Tese (doutorado) - Universidade Federal de Santa Catarina, Centro de Ciências Biológicas. Programa de Pós-Graduação em Farmacologia / Made available in DSpace on 2012-10-26T10:00:25Z (GMT). No. of bitstreams: 1 310349.pdf: 10727909 bytes, checksum: c93e4065cf21f11b20ff92c38ec6e1ff (MD5) / A tuberculose é uma doença causada pelo bacilo Mycobacterium tuberculosis que mata anualmente cerca de 2 milhões de pessoas no mundo. Dado um alto impacto na saúde pública causado pelo M. tuberculosis, a ausência de uma vacina preventiva eficaz e o surgimento de cepas resistentes ao tratamento convencional, existe uma clara necessidade de um melhor entendimento dos mecanismos de imunopatogênese da tuberculose e, sobretudo, a identificação de fatores determinantes do bacilo envolvidos nesse processo. Nesse contexto, as informações geradas pelo projeto genoma de seqüenciamento do M. tuberculosis apresentam um grande potencial a ser explorado, principalmente no que diz respeito a moléculas de superfície/secretadas que possam ser identificadas e avaliadas quanto ao seu envolvimento nos eventos iniciais de infecção e imunogenicidade. No presente estudo, nós identificamos uma nova lectina secretada de M. tuberculosis por uma abordagem bioinformática que é reconhecida durante a fase ativa da tuberculose em humanos tanto em termos de indução de IFN-. em células mononucleares do sangue periférico quanto na produção de anticorpos IgG anti-sMTL-13. Essa produção de anticorpos diminui logo após 1-2 meses de tratamento e permanece em níveis basais até os pacientes atingirem cura clínica, sugerindo que anticorpos anti-sMTL-13 poderiam ser utilizados como um biomarcador de sucesso terapêutico. Em adição, estudos de deleção gênica revelaram que o gene Rv1419 não é essencial para o crescimento in vitro do M. Tuberculosis em meio de cultura, mas que o mesmo parece afetar o crescimento intracelular do bacilo e modula a produção de TNF-a em macrófagos da linhagem RAW 264.7. Em conjunto, os nossos achados demonstram a existência de um novo antígeno de M. tuberculosis com potencial de uso em diagnóstico e de gerar informações relevantes sobre a biologia da interação do patógeno com o hospedeiro. / Tuberculosis remains a major public health problem throughout the world and one-third of the world population carries an asymptomatic infection, which results in eight million new cases of tuberculosis and two million deaths every year. In general, infection by Mycobacterium tuberculosis leads to a latent state in which the host is able to control the pathogen growth. While effective cellular immune responses are suggested as critical to control M. tuberculosis growth inside macrophages, it has been demonstrated that mycobacteria-associated factors play an important role in tuberculose immunopathogenesis. In this study, we have identified a secreted 13 kDa lectin from M. tuberculosis by homology search of a non-redundant lectin database. Bioinformatic analysis revealed that sMTL-13 belongs to the ricin-type b-trefoil family of proteins containing a Sec-type signal peptide present in M. tuberculosis complex species, but not in nontuberculous mycobacteria. Following heterologous expression of sMTL-13 and generation of an mAb (clone 276.B7/IgG1k), we confirmed that this lectin is present in culture filtrate proteins from M. tuberculosis H37Rv, but not in non-tuberculous mycobacteria-derived culture filtrate proteins. In addition, sMTL-13 leads to an increased IFN-g production by PBMC from active tuberculosis patients. Furthermore, sera from tuberculosis patients displayed high titers of IgG Ab against sMTL-13, a response found to be decreased following successful antituberculosis therapy. We also investigated the role of Rv1419 gene of M. tuberculosis during in vitro infection. Our work shows that bacterial replication kinetics of Rv1419 mutant and wild type bacterium were comparable in liquid culture under static conditions. Moreover, the Rv1419 mutant was not impaired in its ability to growth upon macrophage infection. However, its ability to stimulate key cytokine such as TNF-á was reduced, which is in line with CFU counts at earlier time points post-infection (24h) Together, our findings reveal a secreted 13 kDa ricin-like lectin from M. tuberculosis, which is immunologically recognized during active tuberculosis and could serve as a biomarker of disease treatment. We believe that sMTL-13 is an important component of the bacterial-host interplay.

