Made available in DSpace on 2014-06-11T19:31:29Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2013-08-29Bitstream added on 2014-06-13T19:20:34Z : No. of bitstreams: 1 000733415.pdf: 1723077 bytes, checksum: f65fca6863099c73877f273d8beaf603 (MD5) / O objetivo deste trabalho foi avaliar o efeito da melitina natural na infecção experimental por Leishmania (L.) infantum chagasi, bem como seu efeito sobre a produção de citocinas pró e antinflamatórias e metabólitos do oxigênio e do nitrogênio. O fracionamento do veneno foi realizado por meio de cromatografia líquida de alta eficiência (HPLC-RP) usando-se colunas C8 e C18. As frações foram identificadas por sequenciamento peptídico pela química degradativa de Edman e espectrometria de massas do tipo eletrospray. A determinação da atividade anti-leishmania, contra formas promastigotas foi realizada de forma seriada partindo-se de uma concentração inicial de melitina de 100 μg/mL observando-se o valor de CE50 de 28,29 μg/mL. Foi realizado estudo de citotoxicidade em macrófagos peritoniais isolados de camundongos BALB/c, obtendo-se um valor de CE50 de 5,73 μg/mL. A viabilidade celular de ambos os ensaios foi avaliada por meio do estudo da atividade oxidativa mitocondrial (MTT). Os estudos em formas amastigotas intracelulares demostraram um valor de CE50 de 1,47 μg/mL. Quanto a produção de citocinas por celulas desafiadas com o parasita e tratados com a melitina observou-se que houve tendência de aumento para as citocinas inflamatórias IL12 e TNF-α nas concentrações utilizadas e nos respectivos períodos de tempo. A melitina não interferiu na produção de IFN-γ e TGF-β, porém observamos diminuição significativa nos níveis de IL-10, fato semelhante observado na produção de H2O2 e NO. Conclui-se que a melitina demonstrou eficácia in vitro contra a espécie Leishmania (L.) infantum chagasi, podendo ter atuado de forma direta contra o parasita intracelular e/ou por meio da modulação da resposta imune levando a ativação de macrófagos, em que estes produziram outras substâncias que não NO e H2O2, proporcionando uma redução da carga parasitária dentro do macrófago,... / The purpose of this research was to evaluate the effect of natural melittin extracted and purified from the venom of Apis mellifera over an in vitro infection with Leishmania (L.) infantum chagasi, well as their effects on the production of proinflammatory and anti-inflammatory, and metabolites of oxygen and nitrogen. The fractionation of the venom was accomplished by high-performance liquid chromatography system (RP-HPLC) using C18 and C8 columns. These fractions were determined by peptide sequence using a combination of Edman degradation sequence analysis and electrospray ionization (ESI) mass spectrometry. The ascertainment of anti-leishmania activity against promastigote forms was conducted in a seriate form, beginning with an initial melittin concentration of 100μg/mL, noting an EC50 value of 28.29 μg/mL. Cytotoxicity study was conducted in isolated peritoneal macrophages from BALB/c mice, obtaining an EC50 value of 5.73μg/mL. The cell viability of both trials was assessed by means of the study of mitochondrial oxidative activity (MTT). The studies demonstrated an EC50 value of 1.47μg/mL on intracellular amastigotes. As the cytokines production by cells challenged with parasite and treated with melittin, was observed that there was an increased tendency for inflammatory cytokines IL-12 and TNF-α at used concentrations and in the respective periods of time analyzed. The melittin did not interfered in the IFN-γ and TGF-β production, however were observed a significant decrease in the IL- 10 levels, which was similarly observed in the H2O2 and NO production. It is concluded that melittin has shown in vitro efficacy against Leishmania (L.) infantum chagasi and may have a directly behavior against the intracellular parasite and/or by the immune response modulation, leading to an macrophages activation, and after, a production of other substances than NO and H2O2, providing a reduction in ...

