O objetivo dessa dissertação foi avaliar os efeitos do cálcio na indução de morfogênese, mais especificamente na embriogênese somática de Eucalyptus urophylla a partir de hipocótilos cultivados “in vitro". Análises bioquímicas e histológicas foram realizadas visando observar o papel do cálcio nos conteúdos de proteínas e açúcares totais, na atividade específica da peroxidase e na morfogênese, a qual foi avaliada mediante técnicas de histologia. As concentrações de cálcio (na forma de CaCl2H20) variaram de O a 12,12 mM e foram adicionadas ao meio de cultura descrito por Simola (1985) sendo que a concentração de cálcio presente nos calos foi determinada diretamente por Espectrometria  de Fluorescência de Raios-X, um método não-destrutivo que permitu que as mesmas amostras quantificadas fossem utilizadas nas análises histológicas. Uma análise estatística multivariada (Análise de Componentes Principais - PCA) permitiu agrupar os tratamentos em 5 blocos e indicou o grupo mais responsivo para uma resposta morfogênicas considerando as interações entre todos os parâmetros avaliados. Em baixas concentrações de cálcio veirificou-se ausência de resposta morfogênica e a histologia revelou tecidos colapsados e dessaranjados. Aumentando a concentração do cátion, os teores de proteínas e açúcares totais e a atividade específica da peroxidase também aumentaram. Ao nível histológico foram verificadas diferenças entre os tratamentos e foi possível verificar que a concentração de cálcio de 6,62 mmoI.L-1 , estimulou a formação de embriões somáticos globulares. / The aim of this work was to evaluate the calcium effects in the morphogenesis induction, speciffically in the somatic embryogenesis of Eucalyptus urophylla hipocotils. Biochemical and histological analysis were performed in order to observe the calcium role in the total protein and sugar contents, in the peroxidase specific activity and in the morphogenesis, wich was evalueted by histology. The calcium (CaCb.2H20) concentrations from 0.0 to 12.12 mM were added to Simola (1985) culture medium and calcium concentration in calli was determined directly by X-Ray Flourescence Spectrometry, a non-destructive technique, allowing for the processing of thesame tissue for histological analysis. A multivariate analysis (PCA-Principal Components Analysis) grouped the treatments into 5 clusters and indicated the more responsive group for a morphogenic response considering the interactions between the evaluated parameters and the calcium concentration. Lack of calcium supply caused a complete absence of a morphogenic process and tissue collapsing. The increase in calcium concentration favored the presence of higher total protein and sugar contents, the increase of peroxidase specific activity and changes in the histological characteristics. It was possible to verify that calcium stimulated globular somatic embryo formation at concentration of .62 mmoI.L-1

O trabalho foi conduzido na EEA/UFRGS em 2003. O objetivo foi avaliar a eficiência do disco medidor de forragem, do bastão graduado e do medidor de capacitância em predizer a massa de forragem de azevém bem como o de avaliar as diferenças nas variáveis morfogênicas (taxa de elongação de folhas, taxa de surgimento de folhas, tempo de vida da folha) e estruturais da pastagem (numero de folhas verdes, comprimento de folhas e densidade de perfilhos) pela técnica de perfilhos marcados em função dos tratamentos adotados (intensidades e métodos de pastejo). Para determinar a eficiência dos instrumentos foram realizados dois experimentos: o experimento 1 avaliandose a eficiência do disco, bastão e medidor de capacitância em predizer a massa de forragem da pastagem na fase de estabelecimento num delineamento completamente casualizado com 32 repetições e três tratamentos e o experimento 2 avaliando-se a eficiência do disco medidor e do bastão graduado como preditores da massa de forragem sob lotação rotacionada em duas intensidades de pastejo (baixa e moderada) definidas por ofertas de forragem representando, respectivamente, 2,5 ou 5,0 vezes o potencial de consumo dos cordeiros num delineamento em blocos casualizados em arranjo fatorial com quatro repetições. Para determinar as variáveis morfogênicas, estruturais e o fluxo de tecidos os tratamentos foram duas intensidades (baixa e moderada) e dois métodos de pastejo (pastejo com lotação contínua e rotacionada). No experimento 1 o bastão graduado apresentou a melhor correlação com a massa de forragem (r2=0,65). No 2 as melhores correlações foram obtidas quando avaliadas as faixas de pós-pastejo para o disco medidor (r2=0,47) e as de pré-pastejo para o bastão graduado (r2=0,36). Para as variáveis morfogênicas e estruturais as intensidades de pastejo foram responsáveis por diferenças na taxa de elongação de folhas (intensidade baixa resultou em maior taxa de elongação) e nas características estruturais (intensidade baixa resultou em menor densidade de perfilhos, maior comprimento e número de folhas vivas). Os métodos de pastejo influenciaram as características morfogênicas (lotação contínua resultou em maior taxa de elongação de folhas, maior taxa de surgimento e tempo de vida das folhas no ciclo de observação I) e estruturais (lotação contínua resultou em maior densidade de perfilhos); bem como foi obtida interação com as intensidades e com os ciclos de avaliação. O fluxo de crescimento (favorecido por lotação rotacionada a baixa intensidade) e de senescência (favorecido por lotação contínua a baixa intensidade) foram afetados pelos tratamentos, enquanto que o fluxo de consumo não foi alterado pelos tratamentos.

