Made available in DSpace on 2016-04-04T12:35:25Z (GMT). No. of bitstreams: 2 bruno_nunes_ioc_mest_2014.pdf: 2295523 bytes, checksum: ae908a52d5c21a69d898434ee645c5cf (MD5) license.txt: 1748 bytes, checksum: 8a4605be74aa9ea9d79846c1fba20a33 (MD5) Previous issue date: 2014 / Fundação Oswaldo Cruz. Instituto Oswaldo Cruz. Rio de Janeiro, RJ, Brasil / Insetos são expostos a diversos microrganismos patogênicos durante seu ciclo de vida. Para sobreviverem a riscos de infecções, os insetos possuem várias barreiras e respostas imunes. O sistema imune de insetos é basicamente composto por vias de sinalização que controlam uma diversidade de mecanismos efetores, deste modo permitindo o controle da maior parte das infecções. Assim como em outros organismos, há três principais vias de sinalização relacionadas à imunidade em insetos: Toll, Imd e Jak/STAT. Nosso objetivo foi caracterizar estas vias imunes em L. longipalpis, o principal vetor da leishmaniose visceral no Brasil. Para isto, nós transfectamos células embrionárias LL5 de L. longipalpis com RNA dupla fita para os genes repressores cactus (Toll), caspar (Imd) e pias (Jak/STAT). Usando esta abordagem, foi possível correlacionar a expressão dos peptídeos anti-microbianos (AMPs) com as vias correspondentes. Nós vimos que cecropina e defensina 4 foram reguladas positivamente após transfecção com RNA dupla fita para cactus e caspar, mostrando regulação redundante pelas vias Toll e Imd. Nós também silenciamos o gene cactus em insetos adultos. Diferente do que foi observado em células LL5, atacina, cecropina e defensina 4 foram reguladas negativamente após o silenciamento. É possível que este resultado seja explicado pelo efeito de uma alça de regulação negativa da via Toll, de modo a preservar a microbiota na ausência de estímulo imune Além disso, nós avaliamos a resposta de genes de imunidade durante a infecção por Leishmania infantum chagasi em insetos adultos. Cactus foi regulado positivamente 48 horas após infecção, demonstrando o papel da via Toll em resposta à infecção por Leishmania. A expressão de SHP-1 foi modulada durante a infecção, com aumento significativo da expressão, em 48 horas. Este resultado sugere que, assim como em macrófagos, Gp63 ativa SHP-1, do hospedeiro invertebrado e, com isso, inibe a via Toll, possivelmente imunossuprimindo o flebotomíneo. Os AMPs atacina, cecropina e defensina 4 mostraram aumento significativo da expressão 72 horas após infecção, quando o parasita interage diretamente com o epitélio intestinal do flebotomíneo. A carga parasitária diminuiu significativamente nos terceiro e quarto dias, provavelmente devido ao aumento da expressão de AMPs nestes pontos. Estes resultados indicam que esses genes são regulados pelo flebotomíneo em resposta a presença de Leishmania, e que podem causar impactos na sobrevivência do parasita no intestino do inseto durante a infecção / nsects are exposed to a wide range of pathogenic microorganisms during their life cycle. In order to survive infection risks, insects developed several structural barriers and immune responses . The insect immune system is basically composed of signaling pathways that control a diversity of effector mechanisms, thus allowing control of most infections. As found in other organisms, there are three main signaling pathways related to immunity in insects: Toll, Imd and Jak/STAT. Our purpose was to characterize these immune pathways in L. longipalpis, the main vector of visceral leishmaniasis in Brazil. For this, we transfected L. longipalpis embryonic LL5 cells with dsRNA for the repressor genes cactus (Toll), caspar (Imd) and PIAS (Jak/STAT). Using this approach, it was possible to correlate the expression of AMPs to corresponding pathways. We found that cecropin and defensin 4 were upregulated after t ransfection by dsRNA for cactus and caspar, showing redundant regulation via the Toll and IMD pathways. We also silenced the cactus gene in adult insects by dsRNA. U nlike what was observed in LL5 cells , attacin, cecropin and defensin 4 genes were downregul ated after silencing. This result might be explained by the effect of a negative regulation loop via Toll, to preserve the microbiota in the absence of immune stimulation. Furthermore, we assessed the response of immunity genes upon Leishmania infantum cha gasi infection in adult insect. Cactus was upregulated at 48 hours after infection, demonstrating the role of the Toll pathway in response to Leishmania infection. The SHP - 1 expression was modulated during infection , with a significant increase in expressi on at 48 hours. This result suggests that, like in macrophages , Leishmania Gp63 activates SHP - 1 of the invertebrate host and thereby inhibits the Toll pathway , possibly immunosuppressing the sandfly . The AMPs attacin, cecropin and defensin 4 showed signifi cant increase in expression at 72 hours after infection, when the parasite is interacting closely with the sand fly intestinal epithelium . The parasite load decreased significantly on the third and fourth days after infection , probably due to increasead AM Ps expression at this point. These results indicate that these genes are regulated by the sand fly immune response upon the presence of Leishmania , which may have an impact on parasite survival in the insect gut during infection

Made available in DSpace on 2016-04-15T12:56:12Z (GMT). No. of bitstreams: 2 maria_freitas_ioc_mest_2015.pdf: 2682437 bytes, checksum: 7716b2371405ae3b8279f9da1f7ec256 (MD5) license.txt: 1748 bytes, checksum: 8a4605be74aa9ea9d79846c1fba20a33 (MD5) Previous issue date: 2015 / Fundação Oswaldo Cruz. Instituto Oswaldo Cruz. Rio de Janeiro, RJ, Brasil / A ativação imune crônica e a depleção linfocitária são marcantes na infecção pelo HIV-1 e pela Leishmania infatum. Esta ativação tem sido associada à exaustão do sistema imune em pacientes infectados pelo HIV e pode contribuir para as frequentes recidivas de leishmaniose visceral (LV) em pacientes LV/HIV-1. Assim, é importante investigar se a manutenção do tratamento anti-Leishmania combinado à terapia antirretroviral (TARV) é capaz de diminuir os níveis de ativação e, consequentemente, reduzir o número de recidivas da LV. Diante disso, o objetivo desse trabalho foi avaliar o grau de ativação celular e o seu impacto sobre o comprometimento imunológico, em pacientes LV/HIV-1, assim como determinar sua influência no prognóstico (recidiva ou remissão clínica) pós-tratamento anti-Leishmania dos pacientes coinfectados. Os pacientes foram divididos em: Não-recidivantes (NR;n=6) e Recidivantes (R;n=11). Ambos os grupos foram seguidos da fase ativa até 12 meses pós-tratamento (mpt), sendo mantidos sob TARV e em uso de profilaxia secundária com anfotericina B (50mg/quinzenal), desde o final do tto da LV. As contagens de TCD4+, grau de ativação (CD38+HLA-DR+), imunosenescência (CD57+CD27-), níveis de CD14 solúvel e anticorpos anti-Leishmania foram avaliados para os pacientes e voluntários sadios Durante a fase ativa da LV, ambos os grupos apresentaram níveis similares de todos os parâmetros avaliados. Entretanto, nos períodos de 6 e 12 mpt, o grupo NR mostrou um ganho significativo de células TCD4+, bem como uma diminuição dos percentuais de linfócitos TCD4 e TCD8 ativados, diferente do grupo R, que manteve uma baixa reconstituição imunológica, um alto grau de ativação em ambas as