Orientadora : Iara Taborda de Messias Reason / Dissertaçao (mestrado) - Universidade Federal do Paraná, Setor de Ciencias da Saúde, Programa de Pós-Graduaçao em Ciencias Farmaceuticas. Defesa: Curitiba, 2005 / Inclui bibliografia / Área de concentraçao: Análises clínicas / Resumo: A Leishmania (Viannia) braziliensis, é o agente causador da leishmaniose cutânea mucosa, doença endêmica em algumas regiões do Brasil, que representa um grande problema de saúde pública para o país. A ativação do complemento na superfície de promastigotas de Leishmania é um importante fator para a infectividade do parasita em hospedeiros mamíferos, permitindo o seu ataque e invasão de macrófagos via receptores do complemento. A Lectina Ligante da Manose (MBL), possui a capacidade de ativar o complemento e também atua como uma eficiente opsonina. Neste estudo investigou-se a interação de MBL purificada com a superfície de promastigotas da L. braziliensis e a deposição de MBL, C1q, C4 e C3 na superfície do parasita após interação com soro humano normal (SHN), não imune. Foi também avaliada a influência das vias clássica, alternativa e das lectinas no efeito lítico do complemento sobre os parasitas. Observou-se que tanto a MBL do soro como o complexo MBL-MASP purificado ligam-se à superfície da L. braziliensis, através de ensaios de imunofluorescência e de inibição utilizando-se anticorpo monoclonal anti-MBL humana e microscopia confocal. A ligação da MBL demonstrou ser específica para manose presente na superfície do parasita. Foi também observado que a deposição da MBL na superfície da L. braziliensis não alterou o efeito lítico do complemento sobre os parasitas. Deposição de C1q, C4 e C3 foi observada após incubação do parasita com SHN. Ácido etilenodiamino tetraacetico (EDTA), mas não ácido etileno glicol-bis ?-aminoetileter N,N,N,N-tetraacético (EGTA) inibiram a deposição de C3 na superfície do parasita, indicando o envolvimento da via alternativa neste processo. Esses resultados indicam que a MBL pode ligar-se a L. braziliensis através de carboidrato específico na superfície do parasita e fornece evidências para um mecanismo de ativação do complemento independente de anticorpo. Palavras Chave: Leishmania (Viannia) braziliensis, MBL, complemento, lectina-ligante da manose, via clássica, via alternativa. / Abstract: Leishmania (Viannia) braziliensis (L.braziliensis) is the causative agent of mucocutaneous leishmaniasis, a disease that presents high endemicity in some regions of Brazil that represents a major public health problem for the country. Activation of complement on the surface of Leishmania promastigotes appears to be an important factor for parasite infectivity in the mammalian host, allowing their attachment and invasion of macrophages via complement receptors. Mannan-binding lectin (MBL) is a well-known complement activator and an efficient opsonine. In this study, we have investigated whether serum and purified MBL bind to live promastigotes of L. braziliensis and evaluated the deposition of MBL, C1q, C4 and C3 on the parasite surface after interaction with non-immune human serum (NHS). Using immunofluorescence assays we have observed that both serum MBL and purified MBL-MASP complex bind to the surface of L. braziliensis using a mouse monoclonal anti-human MBL antibody and confocal microscopy. MBL binding to parasite surface was shown to be specific for mannose present on the surface of parasites, by inhibition assays. It was observed that the presence of MBL doesn't modify the lytic effect of complement on the parasites. Deposition of C1q, C4 and C3 was observed after parasite incubation with NHS. Ethylenediamine tetra acetic acid (EDTA) but not ethylene glicol-bis ?-aminoethylether N, N, N, N-tetra acetic acid (EGTA) abolished C3 deposition on parasite surface, indicating the involvement of the alternative pathway in this process. Our results indicate that L. braziliensis binds MBL and that this is mediated by specific carbohydrate on the surface of parasites and provide evidences for antibody-independent mechanisms complement activation on parasite surface. Keywords: Leishmania (Viannia) braziliensis; mannose-binding lectin; complement; MBL; alternative pathway; classic pathway.

Made available in DSpace on 2014-11-10T11:09:58Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2014-06-06Bitstream added on 2014-11-10T11:57:26Z : No. of bitstreams: 1 000779449_20150106.pdf: 956149 bytes, checksum: c893e21c17da578d54f227f0f3a50bb4 (MD5) / Apesar de não ser um elemento biológico essencial, a prata metálica e seus derivados (ex. AgNO3 e complexos) têm apresentado várias aplicações medicinais como na purificação da água, tratamento de ferimentos, recobrimentos anti-infecção de instrumentos médicos, no tratamento de queimaduras pois possuem propriedades anti-microbianas potentes com baixa toxicidade em seres humanos. Sua utilização como agente antimicrobiano nos remete ao inicio da história humana, sendo muito utilizada na preservação de água potável durante anos, recurso primordial em conflitos militares. Neste trabalho foram sintetizados e caracterizados novos complexos de prata(I) do tipo Ag(NN)(tu)X, onde NN = 2,2'-bipiridina (bpy), 1,10-fenantrolina (phen), dipirido[3,2-a:2',3'-c]fenazina (dppz) e 1,10-fenantrolina-5,6-diona (phd); tu = tiouréia e X = NO3 -, CF3SO3 -, BF4 - e SO4 2-. Os complexos foram caracterizados pelas técnicas de espectroscopia na região do IV, ressonância magnética nuclear (1H), análise elementar e espectrometria de massas. As estruturas moleculares dos complexos [{Ag(bpy)(μ-tu)}2](NO3)2 (A1) e [{Ag(phd)(μ-tu)(tu)}2](CF3SO3)2 (D2) foram determinadas por difração de raios-X de monocristal, indicando um sistema binuclear com os centros de prata(I) conectados em ponte pelo atomo de enxofre da molécula de tiouréia. A atividade biológica in vitro dos compostos [Ag2(bpy)2(tu)2](NO3)2 (A1), [Ag2(phen)2(tu)2](NO3)2 (B1) e [Ag2(phen)2(tu)2](CF3SO3)2 (B2) foram estudadas frente a fungos (C. albicans, C. tropicalis e C. krusei), bactérias (S. aureus, E. coli e P. aureginosa), M. tuberculosis e formas amastigota e promastigota da L. amazonensis. Mesmo sendo um estudo bastante reduzido, tendo em vista a quantidade de microorganismos e de compostos estudados, foi possível averiguar algumas varições no comportamente biológico com a alteração tanto do ligante quelante NN quanto do contra-íon. Com resultados promissores, os estudos de... / Even Ag0, and its derivates, being not an essential element, they have presented medicinal applications such as water purification, injuries treatment, antiinfection recovery of medical instruments, burn treatment as they have powerful antimicrobial properties and low human toxicity. Silver compounds have been used as antimicrobial agent since the beginning of human history when it was added to potable water for preservation as a primary resource in military conflicts. In the present work novel silver complexes (I) of Ag(NN)(tu)X type in which X = 2,2-bipiridine (bpy), 1,10-phenantroline (phen), dipirido[3,2-a:2’,3’-c]phenazine (dppz) and 1,10- phenantroline-5,6-dione (phd); tu= thiourea and X=NO3 -, CF3SO3 -, BF4 - and SO4 2- have been synthesized and characterized. The complexes had been characterised by infrared spectroscopy, 1H nuclear magnetic resonance, elementary analysis and mass spectroscopy techniques. The crystal structures of [{Ag(bpy)(μ- tu)}2](NO3)2 (A1) and [{Ag(phd)(μ-tu)(tu)}2](CF3SO3)2 (D2) were determined by single crystal X-ray diffraction indicating a binuclear system with silver(I) centers bridgebonded by sulphur atoms of thiourea molecule. The in vitro biological activity of [Ag2(bpy)2(tu)2](NO3)2 (A1), [Ag2(phen)2(tu)2](NO3)2 (B1) e [Ag2(phen)2(tu)2](CF3SO3)2 (B2) compounds had been studied for fungi (C. albicans, C. tropicalis e C. krusei), bacteria (S. aureus, E. coli e P. aureginosa), M. tuberculosis and amastigote and promastigote forms of L. amazonensis. Although a reduced study has been performed in view of the microorganisms and compounds quantities it was possible to evaluate some changes on biological behavior by both chelant ligand NN and counterion modification. Promising results were obtained on the antileishmanial activity for B2 compound which have showed a selectivity index (SI) of 13,8-15,5 values much higher than the observed for AmpB, the standard drug (5,5-5,83).