Submitted by Marco Antônio de Ramos Chagas (mchagas@ufv.br) on 2017-04-05T11:40:32Z No. of bitstreams: 1 Resumo.pdf: 49639 bytes, checksum: 600ac572a3e6f96def3988f061f97cd5 (MD5) / Made available in DSpace on 2017-04-05T11:40:32Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Resumo.pdf: 49639 bytes, checksum: 600ac572a3e6f96def3988f061f97cd5 (MD5) Previous issue date: 2002-02-28 / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior / Bixa orellana L. (Bixaceae) é uma espécie lenhosa conhecida como urucum e que, recentemente, tem despertado o interesse da indústria cosmética e alimentícia por acumular em suas sementes um corante natural, constituído basicamente pelos carotenóides bixina e norbixina. O urucum possui elevada taxa de polinização cruzada, e sendo propagado basicamente via sementes, os plantios comerciais apresentam marcante heterozigose. Por isso, a aplicação de um sistema eficiente de propagação in vitro pode ajudar na multiplicação de ‘tipos elite’, em especial aqueles com elevado teor de carotenóides. Além disso, a propagação in vitro é fundamental para o desenvolvimento de protocolo de transformação genética visando maior acúmulo dos carotenóides nas sementes mediante a superexpressão de enzimas relacionadas à rota biossintética desses compostos. Objetivando estabelecer protocolo de regeneração in vitro de urucum, diferentes explantes [hipocótilos invertidos (HI) e segmentos de hipocótilo (SH)] obtidos de plântulas germinadas in vitro, e embriões zigóticos imaturos foram inoculados em meio MS suplementado com diferentes concentrações de reguladores para obtenção de organogênese e embriogênese somática, respectivamente. Dentre os fatores avaliados, a melhor combinação para obtenção de organogênese consistiu de inoculação de hipocótilos invertidos em meio MS suplementado com 4,56 μM Zea, 87,6 mM sacarose e 2,8 g dm -3 Fitagel ® . A utilização de TDZ não resultou em brotações alongadas, embora tenha ocorrido a formação de multibrotações, enquanto que BAP resultou em resposta intermediária. TDZ induziu intensa divisão mitótica, resultando na formação de inúmeras zonas de proliferação localizadas próximas à epiderme e tecido cortical periférico. A melhor resposta para enraizamento das brotações adventícias alongadas foi obtida com 5,0 μM AIB, apesar da presença indesejável de calos. A obtenção de embriogênese somática só foi possível a partir de embriões zigóticos imaturos e quando carvão ativo estava presente no meio, independente da presença de regulador de crescimento. Apesar disso, a presença de 2,4-D e/ou cinetina acelerou a obtenção de embriões somáticos. A ausência de carvão ativo determinou calogênese e posterior embriogênese somática indireta. Embriões somáticos primários diretos originaram-se preferencialmente das camadas de tecidos externos do explante, como protoderme e meristema fundamental. No entanto, evidenciou-se que a indução de embriogênese somática em urucum pode ser afetada pelo genótipo e explante. Em outro experimento, verificou-se a possibilidade de utilização do carboidrato manose na seleção de plantas de urucum transformadas com o gene fosfomanose isomerase (PMI). Para isso, HI e SH, e embriões somáticos imaturos foram inoculados em meio MS com os melhores fatores para indução de organogênese e embriogênese somática, respectivamente, sendo que a sacarose do meio parcial ou totalmente substituída por manose, a fim de obter a curva de morte dos explantes. Desta forma, observou-se que o urucum foi incapaz de regenerar brotações adventícias na presença de manose como única forma de carbono, ou ainda de formar embriões somáticos quando até 25% da manose foi substituída por sacarose. Assim, o urucum pode ser transformado usando manose como agente seletivo em substituição aos agentes seletivos convencionalmente usados (herbicidas e antibióticos). Para verificar a influência do etileno no enraizamento de brotações de urucum in vitro, ápices caulinares, excisados de plântulas de urucum obtidas a partir da germinação de sementes in vitro, foram inoculados em meio MS básico (controle) ou suplementado com 5 μM AIB ou ANA isolados, ou em combinação com um inibidor (AVG) ou promotor (ACC) da síntese de etileno. Os resultados obtidos mostraram que o uso das auxinas AIB e ANA aumentou a freqüência de enraizamento e o número médio de raízes adventícias por brotação, e concomitantemente aumentou a biossíntese de etileno e a presença indesejável de calos nos tecidos epidérmico e cortical da extremidade proximal das brotações. Análises histológicas revelaram, ainda, a origem das raízes adventícias a partir dos parênquimas do floema e,ou, xilema secundários. No entanto, AVG adicionado ao meio de enraizamento controlou a biossíntese de etileno e a indução de calos na extremidade proximal de ápices caulinares de urucum, mantendo inalterados a epiderme, córtex e demais tecidos internos. Por outro lado, ACC aumentou a freqüência de enraizamento, retardou o enraizamento e aumentou o calejamento quando comparado ao tratamento controle, resultando em intensa proliferação celular predominantemente nos tecidos cortical e vascular, enquanto a epiderme tornou-se extremamente alterada. Finalmente, após uma ampla revisão de literatura, e tendo em vista a importância da fonte de carbono nos processos morfogênicos, e o aumento do uso de novos genes seletivos baseados na fonte de carbono, como por exemplo, o gene fosfomanose isomerase, supõe-se que a padronização da concentração molar como referência para comparar diferentes fontes de carbono é preferível à concentração percentual, comumente utilizada. Essa padronização, juntamente com maior criticismo em relação aos dados encontrados na literatura, irão contribuir positivamente a fim de evitar a perpetuação de erros na elaboração de tratamentos envolvendo diferentes suplementações de açúcares ao meio de cultivo. / Bixa orellana L. (Bixaceae) is a woody species known as annatto that has raised the interest of the industry due to accumulate in its seeds a natural dye, constituted mainly by bixin and norbixin carotenoids, having wide application in the cosmetic and food industries. Annatto is a cross-pollinated species predominantly propagated by seeds, though leading to a markedly heterozygosis. Therefore, the application of a reliable in vitro propagation system would unquestionably aid in multiplication of elite types, in special those with high-producing carotenoid contents. Moreover, the in vitro propagation is fundamental for the development of a protocol for genetic transformation of annatto to improve accumulation of carotenoids in the seed coat by over- expressing key-enzymes of biosynthetic pathway of these compounds. Aiming to establish in vitro regeneration protocol of annatto from inverted hypocotyls (IH) and hypocotyl segments (HS)-derived explants, obtained from in vitro grown seedlings, and immature zygotic embryos were inoculated in MS-based medium supplemented with growth regulator concentrations and combinations for organogenesis and somatic embryogenesis, respectively. The best response for adventitious shoots induction in annatto was obtained using inverted hypocotyls as explants, 87.6 mM sucrose, 2.8 g dm -3 Phytagel ® , and 4.56 μM zeatin. The use of TDZ did not result in elongated adventitious shoots. TDZ induced intense mitotic division, resulting in several