Submitted by Edisangela Bastos (edisangela@ufpa.br) on 2013-11-14T17:53:46Z No. of bitstreams: 2 license_rdf: 23898 bytes, checksum: e363e809996cf46ada20da1accfcd9c7 (MD5) Tese_AvaliacaoAtividadeGonadal.pdf: 3734747 bytes, checksum: c8292253197827b92c34de2888dee135 (MD5) / Approved for entry into archive by Ana Rosa Silva(arosa@ufpa.br) on 2013-11-19T16:25:51Z (GMT) No. of bitstreams: 2 license_rdf: 23898 bytes, checksum: e363e809996cf46ada20da1accfcd9c7 (MD5) Tese_AvaliacaoAtividadeGonadal.pdf: 3734747 bytes, checksum: c8292253197827b92c34de2888dee135 (MD5) / Made available in DSpace on 2013-11-19T16:25:51Z (GMT). No. of bitstreams: 2 license_rdf: 23898 bytes, checksum: e363e809996cf46ada20da1accfcd9c7 (MD5) Tese_AvaliacaoAtividadeGonadal.pdf: 3734747 bytes, checksum: c8292253197827b92c34de2888dee135 (MD5) Previous issue date: 2006 / Fêmeas e machos adultos de P. squamosissimus (Pisces, Teleostei, Sciaenidae) foram coletados mensalmente no Rio Pará, que banha a ilha do Capim (PA) (S 010 34. 971`; W 0480 52.932`), durante o período de fevereiro de 2004 a fevereiro de 2005, correspondendo ao total de 234 espécimes. As gônadas foram coletadas, fixadas e processadas de acordo com os métodos usuais utilizados para processamento em parafina e análise em microscopia de luz. A espécie em estudo é uma das principais fontes de proteína animal para a população local, sendo capturada de forma intensa e ininterrupta ao longo do ano. Com base em informações dos pescadores locais, essa captura parece estar determinando uma aparente diminuição quantitativa e qualitativa em seus estoques locais. A espécie apresenta desova parcelada e o desenvolvimento gonadal foi caracterizado nos estádios de repouso, maturação, maduro e esvaziado ou semi-esvaziado. Gônadas maduras foram encontradas nos meses de dezembro, janeiro e julho. A análise de correlação entre o estádio gonadal maduro e a variação temporal da relação gonadossomática (ΔRGS) indica também a ocorrência de desova nos respectivos meses. Não obstante, as informações obtidas da correlação entre a ΔRGS e a média de oócitos maduros e percentual de espermatozóides por túbulo seminífero, respectivamente, também indicaram haver desova nos respectivos meses, sendo que aparentemente a espécie apresenta uma desova mais intensa ou desova principal entre os meses de dezembro e janeiro (inverno), e outra desova menos intensa ou secundária no mês de julho (verão). Com base no método da morfologia tubular, foram determinados oito estádios do ciclo do epitélio seminífero (CES), sendo que no estádio 1 os túbulos seminíferos são compostos por espermatogônias primárias e cistos de spermatogônias secundárias; o estádio 2 é composto por espermatogônias primárias e secundárias e cistos de espermatócitos; estádio 3 é caracterizado por espermatogônias primárias, secundárias, cistos de espermatócitos e de espermátides jovens ou recém-formadas; estádio 4 com túbulos seminíferos caracterizados pela presença de espermatogônias primárias e secundárias, espermatócitos e por cistos de espermátides jovens e tardias; estádio 5 apresenta todas as células anteriores e é marcado pelo surgimento de espermatozóides no lúmen tubular; estádio 6 tem como características a diminuição dos cistos de células germinativas e considerável aumento do número de espermatozóides no lúmen tubular; os túbulos seminíferos no estádio 7 contêm poucos cistos de células germinativas e se inicia o esvaziamento da massa de espermatozóides do lúmen tubular; estádio 8 é o último do CES e é caracterizado pela aparente desorganização dos cistos remanescentes de células germinativas no túbulo seminífero. / Male and female adults of P. squamosissimus (Pisces, Teleostei, Sciaenidae) were collected monthly in the Para River that surrounds Capim insland, state of Para (S 010 34. 971` ; W 0480 52.932`), during the month of february 2004 to february 2005, having 234 specimes. The gonads were collected, mounted and processed in accordance with the standard methods of paraffin and analysis using a light microscope. The species under analysis is one of the principal sources of animal protein for the local population, fishing being uninterrupted and intensive throughout the year based on information given by local fisherman, the collection process appears to be determined by an apparent qualiquantitative reduction in local stock. The species represents spawn divisions, the gonad development was characterized in state of repose, maturation, mature and empty or half-empty. Mature gonads were found on the months of december, january and july. Correlation analysis between the maturing state of gonads, seasonal variations in relation to gonadosomatic indexes (GSI) and also the occurrence of spawn in the respective months. Nevertheless, the information obtained in correlation to GSI and mature oocyte mediums and between spermatozoa percentages by seminiferous tubule, respectively, also indicate spawning in the respective months, and apparently that the species represents a more intensive spawning period or a primary spawning period between the months of december and january, and a second or less intensive spawning period in the months of july. Based on the tubular morphology method, eight of the seminiferous epithelium cycle stages (SEC) were determined, stage 1 being seminiferous tubule that are comprised of primary spermatogonia and cysts of the secondary spermatogonia; stage 2 is comprised of primary and seconday spermatogonia and spermatocytes cysts; stage 3 is characterized by primary and secondary spermatogonias, spermatocyte cysts and young spermatids; stage 4 with seminiferous tubule characterized by presence of spermatogonias primary and secondary, spermatocyte and by presence of young and later spermatids cysts; stage 5 represents all of the previously mentioned cells and is highlighted by presence of spermatozoa in the tubule lumen; stage 6 is characterized by reduction of cysts of germinative cells and a considerable increase in number of spermatozoa in the tubular lumen; stage 7 is characterized by seminiferous tubule that contain few cysts of germinative cells and is marked by the begining of a mass emptying of spermatozoa of the tubule lume; stage 8 is the last of the SEC and is characterized by the apparent disorganization of the remaining germinative cellular cysts in the seminiferous tubule.

