Made available in DSpace on 2016-06-07T17:12:19Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2015-07-30. Added 1 bitstream(s) on 2016-06-07T17:16:58Z : No. of bitstreams: 1 000863716.pdf: 3896142 bytes, checksum: 956d75511f2ff2d224cbafdf08facf84 (MD5) / Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de São Paulo (FAPESP) / Animais silvestres são importantes fontes de infecção de leishmanioses e doença de Chagas, para espécies domésticas e o homem. A PCR com emprego de iniciadores da região ITS1 associando-se clonagem e seqüenciamento de DNA alvo permite caracterizar espécies parasitas. Pelo uso de imunorreagentes específicos também possibilitam a investigação da infecção natural entre diferentes espécies de animais silvestres para ambas enfermidades. Foram avaliados isolados flagelares em meio LIT (hemocultura) de 103 animais procedentes do Centro de Conservação da Fauna Silvestre de Ilha Solteira/SP e 118 amostras de soros. Em ensaios imunoenzimáticos utilizaram-se as proteínas recombinantes CRA e FRA de Trypanosoma cruzi e rK39 de Leishmania infantum. Conjugados espécie-específicos foram produzidos para diferentes espécies e empregados no teste de ELISA indireto e a proteína A conjugada foi avaliada para testes sorológicos com emprego da rK39. Soros de cães reagentes para leishmaniose visceral e de humanos para doença de Chagas foram testados para verificar a reatividade contra estas proteínas. Observou-se na hemocultura, flagelados para as seguintes espécies de vida livre: cotia, gambá e tatu-galinha; espécie em cativeiro: bugio-preto. Produtos foram amplificados pela PCR (585 pb) a partir de hemocultura em animais de vida livre e de um animal em cativeiro (650 pb) em amostra de sangue total. Os amplificados foram inseridos em vetor de clonagem e sequenciados resultando-se em 97% de similaridade com T. cruzi para gambá e cotia (acesso nº: AF362825.1) e tatu-galinha (acesso nº: GQ258720.1) com 98%. No isolado de bugio-preto houve 90% de similaridade com T. minasense (acesso nº: AB362411.1). Estes resultados apresentam o primeiro relato destas espécies parasitárias de importância epidemiológica na área de estudo e demonstraram vantagem ao associar-se a hemocultura às técnicas moleculares para caracterização de... / Wild animals are important sources of infection of leishmaniasis and Chagas disease to domestic animals and humans. The employment of PCR with ITS1 primers plus cloning and sequencing target DNA allows to characterize parasitic species. By using specific immunoreagents also enable investigation of natural infection between different species of wild animals for both diseases. Flagellate isolates in LIT medium (blood culture) were assessed of 103 animals coming from the Wildlife Conservation Center of Ilha Solteira -SP and 118 serum samples. In immunoassays, recombinant proteins CRA and FRA fromTrypanosoma cruzi and rK39 from Leishmania infantum were used. Species -specific conjugates were produced for different animal species and used in indirect ELISA and the protein A conjugate was evaluated for serological tests with use of rK39. Sera from dogs reagents for visceral leishmaniasis and for humans reagents for Chagas disease were tested for reactivity against these proteins. Flagellate protozoa were observed in LIT culture medium, at the following free-living species: common agouti (D. agouti), white-eared opossum (D. albiventris) and nine-banded armadillo (D. novemcinctus); and from a captive black howler monkey (A. caraya). Products were amplified by PCR (585bp) from blood culture in wild animals and from an animal in captivity (650bp) in whole blood sample. The amplified products were inserted into cloning vector and sequenced resulting in 97% similarity with T. cruzi to white-eared opossum an common agouti (acess number: AF 362825.1) and 98% to nine-banded armadillo (acess number: GQ 258720.1). The isolated from black howler monkey was 90% similar to T. minasense (acess number: AB 362411.1). The results present the first report of these parasitic species of epidemiological importance in the studied area and demonstrated advantage in the association of blood culture to molecular techniques to characterize flagellates. For ...

