Orientador: Eliana Cotta de Faria / Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Ciencias Medicas / Made available in DSpace on 2018-08-09T21:29:39Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Bassora_FernandaDutraSantiago_M.pdf: 2612060 bytes, checksum: 0ddcd23de6e1ce1f879247d7a9c9b2d7 (MD5) Previous issue date: 2007 / Resumo: Está bem estabelecida na literatura especializada a associação inversa entre as concentrações plasmáticas de colesterol das lipoproteínas de alta densidade (HDL-C) e a incidência de doença arterial coronariana (DAC). Além de propriedades anti-oxidante, anti-inflamatória e anti-trombótica, a HDL participa do transporte reverso de colesterol, via pela qual o colesterol é captado das lipoproteínas e das membranas células periféricas e transportado ao fígado para sua excreção na forma livre ou de ácidos biliares. A lipase hepática (LH) possui função crucial no transporte reverso do colesterol, por sua atividade lipolítica e pela função de ligante à lipoproteínas facilitando sua captação tissular. A proteína de transferência de ésteres de colesterol (CETP), e mesma importância metabólica, promove a troca de ésteres de colesterol por triglicérides entre a HDL e as lipoproteínas ricas em triglicérides. Mutações nos genes que codificam estas proteínas têm sido muito estudadas para se compreender a função destas no metabolismo lipídico. O modelo experimental da hiperalfalipoproteinemia tem sido utilizado no decorrer dos últimos anos com o intuito de elucidar os mecanismos de ação da HDL e das proteínas reguladoras do seu metabolismo. A hiperalfalipoproteinemia é caracterizada pelo aumento das concentrações de HDL-C e é causada principalmente por deficiências genética de CETP e/ou LH. Os objetivos desta dissertação foram o de se estabelecer à modulação da hiperalfalipoproteinemia sobre os parâmetros antropométricos, bioquímicos, moleculares (¿514C/T do gene da LH e I405V do gene da CETP) e radiológicos (espessura da camada íntima média de carótidas) em uma amostra populacional brasileira. O estudo foi conduzido em 291 voluntários de ambos os sexos, classificados como hiperalfalipoproteinemicos (Hiper-A), HDL-C =68mg/dL, ou controles, HDL-C<68 e =32 mg/dL, de acordo com o valor do percentil 90, obtido em um estudo prévio do Laboratório de Lípides a partir população normolipidêmica. Os polimorfismos LH-514C/T e CETP I405V foram identificados através de técnicas de reação em cadeia polimerase (PCR) e a espessura da camada íntima-média de carótidas (EIM) pela ultra-sonografia de alta resolução. Em um primeiro trabalho observou-se em um sub-grupo de 169 indivíduos, com a medida da EIM, que somente a idade foi correlacionada com a EIM na hiperalfalipoproteinemia, enquanto que em controles houve modulação positiva pela idade, sexo masculino, pressão arterial sistólica, e controversamente com relatos da literatura, com HDL-C. Apesar de Hiper-A possuir um perfil com maior número de fatores de risco cardiovasculares, a semelhança encontrada na EIM de carótidas, assim como, da freqüência de EIM maior que 1 mm poderia, em parte, ser explicada pela grande diferença de modulação entre os grupos apontando para um traço protetor contra a aterosclerose carotídea em hiperalfalipoproteinemia. A ateroproteção reduzida em controles, tanto em homens quanto em mulheres, está de acordo com a observada associação negativa neste grupo entre EIM e a CETP com possível presença de HDL com a composição química alterada (ricas em TG e pobres em ésteres de colesterol), e ocorreu possìvelmente no sub-grupo masculino, com perfil pró-aterogênico evidente. Em um segundo trabalho, no sub-grupo de 169 indivíduos, com a medida da EIM, foi avaliado o efeito do polimorfismo LH-514C/T sobre a espessura da camada íntima-média de carótidas na hiperalfalipoproteinemia. Não se observou nenhuma variação de EIM em ambos os grupos em função deste polimorfismo. Quando comparados os grupos, o genótipo CC do polimorfismo LH-514C/T mostrou apenas tendência a maior EIM de carótidas em hiperalfalipoproteinemia (p<0,09), mas a freqüência de EIM maior que 1 mm foi igual. Em um terceiro trabalho, em 282-291 indivíduos foram avaliadas as semelhanças de freqüências entre os polimorfismos LH-514C/T e CETP I405V na hiperalfalipoproteinemia e normolipidemia. Ambos apresentaram altas freqüências, similares entre grupos e entre o polimorfismo LH-514C/T, CC 39%, CT+TT 61%; e o polimorfismo CETP I405V: II 26%, IV+VV 74% e CTL: CC 40%, CT+TT 60%, II 43% e IV+VV 57%. Descrevemos o polimorfismo LH-514C/T na hiperalfalipoproteinemia os TT vs CC apresentaram cintura menor, concentrações mais baixas de colesterol plasmático (C), fosfolípides (FL), LDL-C, estimativa do tamanho da LDL (LDL-C/ApoB). O polimorfismo CETP I405V na hiperalfalipoproteinemia em VV vs II, mostrou alta pressão arterial sangüínea e menores concentrações plasmáticas de HDL2TG e HDL3TG. O genótipo IV teve maiores concentrações plasmáticas de ApoAI e pressão arterial diastólica quando comparado com o genótipo II. Em resumo esta dissertação aponta para efeitos ateroprotetores ou neutros da hiperalfalipoproteinemia em uma amostra de população brasileira sobre a aterosclerose carotídea, inclusive no polimorfismo LH -514C/T. Os polimorfismos LH-514C/T e CETP I405V foram muito semelhantes com relação aos lípides e