subpopulações de TCD8+ e CD4+ (p<0,0001 e p<0,01, respectivamente), além de níveis elevados de sCD14 (p<0,05), sugerindo um persistente grau de ativação imune entre pacientes R. As cargas viral e parasitária permaneceram baixas ou indetectáveis sem correlacão com a ativação. Entretanto, tal ativação se correlacionou negativamente com o dano na recuperação imunológica desses pacientes. Apesar dessas diferenças, os percentuais de linfócitos T senescentes foram similarmente elevados entre os grupos R e NR. A menor capacidade do grupo R em reduzir os níveis de ativação celular em comparação ao NR, pode estar relacionada ao comprometimento da resposta efetora, que decai a cada episodio de recidiva. Além disso, a profilaxia secundária parece modificar a história natural dos pacientes coinfectados que estão experenciando o primeiro episódio da doença, ao contrário daqueles que já apresentam várias recidivas / Chronic immune activation and lymphocytic depletion are striking features in HIV-1 and Leishmania infatum infection. Such activation has been associated with the exhaustion of the immune system in HIV+ patients and can contribute to frequent recurrences of visceral leishmaniasis (VL) in coinfected patients. Therefore, it is important to investigate whether maintenance of anti-Leishmania treatment combined with antiretroviral therapy (ART) is able to decrease the levels of cellular activation and hence reduce the number of VL relapses. In this ways, the aim of this study was to evaluate the cellular activation degree and its impact on the immune impairment in VL/HIV patients, as well as to determine their influence on prognosis (relapse or clinical remission) after anti-Leishmania treatment. The patients were divided into non-recurrent (NR; n=6) and recurrent (R; n=11). Both groups were followed by active phase up to 12 months post-treatment (mpt). They were on ART and use of secondary prophylaxis with amphotericin B (50mg/fortnightly) from the end of the VL treatment. CD4+ T cell counts, activation degree (CD38+/HLA-DR+), immunosenescence (CD57+/CD27-), soluble CD14 levels and anti-Leishmania antibodies were evaluated in the patients and healthy controls. During the active phase of VL, both groups had similar levels of all parameters However, at 6 and 12 mpt, the NR group showed a significant gain in CD4+T cells, as well as a decrease in the percentage of activated CD4 and CD8 T lymphocytes. Unlikely, R group kept a low immune reconstitution, a high degree of activation of both CD4 and CD8 subpopulations (p <0.0001 and p <0.01, respectively), and high levels of sCD14 (p <0.05), suggesting a persistent level of immune activation in R coinfected patients. Viral and parasite load remained low or undetectable with no correlation with activation. However, this activation degree was negatively correlated with impaired immune reconstitution of patients. Despite these differences, the percentages of senescent T lymphocytes were similarly high between R and NR groups. The smaller capacity of the R group in reducing cell activation levels compared to NR, may be related to some functional impairment of effector response that has been declining every recurrence episode. In addition, secondary prophylaxis seems to modify the natural history of co-infected patients who are presenting the first episode of the disease, as opposed to those who already have several recurrences

Made available in DSpace on 2016-05-02T13:04:37Z (GMT). No. of bitstreams: 2 sandy_pereira_ioc_mest_2015.pdf: 4606163 bytes, checksum: dd466130d43a2f24db28ac921bec5343 (MD5) license.txt: 1748 bytes, checksum: 8a4605be74aa9ea9d79846c1fba20a33 (MD5) Previous issue date: 2015 / Fundação Oswaldo Cruz. Instituto Oswaldo Cruz. Rio de Janeiro, RJ, Brasil / Os macrófagos são um dos principais fagócitos do sistema imunológico atuando tanto na resposta imune inata quanto na adaptativa. Na infecção por Leishmania são as principais células infectadas nos hospedeiros vertebrados, tendo, portanto, a função de controlar ou favorecer a proliferação do parasito. Diferentes espécies do parasito produzem diferentes manifestações clínicas, mas o perfil genético assim como a resposta imunológica do hospedeiro pode modular o desenvolvimento da doença. Para melhor compreensão da biologia das leishmanioses, utilizam-se modelos de infecção experimental em camundongos como ferramenta para estudo da imunologia, resistência e suscetibilidade ao parasito. Neste trabalho estudamos a infecção por Leishmania amazonensis em macrófagos de três linhagens de camundongos com diferentes graus de suscetibilidade ao parasito. Para isso macrófagos peritoneais de camundongos BALB/c, C57BL/10 e C3H/He foram infectados com promastigotas de L. amazonensis para avaliação da multiplicação de amastigotas intracelulares, produção de óxido nítrico (NO) e produção de citocinas. Macrófagos de C3H/He infectados por 2 MOI de L. amazonensis apresentaram número de amastigotas e taxa de infecção similares a células de BALB/c e C57BL/10 nas primeiras 48h de infecção. No entanto, a partir de 72 horas a taxa de infecção e número total de amastigotas foi menor quando comparadas com células de origem BALB/c. Quando as células foram estimuladas com LPS e IFN-!, a carga parasitária dos macrófagos das três linhagens foram reduzidas, porém os macrófagos BALB/c permaneceram com carga parasitária maior do que os de origem C3H/He A produção de NO pelas células infectadas só foi diferente sob estimulação, quando os macrófagos de origem BALB/c produziram menos NO do que os C3H/He e C57BL/10. A dosagem de citocinas no sobrenadante das culturas sem estimulo mostrou que os macrófagos de C3H/He apresentaram altos níveis de IFN-!, IL-12 e IL-10, sendo este último exacerbado pela infecção, quando comparados as demais linhagens. A estimulação por LPS e IFN-! aumentou a produção de citocinas dos macrófagos de BALB/c e C57BL/10. Já as células de origem C3H/He quando estimuladas mostraram pouca ou nenhuma produção de IL-1", IL12 e IL-10 e uma estimulação moderada de TNF e IL-6. Finalmente, a inibição da iNOS pela aminoguanidina não foi capaz de diminuir a resistência dos macrófagos de C3H/He. Podemos, portanto, concluir que macrófagos de camundongos C3H/He são menos suscetíveis a infecção por L. amazonensis, mas essa sua resistência não é dependente da produção de óxido nítrico e nem de uma resposta do tipo Th1 / Macrophages are the main phagocytes of the imune system, participating on the inate and adaptative responses. They are the main host cell during Leishmania infection, participating on the control or multiplication of the parasite.Different species of the parasite produce different clinical manifestations, but the genetic background and the imune response of the host may modulate the development of the disease. In order to understand the biology of the leishmaniasis the mouse experimental model is used as a tool for the study of immunology and resistance/susceptibility to the parasite. In this work we have studied Leishmania amazonensis infection in macrophages obtained from three different inbred mouse strains, presenting different degrees of susceptibility to infection. Therefore, peritoneal macrophages of BALB/c, C57BL/10 and C3H/He mice were infected with L. amazonensis promastigotes in order to evaluate the number of intracelular amastigotes and infection rate. C3H/He