proliferation zones nearby epidermis and outer cortical tissues. The best shoot rooting response was obtained using 5 μM IBA, although undesirable callus presence. Somatic embryogenesis was obtained only when immature zygotic embryos were cultured onto an activated charcoal-supplemented medium, regardless the presence of growth regulators. Despite this, the presence of 2,4-D and/or kinetin accelerated embryo differentiation. Interestingly, the absence of activated charcoal determined indirect somatic embryogenesis. The primary direct somatic embryos preferably originated from outer cell layers of the explants, like protodermis and ground meristem. It was noticed that the protocol could be affected by genotype. Further work is going on in our laboratory focusing on the evaluation of factors involved in conversion to plants from somatic embryos. After that, this system may be beneficial for mass propagation of selected elite clones as well as for genetic transformation of annatto. It was also verified the possibility of the utilization of mannose as selective agent for further use in genetic transformation studies based on phosphomannose isomerase gene (PMI). For this, HI and SH, and immature zygotic embryos were inoculated in MS-based medium supplemented with the optimized factors for organogenesis and embryogenesis somatic, respectively. Sucrose was partial or totally substituted by mannose, in order to establish conditions that led to regeneration inhibition. So, it was observed that annatto was incapable to regenerate shoots in the presence of mannose as only carbon source, or still to form somatic embryos when down to 25% of mannose was substituted by sucrose. Thus, mannose is a reliable carbon source that may replace conventionally used selective agents (herbicides and antibiotics) for genetic transformation of annatto. In order to evaluate the effect of ethylene upon rhizogenesis of annatto, shoot apex excised from seedlings derived from in vitro germinated seeds were inoculated in MS-based medium (control), or supplemented with 5 μM AIB or ANA, isolated or in combination with an inhibitor (AVG) or promoter (ACC) of ethylene biosynthesis. The results showed that use of auxins IBA or NAA increased rooting frequency and adventitious root number per shoot, and at the same time increased ethylene biosynthesis and undesirable callusing from epidermal and cortical tissues at proximal extremity of annatto shoots. Histology analysis revealed adventitious origin of roots from xylem parenchyma or secondary phloem. AVG added to the rooting medium controlled ethylene biosynthesis and callus induction in annatto shoots, remaining unaltered the epidermis, cortex and inner tissues. However it caused reduction in root number and elongation. On the other hand, ACC increased rooting frequency, retarded rooting appearance and enhanced callusing when compared to control, resulting in intense cell proliferation predominantly in the cortical and vascular tissues, whilst epidermis became mostly altered. Finally, after a vast literature search, and bearing in mind the well known importance of carbohydrate sources on morphogenic processes and the increasing use of novel selection genes based on carbohydrate sources, it was concluded that the standardization of molar concentration as a reference to compare different carbon sources is more adequate than the use of percentages. This standardization, together with a critical reading of the data found in the surveyed literature, will positively contribute to avoid the perpetuation of mistakes when designing treatments involving different carbohydrate supplementation to the culture media. / Tese (Resumo) importada do Alexandria, não tem arquivo PDF completo

MELO, Priscila Bezerra dos Santos. Indução à embriogênese somática e identificação de marcadores ISSR em antúrio. 2016. 98 f. Dissertação (Mestrado em Fitotecnia)-Universidade Federal do Ceará, Fortaleza, 2016. / Submitted by Anderson Silva Pereira (anderson.pereiraaa@gmail.com) on 2017-01-09T18:32:24Z No. of bitstreams: 1 2016_dis_pbsmelo.pdf: 1915586 bytes, checksum: ca8ba64498bc085612866056110e7aef (MD5) / Approved for entry into archive by Jairo Viana (jairo@ufc.br) on 2017-01-11T17:14:19Z (GMT) No. of bitstreams: 1 2016_dis_pbsmelo.pdf: 1915586 bytes, checksum: ca8ba64498bc085612866056110e7aef (MD5) / Made available in DSpace on 2017-01-11T17:14:19Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2016_dis_pbsmelo.pdf: 1915586 bytes, checksum: ca8ba64498bc085612866056110e7aef (MD5) Previous issue date: 2016 / Anthurium is an important ornamental species for floriculture's agribusiness. Thus, it is very important to ensure the success of its cultivation. The use of biotechnology allows the development of effective techniques for in vitro propagation. One of these techniques is the somatic embryogenesis. However, beyond these efforts, another technique that can effectively contribute to the success of Anthurium cultivation, is the characterization of anthurium's cultivars, by means of molecular markers. Therefore, the study was divided into two experiments. Experiment 1: The objective was to establish an induction protocol for somatic embryogenesis for the anthurium's cultivars Jureia and Luau, using nodal segments as explants. It was studied the effect of the interaction among the factors cultivar, growth regulator type and concentration on oxidation (%) and formation of embryogenic calli (%). The scanning electron microscopy (SEM) was used to identify whether the structures formed from the explants showed embryogenic characteristics. The evaluations about oxidation showed that Jureia is the most sensitive cultivar, and that the medium added with NAA is more prone to oxidation. As for the formation of embryogenic calli, it was found that Luau has more embryogenic potential and it was established the following protocol for induction of somatic embryogenesis for the two studied cultivars: nodal segments must be maintained for 75 days, in the dark, in the medium ESA (Pierik 1976 modified) supplemented with 7.5 mM of NAA. Experiment 2: The objective was the selection of ISSR markers for molecular characterization of anthurium's cultivars Sublime, Luau, Jureia and Maré, using leaf samples of in vitro established plants, from indirect organogenesis, and samples of embryogenic calli. The DNA extraction was made, showing a genetic material of good quality. The PCR of the 18 ISSR markers was made and the reaction products were visualized by electrophoresis. The revealed fragments in the agarose gel were transformed into binary data [1- presence of band; 0 - absence of band], allowing the classification of the samples in terms of genetic distance in a dendrogram. It was found that all the ISSR used showed polymorphism, being effective to characterization of the anthurium's samples studied. Cultivar-specific markers were identified. It was found that Sublime is the cultivar genetically most stable and Maré the most unstable. These results provide new perspectives for the in vitro propagation, and are useful for breeding and protection of the studied anthurium's cultivars. / O antúrio é uma importante espécie ornamental para o agronegócio da floricultura. Assim, é importante garantir o sucesso de seu cultivo. O uso da biotecnologia permite o desenvolvimento de técnicas eficientes