Os linfócitos T sofrem rígida regulação homeostática desde seu desenvolvimento até sua maturação, expansão clonal e morte celular. Compostos endógenos ou exógenos que alterem as funções fisiológicas dos linfócitos T podem modular passos importantes da resposta imune. Triptofano tem um papel importante na manutenção da homeostasia dos linfócitos T e é o precursor da síntese de melatonina. Neste estudo, avaliamos os efeitos de triptofano, melatonina e seus produtos de oxidação sobre os principais processos de ativação e desativação dos linfócitos T. Inicialmente, investigamos os efeitos biológicos de L-quinurenina (KYN, composto formado na via de metabolização do triptofano), melatonina e seus produtos de oxidação N1-acetil-N2-formil-5-metoxiquinuramina (AFMK) e N1-acetil-5- metoxiquinuramina (AMK) sobre a proliferação dos linfócitos T humanos e na produção de interferon-gamma (IFN-γ) e das interleucinas IL-2, IL-10 e IL-12. Observamos que KYN, melatonina, AFMK e AMK inibem a linfoproliferação e a liberação de IL-2 e de IFN-γ . O efeito inibitório destes compostos na síntese de IFN-γ não está associado às variações na produção das duas citocinas mais importantes na regulação de IFN-γ , ou seja, IL-10 e IL-12. Na seqüência, descrevemos a ação da melatonina e seus produtos de oxidação, sobre a morte celular induzida por ativação (AICD) de hibridomas de linfócitos T e os possíveis mecanismos de ação. Os resultados deste estudo mostram que tanto melatonina quanto AFMK e AMK são potentes inibidores da apoptose dos linfócitos T. Estes compostos inibem a ativação do Fator de Transcrição Nuclear de Células T ativadas (NFAT) e suprimem a expressão da molécula Fas Ligante (FasL), que é o evento imprescindível para a indução da AICD. Como conclusões, verificamos que os produtos formados tanto a partir da oxidação de triptofano quanto de melatonina são potenciais reguladores da resposta imune e podem participar dos efeitos imunossupressores, nos quais a depleção de triptofano tem sido sugerida como principal mecanismo de regulação dos linfócitos T. Adicionalmente, nossos achados podem ter utilidade na avaliação de possíveis efeitos indesejáveis durante a utilização terapêutica de melatonina. / T Lymphocytes are exposed to severe homeostatic regulation from development stage up to their maturation, clonal expansion and cell death. Endogenous or exogenous compounds altering the physiological functions of T lymphocytes can modulate important steps of the immune response. Tryptophan plays an important role for maintaining the homeostasis of T lymphocytes and is the precursor of the melatonin synthesis. In this study we evaluated the effects of tryptophan, melatonin and their oxidation products concerning the main activation and deactivation processes of T lymphocytes. Firstly, we analyzed the biological effects of L-kynurenine (KYN, a compound formed at the tryptophan metabolization pathway), melatonin and its oxidation products, N-acetyl-N-formyl-5-methoxykynuramine (AFMK) and N-acetyl-5- methoxykynuramine (AMK), concerning the proliferation of human T lymphocytes and the production of interferon-gamma (IFN-γ) as well as of interleukins IL-2, IL-10 and IL-12. It was observed that KYN, melatonin, AFMK and AMK inhibit the lymphocytes proliferation and the release of IL-2 and IFN-γ. The inhibitory effect of these compounds in the IFN-γ synthesis is not related to the variations on the production of the two most important cytokines for the IFN-γ regulation, that is, IL-10 and IL-12. After that, we reported the melatonin action as well as of its oxidation products, in what concerns activation-induced cell death (AICD) of T lymphocytes hybridomas and probable activation mechanisms. The results of this study have shown that melatonin as well as AFMK and AMK are powerful inhibitors of the T lymphocytes apoptosis. These compounds inhibit the activation of the nuclear transcription factor of activated T cells (NFAT) and suppress the expression of the Fas-Ligand molecule (FasL), which is the essential event to the AICD induction. We concluded that products formed by the oxidation of either tryptophan or melatonin are potential regulators of the immune response and may participate on immunosuppression effects, in which the tryptophan depletion is believed to be the main mechanism for T lymphocytes regulation. Added to that, our results may be helpful for evaluating possible unwanted effects during the therapeutical use of melatonin.