macrophages infected with 2 MOI of L. amazonensis presented similar number of amastigotes and infection rate as BALB/c and C57BL/10 cells on the first 48 hours after infection. However, after 72 hours infection rate and number of amastigotes per cells were higher in BALB/c cells. When cells were stimulated with LPS and IFN-!, parasite load of all three inbred strains was reduced, but macrophages from BALB/c remained with a higher parasite load than C3H/He. Nitric oxide production by infected macrophages was only different under stimulation, when macrophages from BALB/c produced less NO than C3H/He and C57BL/10. Cytokine dosage of culture supernatants showed that all non-stimulated cultures produced of macrophages from C3H/He produced high levels of IFN-!, IL-12 and IL-10, the later being further exacerbated by infection, when compared with the others stains. Stimulation by LPS and IFN-! enhanced cytokine production by BALB/c and C57BL/10 macrophages. C3H/He cells when stimulated showed low or no production of IL1 ", IL-12 and IL-10 and a moderate enhancement of TNF and IL-6. Finally, iNOS inhibition by aminoguanidine was not able to reduce the resistance of C3H/He macrophages. We can then conclude that macrophages from C3H/He are less susceptible to L. amazonensis infection, but resistance is not dependent on nitric oxide production of a Th1 response. / 2016-12-17

Submitted by Angelo Silva (asilva@icict.fiocruz.br) on 2016-07-13T18:48:18Z No. of bitstreams: 2 license.txt: 1748 bytes, checksum: 8a4605be74aa9ea9d79846c1fba20a33 (MD5) 71844.pdf: 6374317 bytes, checksum: cbcb33e3210240d51e2f525530467e5c (MD5) / Approved for entry into archive by Anderson Silva (avargas@icict.fiocruz.br) on 2016-08-24T19:30:58Z (GMT) No. of bitstreams: 2 71844.pdf: 6374317 bytes, checksum: cbcb33e3210240d51e2f525530467e5c (MD5) license.txt: 1748 bytes, checksum: 8a4605be74aa9ea9d79846c1fba20a33 (MD5) / Made available in DSpace on 2016-08-24T19:30:58Z (GMT). No. of bitstreams: 2 71844.pdf: 6374317 bytes, checksum: cbcb33e3210240d51e2f525530467e5c (MD5) license.txt: 1748 bytes, checksum: 8a4605be74aa9ea9d79846c1fba20a33 (MD5) Previous issue date: 2015 / Fundação Oswaldo Cruz. Instituto Oswaldo Cruz. Rio de Janeiro, RJ, Brasil / Os achados clínicos da leishmaniose visceral canina (LVC), assim como os da leishmaniose visceral humana (LVH) são variáveis e inespecíficos. Apesar da LVC se apresentar como uma doença que pode ser fatal e crônica, existem poucos estudos descrevendo as alterações clínicas e histopatológicas destas infecções. Desta forma, evidenciando a necessidade de obtenção de dados que pudessem contribuir nesses estudos, o objetivo deste trabalho foi estudar as alterações clínicas e oculares presentes em 25 cães com leishmaniose visceral provenientes da localidade Cidade Operária, São Luís - Maranhão/Brasil através da realização de avaliação clínica, testes oftalmológicos (Schirmer e colírio fluoresceína) além de dosagens hematológicas e bioquímicas, isolamento e caracterização do parasito em amostras de medula óssea, baço e humor aquoso, além de PCR. Os resultados mostraram que linfoadenopatia foi o sintoma mais frequente, seguido de caquexia, alopecia, lesão de pele, onicogrifose e hepatoesplenomegalia. As manifestações clínicas oculares observadas com maior frequência foram: presença de algum tipo de secreção e conjuntivite, seguido de blefarite, uveíte e opacidade de córnea. Oito animais foram positivos no teste de Schirmer e sete no colírio de fluoresceína indicando a presença de ceratoconjuntivite seca e úlcera de cornea, respectivamente As alterações hematológicas mais frequentes foram anemia e trombocitopenia, aumento sérico de proteínas totais e globulina e a diminuição de albumina. A alteração mais frequente observada em todos os animais foi a presença de infiltrado inflamatório do tipo plasmocitário. A análise histopatológica dos olhos dos cães mostrou lesões nas pálpebras, esclera, glândulas e musculatura retrorbital. Tendo a presença do parasito sido evidenciada em 16% dos animais. Estes resultados mostram que as manifestações oftalmológicas estão presentes em animais com LVC e podem ocorrer concomitantemente com outros sinais sistêmicos da doença. É importante considerar a leishmaniose como uma doença sistêmica, a qual afeta diferentes órgãos e sistemas. Sugerimos assim, que em áreas endêmicas, este agravo deve ser incluído como diagnóstico diferencial de cães com lesões oculares ou de etiologia desconhecida / Abstract: Clinical findings of canine visceral leishmaniasis (CVL), as well as of human visceral leishmaniasis (HVL) are variable and nonspecific. Although VC present as a disease that can be fatal and chronic few studies describing the clinical and histopathological changes of these infections. Thus, highlighting the need to obtain data that could contribute to these studies, the objective of this work was to study the clinical and ocular abnormalities present in 25 dogs with visceral leishmaniasis from the locality City Workers, Sao Luis - Maranhao / Brazil by conducting clinical, ophthalmological test (fluorescein drops and Schirmer) and hematological and biochemical measurements, isolation and characterization of the parasite in samples of bone marrow, spleen, and aqueous humor, and PCR. The results showed that lymphadenopathy was the most common symptom, followed by cachexia, alopecia, skin lesion, onychogryphosis, and hepatosplenomegaly. Ocular clinical manifestations observed most frequently were the presence of some type of secretion and conjunctivitis, followed by blepharitis, uveitis and corneal opacity. Eight animals were positive in the Schirmer test and seven in drops of fluorescein indicating the presence of keratoconjunctivitis sicca and cornea ulcer, respectively The most common hematologic abnormalities were anemia and thrombocytopenia, increased serum total protein and globulin and decreased albumin. The most frequent alteration observed in all animals was the presence of inflammatory infiltrate of plasma cell type. Histopathological analysis dogs eyes showed lesions on the eyelids, sclera, glands and muscles retrorbital. Since the presence of the parasite was observed in 16% of animals. These results show that the ocular manifestations are present in animals with LVC and can occur concurrently with other signs of systemic illness. It is important to consider leishmaniasis as a systemic disease, which affects different organs and systems. We suggest therefore that in endemic areas, this grievance should be included in the differential diagnosis of dogs with eye injuries or of unknown etiology

