A suinocultura ocupa um lugar de destaque na economia nacional, e, com o intuito de aumentar a disputa por novos mercados, tem buscado a produção de alimentos de qualidade e inócuos. Dentro dessa concepção, a presença de Listeria monocytogenes no produto constitui uma preocupação, principalmente devido à gravidade das infecções, veiculadas por alimentos, em humanos. O objetivo deste estudo foi avaliar a presença de Listeria sp. em carcaças de suínos em diferentes etapas da linha de abate, verificando os perfis de resistência aos antimicrobianos e identificando grupos clonais de L. monocytogenes obtidos por macrorestrição seguida de eletroforese em campo pulsado (PFGE). Suabes de superfície foram coletados no ambiente e na superfície de carcaças após a escalda, flambagem, evisceração e na entrada da câmara fria, em dois abatedouros frigoríficos localizados no Sul do Brasil. Dos 270 suabes analisados, 21 (7,7%) foram positivos para o gênero Listeria, distribuídas nas espécies, L. innocua (10), L. monocytogenes (9), L. ivanovii (1) e L. seeligeri (1). Os resultados do PFGE demonstraram a existência de dois grupos clonais de L. monocytogenes. O primeiro grupo clonal compreendeu cinco isolados de carcaça do sorotipo 1/2c, enquanto o segundo grupo incluíu quatro isolados de carcaça ou ambiente de sorotipos distintos (1/2c, 1/2a e 1/2b). Nos antibiogramas conduzidos, os isolados de L. monocytogenes foram susceptíveis a todos os antimicrobianos testados. O gênero Listeria foi encontrado no ambiente, bem como contaminando a superfície das carcaças suínas de forma distinta nos dois abatedouros visitados. No frigorífico A apenas uma carcaça antes da flambagem foi positiva (L. innocua), enquanto que os demais isolados obtidos foram isolados do ambiente e de carcaças do frigorífico B. Esse estabelecimento apresentava maior acúmulo de água e resíduos no ambiente, além de contar com flambador manual de carcaças e ocorrer o extravasamento de conteúdo intestinal, durante a evisceração com maior frequência do que no frigorífico A. Nas condições encontradas no frigorífico B, grupos clonais de L. monocytogenes distribuíram-se nas carcaças e no ambiente. / Pork production contributes significantly to the Brazilian national account, and producers have been trying to achieve opportunities for growth by improving the quality and safety of pork. In this connection, the presence of Listeria monocytogenes in pork may be a matter of concern, since food-borne listeriosis is a serious disease in humans. Thus, this study aimed: i. to evaluate the isolation of Listeria sp. from pork carcasses after different steps of the slaughter process; ii. to identify clonal groups among L. monocytogenes isolates submitted to macro-restriction followed by Pulsed-field electrophoresis (PFGE); iii. to evaluate their antimicrobial resistance profiles. Swabs were taken from the slaughter line environment and from carcasses surface after scalding, flaming and evisceration and before chilling at two slaughterhouses in southern Brazil. From a total of 270 swabs, 21 (7.7%) were positive for genus Listeria, distributed in the following species: L. innocua (10), L. monocytogenes (9), L. ivanovii (1), and L. seeligeri (1). PFGE results showed two clonal groups among L. monocytogenes isolates. The first group encompassed five carcass isolates from serotype 1/2c, while the second group included four isolates from carcass or environment belonging to different serotypes (1/2c, 1/2b and 1/2a). Antibiograms demonstrated that all L. monocytogenes isolates were susceptible to the tested antimicrobials. Listeria sp. were found on carcasses sampled at the two slaughterhouses, but on different frequency of isolation. In slaughterhouse A, only one carcass, sampled after flaming, was positive (L. innocua), while all the other Listeria strains were isolated from samples taken at slaughterhouse B. This plant presented a higher accumulation of water and residues on the floor and walls, a manual flaming of the carcasses was performed, and a higher frequency of fecal contamination on carcasses after evisceration was observed. Under the conditions observed in slaughterhouse B, clonal groups of L. monocytogenes were able to spread between carcasses and to the environment.