Submitted by MAYARA LÚCIA DEL CISTIA null (mayara_ldc@hotmail.com) on 2016-06-22T17:02:08Z No. of bitstreams: 1 DissertaçãoMestrado2016_MAYARA_LUCIA_DEL_CISTIA.pdf: 6292986 bytes, checksum: 65cf54ead8c847cc5c6ad551395790c9 (MD5) / Approved for entry into archive by Ana Paula Grisoto (grisotoana@reitoria.unesp.br) on 2016-06-23T19:19:30Z (GMT) No. of bitstreams: 1 delcistia_ml_me_arafcf.pdf: 6292986 bytes, checksum: 65cf54ead8c847cc5c6ad551395790c9 (MD5) / Made available in DSpace on 2016-06-23T19:19:30Z (GMT). No. of bitstreams: 1 delcistia_ml_me_arafcf.pdf: 6292986 bytes, checksum: 65cf54ead8c847cc5c6ad551395790c9 (MD5) Previous issue date: 2016-05-31 / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior (CAPES) / As leishmanioses são um grupo de doenças causadas pelo gênero Leishmania e colocam em risco 350 milhões de pessoas no mundo. Após o sequenciamento do genoma de algumas espécies de Leishmania spp., estudos moleculares de suas formas celulares (amastigotas e promastigotas) trouxeram informações importantes sobre sua biologia e potencial aplicação no aperfeiçoamento ou desenvolvimento de técnicas diagnósticas e terapêuticas. Nesse contexto, este projeto visou avaliar o gene LinJ.36.419 de Leishmania infantum (syn. Leishmania chagasi) e seu produto quanto a potencial aplicação no dsenvolvimento de novas abordagens diagnósticas. Ensaios de PCR quantitativa mostraram que a expressão deste gene é maior em formas amastigotas, estágio responsável pela manifestação da doença, podendo corresponder a um potencial marcador diagnóstico. Um fragmento de 255 aminoácidos da proteína Lc36 foi caracterizado quanto ao seu potencial antigênico utilizando ensaio imunoenzimático (ELISA). Os resultados mostraram especificidade de 74% e sensibilidade de 78% (99% de confiança), com acurácia de 76%, em uma população escolhida randomicamente. Análises adicionais mostraram reação cruzada pouco significativa para soro de cães infectados com Leptospira interrogans e Toxoplasma gondii, e revelaram reação cruzada contra soro de cães infectados por Babesia canis e Ehrlichia canis, todos organismos infecciosos comuns em cães. Análises de bioinformática mostraram que a proteína Lc36 possui um domínio denominado DNA polimerase sigma (COG5260) comum a vários organismos, associado a atividades de replicação, recombinação e reparo de ácidos nucléicos, o qual pode ser responsável pelas reações cruzadas observadas. Dessa forma, outro fragmento (297 aminoácidos) da proteína Lc36, sem a região de domínio conservado, foi expresso para nova caracterização do potencial antigênico com o objetivo de melhorar a especificidade do teste em estudo para aplicação em diagnóstico sorológico de leishmaniose visceral canina. Adicionalmente, bons resultados foram obtidos com ensaios para avaliar a potencial aplicação do gene Lc36 em diagnóstico molecular de leishmaniose visceral por meio do par de oligonucleotídeos RT36 específicos para L.infantum. Os ensaios mostraram que a reação foi capaz de detectar cerca de 5 células do parasita, revelando elevada sensibilidade do teste. Dessa forma, ambos os testes avaliados neste trabalho se mostraram promissores e serão explorados em projetos futuros. / Leishmaniasis are diseases caused by Leishmania genus protozoan and endanger 350 million people worldwide. After genomic sequencing of Leishmania spp., molecular studies of their cycle forms (amastigotes and promastigotes) brought important information, which can contribute to the development of new diagnostic approaches and treatments. In this study we evaluated the potencial application of the Leishmania infantum (syn. Leishmania chagasi) gene Lc.36.4190 and its encoded protein for development of new diagnostic approaches. Quantitative PCR assays showed that the gene is more expressed in intracellular amastigotes, the stage related to the clinical manifestation of these diseases, thus presenting potential to be a diagnostical target. We evaluated antigenic features of a 255 aminoacids fragment of the Lc36 protein using immunoenzimatic assay (ELISA). The results showed specificity of 74% and sensibility of 78% (99% of confidence) and accuracy of 76%, in a randomically chosen population. Additional analysis showed low cross-reaction against Leptospira interrogans and Toxoplasma gondii, and showed cross-reaction against Babesia canis and Ehrlichia canis, all infective organisms common in dogs. Bioinformatics analysis showed that the protein Lc36 contains one DNA polymerase sigma domain (COG5260) found on several organisms, being related to nucleic acid replication, recombination and repair, and might be related to the crossreactions observed. Thus, another fragment (297 aminoacids) of the Lc36 protein, without the conserved domain region, was expressed for a new antigenic characterization to improve the specificity of the canine visceral leishmaniasis serological test. Moreover, good results were obtained on experiments performed to evaluate the potential application of the Lc36 gene on molecular diagnostics using a L. infantum specific pair of primers, RT36. The assays detected approximately 5 parasites, which displays a good sensibility result. Therefore, both serological and molecular tests evaluated in this study are promising and will be explored in future studies.

