Made available in DSpace on 2015-11-11T12:13:57Z (GMT). No. of bitstreams: 2 elvia_esparza_ioc_dout_2014.pdf: 5839066 bytes, checksum: 29e89c3117f3207c7a4df861cc312204 (MD5) license.txt: 1748 bytes, checksum: 8a4605be74aa9ea9d79846c1fba20a33 (MD5) Previous issue date: 2015-06-10 / Fundação Oswaldo Cruz. Instituto Oswaldo Cruz. Rio de Janeiro, RJ, Brasil / A expressão de arginase-1 (Arg1) está associada com a patogênese da leishmaniose visceral (LV), embora os mecanismos que norteiam a sua regulação na doença não sejam adequadamente conhecidos. Nesta tese foram explorados os mecanismos de regulação da Arg-1 no modelo experimental hamster, a fim de aplicar o conhecimento para o tratamento da doença. Encontrou-se que células infectadas in vitro com Leishmania (Leishmania) donovani expressaram Arg-1 e inhibiram a produção do óxido nítrico, o que contribuiu para o aumento da carga parasitária. A regulação da Arg1 dependeu do fator de transcrição STAT-6, que foi ativado de forma independente da IL-4. Para explorar outros mecanismos envolvidos na ativação de STAT-6 foi utilizada uma biblioteca quimica de 80 inibidores dos receptores tirosine quinases (RTK) e uma membrana microarranjo revestidas com anticorpos contra proteínas phosphoriladas dos RTK. Desta forma, foi possível identificar a ativação do receptor do fator de crescimento de fibroblasto-1 (FGFR-1) e o receptor do fator de crescimento semelhante à insulina tipo I (IGF-IR) nos macrofagos. Além disso, realizou-se uma caracterização mais detalhada da cascata de fosporilação canônica dessos receptores. Experimentos in vitro mostraram que macrófagos infectados com L. donovani aumentaram a transcrição de Arg1 quando foram tratados com os ligantes dos RTK, o FGF-2 e o fator de crescimento semelhante à insulina tipo 1 (IGF-I), sugerindo que estes RTK tinham um papel na regulação da Arg1 na LV Quando inibidores químicos do FGFR-1 e IGF-IR foram testados em macrófagos infectados, a Arg1 e o STAT-6 foram inibidos sugerindo uma ligação entre essas vias. De fato, a estimulação com FGF-2 e IGF-I aumentou a fosforilação e a ativação transcripcional do STAT-6, e se observou um efeito aditivo quando a citocina IL-4 foi adicionada, demonstrando a interação positiva destas vias. A inibição do STAT-6 mediante interferência de RNA impediu ou diminuiu significativamente a Arg-1 induzida nos macrófagos infectados e estimulados com FGF-2 e por IGF-I. respectivamente, indicando um papel chave do STAT-6 na Arg-1 induzida pelos RTK. A relevância destes achados experimentais para os seres humanos foi avaliada em cultivos de sangue total de doadores sadios estimulados in vitro e no plasma de crianças durante a doença ativa, um mês, seis meses e até um ano após tratamento. Foi observado um aumento de Arg-1 após o estimulo in vitro com IL-4 e FGF-2 ou IGF-I, consistente com o achado no modelo hamster. Nos pacientes, os níveis plasmáticos de Arg-1 não mudaram com a evolução da doença após e o tratamento e o FGF-2 só apresentou um aumento associado com a resolução um ano após tratamento. Em conclusão, os sinais comuns ativados através do FGF-1R e IGF-IR convergem com a IL-4 para ativar STAT-6 e a transcrição de Arg-1 na LV experimental, mas determinar o papel destes fatores de crescimento na LV humana requer estudos adicionais. Este estudo propõe a base mecanicista da regulação da Arg1 mediada pela convergência da sinalização RTK e IL-4R ao STAT-6 na LV e sugere que os inibidores RTK são de utilidade potencial como tratamento adjuvante da doença / Arginase - 1 (Arg1) expression is associated with the pathogenesis of visceral leishmaniasis (VL) but the mechanisms that lead to its up - regulation on disease are not completelly k nown . The objective of this thesis project was to explore the mecanistic ba sis of Arg - 1 regulation in the experimental hamster model of VL with the aim to apply the knowledge to the treatment of the disease. We found that cells infected in vitro with Leishmania donovani expressed Arg1 and that nitric oxide production was inhibite d , contibuting to the increased parasite burden. Arg - 1 regulation was dependent of the transcription factor STAT - 6, but the activation of this transcription factor was independent of IL - 4 cytokine. To explore other mechanisms involved in activation of STAT - 6 and the expression of Arg1 we used a chemical library of 80 tyrosine kinase receptor (RTK) inhibitors and a protein array with antibodies against phosphorylated RTKs. This allowed identify the activation of fibroblast growth factor receptor - 1 (FGFR - 1) a nd insulin - like growth factor receptor (IGF - IR) and the canonical down - stream signaling cascade. Macrophages infected in vitro with L. donovani increased transcription of Arg1 when treated with RTK ligands (FGF - 2, IGF - I), suggesting a role of these RTKs in the regulation of the Arg1 in LV. C hemical inhibitors of the activated receptors were used to assess the effect on infected macrophages. We found that inhibitors of FGFR - 1 and IGF - IR inhibited parasite burden, Arg1 and STAT - 6, suggesting a connection betw een these routes. Furthermore, the simultaneous stimulation of RTKs with its ligands FGF - 2 or IGF - I and IL - 4 increased the phosphorylation and transcriptonal activation of STAT - 6 and increased Arg1 in an additive manner, showing a positive interaction betw een these signaling cascades. STAT - 6 inhibition by RNA interference prevented or significantly diminished the induction of Arg - 1 in macrophages stimulated with FGF - 2 and IGF - I respectively, indicating a key role of the STAT - 6 on Arg - 1 induced by RTKs. The relevance of these experimental findings to humans was evaluated in stimulated whole blood cultures of healthy donor’s o r plasma of children during active disease, 1 month, 6 months or after 1 year of treatment . We found that the Arg - 1 induced by in vitro stimulation with IL - 4 and FGF - 2 or IGF - I, was consistent with the animal model. However, in the patients plasmatic Arg - 1 did not change over the follow - up, while FGF - 2 increased only after 1 year of treatment. We conclude that the signals activated throu gh FGFR - 1 and IGF - I converge to IL - 4 to activate STAT - 6 and induce Arg - 1 in experimental VL . This study propose that the mecanistic basis of the regulation of Arg1 in VL is mediated by the convergence of RTK signaling pathways and IL - 4R to STAT - 6 and sugge st the potential utility of RTK inhibitors as adjuvant treatment for the disease.

