As concepções de moduladores da dinâmica dos microtúbulos, que levam ao bloqueio do ciclo celular, e de bloqueadores de canais de cálcio tipo L (Cav), tais como o 1,4-di-hidropiridinas e análogos, que diminuem a resistência do organismo humano aos tratamentos quimioterápicos através da inibição da proteína de transmembrana P-gp, são estratégias importantes tanto para terapias antitumorais quanto para leishmanicida. Esta abordagem tem mostrado resultados interessantes na diminuição da resistência à quimioterapia em câncer chamada de MDR (do inglês Multi Drug Resistence), além de também serem uma estratégia importante para controlar a fase inicial da leishmaniose. Diante desse contexto, e baseado no estudo de Ueki 2013 e colaboradores que, a partir de estudos anteriores, os quais relatam a superexpressão das enzimas estona deacetilase (HDAC) e catepsina L (CTSL) em células tumorais, propuseram um pró-fármaco seletivo, planejado a partir de um espaçador de lisina acetilada, que garante a liberação do fármaco seletivamente nas células tumorais, trabalhamos no desenvolvimento de uma nova proposta de pró-fármaco trifuncional. Nossa proposta foi desenvolvida a partir de estudos de triagem virtual, baseados em ligantes e em estrutura, predição das propriedades farmacocinéticas e toxicológicas (ADME/Tox) e também técnicas de bioinformática para a construção de um modelo de canal de cálcio, devido à inexistência de estruturas, do mesmo, que estivessem depositadas no banco de dados de proteínas PDB (Protein Data Bank). Paralelamente, nosso grupo de síntese colaborador sintetizou, através de técnicas de \"Click Chemistry\" e reações de Mitsunobu multicomponentes, uma biblioteca de novos híbridos trifuncionais, os quais, após estudos de atividade biológica, foram avaliados (in silico) frente à estrutura da tubulina, e os compostos mais promissores desta biblioteca serviram de base para novos estudos de triagem virtual. Para a obtenção dos nossos hits, executamos 4 estratégias de triagem virtual, separadas em 2 tarefas. Ao final, selecionarmos um total 59 hits, dos quais, 9 hits apresentam promissoras atividades bloqueadoras do canal de cálcio e 65 hits apresentam promissoras atividades moduladoras da tubulina. Estes hits seguem em estágio de compra e ensaios in vitro e após comprovada a eficácia dos mesmos, estes futuramente farão parte de uma nova proposta de pró-farmaco trifuncional. / The concepts of modulating microtubule dynamics, and calcium channel L-types (CAV) blockers are important strategies for anticancer and antileishmanial therapies. Microtubule modulators that blocks the cell cycle and the calcium channel blockers, such as, 1,4-dihydropyridines and analogues, reduce the resistance of the human body to chemotherapeutic treatments by inhibiting transmembrane P-gp protein. This approach has shown interesting results in reduced resistance to chemotherapy in cancer called MDR (Multi Drug Resistance), and an important strategy for controlling the early stage of leishmaniasis. In this context, we work to develop a new proposal for trifunctional prodrug. We have based on the study of Ueki 2013 and collaborators, which, from earlier studies with reported overexpression of both deacetylase estona enzymes (HDACs) and cathepsin L (CTSL) in tumor cells, proposed a selective prodrug. We considering an acetylated lysine link/spacer, which ensures the release of the drug selectively in tumor cells, have now designed this selective prodrug. Our proposal was developed from virtual screening studies, based on ligands and structure, prediction of pharmacokinetic and toxicological properties (ADME / Tox) and also bioinformatics techniques for the construction of a calcium channel model, due to the inexistence of Structures of the same that were deposited in the database of proteins PDB (Protein Data Bank). At the same time, our collaborating synthesis group synthesized, through Click Chemistry techniques and Mitsunobu multicomponent reactions, a library of new trifunctional hybrids, which, after studies of biological activity, were evaluated (in silico) against the structure of tubulin , And the most promising compounds from this library served as the basis for further virtual screening studies. To obtain our hits, we performed 4 virtual screening strategies, separated into 2 tasks. In the end, we selected 59 hits, of which 9 hits show promising calcium channel blocking activities and 65 hits show promising tubulin modulating activities. These hits follow in vitro purchase and testing, and after proven effectiveness, they will be part of a new tri prodrug proposal.

Submitted by Cássio da Cruz Nogueira (cassionogueirakk@gmail.com) on 2017-06-26T15:13:43Z No. of bitstreams: 2 license_rdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5) Dissertacao_EstudosFarmacognóticosFitoquímicos.pdf: 2916197 bytes, checksum: 4618aef8c86657faa5e5e0790bb8dbab (MD5) / Approved for entry into archive by Irvana Coutinho (irvana@ufpa.br) on 2017-06-28T15:10:09Z (GMT) No. of bitstreams: 2 license_rdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5) Dissertacao_EstudosFarmacognóticosFitoquímicos.pdf: 2916197 bytes, checksum: 4618aef8c86657faa5e5e0790bb8dbab (MD5) / Made available in DSpace on 2017-06-28T15:10:09Z (GMT). No. of bitstreams: 2 license_rdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5) Dissertacao_EstudosFarmacognóticosFitoquímicos.pdf: 2916197 bytes, checksum: 4618aef8c86657faa5e5e0790bb8dbab (MD5) Previous issue date: 2016-05-12 / No presente trabalho, a Annona glabra foi submetida a estudos farmacognósticos, fitoquímicos e biológicos (atividade leishmanicida e antimicrobiana). Nos estudos farmacognósticos, utilizou-se os métodos descritos na Farmacopéia Brasileira V ed. (2010). O extrato etanólico (EE) foi obtido através de maceração descontínua do pó das cascas com etanol. Este foi submetido a fracionamento por partição líquido-líquido com hexano e metanol aquoso 10%, gerando-se as frações hexanica (FH) e metanólica (FM). A FM foi refracionada em coluna de Sephadex originando-se 46 frações, analisadas em CCD e reveladas com ácido Sulfúrico, Dragendorff e ultravioleta (360 nm) sendo reunidas em 5 grupos conforme o perfil cromatográfico. O Grupo 3 foi purificado em coluna cromatográfica em escala preparativa originando a amostra G3-1. O EE, FM, FH, Grupo 2 e G3-1 foram analisadas em CLAE-DAD. A amostra G3-1 foi submetida a análise em espectroscopia de massas e ressonância magnética nuclear (RMN). Na avaliação da atividade antimicrobiana utilizou-se os métodos da difusão em ágar (Escherichia coli, Staphylococcus aureus e Pseudomonas aeruginosa) e de microdiluição (CIM). O EE e suas frações foram submetidos ao ensaio da atividade leishmanicida (Leishmania amazonensis). O pó foi classificado