lipoproteínas séricos, mas não às proteínas reguladoras, oferecendo modulação protetora na hiperalfalipoproteinemia / Abstract: There is an inverse relationship between plasma concentration of high-density lipoprotein (HDL-C) and the risk of coronary arterial disease (CAD). Beyond anti-oxidant, anti-inflammatory and anti-thrombotic properties, HDL plays a role on the reverse cholesterol transport, where cholesterol is taken from lipoproteins and peripheral cells to the liver for excretion. Hepatic lipase (HL) plays a key role in this process, by its lipolitic activities and ligand functions. Cholesterol ester transfer protein (CETP), of equal metabolic importance, facilitates the exchange of cholesterol ester and triglycerides between HDL and triglyceride rich-lipoproteins. Mutations and polymorphisms of these enzymes have being studied in order to evaluate its activity and metabolic consequences. Hyperalphalipoproteinemia (Hyper-A) has being used in the latest years with the purpose of evaluating the anti and pro-atherogenic mechanisms of HDL and of regulating proteins. The aim of this work was to establish the modulation of hyperalphalipoproteinemia in relation to controls on the anthropometric, biochemical, radiological and molecular manifestations. This study was conducted on 291 volunteers, classified as Hyper-A, HDL-C=68mg/dL and controls, HDL-C <68 e 32 mg/dL according to the percentile 90th, obtained from a local normolipidemic population study. We determined clinic data, lipid, lipoproteins and radiological parameters of volunteers. The HL-514C/T and CETP I405V polymorphism were determined by polymerase chain reaction methods. The carotid intima-media thickness measurements were performed high performance ultrasound. We showed in the first manuscript that although possessing a higher risk coronary vascular disease profile the similarity found in carotid could in part be explained by the striking differences in its modulation between the two groups, indicating a protective trait against carotid atherosclerosis in hyperalphalipoproteinemia. In the Hyper-A population, was only correlated with age, while in controls had a positive correlation with age, male sex, systolic blood pressure, and surprisingly with HDL-C. This dissociation between IMT and HDL-C could be accounted for by a small HDL particle number in CTL. In the manuscript 2, the ¿514C/T polymorphism did not contribute to variations in the carotid IMT and Hyper-A did not modulate the IMT variations, contrary to Rundek et al., (2002) who investigated the ¿514C/T polymorphism on variations in the carotid IMT in 87 stroke-free subjects suggested that CC genotypes had increase of carotid IMT, FMT and HALP. The HL-514C/T e CETP I405V polymorphisms, were no associate, were highly prevalent in the two groups but were not associated with HDL-C. In Hyper-A, LH-514C/T induced lower plasma cholesterol (C), phospholipids (PL), LDL-C and LDL size (LDL-C/ApoB). In Hyper-A CETP I405V decreased blood pressure, reduced TG in HDL subfractions 2 and 3 of (HDL2TG and HDL3TG) and increase ApoAI. The HL -514C/T polymorphism in Hyper-A the TT vs CC had lower waist hip-circumference, cholesterol (C) concentrations, phospholipids (PL), LDL-C and estimated size particle by LDL-C/ApoB. The genotype TT was different between 2 groups: in Hyper-A with relation the CTL, had lower HL, estimated size particle by TG/HDL-C and higher HDL2C, HDL3C, HDL3TG, ApoAI and C concentrations and had higher C, estimated size particle by LDL-C/ApoB, ApoAI, HDL2C, HDL3C and estimated size particle by TG/HDL-C. The CETP I405V polymorphism in Hyper-A, the VV vs II had higher Systolic Blood Pressure and lower HDL2TG e HDL3TG concentrations. The IV genotype had higher ApoAI concentration and Diastolic Blood Pressure. In Hyper A, the VV genotype had higher HDL2C, HDL3C, ApoAI, e TG concentrations and reduced concentration of VLDL- and estimated size particle of LDL by TG/HDL-C. In summary, this work indicates an athero-protector and neutral effect on the carotid atherosclerosis in Hyper-A between HL-514C/T and CETP I405V polymorphisms both modulated for plasma lipids more atheroprotective / Mestrado / Ciencias Basicas / Mestre em Clinica Medica

Orientador: Eliana Cotta de Faria / Tese (doutorado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Ciencias Medicas / Made available in DSpace on 2018-08-05T18:47:45Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Dalpino_FabioBernardi_D.pdf: 6838849 bytes, checksum: 0dc3d679b50639d508ce7d89ed869266 (MD5) Previous issue date: 2005 / Resumo: As análises laboratoriais estão sujeitas a diversos interferentes e, mesmo em indivíduos saudáveis, sofrem variações decorrentes de fatores biológicos e/ou laboratoriais, que podem gerar equívocos na interpretação dos resultados de exames. Com o aperfeiçoamento dos equipamentos e da implantação de rígidos sistemas de controle de qualidade, ocorreu uma sensível diminuição da variabilidade analítica e pós-analítica nos exames dos laboratórios clínicos. Conseqüentemente, o enfoque atual está na busca da origem das variações préanalíticas. Um componente biológico muito estudado é o intra-individual, que é inerente ao próprio indivíduo e modifica-se ao longo do tempo. o objetivo deste trabalho foi o de avaliar a ocorrência de ritmos biológicos