Orientador : Rolf Dieter Illg / Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Instituto de Biologia / Made available in DSpace on 2018-07-18T15:24:12Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Alves_MarcosNopper_M.pdf: 11750543 bytes, checksum: 1e11833393cdb525ec96a953e4e0389a (MD5) Previous issue date: 1993 / Resumo: A flora tropical sul-americana é rica em espécies produtoras de farmacos. Cecropia glaziovii é uma das espécies tropicais indicadas pela Central de Medicamentos como possuidora de atividade farmacológica comprovada no tratamento da bronquite, tosse, coqueluche e cancro. O único princípio ativo até hoje identificado nesta espécie, a isovitexina é indicado também como diurético e tônico cardíaco. Esta espécie alógama possui na sua população natural uma variação morfológica que se reflete diretamente na sua biomassa, como também na variação em concentrações de princípios ativos presentes nas suas folhas e estípula. Uma fonte de dificuldades no uso de plantas diretamente a partir de populações naturais é a variação genética, fisiológica e química, que leva eventualmente a atividades biológicas muito variáveis ou em casos extremos até opostas. Medidas que visem a obtenção de clones que possuem altos teores de princípios ativos seriam de grande valia para estudos químicos e farmacológicos desta espécie. O presente trabalho objetivou o desenvolvimento de metodologia de cultura ¿ in vitro¿ dessa espécie arbórea visando a sua multiplicação em larga escala. A finalidade por um lado é de obter metodologia adequada para clonagem de plantas possuidoras de princípios ativos em quantidades elevadas através de micropropagação, por outro lado, objetivamos a regeneração de plantas com possível variabilidade morfológica de interesses agronômico e químico. Todos os ensaios foram conduzidos em condições controladas de luz e temperatura. Visando a multiplicação vegetativa, brotos apicais, axilares e submeristemas previamente esterilizados foram inoculados em meios de cultura compostos por sais de Murashige & Skoog (1962) suplementado com diferentes concentrações dos fitoreguladores BAP, 2iP, KIN, ZEA e IAA. Folhas, estípulas e pecíolos previamente esterilizados foram testados para a indução de calos em meio básico de M.S. suplementado com diferentes concentrações de BAP, 2iP, KIN, 2,4-D e IAA. Tentativas de regeneração de plântulas via organogênese ou embriogênese foram realizadas a partir de meios de M.S. suplementado com diferentes concentrações de BAP, 2,4-D, IAA, 2iP e ZEA inoculados com calos compactos e friáveis. Os resultados demonstraram que as combinações BAP 10,0 mg/1 + NAA 2,0 mg/1 e BAP 10,0 + IAA 1,0 mg/1 e apenas BAP 10,0 mg/1 levaram a uma maior proliferação vegetativa de brotos. Calos foram obtidos com maior frequência quando meios de M;S. suplementado com 2,4-D 5,0 mg/1 + BAP 1,0 mg/1, foram inoculados com pecíolos e incubados na ausência de luz à temperatura de 25º C. Plântulas foram regeneradas a partir de calos por organogênese quando estes foram mantidos em meio M>S. suplementado com 2,4-D 10,0 mg/1 ou 2,4-D 1,0 mg/1 + ZEA 0,1 mg/1 por 30 dias. As plantas regeneradas foram posteriorm,ente propagadas vegetativamente utilizando os melhores meios de propagação vegetativa já descritos acima. O enraizamento foi obtido transferindo-se brotos para meio M.S. acrescido de IAA 1,0 mg/1. As plantas foram aclimatadas durante 30 dias em substrato de vermiculita, sob alta umidade relativa (90 a 100%) acrescida de solução nutritiva de Hoagland a cada 2 dias / Mestrado / Biologia Vegetal / Mestre em Ciências Biológicas

Orientador : Vera Maria Santoro Belangero / Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Ciências Médicas / Made available in DSpace on 2018-07-19T04:29:04Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Cavali_MonicadeLimaRaeder_M.pdf: 1297245 bytes, checksum: 2157d08913b55256f48d68c7892a3722 (MD5) Previous issue date: 1994 / Resumo: A avaliação da bacterioscopia em amostra de urina, não centrifugada e corada pelo método de Gram, foi utilizada em um serviço de atenção primária com o objetivo de se avaliar sua utilidade como exame de rotina em casos com suspeita de Infecção do Trato Urinário (ITU). Foram analisadas 78 crianças (correspondendo a 98 amostras) com idades de 15 dias a 10 anos, com suspeita de ITU e encaminhadas ao laboratório de referência dos postos de saúde, para coleta de urocultura. Nestes pacientes, foi utilizado método padronizado