Embora existam vários mecanismos propostos, o papel das moléculas de histocompatibilidade na susceptibilidade ao DM1 ainda não está totalmente esclarecido. Existem várias evidências de que o número de células apresentadoras de antígenos e a densidade de expressão das moléculas de histocompatibilidade nessas células pode influenciar o resultado da resposta imune. Assim, neste estudo, foram avaliadas as porcentagens das células CD3+, CD4+, CD8+, CD19+ e CD14+, coexpressando as moléculas de histocompatibilidade de classe I e II, a densidade de expressão das moléculas de histocompatibilidade de classe I e II nessas populações linfomonocitárias e a correlação entre densidade de expressão dessas moléculas com o perfil imunogenético do DM1. Para esse fim, foram avaliados 20 pacientes com DM1, recentemente diagnosticados, metabolicamente compensados, sendo 12 do sexo masculino. Como controles, foram avaliados 20 indivíduos saudáveis, pareados com os pacientes em termos de idade, sexo e raça, procedentes da mesma região geográfica dos pacientes. A densidade de expressão das moléculas HLA nas diversas subpopulações linfomonocitárias foi avaliada por citometria de fluxo. Os marcadores imunogenéticos foram tipados utilizando-se iniciadores de oligonucleotídeos seqüência específicos. Os resultados foram analisados usando o teste não paramétrico de Mann Whitney U. Foi observado aumento da densidade de expressão das moléculas de histocompatibilidade de classe I em linfócitos T CD3+, CD4+ e CD8+ de pacientes com DM1 quando comparados aos controles. Em relação às moléculas HLA de classe II, o número e a porcentagem dos linfócitos T CD4+, coexpressando as moléculas HLA-DQ de pacientes estavam diminuídos em relação aos controles. Os resultados referentes à correlação do perfil genotípico dos pacientes revelam que pacientes portadores dos alelos HLA-DQB1*02 apresentaram diminuição no número e porcentagem das células CD3+, CD4+, CD8+, CD19+ e CD14+ coexpressando as moléculas HLA-DQ, e ainda, o aumento da densidade de expressão da molécula HLA-DQ nas células CD19+, em relação aos pacientes sem esses alelos. Pacientes com o alelo HLA-DQB1*0302 apresentaram aumento do número de células CD14+ e CD19+ coexpressando as moléculas HLA-DQ, e ainda, o aumento da densidade de expressão dessas molécula nas células CD14+ em relação aos pacientes negativos para esse alelo. Além da instabilidade de ligação dos peptídeos com as moléculas de susceptibilidade ao DM1, este estudo reafirma a importância da densidade de expressão das moléculas de classe II na susceptibilidade ao DM1. / Althougth the role of MHC molecules in the susceptibility to DM1 has not been elucidated, the density of MHC molecules on cell surface may influence the outcome of the immune response. In this study, the number of CD3+, CD4+, CD8+, CD19+ and CD14+ cells coexpressing MHC class I and II, and the correlation between the density of MHC molecules and the immunogenetic profile of DM1 patients were studied. A total of 20 recently diagnosed patients (12 males) and 20 control individuals matched to the patients in terms of age, sex and race were studied. MHC molecules on cell sufaces were evaluated using flow cytometry. MHC aleles were typed using sequence specific probes. Statistical analysis was performed by the non-parametric Mann Whitney-U test. Increased expression of MHC class I molecules was observed in patients T CD3+, CD4+ and CD8+ cells in relation to controls. The number and porcentage of double-positive CD4+/HLA-DQ+ cells were significantly decreased in patients. Compared to DM1 patients who were not typed as HLA-DQB1*02, DM1 patients typed as HLA-DQB1*02 exhibited decreased numbers of CD3+, CD4+, CD8+, CD19+ and CD14+ cells expressing HLA-DQ molecules, whereas the density of HLA-molecules was increased in CD19+ cells. Compared to non-HLA-DQB1*0302 patients, those typed as HLA-DQB1*0302 presented increased number of CD14+ and CD19+ cells expressing HLA-DQ molecules. Besides the instability of peptide ligation with susceptibility molecules, this study stresses the relevance of the density of MHC class II molecules on the susceptibility to DM1.

