objetivo deste estudo foi investigar os mecanismos de manutenção da endemicidade da LTA em CP. Foi verificado se os casos humanos de LTA nesta região ocorrem por meio de surtos ou de casos esporádicos. No período de 2008 a 2011, 47 casos de LC, 35 de LM e 47 de LD (129 LTA) foram incluídos no estudo. As coordenadas geográficas dos locais de moradia desses pacientes foram coletadas por GPS e plotadas numa foto de satélite de alta definição da região e geo-referenciada, usando o sistema de informação geográfica (SIG). Cada forma de LTA foi analisada separadamente. Para cada caso novo de uma forma de LTA diagnosticado (ex. LC, LM e LD), a distância dos casos anteriores e que ocorreram nos 3, 6 e 12 meses anteriores, foram calculados usando a ferramenta SIG. Em seguida, foi avaliada a correlação entre a frequência de casos recentes próximos aos casos novos diagnosticados e as distâncias destes novos casos diagnosticados. De forma geral e na maioria dos estratos considerados, os casos de LC e LD mostraram uma correlação inversa significante entre as frequências de casos recentes e a distâncias dos casos novos diagnosticados, sugerindo que, para estas formas de doença e em CP, os surtos são mais frequentes do que os casos esporádicos. Os casos de LM não apresentaram correlações sugestivas de agrupamento da doença. Isto sugere que a LM possivelmente ocorre como forma de doença esporádica, embora uma amostragem maior seria necessária para reforçar esta conclusão. Procurou-se também trazer a luz do conhecimento a clonalidade destas infecções de dentro do hospedeiro. Na avaliação preliminar, foram cultivados e genotipados 94 parasitos obtidos de pacientes com LTA incluídos no estudo. Na caracterização genotípica, foi realizado o sequenciamento de um locus polimórfico, localizado a partir da posição 3074 do cromossomo 24. Em 87% dos isolados testados, apenas 1 ou 2 haplótipos de SNP e indels foram detectados no locus CHR24/3074, sugerindo que estas infecções apresentaram um ou dois clones predominantes de L. (V.) braziliensis. Entretanto, estas análises precisam ser expandidas para os materiais biopsiados, os quais refletem melhor o que ocorre no tecido do hospedeiro, particularmente devido à tendência de alguns clones parasitários se adaptarem melhor ao cultivo in vitro do que outros. Finalmente, avaliou-se a distribuição dos 4 haplótipos mais frequentes na população de L. (V.) braziliensis previamente genotipada. A análise visual dos mapas plotados com os hapótipos indicou uma ampla dispersão dos 4 haplótipos na área endêmica. A falta de agregação dos haplótipos na área de estudo sugere que esses haplótipos iniciaram a sua dispersão alguns anos atrás e isso permitiu a eles ocuparem toda a região de CP. A outra possibilidade é que talvez o locus CHR24/3074 seja conservado demais para distinguir a população L. (V.) braziliensis estudada. De forma geral, o cenário que foi descrito aqui é de infecções humanas oligoclonais, os quais ocorreram a partir de surtos de LC e LD, e de casos esporádicos de LM. / Salvador

Submitted by Hiolanda Rêgo (hiolandar@gmail.com) on 2013-09-16T18:10:39Z No. of bitstreams: 1 Dissertação_Med_Viviane Magalhães.pdf: 3760330 bytes, checksum: 352f3d7caf0d3827d385de4db6afdba1 (MD5) / Approved for entry into archive by Flávia Ferreira (flaviaccf@yahoo.com.br) on 2013-10-31T16:56:08Z (GMT) No. of bitstreams: 1 Dissertação_Med_Viviane Magalhães.pdf: 3760330 bytes, checksum: 352f3d7caf0d3827d385de4db6afdba1 (MD5) / Made available in DSpace on 2013-10-31T16:56:08Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Dissertação_Med_Viviane Magalhães.pdf: 3760330 bytes, checksum: 352f3d7caf0d3827d385de4db6afdba1 (MD5) / NIH - National Institute of Health (Grant P50AI30639-16 e R03AI067663-02); TMRC- Tropical Medicine Research Centers / National Institute of Health; CAPES- Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior. / Leishmania (Viannia) braziliensis é a principal causa da leishmaniose tegumentar americana (LTA) no Brasil. L. (V.) braziliensis causa três formas de leishmaniose na Bahia: cutânea localizada (LC), leishmaniose mucosa (LM) e leishmaniose disseminada (LD). Como passo inicial para a melhor compreensão dos eventos parasita-hospedeiro que podem ajudar a determinar o desfecho da infecção, avaliamos o padrão de expressão gênica global em macrófagos derivados de monócitos (MDM) de voluntários saudáveis infectados com parasitas isolados das três formas clinicas de LTA. Uma multiplicidade de infecção de 2 parasitas por MDM foi usada na análise de microarranjo de DNA proveniente dos MDM no ponto de 4h de infecção. Nesse ponto de tempo, aproximadamente 80% dos MDM em cultura foram infectados, com uma média de cinco parasitas por célula hospedeira. Mais de 500 genes do hospedeiro, pertencentes a diferentes grupos funcionais, apresentou mudanças significativas em seu comportamento, onde a grande maioria se mostrou reprimido nos MDM infectados. Para validar os achados gerais e estender as análises a pontos de tempo posteriores, realizamos uma avaliação cinética (30 min, 4, 24 e 48 horas pós-infecção), utilizando duas cepas do parasita. Avaliou-se a expressão por PCR em tempo real de 21 transcritos, representando as diversas classes de genes afetados no