de coleta de urina, sendo o material obtido enviado para realização do sedimento e cultura de acordo com as normas de rotina do laboratório e também para a realização de bacterioscopia. Os prontuários destes pacientes foram revistos para se obter os sinais e sintomas que tinham sido considerados na suspeita clínica de ITU. Os resultados mostram que do ponto de vista clínico, o baixo ganho ponderal foi o principal motivo de encaminhamento, embora não tenha estado relacionado em nenhuma vez com urocultura positiva. A febre isolada ou associada e as queixas urinárias estiveram presentes em todos os casos em que a urocultura foi positiva. A análise do sedimento urinário mostrou que a leucocitúria em si tem um valor preditivo positivo para indicação de urocultura positiva muito baixo (29%) e especificidade de 75%. No entanto, quando se leva em conta a presença de leucocitúria maior ou igual a 100.000 leucócitos/ml, a especificidade é de 100%. Os resultados da bacterioscopia demonstraram que não houve casos de falso negativo entre estes resultados e os da urocultura, sendo a especificidade do método de 84,12% e a sensibilidade de 100%. De acordo com estes dados, a realização da urocultura somente em casos de bacterioscopia positiva ou inconclusiva, levaria a uma redução de 63% nos pedidos de urocultura / Abstract: The evaluation of bacterioscopy in a unspun, stained urine, using Gram method, was used in a primary care center, with the intention to evaluate its aplicability as a routine exam in children with a suspected Urinary Tract 1nfection (1TU). Ninety eight samples of seventy eight children aging from 1 month up to 10 years were analysed, with suspeited urinary tract infeccion and sent out to the laboratory to collect a specimen for urine culture. In these pacientes, an standardized method for the obtention of the samples was used and the obtained material transported to the laboratory to perform the urine sediment analysis and its culture and also to perform the bacterioscopy. The pacients history files were reviewed in order to know the signs and simptoms that were considered in their suspected UTIs. These results showed up that from the clinic point of view the failure to thrive was the main symptom of urine culture solicitation; although these results were not associated with positive urine culture. 1solated or associated fever and urinary simptoms were present in alI case of positive urine culture. The sediment analysis showed that piuria itself has a positive predictible value in relation to the positive urine culture very low (29%) and a specificity of 75%. On the other hand when we evaluated the leucocyte count of major or igual to 100.000/ml, the specificity was 100%. The bacterioscopy results demonstrated that there were no case of false negative between these results and those of urine culture. The specificity was 84,12% and the sensibility 100%. In accordance to the data of this study the request of urine culture in only positive or inconclusive bacterioscopy cases there shall be a 63% reduction in urine culture request / Mestrado / Mestre em Pediatria

Orientador: Rosana Rossi Ferreira / Resumo: A medicina regenerativa é uma área em crescente expansão no Brasil e no mundo, a qual procura ampliar a capacidade natural de regeneração dos tecidos através da utilização de células, fatores de proliferação e biomateriais. Um dos ramos da medicina regenerativa é a terapia celular, vertente que utiliza células-tronco, visando a substituição de tecidos funcionalmente ou estruturalmente lesados, apresentando um caráter terapêutico. Na medicina LASERs e LEDs vem sendo estudados como ferramenta terapêutica, mostrando possuir capacidade bioestimulatória. Este campo é caracterizado por uma variedade de metodologias, que são utilizadas em uma gama considerável de aplicações. Na técnica de fotoestimulação, utiliza-se a luz para ativar moléculas e funções celulares, apresentando o potencial de afetar a proliferação e diferenciação e o metabolismo da célula, estimulando a fosforilação oxidativa e podendo reduzir a resposta inflamatória local. Entretanto para que essa resposta ocorra, inúmeros trabalhos afirmam sobre a importância da seleção de um comprimento de onda ideal, uma vez que a utilização de um comprimento inapropriado pode acarretar em resultados contrários aos esperados, como a bioinibição. Diante destes achados o presente trabalho propôs-se a avaliar a ação do LED 850nm, no regime pulsátil, nas doses de 3, 5 e 10J/cm² na cultura de célula-tronco mesenquimal (CTM) com Soro Fetal Bovino (SFB) e com Hormônios derivados de plaquetas (HDP), e na cultura de células de Linfoma lin... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract: Regenerative medicine is a promising growing area worldwide, with the aim of restore and regenerate tissues and whole organs through the use of cells, proliferation factors and biomaterials. One branch of regenerative medicine is cell therapy, that uses stem cells, aiming at the substitution of functionally or structurally damaged tissues, presenting therapeutic fature. LASERs and LEDs are available as therapeutic tools, showing biostimulating ability. The photo-stimulation technique uses light to activate molecules and cellular functions, presenting potential to affect proliferation, cell differentiation and metabolism, stimulating oxidative phosphorylation and reducing the local inflammatory response. Data shows the importance of selecting an ideal wavelength, such as the use of an inappropriate choice, can lead to undisered results, such as bioinhibition. In the present work, we evaluated the action of LED 850nm, pulsatile, at the doses of 3, 5 and 10J/cm² in mesenchymal stem cells (CTM) with Bovine Fetal Serum (FBS) and with derived platelets – Hormones (HDP) and B-cell lymphoblastic cell culture, 10J /cm2 , RAJI cells. In all light exposure experiments, wavelength of 850 nm inhibited cell proliferation. CTM culture, LED had a low proliferation rate, resulting in a decrease in cellular confluence, especially at 5 and 10J/cm2 . Lymphoblastic lymphoma type B cells, in only one week of exposure presente the same behavior of bioinhibition at 10J/cm2 . The control group had 7.... (Complete abstract click electronic access below) / Mestre

Orientadora: Maysa Furlan / Coorientador: Ana Maria Soares Pereira / Banca: Angela Regina Araújo / Banca: Rafael Victorio Carvalho Guido / Banca: Mario Sergio Palma / Banca: Fernando Continguiba da Silva / Resumo: Plantas biossintetizam uma ampla variedade de metabólitos secundários cujas atividades farmacológicas são consolidadas. No entanto, a obtenção em escala de metabólitos secundários a partir de plantas, muitas vezes, é restringida pelo acúmulo minoritário desses compostos em seus tecidos. Como muitas dessas moléculas apresentam elevada complexidade estrutural, sua obtenção por síntese orgânica pode ser ainda mais dificultada, tanto do ponto de vista econômico quanto ecológico. Contudo, as elucidações das vias metabólicas utilizadas pelas plantas na biossíntese dessas moléculas, sobretudo do ponto de vista enzimático, podem subsidiar o desenvolvimento de ferramentas biotecnológicas, como a engenharia metabólica, para enfrentar esses desafios. Nesse contexto, surge a espécie Maytenus ilicifolia (Celastraceae), uma planta medicinal conhecida por produzir uma gama de metabólitos secundários bioativos, em especial, os triterpenos quinonametídeos (TQs), moléculas com pronunciada e abrangente atividade antitumoral. Desta forma, no presente trabalho foi realizado um estudo proteômico de células de M. ilicifolia com o objetivo principal de inventariar as enzimas de suas vias metabólicas secundárias, principalmente relacionadas a biossíntese dos TQs. Para isso, culturas de células de M. ilicifolia produtoras de TQs, maitenina (1) e 22-β-hidroximaitenina (2), foram elicitadas com metil jasmonato (100 µM) por 12, 24, 48 e 96 h e monitoradas quanto a produção dos TQs por CLAE-DAD. Das célul... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract: Plants biosynthesize a wide variety of secondary metabolites with consolidated pharmacological activities. However, the large - scale production of secondary metabolites by plants is often restricted by minor accumulation of these compounds in their tissues. Many of these molecules shows high structural complexity so their obtainment by organic synthesis can be further complicated both economically and ecologically. However, the elucidation of metabolic pathways used by plants in the biosynthesis of these mol ecules, especially from the enzymatic point of view, can support the development of biotechnological tools such as metabolic engineering, to address these challenges. In this context, emphasis can be given to Maytenus ilicifolia species (Celastraceae), a m edicinal plant that produces a range of bioactive compounds, including quinonamethide triterpenes (QMTs). Thus, in this study we performed a proteomic study of M. ilicifolia cells with the primary goal to provide an enzyme inventory of their secondary meta bolic pathways, mainly for biosynthesis of QMTs. Based on it, M. ilicifolia cell cultures producing the QMTs maytenin ( 1 ) and 22 - β - hydroxymaytenin ( 2 ) were elicited with methyl jasmonate (100 μM) during 12, 24, 48 and 96 h and monitoring for QMTs productio n by HPLC - DAD. Cells that showed a higher QMTs accumulation (when comparing elicited and control cells.) were submitted to protein extractions and analyzed by LCMS - IT - TOF, using shotgun strategy. We have found 1319 proteins in both cells by comparison with proteins of the model plants from databases. Among them, enzymes involved in the biosynthesis of QMTs, including the cytochrome P450 (CYP450s) that potentially catalyze the final steps of this synthesis. We also have found enzymes involved in the biosynth esis of others secondary metabolites characteristic of the species, and proteins related to primary... / Doutor

Orientador: Sidney Luiz Stürmer. / Co-orientador: Luis Hamilton Pospissil Garbossa. / Dissertação (Mestrado em Engenharia Ambiental) - Programa de Pós-Graduação em Engenharia Ambiental, Centro de Ciências Tecnológicas, Universidade Regional de Blumenau, Blumenau.

O Bacupari (Garcinia brasiliensis Mart.) é uma espécie arbórea de importância medicinal, da qual diversos estudos têm obtido o isolamento e testado a atividade de moléculas como a 7-epiclusianona, guttiferona-A, garciniafenona e fukugetina. Porém, a produção desses compostos in natura é limitada, tornando necessário estudos que otimizem a produção destas. Nesse contexto as técnicas de cultura de tecidos vegetais, como o cultivo de calos e suspensões celulares tem sido utilizada para produzir e otimizar a obtenção de metabólitos de interesse farmacêutico in vitro. O objetivo desse trabalho foi utilizar a glutamina como fonte de nitrogênio em calos de G. brasiliensis com intuito de investigar a influência desse aminoácido na produção de fenóis, flavonoides e proantocianidinas. Explantes de 2 mm de espessura e 4 mm de diâmetro foram obtidos a partir de seguimentos do procâmbio de sementes de bacupari, obtidas de uma população localizada no município de Viçosa-MG e inoculados em meio de cultivo contendo 30 mL de meio MS (Murashige e Skoog, 1962) complementado com sacarose (3%), ágar (0,7%), BAP (6-Benzilaminopurine, 0,5 mg L-1) e diferentes concentrações de sais que seguem: Meio MS com as concentrações originais de nitrogênio (20 mM NH4NO3 e 18,8 mM KNO3), meio MS com 10 mM NH4NO3 e 9,4 mM KNO3 chamado ½ força (MS ½) e meio MS sem NH4NO3 e KNO3 contendo glutamina em concentrações finais de 5, 10, 30 e 60 mM. Após a inoculação o material foi mantido em sala de crescimento na ausência de luz por um período de 140 dias. As análises bioquímicas foram realizadas em intervalos de 20 dias e as análises fitoquímicas no final do período de cultivo, aos 140 dias. O delineamento experimental foi inteiramente casualizado contendo 6 tratamentos e 4 repetições. Foi observada diferença significativa na concentração de aminoácidos entre os tratamentos em relação ao tempo de cultivo. A concentração mais baixa para aminoácidos foi a 60 mM de glutamina no tempo de 100 dias. Essa redução pode estar relacionada com a síntese de proteínas, as quais haviam mostraram o decréscimo aos 80 dias de cultivo. Além disso a baixa quantidade de aminoácidos a 60 mM de glutamina indica que esses podem ter sido desviados para a rota metabólica dos metabólitos especiais. / The Bacupari (Garcinia brasiliensis Mart.) is an arboreal species of medicinal importance, where through various studies have demonstrated the isolation and activity of important molecules such as 7-epiclusianone, guttiferona-A, garciniafenona and fukugetina. However, the production of these compounds in nature is limited, so seen the need for studies that optimize the production of these compounds. In this context the techniques of plant tissue culture, such as in vitro cultivation of cells (callus) has been used to produce and optimize the production of metabolites of pharmaceutical interest in vitro. The objective of this study was to use glutamine as a nitrogen source in callus of G. brasiliensis in order to investigate the influence of the amino acid in the production of phenols, flavonoids and proanthocyanidins. The explants were inoculated in MS medium, MS with