de propagação in vitro. Uma dessas técnicas é a embriogênese somática. Porém, além destes esforços, uma das técnicas que pode contribuir efetivamente para o sucesso do cultivo do antúrio é a caracterização das cultivares da espécie, por meio de marcadores moleculares. Assim, o estudo foi dividido em dois experimentos. Experimento 1: Objetivou-se estabelecer um protocolo de indução à embriogênese somática para as cultivares de antúrio Jureia e Luau, utilizando como explantes segmentos nodais. Estudou-se o efeito da interação entre os fatores cultivar, tipo e concentração do regulador de crescimento sobre a oxidação (%) e formação de calos embriogênicos (%). Utilizou-se microscopia eletrônica de varredura (MEV) para identificar se as estruturas formadas a partir dos explantes apresentavam características embriogênicas. Constatou-se que a cultivar Jureia é mais sensível e o meio adicionado de ANA mais propenso à oxidação. Quanto à formação de calos embriogênicos, constatou-se que a cultivar Luau tem maior potencial embriogênico e estabeleceu-se o seguinte protocolo de indução à embriogênese somática, para as duas cultivares estudadas: segmentos nodais devem permanecer 75 dias, no escuro, em meio ESA (Pierik 1976, modificado) suplementado com 7,5 μM de ANA. Experimento 2: Objetivou-se a seleção de marcadores ISSR para caracterização molecular das cultivares de antúrio Sublime, Luau, Jureia e Maré, a partir de amostras de folhas oriundas de plantas estabelecidas in vitro, obtidas de organogênese indireta, e de amostras de calos embriogênicos. Foi realizada a extração de DNA das amostras coletadas, revelando DNA de boa qualidade. Foi feita a PCR de18 marcadores ISSR e os produtos da reação foram visualizados por eletroforese. Os fragmentos revelados no gel de agarose foram transformados em dados binários [1– presença de banda; 0 – ausência de banda], possibilitando agrupar as amostras em termos de distância genética em um dendrograma. Constatou-se que os marcadores ISSR utilizados apresentaram polimorfismo, sendo eficientes para caracterizar as amostras de antúrio estudadas. Foram identificados marcadores cultivar-específicos. Sublime revelou-se como a cultivar geneticamente mais estável, e Maré, como a mais instável. Estes resultados proporcionam novas perspectivas para a propagação in vitro, bem como são úteis para o melhoramento genético e proteção da identidade genética das cultivares de antúrio estudadas.

Submitted by Marco Antônio de Ramos Chagas (mchagas@ufv.br) on 2016-04-29T16:31:02Z No. of bitstreams: 1 texto completo.pdf: 3735449 bytes, checksum: aa20d55ef3b80cac2cc56637e94639c9 (MD5) / Made available in DSpace on 2016-04-29T16:31:02Z (GMT). No. of bitstreams: 1 texto completo.pdf: 3735449 bytes, checksum: aa20d55ef3b80cac2cc56637e94639c9 (MD5) Previous issue date: 2013-10-14 / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior / Brachypodium distachyon (L.) P. Beauv. (Poaceae: Poideae) tem se destacado como planta modelo para gramíneas de clima temperado e espécies usadas para a produção de biocombustíveis. A linhagem Bd21 de Brachypodium distachyon tem um genoma completamente seqüenciado e montado, além de protocolos de genômica e de transformação bem estabelecidos com base em calos embriogênicos. No entanto, as informações sobre a origem e as alterações celulares que ocorrem durante a diferenciação de embriões somáticos nos estágios iniciais não foi documentada para B. distachyon. Também não há relatos sobre o uso de abordagens moleculares para investigar o processo de embriogênese somática nesta espécie. Portanto, os objetivos deste trabalho foram: (1) caracterizar as alterações morfológicas, anatômicas e histoquímicas que ocorrem durante a indução de embriogênese somática a partir de embriões zigóticos imaturos (EZI) da B. distachyon linhagem de referência Bd21 usando microscopia de luz e de varredura em associação com testes histoquímicos e, (2), realizar a clonagem e caracterização de genes SERK (SOMATIC EMBRYOGENESIS RECEPTOR-LIKE KINASE) e analisar sua expressão na indução de embriogênese somática utilizando hibridização in situ para monitorar os processos morfogenéticos in vitro. Culturas embriogênicas de B. distachyon (BD21) foram estabelecidas usando EZI 15 dias após a antese, em meio Murashige e Skoog (1962) contendo ácido 2,4- diclorofenoxiacético. A regeneração in vitro de plântulas derivadas de embriões somáticos ocorreu pela embriogênese somática através da via indireta. Os embriões somáticos tiveram uma origem multicelular e originaram-se de calo embriogênico formado a partir de células da epiderme na região do nó escutelar que se estenderam para a periferia do EZI. A ordem de acumulação de reservas nos embriões somáticos foi semelhante a dos embriões zigóticos. Nas culturas embriogênicas, proteínas e lipídios foram utilizados nos primeiros 2 dias em meio de indução. O teor de amido aumentou nos primeiros 2 dias em meio de indução e diminuiu em seguida em número de grânulos que se tornaram maiores e apareceram principalmente nas células vacuoladas adjacentes às massas pró-embriogênicas. Pequenos grânulos de amido começaram a acumular nos pró-embrioides após 4 dias em meio de indução e tornaram- se maior e mais abundantes em células do escutelo aos 12 dias em meio de indução. A diferenciação do embrião somático seguiu a mesma sequência de desenvolvimento verificado em outros membros da família Poaceae, ou seja, a passagem pelos estádios globular, escutelar e coleoptilar. O gene SERK tem sido usado como um marcador para as células competentes na embriogênese somática de várias espécies. Neste estudo, utilizando iniciadores degenerados, uma sequência específica homóloga de um fragmento do gene SERK foi amplificada de B. distachyon Bd21. A análise da sequência do fragmento de SERK (766 bp) revelou altos níveis de similaridade com genes SERK relatados em outras espécies. A análise de hibridização in situ mostrou que o gene SERK estava presente nos tecidos embriogênicos de B. distachyon antes do desenvolvimento de embriões somáticos e continuou sendo expresso nos estágios globular e escutelar. Estes resultados sugerem que a expressão do gene SERK de B. distachyon pode estar associada com a indução da embriogênese somática. Este estudo faz a primeira descrição de mudanças morfoanatômicas e histoquímicas durante o processo de embriogênese somática em B. distachyon linhagem Bd21. Este é também o primeiro relato sobre a clonagem e expressão de um gene SERK para a espécie e sugere que este gene pode servir como um marcador molecular para monitorar a transição de células somáticas em células competentes e embriogênicas também em B. distachyon. / Brachypodium distachyon (L.) P. Beauv. (Poaceae: Poideae) has been proposed as a new model for temperate and biofuel grasses. Brachypodium distachyon inbred line Bd21 has a fully sequenced and assembled genome, a series of genomics resources, and well-established somatic embryogenesis-based transformation protocols. However, information about origin and cellular changes occurring during the early differentiation of somatic embryos has not been documented for B. distachyon. There are also no reports on the use of molecular approaches to investigate somatic embryogenesis in B. distachyon. Therefore, the objectives of this study were (1) to characterize the morphological, anatomical and