Made available in DSpace on 2015-03-03T11:52:31Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2014-09-18Bitstream added on 2015-03-03T12:06:35Z : No. of bitstreams: 1 000800629.pdf: 2931246 bytes, checksum: 78c9ca8aaa65224fa656c71bd3ff8606 (MD5) / A leishmaniose visceral, forma clínica mais severa das leishmanioses, pode ser fatal se não tratada. Cães infectados são reservatórios potenciais da doença, sendo um diagnóstico específico e cuidadoso requerido para a identificação dos animais infectados, com o objetivo de promover um melhor controle epidemiológico e, consequentemente, controlar a transmissão da doença para o homem. Diversos trabalhos na literatura descrevem vários testes utilizados atualmente para diagnóstico da leishmaniose visceral canina (LVC), porém, apresentam variada especificidade e sensibilidade. Dessa forma, o desenvolvimento de um teste diagnóstico com maior sensibilidade e especificidade se torna importante para correta identificação de cães infectados. O presente trabalho teve como objetivo caracterizar a proteína rLc36, codificada por um gene exclusivo de Leishmania infantum, quanto ao potencial antigênico para desenvolvimento de um teste diagnóstico mais sensível e específico para LVC baseado no ensaio ELISA (Enzyme Linked Immuno Sorbent Assay). Diferentes concentrações desta proteína foram testadas por ELISA usando soros de cães infectados com LV e soros de cães não infectados. A concentração de 1,0?g/mL de rLc36 foi capaz de diferenciar os soros positivos dos soros negativos e apresentou sensibilidade de 85% e especificidade de 71%, em um teste com 95% de confiança, mostrando que a proteína rLc36 é antigênica e apresenta potencial para ser aplicada no desenvolvimento de um kit diagnóstico. A proteína rLc36 foi testada em associação com a proteína A2, o qual já foi previamente avaliado como antígeno no diagnóstico sorológico da leishmaniose, e foi possível observar aumento na sensibilidade do teste (77%), mas não na especificidade (79%). Soros de outras parasitoses foram testados frente à proteína rLc36. Foi possível observar reatividade com os soros positivos para babesiose... / Visceral leishmaniasis, the most severe clinical form of the leishmaniasis, can be fatal if untreated. Infected dogs are potential reservoirs of the disease, being a specific and careful diagnosis required for identification of the infected animals, with the aim of promoting a better epidemiological control and consequently control the transmission of the disease to humans. Several works in the literature describe various tests used for diagnosis of canine visceral leishmaniasis (CVL), however, they show varied specificity and sensitivity. In this way, the development of a diagnosis test with greater sensitivity and specificity becomes important for the correct identification of infected dogs. Thus, the development of a more sensitive and specific diagnosis test based on recombinant antigens may contribute in the correct identification of dogs truly infected and thus contribute to the more effective control of the transmission of the disease. The present work had as objective to characterize the protein rLc36, encoded by a gene unique to Leishmania infantum, for the antigenic potential for development of a more sensitive and specific test for CVL based on the ELISA (Enzyme Linked Immuno Sorbent Assay). Different protein concentrations were tested by ELISA using sera from dogs infected with LV and sera from non-infected dogs. The concentration of 1.0?g/mL of rLc36 protein was able to differentiate positive from negative sera and showed sensitivity of 85% and specificity of 71% on a test with 95% of confidence, showing that the protein rLc36 is antigenic and has potential for be applied in a new diagnosis test. The rLc36 protein was tested in association with the A2 protein, which was previously assessed as antigen in serological diagnosis of leishmaniasis, and it was possible to observe an increase in the sensitivity of the test (77%), but no increase was observed in the specificity (79%). Sera from...