A bacteriocina P34 é produzida por um Bacillus sp. e apresenta atividade antimicrobiana para diversas espécies de Listeria sp. e para L. monocytogenes ATCC 7644. Neste trabalho, foi pesquisada a presença de bactérias lácticas em lingüiça frescal de frango. Os resultados demonstraram o isolamento de seis culturas em placas de ágar MRS a 30ºC por 48 h. Cinco das seis linhagens isoladas inibiram o crescimento da L. monocytogenes após incubação a 30o C por 24 h. Os sobrenadantes brutos destas bactérias lácticas demonstraram efeito sinérgico quando adicionados em conjunto com a bacteriocina P34 frente ao microrganismo indicador, L .monocytogenes, pelo método de difusão em ágar com discos. Foi inoculada L. mononocytogenes ATCC 7644 em suspensão com 103 UFC/g em lingüiça frescal de frango no dia zero e recuperada em meio MOX nos dias zero, três, sete e dez da inoculação. Os resultados permitiram concluir que a bacteriocina P34 parcialmente purificada na concentração de 256 UA/g inibiu L. monocytogenes em todos os tempos. A bacteriocina P34 parcialmente purificada foi testada em envoltórios naturais de bovinos (tripas semi-secas salgadas) frente ao mesmo microrganismo indicador, L. monocytogenes ATCC 7644, demonstrando sua inibição in vitro. / The bacteriocin P34, produced by Bacillus sp., showed antimicrobial activity for many species of Listeria sp and L. monocytogenes ATCC 7644 . In this work, it was investigated the presence of lactic bacteria in fresh chicken sausage. The results demonstrated the isolation of six cultures in MRS agar plates at 30o C for 48h. Five of the six isolated strains inhibited the growing of the L. monocytogenes after incubation at 30ºC for 24h. The crude supernatants of these lactic bacteria demonstrated the synergic effect when it were added together with the bacteriocin P34 against indicator microorganism, L. monocytogenes ATCC 7644, using the method of diffusion in agar with paper discs. L. monocytogenes ATCC 7644 was inoculated in a suspension with 103 UFC/g in chilled chicken sausage and recovered in MOX counting from zero, three, seven and ten days from the inoculationt. The results allowed concluding that the P34 bacteriocin partially purified, in a 256 UA/g concentration, inhibited the indicator microorganism in all periods of time. At the same time, the partially purified P34 bacteriocin were tested in natural bovine wrapping ( salty semi-dried tripe ) using the same indicator micro-organism, L. monocytogenes ATCC 7644, demonstrating its inhibition in vitro.

129 f. / Submitted by Cynthia Nascimento (cyngabe@ufba.br) on 2013-03-05T12:14:39Z No. of bitstreams: 1 Elaine Nóbrega Gibson Silva.pdf: 1277468 bytes, checksum: b6e241394c1af98c42fa8321209cfaa0 (MD5) / Approved for entry into archive by Alda Lima da Silva(sivalda@ufba.br) on 2013-03-05T21:07:46Z (GMT) No. of bitstreams: 1 Elaine Nóbrega Gibson Silva.pdf: 1277468 bytes, checksum: b6e241394c1af98c42fa8321209cfaa0 (MD5) / Made available in DSpace on 2013-03-05T21:07:46Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Elaine Nóbrega Gibson Silva.pdf: 1277468 bytes, checksum: b6e241394c1af98c42fa8321209cfaa0 (MD5) / CAPES / Apesar dos recentes avanços nas tecnologias de controle de patógenos em alimentos, os consumidores tem procurado alimentos “naturais”, isto é, submetidos a tratamentos menos agressivos e isentos de conservadores químicos. O emprego de substâncias consideradas GRAS ou “Geralmente Reconhecidas como Seguras” é uma boa alternativa. Dentre estas substâncias, podemos citar os bacteriófagos, que são vírus que infectam bactérias e estão largamente distribuídos do ambiente, e os sais de ácidos orgânicos de cadeia curta. Os queijos são alimentos apontados com freqüência, como possíveis veículos de contaminação por Listeria monocytogenes, um importante patógeno causador de doença veiculada por alimentos, e sua importância vem aumentando desde a década de 1980. Apesar do número de casos da doença por ano ser relativamente baixo, a infecção pode ser grave com letalidade acima de 30%. Os queijos possuem uma série de condições favoráveis ao desenvolvimento do microrganismo: intensa manipulação no processamento, armazenamento e distribuição; elevada atividade de água, principalmente em queijos de massa macia com média e alta umidade; mistura de diferentes ingredientes; além de serem alimentos mantidos sob refrigeração, o que particularmente favorece a multiplicação de Listeria monocytogenes. Em virtude do exposto, o objetivo deste estudo é avaliar a eficácia do bacteriófago P100 e sais de ácidos orgânicos para o controle da contaminação por Listeria monocytogenes em queijos de massa macia, do tipo Minas Frescal e Coalho. Determinou-se a contagem de células viáveis de Listeria monocytogenes, mistura dos sorotipos 1/2a e 4b, em amostras controle e em amostras submetidas aos tratamentos pelo bacteriófago P100 e sais de ácidos orgânicos nos tempos 0 (zero) e sete dias em armazenamento a 10 °C. Os resultados encontrados demonstram que os tratamentos utilizados foram eficazes para o controle da bactéria no tempo 0 (zero) e após sete dias sob refrigeração, reduzindo por volta de dois ciclos logarítmos a população microbiana no tempo 0 (zero) em ambos tipos de queijos, o que foi estatisticamente significativo (p<0,05). Entretanto, em sete dias de armazenamento observou-se aumento na população do microrganismo (caráter psicrotrófico), sendo obtida uma menor redução decimal (RD), aproximadamente 1 ciclo log, porém com diferença também estatisticamente significativa (p<0,05). Não se observou diferença estatística entre os tratamentos utilizando os sais de ácidos orgânicos (p>0,05). Este estudo traz uma valiosa contribuição, além de ser pioneiro no Brasil, ao utilizar o bacteriófago P100 e sais de ácidos orgânicos em alimentos típicos brasileiros prontos para o consumo, uma vez que não há relatos na literatura científica nacional sobre a eficácia desses aditivos em queijos. / Universidade Federal da Bahia. Faculdade de Farmácia. Salvador-Ba, 2011.