Submitted by Edisangela Bastos (edisangela@ufpa.br) on 2014-07-02T19:16:11Z No. of bitstreams: 2 license_rdf: 23898 bytes, checksum: e363e809996cf46ada20da1accfcd9c7 (MD5) Dissertacao_AvaliacaoHistologicaOvario.pdf: 989364 bytes, checksum: 7d0257e1548062a6de172bd6487b6587 (MD5) / Approved for entry into archive by Ana Rosa Silva (arosa@ufpa.br) on 2014-07-17T14:57:06Z (GMT) No. of bitstreams: 2 license_rdf: 23898 bytes, checksum: e363e809996cf46ada20da1accfcd9c7 (MD5) Dissertacao_AvaliacaoHistologicaOvario.pdf: 989364 bytes, checksum: 7d0257e1548062a6de172bd6487b6587 (MD5) / Made available in DSpace on 2014-07-17T14:57:06Z (GMT). No. of bitstreams: 2 license_rdf: 23898 bytes, checksum: e363e809996cf46ada20da1accfcd9c7 (MD5) Dissertacao_AvaliacaoHistologicaOvario.pdf: 989364 bytes, checksum: 7d0257e1548062a6de172bd6487b6587 (MD5) Previous issue date: 2007 / CNPq - Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e Tecnológico / SECTAM/PA - Secretaria Executiva de Ciência, Tecnologia e Meio Ambiente / FADESP - Fundação de Amparo e Desenvolvimento da Pesquisa / O objetivo deste estudo foi de avaliar os aspectos morfométricos e histológicos do ovário de caititu (Tayassu tajacu) durante duas fases do ciclo estral, e obter dados a respeito da população folicular ovariana. O estudo foi realizado no campo experimental Embrapa- Amazônia Oriental (Belém, Pará). Ovários de seis fêmeas adultas de caititu foram obtidos através de ovariectomia para posteriormente processamento histológico. Os mesmos foram fixados em Bouin, seccionados obtendo cortes de 7 μm de espessura e corados com Hematoxilina e Eosina. Os folículos pré-antrais foram classificados em folículo primordial, primário e secundário. Os folículos antrais foram caracterizados pela presença da cavidade antral. O número de folículos pré-antrais e antrais por ovário foi estimado usando o Fractionator Method. Para análise qualitativa, todos os folículos foram classificados em normais ou degenerados. O diâmetro do folículo, do oócito e de seu núcleo e da camada da granulosa, exceto do folículo antral, foi medido utilizando uma ocular micrométrica para acompanhar o desenvolvimento folicular. Todos os resultados foram representados como média ± desvio padrão. Os resultados revelaram diferenças entre as categorias de folículos pré-antrais nos ovários direito e esquerdo. A média numérica de folículos pré-antrais presentes foi maior no ovário esquerdo e na fase folicular do ciclo estral. Folículos primordiais foram encontrados no córtex com uma única camada de células foliculares de formato pavimentoso, envolvendo o oócito esférico. Nos folículos primários, foi observado a proliferação de células pavimentosas e/ou cúbicas formando mais de uma camada envolvendo o oócito. Folículos secundários apresentaram-se constituídos de duas ou mais camadas concêntricas de células cuboidais. A zona pelúcida e as células imaturas da teca foram primeiramente localizadas em folículos secundários. Folículos antrais foram caracterizados pela presença da cavidade antral, pela projeção do cumulus oophorus no interior do antro, envolvendo o oócito e pela divisão da teca interna e teca externa. O número médio de folículos primordiais e primários normais foi significativo (p<0,05) quando comparado ao número médio de folículos degenerados. As mudanças nos diâmetros observados podem ser utilizadas, possivelmente, como um parâmetro na classificação das diferentes categorias foliculares. / As recentes restrições ao uso de antibióticos melhoradores do desempenho na produção de frangos de cortes têm incentivado a busca por aditivos alternativos. Entre os produtos naturais, o óleo de copaíba tem uma grande representação social e econômica, especialmente na região amazônica, onde é nativo e largamente empregado. Os objetivos deste estudo foram avaliar os efeitos da inclusão do óleo de Copaíba (Copaifera reticulata), sobre o desempenho produtivo de frangos de corte. Foram utilizados 540 pintos com um dia de idade, machos de linhagem comercial Ross, distribuídos em cinco tratamentos e seis repetições com 15 aves em cada unidade experimental. Os tratamentos foram definidos pela inclusão do promotor de crescimento (avilamicina, 10ppm) e do nível do óleo essencial na dieta, sendo caracterizados como: T1: Óleo essencial 0,15% (sem promotor de crescimento); T2: Óleo essencial 0,30% (sem promotor de crescimento); T3: Óleo essencial 0,45% (sem promotor de crescimento); T4: Óleo essencial 0,60% (sem promotor de crescimento) e T5: Controle promotor de crescimento: virginiamicina, 10ppm (sem óleo essencial). Os resultados foram analisados com o auxílio do programa computacional Statistical Analysis System (SAS, 2001) e as diferenças entre as médias foram analisadas pelo teste Dunnet, a um nível de significância de 5%. Os dados de desempenho do 7 e 35 dias de idade mostraram que não houve diferença estatística entre os tratamentos para as variáveis peso corporal, consumo de ração, conversão alimentar e mortalidade. Aos 21 e 40 dias de idade das aves houve diferença significativa para a variável peso corporal. As demais variáveis estudadas (consumo de ração, conversão alimentar e mortalidade) não apresentaram diferenças significativas quando comparada ao tratamento controle (T5). Apenas o tratamento com a inclusão na dieta de 0,15% de óleo de copaíba (T1) foi semelhante estatisticamente com o tratamento controle. Não foi observado efeito significativo dos tratamentos sobre as características de carcaça dos frangos estudados. A utilização de óleo essencial de copaíba a 0,15% na dieta de frangos de corte proporcionou desempenho semelhante à dieta controle para as diferentes variáveis de desempenho e características de carcaça avaliada neste estudo, representando uma alternativa promissora como aditivo promotor de crescimento. / The aim of this study was to evaluate the morphometric and histological aspects the ovary the collared peccary (Tayassu tajacu), and to obtain data about the follicular ovarian population. The study was conducted on the experimental farm of EMBRAPA-UFPA, Belem do Para (Brazil). Ovaries from six adult females of collared peccary were obtained through ovariectomy. The ovaries were fixed in Bouin, sectioned serially at a thickness of 7 μm and stained with hematoxylin and eosin. The preantral follicles were classified into primordial, primary and secondary follicles. Antral follicles were characterized those that presented an antral cavity. The number of preantral and antral follicles for ovary was estimated using the Fractionator Method. All counted follicles were classified as normal or degenerated. The diameter of the follicles, oocytes and nuclei, and layer of granulosa cells were made using a micrometric ocular for to accompany the follicular development. All results were represented as mean ±SE. The variation in the categories of preantral follicles of both the right and left ovaries was observad. The mean number of preantral follicles present was higher in the left ovary and follicular phase of the oestrous cycle. Primordial follicle were found in the cortex, a singler layer of flattened squamous follicular cells, enveloped the spherical oocyte. Primary follicles of the proliferation of the flattened follicular cells surrounding the oocyte gave rise to their flattened squamous and/or cuboidal shape. The secondary follicles were characterized that possess two or more concentric layers of cuboidal cells. The pellucid zone and immature theca cells was first localized in the secondary follicles. Antral follicles were characterized by a central cavity, the cumulus oophorus projected into the antrum and surrounded the oocyte, and divided into the theca interna and theca externa. The mean of normal follicles was significantly greater than the mean of degenerate follicles in categories of primordial and primary follicles. The changes in the diameters observed that is possible to use it to aid in the classification of the different follicular categories. All results were represented as mean ±SE. The variation in the categories of preantral follicles of the right and left ovaries was observed (p<0,05). The mean number of preantral follicles present was higher in the left ovary and follicular phase of the oestrous cycle. Primordial follicle were found in the cortex, a singler layer of flattened squamous follicular cells, enveloped the spherical oocyte. Primary follicles of the proliferation of the flattened follicular cells surrounding the oocyte gave rise to their flattened squamous and/or cuboidal shape. The secondary follicles were characterized that possess two or more concentric layers of cuboidal cells. The pellucid zone and immature theca cells was first localized in the secondary follicles. Antral follicles were characterized by a central cavity, the cumulus oophorus projected into the antrum and surrounded the oocyte, and divided into the theca interna and theca externa. The mean of normal follicles was significantly greater (p<0,05) than the mean of degenerate follicles in categories of primordial and primary follicles. The changes in the diameters observed that is possible to use it to aid in the classification of the different follicular categories.