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Made available in DSpace on 2013-08-07T18:41:51Z (GMT). No. of bitstreams: 1 000439544-Texto+Completo-0.pdf: 1258585 bytes, checksum: 19aa18ec90c3c36b13cb69c6788c4a18 (MD5) Previous issue date: 2012 / Bipolar Disorder (BD) is a complex, multifactorial and chronic psychiatic illness. It is characterized by alternating cycles of mania and depression, with periods of remission or euthymia. Several studies have suggested a direct interaction between nervous, endocrine and immune systems in the pathophysiology of BD. An immune activation, as evidenced by increased plasma levels of proinflammatory cytokines, has been frequently reported in BD. However, the majority of the studies have mainly investigated mania and depression phases, and very few studies have been developed with euthymic patients. In this study, we investigated cellular and molecular mechanisms potentially involved in the inflammatory process in BD, including various lymphocytes subtypes and intracelular pathways of lymphocyte activation. Twentyseven euthymic female subjects with BD type I and 24 age- and sex-matched controls were recruited in this study. Lymphocytes were isolated and stimulated in vitro to assess Th1/Th17/Th2 cytokines (IL-2, IL-4, IL-5, IL-10, IL-17, IFN-ע and TNF-æ) and expression of mitogen-activated protein kinases (MAPKs). The expression of MAPKs (p-oERK and p38), lymphocyte subtypes and cytokines were assessed by flow cytometry. All cytokines assessed were found elevated in bipolar disorder compared with healthy controls. In particu-lar, it was evidenced a bias to a Th1 inflammatory profile in BD. Interestingly, we observed a significant reduction (-56%) of regulatory T cells (CD4+CD25+Foxp3+) and expansion (43%) of CD8+ regulatory T cells (CD8+CD28-) in BD. The lymphocytes of BD patients showed an significant increase in p-ERK in relation to p-p38, indicating lymphocyte activation. Our data suggest that multiple molecular and cellular mechanisms contribute to the immunological imbalance observed in BD. / O Transtorno Bipolar (TB) é uma doença psiquiátrica crônica, complexa e multifatorial, caracterizada por ciclos alternados de mania e depressão, intercalados com períodos de remissão ou eutimia. Diversos estudos vêm demonstrando associações entre sistema nervoso, endócrino e imunológico na patofisiologia do TB. Uma ativação imune, evidenciada por níveis plasmáticos aumentados de citocinas pró-inflamatórias, tem sido freqüentemente relatada no TB. No entanto, a maioria dos estudos refere-se principalmente às fases de mania e depressão, e poucos estudos foram desenvolvidos na fase de eutimía. Neste estudo, investigamos mecanismos celulares e moleculares potencialmente envolvidos no fenômeno inflamatório no TB, incluindo diversos subtipos linfocitários e vias intracelulares de ativação linfocitária. Vinte e sete pacientes mulheres com TB I eutímicos e 24 controles saudáveis pareados por sexo e idade foram recrutadas neste estudo. Os linfócitos foram isolados e estimulados in vitro para avaliar as citocinas Th1/Th17/Th2 (IL-2, IL-4, IL-5, IL-10, IL-17, IFN-ע e TNF-æ) e expressão de proteínas cinases ativadas por mitógeno (MAPKs). A expressão das MAPKs (p-ERK e p-p38), subtipos linfocitários e citocinas foram avaliados por citometria de fluxo. Todas as citocinas avaliadas encontraram-se elevadas nos bipolares em comparação com controles sau-dáveis. Em particular, foi evidenciado um viés para um perfil Th1 (inflamatório) no TB I. Interessantemente, observamos uma redução significativa (-56%) de células T regulatórias (CD4+CD25+Foxp3+) e expansão (43%) de células T CD8+ regulatórias (CD8+CD28-) no TB. Os linfócitos dos pacientes bipolares apresentaram um aumento significativo de p-ERK em relação a p-p38, indicando uma ativação linfocitária. Concluindo, nossos dados sugerem que múltiplos mecanismos celulares e moleculares contribuem para um desequilíbrio imune observado no TB.