Iridoides são metabólitos secundários provenientes de angiospermas eudicotiledôneas, presentes principalmente em espécies das ordens Gentianales e Lamiales. Os iridoides dividem-se em carbocíclicos e seco-iridoides, ocorrendo comumente na forma glicosilada. Estes compostos são marcadores taxonômicos em algumas famílias vegetais e apresentam diversas atividades biológicas tais como cardiovascular, neuroprotetora e anti-Leishmania. Diante da importância dos iridoides, este trabalho teve como finalidade a prospecção química destes metabólitos em espécies nativas do Rio Grande Grande dos Sul, bem como a semissíntese de análogos e a investigação da atividade anti-Leishmania através de ensaios in vitro e modelagem molecular. Os compostos isolados foram identificados através de métodos espectroscópicos e os resultados comparados aos descritos na literatura. A partir de Escallonia bifida e Escallonia megapotamica (Escalloniaceae) foram isolados asperulosídeo, desacetilasperulosídeo, geniposídeo, ácido geniposídico e dafilosídeo, sendo que o asperulosídeo foi convertido em asperulosídeo tetraacetilado por meio de semissíntese. De Angelonia integerrima (Scrophulariaceae) foram obtidos galiridosídeo e antirrídeo. Nos experimentos in vitro para atividade anti-Leishmania, asperulosídeo, galiridosídeo, geniposídeo, ipolamida e teveridosídeo, nas concentrações 5-100 μM, não demonstraram inibição frente às formas promastigotas de Leishmania amazonensis. O estudo de modelagem molecular destes iridoides e daqueles descritos na literatura com atividade anti-Leishmania propôs um modelo farmacofórico que demonstrou que as diferenças estruturais não são responsáveis pela inatividade das moléculas isoladas neste trabalho. A perspectiva é realizar ensaios enzimáticos de tripanotiona redutase, bem com docking molecular e estudos de dinâmica molecular para investigar as interações entre grupamentos farmacofóricos das moléculas isoladas e o sítio de ligação de tripanotiona redutase. / Iridoids are secondary metabolites of eudicotyledonous angiosperms, present mainly in species of the orders Gentianales and Lamiales. The iridoids are divided into carbocyclic and seco-iridoids, occurring commonly in the glycosylated form. These compounds are taxonomic markers in same families of plants and have shown cardiovascular, neuroprotective and anti-Leishmania activities. In view of the importance of iridoids, this work aimed to the chemical prospection of these metabolites of native species of Rio Grande do Sul, as well as semi-synthesis of analogues and to investigate the anti-Leishmania activity through in vitro assays and molecular modeling. The isolated compounds were identified by spectroscopic methods and the results compared to those described in literature. From Escallonia bifida and Escallonia megapotamica (Escalloniaceae) asperuloside, deacetylasperuloside, geniposide, geniposidic acid and daphyloside were isolated, being asperuloside developed in asperuloside tetraacetylated by means of semi- synthesis. From Angelonia integerrima (Scrophulariaceae) galiridoside and antirride were obtained. In the in vitro experiments for anti-Leishmania activity, asperuloside, galiridoside, geniposideo, ipolamiide and theveridoside in concentrations 5-100 μM, did not demonstrate inhibition in promastigote form of Leishmania amazonensis. The molecular modeling study of these iridoids and those described in the literature with anti-Leishmania activity proposed a pharmacophoric model that demonstrated that the structures are not responsible by the inactivity of the molecules isolated in this work. The prospect is to carry out enzymatic assays of trypanothione redutase as well as molecular docking and molecular dynamics studies to investigate the interactions between pharmacophoric grouping of the isolated molecules and the trypanothione reductase binding site.

Submitted by Maurílio Figueiredo (maurilioafigueiredo@yahoo.com.br) on 2013-03-13T22:26:00Z No. of bitstreams: 1 DISSERTAÇÃO_InfluênciaManutençãoLeishmania.PDF: 347399 bytes, checksum: 25dc8ca820f87dc97fb24a9b64724315 (MD5) / Approved for entry into archive by Neide Nativa (neide@sisbin.ufop.br) on 2013-03-15T16:03:13Z (GMT) No. of bitstreams: 1 DISSERTAÇÃO_InfluênciaManutençãoLeishmania.PDF: 347399 bytes, checksum: 25dc8ca820f87dc97fb24a9b64724315 (MD5) / Made available in DSpace on 2013-03-15T16:03:13Z (GMT). No. of bitstreams: 1 DISSERTAÇÃO_InfluênciaManutençãoLeishmania.PDF: 347399 bytes, checksum: 25dc8ca820f87dc97fb24a9b64724315 (MD5) Previous issue date: 2008 / Parasitos pertencentes ao gênero Leishmania quando são mantidos em cultura por passagens sucessivas apresentam redução na infecciosidade. As cepas infectantes dos parasitos possuem maior atividade ecto-nucleotidásica do que as não infectantes. Para avaliar a existência de correlação entre o tempo de manutenção em cultura, a infecciosidade e a hidrólise de nucleotídeos em Leishmania amazonensis o parasito citado foi mantido em cultura por passagens sucessivas. Os parasitos mantidos em cultura por poucas passagens (p<15) apresentaram maior hidrólise dos nucleotídeos ATP, ADP e AMP e maior porcentagem de formas infectantes quando comparados com aqueles mantidos em cultura por várias passagens (p>100). Para avaliar o curso da infecção causada por passagens diferentes do parasito, os camundongos C57BL/6 foram inoculados na pata com formas promastigotas totais ou metacíclicas. O curso da infecção foi acompanhado por um período de oito semanas. Os camundongos inoculados com os parasitos mantidos em cultura por poucas passagens desenvolveram lesões maiores e produziram IFN- em menor quantidade quando comparados com o grupo de animais que recebeu o inóculo dos parasitos mantidos em cultura por várias passagens. Não foi verificada a produção de IL-4. O re-isolamento de parasitos, dos animais inoculados com os parasitos mantidos em cultura por várias passagens, mostra que apenas uma passagem pelo hospedeiro vertebrado não alterou a atividade ecto-nucleotidásica. O observado indica que a manutenção dos parasitos em cultura pode selecionar aqueles que apresentam reduzida atividade ecto-nucleotidásica. O tratamento dos parasitos mantidos em cultura por poucas passagens com adenosina causou alteração no metabolismo de nucleotídeos e na infecciosidade dos mesmos. Os dados sugerem a existência de correlação entre o tempo de manutenção em cultura, a infecciosidade e a atividade ecto-nucleotidásica em L. amazonensis. _______________________________________________________________________________ / ABSTRACT: It is usually accepted that maintenance of Leishmania parasites in culture leads to a decrease in the parasite’s ability to cause infection in the vertebrate host. Previous work from our laboratory suggests that the infectivity of different Leishmania species correlates with the level of ecto-nucleotidasic activity. Studies from other laboratories, also demonstrated that no infectivity strains of Leishmania amazonensis have decreased apirasic activity. Based on these evidences, the present study evaluated the correlation between the maintenance of L. amazonensis in culture for several passages (>100), the ecto-nucleotidasic activity, its infectivity and the immune response induced by the infection in C57BL/6 mice. Our results show that long term culture of L. amazonensis not only leads to decreased metacyclogenesis but, more importantly, that these parasites present reduced ecto-nucleotidasic activity. This decreased infectivity is associated with a decrease in IFN-g production by lymph node and spleen cells. Furthermore, re-isolation of long term cultured parasites from lesions of infected mice did not recover the level of ectonucleotidasic activity. Finally, we show that treatment of L. amazonensis promastigote cultures with adenosine leads to a decreased ability to hydrolyze extracellular ATP and ADP and that infection by these parasites resulted in decreased lesion development. Our results reinforce the hypothesis that infectivity by Leishmania parasites is, at least, partially dependent on the activity of ecto-nucleotidases.