Submitted by Cássio da Cruz Nogueira (cassionogueirakk@gmail.com) on 2017-09-27T15:09:32Z No. of bitstreams: 2 license_rdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5) Dissertacao_EquinococoseNeotropicialEstudo.pdf: 5301692 bytes, checksum: c12c84566fbf92aee7c2ba3e8e0c7c27 (MD5) / Approved for entry into archive by Irvana Coutinho (irvana@ufpa.br) on 2017-09-28T14:11:44Z (GMT) No. of bitstreams: 2 license_rdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5) Dissertacao_EquinococoseNeotropicialEstudo.pdf: 5301692 bytes, checksum: c12c84566fbf92aee7c2ba3e8e0c7c27 (MD5) / Made available in DSpace on 2017-09-28T14:11:44Z (GMT). No. of bitstreams: 2 license_rdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5) Dissertacao_EquinococoseNeotropicialEstudo.pdf: 5301692 bytes, checksum: c12c84566fbf92aee7c2ba3e8e0c7c27 (MD5) Previous issue date: 2012 / Equinococose é uma doença parasitária causada por helmintos do gênero Echinococcus, que podem ser encontrados no intestino de diversos carnívoros silvestres e domésticos. O homem comporta-se como hospedeiro acidental adquirindo a infecção por via oral através da ingestão acidental de ovos de vermes adultos. Após deglutidos e com a liberação do embrião, este aloja-se comumente em órgãos como fígado e pulmão produzindo uma doença de evolução lenta e sintomatologia que assemelha-se a doenças neoplásicas. O Estado do Pará apesar da subnotificação apresenta uma casuística significativa desta rara enfermidade, associada na região ao Echinococcus vogeli. O estudo descreve seis novos casos, cinco localizados no fígado e um no pulmão utilizando microscopia de luz, caracterizando quanto ao tipo de infiltrado inflamatório e componentes celulares presentes. Observou-se fibrose, reação giganto celular, deposição de cálcio e a membrana laminar com seu aspecto cerebroide. Não foram vistos ganchos rostelares. A membrana laminar, não possibilita caracterizar a espécie, mas permite considerar como sendo um parasita do gênero Echinococcus . Ainda que a casuística seja pequena, não permitindo uma análise estatística notam-se achados que justificam uma doença de evolução crônica. Mais estudos como este, que ampliem a casuística são importantes já que a equinococose é uma doença neglicenciada. / Equinococcosis is a disease caused by cestodes of the Echinococcus genus, that can be found at the small intestin of animals like bush-dog and domestic dog. Men behave as an accidental host by the ingestion of eggs of the parasite. The larval forms mainly develop at the liver, and sometimes at the lung, causing a cronic diesease that can be easily mistaken by neoplasias. At the State of Pará, North Brazil, there is a great number of cases of this rare diesease, related to Echinococcus vogeli in the Amazon.This study describes six new cases, five in the the liver, and one at the lung, making description a about the kind of inflammatory cells. Fibrosis, giant-cells, calcification and the laminated layer with the typical cerebroid pattern. Rostellar hooklets did not were found. The laminated layer, is not enough to describe the species of Echinococcus, but allows to consider that the worm´s gender is Echinococcus. Even though the number of cases is too small for a statistical analysis, were observed cells that can justify why the disease has a cronic evolution. More works like this, adding more cases are important, because equinococcosis is a neglected diesese.

Submitted by Cássio da Cruz Nogueira (cassionogueirakk@gmail.com) on 2017-05-15T11:33:59Z No. of bitstreams: 2 license_rdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5) Dissertacao_MorfologiaEpidimariaCaititus.pdf: 2391119 bytes, checksum: 78e310d4a4b4a070a932332aad609056 (MD5) / Approved for entry into archive by Edisangela Bastos (edisangela@ufpa.br) on 2017-05-16T17:51:27Z (GMT) No. of bitstreams: 2 license_rdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5) Dissertacao_MorfologiaEpidimariaCaititus.pdf: 2391119 bytes, checksum: 78e310d4a4b4a070a932332aad609056 (MD5) / Made available in DSpace on 2017-05-16T17:51:27Z (GMT). No. of bitstreams: 2 license_rdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5) Dissertacao_MorfologiaEpidimariaCaititus.pdf: 2391119 bytes, checksum: 78e310d4a4b4a070a932332aad609056 (MD5) Previous issue date: 2015-05-28 / CAPES - Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior / O presente trabalho visou estudar os aspectos histológicos epidídimo de caititus (Pecari tajacu) e as patologias espermáticas associadas às diferentes regiões desse órgão. Fato que contribuirá para o melhor entendimento da biologia reprodutiva da espécie, e consequentemente para a sua conservação. Foram utilizados oito animais adultos, na faixa etária de dois a quatro anos, procedentes do criatório de pesquisas científicas da Embrapa-Amazônia Oriental, localizado em Belém, Pará, Brasil. Cada uma das quatro partes do epidídimo (cabeça proximal, cabeça distal, corpo e cauda) foi dividida em duas porções, sendo que uma das porções foi macerada, enquanto a outra permaneceu intacta. A cauda do epidídimo foi submetida à técnica de fluxo retrógado. As amostras celulares foram armazenadas em formol salino, sendo utilizadas posteriormente para a análise de morfologia espermática. As amostras do órgão foram embaladas em gaze, identificadas e fixadas em ALFAC. Posteriormente, foram submetidas ao processamento histológico de rotina. Foram mensurados os diâmetros de até 20 túbulos e as alturas do epitélio de até 30 túbulos, de cada região do epidídimo, por animal. O teste ANOVA (One Way), apontou diferenças entre o diâmetro do túbulo da cabeça proximal e da cabeça distal (p=0,0008); entre a cabeça proximal e o corpo (p=0,0009); entre a cabeça proximal e a cauda (p=0,0002). Não houve diferenças significativas (p>0,05) entre as demais partes do epidídimo. Foi verificado que a cabeça proximal apresenta a média de diâmetro dos túbulos menor em relação às demais porções do epidídimo. O teste de Newman Keuls apontou semelhanças entre a média da altura do epitélio do corpo e da cauda (p=0,551). Todavia, foram observadas diferenças significativas entre a cabeça distal e a cabeça proximal (p=0,0009); a cabeça distal e a cauda (p=0,0055); cabeça distal e corpo (p=0,0021); cabeça proximal e corpo (p=0,0008); cabeça proximal e cauda (p = 0,0055). Em todas as regiões do epidídimo de caititu, foi observada a presença de epitélio pseudoestratificado colunar com estereocílios. Foram observadas 13 tipos diferentes de alterações morfológicas, sendo que espermatozoides subdesenvolvidos e cabeças soltas foram as mais frequentes ao longo do epidídimo de caititus. Não foram observadas diferenças em relação ao número de patologias nas diferentes regiões do epidídimo, (teste de Man-Whitney) (cabeça proximal: U=19,500; p=0,189; cabeça distal: U= 31,500; p=0,958; corpo: U=27,000; p=0,599 e cauda: U=20,00; p=0,207). Em muitas espécies as análises histopatológicas são frequentemente estudadas, todavia em animais silvestres, como o caititu, ainda são pouco pesquisadas. Dessa forma, os dados deste trabalho são pioneiros, e servirão como base para futuras pesquisas comparativas sobre a biologia reprodutiva dos artiodátilos, contribuindo para a sua conservação e produção. / This work aimed to study the histology of epididymis peccaries (Pecari tajacu) and sperm pathologies associated with different regions of the organ. A fact that will contribute to a better understanding of the reproductive biology of the species, and consequently for their conservation. Eight adult animals were used, aged two to four years, coming from breeding scientific research of Embrapa Amazônia Oriental, located in Belém, Pará, Brazil. Each of the four parts of the epididymis (proximal the head and distal the head, body and tail) was divided into two portions, and one of the portions was macerated, while the other remained intact. The epididymal tail underwent retrograde flow technique. The cell samples were stored in formol saline, and then used for the analysis of sperm morphology. Samples of the body were wrapped in gauze, identified and fixed in ALFAC. Later, they were submitted to routine histological processing. Diameters were measured up to 20 tubules and the heights of up to 30 tubules epithelium, the epididymis of each region for each animal. ANOVA (One Way), pointed out differences between the diameter of the proximal tubule of the head and distal head (p = 0.0008); between the proximal head and the body (p = 0.0009); between the proximal head and the tail (p = 0.0002). There were no significant differences (p> 0.05) among the other parts of the epididymis. It was found that the proximal head has a diameter of less tubules average compared to other portions of the epididymis. The Newman Keuls test showed similarities between the average body epithelium height and tail (p = 0.551). However, significant differences were observed between the distal head and the proximal head (p = 0.0009); the distal head and the tail (p = 0.0055); distal head and body (p = 0.0021); proximal head and body (p = 0.0008); proximal head and tail (p = 0.0055). In all regions of the epididymis of peccary, it observed the presence of pseudostratified columnar epithelium with stereocilia. 13 different types of morphological changes were found, and underdeveloped sperm and loose heads were the most frequent along the epididymis of peccaries. There were no differences in the number of pathologies in different regions of the epididymis (Man-Whitney test) (proximal head: U = 19.500, p = 0.189; distal head: U = 31.500, p = 0.958; body: U = 27,000; p = 0.599 and tail: U = 20.000, p = 0.207). In many species the histopathological analysis are often studied, however in wild animals, such as peccary, are still poorly researched. Thus, this study data are pioneers, and will serve as a basis for future comparative research on the reproductive biology of artiodactyls, contributing to their conservation and production.