Made available in DSpace on 2013-08-07T18:42:00Z (GMT). No. of bitstreams: 1 000412832-Texto+Completo-0.pdf: 399603 bytes, checksum: 31eb2515ec0e5f58e8fa88f141783a51 (MD5) Previous issue date: 2009 / Lymphocytes of human T-lymphotropic virus type-I (HTLV-I) infected patients could be tolerant to mitogenic stimuli as well as glucocorticoid-induced immunomodulation. These data suggest that common signaling events are impaired during this infection. The mitogenactivated protein kinases (MAPKs), lymphocyte subsets and cytokines are potential candidates for these effects. We investigated the role of (i) p38 and ERK MAPKs, (ii) lymphocyte subpopulations, (iii) and cytokines implicated in antigen or glucocorticoidinduced immunomodulation. Twenty-one asymptomatic carriers (AC), 19 patients with HTLV-I-associated myelophathy / tropical spastic paraparesis (HAM/TSP) and 21 healthy subjects took part in this study. Peripheral blood mononuclear cells were isolated and cultured in vitro to assess lymphocyte proliferation and sensitivity to dexamethasone. The expression of phospho-MAPKs, lymphocyte subsets and cytokines were assessed by flow cytometry. Patients with HAM/TSP had a higher p38/ERK ratio associated with a reduced response to mitogens and higher sensitivity to dexamethasone. HAM/TSP patients presented higher levels of activated T cells and CD8+CD28- regulatory T cells, being negatively related to the mitogenic response. These results suggest that multiple underlying mechanisms could be involved with HTLV-related immunomodulation and altered cellular sensitivity to GCs. / Linfócitos de pacientes infectados com o vírus linfotrópico de células T humanas tipo I (HTLV-I) podem apresentar anergia a estimulação e simultaneamente resistência relativa ao efeito imunossupressor dos glicocorticóides (GCs). Isto sugere que estas variáveis são influenciadas por vias de sinalização em comum. As quinases ativadas por mitógenos (MAPKs), subtipos de linfócitos e citocinas são candidatos potenciais para estes efeitos. Portanto, neste trabalho nós avaliamos o envolvimento das (i) MAPKs p38 e ERK, (ii) subpopulações de linfócitos (iii) e citocinas na anergia e na imunomodulação induzida por GCs. Vinte e um portadores assintomáticos (AC), dezenove pacientes com mielopatia associada ao HTLV-I / paraparesia espástica tropical (HAM/TSP) e vinte e um indivíduos controles não infectados fizeram parte deste estudo. As células mononucleares do sangue periférico destes indivíduos foram isoladas e mantidas em cultura para a avaliação da proliferação e da sensibilidade a dexametasona.A expressão das fosfo-MAPKs, dos marcadores extracelulares e das citocinas foi avaliada por citometria de fluxo. Pacientes HAM/TSP apresentaram uma razão p38/ERK elevada que influenciou na baixa resposta aos mitógenos e na alta sensibilidade aos GCs nestes indivíduos. Eles também apresentaram proporções elevadas de células T ativadas e reguladoras CD8+CD28- que correlacionaram-se negativamente com as respostas aos mitógenos. Esses resultados sugerem que muitos mecanismos podem estar envolvidos na imunomodulação relacionada a infecção pelo HTLVI e na alteração da sensibilidade aos GCs.