Programa de Pós-Graduação em Biotecnologia. Núcleo de Pesquisas em Ciências Biológicas, Pró-Reitoria de Pesquisa e Pós Graduação, Universidade Federal de Ouro Preto. / Submitted by Oliveira Flávia (flavia@sisbin.ufop.br) on 2014-08-28T15:20:52Z No. of bitstreams: 1 DISSERTAÇÃO_AnáliseImunogenicidadeEficácia.pdf: 1364971 bytes, checksum: a989e5ba2831ca2c1404a7c4ee79ac51 (MD5) / Approved for entry into archive by Gracilene Carvalho (gracilene@sisbin.ufop.br) on 2014-08-29T16:32:22Z (GMT) No. of bitstreams: 1 DISSERTAÇÃO_AnáliseImunogenicidadeEficácia.pdf: 1364971 bytes, checksum: a989e5ba2831ca2c1404a7c4ee79ac51 (MD5) / Made available in DSpace on 2014-08-29T16:32:23Z (GMT). No. of bitstreams: 1 DISSERTAÇÃO_AnáliseImunogenicidadeEficácia.pdf: 1364971 bytes, checksum: a989e5ba2831ca2c1404a7c4ee79ac51 (MD5) Previous issue date: 2013 / É consenso que a estratégia mais racional para o controle da leishmaniose visceral, que tem como agente etiológico a Leishmania chagasi (sinonímia L. infantum), seria o emprego de uma vacina que proteja o cão impedindo o seu papel de reservatório doméstico do parasito. Assim, considerando o camundongo como modelo experimental amplamente utilizado em ensaios pré-clínicos vacinais anti-Leishmania, é de extrema importância analisar, neste modelo, candidatos vacinais de forma pareada e simultânea. Neste sentido, este projeto avaliou um ensaio pré-clínico vacinal, para análise comparativa de aspectos relacionados a imunogenicidade e eficácia dos candidatos vacinais contra leishmaniose visceral, entre os quais: Leish-Tec® (LT), Leishmune® (LM) e vacina LBSap (composta de antígeno bruto de L. braziliensis e saponina). Dessa forma, camundongos BALB/c foram imunizados com três doses de cada vacina e, após trinta dias da última dose vacinal, os animais foram desafiados experimentalmente com promastigotas de L. chagasi. Trinta dias após o desafio, os animais foram submetidos a eutanásia. Nos tempos antes da 1° dose vacinal (T0), 14 dias após a 3° dose (T1) e antes da eutanásia (T2), amostras de sangue foram coletadas do plexo orbital para realização do leucograma e avaliação do perfil imunofenotípico, ex vivo, de leucócitos circulantes. O baço e o fígado foram coletados no tempo T2 para avaliação da carga parasitária pela técnica de PCR em tempo real. Os resultados obtidos indicam que todas as vacinas são incócuas e seguras para a administração. Dentre as principais alterações relacionadas ao estabelecimento de mecanismos imunoprotetores destaca-se o aumento dos níveis de células NK CD3-CD49b+ observado em T2 para os diferentes grupos vacinais (LT, LM, LBSap). Além disto, ao se avaliar a imunidade adaptativa, foi observado no grupo LT aumento de linfócitos T totais CD3+ em T2, que pode ser associado ao aumento da subpopulação de linfócitos T CD3+CD4+ no mesmo período. De forma interessante, a imunização com vacina LBSap induziu aumento da população de linfócitos T totais CD3+ tanto após o protocolo vacinal (T1) como após o desafio experimental (T2). Este aumento relatado no grupo LBSap parece ser reflexo da expansão da população de linfócitos T CD4+ nos mesmos tempos (T1 e T2). Semelhantemente, o grupo LM apresentou este mesmo perfil de reposta imune com aumento de linfócitos T CD4+ tanto em T1 como em T2. Este perfil imunofenotípico parece ter favorecido o controle do parasitismo tecidual tanto no baço como no fígado para as diferentes vacinas avaliadas. Neste contexto, foi observada redução da carga parasitária esplênica de 36% (LT), 63% (LM) e 42% (LBSap). Além disto, a análise da carga parasitária hepática revelou redução do parasitismo de 48% (LT), 71% (LM) e 62% (LBSap). Estes resultados parecem indicar o estabelecimento de mecanismos imunoprotetores pelos diferentes imunobiológicos avaliados, compatível com a redução da carga parasitária no baço e figado de camundongos imunizados com as vacinas LT, LM e LBSap. Buscando ampliar a identificação de biomarcadores associados a indução de imunoproteção, será realizada como perspectiva a dosagem de imunoglobulinas anti-Leishmania (IgG, IgG1, IgG2a e IgG2b), bem como a análise do perfil de citocinas. ___________________________________________________________________________ / ABSTRACT: The most rational strategy to control visceral leishmaniasis, that presented Leishmania chagasi (syn. L. infantum) as etiological agent, would be the vaccine for protecting the dog and blocking the domestic parasite reservoir status. Thus, considering the experimental mouse model is widely used in anti-Leishmania vaccine pre-clinical trials, it is extremely important to analyze, in this model, vaccine candidates in a simultaneous approach. In this sense, a vaccine pre-clinical trial was performed, including analysis of immunogenicity and protection levels, in different groups, as follows: Leish-Tec®, Leishmune® and LBSap (composed by L. braziliensis antigens plus saponin). Thus, BALB/c mice were inoculated with three doses of each vaccine and challenged with L. chagasi. Thirty days post-challenge all animals were submitted to euthanasia. At the time points before the first dose (T0), after third dose (T1; 14 days after the last dose) and 30 days after L. chagasi challenge (T2) the blood was collected in order to evaluate the hemogram and ex vivo immunophenotyping in whole blood leukocytes. The spleen and liver were collected at T2 for analyzing parasite load quantified by real time PCR. Results displayed that all vaccines are safe and innocuous to the administration in mice. Among the major changes related to the establishment of imunoprotetor mechanisms NK cells (CD3-CD49b+) presented increased levels at T2 in the different vaccine groups (LT, LM, LBSap). Furthermore, the induction of adaptive immunity was observed in LT group showing higher CD3+ T-lymphocytes at T2, which can be associated with CD3+CD4+ T-subset at same time. Interestingly, LBSap immunizations induced higher CD3+ T-lymphocytes in both after vaccine protocol (T1) and experimental challenge (T2). This data would be associated in LBSap group to increased levels in the CD3+CD4+ T-subsets at the same time (T1 and T2). Similarly, LM group presented the same immune profile, displaying increased levels in CD3+CD4+ T-lymphocytes in both T1 and T2. This immunophenotypic profile seems to act in the spleen and liver parasitism control considering the different evaluated vaccines. In this context, the reduction in the spleen parasite load was 36% (LT), 63% (LM) and 42% (LBSap). Moreover, analysis in the liver parasite load demonstrated reduction of 48% (LT), 71% (LM) and 62% (LBSap). These results suggest the establishment of immunoprotection mechanisms in the different evaluated vaccines as related by control in the spleen and liver parasite burden considering LT, LM and LBSap immunized mice. Aiming to further analyze the additional biomarkers associated with immunoprotection, analyzes of anti-Leishmania immunoglobulins (IgG, IgG1, IgG2a and IgG2b) and the cytokine profile will be performed as perspective.