estudo inicial. Os níveis de infecção dos MDM permaneceram estáveis ao longo da avaliação cinética. Aproximadamente 80% dos MDM foram infectados nas culturas, no entanto, o número de parasitas por MDM aumentou constantemente desde cerca de 5 no ponto de tempo de 4 horas a cerca de 20 parasitas por célula. Em relação a expressão gênica, a 4h os níveis dos 21 transcritos avaliados na validação foram semelhantes aos do estudo original. Ao comparar os pontos de 4h contra 24h, oito do total de genes afetados (IL-10RB, MyD88H, PARK7, TRERF1, UBC, NDUFA11, NUP214, NUP62) mostraram uma mudança significativa nos seus níveis de expressão. Na avaliação cinética estendida até 48h pós-infecção encontrou mudanças significativas em algum ponto em oito dos 21 genes. Entre estes, seis genes são semelhantes aos pontos de comparação entre 4 e 24 horas (IL-10RB, MyD88H, PARK7, UBC, NDUFA11, NUP214), enquanto dois mostraram alterações significativas após o ponto 24h (MT1M foi induzida e NUB1 foi reprimida) correspondendo a funções importantes relacionadas com a resposta celular a alterações ambientais. Nos ensaios de transwell houve uma supressão dos genes nas duas condições, 2:1 e 10:1, demonstrando que a passagem de partículas solúveis na membrana da câmara implicou na interação das moléculas das células resultando em modificações na sua expressão gênica. No seu conjunto, os dados indicam que, durante a interação inicial entre L. (V.) braziliensis e o macrófago hospedeiro há uma supressão geral dos principais processos na célula, o que pode ser importante para o parasita estabelecer a infecção. No entanto a compreensão precisa da relação hospedeiro-parasita requer uma avaliação completa, incluindo vários pontos de tempo ao longo do processo infeccioso. / Salvador

Dissertação (mestrado) - Universidade Federal de Santa Catarina, Centro de Ciências Biológicas. Programa de Pós-Graduação em Farmacologia / Made available in DSpace on 2012-10-25T19:16:00Z (GMT). No. of bitstreams: 1 297252.pdf: 1807073 bytes, checksum: bfd884314be529084e9331c85a40fd98 (MD5) / A flora brasileira é rica em plantas empregadas popularmente contra processos infecciosos e, neste cenário, encontra-se uma fonte potencial de novos fármacos antinflamatórios e antiprotozoários. Entre estas espécies, a Kalanchoe crenata (Andrews) Haworth que possui flavonoides, apresenta efeito antinflamatório estudado em modelos animais. O presente estudo teve como objetivo o desenvolvimento de uma forma farmacêutica gel com potencial carreador de lipossomas, para veicular o extrato bruto e fração enriquecida em flavonoides obtidos, para avaliação da atividade farmacológica em animais utilizando um modelo de leishmaniose. A partir da obtenção do extrato e fração da K. crenata e comprovação cromatográfica da presença do flavonóide quercitrina, foi feita a incorporação do extrato e fração em formulação de gel carbopol e realização do estudo de estabilidade acelerada destas formulações. Avaliou-se, então o efeito antinflamatório destas formulações em camundongos BALB/c infectados por Leishmania brasiliensis. Nos resultados obtidos na análise da quercitrina do extrato e fração de K. crenata pode-se confirmar a presença deste flavonóide em maior quantidade na fração. As formulações desenvolvidas demonstraram estabilidade durante o período de seis meses do estudo de estabilidade acelerado. Quando submetidos à avaliação no modelo experimental de inflamação, os géis Teste utilizados nos grupos de animais (n=8) produziram diminuição no processo inflamatório, iniciada imediatamente aos primeiros dias de tratamento e com diferença significativa a 5% pelo teste t-Student quando comparados os grupos tratados com gel Teste no início e final do tratamento. / Brazilian flora is rich in plants popularly employed against infectious processes and in this scenario is a potential source of new anti-inflammatory and antiprotozoal drugs. Among these species, Kalanchoe crenata (Andrews) Haworth has flavonoids with anti-inflammatory effect and has been already studied in animal models. This study aimed to develop a gel dosage form with the potential of liposome carrier to convey the crude extract and flavonoid enriched fraction. The pharmacological activity was evaluated using the leishmaniasis animal model. After chromatographic evidence of flavonoid quercitrin presence, the extract and enriched fraction of K. crenata were incorporated in carbopol gel formulation. The accelerated stability studies of these formulations were performed. We assessed the effect of these anti-inflammatory formulations in BALB/c mice infected by Leishmania brasiliensis. The results obtained in the analysis of the extract and quercitrin fraction K. crenata could confirm the presence of this flavonoid fraction in large quantities. The developed formulation showed stability during the period of six months of accelerated stability study. When undergoing evaluation in the experimental model of inflammation, the gels used in the test groups of animals (n = 8) decrease in the inflammatory process, starting immediately at the first day of treatment and showed a significant difference (5% t-student test) when comparing to the groups treated with gel test at the beginning and the end of treatment.