Submitted by Reginaldo Soares de Freitas (reginaldo.freitas@ufv.br) on 2017-03-24T18:01:18Z No. of bitstreams: 1 texto completo.pdf: 1356478 bytes, checksum: 51adfd6cd0f89b63346e1bda8f1b9c70 (MD5) / Made available in DSpace on 2017-03-24T18:01:18Z (GMT). No. of bitstreams: 1 texto completo.pdf: 1356478 bytes, checksum: 51adfd6cd0f89b63346e1bda8f1b9c70 (MD5) Previous issue date: 2015-02-25 / Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e Tecnológico / Bacteriófagos são vírus específicos de bactérias, os considerados líticos infectam e promovem a lise celular e consequente morte da bactéria hospedeira. Diante disso o interesse da utilização de fagos no controle específico de bactérias patogênicas durante as fases de pré e pós-processamento e armazenamento de alimentos é crescente e muito pesquisado atualmente. O objetivo deste trabalho foi isolar bacteriófagos com especificidade em culturas de L. monocytogenes e avaliar a eficiência de diferentes concentrações dos mesmos no controle de populações L. monocytogenes em meio de cultura, em leite e em queijos. O bacteriófago foi isolado de intestinos de galinhas caipiras oriundas da Zona Rural de Viçosa-MG. Foram testadas concentrações de 105, 106 e 108 UFP·mL-1 do bacteriófago 105 no controle de L. monocytogenes em concentração de UFC· mL-1 . Os testes realizados em meio de cultura e leite demonstraram a eficiência do bacteriófago reduzindo aproximadamente 4 ciclos logarítmicos da população de L. monocytogenes no período de 9 a 12 horas. Em ambos os testes o tratamento mais eficiente foi quando utilizado a concentração 10 8 UFP·mL-1 de bacteriófagos. No teste em queijo observou-se redução de 3,26 e 1, 07 ciclos logarítmico na população de L. monocytogenes após 14 dias de armazenamento nas temperaturas de 15 °C e 5 °C respectivamente. Foram comparadas duas técnicas para enumeração de bacteriófagos, contagem em placas e contagem por microgotas, não sendo observada diferença entre as duas técnicas. Os resultados desta pesquisa demonstram que o uso de bacteriófagos líticos de no controle de populações L. monocytognes foi eficiente nas três matizes estudas, evidenciando o potencial da aplicação de fagos no biocontrole de populações microbianas. / Bacteriophages are viruses specific bacteria, the lytic considered infect and promote cell lysis and subsequent death of the host bacterium. Therefore the interest of the use of phages as agents for particular control of pathogenic bacteria during the phases of pre and post processing and storage of food is increasing and currently researched. The objective of this study was to isolate bacteriophages with specificity for L. monocytogenes cultures and evaluate the efficiency of different concentrations of the same in the control of L. monocytogenes populations in culture medium, milk and cheese. The bacteriophage was isolated from the intestines of hens arising from the Rural Area of Viçosa-MG. Concentrations tested were 105, 106 and 108 PFU.ml-1 bacteriophage in control of L. monocytogenes. The tests performed in culture medium and milk demonstrated bacteriophage efficiency by reducing approximately 4 log cycles of L. monocytogenes in the period from 9 to 12 hours. In both tests was the most effective treatment when used at a concentration of 108 PFU. ml-1 bacteriophages. In the test cheese was observed decrease of 3.26 and 1.07 logarithmic cycles in L. monocytogenes population after 14 days of storage at temperatures of 15 ° C and 5 ° C respectively. We compared two techniques for enumeration of bacteriophages, the count plating technique and score by droplets, with no observed difference between the two techniques. These results demonstrate that the use of lytic bacteriophages of L. monocytognes in the control population was efficient in three ways studies showed the potential application of the phage biocontrol microbial populations.