Dissertação (mestrado) - Universidade Federal de Santa Catarina, Centro de Ciências Físicas e Matemáticas. Programa de Pós-Graduação em Química / Made available in DSpace on 2012-10-26T11:05:59Z (GMT). No. of bitstreams: 1 303779.pdf: 1811315 bytes, checksum: 644d71a0836d033cab000bcb4560da54 (MD5) / Biomarcadores geoquímicos e composição elementar foram avaliados a fim de determinar as fontes de matéria orgânica (MO) em um ambiente anóxico da Lagoa da Conceição. Um testemunho e três amostras de sedimentos superficiais (0-5 cm) foram coletados e analisados, após fracionamento e derivatização quando necessário, por cromatografia à gás com detector por ionização em chama (GC-FID) e cromatografia à gás acoplada a espectrometria de massas (GC/MS). Biomarcadores geoquímicos como alcanos, álcoois, ácidos graxos e esteróis foram detectados nas amostras de sedimentos superficiais e testemunho. Em ambos os casos, a razão C/N associada à distribuição dos homólogos para cada classe de biomarcadores permitiu inferir que a MO sedimentar é constituída de uma mistura de origens, como: plantas terrestres, detritos de bactérias e, principalmente, algas. A análise de agrupamento hierárquico permitiu agrupar as frações do perfil sedimentar quanto ao efeito do processo de eutrofização e a mudança das fontes de MO nos diversos intervalos de profundidade do testemunho. Para as amostras de sedimentos superficiais, a análise de agrupamento hierárquico possibilitou avaliar a dissimilaridade entre amostras provenientes de coletas realizadas em períodos diferentes. Além da origem da MO sedimentar, a alteração diagenética mediada por bactérias foi avaliada por meio das razões de esteróis saturados/insaturados. Os resultados obtidos neste trabalho estão de acordo com a condição redox e com os parâmetros físico-químicos apresentados pelo ambiente nos períodos de coleta. / Geochemical biomarkers and the elemental composition were evaluated to determine the sources of organic matter (OM) in an anoxic environment region of Conceição Lagoon (SC). A core and three samples of surface sediments (0-5 cm) were collected and analyzed, after fractionation and derivatization when necessary, by GC-FID and GC/MS. Geochemical biomarkers as hydrocarbons, alkanols, fatty acids and sterols were detected in the surface sediment samples and along the core. In both cases, the C/N ratio associated with the distribution of homologs of each class of biomarkers allowed us to infer that the sedimentary OM consists of a mixture of sources, such as terrestrial plants, bacterial debris and algae. Based on the hierarchical analysis the effect of the process of eutrophication and changing sources of OM in the various depth intervals of the core were evaluated. For samples of surface sediments, the hierarchical cluster analysis allowed us to evaluate the dissimilarity between samples collected from different periods. In addition to the origin of the sedimentary OM, the bacterially mediated diagenetic alteration was assessed by means of the ratios of sterols saturated/unsaturated. The results of this study are consistent with redox conditions and physico-chemical parameters provided by the environment in the collection periods.