half concentration of the nitrogen salts, and MS absent of nitrogen sources supplemented with glutamine (5, 10, 30 and 60 mM). Biochemical analyzes were performed at intervals of 20 days and phytochemical analysis at the end of the culture period. At the 20 th and 100 th days, there was no difference in the amino acid content, between the treatments. In the remaining periods, the treatment with 60 mM of glutamine showed the lowest concentrations of amino acids. With respect to proteins, there were differences only at the 140 th day of cultivation, and the use of 60 mM of glutamine resulted in higher concentrations, while MS had the lowest concentrations. Similarly, the treatment with 60 mM glutamine resulted in higher levels of phenolic compounds, flavonoids and proanthocyanidins, and the lower levels were observed in MS. Thus, it is concluded that the use of 60 mM glutamine to replace the nitrogen sources in MS medium in the 140 th day promoted the accumulation of proteins and synthesis of secondary metabolites in callus of Bacupari. / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior - CAPES

O tratamento de esgoto tem se evidenciado devido às necessidades ambientais, e no final do processo há geração de um resíduo denominado lodo de esgoto ou biossólido, rico em matéria orgânica e elementos essenciais as plantas. Neste estudo, propôs-se a utilização do biossólido da ETE de Paraguaçu- MG como fonte alternativa para nutrição in vitro de Sucupira-preta (Bowdichia virgilioides Kunth.), espécie lenhosa nativa do cerrado brasileiro. As sementes de sucupira-preta foram desinfestadas em etanol 70 % e hipoclorito de sódio, e imersas em ácido sulfúrico concentrado (98 %) para superação da dormência tegumentar. Após 3 enxágues em água destilada autoclavada as sementes foram inoculadas, uma por tubo de ensaio contendo 30 mL de meio WPM e diferentes concentrações do biossólido moído. Os tratamentos foram divididos da seguinte maneira: controle com meio WPM; meio WPM acrescido de concentrações crescentes de biossólido; concentrações crescentes de biossólido apenas; e um segundo controle contendo apenas água destilada. O delineamento foi inteiramente casualizado em esquema fatorial (2 x 7 com 14 tratamentos e 8 repetições por tratamento), com fator presença e ausência de meio WPM e fator concentração de biossólido (ausência; 1,0; 2,0; 4,0; 6,0; 8,0 e 10 g L-¹). Os tubos foram mantidos em sala de crescimento até o 41º dia, quando foram avaliados: número de folhas; comprimento da parte aérea; área foliar; número de gemas; número de raízes secundárias; comprimento da raiz principal; espessura do caule e massa seca da planta inteira. O fator presença de biossólido apenas, foi significativo influenciando de forma direta as variáveis área foliar, número de raízes secundárias e número de gemas. A presença do biossólido influenciou de forma significativa nos tratamentos onde há interação deste com meio WPM apenas para variável comprimento da raiz principal. Quanto as demais variáveis: número de folhas, comprimento da parte área, espessura de caule e massa seca, não houve resultado significativo para os tratamentos com a presença do biossólido apenas. Os resultados mostraram que a suplementação do meio com o biossólido é possível. Conclui-se que devido à maioria dos parâmetros avaliados não diferirem estatisticamente, o biossólido tem potencial para a substituição dos nutrientes do meio WPM, no que se refere ao estabelecimento in vitro de Sucupira-preta utilizando sementes como explante, resultando em economia para o processo, além de reutilizar o resíduo do tratamento de esgotos. Estudos complementares visando a padronização dos teores de cada componente do biossólido auxiliarão na consolidação do uso deste na cultura de tecidos vegetais. / The high organic matter content of sewage sludge is one of the motivations for their disposal in the environment as a soil conditioner, and at the end of the process, there is a production of one residue denominated the biosolids, wich is rich in organic matter and essential elements to the plants. This study aim to use the biosolids from ETE Paraguaçu (Minas Gerais) as alternative source to in vitro nutrition of sucupira-preta (Bowdichia virgilioides Kunth.), a native woody species from Brazilian Cerrado. Sucupira-preta seeds was sterilized in both 70 % ethanol and hypochlorite of sodium and immersed in 98 % concentrated sulphuric acid for breaking of seed coat