Dissertação (mestrado)—Universidade de Brasília, Programa de Pós-Graduação em Ciências da Saúde, 2011 / Submitted by Alaíde Gonçalves dos Santos (alaide@unb.br) on 2012-05-18T14:30:12Z No. of bitstreams: 1 2011_RicardoFountouradeCarvalho.pdf: 1451341 bytes, checksum: 46a50f9dc3f885c09f1257ffec7d1755 (MD5) / Approved for entry into archive by Marília Freitas(marilia@bce.unb.br) on 2012-05-24T13:48:52Z (GMT) No. of bitstreams: 1 2011_RicardoFountouradeCarvalho.pdf: 1451341 bytes, checksum: 46a50f9dc3f885c09f1257ffec7d1755 (MD5) / Made available in DSpace on 2012-05-24T13:48:52Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2011_RicardoFountouradeCarvalho.pdf: 1451341 bytes, checksum: 46a50f9dc3f885c09f1257ffec7d1755 (MD5) / Os fármacos atuais para o tratamento da leishmaniose ainda não são adequadamente eficazes e nenhuma vacina eficiente está disponível. Assim, o desenvolvimento de terapias alternativas é uma prioridade para o tratamento desta infecção. O objetivo deste estudo foi comparar as atividades leishmanicidas de (1) desoxicolato de anfotericina B (D-anfoB), (2) anfotericina B encapsulada em nanocápsulas de poliláctico-co-glicólico (PLGA) contendo ácido dimercaptosuccinico (DMSA) (D-anfoB-nano) e (3) D-anfoB-nano, anfotericina B encapsulada em nanocápsulas de PLGA contendo DMSA e fluido magnético à base de maghemita (D-anfoB-nano-MG) no tratamento da leishmaniose cutânea experimental em camundongos C57BL/6. Camundongos fêmeas (N = 6/grupo) foram infectados por via intradérmica na pata direita com promastigotas de Leishmania amazonensis na fase metacíclica. Os animais infectados foram divididos em quatro grupos e tratados por via intraperitoneal: (1) PBS 1% por 10 dias consecutivos; (2) D-anfoB, 2mg/kg/dia por 10 dias (totalizando 20mg/kg/animal), (3) D-anfoB-nano e (4) DanfoB- nano-MG, 6mg/kg nos dias 1, 4 e 7 e de 2mg/kg no dia 10, totalizando 20mg/kg/animal no final do tratamento. O grupo D-anfoB-nano-MG foi submetido a um campo magnético de frequência alternada para realizar a magnetohipertermia. As avaliações da atividade leishmanicida foram realizadas por meio de medições do diâmetro da pata enquanto o número de parasitas e a viabilidade celular foram investigados por meio da diluição limitante e ensaio de MTT. D-anfoB-nano mostrou a mesma eficácia que a D-anfoB na redução do diâmetro da pata e também promoveu maior redução no número de parasitas e de viabilidade celular. Assim, estas nanopartículas mostraram ser mais eficazes do que a terapia com D-anfoB, pois com a mesma dose total, durante 10 dias e com menor freqüência de aplicações das doses, apresentaram a mesma eficácia. _______________________________________________________________________________________ ABSTRACT / Current drugs for the treatment of leishmaniasis are far from satisfactory and no effective vaccine is available. Thus, the development of alternative therapies is a priority for treatment of this infection. The aim of this study was to compare the leishmanicidal activities of desoxycholate amphotericin B (D-AMB), AMB nanoencapsulated in poly(lactic-co-glycolic acid) (PLGA) and dimercaptosuccinic acid (DMSA) nanoparticles (Nano-D-AMB) and in D-AMBcoated PLGA–DMSA containing maghemite-based magnetic fluid (Nano-DAMB- MG) for the treatment of experimental cutaneous leishmaniasis in C57BL/6 mice. Female mice (N=6/group) were infected intradermally in the right footpad with promastigotes of Leishmania amazonensis in the metacyclic phase. The infected animals were divided into four groups to be treated intraperitoneally: (1) 1% PBS for 10 consecutive days; (2) D-AMB at 2mg/kg/day for 10 days (totalizing 20mg/kg/animal); (3) Nano-D-AMB and (4) Nano-D-AMB-MG at 6mg/kg on the 1 , 4 and 7 days and at 2mg/kg on the 10 day, also totalizing 20mg/kg/animal at the end of the treatment. The Nano-D-AMB-MG group was submitted to an AC magnetic field to produce magnetohyperthermia. The evaluations were done through paw diameter measurements while the parasite number and the cell viability were investigated by limiting dilution assay. D-AMBcoated PLGA–DMSA nanoparticles showed the same efficiency as free DAMB to reduce paw diameter, and Nano-D-AMB treatment also promoted a greater reduction in parasite number and cell viability than free D-AMB. Thus, these nanoparticles appeared more effective than free D-AMB therapy to reduce the dose frequency required to achieve the same therapeutic level, favoring an extended dosing interval.