Submitted by Nuzia Santos (nuzia@cpqrr.fiocruz.br) on 2015-11-20T18:51:23Z No. of bitstreams: 1 fabiana.pdf: 63742461 bytes, checksum: 0ba3064ab0df6fc4dbb19dc66da0ff61 (MD5) / Approved for entry into archive by Nuzia Santos (nuzia@cpqrr.fiocruz.br) on 2015-11-20T18:51:36Z (GMT) No. of bitstreams: 1 fabiana.pdf: 63742461 bytes, checksum: 0ba3064ab0df6fc4dbb19dc66da0ff61 (MD5) / Made available in DSpace on 2015-11-20T18:51:36Z (GMT). No. of bitstreams: 1 fabiana.pdf: 63742461 bytes, checksum: 0ba3064ab0df6fc4dbb19dc66da0ff61 (MD5) Previous issue date: 2015 / Fundação Oswaldo Cruz. Centro de Pesquisa Rene Rachou. Belo Horizonte, MG, Brasil / Este estudo foi realizado em Belo Horizonte (Minas Gerais, Brasil), área endêmica para Leishmaniose visceral (LV), onde a doença vem se expandindo rapidamente, com 1.612 casos registrados nos últimos 10 anos. Nossa pesquisa avaliou o perfil epidemiológico em duas Áreas de abrangência (AA) dos Centros de Saúde (CS) Miramar e Salgado Filho do município de Belo Horizonte, com transmissão recente de LV, buscando compreender a tríade envolvida na transmissão: parasito-vetor-reservatório. Cada AA foi dividida em três trechos, controle, borrifação e manejo, a fim de avaliar o impacto das medidas de controle no número mensal de Lutzomyia longipalpis, através da curva flebotomínica. Em todos os trechos a captura de flebotomíneos e o inquérito canino censitário foram realizados. Durante 24 meses (setembro/2010 a agosto/2012) foram capturados 5194 flebotomíneos, distribuídos em 6 espécies, sendo Lu. longipalpis, vetora da LV, a espécie predominante (96,54%). Houve uma correlação entre a precipitação pluviométrica e o número de Lu. longipalpis capturados, mostrando que o número de espécimes de flebotomíneos capturados aumentou após o período chuvoso. Através do uso da Leishmania Nested PCR e sequenciamento, foram analisados 93 “pools” espécie-específicos. Leishmania infantum e Le. braziliensis foram encontradas em 23 e em 2 dos 26 “pools” de Lu. longipalpis, respectivamente. O DNA de Le. infantum foi encontrado em um “pool” de cada uma das espécies Lu. lloydi e complexo cortelezzii. A taxa mínima de infecção natural de flebotomíneos na área foi alta, 18,8% para Lu. Longipalpis, 20% para complexo cortelezzii e 100% para Lu. lloydi. Em relação às medidas de controle, observamos uma redução estatisticamente significativa no número de flebotomíneos no trecho manejo ambiental, enquanto houve apenas uma tendência de queda no número de flebotomíneos no trecho borrifação. Em relação ao reservatório doméstico, um total de 1408 cães foram examinados em 2011 através de testes sorológicos; 3,6% apresentaram-se soropositivos para LV canina (LVC). Biópsias de linfonodo, pele, baço e aspirado de medula óssea destes animais foram obtidos e analisados através do diagnóstico parasitológico e molecular. A positividade tanto para mielocultura como para o técnica de aposição em lâmina foi de 72.5%. Todas as amostras de baço mostraram-se positivas para LnPCR, indicando a presença de Le. infantum nas 51 amostras. O linfonodo foi o tecido menos sensível na PCR (57%) em relação aos demais. Cães sintomáticos demonstraram uma tendência a ter mais testes positivos. Nossos resultados mostram que as interfaces parasito-vetor e parasitoreservatório são ativas em áreas de médio risco para transmissão de LV, e que ações eficazes e rápidas devem ser implementadas para controlar a expansão da doença. / This study was conducted in Belo Horizonte (Minas Gerais, Brazil), an endemic area for visceral leishmaniasis (VL), where the disease has been expanding rapidly, with 1,612 cases recorded in the last 10 years. Our research assessed the epidemiological profile in two coverage areas (AA) of the Miramar and Salgado Filho Health Centers (HC) in the city of Belo Horizonte, with recent transmission of VL, willing to understand the triad involved in the transmission: parasite-vector-reservoir. Each AA was divided into three sections, control, spraying and management in order to assess the impact of control measures in the monthly number of Lutzomyia longipalpis through the sand fly curve. In all the sections, the capture of sand flies and canine census survey was conducted. For 24 months (from September / 2010 to August / 2012), 5194 sandflies were captured and distributed into 6 species. Lu. longipalpis, vector of LV, was the predominant species (96.54%). There was a correlation between the precipitation and the number of Lu. longipalpis captured, showing that the number of captured sandflies of specimens increased after the rainy season. With the use of Leishmania nested PCR and sequencing, 93 species-specific "pools" were analyzed. Out of the 26 Lu. longipalpis positive “pools”, Leishmania infantum was found in 23 while Le. braziliensis was found in 2. Le. infantum DNA was found in a "pool" of each species Lu. lloydi and cortelezzii complex. The sand flies natural infection minimum rate in the area was high, 18.8% for Lu. Longipalpis, 20% for cortelezzii complex and 100% for Lu. lloydi. Regarding control measures, we observed a statistically significant reduction in the number of sand flies in the environmental management section, while there was only a decreasing trend in the sand flies number in the spraying section. Concerning the domestic reservoir, 1408 dogs were examined in 2011 by serological tests; 3.6% were positive for canine visceral leishmaniasis (CVL). Lymph node biopsies, skin, spleen and bone marrow aspirate were obtained from these animals and analyzed using parasitological and molecular diagnosis. Positivity for both mielocultura as "imprint" was 72.5%. All spleen samples were positive for LnPCR, indicating the presence of Le. infantum in 51 samples. The lymph node was the least sensitive tissue in the PCR (57%), in relation to the others. Symptomatic dogs showed a tendency to have results that are more positive on the tests. Our results show that the vector-parasite and parasite reservoir interfaces are active in areas of medium risk of VL transmission, and rapid and effective actions must be implemented to control the spread of the disease.