Dissertação (mestrado) - - Universidade Federal de Santa Catarina, Centro de Ciências Biológicas, Programa de Pós-Graduação em Biotecnologia, Florianópolis, 2012. / Made available in DSpace on 2014-08-06T17:02:34Z (GMT). No. of bitstreams: 1 325878.pdf: 841448 bytes, checksum: c4f1c8f0719b25265813f0be9e07d96d (MD5) Previous issue date: 2012 / O crescimento desenfreado da urbanização e industrialização nas últimas décadas tem sido um dos principais responsáveis pela contaminação dos ecossistemas marinhos. As atividades antrópicas, industriais e agrícolas são responsáveis pelo consumo de mais de um terço da água doce acessível no mundo, e consequentemente por sua contaminação. Diversas substâncias potencialmente danosas são liberadas constantemente no ambiente, sejam elas de origem antropogênica ou natural. A mistura complexa de contaminantes presentes no ambiente acaba por causar efeitos interativos na biota. Dentre os contaminantes mais comuns, encontra-se o esgoto sanitário que é composto por uma variedade de substâncias em concentrações de difícil caracterização e que é considerado como a principal fonte de contaminantes de ambientes costeiros. Sabendo-se que os efeitos dos poluentes não podem ser avaliados por análises químicas, torna-se necessária a utilização de meios mais sensíveis e confiáveis para a avaliação ambiental. No capítulo I, peixes Poecilia vivipara foram exposto ao esgoto sanitário na concentração de 33% (v/v) em condições de laboratório para a identificação e análise de biomarcadores moleculares pela técnica de Hibridização Subtrativa Supressiva (SSH). Genes de biotransformação como GST, UDPGT e MET também foram testados por qPCR. Neste estudo foram encontrados 22 genes diferencialmente transcritos, sendo 10 induzidos e 12 reprimidos. Os resultados de qPCR confirmaram a indução de CYP1A, GST, UDPGT, e a repressão de C3, FIB, TF e DMRT1. No capítulo II os genes que obtiveram respostas no experimento de laboratório, foram testados em exposição de campo no Mangue de Ratones (local Referência) e no Mangue do Itacorubi, em dois locais considerados contaminados por esgoto sanitário, um a jusante e outro a montante da saída do mangue. As transcrições dos genes DMRT1, MET, GST e UDPGT foram induzidas no local contaminado situado a jusante, em relação ao grupo referência. CYP1A apresentou uma maior transcrição no local situado mais a montante do Mangue do Itacorubi e nenhum gene foi reprimido. Em ambos os estudos os genes que obtiveram respostas significativas, estão associados a funções biológicas como biotransformação, sistema imune e diferenciação sexual. Os resultados fornecem boas medidas que os caracterizam como possíveis e promissores biomarcadores de contaminação ambiental por esgoto sanitário.<br> / Abstract : The uncontrolled growth of urbanization and industrialization in recent decades has been a major contributor to the contamination of marine ecosystems. Human activities, industrial and agricultural are responsible for the consumption of more than a third of the accessible freshwater in the world, and consequently by their contamination. Several potentially harmful substances are released into the environment constantly, whether they are natural or anthropogenic origin. The complex mixture of contaminants in the environment ultimately causes interactive effects on biota. Among the most common contaminants, lies the sewage which is composed by a variety of substances and concentrations difficult to characterize and is regarded as the main source of contaminants in coastal areas. It is known that the effects of pollutants can not only be measured by chemical analysis, it becomes necessary to use more sensitive and reliable means for environmental assessment. In the Chapter I, fishes Poecilia vivipara were exposed to sanitary sewage in the concentration of 33% (v/v) in the laboratory for the identification and analysis of molecular biomarkers by using the technique Suppressive Subtractive Hybridization (SSH). Genes of Biotransformation such as GST, UDPGT and MET were also tested by qPCR. In this study were found 22 differentially transcribed genes, 10 were induced and 12 repressed. The qPCR results confirmed the induction of CYP1A, GST, UDPGT, and repression of C3, FIB, TF and DMRT1. In Chapter II the responsive genes in the laboratory experiments, were tested in field exposure in the Ratones Mangrove (Reference site) and in the Itacorubi Mangrove at two sites considered contaminated by sanitary sewage, one upstream and one downstream sites. Transcription of DMRT1, MET, GST and UDPGT were induced in the liver of fish kept at the downstream site. CYP1A transcription was induced in the fish from the upstream site and no gene was repressed. In both studies, the genes that had significant responses are associated with biological functions such as biotramsformation, immune system, and sexual differentiation. The associated results provide good measurements that characterize them as possible and promising biomarkers of environmental contamination by sanitary sewage in coastal region.