como pó grosso e de baixa densidade com teor de cinzas e umidade estando dentro dos parâmetros estabelecidos pela Farmacopéia Brasileira. Em CLAE-DAD, os principais picos do EE e suas frações apresentaram no espectro de UV absorbâncias com ʎ entre 240 nm a 280 nm e ʎ entre 300 nm a 400 nm sugestivos respectivamente da banda II (anel A) e banda I (anel B) de flavonóides. A estrutura química de G3-1 foi identificada como sendo o flavonóide Rutina. No teste de difusão em ágar observou-se a formação de halos do EE e FM somente nas placas de Staphylococcus aureus. No ensaio de microdiluição verificou-se que o EE e a FM apresentaram CIM>1000 μg/mL, sendo assim, consideradas inativas. No ensaio antileishmania, o EE apresentou CI50>200 μg/mL. A FM e FH também apresentaram CI50>200 μg/mL, no entanto, inibiram o crescimento das promastigotas respectivamente em 20% e 33,7%. As subtrações Grupo 2 e G3-1 apresentaram CI50>200 μg/mL, porém, na concentração de 200 μg/mL inibiram o crescimento parasitário em aproximadamente 45%. O EE, suas frações e subfrações foram inativas frente as amastigotas de L. amazonensis, no entanto, a FH nas concentrações de 250 e 125 μg/mL inibiu a infecção em 39,1% e 18,7%. Em síntese, o EE e suas frações mostraram-se inativas nos ensaios antimicrobiano e leishmanicida, porém o fracionamento contribuiu para o aumento da atividade sugerindo que substâncias ativas devam estar em baixos teores no extrato e suas frações. / In this study, the Annona glabra underwent pharmacognostic, phytochemicals and biological studies (leishmanicide and antimicrobial activity). In pharmacognostic studies, we used the methods described in Brazilian Pharmacopoeia V ed. (2010). The ethanolic extract (EE) was obtained by maceration of the powder batch of shells with ethanol. The extract was fractionated by liquid-liquid partition with hexane and 10% aqueous methanol resulting in hexane (HF), and methanol (MF) fractions. The MF was submitted to Sephadex column. This procedure resulted in 46 fractions that were analyzed in thin layer chromatography and revealed with sulfuric acid, Dragendorff, and ultraviolet (360 nm) being assembled into 5 groups according to their chromatographic profiles. Group 3 was purified by column chromatography on a preparative scale yielding the G3-1 sample. EE, MF, HF, Group 2 and G3-1 were analyzed by HPLC-DAD. The G3-1 sample was analysed by mass spectrometry and nuclear magnetic resonance (NMR). To evaluate the antimicrobial activity, methods of agar diffusion (Escherichia coli, Staphylococcus aureus and Pseudomonas aeruginosa) and microdilution (MIC) were used. The EE and its fractions were subjected to leishmanicide activity test (Leishmania amazonensis). The powder was classified as coarse and low-density, with ash and moisture contents within the parameters established by the Brazilian Pharmacopoeia. In HPLC-DAD, the main peaks of EE and its fractions were presented in UV absorption spectrum of 240 nm to 280 nm, and 300 nm to 400 nm suggestive respectively Band II (Ring A), and band I (ring B ) of flavonoid. The G3-1 chemical structure was identified as flavonoid rutin. In the agar diffusion test, we observed the formation of halos in EE and MF only in Staphylococcus aureus plates. In the microdilution assay, the EE and FM showed MIC> 1000 mg / mL, considered inactive. In antileishman test, the EE showed IC50> 200 / ml. The MF and HF also showed IC50> 200 / ml; however, they inhibited the growth of promastigotes respectively in 20% and 33.7%. The subtractions and G3-1 Group 2 showed IC50> 200 / ml, but the concentration of 200 / ml inhibited the parasite growth by approximately 45%. The EE, fractions, and subfractions were inactive against L. amazonensis amastigotes. However, the HF concentrations of 250 and 125 g / ml inhibited infection in 39.1% and 18.7%. In short, EE and its fractions were shown to be inactive in the antimicrobial and leishmanicide trials, but fractionation contributed to increase activity suggesting that active substances must be at low levels in extract and its fractions.

Data de aprova??o ausente. / Disponibiliza??o do conte?do parcial, conforme Termo de Autoriza??o no trabalho. / Submitted by Jos? Henrique Henrique (jose.neves@ufvjm.edu.br) on 2016-12-20T11:25:18Z No. of bitstreams: 2 license_rdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5) fabricio_oliveira_parcial.pdf: 460996 bytes, checksum: 830d7a19829ad0928872ba9504ea142a (MD5) / Approved for entry into archive by Rodrigo Martins Cruz (rodrigo.cruz@ufvjm.edu.br) on 2017-01-10T12:15:20Z (GMT) No. of bitstreams: 2 license_rdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5) fabricio_oliveira_parcial.pdf: 460996 bytes, checksum: 830d7a19829ad0928872ba9504ea142a (MD5) / Made available in DSpace on 2017-01-10T12:15:20Z (GMT). No. of bitstreams: 2 license_rdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5) fabricio_oliveira_parcial.pdf: 460996 bytes, checksum: 830d7a19829ad0928872ba9504ea142a (MD5) Previous issue date: 2016 / O uso de plantas com fins terap?uticos ? uma das mais antigas formas de pr?tica medicinal da humanidade. O Brasil hospeda aproximadamente 20% de toda biodiversidade mundial e concentra o maior n?mero de esp?cies end?micas do mundo. As plantas medicinais representam uma promissora fonte de novas drogas, sendo que a regi?o do Cerrado se destaca neste contexto devido a sua vasta biodiversidade. Apesar de sua import?ncia, as plantas end?micas desse bioma s?o ainda pouco exploradas. Assim, o pa?s necessita de maiores investimentos em pesquisas com plantas medicinais, especialmente quando se tratam de doen?as cujo arsenal terap?utico ? limitado e/ou apresenta restri??es como efic?cia e efeitos colaterais, como ? o caso do c?ncer, doen?as negligenciadas como a Doen?a de Chagas e as Leishmanioses e, doen?as infecciosas causadas por bact?rias. Desta forma, este estudo prop?e uma triagem de atividades biol?gicas de extratos etan?licos de 20 plantas do Cerrado. Foram avaliados 24 extratos etan?licos das plantas da regi?o de cerrado de Diamantina, Vale do Jequitinhonha, Minas Gerais: Agarista oleifolia (partes a?reas), Ageratum fastigiatum (partes a?reas), Byrsonima dealbata (partes a?reas), Byrsonima lancifolia (folhas e caule), Byrsonima verbascifolia (partes a?reas), Croton antisyphiliticus (caule), Gomphrena arborescens (partes a?reas), Gomphrena scapigera (partes a?reas), Gomphrena vaga (caule), Gomphrena virgata (ra?zes), Kielmeyera lathrophyton (folhas e caule), Kielmeyera rubriflora (partes a?reas), Lafoensia pacari (folhas e caule), Myrsine emarginella (folhas), Norantea adamantium (partes a?reas), Qualea dichotoma (partes a?reas), Salvertia convallariodora (folhas e caule), Schefflera macrocarpa (folhas), Vochysia elliptica (partes a?reas) e