Submitted by Daniele Amaral (daniee_ni@hotmail.com) on 2016-09-21T20:30:20Z No. of bitstreams: 1 TeseHWK.pdf: 5259387 bytes, checksum: 72d4bd1fcb3174ede9d168165f46252a (MD5) / Approved for entry into archive by Ronildo Prado (ronisp@ufscar.br) on 2016-09-28T19:23:02Z (GMT) No. of bitstreams: 1 TeseHWK.pdf: 5259387 bytes, checksum: 72d4bd1fcb3174ede9d168165f46252a (MD5) / Approved for entry into archive by Ronildo Prado (ronisp@ufscar.br) on 2016-09-28T19:23:12Z (GMT) No. of bitstreams: 1 TeseHWK.pdf: 5259387 bytes, checksum: 72d4bd1fcb3174ede9d168165f46252a (MD5) / Made available in DSpace on 2016-09-28T19:28:30Z (GMT). No. of bitstreams: 1 TeseHWK.pdf: 5259387 bytes, checksum: 72d4bd1fcb3174ede9d168165f46252a (MD5) Previous issue date: 2015-03-26 / Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de São Paulo (FAPESP) / The present study aimed to evaluate the effect of two different Biosilicate® (P2O5-Na2O-CaO-SiO2 system) presentations - highly porous scaffold and composite material – on a tibial bone defect model in rats. Two studies were performed; the first one aimed at evaluating the effect of highly porous scaffolds on bone regeneration using histopathological analysis, immunohistochemistry and immunoenzymatic assay. In this study, 80 male Wistar rats (12 weeks old and body weight of approximately 300 g) were divided in two groups (control and Biosilicate®) and euthanized after 3, 7, 14 and 21 days post-surgery. The histopathological evaluation revealed that both groups presented similar inflammatory responses after 3 and 7 days. At all time points, the scaffold degradation was observed, mainly in the border of the material, allowing the ingrowth of newly formed bone. The immunohistochemical analysis showed that the Biosilicate® scaffolds induced the synthesis of (i) ciclooxigenase 2 (COX-2), (ii) vascular endothelial growth factor (VEGF) and (iii) runt-related transcription factor 2 (RUNX-2). Additionally, the immunoenzymatic assay indicated that the Biosilicate® group did not presented significant statistical difference in the levels of tumor necrosis factor alpha (TNF-α) in all evaluated periods compared to the control group. In addition, the Biosilicate® group presented a higher concentration of interleukin 4 (IL-4) at day 14 and a lower concentration of interleukin 10 (IL-10) 21 days after the surgery when compared to the control group. The second study aimed at investigating the effects of Biosilicate®/poly lactic-co-glycolic acid (PLGA) composites on the process of bone repair using histopathological, morphometric, immunohistochemical and gene expression (Real-Time PCR, qRT-PCR) analyses. In this study, 80 male Wistar rats were distributed in two groups (Biosilicate® and Biosilicate®/PLGA) and euthanized 3, 7, 14 and 21 days after the material implantation. The main findings showed that the incorporation of PLGA into the Biosilicate® had a significant effect in the material morphological structure, leading to a pH decrease and accelerating the mass loss upon incubation in phosphate buffered saline (PBS). Moreover, the histological evaluation revealed that the Biosilicate®/PLGA group presented a higher material degradation accompanied by a higher bone formation when compared to the plain Biosilicate® after 21 days. The immunohistochemical analysis did not show any difference in the immunolabeling for Runx2, RANKL and OPG between Biosilicate® and Biosilicate®/PLGA. In addition, the qRT-PCR indicated that the Biosilicate®/PLGA induced the osteogenic gene expressions (bone morphogenetic protein 4, Runtrelated transcription factor 2 and osteocalcin) at 21 day after surgery. The results evidenced by the present studies suggest that both materials (highly porous Biosilicate® scaffolds and Biosilicate®/PLGA composites) were effective in inducing the repair of tibial bone defects in rats, demonstrating that these materials are promising alternatives for treating bone fractures. / O presente estudo teve como objetivo principal avaliar a ação de duas diferentes apresentações (scaffold altamente poroso ou compósito contendo PLGA) de uma vitrocerâmica bioativa do sistema quaternário P2O5-Na2O-CaO-SiO2 (Biosilicato®) sobre o processo de reparação óssea em um modelo de defeito ósseo tibial em ratos. Para isto, foram realizados dois estudos, sendo que o primeiro teve como objetivo avaliar os efeitos dos scaffolds altamente porosos de Biosilicato® sobre o processo de regeneração óssea por meio da avaliação histopatológica, imunohistoquímica e ensaio imunoenzimático. Neste estudo, 80 ratos machos Wistar (12 semanas de idade e peso corporal de aproximadamente 300 g) foram divididos em dois grupos (controle e Biosilicato®) e eutanasiados após 3, 7, 14 e 21 dias do procedimento cirúrgico. A avalição histopatológica revelou que ambos os grupos apresentaram uma resposta inflamatória similar no período de 3 e 7 dias após a cirurgia. Durante todos os períodos experimentais, a degradação dos scaffolds de Biosilicato® foi observada principalmente na região periférica do material, o que possibilitou o desenvolvimento do tecido ósseo neoformado para o interior destes materiais. A Análise imunohistoquímica demonstrou que os scaffolds de Biosilicato® estimularam a síntese da ciclooxigenase 2 (COX-2), fator de crescimento endotelial vascular (VEGF) e fator de transcrição relacionado a runt-2 (Runx2). Além disso, o ensaio imunoenzimático revelou que o grupo Biosilicato® não apresentou diferença estatística significativa nos níveis do fator de necrose tumoral alfa (TNF-α) em todos os períodos avaliados quando comparado ao grupo controle. Ainda, o grupo Biosilicato® apresentou uma maior concentração da interleucina 4 (IL-4) 14 dias e uma menor concentração da interleucina 10 (IL-10) 21 dias após a cirurgia, quando comparado ao grupo controle. O segundo estudo teve como objetivo investigar os efeitos do compósito de Biosilicato® e ácido poli-láctico-co-glicólico (PLGA) sobre o processo de reparo ósseo através das análises histopatológica, morfomética, imunohistoquímica e de expressão gênica (PCR em tempo real, qRT-PCR). Neste estudo, 80 ratos machos Wistar foram distribuídos em dois grupos (Biosilicato® e Biosilicato®/PLGA) e eutanaziados após 3, 7, 14 e 21 dias do processo de implantação dos materiais. Os achados principais mostraram que a incorporação do PLGA na vitrocerâmica Biosilicato® teve um efeito significativo na estrutura morfológica do material, levando a diminuição do pH e acelerando a perda de massa após incubação do material em solução tampão fosfato (PBS). Além disso, a avaliação histológica revelou que o grupo Biosilicato®/PLGA apresentou uma maior degradação do material, acompanhada pela maior formação de osso quando comparado ao grupo somente com Biosilicato® no período de 21 dias. Na analise imunohistoquímica nenhuma diferença na imunomarcação de Runx2, receptor ativador do ligante nuclear fator kappa-B e osteoprotegerina foram observadas entre o grupo Biosilicato® e Biosilicato®/PLGA. Ainda, a análise de qRT-PCR demonstrou que o grupo Biosilicato®/PLGA induziu a expressão de genes osteogênicos (proteína morfogenética óssea 4, fator de transcrição relacionado a runt-2, e osteocalcina) 21 dias após cirurgia. Diante dos resultados encontrados nos dois estudos, é possível concluir que ambos os materiais utilizados neste estudo, scaffold de Biosilicato® altamente poroso e compósito de Biosilicato® e PLGA, foram eficazes em estimular o reparo de um defeito ósseo tibial em ratos, demonstrando serem alternativas promissoras para tratamento de fraturas ósseas.