Made available in DSpace on 2016-04-04T12:45:12Z (GMT). No. of bitstreams: 2 pricilla_oliveira_ioc_dout_2007.pdf: 1378604 bytes, checksum: f0dbf6910f9fd7228967184a959a3bd6 (MD5) license.txt: 1748 bytes, checksum: 8a4605be74aa9ea9d79846c1fba20a33 (MD5) Previous issue date: 2007 / Fundação Oswaldo Cruz. Instituto Oswaldo Cruz. Rio de Janeiro, RJ, Brasil / expansão e a urbanização da leishmaniose visceral (LV) em Mato Grosso do Sul tornaram a doença um problema de saúde pública no Estado. Para conhecer o comportamento clínico e epidemiológico da LV em indivíduos infectados pelo HIV, foi estudada uma série de 23 casos atendidos em dois hospitais da capital, Campo Grande, região Centro-Oeste do Brasil, de janeiro de 2000 a dezembro de 2006. Foram incluídos os pacientes com resultado sorológico positivo para o HIV documentado no prontuário e cultura positiva para Leishmania sp. em aspirado de medula óssea. Oitenta e sete por cento dos pacientes eram do sexo masculino, com mediana de idade de 37 anos (variando de 21 a 56 anos) Todos os pacientes foram procedentes de Mato Grosso do Sul. 34,8% dos pacientes apresentavam o uso de drogas injetáveis como categoria de exposição para o HIV. A maioria dos pacientes apresentava imunodeficiência avançada, com 80% dos pacientes com contagem de linfócitos T CD4+ inferior a 200 células/mm3 (mediana - 44,5 células/mm3) durante o primeiro episódio de LV. Apesar deste fato, ambas as doenças foram diagnosticadas simultaneamente em 43% dos pacientes. Todos os pacientes infectados pelo HIV com LV apresentaram febre e 78% hepatoesplenomegalia. Os pacientes apresentaram graus variados de diminuição das células sangüíneas e de anormalidades bioquímicas A pesquisa direta de Leishmania sp. em aspirado de medula óssea demonstrou alta positividade (87%) nos pacientes estudados. Cinco pacientes foram tratados exclusivamente com antimoniato de meglumina, cinco pacientes exclusivamente com desoxicolato de Anfotericina B e doze pacientes foram tratados com ambas as terapias, por reação adversa ou falha ao antimoniato de meglumina. Uma a duas recidivas por paciente foram observadas em 56,7% dos casos. Somente um paciente foi a óbito em conseqüência da LV / The outspread and urbanization of visceral leishma niasis in Mato Grosso do Sul becoming the disease a public health problem in the state. To know the clinical and epidemiological characteristics of visceral leishmaniasis in HIV patients, a series of 23 patients attended in Campo Grande, center west region of Brazil, from 2000 to 2006, was studied. We selected the patients with HIV and bone marrow culture positive for leishmaniasis The medi an age of patients was 37 years (range 21*56), 87% were male, All the patients live d in Mato Grosso do Sul, 34.8 percent of patients had intravenous drug use as the ir HIV transmission category. The majority of patients had advanced HIV disease, 80 p ercent had CD4+T cells count less than 200 cells/mm 3 and a median of 44.5 cells/mm3 during the first ep isode of visceral leishmaniasis. Despite of this fact, both diseases were diagnosed at the same time in 43 percent of the patients. All HIV in fected patients with visceral leishmaniasis presented fever, 78 percent presented enlargement of the liver and spleen. The patients presented varying degrees of b lood cytopenias and biochemical abnormalities. Diagnosis was also achieved in 87% o f the patients with the detection of Leishmania amastigotes in Giemsa*stained smears from aspirate s of bone marrow Five patients were treated only with meglumine anti moniate, four patients were treated with only amphotericin B and twelve patient s were treated with both therapies. One or two relapses were seen in 56.7 pe rcent of patients. Only one patient died due to leishmaniosis

Made available in DSpace on 2016-04-04T12:47:36Z (GMT). No. of bitstreams: 2 amanda_cavalcanti_ioc_dout_2014.pdf: 8125448 bytes, checksum: a21804f13675939416a209e2c1250af8 (MD5) license.txt: 1748 bytes, checksum: 8a4605be74aa9ea9d79846c1fba20a33 (MD5) Previous issue date: 2014 / Fundação Oswaldo Cruz. Instituto Oswaldo Cruz. Rio de Janeiro, RJ, Brasil / A Leishmaniose Visceral causada pela Leishmania infantum é uma doença zoonótica no Novo Mundo em que o cão é o principal hospedeiro doméstico. O conhecimento prévio dos mecanismos imunopatogênicos associados à infecção por L. infantum é necessário para o desenvolvimento de vacinas e outras estratégias de controle. O objetivo geral desta tese foi correlacionar a expressão clínica, a carga parasitária, a resposta imunológica do hospedeiro e a diversidade genética dos parasitos em cães naturalmente infectados por L. infantum. O presente estudo é uma avaliação transversal de noventa e dois cães naturalmente infectados por L. infantum provenientes do estado do Mato Grosso. A infecção dos animais incluídos no estudo foi confirmada por sorologia, cultura e /ou PCR. O diagnóstico etiológico foi realizado por PCR-RFLP para o gene hsp70 e por eletroforese de enzimas nos parasitos isolados. Foram ainda analisados os sinais clínicos, a resposta imune pela expressão gênica de citocinas, a carga parasitária por qPCR, as alterações histológicas no baço e fígado e a as populações e genótipos de L. infantum circulantes por meio da análise do polimorfismo de microssatélites. Foram definidos grupos de acordo com a carga parasitária esplênica e hepática. Os animais com alta carga parasitária apresentaram altos títulos de anticorpos específicos anti-Leishmania e mais sinais clínicos da doença A carga parasitária no baço foi maior do que no fígado e houve correlação com o rompimento da arquitetura esplênica, caracterizado principalmente pela desorganização da polpa branca. No fígado, a carga parasitária foi correlacionada positivamente à ocorrência de granulomas, à degeneração dos hepatócitos bem como à intensidade do infiltrado inflamatório. Mostramos que a maior carga parasitária promoveu menor expressão gênica de IL-12, IFN\03B3, TNF, IL-6, TGF\03B2 e IL-10 no baço e maior expressão de CCL2, CXCL8 e MAP4K4 no fígado. A análise genética dos parasitos é indicativa de que há infecção policlonal e tropismo tissular de alguns clones, mais evidente na análise das amostras pareadas (tecidos e isolados do tecido). Foi observada baixa variabilidade genética em que a maioria (96%, 49/51) das amostras foi caracterizada como pertencente a POP2, dentre as populações circulantes no Brasil previamente descritas pelo nosso grupo. Não houve associação entre a variabilidade genética dos parasitos e os parâmetros clínicos, parasitológicos ou imunológicos. Apesar disso, os dados gerados pelos ensaios in vitro com as cepas de diferentes populações sugerem que há sim diferenças na infectividade entre cepas com genótipos de microssatélites distintos. Foi reunida uma série de dados que, em conjunto, mostram que na região estudada a Leishmanise Canina é causada por população geneticamente homogênea não tendo sido observada nenhuma correlação entre genótipos específicos e o fenótipo da infecção canina / Visceral leishmaniasis is a zoonotic disease in the New World and the domestic dog is the main host of Leishmania infantum . Prior knowledge of the immunopathogenic mechanisms associated with