Zeyheria Montana (partes a?reas). Estes foram obtidos por meio de macera??o e secagem por rotaevapora??o. A toxicidade para c?lulas normais de mam?feros foi avaliada utilizando fibroblastos de camundongo, linhagem L929. A avalia??o das atividades antitripanossomat?deos foi realizada sobre formas promastigotas das cepas BH46 de Leishmania (leishmania) infantum, M2269 de Leishmania (leishmania) amazonensis e contra formas epimastigotas das cepas Y e Colombiana de Trypanosoma cruzi. A atividade antitumoral foi realizada sobre a linhagem MDA-MB-231. A avalia??o da toxicidade sobre as linhagens celulares foi realizada por meio da t?cnica colorim?trica de MTT. A atividade antibacteriana foi avaliada sobre as esp?cies Staphylococcus aureus, Salmonella typhimurium, Escherichia coli, Klebsiella oxytoca, Proteus mirabilis, Streptococcus agalactiae, Listeria monocytogenes e Pseudomonas aeruginosa por meio da t?cnica da resazurina. Na avalia??o in vitro da atividade biol?gica dos extratos etan?licos foi verificado que todos os extratos demonstraram alguma toxicidade sobre c?lulas normais de mam?feros da linhagem L929. Entre os extratos avaliados 22 apresentaram atividade antitumoral, sendo que o mais ativo foi o de Ageratum fastigiatum (partes a?reas). Atividade tripanocida foi verificada para sete extratos sobre a cepa Y e oito sobre a cepa Colombiana, sendo que dentre estes os extratos das partes a?reas de Ageratum fastigiatum e das partes a?reas Zeyheria montana foram os mais ativos sobre a cepa Colombiana de T. cruzi. Atividade leishmanicida foi verificada para 11 extratos sobre a cepa M2269 de Leishmania amazonensis e tr?s sobre a cepa BH46 de Leishmania infantum, sendo que o mais ativo foi o extrato das partes a?reas de Ageratum fastigiatum. Atividade antibacteriana foi identificada para 11 extratos, os mais ativos foram o de Ageratum fastigiatum (partes a?reas) e Byrsonima lancifolia (folhas), sendo que a bact?ria mais suscept?vel, por ser inibida pelo maior n?mero de extratos avaliados, foi S. aureus (9 extratos) e a menos suscept?vel foi S. agalactiae (1 extrato). A partir dos resultados obtidos, sugere-se que os extratos etan?licos das partes a?reas de Ageratum fastigiatum e Zeyheria montana s?o os mais promissores para prosseguimento dos estudos, representando uma potencial fonte de subst?ncias com atividade antitripanossomat?deo e antitumoral, e os extratos de Ageratum fastigiatum (partes a?reas) e Byrsonima lancifolia (folhas) como antibacteriana, sendo necess?ria a realiza??o do fracionamento destes extratos a fim de identificar as subst?ncias respons?veis por tais atividades e pela citoxicidade. / Disserta??o (Mestrado) ? Programa de P?s-gradua??o em Ci?ncias Farmac?uticas, Universidade Federal dos Vales do Jequitinhonha e Mucuri, [2016]. / The use of plants for therapeutic purposes is one of the oldest forms from medical practice to mankind. The Brazil accommodate approximately 20% of all global biodiversity and concentrate the largest number of endemic species in the world. Medicinal plants represent a promising source of new drugs, where the Cerrado region stands out for its large biodiversity. Even tought the importance, the endemic plants of this region are yet little explored. So the country needs more investment in research with medicinal plants, especially in situations where the therapeutic arsenal is limited and/or shows restriction like efficacy and side effects, such as cancer, neglected diseases (leishmaniosis and Chagas' disease) and inflammation diseases caused by bacterias. Therefore, the study consider a screening test of 24 ethanol extracts from 20 plants of Cerrado from Diamantina, Valley Jequitinhonha, Minas Gerais, state about its biological activity: Agarista oleifolia (aerial parts), Ageratum fastigiatum (aerial parts), Byrsonima dealbata (aerial parts), Byrsonima lancifolia (leaves and stems), Byrsonima verbascifolia (aerial parts), Croton antisyphiliticus (stems), Gomphrena arborescens (aerial parts), Gomphrena scapigera (aerial parts), Gomphrena vaga (stems), Gomphrena virgata (roots), Kielmeyera lathrophyton (leaves and stems), Kielmeyera rubriflora (aerial parts), Lafoensia pacari (leaves and stems), Myrsine emarginella (leaves), Norantea adamantium (aerial parts), Qualea dichotoma (aerial parts), Salvertia convallariodora (leaves and stems), Schefflera macrocarpa (leaves), Vochysia elliptica (aerial parts) e Zeyheria Montana (aerial parts). They were obtained by maceration and dry out using a rotary evaporator. The toxicity from normal mammalian cells was assessed using mouse fibroblasts (L929 lineage). The evaluation of anti trypanosomatid activities was performed on promastigotes of Leishmania strains BH46 (Leishmania) infantum, Leishmania M2269 (Leishmania) amazonensis and against epimastigotes of Y and Colombian strains of Trypanosoma cruzi. The antitumoral activity was performed on MDA-MB-231 lineage. The evaluation of the toxicity on cell lines and parasites was performed by the colorimetric MTT technique. The antibacterial activity was assessed about the species Staphylococcus aureus, Salmonella typhimurium, Escherichia coli, Klebsiella oxytoca, Proteus mirabilis, Streptococcus agalactiae, Listeria monocytogenes e Pseudomonas aeruginosa using the resazurin technique. In citoxicity assay all extracts have shown some toxicity to normal cells of mammals L929 lineage. Antitumoral activity was observed for 22 extracts, being the most active the extract of aerial parts of Ageratum fastigiatum. Trypanocidal activity was observed for seven extracts against the Y strain and eight extracts against Colombian strain, among them the most active is the aerial parts of Ageratum fastigiatum and aerial parts of Zeyheria montana. Leishmanicidal activity was observed for 11 extracts againt M2269 strain of Leishmania amazonensis and three against BH46 strain of Leishmania infantum, being the most active the extract from aerial parts of Ageratum fastigiatum. Antibacterial activity was identified for 11 extracts, the most active were the Ageratum fastigiatum (aerial parts) and Byrsonima lancifolia (leaves), while the most susceptible bacteria, inhibited by the largest number of extracts, was S. aureus (9 extracts) and the less susceptible was S. agalactiae (1 extract). The results reveals that, the ethanol extracts of the aerial parts of Ageratum fastigiatum and Zeyheria montana are the most promising for further studies, representing a potential source of substances to leismanicial, tripanocidal and antitumoral activities, and extracts of Ageratum fastigiatum (aerial parts) and Byrsonima lancifolia (leaves) as antibacterial activity, being need to perfom a fractionation of these extracts to identify the substances responsible for the activities and toxicity.