Submitted by Hellen Luz (hellencrisluz@gmail.com) on 2017-09-21T16:23:57Z No. of bitstreams: 2 license_rdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5) Dissertacao_InibicaoNitrergicaLocal.pdf: 1790723 bytes, checksum: 5ed20bd490d92e565a6c597c03db4c77 (MD5) / Rejected by Edisangela Bastos (edisangela@ufpa.br), reason: on 2017-10-10T17:00:33Z (GMT) / Submitted by Hellen Luz (hellencrisluz@gmail.com) on 2017-10-17T18:25:37Z No. of bitstreams: 2 license_rdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5) Dissertacao_InibicaoNitrergicaLocal.pdf: 1790723 bytes, checksum: 5ed20bd490d92e565a6c597c03db4c77 (MD5) / Approved for entry into archive by Edisangela Bastos (edisangela@ufpa.br) on 2017-11-24T14:43:47Z (GMT) No. of bitstreams: 2 license_rdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5) Dissertacao_InibicaoNitrergicaLocal.pdf: 1790723 bytes, checksum: 5ed20bd490d92e565a6c597c03db4c77 (MD5) / Made available in DSpace on 2017-11-24T14:43:48Z (GMT). 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Nesse contexto, a proposta do trabalho é averiguar a influência do sistema nitrérgico local na recuperação histológica e funcional do tendão. Para isso, o trabalho conta com o modelo experimental de ruptura do tendão de Aquiles, possibilitando instaurar um quadro de tendinopatia crônica nos animais. O acompanhamento dos grupos controle, ruptura+veículo (Salina 0,9%), ruptura+L-nitro-arginina-metil-éster (LNAME, 5mM) e ruptura+nitroprussiato de sódio (SNP, 3mM) prosseguiram até o 21° dia, estipulado para a coleta de amostras. A fim de avaliar a produção de óxido nítrico, o método de dosagem de Griess foi usado. Os parâmetros funcionais foram caracterizados pelo índice funcional de Aquiles (IFA), obtidos em 0, 7, 14 e 21 dias. Amostras também foram reservadas para processamento histomorfológico e autofluorescência. O ganho de massa corporal também foi avaliado. Conseguimos caracterizar o efeito das drogas no tecido sem fortes influências sistêmicas pela manutenção do peso corporal e níveis de nitrito plasmático. O L-NAME gerou uma significativa redução na densidade celular, inibiu a formação de vasos entre a malha colágena, melhorou a organização tecidual e restabeleceu precocemente o padrão funcional em 21 dias após a injúria. Por outro lado, os tratamentos com SNP e veículo mantiveram a desorganização do tecido e desempenho funcional insatisfatório. Juntos, nossos resultados sugerem um efeito benéfico da inibição local da NOS após a ruptura para a remodelagem tecidual, contribuindo para a regeneração do tendão. / The tendon injuries prevalence has been increased usually by repetitive movements in the occupational and recreational activities of society. The main features this injury involve healing dysfunction and loss of extracellular matrix. At this tissue, the extracellular matrix is basically made of type I collagen and the loss of this protein associated with problems in the remodeling have been considered the major responsible for the symptomatic and functional effects of injury. Additionally the literature reports the nitric oxide synthase expression was up-regulated throughout the repair process. At this context the propose of this work is investigated the nitrergic local inhibition in tissue and functional recovery after tendon injury. We used a experimental model of Achilles tendon rupture for establish pathophysiological changes similar to chronic tendinopathy. The animals were divided into experimental groups control, injury+vehicle (saline, 0,9%), injury+L- Nω-nitro-L-arginine methyl ester (L-NAME, 5mM) and injury+sodium nitroprusside (SNP, 3mM), which were followed until the 21º day, when were killed to collect samples. In order to access nitric oxide production Griess nitrite assay was used. Functional recovery was calculated by Achilles Functional Index (AFI) in 0, 7, 14 and 21 days. Tendons were also processed for histomorphological and autofluorescence analysis. The body weight gain was also evaluated. We characterized the effect of drugs about tissue without stronger systemic influences by maintenance of body weight and plasmatic levels of nitrite. The L-NAME led to significant decrease in the cellular density, vessel formation between collagen network, accelerated the tissue organization and restored early the functional pattern at 21 days after injury. On the other hand, the treatment with SNP and vehicle remained the tissue disorganization and low functional performance. Taken together our results suggest a positive effect of local suppression of NOS after rupture for tissue remodeling, contributing to tendon regeneration.