Dissertação (mestrado)—Universidade de Brasília, Instituto de Ciências Biológicas, Programa de Pós-Graduação em Zoologia, 2018. / Submitted by Raquel Viana (raquelviana@bce.unb.br) on 2018-08-21T21:41:37Z No. of bitstreams: 1 2018_FilipeCarneiroReis.pdf: 4085955 bytes, checksum: 6c302ff5b3fbd0285483d8febfe30065 (MD5) / Approved for entry into archive by Raquel Viana (raquelviana@bce.unb.br) on 2018-08-27T21:50:06Z (GMT) No. of bitstreams: 1 2018_FilipeCarneiroReis.pdf: 4085955 bytes, checksum: 6c302ff5b3fbd0285483d8febfe30065 (MD5) / Made available in DSpace on 2018-08-27T21:50:06Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2018_FilipeCarneiroReis.pdf: 4085955 bytes, checksum: 6c302ff5b3fbd0285483d8febfe30065 (MD5) Previous issue date: 2018-08-21 / Os zoológicos exercem um importante papel nos programas conservacionistas. Para que estes projetos tenham êxito, é necessário que as populações cativas sejam geneticamente manejadas, sendo necessárias translocações entre instituições para evitar depressões endo e exogâmicas. Entretanto, estas movimentações de indivíduos podem acarretar no transporte de patógenos entre instituições como também com o ambiente natural, sendo que os indivíduos participantes podem tanto carregar parasitos quanto se infectar ao longo do processo. Dentre várias doenças que devem ser consideradas, podemos destacar aquelas causadas por tripanossomatídeos como Trypanosoma cruzi, agente etiológico da doença de Chagas e Leishmania spp., agente etiológico das leishmanioses. Este estudo teve como objetivo monitorar a ocorrência de insetos vetores (triatomíneos e flebotomíneos) e investigar a infecção por tripanossomatídeos nestes insetos e nos mamíferos silvestres cativos do Zoológico de Brasília, localizado no Distrito Federal. Para tanto, foram realizadas buscas ativas bimestrais por triatomíneos entre 2016 e 2017, com auxílio de lanternas e pinças, sendo encontrada uma colônia com 17 adultos, duas ninfas e 32 ovos de Panstrongylus megistus no recinto do ouriço-caixeiro. Testes de microscopia e qPCR confirmaram a infecção por T. cruzi em 25% desses insetos. Também foram instaladas armadilhas HP e Shannon com objetivo de capturar flebotomíneos. Após esforço amostral de 7.392 horas, foram capturados 17 flebotomíneos, sendo encontrado indivíduos de Nyssomyia whitmani (principal vetor de L. brasiliensis) e Lutzomyia longipalpis (vetor de L. infantum). Foi realizado qPCR nestes vetores, mas nenhum foi positivo para Leishmania. Foi realizada coleta de sangue de 74 mamíferos silvestres da instituição de cinco diferentes ordens. Testes de qPCR com utilização dos primers TCZ3 e TCZ4 identificaram 50 espécimes positivos para T. cruzi em 24 espécies, sendo possivelmente o primeiro relato para Lagothrix cana, Ateles marginatus, Chiropotes satanas, Speothos venaticus, Lontra longicaudis, Tremarctos ornatus, Leopardus tigrinus, Leopardus colocolo e Puma yagouaroundi. Para Leishmania, qPCR com primers de kDNA identificou 15 espécies positivas, com um total de 23 indivíduos. No total, 18 indivíduos foram diagnosticados com dupla infecção, sendo positivos em ambos os exames. Esses resultados indicam ocorrência de transmissão vetorial de tripanossomatídeos no Zoológico de Brasília. Uma nova colônia de triatomíneos detectada no local indica que a infestação de recintos é um evento recorrente e a presença de espécimes infectados indica que o risco de transmissão de T. cruzi para os mamíferos cativos persiste. Os resultados ampliam a lista de espécies de primatas infectados por T. cruzi no Zoológico de Brasília e ainda mostram outros grupos de mamíferos infectados. O registro de espécies de flebotomíneos, entre elas Lu. longipalpis e Ny. whitmani, potenciais vetoras de L. infantum e L. braziliensis, e de mamíferos infectados nascidos no local, indica que há transmissão autóctone de Leishmania no Zoológico de Brasília. Recomenda-se a aplicação de medidas preventivas com objetivo de evitar novas infecções por T. cruzi e Leishmania. As futuras movimentações de animais silvestres do Zoológico de Brasília devem levar em consideração a presença desses tripanossomatídeos, evitando a disseminação destas zoonoses. / Zoos play a key role in conservation projects. For these projects to succeed, it is necessary the genetic management of the captive populations and the translocations between institutions to avoid both endo and exogamous depressions. However, these transits of individuals can lead to a transport of pathogens between institutions and the natural environment, and the individuals involved can both carry parasites or become infected throughout the process. Among several diseases that must be considered, we can highlight those caused by trypanosomatids like Trypanosoma cruzi, aethiological agent of Chagas disease and Leishmania, aethiological agent of leishmaniasis. The objective of this study was to monitor the occurrence of insect vectors (triatomines and sandflies) and to investigate trypanosomatid infection in these insects and in captive wild mammals of the Brasilia Zoo, located in Distrito Federal, Brasil. A bimonthly active search for triatomines was carried out using lanterns and tweezers between 2016 and 2017. A colony with 17 adults, 2 nymphs and 32 Panstrongylus megistus eggs was found in the hedgehog enclosure. Microscopy and qPCR tests confirmed T. cruzi infection in 25% of these insects. Twenty-two HP and two Shannon traps were installed to capture sandflies. After sampling effort of 7,392 hours, 17 sandflies were captured, and individuals of Nyssomyia whitmani (main vector of L. brasiliensis) and Lutzomyia longipalpis (vector of L. infantum) were found. qPCR was performed, but none were positive for Leishmania. Blood samples were collected from 74 wild mammals of six different orders from the institution. qPCR testing with use of primers TCZ4 and TCZ3 identified 50 specimens positive for T. cruzi in 24 species, possibly being the first report in Lagothrix cana, Ateles marginatus, Chiropotes satanas, Speothos venaticus, Lontra longicaudis, Tremarctos ornatus, Leopardus tigrinus, Leopardus colocolo e Puma yagouaroundi. For Leishmania, qPCR with kDNA primers identified 15 positive species, being a total of 23 individuals. In total, 18 individuals were diagnosed with dual infection, being positive in both examinations. These results indicate the occurrence of vector transmission of trypanosomatids in the Brasília Zoo. The new colony of triatomines detected at the site indicates that infestation of enclosures is a recurrent event and the presence of infected specimens indicates that the risk of T. cruzi transmission to captive mammals persists. The results broaden the list of primate species infected by T. cruzi at the Brasilia Zoo and show other groups of infected mammals. The record of sandflies species, among them Lu. longipalpis and Ny. whitmani, that are the potential vectors of L. infantum and L. braziliensis, and infected local mammals with Leishmania, indicate that transmission of Leishmania was autochthonous at the Brasilia Zoo. It is recommended the application of preventive measures to avoid new infections by T. cruzi and Leishmania. The future translocations of wild animals of the Brasilia Zoo should consider the movement of these trypanosomatids, avoiding the introduction of the zoonoses.