dormancy. After 3 rinses in distilled autoclaved water the seeds were inoculated one by each one test tube containing 30 ml of WPM medium and at different concentrations of grounded biosolids. The treatments were divided in four procedures: first control with WPM medium, one with WPM medium amended with increased concentrations of biosolids, other with only increased concentrations of biosolids and the last control medium with only distillated water. The experimental design was completely randomized in a factorial arrangement (2 x 7 with 14 treatments with eight replications), with the presence or absence factor of WPM medium and the biosolids concentration factor (absence; 1,0; 2,0; 4,0; 6,0; 8,0 e 10 g L-¹). Test tubes were maintained in growing room until the 41th day and it was evaluated the number of leaves, aerial part length,  leaf area measurements, the number of buds, the number of secondary roots, the length of the main root,  the thickness of the stem and the mass of dry matter of the whole plant. The factor with only the biosolids presence was significate influenced the leaf area, number of secondary roots and the number of buds directly. The biosolids presence significantly influences the treatments as the biosolids interacted with WPM medium affecting only the main root length variable. As for the other variables such as the number of leaves, aerial part length, the thickness of the stem and the drier mass, the results showed no significance to those treatments with only biosolids presence. Results demonstrated that the supplementation of medium with the biosolids is possible. The Since the majority of estimated parameters did not have significative  differences, it is possible to infer that biosolids has a potential to substitute the nutrients of WPM medium regarding the establishment in vitro of sucupira-preta using seeds as explants. Consequently, it is a safety way for the process besides of the reusing of sludge that result from processes of sewing treatment. Complementary studies searching for the standardization of each components of biosolids will contributed to evaluated the feasibility of this residue use as substrate in plants tissue cultivation.

Orientador: Elenice Deffune / Banca: Magda Massae Hata Viveiros / Banca: Jaqueline de Camargo Rinaldi / Resumo: Introdução: Muitas patologias podem acometer a córnea, entre elas a síndrome do olho seco e as doenças relacionadas. Tratamentos inovadores para a síndrome do olho seco têm surgido, entre eles, o uso de colírio produzido com soro autólogo de uso ocular, soro de sangue de cordão umbilical, meio condicionado obtido pela expansão de células tronco do epitélio limbal (modelo ex vivo), entre outros. Pacientes com provável indicação do colírio de soro autólogo podem ter a contra-indicação na produção oriunda do status imune para doenças virais como HIV, hepatites B e C, sífilis, doença de Chagas e HTLV I e II, que do ponto de vista de produção do autocolírio, encontram barreiras. Para estes casos, o colírio de soro alogênico, oriundo de doadores saudáveis, é uma alternativa viável. Objetivos: Analisar o efeito in vitro da ação de colírio alogênico em cultura de células da região córneo-escleral, estabelecer a cultura e expansão de células aderentes obtidas da região córneo-escleral, comparar a cultura das células aderentes em meio de cultura contendo colírio e fatores de crescimento derivados de plaquetas, avaliar as células por meio da técnica de imunohistoquímica e analisar os dados médicos dos pacientes que utilizam autocolírio por meio de prontuários. Casuística e Métodos: Os anéis córneo-esclerais foram obtidos no centro cirúrgico após cirurgia de doação de córnea, sendo que estes anéis são materiais de descarte após a cirurgia. Em seguida, o tecido foi encaminhado ao Laboratório de Engenharia Celular do Hemocentro de Botucatu, onde foi fragmentado em pequenas partes e digerido com colagenase tipo I. As células foram plaqueadas em frascos de 25 cm² com meio DMEM Knockout, em uma primeira parte do experimento, e em meio Keratinocyte na segunda parte do trabalho. Após confluência de 80%, as células passaram pelo processo de tripsinização para desprendimento ... / Abstract: Introduction: Many diseases can affect cornea, including dry eye syndrome and related diseases. Innovative treatments for dry eye syndrome have emerged , among them the use of autologous serum eye drops produced with the use of eye serum, umbilical