Submitted by Cássio da Cruz Nogueira (cassionogueirakk@gmail.com) on 2017-03-22T12:48:30Z No. of bitstreams: 2 license_rdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5) Tese_RegeneracaoTendineModelo.pdf: 5002611 bytes, checksum: 610099ff23155f2d7fd67af96fcab4b9 (MD5) / Approved for entry into archive by Edisangela Bastos (edisangela@ufpa.br) on 2017-03-27T12:23:29Z (GMT) No. of bitstreams: 2 license_rdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5) Tese_RegeneracaoTendineModelo.pdf: 5002611 bytes, checksum: 610099ff23155f2d7fd67af96fcab4b9 (MD5) / Made available in DSpace on 2017-03-27T12:23:29Z (GMT). No. of bitstreams: 2 license_rdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5) Tese_RegeneracaoTendineModelo.pdf: 5002611 bytes, checksum: 610099ff23155f2d7fd67af96fcab4b9 (MD5) Previous issue date: 2015-08-10 / CAPES - Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior / CNPq - Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e Tecnológico / FAPESPA - Fundação Amazônia de Amparo a Estudos e Pesquisas / As lesões tendíneas causam forte impacto sobre as pessoas em decorrência da dor e limitação funcional dela resultante. Após a lesão, o tecido passa a apresentar uma rede de nervos. Adicionalmente, há indícios da ocorrência de plasticidade central na medula após a lesão. Dentre os fatores moleculares envolvidos no reparo da lesão, o óxido nítrico (NO) é implicado na remodelagem tecidual, contudo seus efeitos ainda não são bem compreendidos. A proposta deste estudo é averiguar a existência de plasticidade central e a influência do NO na plasticidade periférica, limitação funcional e regeneração tendínea em modelo murino. Para estudar os efeitos do NO na plasticidade periférica, utilizamos animais controle (CTRL, sem lesão) ou tratados com salina (SAL, NaCl 0,9%), L-nitro-arginina-metil-éster (L-NAME, inibidor da síntese de NO) ou nitroprussiato de sódio (SNP, doador de NO) em dias alternados até o 21º dia pós-lesão (DPL). Para avaliar a ocorrência de plasticidade central (segmento L5), apenas a lesão foi realizada e a medula coletada em 2 ou 21 DPL. Analisamos a integridade e a organização tecidual nas amostras de tendão por H&E, microscopia eletrônica de transmissão e imunofluorescência, que também foi usada para avaliar a plasticidade periférica. Para verificar a recuperação funcional do tendão, determinamos o índice funcional de Aquiles, o ângulo articular e o campo aberto. No estudo da medula espinhal, investigamos a reatividade glial e o envolvimento neuronal após a injúria através de colocalizações com o indicador de ativação celular c-Fos. Os achados desta pesquisa mostram que a inibição do NO promove a organização tecidual em associação ao aumento da síntese, secreção e deposição de colágeno. Além disso, a administração local de L-NAME parece favorecer a diferenciação celular para tipos morfológicos análogos a tenócitos e melhorar a organização de ramos nervosos por dentre a malha de colágeno em correlação com a recuperação funcional em 21 DPL. Por outro lado, o aumento nos níveis de NO através de SNP promoveu uma piora em quase todos os parâmetros analisados. Nossos dados mostram ainda que a injúria tendínea desencadeia um processo de plasticidade central com aumento da reatividade glial em 2 DPL e da ativação celular ipsilateral à lesão em 2 e 21 DPL. Em suma, nossos achados indicam a ocorrência de plasticidade central após a lesão tendínea e o favorecimento do reparo tecidual e da plasticidade periférica através do bloqueio nitrérgico, revelando aspectos fundamentais da recuperação tecidual que podem representar novos alvos para uma nova abordagem terapêutica em lesões tendíneas. / Tendon injuries cause strong impact on people due to pain and functional limitation resulting therefrom. After injury, the tissue starts to present a network of nerves. Furthermore, there is evidence for the occurrence of central plasticity after injury. Among the molecular factors involved in injury repair, nitric oxide (NO) is implicated in tissue remodeling, but its effects are not yet well understood. The purpose of this study is to ascertain the existence of central plasticity and the influence of NO in peripheral plasticity, functional limitation and tendon regeneration in murine model. To study the effects of NO in peripheral plasticity, we used control animals (CTRL, without injury) or animals treated with saline (SAL, 0.9% NaCl), L-nitro-arginine-methyl-ester (L-NAME, NO-synthesis inhibitor) and sodium nitroprusside (SNP, NO donor) every other day until the 21st day post injury (DPI). To evaluate central plasticity (L5 segment), an injury was performed alone and the spinal cord collected at 2 or 21 DPI. We analyzed the integrity and tissue organization in tendon samples by H&E, transmission electron microscopy and immunofluorescence, which was also used to evaluate peripheral plasticity. To assess tendon functional recovery, we determined the Achilles functional index, the joint angle and the open field. In spinal cord studies, we investigated glial reactivity and neuron involvement after injury by co-localizations with the cell activation indicator c-Fos. The findings of this research show that NO inhibition promotes tissue organization in association to an increase in collagen synthesis, secretion and deposition. Besides, L-NAME local administration seems to favor cell differentiation to tenocyte-like morphological types and improve the organization of nerve branches in between the collagen mesh in correlation with functional recovery at 21 DPI. On the other hand, increased levels of NO by SNP promoted worsening in almost all parameters analyzed. Our data also show tendon injury triggers a central plasticity process with an increase in glial reactivity at 2 DPI and ipsilateral cell activation at 2 and 21 DPI. Afterall, our findings point out occurrence of central plasticity after tendon injury and favoring of tissue repair and peripheral plasticity through nitrergic blockage, unraveling fundamental aspects of tissue recovery that may represent new targets for a therapeutical approach in tendon injuries.

Submitted by Cássio da Cruz Nogueira (cassionogueirakk@gmail.com) on 2017-05-15T17:29:00Z No. of bitstreams: 2 license_rdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5) Dissertacao_CaracterizacaoEstruturalUltraestrutural.PDF: 855507 bytes, checksum: c7a91308a0fcd2fd22112a69f16c24c7 (MD5) / Approved for entry into archive by Edisangela Bastos (edisangela@ufpa.br) on 2017-05-19T13:10:27Z (GMT) No. of bitstreams: 2 license_rdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5) Dissertacao_CaracterizacaoEstruturalUltraestrutural.PDF: 855507 bytes, checksum: c7a91308a0fcd2fd22112a69f16c24c7 (MD5) / Made available in DSpace on 2017-05-19T13:10:27Z (GMT). No. of bitstreams: 2 license_rdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5) Dissertacao_CaracterizacaoEstruturalUltraestrutural.PDF: 855507 bytes, checksum: c7a91308a0fcd2fd22112a69f16c24c7 (MD5) Previous issue date: 2014-09-05 / CVRD - Companhia Vale do Rio Doce / FAPESPA - Fundação Amazônia de Amparo a Estudos e Pesquisas / FAPESP - Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de São Paulo / Hypophthalmus marginatus é um siluriforme, pertencente à família Pimelodidae. Na Amazônia oriental esta espécie é altamente consumida, e possui uma grande importância sócio-econômica para a região. Estudo da caracterização histológica do sistema reprodutivo ainda é desconhecido nesta espécie. Portanto, este estudo serve de ferramenta para as técnicas de biotecnologia, necessárias para a produção em cativeiro, visto que a espécie é um dos recursos pesqueiro mais explorado pela pesca artesanal. O objetivo do presente estudo foi estudar aspecto estrutural e ultraestrutural das células do epitélio germinativo de Hypophthalmus marginatus durante a espermatogênese. Foram capturados 168 espécimes no período entre dezembro de 2011 a dezembro de 2012. Macroscopicamente foram identificados 69 machos adultos, ainda em campo foi realizada uma incisão ventral e fragmentos da região mediana dos testículos e sêmen foram retirados e submetidos ao processamento e análise em microscopia de luz, microscopia eletrônica de transmissão e varredura. Os estudos evidenciaram que as células germinativas se proliferam no interior do cisto espermático de forma sincrônica. As espermátides entram no processo de espermiogênese passando por três fases distintas de diferenciação celular. O núcleo não se move em relação ao eixo flagelar e os centríolos não migram para o núcleo. Os espermatozóides liberados no lúmen do túbulo seminífero apresentaram uma cabeça esférica com o núcleo altamente condensado e sem acrossoma, a peça intermediária curta contendo um único flagelo longo com axonema apresentando o microtúbulo padrão (9+2), a fossa nuclear excêntrica alojava parcialmente o centríolo proximal. A presença de células espermatogênicas na mesma subfase da meiose no interior do cisto é caracterizada como espermatogênese cística, com desenvolvimento sincrônico das células, Isto sugere que espermiogênese de H. marginatus seja do tipo III e a presença da fossa nuclear é considerada uma característica distinta para a espécie, o que difere de outros pimelodideos. / Hypophthalmus marginatus is a siluriforme, belonging to the family Pimelodidae. This species is highly consumed in eastern Amazonia and has a wide socio-economic importance to the region. Studies on the histological characterization of the reproductive system are still unknown in this species. Therefore, this study serves as a tool for biotechnology techniques, necessary for the production in captivity, since this species is one of the fishing resource most intensively exploited by artisanal fisheries. The aim of this study was to characterize the structural and ultrastructural features of germinal epithelium cells of Hypophthalmus marginatus during spermatogenesis. 168 specimens were collected from December 2011 to December 2012. Macroscopically were identified 69 adult males. In field, ventral incision was held in fishes and fragments of testicles from the median region and semen were removed. Then the material was subjected to processing and analysis of light microscopy, transmission electron microscopy and scanning. The data revealed that the germ cells proliferate inside the spermatic cyst synchronously. Spermatids enter at the spermiogenesis process through three distinct stages of cell differentiation. The nucleus does not move relative to the axis flagellar and the centrioles don't migrate to the nucleus. The spermatozoids showed a spherical head with the highly condensed nucleus and no acrosome. The intermediary piece was short containing a single long flagellum. The axoneme presents the structure of microtubules within the pattern (9 + 2). The nuclear fossa housed the proximal centriole partially. The presence of spermatogenic cells in the same subphase of meiosis inside the cyst is characterized as cystic spermatogenesis, with synchronous growth of the cells. This suggests that spermiogenesis of H. marginatus is of type III and the presence of nuclear fossa is considered a distinctive feature for the species, which differs from other pimelodids.