em analitos bioquímicos séricos (correlacionando-os com a frequência de doenças) e analisar a prevalência de dislipidemias, assim como a regulação sérica da lipoproteína(a), numa população brasileira. Para tal foram realizados quatro estudos retrospectivos e um prospectivo de avaliação dos resultados de diversos exames laboratoriais de pacientes atendidos no Hospital das Clínicas da Unicamp, no período de 1996 a 2003. Os parâmetros analisados foram: ácido úrico, cálcio, colesterol, creatinina, fósforo, HDL-colesterol, LDL-colesterol, lipoproteína(a), triglicérides e uréia. Análises estatísticas foram realizadas utilizando-se o programa SAS e SPSS para análises descritivas e comparativas. Para a análise temporal foi utilizado o método Cosinor. Os valores encontrados para colesterol, HDL-colesterol, LDL-colesterol, triglicérides e Lp(a) estão fora dos recomendados pelo NCEP e adotados pela IIIDBSD em uma grande parcela da população estudada. Foram detectados ritmos sazonais nas determinações séricas de colesterol, HDL-colesterol, LDL-col~sterol, cálcio e creatinina. Além disso, os ritmos encontrados para colesterol e LDL-colesterol se associaram a uma maior freqüência de manifestações clínicas da aterosclerose na região estudada. Conclui-se que os valores observados para colesterol, HDL-colesterol, LDL-colesterol, triglicérides e Lp(a), tanto em adultos como crianças e adolescentes, indicam a altaprevalência de dislipidemias nesta região. Os bioritmos de colesterol, HDL-colesterol, LDL-colesterol, cálcio e creatinina devem ser valorizados como uma importante causa de variação pré-analítica no laboratório clínico e pelo fato dos ritmos dos lípides e lipoproteínas se associarem ao ritmo de prevalência de aterosclerose na região. Estes resultados resgatam a importância dos "relógios biológicos" na prática médica / Abstract: Laboratory exams are subject to several interfering aspects and even healthy individuaIs may present variations, stemming from biological and/or laboratory factors, and generating problems in the outcome interpretation of exams. As a consequence of laboratory technological improvement, information technology and strict quality control systems, a marked decrease in analytical and post-analytical variability has taken place in clinical laboratories today. Accordingly, studies have preferably focused on the origin of pre-analytical errors. Among the biological components current1y being investigated there is the intra-individual, which is inherent to the individual and changes over time. The objective of this work was to evaluate the occurrence of biological rhythms in several biochemical serum parameters (correlating with atheroscleroses) and to measure the prevalence of dyslipidemia, as well as the modulation of serum lipoprotein(a), in a Brazilian population. For such four retrospective studies and a prospective one the results of severaI biochemical serum parameters of individuaIs registered at a referral University Hospital in Campinas - Unicamp,duringthe yearsof 1996to 2003 were evaluated. The analyzed parameters were: uric acid, calcium, cholesterol, creatinine, phosphorus, HDL-cholesterol, LDL-cholesterol, lipoprotein(a), triglycerides and urea. Statistical analyses were carried out by the SAS or SPSS programs for descriptive and comparative analyses. Temporal analyses were carried out using the Cosinor method. The values found for cholesterol, HDL-cholesterol, LDL-cholesterol, triglycerides and Lp(a) are out of the recommended ranges by NCEP and adopted by IIIDBSD in a great portion of the studied population. Seasonal rhythms was observed in serum cholesterol, HDL-cholesterol, LDL-cholesterol, calcium ~nd creatinine. The correlation between the rhythms of cholesterol and LDLcholesterol and the prevalence of manifestations of atherosclerosis strongly suggest their impact of seasonality on coronary artery disease. In conc1usion, the serum concentrations of cholesterol, HDL-cholesterol, LDL-cholesterol, triglycerides and Lp(a), so much in aduIts as children and adolescents, indicated the high prevalence of dyslipidemia in this area. The sazonality observed for cholesterol, HDLcholesterol, LDL-cholesterol, calcium and creatinine should be considered a significant cause of pre-analytical variation in these laboratory tests and also the rhythms of lipids and lipoproteins are associated with atherosc1erosis rhythmicity in the studied area. These results emphasize the importance of "biological c1ocks" in medical practice / Doutorado / Patologia Clinica / Doutor em Ciências Médicas