cord blood, conditioned medium obtained by expansion of limbal epithelial stem cells (ex vivo model) among others. Patients with probable indication of autologous serum eyedrops may be contraindicated in production originating immune status for viral diseases such as HIV, hepatitis B and C, syphilis , Chagas disease and HTLV I and II, from the point of view of eye drops's production, have barriers . For these cases, eye drops from healthy donors allogeneic serum can be an alternative. Objectives: Evaluate in vitro effect of the action of allogeneic eye drops in corneal-scleral cell culture, established the culture and expansion of adherent cells obtained from the corneal- scleral region, compare the culture of adherent cells in culture medium containing eye drops and platelets derived growth factors, evaluating the cells by immunohistochemistry and analyze medical data of eye drops's patients. Materials and Methods: The corneal- scleral rings were obtained in the operating room after surgery of tissue donor, and these rings were discarded after surgery. Then, tissue was sent to the Laboratory of Cell Engineering of Botucatu Blood Center, which was fragmented into small pieces and digested with collagenase type I. Cells were plated in 25 cm² flasks with DMEM Knockout in the first part of the experiment, and Keratinocyte in the second part of the experiment. After 80% confluence, cells passed through the trypsinization procedure for detachment of the cells from the culture flask. Mounting plaque experiment, cells were placed to control, or untreated cells, treated cells with eye drops and cells treated with platelets derived growth factors was performed. After 5 days, immunohistochemistry ... / Mestre

Orientador: Fernanda da Cruz Landim / Banca: Claudia Barbosa Fernandes / Banca: Flávia Karina Dlella / Resumo: Células tronco embrionárias (CTE) são caracterizadas pelas capacidades de auto-renovação e diferenciação. No entanto, os mecanismos moleculares que regulam estes dois processos são mal compreendidos. CTE de camundongos foram originalmente isoladas a partir da massa celular interna (MCI) de blastocistos produzidos in vitro e in vivo e mantidas em cultura sem perda da pluripotência, originando tecidos das três camadas germinativas. Há profundo interesse em conhecer os processos envolvidos na proliferação e diferenciação das células embrionárias contribuindo, no futuro, para engenharia de tecidos e clonagem terapêutica. Objetivos: Comparar o potencial gerador de CTE de embriões bovinos produzidos in vitro em meio contendo alta e baixa concentração de soro, assim como avaliar a manutenção da pluripotência das células em cultivo através da ação de dois fatores, a LIF e o bFGF, utilizados isoladamente ou em conjunto, no cultivo in vitro de CTEbov. Foram utilizados blastocistos bovinos com 9 dias de desenvolvimento in vitro para remoção da massa celular interna (MCI) e posterior cultivo das mesmas em placas tratadas com monocamada de fibroblastos bloqueados. As colônias celulares semelhantes a células-tronco foram analisadas através da identificação da expressão in sito dos fatores de indiferenciação Oct-4, Nanog, SSEA-1, SSEA-3, SSEA-4, TRA-1- 60, TRA-1-81. Os blastocistos bovinos com 9 dias de idade também foram submetidos à marcação imunocitoquímica. Adicionalmente foi avaliado o potencial de diferenciação in vitro das CTEbov para linhagens celulares de origem endodermal, mesodermal e ectodermal. Em média, 525 embriões de cada um dos dois grupos (2,5% e 10% de soro fetal bovino, respectivamente) foram selecionados para o isolamento da MCI. Foram utilizados 300 blastocistos iniciais... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract: Embryonic stem cells (ESC) are characterized by their capacity for selfrenewal and differentiation. However, the molecular mechanisms which regulate these two processes are poorly understood. ESC of mice were originally isolated from the inner cell mass (ICM) of blastocysts in vitro and in vivo and maintained in culture without loss of pluripotency, yielding three germ layers of tissue. There is keen interest in learning about the processes involved in proliferation and differentiation of embryonic cells contribute in the future, tissue engineering and therapeutic cloning. To compare the potential generator ESC of bovine embryos produced in vitro in medium containing high and low concentrations of serum, as well as evaluating the maintenance of