Dissertação (mestrado) - Universidade Federal de Santa Catarina. Programa de Pós-Graduação em Biotecnologia. / Made available in DSpace on 2012-10-21T14:53:10Z (GMT). No. of bitstreams: 1 220751.pdf: 1392360 bytes, checksum: 4537ce975f642a376ad212bd07f39936 (MD5) / As regiões costeiras vêm recebendo nas últimas décadas um significativo aporte de contaminantes de origem antropogênica, incluindo o petróleo e seus derivados. Como conseqüência disso, ecossistemas como os manguezais, caracterizados por possuir amplas variações de salinidade, são alguns dos ecossistemas mais afetados e vulneráveis. A ostra-do-mangue Crassostrea rhizophorae (Mollusca: Bilvalvia), um molusco eurihalino e osmoconformador, com ampla distribuição na costa brasileira, pode ser utilizado como um organismo sentinela em programas de biomonitoramento. O objetivo deste estudo foi avaliar a influência da salinidade (35, 25, 15 e 9) sobre a

Dissertação (mestrado) - Universidade Federal de Santa Catarina, Centro de Ciências Biológicas. Programa de Pós-Graduação em Biotecnologia. / Made available in DSpace on 2012-10-21T17:19:52Z (GMT). No. of bitstreams: 0 / Metalotioneínas (MT) são proteínas de baixo peso molecular, termoresistentes e ricas em resíduos de cisteína. Devido a sua afinidade por metais-traço, tem sido sugerido que, em organismos aquáticos, estas proteínas atuem na homeostase e detoxificação de metais essenciais (Cu e Zn) e não essenciais (Cd e Hg). Além disso, as MT poderiam estar envolvidas na resistência a metais em organismos expostos a estes compostos. O objetivo deste estudo foi identificar e caracterizar a presença de MT na glândula digestiva do mexilhão Perna perna, clonar e seqüenciar o cDNA de MT a partir das brânquias e padronizar as técnicas de PCR semi-quantitativa e Slot blotting para detectar os níveis de MT em animais expostos a cádmio em laboratório. Dois grupos de mexilhões (n=3 por grupo) foram expostos a Cd (0,3 mg/L) por 7 e 15 dias. As glândulas digestivas foram retiradas, homogeneizadas e centrifugadas. Os sobrenadantes resultantes foram submetidos à cromatografia de filtração em gel (Sephadex G-75). Uma fração correspondente a proteínas de baixo peso molecular (faixa de PM = 20 -10 kDa) foi observada nos animais expostos a cádmio. Estes resultados estão de acordo com o perfil de eluição das amostras, obtido por cromatografia líquida de alta performance (HPLC), em uma coluna de exclusão molecular (DIOL - 150; Shimadzu). A presença de Cd foi determinada nesta fração de baixo peso molecular, através de análises químicas por ICP - MS. Alíquotas do sobrenadante e das frações obtidas foram analisadas através de eletroforese em um gel gradiente de poliacrilamida, em condições desnaturantes (PAGE-SDS) e, uma proteína com peso molecular aparente de 16 kDa foi detectada. Mexilhões foram expostos a Cd (0,25 e 0,5 mg/L) por 48 horas, 7 e 18 dias (n=5 por grupo). As brânquias foram retiradas e utilizadas para a extração de RNA total. A partir do cDNA obtido foi realizada a reação de PCR (Reação em Cadeia da Polimerase), utilizando diferentes iniciadores para a amplificação de sequências de MT e de b-actina. O fragmento correspondente à MT foi clonado e aguarda sequenciamento. Além disso, as técnicas de PCR semi-quantitativa e Slot blotting foram avaliadas como ferramentas para a quantificação dos níveis de MT nos mexilhões expostos a Cd. De acordo com os resultados preliminares obtidos, ambas as metodologias mostraram-se eficientes. O aumento nos níveis de proteínas ligantes a metais e do RNA da MT pode ser atribuído a uma resposta de defesa celular contra a exposição a metais. Sua avaliação, através de metodologias como HPLC, PCR semi-quantitativa e Slot blotting, representa uma perspectiva relevante para o biomonitoramento ambiental, utilizando o mexilhão Perna perna.