Submitted by Cássio da Cruz Nogueira (cassionogueirakk@gmail.com) on 2017-05-15T17:31:45Z No. of bitstreams: 2 license_rdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5) Dissertacao_ExpressaoGenicaViabilidade.PDF: 2527584 bytes, checksum: a92c30bb13a081c6f66b18e729cf04d0 (MD5) / Approved for entry into archive by Edisangela Bastos (edisangela@ufpa.br) on 2017-05-19T14:44:20Z (GMT) No. of bitstreams: 2 license_rdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5) Dissertacao_ExpressaoGenicaViabilidade.PDF: 2527584 bytes, checksum: a92c30bb13a081c6f66b18e729cf04d0 (MD5) / Made available in DSpace on 2017-05-19T14:44:20Z (GMT). No. of bitstreams: 2 license_rdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5) Dissertacao_ExpressaoGenicaViabilidade.PDF: 2527584 bytes, checksum: a92c30bb13a081c6f66b18e729cf04d0 (MD5) Previous issue date: 2012-05-25 / CAPES - Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior / A vitrificação é uma biotécnica que tem se mostrando cada vez mais promissora em várias espécies, dentre elas ruminantes domésticos (como ovelhas, cabras e vacas), e em primatas não humanos (PNH) (como o cynomologus e rhesus), e consiste na redução ultra-rápida da temperatura mediante a presença de altas concentrações de agentes crioprotetores (ACP’s) em nitrogenio liquido. Desta forma o objetivo deste estudo foi o desenvolvimento de uma metodologia de criopreservação por vitrificação de Folículos Ovarianos Pré-antrais (FOPA’s) em Sapajus apella. Para tanto, foram utilizadas femêas (n=9) adultas de Sapajus apella pertencentes ao plantel do Centro Nacional de Primatas (CENP). Foram realizadas coletas de córtex de tecido ovariano por meio de laparotomia exploratória de modo a não inviabilizar o animal reprodutivamente. Os fragmentos expostos a 8 tratamentos diferentes: Etilenoglicol (EG) 40% + Sacarose (Sac) 0,5 M dissolvidos em TCM-199 adicionados ou não de Selenio (2,5, 5 ou 10 ng/ml) ou Trolox (25, 50 ou 100 mM). Após a exposição aos agentes crioprotetores foi analisada a viabilidade folicular antes e após a vitrificação, a partir da morfologia folicular, expressão dos genes Hsp70, Erp29, Erp60 e Sod1 através da análise por Reação em Cadeia da Polimerase (PCR), além de realizar a dosagem de estresse oxidativo atravéz da TEAC (do inglês Total Equivalent Antioxidant Activity). As análises mostraram que a vitrificação permitiu a manutenção da viabilidade folícular mediante a exposição previa a elevadas concentrações de ACP’s, principalmente quando suplementados com trolox a 50 μM (que resultou em elevadas taxas de sobrevivência folicular) e aumento na expressão da enzima antioxidante Sod1. Enquanto na ausência do mesmo foi observado o aumento nas taxas de folículos degenerados e com vacuolização citoplasmática, além da redução na expressão da enzima antioxidante Sod1 e elevação da expressão da chaperona Erp29. / Vitrification is a biotech that has been increasingly showing promise in several species, among them domestic ruminants (such as sheep, goats and cows) and in nonhuman primates (NHP) (as cynomologus and rhesus), and consists in reducing ultra-rapid temperature by the presence of high concentrations of cryoprotective agents (PCA's) in liquid nitrogen. Thus the aim of this study was to develop a methodology for cryopreservation by vitrification of preantral follicles (PF's) in Sapajus apella. For this purpose, we used females (n = 9) adult Sapajus apella squad belonging to the National Primate Center (CENP). Samples were taken from the ovarian cortex by laparotomy so as not to destabilize the animals reproducibly. The fragments exposed to 8 different treatments: Ethylene glycol (EG) + 40% Sucrose (Sac) dissolved in 0.5 M TCM-199, added to Selenium (2,5, 5 or 10 ng / ml) or Trolox (25, 50 or 100 mM). Following exposure to cryoprotective agents was analyzed follicular viability before and after vitrification, from the follicular morphology, expression of Hsp70 genes, Erp29, Erp60 SOD1 and through the analysis by Polymerase Chain Reaction (PCR), in addition to performing measurement of oxidative stress thru the TEAC (English Total Equivalent Antioxidant Activity). The analyzes showed that vitrification allowed the maintenance of follicular viability by previous exposure to concentrations of ACP's alevadas, especially when supplemented with 50 mM trolox (which resulted in high follicular survival rates) and increased expression of the antioxidant enzyme SOD1. While in the absence of it was observed an increase in rates of follicles degenerate and vacuolated, and reduced expression of the antioxidant enzyme SOD1 and increased expression of chaperone Erp29.