infection by L. infantum is required for the development of vaccines and other control strategies. The overall aim of this thesis was to compare the clinical expression, parasite load, the host immune response and genetic diversity of parasites in dogs naturally infected with L. infantum . This study is a cross - sect ional assessment of ninety - two dogs naturally infected by L. infantum . Infection was confirmed by serology, parasite culture and / or PCR. The etiology was assessed by hsp70 PCR - RFLP and MLEE . We further analyzed clinical signs , immune response by cytokine gene expression, molecular parasite load by qPCR, histological changes in sple nic and hepatic compartments and also L. infantum populations and genotypes through microsatellite analysis. Groups according to the spleen and liver parasite load were defined. Animals with high parasite load had high titers of anti - Leishmania antibodies and more clinical signs. The paras ite load in the spleen was higher than in liver and correlated with disruption of splenic architecture, mainly characterized by white pulp diso rganization. Liver parasite load was correlated with the occurrence of granulomas, degeneration and intensity of the inflammatory infiltrate. We show that the higher parasite load promoted lower gene expression o f IL - 12, IFNγ, TNF, IL - 6, IL - 10 and TGFβ in the spleen and increased expression of CCL2, CXCL8 MAP4K4 in the liver. Genetic analysis of parasites is indicative of polyclonal infection and tissue tropism of some clones, more evident in the analysis of paire d samples ( strain isolated and tissue). We also found l ow genetic variability , in which the majority (96%, 49/51) of the samples was characterized as belonging to POP2, among tree populations previously described by our group. There was no association betw een the genetic variability of the parasites and the clinical, parasitological and immunological parameters. Nevertheless, the data generated by in vitro assays with strains from different populations suggest that there are differences in infectivity betwe en strains with distinct m icrosatellite genotypes. Taken together, these results show that in the region studied Canine Leishmaniasis is caused by genetically homogeneous population without any correlation between specific genotypes and the phenotype of ca nine infection .

Submitted by Nuzia Santos (nuzia@cpqrr.fiocruz.br) on 2016-04-07T19:04:34Z No. of bitstreams: 1 Tese_DIP_SharaReginadaSilva.pdf: 575472 bytes, checksum: 90fbdbc94aef7c2eb888b39541523483 (MD5) / Approved for entry into archive by Nuzia Santos (nuzia@cpqrr.fiocruz.br) on 2016-04-07T19:08:47Z (GMT) No. of bitstreams: 1 Tese_DIP_SharaReginadaSilva.pdf: 575472 bytes, checksum: 90fbdbc94aef7c2eb888b39541523483 (MD5) / Made available in DSpace on 2016-04-07T19:08:47Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Tese_DIP_SharaReginadaSilva.pdf: 575472 bytes, checksum: 90fbdbc94aef7c2eb888b39541523483 (MD5) Previous issue date: 2015 / Fundação Oswaldo Cruz. Centro de Pesquisa Rene Rachou / O presente trabalho avaliou a transmissibilidade de Leishmania spp. para Lutzomyia longipalpis em 136 cães nativos e beagles-sentinelas , vacinados ou não (placebo) com Leish- Tec ® (vacina anti-leishmaniose visceral canina), domiciliados em Porteirinha, município endêmico para leishmaniose visceral, em Minas Gerais. Esses animais foram selecionados a partir da amostra total de cães que compõem o ensaio clínico de fase III que determinou a eficácia da vacina Leish-Tec ® , conforme diretrizes estabelecida s pelo Ministério da Saúde do Brasil. Além da técnica de xenodiagnóstico, e sses cães também foram submetidos aos testes diagnósticos ELISA, RIFI, te ste rápido Kalazar Detect TM e exames de detecção do parasito. Uma tendência de redução da infectividade (p -valor 0,052) foi obser vada no grupo de cães vacinados com Leish-Tec ® que apresentaram resposta sorológi ca positiva ao antígeno vacinal A2. Os testes RIFI, Kalazar Detect TM e xenodiagnóstico apresentar am maior percentual de positividade entre os cães sintomáticos da amostra (p<0,05), quando comparados aos cães assintomáticos, na análise global. Na análise estr atificada e, para o grupo de cães que recebeu vacina, as diferenças se mantiveram para a RIFI e o teste rápido, mas não para o xenodiagnóstico; já para os cães que receberam pl acebo, as diferenças entre grupos clínicos se mantiveram para o xenodiagnóstico e teste rápido, mas não para a RIFI. Nossos resultados sugerem que a Leish-Tec ® possui potencial de redução da in fectividade em cães vacinados e desafiados em área endêmica e que a vacinação com Leish-Tec ® pode contribuir para a redução da transmissão da leishmaniose viscer al canina, desde que utilizada como medida protetiva individual e em conjunto com as dema is estratégias, individuais e coletivas, de prevenção e controle da doença. Com rel ação à diferença de desempenho dos testes diagnósticos entre grupos clínicos, nossos resultados apontam para a necessidade de desenvolvimento de testes mais eficazes no di agnóstico da infecção assintomática por Leishmania e demonstra que essas diferenças in terferem nos resultados e devem ser consideradas na avaliação de ensaios clínicos. / This study evaluated the transmission of Leishmania spp. to Lutzomyia longipalpis in 136 native and beagles sentinel dogs, vaccina ted or not (placebo) with Leish-Tec ® (canine visceral anti-leishmaniasis vaccine), domiciled in Port eirinha, visceral leishm aniasis endemic county in Minas Gerais, Brazil. These animals were sele cted from the total sample of dogs that make up the phase III clinical trial that determined the efficacy of Leish-Tec ® vaccine, according to guidelines established by Brazilia n Ministry of Health. Beside s the xenodiagnosis technique, these dogs were also subjected to the sorological tests ELI SA, IFAT, rapid test Kalazar Detect TM and parasite detection. A tendency of reduction of infectivity (p-value 0.052) was observed in the group of dogs vaccinated with Leish-Tec ® that presented positive serological response to the vaccine antig en A2. IFAT, Kalazar Detect TM and xenodiagnosis showed a higher percentage of positivity among symptomatic dogs (p <0.05) compared to asymptomatic dogs. In stratified analysis, and for the vaccine dogs group, differences remained for the IFAT and the rapid test, bu t not for xenodiagnosis; already for placebo dogs group, the differences between clinical groups re mained to xenodiagnosis and rapid test, but not for the IFAT. Our results suggest that the Leish-Tec ® has the potential to reduce the infectivity of vaccinated and challenged dogs in endemic areas and could contribute to the reduction of transmission of canine visceral le ishmaniasis, since used as an individual protective measure and together w ith other strategies, individual and collective, to prevent and control the disease. Regarding the performance difference of di agnostic tests between clinical groups, our results point to the need for developm ent of more effective tests in the diagnosis of asymptomatic Leishmania infection and shows that these di fferences affect the results and should be considered in ev aluating clinical trials.