Submitted by CRISTIANE BECK null (cristiane.beck@unijui.edu.br) on 2016-06-28T00:42:01Z No. of bitstreams: 1 Tese completa biblioteca (1).pdf: 845254 bytes, checksum: 6e900872a3cf5efd5aa8d3ac1ff2985d (MD5) / Rejected by Ana Paula Grisoto (grisotoana@reitoria.unesp.br), reason: Solicitamos que realize uma nova submissão seguindo a orientação abaixo: O arquivo submetido está sem a ficha catalográfica. A versão submetida por você é considerada a versão final da dissertação/tese, portanto não poderá ocorrer qualquer alteração em seu conteúdo após a aprovação. Corrija esta informação e realize uma nova submissão contendo o arquivo correto. Agradecemos a compreensão. on 2016-06-29T14:40:22Z (GMT) / Submitted by CRISTIANE BECK null (cristiane.beck@unijui.edu.br) on 2016-06-30T16:18:06Z No. of bitstreams: 1 Tese completa biblioteca.pdf: 1543432 bytes, checksum: 57e5b0af047f27b0a54c7540e57780b4 (MD5) / Approved for entry into archive by Juliano Benedito Ferreira (julianoferreira@reitoria.unesp.br) on 2016-06-30T19:32:07Z (GMT) No. of bitstreams: 1 beck_c_dr_bot.pdf: 1543432 bytes, checksum: 57e5b0af047f27b0a54c7540e57780b4 (MD5) / Made available in DSpace on 2016-06-30T19:32:07Z (GMT). No. of bitstreams: 1 beck_c_dr_bot.pdf: 1543432 bytes, checksum: 57e5b0af047f27b0a54c7540e57780b4 (MD5) Previous issue date: 2016-06-03 / Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de São Paulo (FAPESP) / A Leishmaniose Visceral é uma doença infecciosa, de caráter zoonótico, emergente e de notificação obrigatória. No Brasil tem como agente o protozoário Leishmania infantum chagasi, e o principal reservatório é o cão (Canis familiaris). A transfusão sanguínea é muito utilizada na rotina da clínica, entretanto está associada a transmissão de doenças infecciosas. O objetivo deste estudo foi avaliar os efeitos do tratamento com a luz visível associada a ftalocianina de cloro-alumínio na inativação da Leishmania infantum chagasi em sangue canino, quando inoculados em hamsters (Mesocricetus auratus). Foram preparados 3 grupos experimentais compostos por 6 hamsters cada. O grupo controle recebeu sangue negativo para Leishmania, o grupo doença foi inoculado com sangue parasitado com Leishmania infantum chagasi e o grupo tratamento recebeu sangue parasitado tratado com luz visível associada a ftalocianina de cloro-alumínio. Os animais foram monitorados por 180 dias e então submetidos a avaliação clínica. Em seguida os animais foram anestesiados para a coleta de sangue por meio de punção intracardíaca e procedendo-se assim a eutanásia. O sangue foi colocado em microtubos e o soro separado por centrifugação e acondicionado a -30ºC, até a realização do teste de aglutinação direta. Após procedeu-se a coleta do fígado e baço para a realização da histopatologia. Outra parte destes órgãos e a medula óssea foram acondicionados em tubos livres de DNAse e RNAse, congelados a -30ºC até a realização da PCR e qPCR. Impressões do fígado e baço foram feitas em lâminas para a microscopia para verificar a presença das formas amastigotas do parasita. Após 180 dias os animais não apresentaram sinais clínicos e os exames sorológicos e parasitológicos foram negativos. Quanto ao exame macroscópico, alguns animais apresentaram hepato e esplenomegalia, já na análise histopatológica nenhum tecido analisado demonstrou formas amastigotas do parasita. Na avaliação da PCR o baço e a medula óssea de todos os hamsters, dos grupos doença e tratado, apresentaram amplificação da Leishmania infantum chagasi. Na qPCR ocorreu uma significativa diminuição (P<0,01) na parasitemia quando comparado ao grupo tratado com a luz visível associada a ftalocianina de cloro-alumínio, com o grupo que recebeu sangue parasitado sem tratamento. Com esses resultados é possível concluir que a luz visível associada a ftalocianina de cloro-alumínio reduz a parasitemia da Leishmania infantum chagasi em sangue canino. / Visceral Leishmaniasis is an emerging zoonotic infectious disease that requires mandatory reporting. In Brazil, it is caused by the protozoan Leishmania infantum chagasi, with dogs as main reservoir (Canis familiaris). Blood transfusion is frequently used in clinical routine, however it is associated with the transmission of infectious diseases. The aim of this study was to evaluate the effects of treatment with visible light associated with chloro-aluminium phthalocyanine on the inactivation of Leishmania infantum chagasi in canine blood, when inoculated in hamsters (Mesocricetus auratus). Three experimental groups consisted of six hamsters each. The control group received blood negative for L. infantum chagasi, the diseased group was inoculated with blood infected with L. infantum chagasi, and