Submitted by Alessandra Portugal (alessandradf@ioc.fiocruz.br) on 2013-10-01T01:00:11Z No. of bitstreams: 1 Mariana Rottini.pdf: 21725457 bytes, checksum: 50116ecf0d459814e95cda68b7d9058c (MD5) / Made available in DSpace on 2013-10-01T01:00:11Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Mariana Rottini.pdf: 21725457 bytes, checksum: 50116ecf0d459814e95cda68b7d9058c (MD5) Previous issue date: 2011 / Fundação Oswaldo Cruz. Instituto Oswaldo Cruz. Rio de Janeiro, RJ, Brasil / As leishmanioses são um conjunto de doenças de natureza crônica provocadas por parasitos intracelulares obrigatórios do gênero Leishmania, que podem causar lesões dérmicas ou, dependendo da espécie do parasito, podem também acometer órgãos internos tais como fígado, baço e medula óssea. As opções de tratamento disponíveis para a leishmaniose apresentam problemas envolvendo a eficácia além de inúmeros efeitos colaterais e casos de resistência relacionados aos principais fármacos. Isso tem incentivado a pesquisa de novos agentes com características leishmanicidas, que apresentem menos efeitos colaterais. Assim, a utilização de produtos naturais, derivados de plantas medicinais, vem despertando o interesse de pesquisadores para a busca de tratamentos alternativos, principalmente, para a leishmaniose cutânea. Alguns óleos essenciais ou compostos isolados, obtidos de plantas, têm mostrado, em ensaios experimentais, efetiva ação leishmanicida, o que faz desses compostos opções promissoras no tratamento da leishmaniose cutânea. No presente trabalho avaliamos, in vitro, a atividade leishmanicida e a citotoxicidade de diferentes óleos essenciais como: Citrus limon, Citrus aurantium, Eucalyptus globulus, Endlicheria bracteolata e do α- bisabolol contra promastigotas e amastigotas intracelulares de L. amazonensis. Nossos resultados demonstraram que todos os óleos essenciais pesquisados apresentaram atividade leishmanicida contra as formas promastigotas. Além disso, o óleo essencial de E. bracteolata e o α-bisabolol demonstraram uma excelente atividade contra as formas amastigotas intracelulares, o que indica serem estes, compostos promissores para o desenvolvimento de um tratamento alternativo para a leishmaniose cutânea. / Leishmaniasis are a group of chronic diseases caused by an obligate intracellular parasite of the Leishmania genus. These parasites can cause skin lesions or, depending on the parasite species, can also affect internal organs such as liver, spleen and bone marrow. Leishmaniasis treatment have several issues that involves lack of effectiveness due to cases of drug resistance, and numerous side effects. These problems have encouraged the search for new anti-leishmanial compounds. Therefore, the use of natural products, derived from medicinal plants, has raised the interest of researchers in the quest for on alternative treatment for cutaneous leishmaniasis. Some essential oils or isolated compounds obtained from plants have shown, an effective anti-leishmanial action in experimental studies, making these compounds promising options for the treatment of cutaneous leishmaniasis. For this reason, the present study has evaluated the anti-leishmanial activity and cytotoxicity of the following different essential oils: Citrus limon, Citrus aurantium, Eucalyptus globulus, Endlicheria bracteolata and α-bisabolol. The activity against promastigotes and intracellular amastigotes of Leishmania amazonensis was tested in vitro. Our results showed that all essential oils above showed anti-leishmanial activity against promastigotes. The essential oil of E. bracteolata and α-bisabolol showed also an excellent activity against intracellular amastigotes, indicating that they are promising compounds for the development of an alternative treatment for cutaneous leishmaniasis.

Leishmaniasis is among the most neglected diseases in the world. Currently, the drugs available for its treatment are limited and highly toxic, so the search for more effective and safer medicines is necessary. Thus, this paper aims to investigate the leishmanicidal activity of new natural, and synthetic. Two series of new 1,4-naphthoquinone derivatives were synthesized. The series of bis-2-hydroxy-1,4-naphthoquinone substituents exhibited significant activity against Leishmania amazonensis and Leishmania braziliensis promastigotes, six compounds showed good activity without toxic effects against the host cell. Moreover, compound 3a, which was selected to an in vivo infection assay with Leishmania amazonensis, reduced the size of the infected ear, but did not reduce parasite burden of the ear and draining lymph node. Furthermore, treatment with 3a induced no change in spleen weight or changes in alanine aminotransferase (ALT), aspartate aminotransferase (AST), creatinine, and urea levels. The series of 2-N,N'-dialkylamino-1,4-naphthoquinone substituents showed activity against promastigotes of L. chagasi and L. amazonensis, especially 1d, 1h and 1i, which exhibited L. amazonensis promastigote growth inhibition over 50%, and 1d, 1e, 1f, 1h, 1k and 1n derivatives which inhibited the growth of L.chagasi promastigotes over 70%. In the assay against the amastigote intracellular forms, 1a, 1b, 1c, 1d, 1h, 1i, 1k and 1m derivatives presented significant activity. The flavonoids SP1, SP2, and SP3 and S. palodosum crude extract inhibited the growth of promastigotes and amastigotes of L. amazonensis and L. chagasi. Moreover, SP4 inhibited the growth of promastigotes L. amazonensis. In regard an intracellular forms growth inhibition, SP1, SP3, and crude extract were active significantly. Furthermore, in the in vivo assay of infection with L. amazonensis, the compounds SP1 and SP3 reduced the parasitic burden on the infected ear, but did not reduce parasite burden on draining lymph node. On Leishmania cell cycle analysis, it was observed that SP1 and SP3 induced modifications on S and G2/M phases of cell cycle. In addition, SP3 induced death by apoptosis, and changed autophagy intensity, suggesting anti-proliferative activity at the concentration of 100 μM. The compound 3,7,3',4'-tetra-O-methylquercetin (retusin) inhibited the growth of promastigotes and amastigotes of L. amazonensis and L. chagasi. In the infection assay using hamsters infected with L. chagasi, retusin decreased the parasite burden in the spleen of infected animals. However, in the in vivo assay of infection using Balb/c mice infected with L. amazonensis, retusin did not reduce the parasitic load in the ear and draining lymph node. Moreover, retusin induced morphological alterations in L. chagasi promastigotes observed by scanning electron microscopy. In addition, retusin induced death by apoptosis at the concentration of 100 μM, which is probably not dependent on caspases; besides retusin inhibited Leishmania topoisomerases. The results indicate that the 1,4-naphthoquinone derivatives and flavonoid compounds derived from S. paladosum are active against Leishmania, mainly 1a, 1b, 1c, and 1m, which were active against Leishmania in the in vitro assays, without induce damage in host cells; and SP1, SP3, and rutesin, which were active in vivo by intraperitoneal route, suggesting they can be useful lead compounds candidates for antileishmanial drugs. / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior / A leishmaniose está entre as doenças mais negligenciadas do mundo. Atualmente, os medicamentos disponíveis para o tratamento são limitados, de toxicidade elevada e cepas de Leishmania spp. têm apresentado resistência aos tratamentos preconizados. Assim faz-se necessário a busca de medicamentos mais eficazes e mais seguros. Dessa forma, este trabalho visa investigar a atividade leishmanicida de novos compostos de origem natural e sintéticos. Foram sintetizados duas séries de novos derivados 1,4-naftoquinonas. A série com substituintes bis-2-hidroxi-1,4-naftoquinona exibiram atividade significante contra promastigotas de Leishmania amazonensis e Leishmania braziliensis, seis destes compostos mostraram boa atividade sem efeito tóxico para célula hospedeira, além