Submitted by Ana Maria Fiscina Sampaio (fiscina@bahia.fiocruz.br) on 2016-05-10T16:21:40Z No. of bitstreams: 1 Jessica Mariane Ferreira Mendes Produção... 2016.pdf: 1965926 bytes, checksum: ac5119592b97390470f4914f6fcbddf0 (MD5) / Approved for entry into archive by Ana Maria Fiscina Sampaio (fiscina@bahia.fiocruz.br) on 2016-05-10T16:21:54Z (GMT) No. of bitstreams: 1 Jessica Mariane Ferreira Mendes Produção... 2016.pdf: 1965926 bytes, checksum: ac5119592b97390470f4914f6fcbddf0 (MD5) / Made available in DSpace on 2016-05-10T16:21:54Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Jessica Mariane Ferreira Mendes Produção... 2016.pdf: 1965926 bytes, checksum: ac5119592b97390470f4914f6fcbddf0 (MD5) Previous issue date: 2016 / Fundação Oswaldo Cruz. Centro de Pesquisas Gonçalo Moniz. Salvador, BA, Brasil / Uma vacina efetiva contra a leishmaniose visceral (LV) canina pode contribuir para o controle da doença no homem. Visando o desenvolvimento de uma vacina contra LV canina, antígenos recombinantes de L. infantum foram selecionados em nosso laboratório pelo uso de uma mistura de soros de seres humanos ou cães naturalmente infectados pela L. infantum. Alguns destes antígenos foram testados em diversos protocolos de imunização, incluindo uso de diferentes adjuvantes, em camundongos ou cães. A imunização de camundongos ou cães com um dos antígenos recombinantes (rLci2B) usado isoladamente ou em associação com saponina induziu resposta imune Th2 ou Th1/Th2, respectivamente, não protetoras contra a infecção experimental. Com a determinação da sequência deduzida de aminoácidos notou-se que a maioria dos antígenos selecionados apresenta um segmento com sequência de aminoácidos única (domínio não repetitivo) e segmentos com sequência de aminoácidos com motivos repetitivos (domínios repetitivos). Possivelmente a incapacidade dos antígenos recombinantes de induzir uma resposta imune predominantemente Th1, protetora contra a LV, seria por conta da presença de domínios repetitivos, que favorecem a apresentação antigênica por linfócitos B e, consequentemente, estimulam uma resposta imune Th2. Para avaliar o direcionamento da resposta imune pelos dois tipos de domínio, novas construções de DNA foram concebidas de modo a codificar apenas domínio(s) não repetitivo(s) ou domínio(s) não repetitivo(s) e domínios repetitivos. OBJETIVOS: Produzir quatro proteínas recombinantes com domínios não repetitivos (rLci2-NT-CT, rLci3-NT-CT, rLci10-NT e rLci12-NT-CT) e avaliar a capacidade desses polipeptídios de induzir resposta imune celular in vitro em cães assintomáticos inoculados por via dérmica com L. infantum. MATERIAIS E MÉTODOS: Foram realizadas: a) a subclonagem de construções de DNA (Lci3-NT-CT, Lci10-NT e Lci12- NT-CT) em um plasmídeo apropriado para expressão em Escherichia coli, b) a determinação de condições apropriadas para produção das proteínas recombinantes (rLci2-NT-5R-CT, rLci2-NT-CT, rLci3-NT-2R-CT, rLci3-NT-CT, rLci10-NT-2R e rLci10- NT) c) a purificação das proteínas recombinantes por cromatografia de afinidade e d) avaliação da capacidade dos polipeptídios de induzir estimulação de células mononucleares sangue periférico (PBMC) de cães assintomáticos inoculados por via dérmica com L. infantum. RESULTADOS: Três (rLci2-NT-CT, rLci2-NT-5R-CT, rLci3- NT-CT, rLci3-NT-2R-CT, rLci10-NT e rLci10-NT-2R) dos quatro pares de polipeptídios recombinantes foram expressos, produzidos e purificados. Três antígenos recombinantes (rLci2-NT-5R-CT, rLci2-NT-CT e rLci3-NT-2R-CT) promoveram a linfoproliferação in vitro utilizando PBMC de cães assintomáticos inoculados por via dérmica com L. infantum CONCLUSÕES: Três das seis proteínas produzidas induziram a linfoproliferação, sendo a maior linfoproliferação encontrada para PBMC estimulado com a proteína sem domínios repetitivos (rLci2-NT-CT). Avaliações adicionais são necessárias para comprovar a utilidade destas moléculas em formulação de vacina contra leishmaniose visceral canina. / An effective vaccine against visceral leishmaniasis (VL) dog can help to control the disease in man. Aiming at development of a vaccine against canine VL, recombinant antigens of L. infantum were selected in our laboratory by using a mixture of sera from humans or dogs naturally infected with L. infantum. Some of these antigens were tested in different immunization protocols, including use of different adjuvants in mice or dogs. The immunization of mice or dogs with a recombinant antigens (rLci2B) used alone or in combination with saponin induced Th2 response or Th1 / Th2, respectively, did not protective against experimental infection. With the determination of the deduced amino acid sequence it was noted that most of the antigens selected segment has a unique amino acid sequence (non-repetitive domain) and segments of amino acid sequence with repetitive motifs (repetitive domains). Possibly the inability of recombinant antigens to induce an immune response predominantly Th1 protective against LV would be due to the presence of repetitive domains that promote antigen presentation by B cells and thus stimulate an immune response Th2. To assess the direction of the immune response by two types of domain, new DNA constructs were designed to encode only the domain (s) not repetitive (s) or domain (s) not repetitive (s) and repetitive fields. MATERIALS AND METHODS: Were performed: a) subcloning DNA constructs (rLci3-NT-CT, rLci10-NT and rLci12-NT-CT) into a suitable plasmid for expression in Escherichia coli, b) determining the appropriate conditions for the production of proteins recombinant (rLci2- NT-5R-CT, rLci2-NT-CT, rLci3-NT-2R-CT, rLci3-NT-CT, rLci10-NT-2R and rLci10-NT) c) purification of recombinant proteins by chromatography affinity d) evaluating the ability of polypeptides rLci2-NT-CT, rLci3-NT-CT and rLci10-NT to induce stimulation of peripheral blood mononuclear cells (PBMC) from healthy dogs inoculated dermal with L. infantum. RESULTS: Three (rLci2-NT-CT, rLci2-NT-5R-CT, rLci3-NT-CT, rLci3-NT-2R-CT, rLci10- NT and rLci10-NT-2R) of the four pairs of recombinant polypeptides are expressed, produced and purified. Three recombinant antigens (rLci2-NT-5R-CT, rLci2-NT-CT and rLci3-NT-2R-CT) promoted lymphocyte proliferation in vitro using asymptomatic dogs PBMC inoculated dermal L. infantum CONCLUSIONS: Three of the six proteins produced induced lymphoproliferation, most lymphoproliferation was found to PBMC stimulated with the protein without repetitive domains (rLci2-NT-CT). Additional evaluations are necessary to confirm the utility of these molecules against canine visceral leishmaniasis vaccine formulation