Made available in DSpace on 2014-06-11T19:27:18Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2010-08-13Bitstream added on 2014-06-13T19:35:13Z : No. of bitstreams: 1 souza_f_me_araca.pdf: 170217 bytes, checksum: 6f885ef38991b7f73f26fde178a12e06 (MD5) / Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de São Paulo (FAPESP) / Os cães são o principal reservatório doméstico de Leishmania. (L.) chagasi. No hospedeiro vertebrado, incluindo o homem, o parasita pode causar leishmaniose visceral, transmitida aos humanos. As células T regulatórias (Treg) estão envolvidas na indução de supressão de mecanismos efetores relacionados à imunidade celular. Para investigar a possível implicação das células Treg durante a infecção por Leishmania spp., a presença de Treg no baço e no sangue periférico foi avaliada em cães naturalmente infectados e com sinais clínicos compatíveis com a doença. Quinze cães adultos provenientes do Centro de Controle de Zoonoses da Prefeitura Municipal de Araçatuba - SP, Brasil, com reação sorológica positiva para antígenos de Leishmania (L.) chagasi determinada por ELISA indireto e teste rápido rK39 (Kalazar Detect TM Rapid Test, InBios Inc-Seattle, WA-USA). Cinco cães saudáveis, provenientes de área não endêmica foram incluídos no estudo. As células T regulatórias foram quantificadas em amostras de baço e em células mononucleares do sangue periférico utilizando-se anticorpos monoclonais e citometria de fluxo. No baço, menor número de células Treg foi observado em cães infectados do que nos controles (p<0,05), enquanto que nenhuma diferença foi observada nas células mononucleares de sangue periférico. Esses resultados sugerem que as células Treg estão envolvidas na infecção por Leishmania spp. e que podem ter um papel na persistência do parasita e o estabelecimento da infecção crônica / Dogs are the main domestic reservoirs of L. (L.) chagasi. Once in the vertebrate host, the parasite may cause visceral leishmaniasis, which can also be transmitted to humans. Regulatory T cells (Treg) have been shown to be involved in the direct induction of immunosupression of effector cellular immune response. To investigate the possible involvement of T reg cells during Leishmania infection, the presence of Treg cells from the spleen and peripheral blood mononuclear cells (PBMC) of dogs naturally infected with L. (L.) chagasi, and showing clinical signs, was quantified. A total of 15 adult dogs from the Center for Zoonosis Control of Araçatuba - SP, Brazil, positive for Leishmania (L.) chagasi by indirect ELISA and TM rapid test rK39 (Kalazar Detect TM Rapid Test, InBios Inc-Seattleadult healthy dogs from non endemic area were included in the sspleen and PBMC were used for quantification of Treg by flow cytometmonoclonal antibodies. In spleen, Treg levels in infected dogs control group (p<0.05); in PBMC, no differences were observed betgroups. These results suggest that Treg population is involved in infection and may play a role in promoting parasite persistence achronic infection

Made available in DSpace on 2014-06-11T19:27:59Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2012-06-05Bitstream added on 2014-06-13T20:36:42Z : No. of bitstreams: 1 jacintho_app_me_jabo.pdf: 1171496 bytes, checksum: ca4de86d788a08d2a03efb6f93a4a52b (MD5) / Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de São Paulo (FAPESP) / Os cães infectados pelo protozoário Leishmania (Leishmania) chagasi podem ou não apresentar sinais clínicos dessa zoonose e são a principal fonte de infecção para o homem. A pele é o primeiro órgão infectado pelo parasito na LVC. As enzimas metaloproteinases da matriz (MMPs) atuam na degradação da matriz extracelular (MEC) e na modulação da resposta inflamatória, frente a vários tipos de injúrias. O objetivo deste estudo foi avaliar a expressão de MMP-2 e MMP-9, por meio da técnica de imuno-histoquímica e zimografia na pele de cães naturalmente acometidos por LVC e comparar estes resultados com a imunodetecção das citocinas TNF- e TGF- e do protozoário Leishmania, com as possíveis alterações da matriz extracelular dermal. A alteração da composição de fibras colágenas da derme foi avaliada pela coloração PicroSirius. O método foi usado para diferenciar fibras colágenas dos tipos I e III, nas regiões do focinho, orelha e abdômen. A carga parasitária, intensidade de inflamação e a produção de MMP 2 e 9 foram maiores nas regiões cutâneas da orelha e focinho. Os macrófagos, linfócitos e plasmócitos predominaram no infiltrado inflamatório da derme superficial, formando granulomas, associados a degradação do colágeno maduro (tipo I) e a discreta deposição de colágeno jovem (tipo III), com maior intensidade nos cães com elevada carga parasitária cutânea. O TGF-β foi detectado nos três grupos de cães infectados (assintomático, oligossintomático e sintomático), sem diferenças significativas entre eles. O TNF-α não foi detectado na maioria dos animais infectados e no grupo controle. Conclui-se que quanto maior a carga parasitária e a