Submitted by ROBERTO PAULO CORREIA DE ARAÚJO (ppgorgsistem@ufba.br) on 2016-08-30T16:55:37Z No. of bitstreams: 1 DISSERTAÇÃO MArcia de miguel.pdf: 2399875 bytes, checksum: eba9d8dc3e7929c3ed0ddaf185e0151f (MD5) / Made available in DSpace on 2016-08-30T16:55:37Z (GMT). No. of bitstreams: 1 DISSERTAÇÃO MArcia de miguel.pdf: 2399875 bytes, checksum: eba9d8dc3e7929c3ed0ddaf185e0151f (MD5) / A dor crônica é um problema de saúde pública, pois apresenta alta prevalência ao redor do mundo e está associada a prejuízos físicos, emocionais, sociais e laborais. Seu tratamento está associado a custos elevados e, em muitos casos, a resposta às alternativas terapêuticas atuais não são adequadas. O conhecimento da relação entre a dor crônica e o sistema imune ainda não é compreendida de forma ampla a fim de possibilitar o desenvolvimento de tratamentos mais efetivos. A despeito das tentativas anteriores de desvendar essa relação, os trabalhos realizados com humanos apresentam dados controversos e limitados. Objetivo: Esta pesquisa tem o objetivo de comparar os níveis séricos de citocinas inflamatórias e a fenotipagem de subpopulações de linfócitos de pacientes com dor crônica do Ambulatório de Dor do Hospital Universitário Professor Edgard Santos, em Salvador, e indivíduos sem dor. Metodologia: Foi realizado um estudo observacional do tipo inquérito epidemiológico e foram avaliados os níveis séricos das citocinas inflamatórias IL-1β, IL-4, IL-6, IL-10, IFN-γ, TNF-α pelo método de Cytometric Bead Array (CBA) (eBioscience/BD®) e a fenotipagem das subpopulações de linfócitos T CD4, T CD8, células NK e linfócitos B pelo método de citometria de fluxo Lymphogram® em sangue periférico de 20 pacientes com dor crônica e 10 indivíduos sem dor. Resultados: Com relação às citocinas, foram encontrados níveis elevados de IFN-γ e níveis reduzidos IL-10 no grupo com dor crônica quando comparado aos indivíduos sem dor. Não houve diferença entre os grupos quanto às citocinas IL-1β, IL-4 e TNF-α e IL-6. Com relação à fenotipagem de linfócitos, a contagem de linfócitos T CD8 foi menor nos pacientes com dor crônica, enquanto que a contagem de células NK e linfócitos B no mesmo grupo foi maior que nos indivíduos sem dor. A contagem de T CD4 foi discretamente maior nos pacientes com dor crônica e o mesmo grupo mostrou aumento da relação CD4/CD8 quando comparado aos indivíduos sem dor. Conclusão: Apesar do número reduzido de indivíduos avaliados e do estudo não ter sido realizado com seleção aleatória, foi possível observar diferenças entre o perfil imunológico de pacientes com dor crônica quando comparados a indivíduos sem dor, conforme descreve a literatura. No entanto, estudos posteriores são necessários para melhor compreensão da relação entre o sistema imune e a dor crônica.