the treatment group received infected blood previously subjected to therapy with visible light associated with chloroaluminium phthalocyanine. The animals were observed for 180 days and then subjected to clinical evaluation. Then the animals were anesthetized for blood collection through intracardiac puncture and were euthanized. The blood was placed into microtubes and the serum was separated by centrifugation and stored at -30 ° C until the direct agglutination test was performed. After, liver and spleen collection was performed to histopathological examination. Another part of these organs and bone marrow were placed in tubes DNase and RNase free, and frozen at -30°C until the PCR and qPCR were performed. Imprints of liver and spleen were performed on slides for microscopy to verify the presence of amastigotes of the parasites. After 180 days the animals showed no clinical signs and serologic and parasitological tests were negative. During pathological examination, some animals showed hepatomegaly and splenomegaly; under microscopic analysis, any tissue showed amastigote forms of the parasite. In the PCR evaluation of spleen and bone marrow, all hamsters from diseased and treated groups showed amplification of Leishmania infantum chagasi. Results from q-PCR revealed a significant decrease (P <0.01) in the number of parasites in the group inoculated with blood subjected to chloro-aluminium photodynamic therapy, compared to the group inoculated with parasitized blood that had not been subjected to photodynamic therapy. With these results it is possible to conclude that visible light associated with chlorine-aluminum phthalocyanine reduces parasitaemia of Leishmania infantum chagasi in canine blood. / FAPESP: 2014/03353-4

Made available in DSpace on 2016-09-27T13:39:59Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2015-12-04. Added 1 bitstream(s) on 2016-09-27T13:45:08Z : No. of bitstreams: 1 000870615_20170104.pdf: 317584 bytes, checksum: 6a269491df3512a27244ef461e746baa (MD5) Bitstreams deleted on 2017-01-06T13:21:19Z: 000870615_20170104.pdf,. Added 1 bitstream(s) on 2017-01-06T13:22:02Z : No. of bitstreams: 1 000870615.pdf: 515774 bytes, checksum: 03bc759e34cba0d37722957c82943ef6 (MD5) / Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de São Paulo (FAPESP) / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior (CAPES) / Visceral leishmaniasis (VL) is a chronic disease that can be fatal to humans and dogs. The disease is caused by the intracellular parasite Leishmania infantum and is transmitted by the bite of the sandfly (phlebotomines). In dogs, VL is observed as an intense chronic inflammatory reaction in the liver, spleen, skin, bone marrow and lymph nodes. Arginase activity is important in VL because an increase of this enzyme may contribute to the multiplication of the parasite and a reduction of nitric oxide (NO) synthesis, predisposing a macrophage to infection. Prostaglandin E2 (PGE2) can play a regulatory role in the production of tumor necrosis factor (TNF-α) and interleukin-10 (IL-10), however, there have been no studies in dogs with LV. This study aimed to evaluate the arginase activity in adherent macrophages cultivated from the lymph nodes of 18 healthy and 23 naturally infected dogs and to examine levels of NO and PGE2 in the supernatant of these cultures. The regulatory effect of PGE2 on the production of TNF-α and IL-10 was also evaluated in supernatants of total lymph node leukocytes cultures. These results help to clarify the mechanisms of the immune response in CVL. / FAPESP: 2013/066849

Made available in DSpace on 2016-09-27T13:40:02Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2015-02-02. Added 1 bitstream(s) on 2016-09-27T13:45:12Z : No. of bitstreams: 1 000870506_20170202.pdf: 558799 bytes, checksum: a8949d82d1af332f8d470d4406c88690 (MD5) Bitstreams deleted on 2017-02-03T10:35:37Z: 000870506_20170202.pdf,. Added 1 bitstream(s) on 2017-02-03T10:36:27Z : No. of bitstreams: 1 000870506.pdf: 1163684 bytes, checksum: 1bf926a3e051e1f07e34630ec6dfbd44 (MD5) / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior (CAPES) / Canine visceral leishmaniasis (CVL) is a zoonosis of great epidemiological relevance. Infected dogs usually present nonspecific clinical and laboratory alterations that hampers the diagnosis of the disease in routine screening, and the use of techniques with higher sensitivity and sensibility, such as the detection of the parasite by polymerase chain reaction (PCR), are often necessary. Among the nonspecific alterations, anemia is one of the most frequently found, but the mechanism underlying its occurrence is still under dispute. Oxidative stress, the imbalance between