intensidade de inflamação na pele, maior a degradação do colágeno maduro, produção de MMPs 2 e 9 e produção de TGF-β. A MMP-9 ativa poderia ser utilizada... / Dogs infected by Leishmania (Leishmania) chagasi may or may not show clinical signs of the zoonosis and they are the main source of infection for man. The skin is the first organ infected by the parasite in the LVC. The enzyme matrix metalloproteinases (MMPs) act on the degradation of extracellular matrix (ECM) and in the inflammatory response modulation against many kinds of injuries. The aim of this study was to evaluate the expression of MMP-2 and MMP-9 by immuno-histochemistry and zymography in the skin of dogs naturally affected by LVC and the immunodetection of TNF- and TGF- and of Leishmania and compare these results with the possible alterations of dermal extracellular matrix. The method was used to differentiate collagen fibers in the dermis was evaluated by Picrosirius red staining to differentiate collagen types I and III, in regions of the nose, ear and abdomen. The parasite load, intensity of inflammation, increased production of MMP 2 and 9 were higher in regions of the ear and muzzle. Macrophages, lymphocytes and plasma cells predominated in the inflammatory infiltrate of the superficial dermis, forming granulomas, associated with degradation of mature collagen (type I) and the discrete deposition of the young collagen (type III), with greater intensity in dogs with high parasite load skin. The TGF-β was detected in all groups of infected dogs (asymptomatic, oligosymptomatic and symptomatic), no significant differences among them. The TNF-α was not detected in most infected animals and the control group. It follows that the greater is the intensity of parasitic load and inflammation of the skin, the greater is the degradation of mature collagen, the production of MMPs and 2 and 9, production of TGF-β. Active MMP-9 could be used as a marker of inflammation in infected dogs. This profile of the... (Complete abstract click electronic access below)

Orientadora: Dra. Guilhermina Rodrigues Noleto / Dissertação (mestrado) - Universidade Federal do Paraná, Setor de Ciências Biológicas, Programa de Pós-Graduação em Bioquímica. Defesa: Curitiba, 26/02/2010 / Bibliografia: fls.71-79 / Resumo: O tratamento atual para Leishmanioses é feito principalmente com antimoniais pentavalentes há mais de 60 anos. Além de resistência do parasita, estes medicamentos apresentam alta toxicidade. Frente à capacidade de polissacarideos de ativar macrófagos para executar atividade microbicida, o que inclui a atividade leishmanicida, esta foi avaliada in vitro para a arabinogalactana neutra ARAGAL, obtido de Anandethera columbrina, e para polissacarídeos sulfatados obtidos de macroalgas marinhas, Go3 (heteroraminana sulfatada), Iota-Gy (galactana kappa-iota-nu-carragenana) e EHW-I (galactana iota-nu-carragenana). Os compostos Go3, Iota-Gy e EHW-I inibiram a produção de ânion superóxido na ausência e presença de PMA 1 g/mL e apresentaram atividade captadora da mesma espécie reativa de forma dose dependente, chegando, na concentração 10 g/mL a 33% de captação com o Go3, 44% com o Iota-Gy e 55% com o EHW-I. Apresentaram ainda aumento da produção de óxido nítrico alcançando a 10 g/mL aproximadamente 110% de ativação em relação ao controle negativo para Go3, 71% para Iota-Gy e 81% para EHW-I. Houve diminuição da atividade fagocítica para Go3 e EHW-I, Iota Gy não exibiu efeito para esta atividade. A morfologia foi bastante alterada por estes compostos. ARAGAL, Go3, Iota-Gy e EHWI foram então avaliados quanto a atividade leishmanicida em macrófagos peritoneais de camundongos infectados com Leishmania (Leishmania) amazonensis. O polissacarídeo ARAGAL apresentou atividade leishmanicida nas concentrações 10, 25 e 50 g/mL, inibindo 88% do crescimento da Leishmania (Leishmania) amazonensis na concentração mais baixa. O polissacarídeo Go3 apresentou atividade a partir da concentração 5 g/mL chegando a 55% de inibição em 10 g/mL. Iota-Gy iniciou sua atividade já em 2,5 g/mL e atingiu 50% de inibição em 10 g/mL. EHW-I exibiu o efeito leishmanicida mais intenso em todas as concentrações, atingindo 98% de inibição em 10 g/mL. Os resultados obtidos neste trabalho colocam as moléculas testadas em evidência para investigações futuras visando o desenvolvimento de novos agentes terapêuticos contra leishmanioses. / Abstract: The current treatment against Leishmaniasis is mainly done using pentavalent antimonials for over 60 years. Beyond parasits resistance, this medications are highly toxic. Faced with the capacity of olysaccharides activating macrophages to stimulate the microbicidal activity, that includes the leishmanicidal activity, it was evaluated in vitro to the neutral arabinogalactan ARAGAL, obtained from Anandethera columbrina, and to sulfated polysaccharides obtainded from seaweeds, Go3 (sulfated heterorhamnan), Iota-Gy (galactan kappa-iota-nu-carrageenan) and EHW-I (galactan iotanu- carrageenan). The compounds