Made available in DSpace on 2016-05-11T13:01:06Z (GMT). No. of bitstreams: 2 monica_barragan_ioc_dout_2016.pdf: 13009899 bytes, checksum: abc5f4810f4467645ebd92d9f74a39e2 (MD5) license.txt: 1748 bytes, checksum: 8a4605be74aa9ea9d79846c1fba20a33 (MD5) Previous issue date: 2016 / Fundação Oswaldo Cruz. Instituto Oswaldo Cruz. Rio de Janeiro, RJ, Brasil / A desnutrição proteica é considerada um fator de risco primário para o desenvolvimento da leishmaniose visceral (LV), contudo, as bases imunológicas desta associação são majoritariamente desconhecidas. Este trabalho pretendeu determinar os efeitos da desnutrição proteica no timo e baço de camundongos BALB/c infectados com L. infantum. Os animais foram submetidos à dieta controle (CP, 14% em proteína) ou baixa em proteína (LP, 4% em proteína). Após sete dias de dieta, cada grupo foi dividido em dois e cada um foi infectado com L. infantum (CPi, e LPi). As dietas foram mantidas após a infecção e os animais foram eutanasiados 14 dias pós-infecção. Os animais LPi mostraram uma desnutrição moderada e uma diminuição significativa no peso do timo e baço, acompanhado de níveis séricos reduzidos de IGF1 e Leptina e de IGF1 hepático obedecendo aos padrões esperados em um quadro de desnutrição proteica. Além disso, animais LPi apresentaram uma carga parasitaria significativamente maior que animais CPi. A desnutrição e infecção induziram danos na arquitetura tímica, gerando alterações na distribuição de laminina e fibronectina, e redução na secreção de varias citocinas e quimiocinas no fluido intersticial tímico tais como: IL-12, CCL5, CXCL12, IGF1, CXCL9 e CXCL10, sugerindo que a entrada de progenitores ao timo e sua maturação intratímica e migração pode estar comprometida nestes animais A análise proteômica deste fluido permitiu gerar um perfil de proteínas secretadas tímicas e revelou a importância de proteínas exossomais na fisiologia do timo, assim como a participação de vias metabólicas como a fosforilação oxidativa e \03B2-oxidação de ácidos graxos na proliferação e diferenciação dos timócitos LPi. O baço, por sua vez, apresentou desorganização tecidual e diminuição no número de folículos, assim como uma redução significativa de moléculas pró-inflamatórias e de moléculas envolvidas na quimiotaxia no fluido intersticial esplênico de animais LPi (IL-1a, IL-1b, IL-2, IL-12, IGF1, CCL5, CXCL12, CXCL9 e CXCL10). Esta diminuição se correlaciona positivamente com a carga parasitaria esplênica incrementada, e pode ser uma causa da mesma. A análise proteômica do fluido intersticial esplênico revelou um aumento na abundância de proteínas relacionadas com estresse oxidativo sugerindo um desequilibro no estado oxidante/anti-oxidante em animais LPi. Observou-se também uma diminuição na abundância de proteínas envolvidas na via das pentoses fosfato e na síntese de purinas indicando potenciais defeitos na proliferação de esplenócitos. A identificação de proteínas envolvidas na resposta pró-inflamatória e quimiotaxia, cuja abundância estava diminuída, reforça os resultados moleculares relatados no grupo LPi. Em síntese, identificaram-se novos elementos na patogênese da LV, tanto no timo quanto no baço, que contribuem ao entendimento do aumento da susceptibilidade a desenvolver LV quando há uma condição desnutrição pré-existente / Protein malnutrition is considered a primary risk factor for the development of visceral leishmaniasis (VL); however, the immunological bases of this association are mainly unknown. This thesis aims to determine the effects of protein malnutrition in the thymus and spleen of BALB/c mice infected with L. infantum. The animals were fed with control (CP, 14% protein) or low-protein (LP, 4% protein) diet. After seven days of diet, each group was divided in two and one of them was infected with L. infantum (CPi, and LPi). The diets were maintained after infection and animals were euthanized after 14 post-infection. LPi animals showed a moderate malnutrition and a significant decrease in thymus and spleen weight. This was accompanied by a reduced serum levels of IGF1 and Leptin, and hepatic IGF1, showing the expected patterns of protein malnutrition. In addition, malnutrition induced a significant increase in the splenic parasite load of infected animals. Malnutrition and infection induced damage to the thymic architecture, causing changes in the distribution of laminin and fibronectin, and a reduction in the secretion of various cytokines and chemokines such as IL-12, CCL5, CXCL12, IGF1, CXCL9 and CXCL10 into the thymic interstitial fluid, suggesting that the entrance of progenitors into the thymus and intrathymic maturation and migration can be compromised in these animals. Quantitative proteomic analysis of this fluid allowed the identification thymic secreted proteins and revealed the importance of exosomal proteins in the thymus physiology. Proteomics also revealed that metabolic pathways such as oxidative phosphorylation and β-oxidation of fatty acids are potentially involved in the proliferation and differentiation of LPi thymocytes. Malnutrition also induced a drastic disorganization of splenic architecture including a severe reduction in the number of follicles, as well as a significant decrease of pro-inflammatory and chemotactic molecules in the splenic interstitial fluid of LPi animals (IL-1a, IL-1b, IL-2, IL-12, IGF1, CCL5, CXCL12, CXCL10 and CXCL9), which is related to the increased splenic parasitic load. Proteomic analysis of splenic interstitial fluid revealed increased abundance of proteins related to oxidative stress suggesting an imbalance in the oxidant/anti-oxidant state in LPi animals. On other hand, proteins with decreased abundance were mainly involved in the pentose phosphate pathway and purine synthesis suggesting potential defects on splenocytes proliferation. Also, a decreased abundance of proteins associated with proinflammatory response and chemotaxis was observed in the splenic interstitial fluid, supporting the molecular data obtained in the LPi group. In summary, we identified new elements in the pathogenesis of VL both in the thymus as the spleen that contribute to the understanding of the increased susceptibility to develop VL when a malnutrition condition pre-exists. / 2100-03-04