Submitted by Nathália Faria da Silva (nathaliafsilva.ufv@gmail.com) on 2017-06-09T18:17:46Z No. of bitstreams: 1 resumo.pdf: 93744 bytes, checksum: 9c82a9017db2449c670fde86f0fec24e (MD5) / Made available in DSpace on 2017-06-09T18:17:46Z (GMT). No. of bitstreams: 1 resumo.pdf: 93744 bytes, checksum: 9c82a9017db2449c670fde86f0fec24e (MD5) Previous issue date: 2000-09-10 / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior / A atividade in vitro das citolisinas, listeriolisina O (LLO) e fosfatidilcolina- fosfolipase C (PC-PLC), uma lecitinase e a virulência in vivo, de isolados de Listeria monocytogenes proveniente de ambientes de laticínios, de alimentos e de humanos foram determinados. A susceptibilidade a agentes antimicrobianos também foi avaliada e foi feita uma comparação entre dois meios de cultura, para determinar a atividade de PC-PLC. Os isolados de alimentos e de humanos pertenciam aos sorotipos 1/2a, 1/2b e 4b; e 60% dos isolados procedentes de ambientes de laticínios pertenciam ao sorogrupo 4. A atividade hemolítica em hemácias de carneiro foi constatada em todos os isolados analisados, com exceção do isolado 506/82, proveniente de líquido cefalorraquidiano. A atividade de PC-PLC em ágar BHI, contendo 2% de NaCl e 5% de emulsão de gema de ovo, foi detectada em 91,9% dos isolados de L. monocytogenes após 96 h de incubação sob anaerobiose. Nas espécies L. innocua, L. grayi, L. welshimeri e L. seeligeri, não foi observada atividade hemolítica nem de PC-PLC. A virulência, avaliada em embriões de galinha de viii14 dias, foi constatada em 88,4% dos isolados de L. monocytogenes. Dois isolados de alimentos que apresentaram atividade hemolítica e o isolado 506/82, não-hemolítico, proveniente de humanos, foram avirulentos. Não foi possível relacionar os sorotipos e a presença de fatores de patogenicidade in vitro com a virulência in vivo. Os isolados de outras espécies de Listeria não foram considerados patogênicos por promoverem a morte de 40% ou menos dos embriões inoculados. A resistência a antibióticos foi constatada em 25 (71,4%) dos 35 isolados de L. monocytogenes avaliados. A resistência a cefoxitina foi verificada em 54,3% dos isolados, enquanto 48,6% foram resistentes à kanamicina, 8,6% à cefotaxima e 2,9% à amicacina. Entre os isolados resistentes, 11 (44%) apresentaram resistência a um antibiótico e 14 (56%) foram resistentes a dois ou três agentes antimicrobianos. A comparação do ágar BHI com o ágar Vogel-Johnson para detecção da atividade de PC-PLC revelou que resultados positivos podem ser observados a partir de 24 h de incubação em ágar Vogel-Johnson, em anaerobiose, enquanto, no ágar BHI, a maioria dos resultados positivos ficam evidentes após 72 h de incubação, sob as mesmas condições. Dos 71 isolados de L. monocytogenes avaliados, 55 (77,5%) apresentaram atividade de PC-PLC mas apenas em condições de anaerobiose. Os 34 isolados das outras espécies de Listeria não demonstraram atividade dessa enzima em nenhum dos dois meios de cultura avaliados. Estes resultados permitem sugerir a adoção do teste de PC-PLC em meio Vogel- Johnson entre os testes bioquímicos de diferenciação da espécie L. monocytogenes das demais espécies do gênero. / The in vitro activity of the citolysins, listeriolysin O (LLO) and phosphatidylcholine phospholipase C (PC-PLC), a lecithinase, and the in vivo virulence of some L. monocytogenes strains isolated from dairy industries, foods, and humans were evaluated. The susceptibility to antimicrobial agents and PC-PLC activity in two different culture media were also evaluated. Isolates obtained from foods and humans corresponded to serotypes 1/2a, 1/2b, and 4b, and 60% of those from the dairies belonged to serogroup 4. A hemolytic activity of sheep hematocytes was observed for all isolates but 506/82, obtained from cephalo-rachidian liquid. PC-PLC activity in BHI containing 2% NaCl and 5% yolk emulsion was detected for 91.9% of the isolates of L. monocytogenes after 96h of incubation under anaerobiosis. For L. innocua, L. grayi, L. welshimeri, and L. seeligeri, no hemolytic or PC-PLC activity was observed. Virulence, evaluated in 14-day-old chicken embryos, was observed for 88.4% of the isolates of L. monocytogenes. Two food isolates presenting hemolytic activity and the non-hemolytic isolate 506/82, isolated from humans, were avirulent. No correlation could be established between the serotypes, the in vitro presence of xpathogenicity factors, and in vivo virulence. The isolates of other species of Listeria that caused the death of 40% or less of the inoculated embryos were not considered pathogenic. Resistance to antibiotics was detected for 25 (71.4%) of the 35 L. monocytogenes isolates. Resistance to cefoxitin was observed for 54.3% of the isolates, while 48.6% were resistant to kanamycin, 8.6% to cefotaxime, and 2.9% to amikacin. Among the resistant isolates, 11 (44%) were resistant to one antibiotic and 14 (56%) were resistant to two or three. Comparisons between BHI and Vogel-Johnson agar for the detection of PC-PLC activity demonstrated that positive results could be obtained after 24h of incubation on Vogel-Johnson agar under anaerobiosis, while in BHI, most of the positive results were evident after 72h of incubation under the same conditions. Among the 71 isolates of L. monocytogenes evaluated, 55 (77,5%) presented PC-PLC activity only under anaerobiosis. The 34 isolates of other species of Listeria did not produce lecithinase in none of the tested media. These results suggest that the PC-PLC test on Vogel-Johnson agar can be used with other biochemical tests to distinguish L. monocytogenes from the other species of the genus.