histochemical changes occurring during the induction of somatic embryogenesis from immature zygotic embryos (IZE) of B. distachyon community standard line Bd21 using light and scanning electron microscopy in association with histochemical tests and, (2), to carry out the cloning and characterization of SOMATIC EMBRYOGENESIS RECEPTOR-LIKE KINASE (SERK) genes and analysis of its expression in somatic embryogenesis induction using in situ hybridization for monitoring the morphogenetic processes in vitro. Somatic embryogenic cultures of B. distachyon (Bd21) were established following culture of IZE, 15 days post anthesis, on Murashige and Skoog (1962) medium containing 2,4- dichlorophenoxyacetic acid. In vitro regeneration of plantlets derived from somatic embryos occurred by the indirect somatic embryogenesis pathway. Somatic embryos had a multicellular origin and originated from embryogenic callus formed from cells of the epidermis in the region of the scutellar node and extended to the periphery of IZE. The order in accumulation of storage reserves in somatic embryos was similar to that of zygotic embryos. In the embryogenic cultures, storage proteins and lipids were used up in the first 2 days after culture (DAC). The levels of starch increased in the first 2 DAC and then decreased in number of granules that became larger and appeared mainly in the vacuolated cells subtending the proembryonic masses. Small starch granules started accumulating in proembryoids after 4 DAC and became larger and abundant in scutellar cells 12 DAC. Somatic embryo differentiation in B. distachyon proceeded through globular, scutellar and coleoptilar stages, following the morphological pattern of development of that reported in other members of the Poaceae. The SERK gene has been used successfully as a marker for competent cells in somatic embryogenesis of several species. In this study, using degenerate primers, it was possible to amplify a specific homologous sequence of a SERK gene fragment from B. distachyon Bd21. Sequence analysis of the SERK fragment (766 bp) revealed high levels of similarity to other reported SERKs. In situ hybridization analysis showed that the SERK gene was present in embryogenic tissues of B. distachyon before somatic embryo development and continued expressing through globular and scutellar stages. These results suggest that the expression of the B. distachyon SERK gene was associated with induction of somatic embryogenesis. This study provides the first description of morphoanatomical and histochemical changes underlying the embryogenic process in B. distachyon reference line Bd21. It is also the first report on the cloning and expression of a SERK gene for the species, suggesting that it could serve as a molecular marker to monitor the transition of IZE cells into competent and embryogenic cells also in B. distachyon line Bd21.

Submitted by Reginaldo Soares de Freitas (reginaldo.freitas@ufv.br) on 2016-06-27T16:33:43Z No. of bitstreams: 1 texto completo.pdf: 211364 bytes, checksum: fc3a80581c0ee32381531236323755c1 (MD5) / Made available in DSpace on 2016-06-27T16:33:43Z (GMT). No. of bitstreams: 1 texto completo.pdf: 211364 bytes, checksum: fc3a80581c0ee32381531236323755c1 (MD5) Previous issue date: 2000-10-11 / Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e Tecnológico / Objetivou-se com este trabalho avaliar as características morfogênicas (taxa de aparecimento de folhas, taxa de alongamento de folhas, senescência foliar) e de crescimento: taxa assimilatória líquida (TAL), taxa de crescimento relativo (TCR), razão de área foliar (RAF), razão de peso foliar (RPF), área foliar específica (AFE) e índice de área foliar (IAF) do capim-tifton 85, sob cinco doses de adubo nitrogenado 0, 33, 66, 100 e 133 kg/ha colhido ao atingir 30, 40 e 50 cm de altura. O experimento foi arranjado em parcelas subdivididas, segundo o delineamento inteiramente casualizado, com três repetições. As parcelas referiam-se às doses de N e as subparcelas, às alturas das plantas ao tempo de corte. Como fontes de nitrogênio e potássio, foram utilizados, respectivamente, o sulfato de amônio e o cloreto de potássio. A taxa de aparecimento e alongamento de folhas cresceu com as doses de N e decresceu com as alturas, enquanto a senescência diminuiu com aumento das doses de N e cresceu com altura das plantas, nos dois anos de avaliações. A RAF aumentou com o incremento das doses de N e altura da planta, estimando-se valor de 0,01165 m2/g na dose de 133 kg/ha e altura de 50 cm; seu maior valor foi de 0,529 g/g. A RAF decresceu 0,000101 unidade para cada cm de incremento na altura das plantas, por ocasião dos cortes, cresceu 0,000045 unidades/kg de N aplicado. A RPF também decresceu com a altura das plantas e aumentou, com as doses de N. A AFE, foi influenciada apenas pela adubação nitrogenada, estimando-se valores de 0,0114 e 0,0214 m2/g, para as doses de 0 e 133 kg de N/ha, respectivamente. A TAL foi maior no intervalo de 30-40 cm, na dose de 133 kg/ha, registrando-se valor de 7,79 g/m2.dia, enquanto que a TCR não variou entre os intervalos e aumentou com as doses de N, obtendo-se valor de 0,075 g/g.dia, para a dose de 133 kg de N/ha. O índice de área foliar aumentou com o incremento das doses de N e com a altura das plantas, estimando-se valores máximos de 4,99; 4,96; e 5,54, para a dose de 133 kg/ha, para as plantas colhidas ao atingirem 30, 40 e 50 cm de altura, respectivamente. / This work was conducted to evaluate the morphogenical traits (leaves appearance rate, leaves elongation rate and leaves senescence) and growth traits: net assimilatory rate (NAR), relative growth rate (RGR), colm:stem ratio (C/S), leaf weight ratio (LWR), leaf specific area (LSA) and leaf area index (LAI) of tifton 85 bermudagrass under five levels of nitrogen (0, 33, 66, 100 and 133 kg/ha) harvest at 30, 40 and 50 cm of height. The experiment was assigned to a split plot, according to a completely randomized design, with three replicates. N levels were the plots and the pants height at cut time was the split plots. Ammonia sulfate and potassium chloride were used respectively as nitrogen and potassium sources. The leaves appearance and elongation rate increased as N levels increased and decreased as plants height increased, while senescence rate decreased as N levels increased and increased as plants height increased, in both evaluation years. C/S increased as N levels and plants height increased, and a value of 0.01165 m2/g at 133 kg/ha and 50 cm of height was estimated. The higher value was 0.529 g/g. C/S decreased 0.000101 unit for each cm of plant height increase at cutting and increased 0.000045 unit/kg N. LWR also decreased as plants height increased and increased as N levels increased. Nitrogen fertilization influenced only LSA, and values of 0.0114 and 0.0214 m2/g, for levels of 0 and 133 kg N/ha, respectively, were estimated. NAR was higher from 30 to 40 cm, at level of 133 kg/ha, with a value of 7.79 g/m .day, while RGR did not change among intervals and increased as N levels increased, with a value of 0.075 g/g.day, for 133 kg N/ha. Leaf area index increased as N leaves and plants height increased, and the maximum values of 4.99 and 4.96 and 5.54, for 133 kg/ha, were estimated for plants harvest at 30, 40 and 50 cm of height, respectively. / Não foi localizado o CPF do autor.