oxidants and antioxidants, has been recently incriminated as one of the possible triggers of anemia in CVL. Here, we investigated the putative relationships between parasite load and markers of oxidative stress and hematologic, biochemical and clinical alterations in dogs naturally infected with Leishmania spp. Markers of oxidative stress included albumin, uric acid, bilirubin, total antioxidant capacity (TAC), total oxidant capacity (TOC), oxidative stress index (TOC/TAC) and serum and packed red cells Thiobarbituric acid reactive substances (TBARS). Additional laboratory analysis included complete blood count (CBC) and biochemical profile. Observation of clinical alterations was scored as present or absent. Quantitative PCR (qPCR) of tissue samples of skin, conjunctiva, whole blood and packed white cells was used to estimate tissue-specific parasite load. In order to represent the total parasite load (i.e., the parasitism across different analyzed tissues), we applied a principal components analysis to the matrix of tissue-specific qPCR results to create a single synthetic variable that captures the information content present in the four different original variables. We found no significant associations between hematologic parameters and parasite load, and previously reported alterations such as sample hemolysis or icteric serum were not observed. However, significant differences

Made available in DSpace on 2014-12-17T14:03:28Z (GMT). No. of bitstreams: 1 AngelaPC.pdf: 1566185 bytes, checksum: 7d1058ec264f2b220826cdd6e4419f1f (MD5) Previous issue date: 2007-10-23 / The Visceral Leishmaniose (LV) disease is endemic in some places in Brazil. It is caused by the protozoa Leishmania chagasi, being transmitted for vector, the phlebotomies, Lutzomyia longipalpis. In virtue of the expansion of the illness in Rio Grande do Norte, it is necessary to evaluate the determinative ambient factors in the proliferation of the vector for better control of the illness. The variable rainfall and the social variables had been analyzed using space regression with two models and the ambient variable of ZANE and the variables analyzed in 205 houses in the cities of Natal, Extremoz, N?sia Floresta, S?o Gon?alo do Amarante, S?o Jose do Mipibu, Parnamirim and Maca?ba the Person and ML Chi-square were used . The analyses had shown that high rainfall, plain relief, the forest, the humid tropical climate the activities of production culture of sugar cane and fruit culture and the presence of bovines increase the risk of the LV. The work showed that it has space aggregation and that ambient factors influence in the LV in the State / A Leishmaniose Visceral (LV) ? uma doen?a end?mica em algumas regi?es do Brasil causada pelo protozo?rio Leishmania chagasi, sendo transmitida por vetor, o flebotom?neo, Lutzomyia longipalpis. Em virtude da expans?o da doen?a no Rio Grande do Norte, ? necess?rio avaliar os fatores ambientais determinantes na prolifera??o do vetor para melhor controle. Foram analisadas as vari?veis pluviom?tricas e sociais utilizando a regress?o espacial com dois modelos. Para as vari?veis ambientais do Zoneamento Agroecol?gico do Nordeste e as analisadas nos munic?pios de Natal, Extremoz, N?sia Floresta, S?o Gon?alo do Amarante, S?o Jos? do Mipibu, Parnamirim e Maca?ba, onde foram georeferenciadas 205 casas, utilizando-se o coeficiente de Pearson e tamb?m o qui-quadrado para as primeiras. Os resultados mostraram que alta pluviosidade, relevo plano, a presen?a de floresta, o clima tropical ?mido as atividades de produ??o cultivo de cana de a??car e fruticultura e a presen?a de bovinos aumentam o risco da LV. Foi confirmada que h? agrega??o espacial e que fatores ambientais influenciam na LV no Estado

Made available in DSpace on 2014-12-17T14:03:39Z (GMT). No. of bitstreams: 1 PauloRPN_DISSERT.pdf: 1361148 bytes, checksum: 4572b4a963991f34258d766f8d1c322f (MD5) Previous issue date: 2012-04-23 / Conselho Nacional de Desenvolvimento Cient?fico e Tecnol?gico / Iron is an essential element for many cellular functions, including the immune response against intracellular pathogens. In this study, we aimed evaluate the effect of iron on IRP2, IFN-?, TNF-?, IL-6, IL-10, MIG and IP10 expression in PBMC and assess the effect of the spleen parasite load on the expression of these genes in the spleen of L. infantum naturally infected dogs. Blood sample from 7 DTH+ donor was collected and PBMC was obtained. The cells were cultivated in absence (iron chelator desferroximane, DFO 10 ?M supplemented media) or in presence of iron (hemin 6 mM) for 1 h, followed by stimulation with Leishmania infatum antigen for 4 h. 44 dog spleen samples were obtained and