disso o composto 3a selecionado para o tratamento no ensaio in vivo de infecção com Leishmania amazonensis reduziu a lesão da orelha infectada, porém não reduziu a carga parasitária da orelha e do linfonodo drenante, além disso, o tratamento com o composto 3a não induziu alteração no peso do baço, nem alterações de alanino aminotransferase (ALT), aspartato aminotransferase (AST), creatinina e ureia. Compostos da série com substituintes 2-N,N’-dialquilamino-1,4-naftoquinona apresentaram atividade contra promastigotas de L.chagasi e L. amazonensis, com destaque para os derivados 1d, 1h e 1i que inibiram o crescimento de promastigotas de L. amazonensis acima de 50%, e os derivados 1d, 1e, 1f, 1h, 1k e 1n que exibiram pronunciada inibição do crescimento de promastigotas de L.chagasi, com mais de 70% de inibição. No ensaio contra as formas amastigotas de L.chagasi, os derivados 1a, 1b, 1c, 1d, 1h, 1i, 1k e 1m apresentaram significante atividade contra o crescimento das formas intracelulares do parasito. Os flavonoides SP1, SP2, SP3 e o extrato bruto de Solanum paladosum inibiram o crescimento de promastigotas de L. amazonensis e L. chagasi. Além disso, SP4 inibiu o crescimento de promastigotas de L. amazonensis. No que diz respeito à inibição do crescimento das formas intracelulares, SP1, SP3 e o extrato bruto foram estatisticamente significantes. Além disso, no ensaio in vivo de infecção com L. amazonensis os compostos SP1 e SP3 reduziram a carga parasitária da orelha infectado, porém não reduziram a carga parasitária do linfonodo. Na análise do ciclo celular da Leishmania, foi observado que SP1 e SP3 induziram mudança na fase S e G2/M do ciclo celular. Ademais, o composto SP3 na concentração de 100 μM induziu morte por apoptose e alterou a intensidade de autofagia, indicando atividade antiproliferativa. O composto 3,7,3',4'-tetra-O-methylquercetin (retusin) inibiu o crescimento de promastigotas e amastigotas de L.chagasi e L. amazonensis. No ensaio de infecção utilizando hamsters infectados com L. chagasi, o composto retusin diminuiu a carga parasitária no baço dos animais infectados. Entretanto, no ensaio in vivo de infecção de camundongos Balb/c com L. amazonensis, o composto retusin não reduziu a carga parasitária da orelha e do linfonodo drenante. Além disso, o ensaio de microscopia eletrônica de varredura revelou que o composto retusin induziu alterações morfológicas em promastigotas de L. chagasi. O composto retusin foi capaz de induzir morte por apoptose na concentração de 100 μM, provavelmente não dependente de caspases, além disso, inibiu topoisomerase de Leishmania. Os resultados indicam que os derivados 1,4-naftoquinonas e os compostos flavonoides de S. paladosum são ativos contra espécies de Leishmania, principalmente os compostos 1a, 1b, 1c, and 1m que foram ativos contra espécies de Leishmania nos ensaios in vitro, sem efeito deletério para célula hospedeira, e os flavonoides SP1, SP3 e retusin que foram ativos por via intraperitoneal no ensaio in vivo, indicando que estes são fortes candidatos a fármacos leishmanicidas.

Made available in DSpace on 2016-05-11T13:06:35Z (GMT). No. of bitstreams: 2 mariana_rottini_ioc_dout_2015.pdf: 66121272 bytes, checksum: 81ebf83865bc58345b44635091ee970f (MD5) license.txt: 1748 bytes, checksum: 8a4605be74aa9ea9d79846c1fba20a33 (MD5) Previous issue date: 2015 / Fundação Oswaldo Cruz. Instituto Oswaldo Cruz. Rio de Janeiro, RJ, Brasil / As opções de tratamento para leishmaniose tegumentar, atualmente disponíveis, apresentam problemas envolvendo a eficácia, os efeitos colaterais e os casos de resistência do parasito relacionados aos principais fármacos utilizados. Além disso, todos os fármacos são de administração parenteral, o que depende de profissionais experientes e deslocamento do paciente ao local de tratamento. Por esse motivo, muitos abandonam o tratamento, o que leva ao surgimento de cepas de Leishmania resistentes. Isso tem incentivado a pesquisa de novos agentes, com características leishmanicidas que apresentem menores efeitos colaterais e que sejam de administração mais fácil. Assim, a utilização de produtos naturais, derivados de plantas, vem despertando o interesse de pesquisadores na busca de tratamentos alternativos para a leishmaniose cutânea. Alguns óleos essenciais têm mostrado, em ensaios experimentais, uma efetiva ação leishmanicida, o que faz desses compostos promissoras opções no tratamento desta doença. Resultados obtidos, anteriormente, pelo nosso grupo, demonstraram que o (-)\03B1-bisabolol apresenta potente atividade leishmanicida, in vitro, contra formas promastigotas e amastigotas intracelulares de L. amazonensis. Ao avaliarmos a citotoxicidade deste óleo demonstramos que este composto apresentou maior atividade citotóxica para os parasitos que para os macrófagos Além disso, foi possível demonstrar alterações morfológicas e ultraestruturais nos parasito, tanto em formas promastigotas, como em formas amastigotas interiorizadas por macrófagos tratadas com o (-)\03B1-bisabolol, através da microscopia eletrônica de transmissão. Baseados nestes resultados in vitro, obtidos pelo nosso grupo, desenvolvemos três formulações tópicas contendo (-)\03B1-bisabolol com diferentes concentrações, as quais foram utilizados no tratamento da leishmaniose experimental no modelo murino. Durante o tratamento com as formulações não observamos alterações que pudessem estar relacionadas com a citotoxicidade ao tratamento tópico. Observamos que os animais tratados com a formulação contendo 1.000 mg/kg/dia de (-)\03B1-bisabolol mostraram regressão e cicatrização das lesões, com diminuição da carga parasitária. Os animais tratados com 500 mg/kg/dia e 250 mg/kg/dia de (-)\03B1-bisabolol também mostraram regressão e cicatrização das lesões, entretanto, sem diminuição da carga parasitária. Diante dos resultados analisados, podemos destacar que o (-)\03B1-bisabolol possui ação leishmanicida, dose dependente, tanto in vitro quanto in vivo, demonstrando ter eficácia no tratamento da leishmaniose experimental, o que poderá transformá-lo num composto promissor, através de um estudo futuro que possibilite aprimorar a sua capacidade leishmanicida / The treatment currently available for cutaneous leishmaniasis have problems involving its efficacy, side effects and resistance cases. In addition, all drugs are administrated parenterally. For this reason, many patients abandon the treatment, which leads to the emergence of Leishmania resistant strains. This has encouraged the search for new agents with antileishmanial features that have fewer side effects. Thus, the use of natural products derived from plants has aroused the interest of researchers in the search for alternative treatments for cutaneous leishmaniasis. Some essential oils or isolated compounds from plants have been shown, in experimental trials, an effective activity against Leishmania, which makes these compounds promising options for the treatment of this disease. Results obtained previously by our group demonstrated that (-)α-bisabolol has potent leishmanicidal activity in vitro against promastigotes and intracellular amastigotes of Leishmania amazonensis. When evaluating the cytotoxicity of this oil we demonstrated that this compound present stronger cytotoxic activity against parasites than macrophages. Furthermore, morphological and ultrastructural changes of the parasite were demonstrated by transmission electron microscopy, both in promastigotes and amastigotes treated with (-)α-bisabolol. Due to the in vitro results obtained by our group, we have developed three topical formulations containing (-) α-bisabolol with different concentrations. During treatment with the formulations changes that might be related to cytotoxicity to topical treatment were not observed. Animals treated with the formulation containing 1.000 mg/kg/day (-) α-bisabolol, showed regression and healing of the lesions with reduction in parasite load. The animals treated with 500 mg/kg/day and 250 mg/kg/day (-)α-bisabolol also showed regression and healing of the lesions, however, without reduction of the parasitic load. On the analyzed results, we emphasize that the (-) α- bisabolol has leishmanicidal action both in vitro and in vivo, showing be effective in the treatment of experimental leishmaniasis, which could turn it into a promising compound through a future study enables leishmanicidal improve its capacity. / 2017-12-02