Submitted by Ana Maria Fiscina Sampaio (fiscina@bahia.fiocruz.br) on 2016-10-05T18:21:34Z No. of bitstreams: 1 Nanci Derevtsoff Munford Alterações... 2016.pdf: 3140719 bytes, checksum: 5a6dfaa344823e60c8a3fa04f9a40b45 (MD5) / Approved for entry into archive by Ana Maria Fiscina Sampaio (fiscina@bahia.fiocruz.br) on 2016-10-05T18:28:26Z (GMT) No. of bitstreams: 1 Nanci Derevtsoff Munford Alterações... 2016.pdf: 3140719 bytes, checksum: 5a6dfaa344823e60c8a3fa04f9a40b45 (MD5) / Made available in DSpace on 2016-10-05T18:28:26Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Nanci Derevtsoff Munford Alterações... 2016.pdf: 3140719 bytes, checksum: 5a6dfaa344823e60c8a3fa04f9a40b45 (MD5) Previous issue date: 2016-06-20 / Fundação Oswaldo Cruz. Centro de Pesquisas Gonçalo Moniz. Salvador, BA, Brasil / INTRODUÇÃO: Leishmaniose visceral é uma zoonose grave que acomete uma gama de animais. O cão é considerado o principal reservatório urbano da Leishmania infantum e pode ser clinicamente assintomático ou sintomático na infecção. Poucos estudos abordam os aspectos clínicos e histopatológicos na leishmaniose visceral, sobretudo estudos sistemáticos, que fazem descrição detalhada dos achados de histopatologia e façam a correlação desses aspectos na doença. A hipótese da pesquisa é que cães naturalmente infectados com L. infantum apresentam alterações histopatológicas distintas que se relacionam com as manifestações clínicas, tendo significados diagnóstico e prognóstico. OBJETIVO: O objetivo do trabalho foi a descrição sistemática das alterações histopatológicas encontradas nos diversos órgãos de cães com leishmaniose visceral naturalmente infectados, correlacionando com diferentes manifestações clínicas. MÉTODOS: Para este estudo foram coletados amostras e dados provenientes de 58 cães do município de Jequié-Ba, área endêmica para leishmaniose. Os cães foram submetidos a exame clínico, eutanásia e coleta de material para PCR, ELISA e cultura, além de fragmentos de fígado, baço, linfonodo, pele, intestino, rins e pulmões. Os animais foram classificados em assintomáticos, quando apresentaram até dois sinais, e sintomáticos, quando exibiram mais de dois sinais. Cães com positividade simultânea nos testes de cultura esplênica, ELISA e PCR tiveram cortes dos tecidos submetidos a procedimento imunoistoquímico para avaliação da carga parasitária em linfonodo, baço e fígado. Lâminas dos fragmentos obtidos foram avaliadas sob microscopia óptica para análise das alterações. RESULTADOS: Ao todo, nove animais foram classificados como assintomáticos e 49 sintomáticos. Os 58 cães da pesquisa foram positivos em pelo menos um dos testes realizados para diagnóstico da infecção: PCR (n=91,38%), ELISA (n= 84,48%) ou cultura esplênica (n= 34,48%). No fígado, a linfocitose intrassinusoidal moderada se mostrou mais frequente no grupo dos sintomáticos (p=0,008). Nos demais parâmetros hepáticos, os grupos não obtiveram diferenças estatisticamente significantes. No baço, linfonodo, intestino, pele, rins e pulmões, as alterações se comportaram de forma semelhante entre as manifestações clínicas. A maior carga parasitária foi encontrada no baço. CONCLUSÃO: As alterações histopatológicas não mostraram diferenças entre as manifestações clínicas. / INTRODUCTION: Visceral leishmaniasis is a serious zoonosis that affects a range of animals. The dog is considered the main urban reservoir of Leishmania infantum and may be clinically asymptomatic or symptomatic in infection. Few studies address the clinical and histopathological aspects in visceral leishmaniasis, especially systematic studies, which are detailed description of histopathology findings and making the correlation of these aspects of the disease. The hypothesis of the research is that dogs naturally infected with L. infantum have distinct histopathologic changes that relate to the clinical manifestations, diagnosis and prognosis. OBJECTIVE: The objective was the systematic description of histopathology found in the various organs of dogs with visceral leishmaniasis naturally infected, correlated with different clinical manifestations. METHODS: For this study were collected samples and data from 58 dogs in the city of Jequié-Ba, endemic area for leishmaniasis. The dogs underwent clinical examination, euthanasia and collection of material for PCR, ELISA and culture, as well as fragments of liver, spleen, lymph nodes, skin, intestine, kidneys and lungs. The animals were classified as asymptomatic when presented two signs, and symptomatic when exhibited more than two signals. Dogs with positive symptomatology for splenic culture, ELISA and PCR were subjected to cuts tissue immunohistochemical procedure for evaluating the parasite load in the lymph node, spleen and liver. Blades fragments obtained were evaluated by optical microscopy for analysis of changes. RESULTS: In all, nine animals were classified as asymptomatic and 49 symptomatic. The 58 dogs of the survey were positive in one of the tests for the diagnosis of infection: PCR (n = 91.38%), ELISA (n = 84.48%) or splenic culture (n = 34.48%). In the liver, moderate sinusoidal intra lymphocytosis was more frequent in the symptomatic group (p = 0.008). In other hepatic parameters, the groups no revealed statistically significant differences. In spleen, lymph nodes, intestines, skin, kidneys and lungs, the changes are similarly between the clinical manifestations. The largest parasitic load was found in the spleen. CONCLUSION: The histopathological changes showed no differences between the clinical manifestations