La leishmaniasis, tiene un fuerte impacto social, alta morbilidad y se manifiesta por la presentación de cuadros clínicos severos. En el Perú, las formas clínicas más frecuentes son la Leishmaniasis Cutánea (LC); Leishmaniasis Cutáneo Mucosa (LCM) y Leishmaniasis Cutánea Difusa (LD) causadas principalmente por Leishmania (Viannia) peruviana, Leishmania (Viannia) braziliensis y Leishmania (Leishmania) amazonensis respectivamente. En este contexto, se evaluó la actividad fotodinámica in vitro de ftalocianina de aluminio tetrasulfonada clorada (AlPcClS4) sobre promastigotes y amastigotes de L.(V.) peruviana, L.(V.) braziliensis y L. (L.) amazonensis. La actividad del fotosensibilizador AlPcClS4 sobre promastigotes se determinó por la prueba colorimétrica trimetiltetrazolium (MTT) y su actividad tóxica en amastigotes por qPCR. Los resultados para promastigotes fueron expresados en Concentración Inhibitoria 50 (IC50) y para amastigotes en porcentajes (%) de reducción de ADN parasitario. Se encontró que la actividad de AlPcClS4 a 100 µM, 24 horas post tratamiento fue fototóxica en promastigotes, inhibiendo el crecimiento de L. (V.) peruviana, L.(V.) braziliensis y L.(L).amazonensis en 65,6; 49,6 y 43,9% frente al control respectivamente; Concentraciones inferiores a 50 µM de AlPcClS4 no tuvieron efectos significativos en ninguna de las tres especies con respecto al control (p>0.05). En cambio para amastigotes intracelulares de las tres especies, la AlPcClS4 expuesta a 200 µM, 72 horas post tratamiento logró una reducción del número de amastigotes con respecto al control en un 57,82; 37,13 y 34,85% respectivamente. Asimismo, se observaron alteraciones morfológicas que podrían estar asociados a procesos de apoptosis. Los resultados de avance permiten indicar que la TFD con nuevos fotosensibilizadores como AlPcClS4 serían una probable alternativa en el tratamiento de leishmaniasis, sin embargo se requiere contar con ensayos in vivo en animales de experimentación. / Tesis

Submitted by Pós Imunologia (ppgimicsufba@gmail.com) on 2017-03-14T18:58:18Z No. of bitstreams: 1 dissertação Ananda Isis Lima de Marinho.pdf: 1076899 bytes, checksum: 21e99adf683c19eda3cf6952ccc97d03 (MD5) / Approved for entry into archive by Delba Rosa (delba@ufba.br) on 2017-04-24T13:08:50Z (GMT) No. of bitstreams: 1 dissertação Ananda Isis Lima de Marinho.pdf: 1076899 bytes, checksum: 21e99adf683c19eda3cf6952ccc97d03 (MD5) / Made available in DSpace on 2017-04-24T13:08:50Z (GMT). No. of bitstreams: 1 dissertação Ananda Isis Lima de Marinho.pdf: 1076899 bytes, checksum: 21e99adf683c19eda3cf6952ccc97d03 (MD5) / CNPq / Nas infecções parasitárias alguns fatores estão associados com a susceptibilidade do hospedeiro, dentre eles o sexo, a idade, condição genética, fatores ambientais e o estado imunológico. Diferenças entre os sexos são observadas em diversas infecções. Acredita- se que isto ocorra devido a ações de hormônios sexuais, podendo afetar os diferentes tipos de resposta imune. A Leishmaniose é um grave problema de saúde pública apresentando aumento da prevalência e afetando grande parte da população mundial. No Brasil é endêmica e o Nordeste é a região mais afetada. A forma visceral é a mais grave podendo levar o indivíduo a óbito se não tratada. Objetivamos determinar se existe diferença entre sexos no modelo experimental de LV. Hamsters (Mesocricetus auratus) machos e fêmeas foram infectados com L. infantum/chagasi através da injeção intradérmica e comparados com animais controles, após 5 meses de infecção. Após eutanásia sangue, baço e fígado foram coletados para as análises de carga parasitária, histológicas e de parâmetros bioquímicos. As fêmeas infectadas apresentaram um maior tamanho de baço que os machos infectados. Porém, foram os machos que apresentaram maior carga parasitária. As alterações bioquímicas foram maiores nas fêmeas, podendo estar relacionadas às alterações histológicas observadas no fígado das mesmas. As fêmeas infectadas apresentaram concentrações séricas inferiores de estradiol quando comparadas com fêmeas não infectadas. Essa redução não foi detectada