As concepções de moduladores da dinâmica dos microtúbulos, que levam ao bloqueio do ciclo celular, e de bloqueadores de canais de cálcio tipo L (Cav), tais como o 1,4-di-hidropiridinas e análogos, que diminuem a resistência do organismo humano aos tratamentos quimioterápicos através da inibição da proteína de transmembrana P-gp, são estratégias importantes tanto para terapias antitumorais quanto para leishmanicida. Esta abordagem tem mostrado resultados interessantes na diminuição da resistência à quimioterapia em câncer chamada de MDR (do inglês Multi Drug Resistence), além de também serem uma estratégia importante para controlar a fase inicial da leishmaniose. Diante desse contexto, e baseado no estudo de Ueki 2013 e colaboradores que, a partir de estudos anteriores, os quais relatam a superexpressão das enzimas estona deacetilase (HDAC) e catepsina L (CTSL) em células tumorais, propuseram um pró-fármaco seletivo, planejado a partir de um espaçador de lisina acetilada, que garante a liberação do fármaco seletivamente nas células tumorais, trabalhamos no desenvolvimento de uma nova proposta de pró-fármaco trifuncional. Nossa proposta foi desenvolvida a partir de estudos de triagem virtual, baseados em ligantes e em estrutura, predição das propriedades farmacocinéticas e toxicológicas (ADME/Tox) e também técnicas de bioinformática para a construção de um modelo de canal de cálcio, devido à inexistência de estruturas, do mesmo, que estivessem depositadas no banco de dados de proteínas PDB (Protein Data Bank). Paralelamente, nosso grupo de síntese colaborador sintetizou, através de técnicas de \"Click Chemistry\" e reações de Mitsunobu multicomponentes, uma biblioteca de novos híbridos trifuncionais, os quais, após estudos de atividade biológica, foram avaliados (in silico) frente à estrutura da tubulina, e os compostos mais promissores desta biblioteca serviram de base para novos estudos de triagem virtual. Para a obtenção dos nossos hits, executamos 4 estratégias de triagem virtual, separadas em 2 tarefas. Ao final, selecionarmos um total 59 hits, dos quais, 9 hits apresentam promissoras atividades bloqueadoras do canal de cálcio e 65 hits apresentam promissoras atividades moduladoras da tubulina. Estes hits seguem em estágio de compra e ensaios in vitro e após comprovada a eficácia dos mesmos, estes futuramente farão parte de uma nova proposta de pró-farmaco trifuncional. / The concepts of modulating microtubule dynamics, and calcium channel L-types (CAV) blockers are important strategies for anticancer and antileishmanial therapies. Microtubule modulators that blocks the cell cycle and the calcium channel blockers, such as, 1,4-dihydropyridines and analogues, reduce the resistance of the human body to chemotherapeutic treatments by inhibiting transmembrane P-gp protein. This approach has shown interesting results in reduced resistance to chemotherapy in cancer called MDR (Multi Drug Resistance), and an important strategy for controlling the early stage of leishmaniasis. In this context, we work to develop a new proposal for trifunctional prodrug. We have based on the study of Ueki 2013 and collaborators, which, from earlier studies with reported overexpression of both deacetylase estona enzymes (HDACs) and cathepsin L (CTSL) in tumor cells, proposed a selective prodrug. We considering an acetylated lysine link/spacer, which ensures the release of the drug selectively in tumor cells, have now designed this selective prodrug. Our proposal was developed from virtual screening studies, based on ligands and structure, prediction of pharmacokinetic and toxicological properties (ADME / Tox) and also bioinformatics techniques for the construction of a calcium channel model, due to the inexistence of Structures of the same that were deposited in the database of proteins PDB (Protein Data Bank). At the same time, our collaborating synthesis group synthesized, through Click Chemistry techniques and Mitsunobu multicomponent reactions, a library of new trifunctional hybrids, which, after studies of biological activity, were evaluated (in silico) against the structure of tubulin , And the most promising compounds from this library served as the basis for further virtual screening studies. To obtain our hits, we performed 4 virtual screening strategies, separated into 2 tasks. In the end, we selected 59 hits, of which 9 hits show promising calcium channel blocking activities and 65 hits show promising tubulin modulating activities. These hits follow in vitro purchase and testing, and after proven effectiveness, they will be part of a new tri prodrug proposal.

Submitted by Renata Lopes (renatasil82@gmail.com) on 2016-07-08T14:59:50Z No. of bitstreams: 1 danielatrivelatodasilveiradepaula.pdf: 1200045 bytes, checksum: f8ebaf5127aea71d80cdf654a3635613 (MD5) / Approved for entry into archive by Adriana Oliveira (adriana.oliveira@ufjf.edu.br) on 2016-07-13T16:33:54Z (GMT) No. of bitstreams: 1 danielatrivelatodasilveiradepaula.pdf: 1200045 bytes, checksum: f8ebaf5127aea71d80cdf654a3635613 (MD5) / Made available in DSpace on 2016-07-13T16:33:55Z (GMT). No. of bitstreams: 1 danielatrivelatodasilveiradepaula.pdf: 1200045 bytes, checksum: f8ebaf5127aea71d80cdf654a3635613 (MD5) Previous issue date: 2012-02-15 / CAPES - Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior / As leishmanioses são doenças causadas por protozoários do gênero Leishmania e apresentam um amplo espectro de manifestações clínicas. São consideradas doenças tropicais negligenciadas e encontram-se presentes atualmente em 98 países, afetando 12 milhões de pessoas, com 2 milhões de novos casos por ano. O tratamento baseia-se principalmente na administração de antimoniais pentavalentes, que apresentam diversos problemas, incluindo alta toxicidade, efeitos adversos e o aparecimento de cepas resistentes. Diante deste fato é indiscutível a necessidade de novas drogas para a quimioterapia destas doenças. Neste sentido, o objetivo do trabalho consistiu na avaliação da atividade de compostos análogos de imidazolidinas e hexahidropirimidinas em diferentes espécies de Leishmania relacionadas à manifestações cutâneas. Foram testados 18 compostos, sendo nove análogos de imidazolidinas e nove de hexahidropirimidinas. Inicialmente os testes foram realizados em formas promastigotas de L. amazonensis, L. braziliensis e L. major e em macrófagos peritoneais de camundongos. A viabilidade destas células foi mensurada pelo método colorimétrico do MTT. Posteriormente, compostos com baixa toxicidade para macrófagos e efetiva atividade antipromastigota foram selecionados para os testes em amastigotas, cuja metodologia foi baseada na coloração por giemsa e contagem dos parasitos intracelulares. Nenhum dos compostos testados apresentou atividade citotóxica significativa para macrófagos. Dentre os análogos de imidazolidinas, cinco apresentaram atividade efetiva em formas promastigotas de Leishmania, com CI50 variando de 6,18 a 34,93 μM. Os compostos 2 e 3 foram os que apresentaram maior atividade antipromastigota e antiamastigota em Leishmania, sendo o composto 2, que possui uma diamina, o mais ativo. Para os análogos de hexahidropirimidinas, promastigotas de L. major foram os únicos sensíveis com CI50 variando de 13,63 a 33,50 μM. Somente o composto 14 se mostrou ativo em formas intracelulares do parasito. Verificou-se nos compostos testados uma relação estrutura-atividade, bem como diferenças de sensibilidades entre as espécies de Leishmania e entre as formas promastigotas e amastigotas. Os análogos de imidazolidinas apresentaram CI50 das formas promastigotas e amastigotas próximos, sugerindo que o mecanismo de ação não depende da imunomodulação da célula hospedeira. Em relação