Go3, Iota-Gy and EHW-I inhibited the superoxide anion production in the absence or presence of PMA 1 g/mL and presented a dose dependent scavenging activity to this reactive oxigen species, reaching 33% of scavenging activity to Go3, 44% to Iota-Gy and 55% to EHW-I at the higher concentration, 10 g/mL. They have also increased production of nitric oxide reaching 110% of activation compared to control to Go3, 71% to Iota-Gy and 71% to EHW-I. There was reduction in phagocytic activity for Go3 and EHW-I, Iota-Gy didn't show any effect in this activity. The morphology was considerably changed to these compouds. ARAGAL, Go3, Iota-Gy and EHW-I were than tested for leishmanicidal activity in murine peritoneal macrophages infected with Leishmania (Leishmania) amazonensis. ARAGAL showed leishmanicidal activity at concentrations 10, 25 and 50 g/mL, reaching 88% inhibition of Leishmania (Leishmania) amazonensis growth at the lower concentration. Go3 presented activity at 5 and 10 g/mL up to 55% inhibition. Iota-Gy started its activity in 2.5 g/mL and reached 50% inhibition at 10 g/mL. EHW-I presented the most intense leishmanicidal effect in all concentrations, reaching 98% inhibition at 10 g/mL. The results of this study puts the tested molecules in evidence for future investigations in order to develop new therapeutic agents against leishmaniasis.

Made available in DSpace on 2014-06-11T19:23:09Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2012-12-06Bitstream added on 2014-06-13T20:29:52Z : No. of bitstreams: 1 silva_klo_me_araca.pdf: 342089 bytes, checksum: 33106984cbf6552cd3c58d58104a5a0b (MD5) / A Leishmaniose Visceral (LV) é uma antropozoonose considerada uma das mais importantes zoonoses parasitárias emergentes em expansão por todo o mundo. A transmissão de Leishmania (L.) chagasi, se dá pela picada de fêmeas de insetos dípteros, denominados flebotomíneos, conhecidos popularmente como mosquitos “palha” ou “birigui”. A leishmaniose visceral canina (LVC) é uma doença crônica, fatal, sistêmica e infecciosa. No Brasil é causada pelo protozoário L. chagasi. Cães são os maiores hospedeiros e reservatórios do parasita L. infantum e L. chagasi com um papel central no ciclo da transmissão do parasita para os humanos, com um grande contingente de animais assintomáticos. A infecção em cães é clinicamente semelhante à infecção humana e a apoptose tem sido associada à redução de linfócitos T e células mononucleares de sangue periférico e à falha na imunidade, pois ocorre diminuição na secreção do IFN- . A desregulação da apoptose tem sido associada a várias doenças e as principais moléculas implicadas são o sistema FAS/FASL e o TRAIL, que envolvem reações imunológicas e citotoxicidade mediada pelas células T. O entendimento de tal mecanismo em cães infectados pode permitir futuras intervenções terapêuticas para reduzir a depleção dos linfócitos. Para investigar a apoptose nas células CD4+ e CD8+ e a expressão e função dos principais receptores envolvidos no processo apoptótico, FAS/FASL e TRAIL foram avaliados nas células do sangue periférico e baço de 38 cães sintomáticos com leishmaniose visceral moderada e de 25 cães saudáveis. A apoptose das células CD4+ e CD8 + do sangue e baço foi maior nos cães infectados que nos saudáveis. Nas células CD4+ do sangue e baço dos cães infectados a expressão de FAS e FASL foi menor do que a dos saudáveis, nas células CD8+ do sangue e do baço dos cães... / Visceral leishmaniasis (VL) is a anthropozoonosis considered one of the most important emerging parasitic zoonoses expanding worldwide. The transmission of Leishmania (L.) chagasi, occurs through the bite of female insects flies, called sandflies, mosquitoes popularly known as straw or birigui. Canine visceral leishmaniasis (CVL) is a chronic, fatal, systemic and infectious. In Brazil it is caused by the protozoan L. chagasi. Dogs are the greatest hosts and reservoirs of the parasite L. infantum and L. chagasi with a central role in the transmission cycle of the parasite to humans, with a large contingent of asymptomatic animals. The infection in dogs is clinically similar to human infection and apoptosis has been associated with reduction of T lymphocytes and peripheral blood mononuclear cells and failure to immunity, because there is a decrease in the secretion of IFN- . Dysregulation of apoptosis has been associated with various diseases and key molecules involved are the FAS/FASL and TRAIL, which involve immune reactions and cell-mediated cytotoxicity T. The understanding of this mechanism in infected dogs may allow future therapeutic interventions to reduce the depletion of lymphocytes. To investigate apoptosis in CD4+ and CD8+ lymphocytes and the expression and function of major receptors involved in apoptotic FAS/FASL and TRAIL were assessed in peripheral blood cells and spleen of 38 dogs symptomatic patients with visceral leishmaniasis moderate and 25 healthy dogs. Apoptosis of CD4+ and CD8+ spleen and blood was... (Complete abstract click electronic access below)