Dissertação (mestrado) - Universidade Federal de Santa Catarina, Centro de Ciências da Saúde / Made available in DSpace on 2012-10-18T07:04:13Z (GMT). No. of bitstreams: 0Bitstream added on 2014-09-25T23:21:50Z : No. of bitstreams: 1 178223.pdf: 8890735 bytes, checksum: 97dcbc2e0924f69a68f5f3c880336f0d (MD5) / O hipotireoidismo subclínico é definido pela presença de nível aumentado de TSH e níveis normais de hormônios tireoideanos. Podem ocorrer repercussões clínicas, com alterações cárdio-vasculares, músculo-esqueléticas, de perfil lipídico e estado de humor. É questionável ainda se este quadro corresponde a um hipotireoidismo "verdadeiro" em evolução, ou se é uma anormalidade bioquímica, sem disfunção de órgão alvo. Em 80% dos casos de hipotireoidismo subclínico, há alteração de função tireoideana por anticorpos IgG autoimunes, dirigidos principalmente contra a tireoperoxidase (TPO). O objetivo deste estudo foi avaliar a subclassificação de IgG anti-TPO, a medida da sua avidez (força de ligação entre anticorpos e seus epítopos específicos) e a detectabilidade e níveis de marcadores inflamatórios (IL-1, IL-6, IL-10, IFN-g, TNF-a e neopterina) em pacientes portadoras de hipotireoidismo subclínico (hs), comparando tais achados aos de pacientes portadoras de hipotireoidismo estabelecido (he) e grupo controle (c). Foram avaliadas amostras de soros de 95 pacientes do sexo feminino, 34 com hs, 33 com he e 28 pacientes com função tireoideana normal, de acordo com os níveis de TSH e T4 livre. As dosagens de TSH, T4 livre, a subclassificação de anti-TPO e as dosagens de marcadores inflamatórios foram realizadas por método imunoenzimático (ELISA), enquanto que a dosagem de anti-TPO foi feita por quimioluminescência. A comparação da distribuição das variáveis nos três grupos foi realizada através de testes não paramétricos e as análises de correlação pelo coeficiente de Spearman. Os níveis de TSH foram diferentes entre os pacientes com hs e he (p=0,03), apesar de ambos elevados. Os níveis de T4 livre foram diferentes entre os pacientes com hs e c (p<0,001), ainda que ambos dentro da faixa normal. Os níveis de anti-TPO e a medida da sua avidez não diferiram entre os grupos hs e he. A subclassificação de IgG anti-TPO nos grupos de pacientes portadores de hs e he mostrou maior percentual de positividade para IgG1 e IgG4, com positividade de IgG1 de 71% no grupo hs e 67% no grupo he, enquanto que a positividade de IgG4 foi de 97% no grupo hs e 79% no grupo he A relação IgG1/IgG4 foi significativamente maior no grupo de pacientes portadoras de he (p=0,008) IgG1 é capaz de fixar complemento levando a lesão tecidual, enquanto que IgG4 não o faz. Desta forma, o predomínio de IgG1 sobre IgG4 através da medida de sua relação, pode estar associado ao potencial de lesão tecidual em pacientes portadores de hs. A dosagem de marcadores inflamatórios mostrou-se positiva em pequeno número de pacientes, com detectabilidade de TNF-a em 8,8%, IL-6 em 14,7% e IL-10 em 3% dos pacientes com hs. O acompanhamento das pacientes portadoras de hs permitirá a correlação destes dados (positividade e níveis de IgG1 e IgG4, bem como a sua relação) com a evolução clínica

Orientadora : Drª Giseli Klassen / Coorientador : Prof. Dr. Emanuel M. de Souza / Tese (doutorado) - Universidade Federal do Paraná, Setor de Ciências Biológicas, Programa de Pós-Graduação em Ciencias Biológicas (Microbiologia, Parasitologia e Patologia Básica). Defesa: Curitiba, 14/10/2016 / Inclui referências : f. 68-88 / Área de concentração: Patologia / Resumo: O câncer de mama é o tipo de câncer que mais acomete as mulheres em todo o mundo, tanto em países desenvolvidos como em países em desenvolvimento. É uma doença heterogênea, com diferenças em suas características clínicas, moleculares e biológicas. Tradicionalmente, os marcadores de imunohistoquímica em conjunto com os parâmetros clínico-patológicos são usados para classificar esse tipo de câncer e prever a evolução da doença. Dentre os subtipos moleculares de câncer