A leishmaniose visceral americana (LVA) ou Calazar é um exemplo de doença infecciosa reemergente, cuja urbanização a uma das principais marcas da alteração de seu padrão epidemiológico de ocorrência. No Brasil, a infecção por L. chagasi tem se comportado de forma epidêmica em diversas regiões e as estratégias de controle não tem sido efetivas na contenção da propagação da doença. Para melhor compreensão deste processo, estudaram-se associações da imunidade tardia, medida por meio do teste de intradermorreação de Montenegro (IDRM), com fatores demográficos, sociais, econômicos e ambientais em área urbana com alta forca de transmissão. A análise dos dados foi feita tendo como base o modelo de regressão de Poisson ajustado pelo qui-quadrado, onde foram calculadas as razões de prevalência (RP) e seus respectivos intervalos de 95% de confiança (IC). Foi detectada maior prevalência da positividade a IDRM para o sexo masculino (RP = 1,32 IC: 1,11 1,56), com o aumento da idade (RP = 1,18 IC: 1,10 1,26), com a posse de cao por período de três anos ou mais (RP = 1,26 IC: 1,01 1,56) e com presença de fossa rudimentar no domicilio (RP = 1,33 IC: 0,99 1,77). Indivíduos com maior escolaridade (RP = 0,81 IC; 0,66 0,99), convivendo com três ou mais pessoas no domicilio (RP = 0,66 IC; 0,47 0,93), com história de Calazar no domicílio (RP = 0,40 IC: 0,16 0,99) e com parede com tijolo sem reboco (RP= 0,79 IC: 0,64 0,98) apresentaram prevalências mais baixas mostrando possível proteção infecção anterior. Os resultados obtidos podem contribuir para o melhor entendimento do dinamismo da doença em contexto urbano, permitindo melhor direcionamento das estratégias de intervenção. / The American visceral leishmaniasis (AVL) or kalazar is an example of reemerging infectious disease, its urbanization being one of the most typical feature of its new epidemiologic pattern of occurrence. In Brazil, epidemics of infection by L. chagasi have occurred in several regions and control strategies have not been effective to contain the spread of the disease. To better understand this process, we have studied the association between cellular immunity, measured by the Montenegro Skin Test (MST), and demographic, social, economic and environmental factors in an urban area with high force of transmission. Statistical analysis was performed using Poisson regression models adjusted by the chi-square. Associations between variables were expressed by prevalence ratios (PR) and their respective 95% confidence intervals (CI). Higher prevalence of positivity to MST was detected among male participants (PR = 1.32 CI: 1.11 1.56), for each ten years increase of age (PR = 1.18 CI: 1.10 1.26), among subjects who owned dogs for three or more years (PR = 1.26 CI: 1.01 1.56) and for those who lived in households with precarious sewage system (PR = 1.33 CI: 0.99 1.77). Individuals with higher literacy (PR = 0.81 CI: 0.66 0.99), living in households where a case of AVL had occurred before (PR = 0.40 CI: 0.16 0.99), or in houses with walls made of bricks without finishing (PR = 0.79 CI: 0.64 0.98), or with three or more persons (PR = 0.66 CI: 0.47 0.93), showed lower prevalence of positivity to MST, indicating that these factors might have protected for earlier infection. These results might contribute to a better understanding of the behavior of the infection in urban context, and maybe useful for directing intervention to high-risk groups.

Este é um estudo ecológico misto onde o perfil de distribuição de chuvas e das variações térmicas foi relacionado à variação sazonal das taxas de incidência de leishmaniose visceral em vinte municípios brasileiros de transmissão intensa da doença, no período de 2001 a 2008. O objetivo foi identificar similaridades e diferenças entre os municípios estudados quanto à tendência temporal e sazonalidade da doença e à possível relação entre variações climáticas e a distribuição sazonal da doença. Os dados de incidência de leishmaniose visceral foram obtidos do Sistema de Informação de Agravos de Notificação (Sinan), os dados demográficos foram obtidos do Departamento de Informática do Sistema Único de Saúde (DATASUS), os dados pluviométricos e de temperatura foram obtidos do Sistema de Monitoramento Agrometeorológico do Ministério da Agricultura (AGRITEMPO). Os resultados são apresentados graficamente e mostram que a distribuição sazonal da incidência e períodos prováveis de transmissão são diferentes em vários municípios e acompanham as diferenças climáticas, sugerindo que as intervenções que visem diminuir a incidência devem ser pontuais, obedecendo às características de cada município. / This is a mixed ecological study where the distribution profile of rainfall and temperature variations were related to seasonal variation in the rate of incidence of visceral leishmaniasis in twenty highly endemic municipalities in the period from 2001 to 2008. The purpose was to identify similarities and differences between the municipalities studied concerning disease trends and seasonal patterns and regarding the potential relationships between climatic variations and the seasonal distribution of the disease. Incidence data on visceral leishmaniasis were obtained from the Sistema de Informação de Agravos de Notificaçao (Sinan), demographic data were obtained from the Departamento de Informática do Sistema Único de Saúde (DATASUS), the temperature and rainfall data were obtained from agrometeorological monitoring system of the Ministry of Agriculture (AGRITEMPO). The results are presented graphically and show that the seasonal distribution of the incidence and probable transmission periods are different in several municipalities and accompanying climatic differences, suggesting that interventions aimed at reducing the incidence must be punctual, according to the characteristics of each municipality.