Programa de Pós-Graduação em Ciências Farmacêuticas. CIPHARMA, Escola de Farmácia, Universidade Federal de Ouro Preto. / Submitted by Maurílio Figueiredo (maurilioafigueiredo@yahoo.com.br) on 2015-01-28T17:51:37Z No. of bitstreams: 2 license_rdf: 22190 bytes, checksum: 19e8a2b57ef43c09f4d7071d2153c97d (MD5) DISSERTAÇÃO_AvaliaçãoAtividadeLeishmanicida.pdf: 1885846 bytes, checksum: f5a4b75f79b82eb4d3a774329357062f (MD5) / Approved for entry into archive by Gracilene Carvalho (gracilene@sisbin.ufop.br) on 2015-01-28T19:37:32Z (GMT) No. of bitstreams: 2 license_rdf: 22190 bytes, checksum: 19e8a2b57ef43c09f4d7071d2153c97d (MD5) DISSERTAÇÃO_AvaliaçãoAtividadeLeishmanicida.pdf: 1885846 bytes, checksum: f5a4b75f79b82eb4d3a774329357062f (MD5) / Made available in DSpace on 2015-01-28T19:39:27Z (GMT). No. of bitstreams: 2 license_rdf: 22190 bytes, checksum: 19e8a2b57ef43c09f4d7071d2153c97d (MD5) DISSERTAÇÃO_AvaliaçãoAtividadeLeishmanicida.pdf: 1885846 bytes, checksum: f5a4b75f79b82eb4d3a774329357062f (MD5) Previous issue date: 2013 / O presente estudo avaliou a utilização do extrato aquoso de própolis verde (EAPV) e de sua associação ao antimoniato de meglumina livre ou encapsulado em lipossomas para o tratamento da leishmaniose visceral (LV) em modelo murino. In vitro, avaliou-se o efeito do EAPV e de sua associação com o antimoniato de meglumina livre sobre a viabilidade de células J774-A1. O EAPV não apresentou toxicidade nas concentrações testadas e foi capaz de reduzir o efeito tóxico do antimoniato de meglumina livre. Para o experimento in vivo, camundongos BALB/c isogênicos foram inoculados com 1 x 107 promastigotas de Leishmania (Leishmania) infantum (cepa C43). Após duas semanas de infecção, os animais foram divididos em sete grupos (n=8) e tratados com: (1) dose única de tampão fosfato por via intraperitoneal (ip), (2) dose única de antimoniato de meglumina livre (AM) (30 mg/Kg) ip., (3) dose única de lipossomas vazios ip, (4) dose única de antimoniato de meglumina lipossomal (30 mg/Kg) ip., (5) dose diária de EAPV (500 mg/kg/dose) durante 14 dias via oral; (6) associação do EAPV (esquema terapêutico igual ao grupo 5) ao AM (30 mg/kg) ip. e (7) associação do EAPV (esquema terapêutico igual ao grupo 5) ao antimoniato de meglumina lipossomal (30 mg/kg) ip. Duas semanas após o tratamento, os animais foram eutanasiados e avaliou-se a carga parasitária no fígado e baço pelo método de diluição limitante. Além disso, foi realizada análise do perfil de células do baço por citometria de fluxo, toxicidade cardíaca, hepática e renal pela dosagem de marcadores bioquímicos (CKMB, TGO/ALT, TGP/ASP, creatinina) e a histopatologia do fígado e baço. O tratamento com EAPV reduziu a carga parasitária no fígado (44%), mas não no baço. Além disso, verificou-se uma redução na carga parasitária após tratamento com antimoniato de meglumina encapsulado em lipossoma no fígado e baço de aproximadamente 41%. Não foi observada diminuição na carga parasitária após tratamento com antimoniato de meglumina livre em nenhum dos órgãos avaliados. A administração concomitante do EAPV e antimoniato de meglumina livre reduziu a carga parasitária no fígado (24,4%), mas não no baço. No entanto, a administração concomitante do EAPV e antimoniato de meglumina encapsulado em lipossomas reduziu a carga parasitária tanto no fígado quanto no baço, porém no mesmo nível observado pelo tratamento com antimoniato de meglumina lipossomal. Os resultados demonstraram ausência de alteração no padrão fenotípico de células do baço por citometria de fluxo e na função hepática, cardíaca e renal por análises bioquímicas. As análises histopatológicas mostraram que a administração do EAPV assim como do AM lipossomal isoladamente ou em associação ao EAPV levou a uma melhor preservação dos tecidos hepático e esplênico quando comparados aos demais grupos experimentais. Os resultados desse trabalho permitiram concluir que o EAPV foi capaz de provocar uma redução da carga parasitária hepática no mesmo nível observado com dose única de AM lipossomal. No entanto sua associação com antimoniato de meglumina lipossomal foi capaz de reduzir a carga parasitária no fígado e baço de forma semelhante à formulação de antimoniato de meglumina lipossomal isolada. As drogas testadas não causaram alterações no perfil das células do baço bem como não apresentaram toxicidade para os órgãos avaliados. __________________________________________________________________________________________ / ABSTRACT: The present study evaluated the use of aqueous extract of green propolis (AEGP) and its association with free or liposomal meglumine antimoniate for the treatment of murine visceral leishmaniasis (VL). In vitro, it was evaluated the effect of AEGP on the viability of J774-A1 cells. It was observed that the AEGP showed no toxicity at the concentrations tested and it reduced the toxic effects of free meglumine antimoniate. Isogenic BALB/c mice were intravenously inoculated with 1 x 107 Leishmania (Leishmania) infantum promastigotes (C43 strain). Two weeks post infection, the animals were divided into seven groups (n=8) and treated intraperitoneally, as a single dose, with either (1) phosphate buffer, (2) Sb(V) at 30 mg/kg, (3) empty liposomes, (4) liposomal Sb(V) – at 30 mg/kg, (5) AEGP at 500 mg/kg (oral, 14 days), (6) association of AEGP (500 mg/kg) with Sb(V) at 30 mg/kg or (7) association of AEGP (500 mg/kg) with Sb(V)-entrapped liposomes at 30 mg/kg. Two weeks after treatment, animals were euthanized and the parasite load associated to the liver and spleen was evaluated through the limiting dilution technique. Immunophenotyping of spleen cells was performed using flow cytometry. Enzyme activities in the serum were used to monitor hepatic, kidney and cardiac functions. Histopathological examinations of the liver and spleen were also conducted. The administration of AEGP reduced parasitic load in the liver, but not in spleen. There was a reduction in parasite load after treatment with liposomal meglumine antimoniate in the liver and spleen 41%. There was no decrease in parasite load after treatment with free meglumine