Submitted by Hiolanda Rêgo (hiolandar@gmail.com) on 2013-09-17T20:35:20Z No. of bitstreams: 1 Dissertação_Med_Andréia de Sousa Rocha Barreto.pdf: 2321438 bytes, checksum: 3e46edc6c1f36a6c86dbc70776eee875 (MD5) / Approved for entry into archive by Flávia Ferreira(flaviaccf@yahoo.com.br) on 2013-09-22T23:51:40Z (GMT) No. of bitstreams: 1 Dissertação_Med_Andréia de Sousa Rocha Barreto.pdf: 2321438 bytes, checksum: 3e46edc6c1f36a6c86dbc70776eee875 (MD5) / Made available in DSpace on 2013-09-22T23:51:40Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Dissertação_Med_Andréia de Sousa Rocha Barreto.pdf: 2321438 bytes, checksum: 3e46edc6c1f36a6c86dbc70776eee875 (MD5) / Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e Tecnológico - CNPq; Instituto Nacional de Ciência e Tecnologia de Doenças Tropicais - INCT-DT; Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior - CAPES. / A esquistossomose assume o segundo lugar em importância clínica e epidemiológica dentre as doenças parasitárias no mundo. A resposta imune do hospedeiro é considerada essencial na proteção e na patogênese da doença. A fase crônica é caracterizada pela produção de citocinas Th2, sendo as mesmas associadas ao desenvolvimento de fibrose periportal. Pouco se sabe sobre o fenotipo e o grau de ativação dos diferentes subtipos de células T no processo de fibrose. Objetivo: avaliar o fenótipo e o grau de ativação dos linfócitos T em pacientes esquistossomóticos com fibrose periportal. Método: Estudo de corte transversal, realizado no povoado de Água Preta, Gandu-Bahia, incluindo 37 indivíduos com fibrose periportal determinado por ultrassonografia. Quinze deles apresentavam fibrose incipiente, sete apresentavam fibrose moderada a grave e quinze não apresentavam fibrose. Células mononucleares do sangue periférico foram obtidas por gradiente de Ficcol-hypaque e a frequência de linfócitos TCD4+ e TCD8+ e a expressão dos marcadores de superfície CD28, CD69, CD25 e CTLA-4 foram determinadas por citometria de fluxo. Resultados: Não houve diferença significativa na frequência das células TCD4+ entre os pacientes com diferentes graus de fibrose periportal, entretanto, os indivíduos com fibrose moderada e grave apresentaram uma frequência menor de células TCD8+, comparados aos indivíduos sem fibrose ou com fibrose incipiente. A frequência de células TCD8+CD28+, bem como de células TCD4+CD69+ foi maior no grupo de pacientes com fibrose incipiente, em comparação com aqueles sem fibrose. Em relação à frequência das células TCD4+CD25Low, não houve diferença significativa entre os grupos de pacientes, entretanto, os indivíduos com fibrose moderada a grave apresentaram uma menor frequência de células TCD4+CD25High comparados àqueles sem fibrose ou com fibrose incipiente. A frequência de linfócitos TCD4+CTLA-4+ em indivíduos com fibrose moderada a grave foi também menor em relação aos indivíduos sem fibrose ou com fibrose incipiente. Conclusão: A alta frequência de células T ativadas nos pacientes com fibrose indica que estas células devem participar do processo de formação da fibrose periportal. Adicionalmente, a menor frequência de células T com o perfil regulatório nos pacientes com fibrose moderada a grave reforça a hipótese de uma falta de regulação da resposta imune nestes pacientes. / Salvador

Submitted by Pós Imunologia (ppgimicsufba@gmail.com) on 2017-06-05T20:01:32Z No. of bitstreams: 1 Tese de Doutorado_Jamille Fernandes_versão PDF_completa (1).pdf: 1641289 bytes, checksum: 4b6203c0249095658c9990f2b42cc2af (MD5) / Approved for entry into archive by Delba Rosa (delba@ufba.br) on 2017-06-07T13:42:02Z (GMT) No. of bitstreams: 1 Tese de Doutorado_Jamille Fernandes_versão PDF_completa (1).pdf: 1641289 bytes, checksum: 4b6203c0249095658c9990f2b42cc2af (MD5) / Made available in DSpace on 2017-06-07T13:42:02Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Tese de Doutorado_Jamille Fernandes_versão PDF_completa (1).pdf: 1641289 bytes, checksum: 4b6203c0249095658c9990f2b42cc2af (MD5) / FAPESB / Estima-se que aproximadamente 334 milhões de pessoas sofrem de asma no mundo, e 5-10% dos indivíduos asmáticos tem asma grave caracterizada por uma resposta insatisfatória ao tratamento habitual. A imunopatogênese da asma está associada a um aumento da resposta do tipo 2, porém evidências também sugerem contribuições das citocinas Th1 e Th17 na gravidade da doença. Existem poucos estudos demonstrando o perfil imunológico de indivíduos com asma grave classificados de acordo com a sua resposta ao tratamento com doses elevadas de corticosteroides