Orientador: Luis Alberto Magna / Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Ciências Médicas / Made available in DSpace on 2018-07-19T18:10:27Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Dalpino_Dirceu_M.pdf: 1692260 bytes, checksum: b4ea574ae451d2b794563c4f1aea075d (MD5) Previous issue date: 1994 / Resumo: Muitos pacientes portadores de hanseníase virchoviana, após longo tempo de evolução, apresentam alterações dérmicas muito semelhantes aos xantomas e seus exames histológicos mostram numerosos macrófagos carregados de material lipídico. Esses fatos, associados a alterações humorais dos lipídeos descritas na literatura, sugerindo alterações no metabolismo dos mesmos, levou-nos a estudos, visando estabelecer valores médios em pacientes, utilizando-se de novas determinações lipoprotêicas e de apoproteínas muito mais precisas. Para tanto, selecionamos 82 pacientes virchovianos internados no Instituto Lauro de Souza Lima, Bauru, S.P. ou atendidos ambulatorialmente no Centro de Saúde I da mesma cidade, que não estivessem apresentando surto reacional do tipo eritema nodoso e dosamos o colesterol, triglicérides, HDL-colesterol, LDL-colesterol, apoproteínas AI e B, Lipoproteína(a), lipídeos totais e suas frações. Efetuamos também as dosagens da glicemia e do ácido úrico por estarem associados com distúrbios lipídicos, quando em níveis aumentados. Concomitantemente, efetuamos o levantamento dos dados de necrópsias realizadas neste Instituto entre 1971 e 1989, com a finalidade de obtermos informações anatomopatológicas, que sugerissem possíveis alterações nos valores dos lipídeos e das ipoproteínas em pacientes virchovianos. O valor médio do colesterol e do LDL-colesterol em nossos pacientes não apresentou diferença estatística significativa em relação ao do grupo controle. Já o valor médio do HDL colesterol apresentou diferença estatística significativa em relação ao grupo controle, porém está dentro dos limites da normalidade. Por outro lado a Lipoproteína(a) apresentou valor médio acima de 20 mg/dl em 64,6% dos pacientes, contra 33,3% no grupo controle. Na análise dos dados de necrópsia não se observou relação entre idade, forma clínica e a presença de aterosclerose. Das 209 necrópsias realizadas, 166 (79,4%) são de pacientes virchovianos. A aterosclerose estava presente em 92% dos virchovianos e 93% das outras formas clínicas. O encontro de Lipoproteína(a) aumentada, em pacientes portadores de hanseníase virchoviana é importante, porque existe uma comprovada relação entre esta lipoproteína e alterações vasculares tipo ateroscleróticas e distúrbios na fibrinólise / Abstract: An alteration in the lipid metabolism of lepromatous leprosy patients has been reported by several workers.The cardiovascular disease, especially the atherosclerosis, is frequentely refered in the anatomopathological description of lepromatous leprosy inpatients from Instituto Lauro de Souza Lima in the city of Bauru . A subnormal level of serum total cholesterol has been observed in active lepromatous leprosy. Concerned of this fact, we determined the blood level of the protector and risk factor of the cardiovascular diseases in 82 lepromatous leprosy inpatients from that Institute and outpatients of the Healthcare Center-I Ambulatory, in Bauru.We didn't confirm the low cholesterol level refered in many surveys and the value of the HDL cholesterol was dif.ferent from the data found among lepromatous leprosy patients from India. Fibrinolytic activity is significantly decreased in patients of lepromatous Ieprosy and in erythema nodosum leprosum40,41,42,67,68. Plasminogen and apolipoprotein(a) are also genetically linked on human chromosome 6, and partial amino acid sequence ofboth is homologous31 . On the values observed we can state that the level of the lipoprotein(a) is very important for the determination of the cardiovasvular disease risk and alterations in the fibrinolytic activity of the lepromatous leprosy patients. This is so because we found high increased blood level of lipoprotein(a) in those patients when compared to the levei found in other surveys / Mestrado / Mestre em Medicina Interna

Doutor -- Universidade de Sao Paulo. Faculdade de Saude Publica. Departamento de Nutricao, Sao Paulo, 2003.

As origens das populações e o processo de povoamento das Américas são questões bastante controversas e, por isso, têm sido amplamente estudadas. O gene LDLR (low density lipoprotein receptor), que está localizado no braço curto do cromossomo 19 (p13.1-p13.3) e possui 18 éxons, bem como uma porção 3’UTR onde ocorrem dois elementos Alu completos (chamados de U e D) e um parcial, foi escolhido para esclarecer esses e outros problemas de evolução e variação genética humana. O objetivo geral deste trabalho foi verificar o que esta região hipervariável, especificamente na sua porção U, nos indicaria sobre a história evolutiva das populações ameríndias. Para este trabalho foram analisadas amostras de DNA de indivíduos nativos da Mongólia (n=24), da Sibéria (n=26), das Américas do Norte (n=11), Central (n=26) e do Sul (n=16), totalizando 14 populações e 103 indivíduos. Essas amostras foram amplificadas pela técnica de PCR (polymerase chain reaction), utilizando-se primers específicos para o segmento hipervariável U e, posteriormente, foram elas seqüenciadas automaticamente. Quatorze sítios polimórficos foram encontrados, classificáveis em sete haplótipos, sendo que o sítio 3809 apresentou uma transversão de C para G não descrita na literatura. A estimativa geral de diversidade nucleotídica (π) foi de 0.62%, considerada alta para um marcador autossômico. Verificou-se uma certa uniformidade haplotípica entre a Ásia e a América, mas com a diferenciação maior ocorrendo entre a Mongólia e a América+Sibéria. Não foi detectada diferenciação significativa entre nativos sul e centro-americanos. De um modo geral, o estudo desse marcador confirmou uma provável origem asiática para as populações ameríndias e apoiou a hipótese de uma única onda de migração no processo de povoamento pré-histórico das Américas.