de mama, os carcinomas triplo negativo (TNG) são definidos pela ausência de expressão de receptores hormonais e do gene HER2. Cerca de e 80% dos TNG apresentam o fenótipo basal, por expressar proteínas que caracterizam células mesenquimais e são denominados como o subtipo basalóide (BLBC) de câncer de mama. Os TNG são os subtipos mais agressivos de câncer de mama, com pior prognóstico, e ausência de terapia específica. Estudos anteriores do grupo de pesquisa, evidenciaram que o gene ADAM33, pode ser silenciado por hipermetilação do DNA no câncer de mama. Diversas proteínas da família ADAM já foram relacionadas ao desenvolvimento e progressão de tumores. Diante dessas observações, a expressão diferencial do gene ADAM33 motivou ao nosso grupo de pesquisa investigar se a proteína ADAM33 poderia ser utilizada como um biomarcador no câncer de mama. No presente estudo, foram produzidos anticorpos monoclonais contra a proteína ADAM33 para que esse pudesse ser utilizado em ensaios de imunohistoquímica em amostras parafinadas de câncer de mama. Para isso, após a obtenção de um hibridoma secretor e ensaios de caracterização de anticorpo monoclonal, esse foi utilizado, juntamente com um painel de marcadores moleculares (RE, PR, HER2, EGFR, CK 5/6, CK14, CK17, c-Kit e Ki- 67) em 212 amostras de tumores de mama. E pode-se comparar os escores da proteína ADAM33 com os dados clínico-patológicos das pacientes, para determinar sua importância como um marcador de prognóstico ou preditivo para o câncer de mama. A baixa expressão da proteína ADAM33 foi relacionada com TNG e BLBC, e com uma menor sobrevida global e sobrevida livre de metástases. O achado mais importante deste trabalho é que a baixa expressão de ADAM33 no câncer de mama tem um valor prognóstico independente. A diminuição da expressão dessa proteína está associada ao risco de desenvolvimento de metástases e morte. Assim, a avaliação de ADAM33 por IHQ poderia ser utilizado como um marcador de prognóstico para os subtipos TNG e BLBC. / Abstract: Breast cancer is the most common cancer in women around the world. It is a heterogeneous disease with differences in its clinical, molecular and biological features. Traditionally, immunohistochemical markers together with clinicopathologic parameters are used to classify breast cancer and to predict disease outcome. Triplenegative breast cancer (TNBC) is a particular type of breast cancer that is defined by a lack of expression of hormonal receptors and HER2 gene. About 80% of TNBC also have a basal-like phenotype (BLBC) with expression of cytokeratin 5/6 and/or EGFR, characterized by protein expression of mesenchymal cells. TNG are the most aggressive subtypes of breast cancer with worse prognosis and lack of specific therapy. In that regard, the ADAM33 gene is silenced by DNA hypermethylation in breast cancer, which suggests that ADAM33 might be useful as a molecular marker. In the present study, we have produced monoclonal antibodies against the ADAM33 protein and have investigated role of ADAM33 protein in 212 breast tumor samples breast cancer. We compare clinicopathological information and the expression of a panel of IHC markers (ER, PR, HER2, EGFR, CK 5/6, CK14, CK17, c-Kit and Ki67) with the ADAM33 protein scores to determine whether ADAM33 protein is clinically efficient as a prognostic or predictive marker for breast cancer. We compare the ADAM33 protein scores with clinicopathological data from 212 patients to determine their importance as a predictor and prognostic marker for breast cancer. The low expression of ADAM33 protein was related to TNBC and BLBC, and with a lower overall survival and metastasis-free survival. The most important finding of this study is that low ADAM33 expression in breast cancer has an independent prognostic value. Decreasing the expression of this protein is associated with risk of development of metastases and death. Thus, the evaluation of ADAM33 protein by IHC could be used as a prognostic marker for TNBC and BLBC subtypes.