antimoniate in any organ evaluated. Concomitant administration of AEGP and free meglumine antimoniate reduced the parasite load in the liver but not in spleen. However, concomitant administration of AEGP and meglumine antimoniate encapsulated in liposomes reduced the parasite load in both organs. Our results did not reveal any significant alteration in the profile of spleen cells by flow cytometry or in the liver, heart and kidney functions by biochemical analyzes. The histopathological analysis showed that administration of AEGP and/or liposomal Sb(V) was able to protect the liver and spleen tissues when compared to other groups. The results of this study indicate that the AEGP was able to reduce the parasite load only in the liver, however its association with meglumine antimoniate encapsulated in liposomes was able to reduce the parasite load in the liver and spleen. The drugs tested did not cause changes in the profile of spleen cells and showed no organ toxicity evaluated.

Programa de Pós-Graduação em Ciências Biológicas. Núcleo de Pesquisas em Ciências Biológicas, Pró-Reitoria de Pesquisa e Pós Graduação, Universidade Federal de Ouro Preto. / Submitted by Maurílio Figueiredo (maurilioafigueiredo@yahoo.com.br) on 2015-01-28T20:16:28Z No. of bitstreams: 2 license_rdf: 22190 bytes, checksum: 19e8a2b57ef43c09f4d7071d2153c97d (MD5) DISSERTAÇÃO_ImplicaçõesEvoluçãoClínica.pdf: 2277060 bytes, checksum: a62590db278a8868aadbea6ad2834333 (MD5) / Approved for entry into archive by Gracilene Carvalho (gracilene@sisbin.ufop.br) on 2015-01-30T18:26:18Z (GMT) No. of bitstreams: 2 license_rdf: 22190 bytes, checksum: 19e8a2b57ef43c09f4d7071d2153c97d (MD5) DISSERTAÇÃO_ImplicaçõesEvoluçãoClínica.pdf: 2277060 bytes, checksum: a62590db278a8868aadbea6ad2834333 (MD5) / Made available in DSpace on 2015-01-30T18:26:18Z (GMT). No. of bitstreams: 2 license_rdf: 22190 bytes, checksum: 19e8a2b57ef43c09f4d7071d2153c97d (MD5) DISSERTAÇÃO_ImplicaçõesEvoluçãoClínica.pdf: 2277060 bytes, checksum: a62590db278a8868aadbea6ad2834333 (MD5) Previous issue date: 2013 / A leishmaniose visceral canina (LVC) é uma zoonose de grande impacto na saúde pública sendo a pele o principal ponto de contato de organismos do gênero Leishmania com os hospedeiros invertebrados. O objetivo desse trabalho foi avaliar a carga parasitária, o processo inflamatório e as alterações da matriz extracelular na pele de cães naturalmente infectados por Leishmania (Leishmania) infantum apresentando diferentes formas clínicas da doença. Para isso, foram utilizados 35 cães sem raça definida, provenientes da região de Belo Horizonte, MG. Esses animais foram divididos em três grupos, de acordo com a presença de sinais clínicos, como assintomáticos (n=11, CA), oligossintomáticos (n=12, CO) e sintomáticos (n=12, CS), além de oito animais controle. Posteriormente estes animais foram distribuídos em novos grupos, de acordo com a intensidade do parasitismo cutâneo, sendo classificados em baixo parasitismo (n=12, BP), médio parasitismo (n=11, MP) e alto parasitismo (n=12, AP). Após exame clínico verificou-se que os sinais clínicos mais frequentes, sugestivos de LVC, foram as dermatites (47, 2%), seguidas por linfadenopatia (36, 1%) e emagrecimento (33,3%). Quanto à carga parasitária, verificou-se que essa foi maior nos grupos CS e CO quando comparada a CA. Infiltrado inflamatório foi presente em todos os grupos clínicos, porém esse foi maior nos grupos CA, CO e CS quando comparados ao grupo controle. Ainda, a inflamação foi maior no grupo CS quando comparado aos grupos CA e CO. Ao avaliar esse mesmo parâmetro nos grupos com distintos graus de parasitismo, foi verificado maior inflamação em cães com BP e MP quando comparados aos cães controle. Além disso, cães com MP e AP possuíam maior processo inflamatório que cães com BP. A avaliação da matriz extracelular demonstrou redução de colágeno total nos grupos infectados quando comparados ao grupo controle e nos grupos CO e CS em relação ao grupo CA. Animais com AP e MP apresentaram diminuição da área de colágeno em relação a animais controle. Na quantificação das fibras colágenas do tipo I observou-se redução nos grupos CO e CS quando comparados ao grupo controle e diminuição da mesma nos cães com MP em relação ao grupo controle. Ainda, em relação às fibras colágenas do tipo III foi observado um aumento significativo no grupo CO em relação aos grupos controle e CS e aumento em cães com BP quando comparado a cães controle e com MP. Esses resultados sugerem que a inflamação crônica e o intenso parasitismo dérmico foram diretamente relacionados à gravidade da doença e que esse processo inflamatório está intimamente associado à carga parasitária e as alterações da matriz extracelular desse órgão. __________________________________________________________________________________________ / ABSTRACT: Canine visceral leishmaniasis (CVL) is a zoonosis of major public health impact and the skin the main point of contact of organisms of the genus Leishmania with invertebrate hosts. Based on this, the aim of this study was evaluate the parasite load, inflammation and the matrix cellular alterations in the ear skin of dogs naturally infected with Leishmania (Leishmania) infantum with different clinical forms and different intensities of cutaneous parasitism. For that, thirty five dogs naturally infected with Leishmania, mongrels, from the Belo Horizonte, MG were categorized as asymptomatic (n=11), oligosymptomatic (n=12) and symptomatic dogs (n=12) and these were compared to control dogs (n = 8). Later were divided into new groups, according to three different parasites density: low (n=12), medium (n=11) and high parasitism (n=12). The major clinical manifestations of visceral leishmaniasis in dogs were dermatitis (47,2%), lymphadenopathy (36,1%) and weight loss (33,3%). Inflammatory infiltrates were observed in all groups, varying from intense and/or moderate in symptomatic to discrete in asymptomatic and control animals. Moreover, the inflammation was higher in symptomatic dogs when compared to oligosymptomatic and asymptomatic dogs. In assessing this parameter in groups