Neste estudo observamos os efeitos da ausência de receptores para LDL sobre os níveis plasmáticos de colesterol, pressão arterial, controle reflexo da freqüência cardíaca, nitratos totais e estresse oxidativo em eritrócitos e tecido cardíaco. Para tanto utilizamos camundongos controle (n=13, para avaliações hemodinâmicas e de estresse oxidativo, e n=11, para dosagem de colesterol), e Knockout para receptores de LDL controle (n= 6, para avaliações hemodinâmicas e de estresse oxidativo, e n=5, para dosagem de colesterol). Como análise estatística utilizamos o teste T de Student para amostras não pareadas, considerando-se significativo quando p<0,05. A ausência desses receptores aumentou os níveis plasmáticos de colesterol total em mg/dL (179± 35) no grupo knockout (KO), em relação ao controle (109± 13). Esse resultado foi acompanhado pelo aumento da pressão arterial média (PAM) em mmHg no grupo KO (140±3), quando comparado ao controle (118±6). A freqüência cardíaca basal não foi significativamente diferente entre os grupos, mas o reflexo comandado pelos pressoreceptores estava significativamente atenuado nos animais KO. Tanto em eritrócitos como no tecido cardíaco, a atividade das enzimas antioxidantes apresentou-se significativamente reduzida; e o dano oxidativo, expresso pela dosagem de carbonilas e quimiluminescência, esteve significativamente aumentado no grupo KO. Esses resultados foram acompanhados pela redução dos níveis de nitratos totais, indicando uma redução da biodisponibilidade de óxido nítrico circulante nesses animais. Esses resultados indicam que a ausência de receptores para LDL não só causam aumento dos níveis de colesterol sangüíneo, mas também do estresse oxidativo. Esses aumentos poderiam estar contribuindo tanto para aumentar a degradação do óxido nítrico quanto para reduzir sua síntese, resultando em aumento da PA e prejuízo da sensibilidade barorreflexa, observados nesse estudo.

Tese (doutorado) - Universidade Federal de Santa Catarina, Centro de Ciências Biológicas, Programa de Pós-Graduação em Bioquímica, Florianópolis, 2016. / Made available in DSpace on 2016-10-11T04:07:13Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2016Bitstream added on 2017-07-11T04:21:40Z : No. of bitstreams: 1 342134.pdf: 7285031 bytes, checksum: b987d4d26a82eb2ecb193bbfe9adeb3d (MD5) / A aterosclerose é uma doença inflamatória crônica caracterizada pelo acúmulo de lipídios e elementos celulares nas artérias de calibre médio e grande porte. Neste contexto, a modificação oxidativa da lipoproteína de baixa densidade (LDL) e a geração de espécies reativas no ambiente vascular desempenham um papel importante no desenvolvimento desta patogênese. O disseleneto de difenila (PhSe)2, um composto orgânico de selênio, tem demonstrado relevante papel na prevenção da aterosclerose e de outras doenças relacionadas com o estresse oxidativo em diversos modelos experimentais. Os efeitos antioxidantes do (PhSe)2 estão relacionados a sua capacidade em atuar como mimético a glutationa peroxidase e também por aumentar as defesas antioxidantes celulares, através da ativação de fatores de transcrição, como o Nrf2. Neste contexto, nosso objetivo foi investigar os mecanismos moleculares envolvidos no efeito citoprotetor do (PhSe)2 em macrófagos e células endoteliais. Os nossos resultados demonstraram que o pré-tratamento com (PhSe)2 reduziu os efeitos tóxicos induzidos pela LDLox em macrófagos murinos J774, incluindo a geração de ERO, distúrbio da homeostase do ?NO, ativação de metaloproteinases de matriz, formação de células espumosas e disfunção mitocondrial. Além disso, os efeitos da sinalização redox do (PhSe)2 foram acompanhados pela regulação do fator de transcrição NF-?B, aumento dos níveis de GSH e da atividade da GGCS em macrófagos de forma dependente do tempo. Esses resultados estão relacionados com a capacidade do (PhSe)2 em promover a ativação e a translocação nuclear do fator de transcrição Nrf2. Por outro lado, o aumento da atividade da GGCS e a translocação para o núcleo do Nrf2 induzidas pelo (PhSe)2 foram revertidas pelos inibidores de PI3K, JNK e p38MAPK. Ainda, o (PhSe)2 aumentou os níveis proteicos de enzimas antioxidantes, como HO-1 e Prx-1, dependentes de Nrf2. Além disso, este composto aumentou a atividade da GPx, a qual está relacionada com o aumento nos níveis proteicos das isoformas GPx1 e GPx2 da enzima. Interessantemente, o (PhSe)2 aumenta os níveis de MnSOD e GPx2, enzimas que não são alvos de Nrf2, sugerindo que outro fator de transcrição pode estar envolvido no efeito antioxidante do (PhSe)2. Considerando o importante papel das células endoteliais vasculares no processo aterogênico, utilizando células