Made available in DSpace on 2016-06-02T19:02:41Z (GMT). No. of bitstreams: 1 3965.pdf: 3863042 bytes, checksum: f995d87531cc46a186a0c566c0be57ea (MD5) Previous issue date: 2011-12-02 / This study aimed to evaluate the effects of low intensity laser therapy (LLLT) (830nm, 120J/cm2, 100mW) and implantation of Biosilicate® scaffolds, associated or not, in histological aspects, biomechanical properties of the bone callus and immunoexpression of proteins, growth and transcription factors related to different stages of bone repair, at 15, 30 and 45 days after surgery of bone defects induced in the tibia.of rats. For this, three studies were performed in which a total of one hundred and twenty male Wistar rats (3 months ± 280 g) were submitted to bilateral tibial defects and randomly distributed in four experimental groups with 30 animals each. In the first study the effects of the implantation of Biosilicate® scaffolds in bone defects of rats were investigated in two groups: bone defect group (GC) and bone defect treated with Biosilicate® scaffold group (GB). The implantation of the scaffold was performed subsequent to surgery of bone defect. Histological analysis revealed that animals of GB showed newly formed bone better organized at 30 and 45 days after surgery. The immunohistochemical analysis demonstrated that the Biosilicate® scaffold promoted a higher expression of COX-2 on days 15 and 30 after surgery, immunostaining positive of RUNX-2 in all periods, increased expression of RANKL on day 15 and positive immunoexpression of BMP-9 on the 45th day. However, the Biosilicate® scaffold did not increase the mechanical properties of bone callus. Thus, the implantation of Biosilicate® scaffold was effective in stimulating the repair of tibial defects, however, was not able to improve their mechanical properties. In the second study, the spatialtemporal changes in the process of bone healing in defects treated with LLLT were evaluated in two groups: GC and bone defect treated with laser group (GL). The laser treatment started immediately following the surgery of bone defects and have been 8, 15 or 23 sessions with an interval of 48 hours between them. The histological and morphometric analysis revealed that the GL showed better tissue organization at 15 and 30 days after surgery, and biggest area of newly formed bone at day 15. The immunohistochemistry showed that the LLLT promoted higher expression of COX-2 at day 15, immunostaining of RUNX-2 positive in all periods, higher immunoexpression of BMP-9 on day 30 and higher immunoreactivity of RANKL at day 15. However, the LLLT did not increase the biomechanical properties of bone callus. Thus, the LLLT improved the process of bone healing, but was unable to improve its biomechanical properties. In the third study the effects of the association of LLLT with implants of Biosilicate® scaffolds in bone healing were investigated in three experimental groups: GC, GB and Biosilicate® scaffold irradiated with laser group (GBL). The implantation of the scaffold was performed following the surgery of bone defect. The laser treatment started immediately after surgery and were performed 8, 15 or 23 sessions with an interval of 48 hours between them. At 15 days after surgery, the histological analysis revealed granulation tissue and newly formed bone juxtaposed to the surface of scaffolds in GB and GBL. Thirty days after injury, the GB and GBL had better organized newly formed bone compared to the CG. At day 45 was possible to observe granulation tissue in the defects of the GBL. In the GB, the peak of immunoexpression of COX-2 occurred on the 15th day and in the GBL, on the 30th day. The GB and GBL showed positive immunoexpression of BMP-9 up to 45th day after surgery, while RANKL immunoexpression was higher in the GBL at day 30. However, 30 and 45 days after injury, the animals of GB and GBL showed statistically lower values of maximum load compared to the CG. Thus, the association of the scaffold Biosilicate® with laser irradiation has osteogenic activity during the bone repair, however, the scaffold Biosilicate® associated or not with the laser irradiation is not effective to improve mechanical properties of the bone callus. Finally, we concluded that LLLT (&#955; = 830 nm, 120J/cm2) and implantation of Biosilicate® scaffolds, associated or not, were effective to stimulate the bone consolidation by improving the development of newly formed bone and activating immunoexpression of proteins, growth and transcription factors related to different stages of bone healing in tibial defects in rats. However, these therapeutic modalities associated or not, were unable to improve mechanical properties of the bone callus. / Este trabalho teve como objetivo avaliar os efeitos da terapia laser de baixa intensidade (LLLT) (830nm, 120J/cm2, 100mW) e do implante de scaffolds de Biosilicato®, associados ou não, nos aspectos histológicos, propriedades biomecânicas do calo ósseo e na imunoexpressão de proteínas, fatores de crescimento e de transcrição relacionados a diferentes etapas do reparo ósseo, ao 15º, 30º e 45º dia após a cirurgia de defeitos ósseos induzidos em tíbias de ratos. Cento e vinte ratos machos da linhagem Wistar (3 meses de idade ± 280 gramas) foram submetidos a defeitos tibiais bilaterais e distribuídos aleatoriamente em 4 grupos experimentais com 30 animais cada. No primeiro estudo investigaram-se os efeitos do implante de scaffolds de Biosilicato® em defeitos ósseos de ratos, a partir de dois grupos experimentais: grupo defeito ósseo controle (GC) e grupo defeito ósseo tratado com scaffold de Biosilicato® (GB). O implante do scaffold foi realizado em seguida à cirurgia de defeito ósseo. A análise histológica revelou que os animais do GB apresentavam osso neoformado mais organizado ao 30º e 45º dia após a cirurgia. A imunoistoquímica demonstrou que o scaffold de Biosilicato® promoveu maior expressão de COX-2 nos dias 15 e 30 de após a cirurgia, imunoexpressão positiva de RUNX-2 em todos os períodos, maior expressão de RANKL no 15º dia e imunoexpressão positiva de BMP-9 no 45º dia. Porém, o scaffold de Biosilicato® não aumentou as propriedades mecânicas do calo ósseo. Assim, o implante de scaffold de Biosilicato® foi eficaz em estimular o reparo de defeitos tibiais, porém, não foi capaz de melhorar suas propriedades mecânicas. No segundo estudo, foram avaliadas as mudanças temporais-espaciais no processo de reparo ósseo em defeitos tratados com LLLT, a partir de dois grupos experimentais: GC e grupo defeito ósseo tratado com laser (GL). O tratamento com laser iniciou-se imediatamente após a cirurgia dos defeitos ósseos e realizaram-se 8, 15 ou 23 sessões, com um intervalo de 48h entre elas. As análises histológica e morfométrica revelaram que o GL apresentou melhor organização tecidual aos 15º e 30º dias após a cirurgia, e maior área de osso neoformado no 15º dia. A imunoistoquímica mostrou que a LLLT promoveu maior expressão de COX-2 no 15º dia, imunoexpressão positiva de RUNX-2 em todos os períodos avaliados, maior imunoexpressão de BMP-9 no 30º dia e maior imunorreatividade do RANKL no 15º dia. Porém, a LLLT não aumentou as propriedades biomecânicas do calo ósseo. Assim, a LLLT melhorou o processo de consolidação óssea, mas não foi capaz de melhorar suas propriedades biomecânicas. O terceiro estudo investigou os efeitos da associação da LLLT com implantes de scaffolds de Biosilicato® na consolidação óssea, a partir de três grupos experimentais: GC, GB e grupo scaffold de Biosilicato® irradiado com laser (GBL). O implante do scaffold foi realizado em seguida à cirurgia de defeito ósseo. O tratamento com laser iniciou-se imediatamente após a cirurgia e foram realizadas 8, 15 ou 23 sessões, com um intervalo de 48h entre elas. Ao 15º dia pós-lesão a análise histológica revelou tecido de granulação e osso neoformado justapostos à superfície dos scaffolds no GB e GBL. Trinta dias após a lesão, o GB e GBL apresentavam osso neoformado mais organizado em comparação ao GC. Ao 45º dia, foi possível observar tecido de granulação nos defeitos do GBL. No GB, o pico de imunoexpressão da COX-2 ocorreu no 15º dia e no GBL, no 30º dia. Os GB e GBL apresentaram imunoexpressão positiva da BMP-9 até o 45º dia após a cirurgia, enquanto que para o RANKL, a imunoexpressão foi maior no GBL no 30º dia. No entanto, 30 e 45 dias após a lesão, os animais dos GB e GBL apresentaram valores estatísticamente menores de carga máxima em comparação ao GC. Assim, a associação do scaffold de Biosilicato® com o laser exerce atividade osteogênica durante o reparo ósseo, no entanto, o scaffold de Biosilicato® associado ou não a irradiação laser não é eficaz em melhorar as propriedades mecânicas do calo ósseo. Finalmente, podemos concluir que a LLLT e o implante de scaffolds de Biosilicato®, associados ou não, foram eficazes em estimular a consolidação óssea, melhorando o desenvolvimento de osso neoformado e ativando a imunoexpressão de proteínas, fatores de crescimento e de transcrição relacionados a diferentes etapas do reparo ósseo em defeitos tibiais em ratos. No entanto, estas modalidades terapêuticas, associadas ou não, não foram capazes de melhorar as propriedades mecânicas do calo ósseo em ensaio de flexão na posição de tração.