às hexahidropirimidinas, o composto 14 não aumentou os níveis da produção do NO, indicando que o mecanismo de ação não ocorre via modulação de NO. De modo geral, o estudo mostrou que os compostos analisados possuem significativo potencial leishmanicida, embora mais pesquisas sejam necessárias, no sentido de se identificar o mecanismo de ação dos mesmos. / Leishmaniasis is a disease caused by protozoa of the genus Leishmania, presenting a broad spectrum of clinical manifestations. Nowadays it is present in 98 countries, affecting 12 million people, with 2 million new cases per year. The current treatment is based mainly on administration of pentavalent antimonials which have several problems, including high toxicity, adverse effects and the emergence of resistants strains. Given this fact, there is a clear need for development of new drugs for chemotherapy of these diseases. In this sense, the aims of this study were to assess the activity of imidazolidine and hexahydropyrimidine analogues compounds in different species of Leishmania which are related to cutaneous manifestations. Eighteen compounds were tested, nine imidazolidine analogues and nine hexahydropyrimidine analogues. Initially the tests were performed on promastigote forms of L. amazonensis, L. braziliensis and L. major and murine peritoneal macrophages. The viability of these cells was measured by the MTT colorimetric method. Subsequently, compounds with low toxicity for macrophages and effective antipromastigote activity were selected for the tests in amastigote forms, which methodology was based on Giemsa staining and counting of intracellular parasites. None of compounds showed significant cytotoxic activity for macrophages. Among the imidazolidine analogues, five showed effective activity in promastigotes of Leishmania, with IC50 ranging from 6.18 to 34.93 μM. The compounds 2 and 3 presented the highest activity for antipromastigote and antiamastigote assays, and the compound 2, with a diamine, was the most active. For hexahydropyrimidine analogues, only promastigotes of L. major were sensitive of the compounds, with IC50 ranging from 13.63 to 33.50 μM. Only the compound 14 showed activity on intracellular forms of the parasite. It was observed in the compounds tested a structure-activity relationship as well as differences in sensitivity between Leishmania species and promastigotes and amastigotes forms. The imidazolidine analogues showed a close IC50 for promastigote and amastigote forms, suggesting that their action mechanism action does not depend on immunomodulation of the host cell. Regarding hexahydropyrimidine analogues, the compound 14 did not increasead NO production, indicating that the action mechanism was unlikely to be due to NO modulation. In general, this study showed that the compounds studied have potential leishmanicidal activity, although more research are necessary, in order to identify the mechanism of action of these compounds.

Submitted by Renata Lopes (renatasil82@gmail.com) on 2017-03-24T11:33:53Z No. of bitstreams: 1 rodrigoluizfabri.pdf: 1102302 bytes, checksum: 4c3dbed48513288ea4b5efae07be8c2c (MD5) / Approved for entry into archive by Adriana Oliveira (adriana.oliveira@ufjf.edu.br) on 2017-03-24T12:55:36Z (GMT) No. of bitstreams: 1 rodrigoluizfabri.pdf: 1102302 bytes, checksum: 4c3dbed48513288ea4b5efae07be8c2c (MD5) / Made available in DSpace on 2017-03-24T12:55:36Z (GMT). No. of bitstreams: 1 rodrigoluizfabri.pdf: 1102302 bytes, checksum: 4c3dbed48513288ea4b5efae07be8c2c (MD5) Previous issue date: 2008-02-13 / O extrato metanólico das partes aéreas de Mitracarpus frigidus (Willd. ex Reem Schult.) K. Schum. (Rubiaceae) e suas partições foram avaliados quanto à atividade antimicrobiana frente a onze cepas de bactéria (Staphylococcus aureus, Pseudomonas aeruginosa, Salmonella enterica sorovar tythimurium, Shigella sonnei, Klebsiella pneumoniae, Escherichia coli, Micrococcus luteus, Enterococcus faecalis, Enterobacter cloacae, Streptococcus pyogenes e Bacillus cereus) e duas de levedura (Candida albicans e Cryptococcus neoformans). A atividade leishmanicida foi testada para as formas promastigotas de Leishmania (L. chagasi e L. amazonensis) e a citotoxidade avaliada pelo teste de letalidade frente a Artemia salina. A atividade antioxidante (ensaio com DPPH e poder de redução), a análise fitoquímica e os conteúdos de compostos fenólicos e flavonóides também foram investigados. Atividade citotóxica mais significativa foi observada para a partição hexânica (CL50 = 61 µg/ml); as partições AcOEt e n-BuOH apresentaram excelente atividade antioxidante (CI50 = 7 e 9 µg/ml, respectivamente, pelo método do DPPH e CE50 = 35 e 40 µg/ml, respectivamente, pelo método de avaliação do poder de redução). A atividade antioxidante que foi correlacionada positivamente com conteúdos de compostos fenólicos e de flavonóides. A partição hidrometanólica apresentou atividade expressiva para formas promastigostas de L. amazonensis (CI50 = 9 µg/ml). A partição CH2Cl2 mostrou intensa atividade antimicrobiana, principalmente contra C. neoformans e B. cereus com CIM = 0,010 e 0,020 µg/ml, respectivamente e também atividade leishmanicida com CI50 = 7 µg/ml para L. chagasi. A partição em CH2Cl2 foi fracionada e forneceu frações com atividade citotóxica, antimicrobiana e leishmanicida significativas. A bioautografia mostrou que triterpenos e alcalóides foram os responsáveis pela atividade antifúngica das frações. Os alcalóides extraídos apresentaram atividade antimicrobiana para B. cereus, P. aeruginosa e C. neoformans com CIM = 0,039 mg/ml. O óleo essencial apresentou linalol e acetato de eugenol como componentes majoritários e excelente atividade antifúngica com CIM de 0,063 mg/ml para C. albicans e de 0,008 mg/ml para C. neoformans. Este estudo é o primeiro relato de caracterização químicobiológica de M. frigidus. / The methanolic extract of the aerial parts of Mitracarpus frigidus (Willd. ex Reem Schult.) K. Schum. (Rubiaceae) and their partitions were evaluated for antimicrobial activity against eleven strains of bacteria (Staphylococcus aureus, Pseudomonas aeruginosa, Salmonella enterica sorovar tythimurium, Shigella sonnei, Klebsiella pneumoniae, Escherichia coli, Micrococcus luteus, Enterococcus faecalis, Enterobacter cloacae, Streptococcus pyogenes e Bacillus cereus) and two yeasts (Candida albicans e Cryptococcus neoformans). Antileishmanial activity was tested for promastigotes forms of Leishmania (L. chagasi e L. amazonensis) and cytotoxicity was analysed by brine shrimp (Artemia salina) lethality assay. Antioxidant activity (assay with DPPH and reduction power), phytochemical screening and the contents of phenolics and flavonoids were also investigated. The most significative cytotoxic activity were found for hexane partition (LC50 = 61 µg/ml); the EtOAc and n-BuOH partitions presented excellent antioxidant activity (IC50 = 7 and 9 µg/ml, respectively, by the DPPH assay and EC50 = 35 and 40 µg/ml, respectively, by reduction power assay) which was positively correlated with the contents of phenolics and flavonoids. Hydromethanolic partition showed expressive activity against the promastigotes forms of L. amazonensis (IC50 = 9 µg/ml). CH2Cl2 partition present an intense antimicrobial activity, mainly against C. neoformans e B. cereus with MIC = 0,010 e 0,020 µg/ml, respectively and also antileishmanial with IC50 = 7 µg/ml for L. chagasi. The CH2Cl2 partition was fractionated and gave several fractions with cytotoxic, antimicrobial and antileishmanial activity. Bioauthography showed that triterpenes and alkaloids were responsible for antifungal activity of the fractions. The extracted alkaloids presented antimicrobial activity against B. cereus, P. aeruginosa and C. neoformans with MIC = 0,039 mg/ml. The essential oil presented linalol and eugenol acetate as the major components and an excellent antifungal activity with MIC of 0,063 mg/ml for C. albicans and of 0,008 mg/ml for C. neoformans. This study is the first report of the chemical-biological characterization of M. frigidus.