parasite load in this organ was determinate by qPCR. Gene expression was analyzed by qPCR and cytokine production quantified by flow cytometry. In antigen stimulated cells, genes involved in immune response are significantly more expressed in presence of iron. T CD4+ and TCD8+ lymphocytes produces IFN-?, TNF-? and IL-10 possibly in iron dependent pathway. Monocytes antigen stimulated reduced TNF-?, IL-6 and IL-10 production in presence of iron. We found spleen of infected dogs IRP2 expression increases according to parasite load in that organ, while an inverse profile was found for IFN-?, TNF-? e IL-10 expression. These results suggest that T lymphocytes depends on iron to produce IFN-?, TNF-? and IL-10, while iron seems to inhibit cytokine production in monocytes. So, we propose an immunoregulatory mechanism carried out by iron during L. infantum infection in humans and dogs / O ferro ? um elemento essencial para diversas fun??es celulares, incluindo a resposta imune a pat?genos. O objetivo deste trabalho foi avaliar o efeito do ferro sobre a express?o dos genes IRP2, IFN-?, TNF-?, IL-6, IL-10, MIG e IP10 em c?lulas mononucleares de sangue perif?rico (CMSP) humano e examinar o efeito da carga parasit?ria espl?nica sobre a express?o destes genes no ba?o de c?es naturalmente infectados por L. infantum. Coletou-se amostras de sangue perif?rico de 7 indiv?duos DTH+ e obteve-se as CMSP. As c?lulas foram cultivadas na aus?ncia (quelante deferoxamina 10 ?M) ou presen?a de ferro (Hemina 6 mM) por 1 hora seguido de estimula??o com ant?geno de Leishmania infantum por 4 horas. Obteve-se o ba?o de 44 c?es e determinouse a carga parasit?ria neste ?rg?o por qPCR. A express?o g?nica foi avaliada por qPCR e a produ??o de citocinas foi quantificada por citometria de fluxo. Encontramos que na presen?a de ferro a express?o de genes envolvidos na resposta imune ? significativamente aumentada em CMSP. Linf?citos T CD4+ e TCD8+ produzem IFN-?, TNF-? e IL-10 possivelmente por uma via dependente de ferro. Em mon?citos a produ??o de TNF-?, IL-6 e IL-10 foram reduzidas em c?lulas estimuladas e cultivadas na presen?a do metal. Foi visto que no ba?o de c?es a express?o de IRP2 aumenta de acordo com a carga parasit?ria, sendo o inverso encontrado para IFN-?, TNF-? e IL-10. Os resultados sugerem que linf?citos T dependem de ferro para produzir IFN-?, TNF-? e IL-10, enquanto em mon?citos o ferro parece ter efeito inibit?rio sobre a produ??o de citocinas, sugerindo um efeito imunomodulat?rio para o ferro em humanos e c?es durante a leishmaniose visceral

Made available in DSpace on 2014-12-17T14:03:41Z (GMT). No. of bitstreams: 1 MagdaFDC.pdf: 1127289 bytes, checksum: e8f867febd165499040c2d067e137209 (MD5) Previous issue date: 2005-02-23 / Coordena??o de Aperfei?oamento de Pessoal de N?vel Superior / No Brasil, a Leishmania chagasi ? a esp?cie que causa a leishmaniose visceral (LV). A Leishmania tem a capacidade de causar um estado de parasitismo intracelular nos macr?fagos. A destrui??o dos parasitas, tanto no in?cio da infec??o, como na fase tardia, depende da ativa??o de macr?fagos por citocinas. Leishmania evade da resposta imunol?gica do hospedeiro e sobrevive sem o macr?fago durante a doen?a. A infec??o por Leishmania chagasi pode induzir hepatites, independente da co-infec??o com v?rus de hepatites (A-E). A infec??o por GBV-C est? sendo associada com prote??o ? progress?o da doen?a, e aumento da sobreviv?ncia em indiv?duos HIV-1 soro positivos. Neste estudo, objetivou-se avaliar se a infec??o subcl?nica por Leishmania Chagasi depende da modula??o de outros pat?genos dentre eles o v?rus da hepatite G. Um total de 322 indiv?duos, residentes em ?reas end?micas para LV e um total de 82 pacientes de banco de sangue participaram deste estudo. Usando a t?cnica de RT-PCR seguida do sequenciamento do fragmento da PCR da regi?o 5 NTR e submetendo-se os dados obtidos a um banco de genes (BLAST) para uma an?lise comparativa de seq??ncias do Genebank obteve-se uma identidade de 98% do clone GBV1 com o isolado 34,5 da hepatite G v?rus, 5 -UTR, parcial seq??ncia (AF489995. 1). Dentre os fen?tipos avaliados, DTH+, DTH-, e LV constatou-se uma maior preval?ncia do fen?tipo DTH+ nos indiv?duos GBV-C positivos se comparados com DTH- e LV( DTH+ 57%, DTH- 10%,LV 33%).Um subgrupo de 4 indiv?duos de fen?tipo LV e positivos para GBV-C no ano de 1996 foi submetido a novas coletas em 2004. An?lises bioqu?micas de enzimas,AST,ALT , YGT,LDH, Fosfatasse Alcalina e bilirrubinas foram realizadas, bem como, dosagens de marcadores de outras hepatites.Constatou-se que as dosagens bioqu?micas n?o sofreram altera??es significativas e que os pacientes positivos no ano de 1996 para GBV-C; no ano de 2004 apresentaram HVAG positivo, com marcadores negativos, para hepatite B e C. Sugerimos uma poss?vel intera??o do v?rus da hepatite G com pacientes do fen?tipo LV e DTH+, com poss?vel ativa??o da resposta imune celular