CAMILO, Danilo de Araújo. Morfofisiologia e trocas gasosas do capim Panicum Maximum BRS zuri sob salinidade e lâminas de irrigação. 2017. 118 f. Tese (Doutorado em Zootecnia)–Universidade Federal do Ceará, Fortaleza, 2017. / Submitted by Francisca Gomes (francisbeserra@yahoo.com.br) on 2017-07-14T17:53:54Z No. of bitstreams: 1 2017_tese_dacamilo.pdf: 1662780 bytes, checksum: df5db20ab7e43cae68b5358368af4e64 (MD5) / Approved for entry into archive by Jairo Viana (jairo@ufc.br) on 2017-07-14T18:09:47Z (GMT) No. of bitstreams: 1 2017_tese_dacamilo.pdf: 1662780 bytes, checksum: df5db20ab7e43cae68b5358368af4e64 (MD5) / Made available in DSpace on 2017-07-14T18:09:47Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2017_tese_dacamilo.pdf: 1662780 bytes, checksum: df5db20ab7e43cae68b5358368af4e64 (MD5) Previous issue date: 2017 / A challenge in making pasture based production systems feasible is the use of forage species more adapted to different environmental conditions. The objective was to evaluate the growth and morphophysiological responses through the morphogenic and structural characteristics, water use efficiency and gas exchanges of BRS Zuri grass under greenhouse conditions. The experiment was arranged in a randomized block split-plot design. The study was performed in two phases: in experiment I, main plots were composed of salinity levels in water (0.5, 2.0, 4.0 and 6.0 dS m-1) and in the subplots (60, 80, 100 and 120% of the evapotranspiration - ET). Due to the severe effects of salinity levels on development and consequent death of plants at the level of 6.0 dS m-1, the study was continued in experiment II (cycles 3 and 4), where the same design was used and the initial salinity levels were replaced by 0.6; 1.8 and 3.0 dS m-1. Salinity levels of 4.0 and 6.0 dS m-1 caused severe impacts on the development of BRS Zuri cultivar with decrease in growth rates (leaf and stem elongation), leaf size (leaf length, width and area), number of live leaves, tillering, proportion and production of green material (leaves and stems) and increase in the proportion and production of the senescent fraction. At these salinity levels, plants developed adaptation strategies such as reduction of leaf area and increase in leaf appearance rate. Water use efficiency and photosynthetic activity were also compromised under higher salinity. However, gas exchanges were favored at the 4.0 dS m-1 level when under high water availability (irrigation depths of 100 and 120% ET). Water deficit provided by irrigation depth of 60% ET negatively influenced growth and gas exchanges. Higher productivity was obtained in irrigation depth of 120% ET. The cultivar presented growth recovery potential with the reduction of salinity levels up to 3.0 dS m-1 as observed in experiment II. Salinity levels of 4.0 and 6.0 dS m-1 are impracticable for development and maintenance of the BRS Zuri cultivar, as they result in a reduction in the morphophysiological characteristics related to growth and production. BRS Zuri cultivar presents growth recovery potential with the reduction of salinity levels, however, the cumulative effects of salinity compromise the physiological apparatus over time, recommending the maximum levels of 2.0 dS m-1 (experiment I) or 1.8 dS m-1 (experiment II) since maintained under high water availability. The use of the irrigation depth of 80% ET may be feasible under low salinity conditions, since few characteristics were affected under these conditions. Irrigation using 60% ET promotes severe and deleterious effects on the morphophysiological and structural characteristics of the cultivar and, under high salinity these effects are intensified. The evaluation of gas exchanges and leaf chlorophyll index should be carried out with caution, since other factors may influence treatment responses. / Um dos desafios em viabilizar a implantação de sistemas de produção a pasto consiste na utilização de espécies forrageiras adaptadas às diferentes condições ambientais. Objetivou-se avaliar o crescimento e respostas morfofisiológicas por meio das características morfogênicas, estruturais, eficiência de uso da água e trocas gasosas do capim BRS Zuri em casa de vegetação. O delineamento experimental foi em blocos casualizados em parcelas subdivididas. O estudo foi realizado em duas fases: no experimento I (ciclos 1 e 2), as parcelas principais foram compostas pelos níveis de salinidade na água (0,5; 2,0; 4,0 e 6,0 dS m-1) e nas subparcelas lâminas de irrigação (60; 80; 100 e 120% da evapotranspiração). Em virtude dos efeitos severos dos níveis de salinidade sobre o desenvolvimento e consequente morte das plantas no nível de 6,0 dS m-1 foi dada continuidade ao estudo no experimento II (ciclos 3 e 4) em que utilizou-se o mesmo delineamento sendo substituídos os níveis de salinidade iniciais por 0,6; 1,8 e 3,0 dS m-1. Os níveis de salinidade de 4,0 e 6,0 dS m-1 causaram impactos severos sobre no desenvolvimento da cultivar BRS Zuri com diminuição nas taxas de crescimento (alongamento foliar e de colmos), dimensões foliares (comprimento, largura e área foliar), número de folhas vivas, perfilhamento, na proporção e produção de material verde (folhas e colmos) e aumento da proporção e produção da fração senescente. Nesses níveis de salinidade, as