Submitted by isabela.moljf@hotmail.com (isabela.moljf@hotmail.com) on 2017-05-02T13:33:15Z No. of bitstreams: 1 josianemellosdasilva.pdf: 1506702 bytes, checksum: 3a2c29162f7b397a1ea2e3562ccf7a81 (MD5) / Approved for entry into archive by Adriana Oliveira (adriana.oliveira@ufjf.edu.br) on 2017-05-13T13:09:16Z (GMT) No. of bitstreams: 1 josianemellosdasilva.pdf: 1506702 bytes, checksum: 3a2c29162f7b397a1ea2e3562ccf7a81 (MD5) / Made available in DSpace on 2017-05-13T13:09:16Z (GMT). No. of bitstreams: 1 josianemellosdasilva.pdf: 1506702 bytes, checksum: 3a2c29162f7b397a1ea2e3562ccf7a81 (MD5) Previous issue date: 2011-04-01 / CAPES - Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior / Lacistema pubescens Mart. (Lacistemataceae), espécie arbórea e nativa, apresenta-se distribuída em vários estados brasileiros e é conhecida popularmente, conforme a região em que se encontra como espeto-vermelho, canela-vermelha, sabonete e cafezinho. Esse trabalho descreve o estudo fitoquímico e atividade antioxidante, antimicrobiana, leishmanicida, antitumoral, antinociceptiva e anti-inflamatória das folhas de L. pubescens. A atividade antioxidante foi analisada por quatro métodos diferentes e realizada com o extrato bruto metanólico (EBM) e partições em hexano (PHEX), em diclorometano (PDCM), em acetato de atila (PAcOEt) e hidrometanólica (PHM). Pelo método do DPPH, todas as amostras foram efetivas em inibir o radical, particularmente a PHM (CI50 1,8 μg/mL); pelo sistema β-caroteno / ácido linoleico a melhor resposta foi para a PHEX (CI50 22,71 μg/mL); no método do TBA, a amostra que melhor conseguiu inibir a lipoperoxidação foi a PHM e no método para avaliar o poder redutor das amostras, nenhuma amostra foi efetiva. A atividade antimicrobiana com determinação da CIM foi realizada com o EBM e partições diante das cepas Staphylococcus aureus, Pseudomonas aeruginosa, Shigella dysenteriae, Salmonella typhimurium, Escherichia coli, Enterobacter cloacae e Enterococcus faecali. A melhor resposta foi para as partições com valores de CIM de 125 μg/mL, a saber: PDCM para Enterococcus faecalis; PAcOEt bem como PHM para Enterobacter cloacae. A atividade leishmanicida foi verificada em formas promastigotas de Leishmania amazonensis, L. major, L. braziliensis e L. chagasi. A PHEX foi a amostra que apresentou a CI50 mais significativa em comparação ao controle em três das quatro espécies testadas. Para a atividade antitumoral verificada pelo método do MTT, PHEX e PAcOEt foram ativas diante da linhagem HL60 e PDCM, diante da linhagem MCF-7, contudo todas os extratos mostraram-se resistentes para Jurkat. O potencial anti-inflamatório e antinociceptivo de L. pubescens foi investigado in vivo. Três modelos para dor, com mecanismos de modulação distintos, foram utilizados. No teste de contorções abdominais, EBM e todas as partições foram efetivas em suprimir a dor. No teste da formalina, na dor de origem central, PHEX e PDCM foram ativos e na dor inflamatória, mostraram-se ativos os EBM, PHEX e PDCM. No teste da retirada da cauda, as amostras analisadas não alteraram o período de latência. Para avaliar o potencial anti-inflamatório foi utilizado o modelo do edema de orelha. EBM e PHEX administrados oralmente, não foram capazes de diminuir a inflamação, contudo a PHEX administrada topicamente suprimiu o edema em 88%. Triterpenos, flavonoides e esteroides encontrados nas amostras parecem ser os responsáveis pelas atividades encontradas. / Lacistema pubescens Mart. (Lacistemataceae), an arborea native species, is distributed in several Brazilian states and known popularly as “espeto-vermelho, canela – vermelha, sabonete e cafezinho”. This work describes the phytochemical profile and the antioxidant, antimicrobial, anti-leishmanial, antitumor, anti-inflammatory and antinociceptive activities of the leaves of L. pubescens. The antioxidant activity was evaluated by four different methods and performed with the crude methanol extract (EBM) and the hexane (PHEX), dichloromethane (PDCM), ethyl acetate (PAcOEt) and hydromethanolic (PHM) partitions. By the DPPH method, all samples were effective in inhibiting the radical, particularly PHM (IC50 1.8 μg /ml), by the β-carotene/linoleic acid system, the best answer was shown for PHEX (IC50 22.71 μg/ml), by the TBA method, the sample that best managed to inhibit lipid peroxidation was the PHM and when evaluated for the reducing power, the samples showed no activity. The antimicrobial activity, used to determine the MIC was performed with the EBM and partitions on the strains Staphylococcus aureus, Pseudomonas aeruginosa, Shigella dysenteriae, Salmonella typhimurium, Escherichia coli, Enterobacter cloacae and Enterococcus faecalis. The best response was for the partitions with MIC values of 125 μg/mL, as follows: PDCM for Enterococcus faecalis; PAcoEt for PHM and Enterobacter cloacae. The leishmanicidal activity was observed in promastigotes of Leishmania amazonensis, L. major, L. braziliensis and L. chagasi. PHEX was the sample that showed the most significant IC50 among the four species tested. For the antitumor activity observed by MTT method, PHEX and PAcOEt were active for HL60 and PDCM for MCF-7 tumor cell lines. On the other hand, all extracts were resistant to Jurkat. The antinociceptive and anti-inflammatory potential of L. pubescens were investigated in vivo. Three models for pain, with different modulation mechanisms were used. In the writhing test, EBM and all partitions were effective in suppressing pain. In the formalin test, on central origin pain, PHEX and PDCM were active and on inflammatory pain, EBM, PHEX and PDCM were active. In the tail flick test, the samples did not alter the latency period. To assess the anti-inflammatory activity, the ear edema model was used. EBM and PHEX when administered orally were not capable to reduce inflammation, but PHEX, administered topically, suppressed the edema by 88%. Major compounds like triterpenes, flavonoids and sterols found in the samples could be responsible for the activities found for L. pubescens.