endoteliais da aorta bovina (BAEC), investigamos o efeito citoprotetor do (PhSe)2 nestas células expostas a privação de oxigênio e glicose, seguido de reoxigenação (OGD), simulando um quadro dehipóxia. Inicialmente verificamos que o (PhSe)2, na sua forma reduzida selenol, aumentou a constante de reação com ONOO- na medida que o pH diminuiu, sugerindo apresentar um efeito protetor em casos de acidose metabólica, como ocorre na hipóxia. Além disso, o (PhSe)2 preveniu a morte celular e a geração de ERO/ERN induzidos pela OGD. Ademais, a OGD diminuiu o potencial de membrana mitocondrial e a eficiência respiratória mitocondrial, sendos esses efeitos prevenidos pelo tratamento com (PhSe)2. Este efeito protetor pode estar relacionado, em parte, a sua atividade antioxidante como mimético da GPx e, por outro lado, por sua capacidade em ativar fatores transcricionais promotores do aumento da expressão de enzimas antioxidantes, diminuindo, desta forma, os efeitos nocivos provocados por espécies reativas e melhorando, consequentemente, o ambiente redox celular. Assim, os nossos resultados sugerem que o (PhSe)2 melhorou os sistemas de defesas antioxidantes em macrófagos e em células endoteliais através da modulação de diferentes vias de sinalização.<br> / Abstract : Atherosclerosis is a chronic inflammatory disease characterized by accumulation of lipids and cellular elements in the medium and large-sized arteries. In this context, the oxidative modification of low density lipoprotein (LDL) and the generation of reactive oxygen species (ROS) in the vascular environment play an important role in the development of this pathogenesis. The diphenyl diselenide (PhSe)2, an organic selenium compound, has been demonstrated significant role in prevention of atherosclerosis and other diseases associated with oxidative stress in different experimental models. The antioxidant effects of (PhSe)2 are related to its ability to act as glutathione peroxidase mimetic and also by increasing cellular antioxidant defenses, via activation of transcription factors, such as Nrf2. Thus, our goal was to investigate the molecular mechanisms involved in the cytoprotective effect of (PhSe)2 in macrophages and endothelial cells. Our results showed that pre-treatment with (PhSe)2 reduced the toxic effects induced by oxLDL in J774 murine macrophages, including ROS, disturbance of ?NO homeostasis, matrix metalloproteinase activation, foam cell formation and mitochondrial dysfunction. Moreover, the effects of redox signaling caused by (PhSe)2 were monitored by regulation of the transcription factor NF-?B, increasing GSH levels and GGCS activity in the macrophages in a time-dependent manner. These results are related to the capacity of (PhSe)2 in promoting activation and nuclear translocation of the transcription factor Nrf2. On the other hand, the increased GGCS activity and translocation of Nrf2 to the nucleus-induced by (PhSe)2 were reversed by inhibitors of PI3K, JNK and p38MAPK. Furthermore, (PhSe)2 increased the protein levels of antioxidant enzymes, such as HO-1 and Prx-1, an Nrf2-dependent mechanism. In addition, this compound increased GPx activity, which is related to the rise in the protein levels of GPx1 and GPx2 isozymes. Interestingly, (PhSe)2 increased the protein levels of MnSOD and GPx2, enzymes that are not Nrf2 targets, suggesting that another transcription factor may be involved in the antioxidant effect of (PhSe)2. Considering the important role of vascular endothelial cells in the atherogenic process, using bovine aortic endothelial cells (BAEC), we investigate the cytoprotective effect of (PhSe)2 in this cells exposed to deprivation of oxygen and glucose, followed by reoxygenation (OGD) protocol, simulating a hypoxia condition. Initially we found that the (PhSe)2, in reduced form selenol, increased reaction constant with ONOO- as the pH decreased, suggesting a protective effect in case of metabolicacidosis, as occurs in hypoxia. Furthermore, (PhSe)2 prevented cell death and generation of ROS/RNS induced by OGD. Moreover, OGD decresead the mitochondrial membrane potential and mitochondrial respiratory efficiency, being both of this effects prevented by (PhSe)2 treatment. This protective effect may be, in part, related by its antioxidant activity as GPx mimetic and, secondly, by its ability to activate transcription factors that enhance expression of antioxidant enzymes, reducing, thus, the harmful effects caused by reactive species and improving the intracellular redox environment. Thus, our results suggest that (PhSe)2 improved the antioxidant defense system in macrophages and endothelial cells through modulation of different signaling pathways.