Submitted by Marco Antônio de Ramos Chagas (mchagas@ufv.br) on 2017-11-06T10:14:45Z No. of bitstreams: 1 texto completo.pdf: 1239459 bytes, checksum: e1a7cd2486c370dcab988719055849df (MD5) / Made available in DSpace on 2017-11-06T10:14:45Z (GMT). No. of bitstreams: 1 texto completo.pdf: 1239459 bytes, checksum: e1a7cd2486c370dcab988719055849df (MD5) Previous issue date: 2017-06-26 / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior / A utilização de cepas fermentadoras de Lactococcus lactis subsp. lactis produtoras de nisina em alimentos fermentados tem vantagem para a indústria pois permite um controle adicional de contaminantes, como o patógeno de origem alimentar Listeria monocytogenes. No entanto, as interações microbianas devem ser avaliadas para garantir a produção da bacteriocina no alimento e o efeito na população do patógeno. L. monocytogenes tem a capacidade de resistir a diversas condições de estresse encontradas no alimento e durante o processamento, expressando diferentes genes como o fator siga alternativo (sigB), a enzima glutamato descarboxilase (gadD), a chaperona GroEL e o transportador de glicina betaína (gbu). A exposição a uma condição de estresse em nível subletal é capaz de conferir uma maior resistência a L. monocytogenes de sobreviver a outras situações. Nesse contexto, o objetivo deste trabalho foi avaliar a expressão de genes de estresse de L. monocytogenes em interação com L. lactis subsp. lactis produtor de nisina em meio de cultura e leite. A produção de nisina em caldo BHI e leite foi avaliada por sua detecção no sobrenadante do meio de crescimento e pela expressão do gene nisK. A expressão dos genes de estresse de L. monocytogenes sigB, gadD2, groEL e gbu foi avaliada relativamente a cultura pura e na interação com L. lactis subsp. lactis. A expressão relativa dos genes de estresse de L. monocytogenes foi variável. No entanto, a expressão dos genes sigB, groEL e gbu foi inferior no tempo de 24 h durante a interação, em relação a cultura pura, o que pode indicar uma menor capacidade de sobrevivência aos estresses quando a bactéria se encontra em interação com L. lactis subsp. lactis produtor de nisina. / The use of nisin producing fermentative strains of Lactococcus lactis subsp. lactis in fermented foods has an advantage for the industry because it allows an additional control of contaminants, such as the food-borne pathogen Listeria monocytogenes. However, microbial interactions should be evaluated to ensure bacteriocin production in the food and the effect on the pathogen population. L. monocytogenes has the ability to withstand the various stress conditions encountered in food and during processing, expressing different genes such as the alternative sigma factor (sigB), the glutamate decarboxylase enzyme (gadD), the GroEL chaperone and the glycine betaine transporter (gbu). The exposure to a stress condition at the sublethal level is able to confer a greater resistance to L. monocytogenes to survive other situations. In this context, the aim of this work was to evaluate the expression of L. monocytogenes stress genes in interaction with nisin producing L. lactis subsp. lactis in culture medium and milk. The production of nisin in BHI broth and milk was evaluated by its detection in the supernatant of the growth medium and by the expression of the nisK gene. Expression of sigB, gadD2, groEL and gbu stress genes of L. monocytogenes was evaluated for pure culture and for the interaction with L. lactis subsp. lactis. The relative expression of the L. monocytogenes stress genes was variable. However, expression of the sigB, groEL and gbu genes was lower at 24 h during interaction than in pure culture, which may indicate a lower ability to survive stress when the bacterium is interacting with nisin producing L. lactis subsp. lactis.

Submitted by Reginaldo Soares de Freitas (reginaldo.freitas@ufv.br) on 2018-02-21T13:02:13Z No. of bitstreams: 1 texto completo.pdf: 2137513 bytes, checksum: 7725910b3e0d21458b72ca20693db1f2 (MD5) / Made available in DSpace on 2018-02-21T13:02:13Z (GMT). No. of bitstreams: 1 texto completo.pdf: 2137513 bytes, checksum: 7725910b3e0d21458b72ca20693db1f2 (MD5) Previous issue date: 2017-08-25 / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior / Listeria monocytogenes é uma bactéria Gram-positiva comumente encontrada no ambiente de processamento de alimentos, produtos in natura e processados. Esse patógeno é reconhecido como o agente causador da listeriose, uma doença grave que afeta principalmente indivíduos de grupos de risco. O presente estudo teve como objetivo caracterizar isolados de L. monocytogenes recuperados no Brasil a partir de fontes clínicas, ambiente de processamento de produtos cárneos, e de carne bovina. Os perfis de susceptibilidade aos antibióticos, genes de virulência, diversidade de sorotipos, capacidade de invadir, replicar e se disseminar em células hospedeiras, bem como a morte celular e a produção de IFN induzidas por isolados de L. monocytogenes