nos machos. Nossos resultados indicam que existem diferenças entre sexos na LV experimental. A determinação de diferenças entre os sexos nas respostas às infecções é de fundamental importância na escolha da melhor abordagem terapêutica para o tratamento das enfermidades, incluindo as leishmanioses. / In parasitic infections some factors are associated with the susceptibility of the host, including sex, age, genetic condition, environmental factors and immune status. Gender differences are observed in various infections. It is believed it occurs due to sex hormones, which may affect different types of immune responses. Leishmaniasis is a serious public health problem presenting increased prevalence and affecting much of the world population. In Brazil it is endemic and the Northeast is the most affected region. The visceral form is the most severe and may cause death if left untreated. We aimed to determine whether there is gender difference in the experimental model of LV. Hamsters (Mesocricetus auratus) males and females were infected with L. infantum / chagasi by intradermal injection and compared with control animals after 5 months of infection. After euthanasia, blood, spleen and liver were collected for parasite load, histological and biochemical parameters analysis. Infected females showed an increase in the size of spleen compared to infected males. However, males had higher parasite burden. Biochemical changes were higher in females, which may be related to the histological changes observed in their liver. Infected females had lower serum concentrations of estradiol compared to uninfected females. This reduction was not detected in males. Our results indicate that there are gender differences in experimental LV. The determination of sex differences in responses to infection is very important in choosing the best therapeutic approach for the treatment of diseases, including leishmaniasis.

Submitted by Hiolanda Rêgo (hiolandar@gmail.com) on 2013-06-10T19:36:18Z No. of bitstreams: 1 Dissertação_ICS_Gustavo Miranda.pdf: 1853807 bytes, checksum: f9a1c2b796442124414bba8e163ac719 (MD5) / Made available in DSpace on 2013-06-10T19:36:18Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Dissertação_ICS_Gustavo Miranda.pdf: 1853807 bytes, checksum: f9a1c2b796442124414bba8e163ac719 (MD5) / Doenças como a leishmaniose é uma importante causa de morbidade e mortalidade no Brasil e seus diagnósticos devem ser melhoradas. A produção de anticorpos monoclonbais anti-L. infantum e acoplamento ao sensor piezoelétrico, para formar um dispositivo bioeletrônicos capaz de detectar rapidamente antígenos de Leishmania sp, tanto qualitativa como quantitativamente, é uma alternativa promissora para o diagnóstico da leishmaniose, devido à sua alta especificidade e sensibilidade, portabilidade e baixo custo, em comparação aos métodos convencionais. Objetivo: Desenvolver um imunossensor capaz de detectar antígenos de L. infantum em tecidos de animais infectados. Material e Método: Quatro hibridomas produtores de anticorpos monoclonais anti-amastigota de L. infantum teve sua especificidade confirmada por ELISA. Esses anticorpos foram imobilizados sobre um cristal piesoelétrico de quartzo através de uma fina camada de 2-aminoetanotiol (cisteamina) e glutaraldeído, e submetidos a injeções de extratos de baço de hamster infectados e não-infectados com L. infantum. Resultados: Quatro anticorpos (5A9H8, 2B7B8, 4B6F7 e 5AB3A10B4), todos da classe IgG, foram acoplados à superfície do transdutor e foram capazes de reagir contra extrato de baço de hamster infectado com L. infantum. A metodologia desenvolvida foi capaz de detectar 3,5x10 4 amastigotas por grama de tecido infectado com os anticorpos 5A9H8, 4B6F7 e 5AB3A10B4, e 1,75x10 4 com o anticorpo 2B7B8. Conclusões: Os resultados demonstraram que este teste pode ser útil para quantificar amastigotas de L. infantum em órgãos de animais experimentais para estudos sobre a patogênese da leishmaniose visceral americana e é uma ferramenta promissora para desenvolver um diagnóstico de leismanioses humana e canina. / Salvador