As origens das populações e o processo de povoamento das Américas são questões bastante controversas e, por isso, têm sido amplamente estudadas. O gene LDLR (low density lipoprotein receptor), que está localizado no braço curto do cromossomo 19 (p13.1-p13.3) e possui 18 éxons, bem como uma porção 3’UTR onde ocorrem dois elementos Alu completos (chamados de U e D) e um parcial, foi escolhido para esclarecer esses e outros problemas de evolução e variação genética humana. O objetivo geral deste trabalho foi verificar o que esta região hipervariável, especificamente na sua porção U, nos indicaria sobre a história evolutiva das populações ameríndias. Para este trabalho foram analisadas amostras de DNA de indivíduos nativos da Mongólia (n=24), da Sibéria (n=26), das Américas do Norte (n=11), Central (n=26) e do Sul (n=16), totalizando 14 populações e 103 indivíduos. Essas amostras foram amplificadas pela técnica de PCR (polymerase chain reaction), utilizando-se primers específicos para o segmento hipervariável U e, posteriormente, foram elas seqüenciadas automaticamente. Quatorze sítios polimórficos foram encontrados, classificáveis em sete haplótipos, sendo que o sítio 3809 apresentou uma transversão de C para G não descrita na literatura. A estimativa geral de diversidade nucleotídica (π) foi de 0.62%, considerada alta para um marcador autossômico. Verificou-se uma certa uniformidade haplotípica entre a Ásia e a América, mas com a diferenciação maior ocorrendo entre a Mongólia e a América+Sibéria. Não foi detectada diferenciação significativa entre nativos sul e centro-americanos. De um modo geral, o estudo desse marcador confirmou uma provável origem asiática para as populações ameríndias e apoiou a hipótese de uma única onda de migração no processo de povoamento pré-histórico das Américas.

Neste estudo observamos os efeitos da ausência de receptores para LDL sobre os níveis plasmáticos de colesterol, pressão arterial, controle reflexo da freqüência cardíaca, nitratos totais e estresse oxidativo em eritrócitos e tecido cardíaco. Para tanto utilizamos camundongos controle (n=13, para avaliações hemodinâmicas e de estresse oxidativo, e n=11, para dosagem de colesterol), e Knockout para receptores de LDL controle (n= 6, para avaliações hemodinâmicas e de estresse oxidativo, e n=5, para dosagem de colesterol). Como análise estatística utilizamos o teste T de Student para amostras não pareadas, considerando-se significativo quando p<0,05. A ausência desses receptores aumentou os níveis plasmáticos de colesterol total em mg/dL (179± 35) no grupo knockout (KO), em relação ao controle (109± 13). Esse resultado foi acompanhado pelo aumento da pressão arterial média (PAM) em mmHg no grupo KO (140±3), quando comparado ao controle (118±6). A freqüência cardíaca basal não foi significativamente diferente entre os grupos, mas o reflexo comandado pelos pressoreceptores estava significativamente atenuado nos animais KO. Tanto em eritrócitos como no tecido cardíaco, a atividade das enzimas antioxidantes apresentou-se significativamente reduzida; e o dano oxidativo, expresso pela dosagem de carbonilas e quimiluminescência, esteve significativamente aumentado no grupo KO. Esses resultados foram acompanhados pela redução dos níveis de nitratos totais, indicando uma redução da biodisponibilidade de óxido nítrico circulante nesses animais. Esses resultados indicam que a ausência de receptores para LDL não só causam aumento dos níveis de colesterol sangüíneo, mas também do estresse oxidativo. Esses aumentos poderiam estar contribuindo tanto para aumentar a degradação do óxido nítrico quanto para reduzir sua síntese, resultando em aumento da PA e prejuízo da sensibilidade barorreflexa, observados nesse estudo.