foram caracterizados. Todos os isolados apresentaram sensibilidade aos antimicrobianos utilizados para o tratamento da listeriose, no entanto a maioria apresentou resistência ou resistência intermediária à clindamicina e à oxacilina. A sorotipagem molecular produziu resultados contraditórios para sete isolados do sorotipo 1/2a, que foram positivos para o gene lmo1118 e exibiram o perfil IIc (sorotipos 1/2c ou 3c). Além disso, quinze isolados do sorotipo 4b amplificaram o gene lmo0737, e foram classificados como atipico IVb-v1. O potencial de invadir células Caco-2 foi significativamente afetado pela presença de codons de parada prematuros (PMSCs) no gene inlA do sorotipo 1/2c (p < 0,005). As cepas variaram amplamente em seus tempos de duplicação intracelular em celulas Caco- 2, e não houve relação clara entre sorotipo ou fonte. Foram observadas diferenças significativas entre os sorotipos com relação a disseminação em células Caco-2; isolados do sorotipo 1/2a apresentaram defeito na disseminação celular, enquanto isolados do sorotipo 1/2b apresentaram maior habilidade de disseminação celular (p <0,0001). Além disso, identificamos três isolados de sorotipo 4b que se disseminaram em uma área aproximadamente duas vezes maior que a cepa de referência 10403S. Não foram observadas tendências quanto aos tempos duplicação intracelular em iBMDM, comparando fontes de isolamento e sorotipos. Os resultados indicam que a replicação intracelular é determinada pelas características genotípicas de cada isolado. A morte celular induzida por alguns isolados após a infecção de iBMDM foi dependente da enzima Caspase 1, indicando que eles induzem morte celular por piroptose. Alguns isolados também induziram alta produção de INF pela linhagem celular iBMDM. Usando macrófagos primários, foi revelado que a produção de INF foi sempre STING dependente, em alguns casos totalmente cGAS independente, parcialmente cGAS dependente, ou mesmo cGAS dependente. Este trabalho caracterizou o perfil patogênico de isolados de L. monocytogenes, permitindo uma melhor compreensão dos mecanismos de infectividade desse patógeno, e levando a uma análise mais profunda dos genomas e outras abordagens experimentais para revelar os mecanismos associados aos fenótipos de virulência mais extremos. / Listeria monocytogenes is a Gram-positive bacterium commonly isolated from food processing environment, raw and processed foods. It is recognized as the causative agent of listeriosis, a serious disease that affects mainly individuals from risk groups. The present study aimed to characterize L. monocytogenes isolates recovered in Brazil from clinical sources, meat processing environmental and beef. Antibiotic resistance profiles, virulence genes, serotype diversity, ability to invade, replicate and spread in host cells, as well as cell death and IFN production induced by L. monocytogenes isolates were characterized. All isolates presented sensitivity to antimicrobials used for listeriosis treatment while most of them presented resistance or intermediate resistance to clindamycin and oxacillin. Molecular serogrouping produced contradictory results for seven isolated from serotype 1/2a, which were positive for the gene lmo1118 and exhibited the profile IIc (serotypes 1/2c or 3c). In addition, fifteen isolates from serotype 4b amplified the gene lmo0737, being classified as atypical IVb-v1. The potential to invade Caco-2 cells was significantly affected by the presence of premature stop codons (PMSCs) in inlA gene of isolates from serotype 1/2c (p < 0.005). The isolates varied widely in their intracellular doubling times, and there was no clear relationship between serotype or source. There were significant differences between serotypes for cell-to-cell spread in Caco-2 cells, isolates from serotype 1/2a were generally impaired in their spreading ability while most os isolates from serotype 1/2b exhibited increased spreading ability (p < 0.0001). In addition, we identified three isolates from serotype 4b that spread nearly twice as much as the reference strain 10403S. No trends were observed regarding intracellular doubling times in iBMDM by comparing sources and serotypes; based on these results, intracellular growth seems to be determined by genetic characteristics of each strain. The cell death induced by some isolates after infection of iBMDM was Caspase 1 dependent, indicating that they induce pyroptosis. Some of these isolates also induced high INF production by iBMDM. Using primary macrophages, it was revealed that INF production was always STING dependent, and in some cases it is fully cGAS independent, partially cGAS dependent, or even mostly cGAS dependent. We have characterized L. monocytogenes isolates that could provide novel insight into infectivity of this pathogen that may not be revealed by studying common laboratory strains, demanding further analysis of their genomes and other experimental approaches to reveal the mechanisms associated with the most extreme phenotypes exhibited.