pluripotency of the cells in culture through the action of two factors, the LIF and bFGF, used singly or together, in vitro cultivation of ESCbov. We used bovine blastocysts to nine days of in vitro development to remove the inner cell mass (ICM) and further cultivation of the same plates treated with fibroblast monolayer blocked. The cell colonies similar to stem cells were analyzed by in situ identification of the expression of differentiation factors Oct-4, Nanog, SSEA-1, SSEA-3, SSEA-4, TRA-1-60, TRA-1-81 . The bovine blastocysts with 9 days of age were also subjected to immunocytochemical labeling. Additionally it was evaluated the potential of differentiation in vitro of cell lines to ESCbov endodermal origin, mesodermal and ectodermal. The average 525 embryos from each of the two groups (2.5% and 10% fetal bovine serum, respectively) were selected for isolation of the ICM. Early blastocysts were used 300, 160 expanded blastocysts and 45 hatched blastocysts per group. However, only expanded blastocysts adhered to the monolayer of fibroblasts and developed into colonies similar to... (Complete abstract click electronic access below) / Mestre

Orientador: Tereza Cristina Cardoso / Co-orientador: Maria Cecília Rui Luvizotto / Banca: Rafael Silva Cipriano / Banca: Vera Lúcia Lorenzetti Magalhaes Curci / Banca: Carlos Noriyki Kaneto / Banca: Cáris Maroni Nunes / Resumo:A infecção pelo herpesvírus Bovino tipo 5 (BoHV-5) resulta em meningoencefalite não supurativa que é responsável por perdas econômicas significativas na América do Sul. Células tronco mesenquimais (CTM) são encontradas em diferentes tecidos fetais, como no cordão umbilical que possuí diversos fatores favoráveis para obtenção destas células. O objetivo da presente pesquisa foi avaliar o isolamento e a viabilidade das CTM bovinas e sua capacidade de diferenciação em outros tecidos de origem mesenquimal, como as "neuron-like cells" - células semelhantes a neurônios - (CSN), e avaliar a possibilidade da utilização das mesmas como modelo de infecção experimental com BoHV-5. As CTM foram isoladas da geleia de Wharton e diferenciadas em tecido adiposo, cartilagem, ósseo e CSN. As linhagens celulares foram caracterizadas pela expressão genica e imunofenotipicamente, utilizando a técnica de PCR, imunocitoquímica e citometria de fluxo, respectivamente. O conjunto de primers e painel de anticorpos primários, empregados na experimentação, permitiu caracterizar as células tronco e sua diferenciação em células neuronais. Após a adaptação e diferenciação, ambas as células foram infectadas pelo BoHV-5, exibindo efeito citopático e taxa de replicação viral aumentada 72 h pós infecção. A técnica de hibridização in situ identificou as partículas virais no interior das CSN e no meio extracelular. Os resultados demonstram a capacidade de diferenciação das CTM em outros tipos celulares e a possibilidade da utilização das mesmas como modelo de infecção in vitro de células neuronais pelo BoHV-5. Estes resultados corroboram o uso de MSC como fonte de NLC para uso no estudo da patogênese da infecção experimental pelo BoHV-5 / Abstract:Bovine Herpesvirus type 5 (BoHV-5) infection results in non- suppurative meningoencephalitis which underlies significant economic losses in South America. Mesenchymal stem cells (MSCs) are found in fetal tissues, such as the umbilical cord. The goal of this research was to characterize the isolation and viability of bovine umbilical cord MSCs for in vitro differentiation into "neuron-like cells" (NLC) to be used as a model for experimental infection with BoHV-5. MSCs were isolated from Wharton's jelly and differentiated in vitro into adipogenic, chondrogenic, and osteogenic cells as well as NLC. The cells lines were characterized molecularly and immunophenotypically, using PCR, immunocytochemistry, and flow cytometry. The set of primers and panel of primary antibody used in the experiments confirmed the isolation of mesenchymal stem cells and their differentiation into neuronal-like cells. After adaptation and differentiation, the cells were infected with BoHV-5, exhibiting typical cytopathic effect and increased viral replication rate 72 h post-infection. Viral particles were identified in the NLC and in the extracellular environment. by in situ hybridization These results corroborate the use of MSCs as a source of NLC which can be used to study the pathogenesis of the experimental in vitro infection wtih BoHV-5 / Doutor