with different degrees of parasitism, greater inflammation was observed in dogs with low, medium and high parasitism when compared to control dogs. In addition, dogs with medium and high parasitism showed higher inflammatory process those dogs with low parasitism. The mast cells’ number was higher in oligosymptomatic dogs compared to control dogs and was higher in dogs with low and medium parasitism when compared to control group. Extracellular matrix assessment demonstrated decrease in the collagen area in all infected groups when compared to control dogs and in symptomatic and oligosymptomatic dogs compared to asymptomatic dogs. Moreover, dogs with high and medium parasitism showed a decrease in collagen area relative to control animals. Regarding collagen type I there was only a significant dicrease in symptomatic and oligosymptomatic dogs compared to the group of uninfected dogs and decrease in dogs with medium parasitism compared to the group of uninfected dogs. Furthermore, it was verified increase in collagen type III in oligosymptomatic dogs compared to control group and symptomatic dogs and increase in dogs with low parasitism in relation the group of uninfected dogs and medium parasitism dogs. The results suggested that chronic dermal inflammation and cutaneous parasitism were directly related to the severity of clinical disease and that this inflammation is closely associated with the parasite load and changes in the extracellular matrix of the skin.

Tese(doutorado) - Universidade Federal de Santa Catarina, Centro de Ciências Biológicas, Programa de Pós-Graduação em Biotecnologia, Florianópolis, 2013 / Made available in DSpace on 2013-12-06T00:29:41Z (GMT). No. of bitstreams: 1 319288.pdf: 2480441 bytes, checksum: 0e6312c8dd815f386ee3ee05e8b31b8a (MD5) Previous issue date: 2013 / Embora conhecida como uma doença de alta endemicidade na região Amazônica do Brasil, a presença de Leishmaniose Tegumentar Americana (LTA) na parte subtropical do Sul do país tem recebido pouca atenção dos órgãos oficiais de saúde pública brasileira. Este estudo foi realizado para demonstrar que a LTA é uma zoonose emergente e endêmica no estado de Santa Catarina. Além de caracterizar o perfil epidemiológico, o presente estudo incorporou métodos moleculares para a identificação das espécies de Leishmania e a tipagem das cepas de Leishmania (Viannia) braziliensis do Estado. Para este estudo transversal retrospectivo, foram avaliados os dados de todos os casos de LTA em Santa Catarina notificados ao Sistema de Informação de Agravos de Notificação (SINAN), no período entre 2001 e 2009, e o perfil epidemiologico foi comparado entre as duas regiões do Estado. Os resultados mostram que a LTA é recentemente endêmica na região Nordeste do estado de Santa Catarina, com o perfil epidemiológico variado entre as distintas regiões do Estado. A LTA do Estado é predominantemente uma doença de transmissão urbana. A PCR-RFLP de kDNA identificou 98,8% das amostras como sendo L. (V.) braziliensis (248/251), e 1,2% somente como sendo L. (Leishmania) amazonensis. A análise de sequências multilocus (MLSA) de seis loci gênicos de 33 isolados de Santa Catarina e 53 isolados de onze outros estados brasileiros de L. (V.) braziliensis, agrupou as cepas em três principais complexos clonais (CC). A maioria (84,8%, 28/33) das cepas de Santa Catarina pertencem ao CC1, mostrando elevada homogeneidade genética. O mesmo foi observado na análise da estrutura populacional, que identificou três populações com a maioria das cepas de Santa Catarina pertencentes a uma população principal. A MLSA foi capaz de distinguir padrões epidemiológicos entre as cepas, demonstrando o potencial da técnica como ferramenta epidemiológica. Esses dados sugerem que a emergência da LTA causada pela L. (V.) braziliensis na população humana em Santa Catarina é um fenômeno recente que requer o desenvolvimento urgente de medidas de controle. <br> / Abstract: Although known to be highly endemic in the Amazon regions of Brazil, the presence of American tegumentary leishmaniasis (ATL) in the s subtropical southern part of the country has received little attention by public health officials. This study was conducted to demonstrate ATL is an emerging zoonosis in the state of Santa Catarina. In addition to characterizing the epidemiological profile, the present study incorporated molecular methods for the identification of Leishmania species and evaluation of the genetic variability of isolates from the state. For this retrospective cross-sectional study, data from all cases of ATL in Santa Catarina notified to the Information System for Notifiable Diseases (SINAN) during the period from 2001 to 2009 were evaluated, and the epidemiological profile was compared between the two main geographical regions of the state. Results demonstrated ATL has become endemic recently in northeastern region of the state of Santa Catarina, with the epidemiological profile varying significantly by region of the state. The LTA of the state is predominantly a disease of urban transmission. Species characterization by kDNA PCR-RFLP identified 98.8% of the samples as L. (V.) braziliensis (248/251) and only 1.2% as L. (Leishmania) amazonensis (3/251). Among the 33 Santa Catarina L. (V.) braziliensis isolates and 53 L. (V.) braziliensis isolates from eleven other states which were subjected to multilocus sequence analysis (MLSA) of six loci, the strains were found to cluster into three clonal complexes (CC). The majority (84.8%, 28/33) of the Santa Catarina strains belonged to CC1, representing high genetic homogeneity. The same was observed in the analysis of population structure, in which three populations were identified with most of the Santa Catarina strains belonging to one main population. MLSA was able to distinguish epidemiological patterns among the strains, demonstrating the potential of the technique as an epidemiological tool. Data presented here suggests the emergence of LTA caused by L. (V.) braziliensis in the human population of Santa Catarina is a recent phenomena that urgently requires the development of control methods.