Dissertação (mestrrado) - Universidade Federal de Santa Catarina, Centro de Ciências Agrárias, Programa de Pós-Graduação em Ciência dos Alimentos, Florianópolis, 2015. / Made available in DSpace on 2015-12-01T03:13:46Z (GMT). No. of bitstreams: 1 336258.pdf: 1244425 bytes, checksum: be66a9ec0820c29bc873fa18ed5894e1 (MD5) Previous issue date: 2015 / O pescado é um alimento de extrema importância na dieta dos seres humanos, pois possui um alto valor nutricional, contribuindo na preservação da saúde humana. Porém, esses alimentos, principalmente os produtos a base de pescados prontos ou pré-prontos para o consumo, quando indevidamente preparados, podem se tornar veículo de transmissão de perigosos agentes infecciosos, como Listeria monocytogenes. Esse micro-organismo, que é natural do ambiente marinho, é considerado como agente etiológico de enfermidades alimentares representa um risco potencial para a saúde dos consumidores, principalmente mulheres gestantes, pessoas idosas e imunodeprimidos. As análises convencionais para detecção de L. monocytogenes nestes produtos, como a ISO 11290-1, apesar de ainda muito utilizadas no Brasil, são técnicas laboriosas, demoradas e de sensibilidade reduzida. Os métodos moleculares atuais, como o PCR em tempo real, por exemplo, são extremamente sensíveis, rápidos e eficientes para a detecção de patógenos alimentares. Com base nisso, esse estudo teve como objetivo detectar a presença de L. monocytogenes em amostras de produto a base de pescado através de dois protocolos distintos (utilizando um kit comercial e um protocolo in house) de uma técnica molecular: o PCR em tempo real. Os resultados foram comparados aos obtidos com a técnica convencional ISO 11290-1. Foram analisadas, ao todo, noventa amostras de produtos a base de pescados vendidos nos supermercados do litoral de Santa Catarina. As amostras incluíram nove tipos de produtos de pescado, sendo eles: 10 amostras de pizza de atum, 10 amostras de kani, 10 amostras de bolinho de bacalhau, 10 amostras de bolinho de peixe, 10 amostras de hambúrguer de peixe, 10 amostras de filé de peixe, 10 amostras de marisco cozido, 10 amostras de nuggets de merluza e 10 amostras de nuggets kids. Foi detectada a presença de L. monocytogenes em oito amostras (8,88%) pelo protocolo PCR em tempo real in house, sete amostras (7,77%) pelo protocolo PCR em tempo real com kit comercial e seis amostras (6,66%) pela técnica ISO 11290-1. Os produtos que tiveram amostras positivas foram: pizza de atum, bolinho de bacalhau, bolinho de peixe e filé de peixe. Os resultados demonstraram uma elevada incidência de L. monocytogenes nos produtos a base de pescados pesquisados, além de indicar uma maior sensibilidade da metodologia molecular comparada á metodologia convencional, sendo que o protocolo in house da técnica de PCR em tempo real foi o mais sensível, mesmo não apresentando diferença significativa estatisticamente.<br> / Abstract : Seafood are an extremely important food in the human diet, due to its high nutritional value, contributing to the preservation of human health. However, these foods, especially ready to eat (RTE) fish-based products or pre- prepared could become dangerous vehicle for infectious agents such as Listeria monocytogenes (L. monocytogenes), when incorrectly prepared. This micro-organism is considered as the etiological agent of food illnesses with hight potential risk to the consumers health, especially pregnant women, elderly and immunocompromised. Conventional methods for L. monocytogenes in these products, such as ISO 11290-1, still widely used in Brazil, has laborious, hight time consuming and reduced sensitivity. Current molecular techniques, such as real-time PCR, for example, are extremely sensitive, fast and effective for the detection of foodborne pathogens. On that basis, this study aimed to detect the presence of L. monocytogenes in fish-based product sample using two different protocols (application of commercial kit and protocol in house) of a molecular technique: the real-time PCR. The results were compared to those obtained with the conventional technique acoording to ISO 11290-1. There were analyzed ninety samples of the fish-based products sold in supermarkets from the coast of Santa Catarina. The samples included nine types of fish products, which were: ten samples of tuna pizza, ten samples of kani, ten samples of codfish balls, ten samples of fish dumpling, ten samples of fish burger, ten samples of fish fillet, ten samples of baked seafood, ten samples of hake nuggets and ten samples of nuggets kids. L. monocytogenes was detected in eight samples (8.88%) by real-time PCR protocol in house, in seven samples (7.77 %) by real time PCR protocol with a commercial kit and in six samples (6.66 %) by ISO 11290-1 technique. The products which had positive samples were tuna pizza, codfish balls, fish fillet and fish balls. The results showed a high incidence of L. monocytogenes in fish-based products, and indicate an increased sensitivity of PCR analysis compared to conventional methodology, and the protocol in house of the real-time PCR assay technique was the most sensitive, despite not having statistically significant difference.