Orientador: Fernanda Klein Marcondes / Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Odontologia de Piracicaba / Made available in DSpace on 2018-08-10T09:25:59Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Neves_VanderJosedas_M.pdf: 681977 bytes, checksum: 464ec8f4e4c7ed9de2fae2bed0778c12 (MD5) Previous issue date: 2008 / Resumo: Complicações metabólicas e vasculares podem resultar em aterosclerose, que constitui um grave problema de saúde pública, sendo responsável por cerca da metade da mortalidade relacionada a doenças cardiovasculares no mundo ocidental. Portanto, estudar os fatores de risco associados a esta patologia é fundamental para que se possa estabelecer diretrizes de tratamento e prevenção de distúrbios cardiovasculares. O estresse crônico e a ingestão de dietas hipercalóricas têm sido reconhecidos como fatores de risco para doenças cardiovasculares e para a aterosclerose, por seus efeitos potencialmente deletérios sobre o sistema cardiovascular. O objetivo deste estudo foi avaliar, em ratos, os efeitos aterogênicos do estresse crônico moderado e imprevisível (ECMI), associado ou não à ingestão de dieta hipercalórica, sobre a sensibilidade às catecolaminas em átrio direito e aorta torácica, sobre a morfologia vascular e a influência de lipídios nas alterações funcionais e morfológicas observadas. Buscando avaliar os mecanismos relacionados aos efeitos do estresse crônico, associado ou não, ao consumo de dieta hipercalórica, apresentamos nos capítulos 1 e 2, resultados de estudos in vitro. No capítulo 1, foi mostrado que o ECMI promove supersensibilidade à fenilefrina em aorta torácica isolada de ratos, aumento da espessura do endotélio e da camada média vascular, dislipidemia aterogênica, e elevado índice aterogênico, em relação ao grupo controle, sem alteração da sensibilidade atrial à noradrenalina. Tais alterações parecem estar relacionadas à diminuição da síntese de óxido nítrico endotelial e aumento das concentrações séricas de lipoproteína de baixa densidade (LDL) em ratos submetidos ao ECMI. No capítulo 2 foi mostrado que, em animais não submetidos a estresse, a dieta hipercalórica promoveu aumento da adiposidade e das concentrações séricas de LDL, sem alterações nas concentrações de colesterol total e triglicerídeos, e sem alterações funcionais ou estruturais na aorta torácica. O ECMI promoveu supersensibilidade vascular à fenilefrina, aumento da espessura do endotélio e da camada média vascular e elevação da concentração sérica de LDL em ratos tratados com dieta hipercalórica e em animais tratados com dieta controle, em relação aos respectivos grupos não submetidos a estresse. Além disso, o ECMI promoveu alterações contrárias sobre a adiposidade nos grupos tratados com dieta controle e dieta hipercalórica, diminuindo a adiposidade no primeiro grupo e elevando-a no segundo, em relação aos grupos tratados com a mesma dieta e não submetidos a estresse. Considerando que, apesar de elevadas concentrações de LDL, não houve alterações funcionais ou estruturais na aorta torácica de ratos alimentados com dieta hipercalórica, não submetidos ao ECMI, e que, embora tenha ocorrido maior elevação nas concentrações de LDL em ratos estressados tratados com dieta hipercalórica, as alterações funcionais e morfológicas observadas na aorta torácica e as concentrações de corticosterona deste grupo não diferiram em relação aos animais estressados alimentados com dieta controle. Os resultados apresentados nos capítulos 1 e 2 indicam que o estresse crônico parece potencializar os efeitos aterogênicos das LDL / Abstract: Metabolic and vascular complications can result in atherosclerosis, which constitutes a great problem of public health, associated to approximately half of the deaths related to the cardiovascular illnesses in the occidental world. Therefore to the establishment of guidelines for treatment and prevention of cardiovascular diseases, it is important to study risk factors associated to this pathology. Chronic stress and hypercaloric diet ingestion have been recognized as risk factors for cardiovascular diseases because of its potential deleterious effect on the cardiovascular system. The aim of this work was to evaluate, in rats, the atherogenic effects of chronic mild unpredictable stress (CMS) associated or not to the ingestion of hypercaloric diet on the sensitivity of right atria and thoracic aorta to catecholamines, on the vascular morphology and the influence of lipids in the possible functional and morphological vascular alterations. In order to evaluate the mechanisms related to the effects of chronic stress, associated or not to the consumption of hypercaloric diet, we present in the chapters 1 and 2, results of in vitro studies. In the chapter 1, it was shown that CMS promotes supersensitivity to phenylephrine in thoracic aorta isolated from rats, increases the endothelium and tunica media thickness, atherogenic dyslipidemia, and higher atherogenic index, in comparison with the control group, without alteration in the atrial sensitivity to noradrenaline. These alterations seem to be related to the inhibition of endothelial nitric oxide production and to the increase in the seric levels of low-density lipoprotein (LDL) in rats submitted to the CMS. In chapter 2, it was shown that in non-stressed-animals, hypercaloric diet promoted an increase in the adiposity and seric levels of LDL, without alterations in the levels of total cholesterol, triglicerides and without functional or structural changes in the thoracic aorta. The CMS promoted vascular supersensitivity to phenylephrine, increased the endothelium and tunica media thickness and increased the seric levels of LDL in rats treated with hypercaloric diet and control diet, in comparison with the groups that were not submitted to stress. Furthermore, the CMS promoted contrary alterations on the adiposity in the groups treated with control and hypercaloric diet, decreasing the adiposity in the first one and increasing it in the second group, in comparison with the respective groups treated with the same diet, but not submitted to the CMS. Considering that in spite of high levels of LDL, there were no functional or morphological changes in the thoracic aorta from rats treated with hypercaloric diet and not submitted to the CMS, and that despite the biggest rise in the LDL levels in stressed rats treated with hypercaloric diet, there was no difference between this group and stressed rats treated with control diet in the functional and morphological changes observed in the thoracic aorta as well in the corticosterone levels, the results presented in the chapter 1 and 2, indicate that chronic stress seems to increase the atherogenic effects of the LDL / Mestrado / Fisiologia Oral / Mestre em Odontologia