plantas desenvolveram estratégias de adaptação como a redução da área foliar e aumento na taxa de aparecimento foliar. Ocorreu também comprometimento da eficiência de uso da água e da atividade fotossintética sob maior salinidade. Contudo, as trocas gasosas foram favorecidas no nível de 4,0 dS m-1 em alta disponibilidade hídrica (lâminas de 100 e 120% da ET). O déficit hídrico proporcionado pelas lâminas de 60% da ET influenciou negativamente o crescimento e as trocas gasosas. Maior produtividade foi obtida na lâmina de 120% da ET. A cultivar apresentou potencial de recuperação do crescimento com a redução dos níveis de salinidade de até 3,0 dS m-1, conforme observado no experimento II. Níveis de salinidade de 4,0 e 6,0 dS m-1 inviabilizam o desenvolvimento e manutenção da cultivar BRS Zuri, pois decorrem em redução nas características morfofisiológicas relacionadas ao crescimento e produção. A cultivar BRS Zuri apresenta potencial de recuperação, contudo, os efeitos cumulativos da salinidade comprometem o aparato fisiológico ao longo do tempo, recomendando-se o uso de níveis de 2,0 dS m-1 (experimento I) ou 1,8 dS m-1 (experimento II) desde seja mantida sob disponibilidade hídrica elevada. O uso da lâmina de irrigação de 80% da ET pode ser viável em condições de baixa salinidade, uma vez que poucas características foram afetadas nessas condições. A lâmina de 60% da ET promove efeitos severos e deletérios nas características morfofisiológicas e estruturais da cultivar e, sob efeito da salinidade esses efeitos são intensificados. A avaliação das trocas gasosas e do índice de clorofila da folha deve ser realizado com cautela, pois outros fatores podem influenciar nas respostas dos tratamentos.

Submitted by Teresa Cristina Rosenhayme (teresa.rosenhayme@cprm.gov.br) on 2017-04-04T14:12:45Z No. of bitstreams: 1 Tese_PatriciaSimoes.pdf: 89947924 bytes, checksum: 3def42961311eeba8abfa85464d444ff (MD5) / Approved for entry into archive by Flasleandro Oliveira (flasleandro.oliveira@cprm.gov.br) on 2017-04-06T13:34:33Z (GMT) No. of bitstreams: 1 Tese_PatriciaSimoes.pdf: 89947924 bytes, checksum: 3def42961311eeba8abfa85464d444ff (MD5) / Approved for entry into archive by Flasleandro Oliveira (flasleandro.oliveira@cprm.gov.br) on 2017-04-06T13:35:31Z (GMT) No. of bitstreams: 1 Tese_PatriciaSimoes.pdf: 89947924 bytes, checksum: 3def42961311eeba8abfa85464d444ff (MD5) / Made available in DSpace on 2017-04-06T13:37:28Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Tese_PatriciaSimoes.pdf: 89947924 bytes, checksum: 3def42961311eeba8abfa85464d444ff (MD5) Previous issue date: 2016

O trabalho foi conduzido na EEA/UFRGS em 2003. O objetivo foi avaliar a eficiência do disco medidor de forragem, do bastão graduado e do medidor de capacitância em predizer a massa de forragem de azevém bem como o de avaliar as diferenças nas variáveis morfogênicas (taxa de elongação de folhas, taxa de surgimento de folhas, tempo de vida da folha) e estruturais da pastagem (numero de folhas verdes, comprimento de folhas e densidade de perfilhos) pela técnica de perfilhos marcados em função dos tratamentos adotados (intensidades e métodos de pastejo). Para determinar a eficiência dos instrumentos foram realizados dois experimentos: o experimento 1 avaliandose a eficiência do disco, bastão e medidor de capacitância em predizer a massa de forragem da pastagem na fase de estabelecimento num delineamento completamente casualizado com 32 repetições e três tratamentos e o experimento 2 avaliando-se a eficiência do disco medidor e do bastão graduado como preditores da massa de forragem sob lotação rotacionada em duas intensidades de pastejo (baixa e moderada) definidas por ofertas de forragem representando, respectivamente, 2,5 ou 5,0 vezes o potencial de consumo dos cordeiros num delineamento em blocos casualizados em arranjo fatorial com quatro repetições. Para determinar as variáveis morfogênicas, estruturais e o fluxo de tecidos os tratamentos foram duas intensidades (baixa e moderada) e dois métodos de pastejo (pastejo com lotação contínua e rotacionada). No experimento 1 o bastão graduado apresentou a melhor correlação com a massa de forragem (r2=0,65). No 2 as melhores correlações foram obtidas quando avaliadas as faixas de pós-pastejo para o disco medidor (r2=0,47) e as de pré-pastejo para o bastão graduado (r2=0,36). Para as variáveis morfogênicas e estruturais as intensidades de pastejo foram responsáveis por diferenças na taxa de elongação de folhas (intensidade baixa resultou em maior taxa de elongação) e nas características estruturais (intensidade baixa resultou em menor densidade de perfilhos, maior comprimento e número de folhas vivas). Os métodos de pastejo influenciaram as características morfogênicas (lotação contínua resultou em maior taxa de elongação de folhas, maior taxa de surgimento e tempo de vida das folhas no ciclo de observação I) e estruturais (lotação contínua resultou em maior densidade de perfilhos); bem como foi obtida interação com as intensidades e com os ciclos de avaliação. O fluxo de crescimento (favorecido por lotação rotacionada a baixa intensidade) e de senescência (favorecido por lotação contínua a baixa intensidade) foram afetados pelos tratamentos, enquanto que o fluxo de consumo não foi alterado pelos tratamentos.