inalados. O objetivo deste estudo foi caracterizar os fenótipos dos linfócitos e monócitos de indivíduos com asma grave conforme sua resposta ao tratamento. Neste estudo foram avaliados 19 indivíduos com asma grave refratária ao tratamento (AGR), 21 com asma grave bem controlada/parcialmente controlada (AGC), em comparação a 23 com asma leve a moderada (ALM) e 10 controles sem asma (CSA). Os linfócitos e monócitos foram obtidos de CMSP e as frequências das diferentes moléculas foram realizadas utilizando a técnica de citometria de fluxo. A frequência de linfócitos T CD4 expressando CTLA-4 e TGF-β foi menor nos indivíduos com AGR em comparação aos indivíduos AGC e ALM. No grupo de indivíduos com AGR a frequência de células T CD4+CD25hi foi menor em relação aos indivíduos com AGC. Nos indivíduos com AGR, a frequência de células T CD4+CD25hiFoxP3+ e T CD4+IL-10+ foi menor quando comparada aos indivíduos com ALM. No entanto, a frequência das células T CD4 expressando IFN-γ e IL-17A foi maior nos grupos AGR e AGC em comparação ao grupo CSA. Quanto às subpopulações de monócitos, apesar de termos observado uma frequência maior dessas células expressando IL-10R e IL-10 nos grupos com asma grave (AGR e AGC), foi também observado que as subpopulações de monócitos de ambos os grupos expressavam mais as citocinas IL-13, IL-33 e TGF-β quando comparadas aos controles (ALM e CSA). Adicionalmente, a frequência das subpopulações de monócitos expressando os receptores IL-4Rα e IL-13Rα2 foi maior no grupo de AGR quando comparada aos grupos controles (ALM e CSA) e ao grupo AGC, respectivamente. A gravidade da asma está associada a um aumento das citocinas do perfil Th1 e Th17 pelos linfócitos e a refratariedade ao tratamento associada a uma diminuição de regulação por essas células. Entretanto, os monócitos de pacientes com AGR e AGC têm um papel importante na gravidade da doença por apresentarem perfis distintos associados com a produção de citocinas e expressão de receptores envolvidos na resposta imune Th2 e no remodelamento tecidual. / It is estimated that about 334 million people suffer from asthma in the world, and 5-10% of the asthmatic individuals have severe asthma characterized by unsatisfactory response to treatment. The immunopathogenesis of asthma is associated with increased type-2 response, but there is evidence of contributions of Th1 and Th17 cytokines to disease severity. There are few studies demonstrating the immunological profile of individuals with severe asthma categorised by their response to treatment with higher doses of inhaled corticosteroids. Thus, the objective of this study was to characterize the phenotypes of the lymphocyte and monocyte of indivduals with severe asthma classified according their response to treatment. In this study we evaluated 19 individuals with refractory severe asthma (RSA), 21 with severe asthma well controlled/partly controlled (CSA), 23 with mild to moderate asthma (MMA) and 10 controls with no asthma (CNA). Lymphocytes and monocytes were obtained from PBMC and the frequencies of the different molecules were performed using the technique of flow cytometry. The frequency of CD4+ T cells expressing CTLA-4 and TGF-β was lower in subjects with RSA in relation to individuals with CSA and MMA. In addition, in the group of individuals with RSA the frequency of CD4+CD25hi T cells was lower in individuals with CSA. We also observed that in individuals with RSA, the frequency of CD4+CD25hiFoxP3+ T and CD4+IL-10+ T cells was lower when compared to individuals with MMA. However, the frequency of CD4 T cells expressing IFN-γ and IL-17A was higher in the RSA and CSA groups in comparison to the CNA group. Concerning the monocyte subsets, although we observed a higher frequency of these cells expressing IL-10R and IL-10 in the severe asthma (RSA and CSA) groups, it was also observed that the monocyte subsets of both groups expressed more cytokines IL-13, IL-33 and TGF-β when compared to controls (MMA and CNA). In addition, the frequency of the monocyte subsets expressing the IL-4Rα and IL-13Rα2 was higher in the RSA group when compared to the control (MMA and CNA) and CSA groups, respectively. The severity of asthma is associated with an increase in Th1 and Th17 cytokines by lymphocytes and refractoriness to treatment associated with decreased regulation by these cells. However, monocytes from patients with RSA and CSA present differents profiles associated with cytokine production and expression of receptors involved in Th2 response and tissue remodeling.