Made available in DSpace on 2014-12-17T14:03:42Z (GMT). No. of bitstreams: 1 JoseFlavioVC.pdf: 1066045 bytes, checksum: 95695454c994be62f483dac7ee237cd8 (MD5) Previous issue date: 2005-02-28 / Coordena??o de Aperfei?oamento de Pessoal de N?vel Superior / Canine Visceral Leishmania (CVL) is an important zoonotic disease that has a world wide distribution and has a large impact on public health on the American Continent, especially in Brazil, where the nature of endemic diseases in humans affects a large part of the nation. The influence of the prevalence of CVL in the increased rate of human cases in endemic areas and in the unleashing of epidemic outbreaks shows the need for a more profound understanding, that would generate significant advances in the current measures used to control the reservoirs of sickness that are practiced by the Programa Nacional de Vigil?ncia e Controle da Leishmaniose Visceral. The present work describes and compares the clinical-laboratorial and histopathological findings of twenty-three dogs that were naturally infected by Leishmania chagasi, from endemic areas in metropolitan Natal, Rio Grande do Norte, Brazil. These animals, that were selected and given physical and serological exams (IFI and ELISA rK-39), were classified according to the degree of clinical severity and had blood samples drawn (whole blood and serum) for a complete hemogram and a coagulogram to be done as well as biochemical tests for kidney and liver function. The confirmation of infection by L. chagasi was done after the euthanasia of the animals, through the direct demonstration of the parasite in the impression of the spleen and liver crowned with GIEMSA and through a cultivation by means of NNN/Schneider. According to the clinical evaluation, the animals were classified as asymptomatic (7), oligosymptomatic (7) and polysymptomatic (9). Among the animals that were chosen to be autopsied, there were 2 asymptomatic, 3 oligosymptomatic and 3 polysymptomatic, for the purpose of studying their histopathology, having collected fragments of the spleen, liver, kidneys and skin and were fixed in 10% tamponed formol. The comparison between the average parameters of the clinical-laboratory tested animals in the groups was done through the Student t test (a<0.05). The main clinical signals observed were lymphadenomegaly, alopecy, dermatitis, exfoliation, cutaneous ulcers, onicogriphosis and emaciation. The main clinical-laboratorial alterations established, mainly in the polysymptomatic group, were anemia, hyperproteinemia, hyperglobulinemia, alterations in the albumin/globulin ratio and increased ALT activity. Renal alterations were not verified (urea and creatinine levels were normal). Thrombocytopenia was observed in three clinical groups. However, the other indicators of coagulation function (TAP and TTPA) did not have abnormal variations. There were inflammatory infiltrations and leishmania amastigotes in the skin of polysymptomatic dogs, however, they were not found in the skin of asymptomatic animals. Hypertrophy and hyperplasia of the phagocyte mononuclear system, leishmania amastigote parasites were found in the macrophages, extramedullary hematopoiesis and degenerative alterations were detected in the spleen and liver of 8 of the animals submitted to histopathological exams. In accord with these results, it was demonstrated that the expected alterations in the hematological and biochemical parameters in function of their viscerotropic nature of CVL are mainly observed in the more advanced stages of the disease. The absence of inflammatory infiltration and parasite load in the skin suggest that infected animals without symptoms may have an importance irrelevant to the infectiousness of the vector / A leishmaniose visceral canina (LVC) ? uma importante zoonose de distribui??o mundial com grande impacto em sa?de p?blica no Continente Americano, especialmente no Brasil, onde a natureza end?mica da doen?a humana afeta boa parte do territ?rio nacional. A influ?ncia da preval?ncia da LVC na amplia??o da taxa de casos humanos em ?reas end?micas e no desencadeamento de surtos epid?micos ainda carece de um entendimento mais profundo, o que geraria avan?os significativos nas atuais medidas destinadas ao controle de reservat?rios da doen?a preconizadas pelo Programa Nacional de Vigil?ncia e Controle da Leishmaniose Visceral. O presente trabalho descreveu e comparou os achados cl?nico-laboratoriais e histopatol?gicos