Dissertação (mestrado)—Universidade de Brasília, Faculdade de Medicina, Programa de Pós-Graduação em Patologia Molecular, 2014. / Submitted by Alaíde Gonçalves dos Santos (alaide@unb.br) on 2014-04-29T12:50:20Z No. of bitstreams: 1 2014_ThuanydeMouraCordeiro.pdf: 3960809 bytes, checksum: 4b394c3182d7b2be77db6f48e1225c6d (MD5) / Approved for entry into archive by Guimaraes Jacqueline(jacqueline.guimaraes@bce.unb.br) on 2014-05-23T12:40:35Z (GMT) No. of bitstreams: 1 2014_ThuanydeMouraCordeiro.pdf: 3960809 bytes, checksum: 4b394c3182d7b2be77db6f48e1225c6d (MD5) / Made available in DSpace on 2014-05-23T12:40:35Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2014_ThuanydeMouraCordeiro.pdf: 3960809 bytes, checksum: 4b394c3182d7b2be77db6f48e1225c6d (MD5) / A malária é uma doença infecciosa causada por protozoários Plasmodium spp. O P. falciparum é considerado o mais severo por ser o responsável pela maioria dos casos de morte causados pela doença. Devido ao rápido surgimento de cepas de P. falciparum resistentes às drogas antimalariais dá-se a importância de realizar um screening de compostos da biodiversidade, além de elucidar os mecanismos de ação de substâncias com comprovada ação antiplasmodial, como por exemplo, a rottlerin, um inibidor da proteína quinase C. As proteínas quinases desempenham um papel essencial em muitas funções celulares, o que as tornam alvos muito atraentes para o desenvolvimento de novas drogas. A metodologia considerada padrão ouro para avaliar a atividade antimalárica de drogas é o ensaio com incorporação de hipoxantina tritiada. No entanto, o alto custo, a adoção de medidas de segurança e a produção de lixo radioativo limitam a utilização desta técnica. Desta forma, os objetivos deste trabalho foram à implementação do teste de atividade antiplasmodial baseado em fluorescência com SYBR Green I®, avaliação da atividade antimalárica das subfrações cromatográficas de sílica-gel do extrato de acetato de etila de Qualea grandiflora, uma planta típica do Cerrado brasileiro, e avaliação dos efeitos da rottlerin no ciclo intra-eritrocitário do P. falciparum por métodos bioquímicos e citofluorimétricos. Três subfrações de Q. grandiflora apresentaram atividade antiplasmodial moderada, sem atividade citotóxica e hemolítica aparentes. Foi demonstrado o efeito da rottlerin, um potencial efetor da autofagia, sobre o ciclo eritrocitário de P. falciparum por citometria de fluxo. De fato, a análise da população enriquecida de esquizonte de P. falciparum em cultura tratada por rottlerin comparada com a não tratada revelou que houve inibição da diferenciação dos merozoítos, acarretando na morte rápida do parasito. A fim de entender quais eram os alvos proteicos de ação desta molécula, foi realizada uma análise proteômica comparativa preliminar por eletroforese bidimensional. Três proteínas, Heat Shock Protein 90 (HSP90), 3-fosfoglicerato quinase (3-PGK) e lactato desidrogenase (LDH), superexpressas na população de esquizontes não tratada com a rottlerin foram identificadas. Estas proteínas pertencem à classe de proteínas quinases ou possuem um domínio de interação com quinase. A HSP90 está envolvida no processo de enovelamento proteico com um papel fundamental no crescimento e desenvolvimento do parasito e, consequentemente, estudada como potencial alvo de droga antiplasmodial. A LDH e a 3-PGK são enzimas do metabolismo da glicose, e assim, potenciais alvos bem conhecidos para compostos antimaláricos devido à dependência deste parasito à glicólise para produção de energia. O estudo da biodiversidade do Cerrado pode contribuir para a descoberta de compostos antimalariais e a conservação deste bioma ameaçado. A não detecção das proteínas identificadas na presença de rottlerin pode estar relacionada à indução da autofagia na esquizogonia eritrocitária e constituem potenciais alvos de drogas antimaláricas. _______________________________________________________________________________________ ABSTRACT / Malaria is an infectious disease caused by Plasmodium spp protozoa. The P. falciparum is considered the most severe, since it is responsible for the majority of deaths related to this disease. Due to the rapid emergence of resistant strains of P. falciparum against antimalarial drugs, a great importance can be given to the screening of biodiversity compounds in addition to elucidate the mechanisms of action of substances with demonstrated antiplasmodial action such as rottlerin, an inhibitor of protein kinase C. Protein kinases play a pivotal role in many cellular functions, which make them very attractive targets for the development of new drugs. The methodology considered the gold standard for assessing antimalarial drug activity is the [3H]hypoxanthine incorporation assay. However, the high cost, adoption of safety regulations and the production of radioactive waste limit the application of this technique. Therefore, the objectives of this study were to implement the antiplasmodial activity test based on SYBR® Green I fluorescence, assessment of antimalarial activity of silica gel chromatographic subfractions of Qualea grandiflora ethyl acetate extract, a typical plant of the Brazilian Cerrado, and assessment of the rottlerin‟s effects in erythrocytic cycle of P. falciparum by biochemical and cytofluorimetric methods. Three subfractions of Q.grandiflora showed moderate antiplasmodial activity without apparent cytotoxic and hemolytic activities. It was demonstrated the effect of rottlerin, a potencial autophagy effector, on P. falciparum erythrocytic cycle by flow cytometry. In fact, analysis of the schizont enriched population of P. falciparum in rottlerin-treated culture compared to untreated ones revealed that there was an inhibition of merozoites differentiation, resulting in the rapid death of the parasite. In order to elucidate which proteins were the targets of rottlerin action, a preliminary comparative proteomic analysis by two-dimensional electrophoresis was performed. Three proteins, heat shock protein 90 (HSP90), 3- phosphoglycerate kinase (PGK-3) and lactate dehydrogenase (LDH), upregulated in schizont population non treated with rottlerin were identified. These proteins belong to the class of protein kinases or possess domains that interact with them. The HSP90 is involved in the protein folding process with a critic role in parasite growth and development, thus being studied as a potential target for antiplasmodial drugs. The 3- PGK and LDH are enzymes of glucose metabolism, hence well known potential targets for antimalarial compounds due to parasite dependence on glycolysis to produce energy. The study of Cerrado biodiversity can contribute to the discovery of antimalarial compounds and to the conservation of this threatened biome. The not detection of these proteins identified in the presence of rottlerin may be related to autophagy induction in erythrocytic schizogony and constitute potential targets for antimalarial drugs.