Tese (doutorado) - Universidade Federal de Santa Catarina, Centro Tecnológico. Programa de Pós-Graduação em Ciência dos Alimentos. / Made available in DSpace on 2012-10-20T13:41:35Z (GMT). No. of bitstreams: 1 194103.pdf: 1918170 bytes, checksum: c2f58c418e82f4da936e1bd742eaaa52 (MD5) / O presente trabalho teve por objetivo: i) realizar um estudo comparativo entre três métodos de recuperação de Listeria monocytogenes em salsichas embaladas a vácuo; ii) verificar a sobrevivência de L. monocytogenes em salsichas embaladas a vácuo, preparadas com ou sem adição de lactato de potássio durante estocagem a temperaturas de refrigeração e abusiva; iii) determinar a sobrevivência de L. monocytogenes em salsichas durante estocagem a temperaturas de refrigeração, empregando eletroforese em gel em campo pulsado (PFGE); e iv) verificar os efeitos da temperatura e tempo de reaquecimento na sobrevivência de L. monocytogenes em salsichas preparadas com ou sem adição de lactato de potássio, durante estocagem em temperaturas de refrigeração e congelamento. Os resultados obtidos indicaram que: i) o método de enxágüe do produto na embalagem do USDA/ARS foi mais sensível, bem como rápido e fácil, do que o método aprovado de enriquecimento de amostra do USDA/FSIS ou que o método de enxágüe de amostra do USDA/ARS em determinar a presença ou ausência de L. monocytogenes; ii) a adição de lactato de potássio como um ingrediente na produção de salsichas pode aumentar consideravelmente a segurança microbiológica de produtos cárneos prontos para consumo inibindo ou retardando a multiplicação de L. monocytogenes durante estocagem em temperatura de refrigeração ou abusiva; iii) cepa isolada de uma planta de processamento multiplicou melhor em salsichas embaladas a vácuo do que cepas isoladas de salsichas, salame e em clínica; e iv) a formulação do produto e temperatura/tempo de estocagem, ou combinações destas, não influenciaram significativamente a sobrevivência e/ou termorresistência de L. monocytogenes em salsichas nas temperaturas de reaquecimento testadas.

Made available in DSpace on 2014-06-11T19:33:33Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2002-11-27Bitstream added on 2014-06-13T20:45:18Z : No. of bitstreams: 1 silva_jmn_dr_jabo.pdf: 226978 bytes, checksum: b750d41fae4be269e3578a4ae3813b74 (MD5) / Objetivou-se estudar o valor nutritivo e desenvolvimento de fungos e de Listeria spp. no capim-Tifton 85 (híbrido de Cynodon, PI 290884 originário da África do Sul com o Tifton 68 (Cynodon nlemfuensis) ensilado sem emurchecimento (umidade 60-70%), submetido a pré-secagem (umidade 40-50%) e com adição ou não de polpa cítrica (5% do peso verde). As amostras foram colhidas na abertura dos silos e aos 15 e 30 dias após a abertura, para avaliação da ocorrência de Listeria spp e de fungos, do padrão de fermentação (pH, N amoniacal, ácidos orgânicos), teores de matéria seca, de proteína bruta, de nitrogênio associado a parede celular, dos constituintes da parede celular e digestibilidade in vitro da matéria seca (DIVMS). Os dados foram analisados segundo o delineamento em blocos completos casualisados, em esquema de parcela subdividida, sendo que nas parcelas foram avaliadas as silagens submetidas ao emurchecimento e uso ou não de polpa cítrica e nas subparcelas os períodos de exposição ao ar, com quatro repetições. Constatou-se a presença de Listeria spp em 65,6% das silagens de alta matéria seca, sendo que destas 10% foram positivas para Listeria monocytogenes. As silagens de alta matéria seca apresentaram pouca estabilidade aeróbia, tendo sido registrado aumento na ocorrência dos fungos Penicillium, Fusarium e Pithomyces com o prolongamento do período de exposição ao ar. Esses resultados evidenciaram o risco potencial que silagens de gramíneas com alto conteúdo de matéria seca pode representar para a saúde dos animais e humanos. Em termos de padrão de fermentação observou-se baixos teores de ácidos orgânicos e de N amoniacal, altos valores de pH, provavelmente devido aos elevados conteúdos de matéria seca causados pelo emurchecimento e adição de polpa cítrica... / This research was conducted to evaluate the nutritive value and fungal and Listeria spp. occurrence of the no wilted (60 to 70% of moisture) and wilted (40 to 50% of moisture) Tifton 85 ensiled with or without citrus pulp (5.0% of the wet weight). The high dry matter silage were harvested, immediately after the silos opening, also 15 and 30 days after the air exposition. It was evaluated the Listeria and fungal occurrences, fermentation characteristics (pH, amoniacal nitrogen, organic acids), values of dry matter, crude protein (CP), neutral detergent insoluble nitrogen (NDIN), acid detergent insoluble nitrogen (ADIN), neutral detergent fiber (NDF), acid detergent fiber (ADF), and in vitro dry matter digestibility (IVDMD). The data were analyzed according to a randomized block design in split plot scheme, being the silages studied in plots and the periods of air exposure in the split plots, with four replications. It was observed Listeria spp in 65.6% of the high dry matter silage samples, and Listeria monocytogenes occurred in 10.0% of these samples. The high dry matter silage was air unstable and Penicillium, Fusarium e Pithomyces occurrence increased during the air exposition period. These data showed the potential risk that the high dry matter grass silage could represent to the animal and human health. In relation to the fermentation characteristics, it was observed lowest values of amoniacal nitrogen, organic acid, and highest pH values, probably due to the high dry matter content of the silage. The high dry matter silage showed lowest N-NH3/N total values, preserving the crude protein content, probably caused by the low Clostridium activity. The NDIN and ADIN contents increased during the air exposition periods, in function of the microorganism's activity, resulted in high temperature of the high dry matter silage... (Complete abstract, access undermentioned eletronic address)