de vinte e tr?s c?es infectados naturalmente pela Leishmania chagasi, provenientes de localidades end?micas da ?rea metropolitana de Natal-RN. Estes animais, escolhidos a partir de exame f?sico e sorologia (IFI e ELISA rK-39), foram classificados de acordo com o grau de comprometimento cl?nico e submetidos a coleta de sangue (sangue total e soro) para realiza??o de hemograma completo, provas bioqu?micas de fun??o renal e hep?tica, e coagulograma. A confirma??o da infec??o por L. chagasi foi realizada ap?s a eutan?sia dos animais, pela demonstra??o direta do parasita em impress?o de ba?o e f?gado corado com GIEMSA e atrav?s de cultivo em meio NNN/Schneider. De acordo com a avalia??o cl?nica, os animais foram classificados em assintom?ticos (7), oligossintom?ticos (7) e polissintom?ticos (9). Dentre os animais necropsiados, foram selecionados 2 c?es assintom?ticos, 3 oligossintom?ticos e 3 polissintom?ticos para o estudo histopatol?gico, sendo colhidos fragmentos de ba?o, f?gado rins e pele e fixados em formol a 10% tamponado. A compara??o entre as m?dias dos par?metros cl?nico-laboratoriais testados nos grupos foi realizada atrav?s do teste t de Student (&#945;<0,05). Os principais sinais cl?nicos observados foram linfadenomegalia, alopecia, dermatite esfoliativa, ?lceras cut?neas, onicogrifose e emacia??o. As principais altera??es cl?nico-laboratoriais estabelecidas, principalmente no grupo polissintom?tico, foram anemia, hiperproteinemia, hipoalbuminemia, hiperglobulinemia, altera??es no ?ndice albumina/globulina e aumento da atividade da ALT. Altera??es renais n?o foram verificadas (ur?ia e creatinina normais). Trombocitopenia foi observada no tr?s grupos cl?nicos, contudo, os outros indicadores da fun??o de coagula??o (TAP e TTPA) n?o apresentaram varia??es anormais. Foi observado Infiltrado inflamat?rio e amastigotas de leishmania na pele de c?es polissintom?ticos, por?m n?o na pele de animais assintom?ticos. Hipertrofia e hiperplasia do sistema fagocit?rio mononuclear, macr?fagos parasitados por amastigotas de leishmania, hematopoiese extramedular e altera??es degenerativas foram detectadas no ba?o e f?gado dos 8 animais submetidos a exame histopatol?gicos. De acordo com esses resultados, foi demonstrada que as altera??es esperadas nos par?metros hematol?gicos e bioqu?micos em fun??o da natureza viscerotr?pica da LVC s?o observadas principalmente em est?gios mais avan?ados da doen?a. A aus?ncia de infiltrado inflamat?rio e carga parasit?ria na pele sugerem que animais infectados sem sintomatologia talvez tenham import?ncia irrelevante na infectividade para o vetor

Made available in DSpace on 2014-12-17T14:13:41Z (GMT). No. of bitstreams: 1 CarlosEMG_TESE.pdf: 2102443 bytes, checksum: d87bffc579222ca852f9b42a794cb0cc (MD5) Previous issue date: 2012-12-16 / Coordena??o de Aperfei?oamento de Pessoal de N?vel Superior / A popula??o brasileira ? composta por tr?s subpopula??es originais: amer?ndios aut?ctones, exploradores europeus e escravos africanos. No Nordeste do Brasil h? ?reas end?micas para diversas doen?as causadas por microorganismos intracelulares como Leishmania spp e Mycobacterium. A susceptibilidade ou resist?ncia a essas infec??es parece em parte ser influenciada geneticamente. Estudos realizados na ?rea end?mica para leishmaniose visceral (LV) no Rio Grande do Norte demonstram a exist?ncia de agrega??o familiar de infec??o por Leishmania. Entre tais estudos est? uma varredura de genoma a qual identificou tr?s regi?es cromoss?micas associadas a evolu??es distintas frente ? infec??o por Leishmania infantum. No presente estudo n?s determinamos as propor??es de ancestralidade paterna de pessoas residentes na ?rea end?mica para LV no Rio Grande do Norte, Bahia e Bel?m atrav?s de marcadores gen?ticos do cromossomo Y. Nos indiv?duos oriundos do RN as frequ?ncias al?licas de marcadores moleculares extratificados por origem ?tnica foram analisados buscando associa??o com doen?a e infec??o assintom?tica. Cerca de 75% da contribui??o paterna das popula??es estudadas ? europ?ia, com 20% de contribui??o africana e o restante amer?ndia. Foi detectada a presen?a de ancestralidade judia. A maior parte da varia??o gen?tica observada deve-se ao componente africano. A an?lise de rela??o entre origem ?tnica exclusivamente paterna e desfecho da infec??o indicou que n?o h? associa??o entre essas vari?veis. A an?lise de associa??o de marcadores microssat?lites mostrou a associa??o de um marcador (D9S925) com leishmaniose visceral. Esses resultados tomados em conjunto parecem indicar que na popula??o da ?rea end?mica no RN a etnia influencia na freq??ncia al?lica de genes que podem interferir no o desfecho da infec??o por L. infantum.