Made available in DSpace on 2014-05-29T12:01:46Z (GMT). No. of bitstreams: 4 license.txt: 1748 bytes, checksum: 8a4605be74aa9ea9d79846c1fba20a33 (MD5) 0000014.pdf: 1580298 bytes, checksum: 5b054cb92fe477233b388a0c1a81bd25 (MD5) 0000014.pdf.txt: 169882 bytes, checksum: eea5ec448fdc049d55bc046ebc61480a (MD5) 0000014.pdf.jpg: 1381 bytes, checksum: 8de6ddf0e9e8bf8dd03f0bf32d033a25 (MD5) Previous issue date: 2013 / A exposição de trabalhadores a tório (Th), cério (Ce) e lantânio (La), nas áreas de mineração e extração, é tratada apenas sob o ponto de vista da exposição e incorporação do Th por se tratar de elemento radioativo. No caso específico da exposição humana aos elementos encontrados em minérios, donde se extraem estes metais, as informações disponíveis na literatura sobre a toxicologia química não nos permitem antever, com segurança, o potencial dos mesmos em provocar danos à saúde. A questão do efeito das misturas de Th, Ce e La é um aspecto ainda menos explorado, mas de extrema importância. O tema desta tese foi a pesquisa in vitro dos efeitos de Th, Ce e La sobre modelos de linfócito T (linhagem Jurkat) e osteoblastos (linhagem MG63) humanos, testados sob a forma simples e em combinações. Como indicadores de efeito foram utilizados medidas de viabilidade e proliferação, adesão celular, síntese de fosfatase alcalina e osteocalcina. Foram utilizados métodos colorimétricos e leituras em hematocitômetro, microscopia de fluorescência e espectrofotômetro. Na avaliação da exposição às misturas foi testada a hipótese de não interação entre os metais através da abordagem de Loewe e do modelo matemático de Chou (Compusyn). Observou-se que células Jurkat em presença de Th e Ce, de forma isolada, não sofreram efeitos tóxicos e que o La gerou redução na proliferação celular. Quanto à linhagem MG63 foi observado que a exposição de células aos três metais gerou curvas dose-efeito em forma de sino mostrando que os efeitos sobre a proliferação podem ser de ativação ou inibição de acordo com as doses utilizadas. / Os indicadores de diferenciação celular sugerem que, nas concentrações mais elevadas, os três metais, e mais fortemente Ce e La, foram capazes de estimular a diferenciação de osteoblastos expressa pela síntese aumentada de fosfatase alcalina e osteocalcina. Os lantanídeos também interferiram no processo de adesão dos osteoblastos ao substrato. Tanto para células Jurkat como para células MG63 observou-se a existência de interações químicas entre diferentes combinações testadas. Dependendo da mistura e do desfecho avaliado as interações, quando presentes, variaram entre sinergismo e antagonismo. Com relação à exposição das células Jurkat às misturas, os efeitos mostraram a intensificação do efeito do La em presença de Th, que resultou em uma redução na proliferação celular. Observou-se também que o sinergismo foi mais acentuado em presença das concentrações mais baixas dos metais da mistura. Considerando-se o desfecho proliferação relativamente aos osteoblastos, observou-se sinergismo para as combinações (Th+La) e (Th+Ce). Com relação à síntese de fosfatase alcalina observou-se um antagonismo leve para as misturas (Th+Ce) e (Ce+La) e para síntese de osteocalcina observou-se um forte antagonismo em todas as combinações binárias utilizadas. Futuras pesquisas poderão ser delineadas reunindo diferentes abordagens como estudos in vitro, in vivo, epidemiológicos e de modelagem. Há uma forte indicação de que a densidade óssea possa ser um possível indicador de efeito para exposições desse tipo.