Orientador : Prof. Dr. Guilherme L. Sassaki / Co-orientadores : Profª. Drª. Sheila Maria B. Winnischofer, Dr. Lauro Mera de Souza / Tese (doutorado) - Universidade Federal do Paraná, Setor de Ciências Biológicas, Programa de Pós-Graduação em Ciências : Bioquímica. Defesa: Curitiba, 25/02/2013 / Inclui referências / Resumo: Biomarcadores capazes de diferenciar células tumorigênicas de não tumorigênicas são importantes, mas ainda existem em quantidades restritivas. Neste estudo, análises de RMN 2D do tipo HSQC-ed forneceram fingerprints dos extratos lipídicos obtidos de linhagens de melanoma humano, representando diferentes estágios de tumorigênese (RGP, VGP e MET), e linhagens de melanócitos e de melanoma de origem murina. Em relação às linhagens murinas, técnicas de análise multivariada demonstraram que o uso de agentes mitogênicos, como ésteres de forbol, podem influenciar significativamente o perfil lipidômico da linhagem de melanócitos, tornando-o mais semelhante ao perfil de linhagens de células mais proliferativas. Extratos aquosos também foram estudados e os metabólitos que mais influenciaram na discriminação entre as linhagens foram quantificados, esses dados, em conjunto com os obtidos da fração lipídica, permitiram caracterizar o metaboloma destas linhagens. A composição de ácidos graxos das linhagens celulares, analisada por GC-MS, foi diferenciada principalmente pelas proporções de ácidos graxos C14:0 e C16:0, em maior quantidade na linhagem de melanoma murino, e C18:1, presente em maior proporção na linhagem de melanócitos murina. Porém, a diferenciação das linhagens foi fortemente influenciada pelos metabólitos de baixo peso molecular creatina e creatinina. Análises de expressão gênica confirmaram que a via bioquímica deste metabólito está alterada entre as linhagens celulares. O lipidoma das linhagens de melanoma humano revelou que os ácidos graxos C14:0, C16:1, C18:0 e C20:4 aumentaram sua proporção nas linhagens com maior potencial tumorigênico (VGP e MET). Análises de GC-MS e de componentes principais apontaram derivados de inositol como os principais contribuintes para a diferenciação das linhagens, e análises de RMN 2D confirmaram que os níveis de lipídeos da classe dos fosfatidilinositóis possuem uma relação direta com o potencial tumorigênico das 3 linhagens de células de melanoma humanas analisadas. Os resultados demonstram que perfis lipidômicos podem ser utilizados para diferenciar linhagens de melanócitos de melanoma e também linhagens de melanomas em diferentes estágios de progressão do tumor, e a combinação das técnicas desenvolvidas pode fornecer novos métodos de diagnóstico e classificação deste carcinoma. / Abstract: Biomarkers that discriminate tumorigenic from normal cells are important but limited. In the present study, 2D HSQC-ed NMR lipid maps from human melanoma cell lines, having distinct tumorigenic potential (RGP, VGP and MET) and mouse melanocytes and melanoma cell lines were obtained. Regarding the mouse cell lines, we revealed through principal component analysis that the use of mitogenic agents, such as phorbol esters, can markedly influence the lipid profile of the melanocyte cell line, resembling the pattern of the most proliferative cell lines. Aqueous extracts were also characterized, and the metabolites that most indicated discrimination between the cell lines were quantified, allowing to characterize the metabolomic profile of the cell lines. The cell lines had different fatty acid compositions, as confirmed through GC-MS analysis, the melanocyte containing a lower proportion of C14:0 and C16:0, the opposite occurring with C18:1, when compared with the melanoma cell line, but the differentiation was mostly influenced to small-molecule metabolites: creatine and creatinine. Gene expression analysis confirmed that the synthetic pathway of these metabolites was altered between the cell lines. The human melanoma lipidome showed a fatty acid composition with C14:0, C16:1, C18:0 and C20:4 having a higher proportion on the VGP and MET cell lines than in RGP. Multivariate and GC-MS analysis pointed out inositol derivatives as main contributors to the differentiation of the cells, and 2D NMR analysis established that the levels of phosphoinositol derivatives are related to the carcinogenic stage of the 3 cell lines. These results demonstrate that lipidomic profiles were capable to discriminate melanocytes from melanoma cells and even melanomas on distinct tumorigenic stages. The combination of the applied techniques could be an efficient and convenient tool for early diagnosis and screening of melanoma disease.

Made available in DSpace on 2015-08-20T17:10:03Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2015-03-17. Added 1 bitstream(s) on 2015-08-20T17:25:57Z : No. of bitstreams: 1 000843029.pdf: 2165099 bytes, checksum: 8071b2bc7f900fdb98f8d13a65affa58 (MD5) / A espécie Periplaneta americana (Linnaeus, 1758) é uma praga urbana capaz de carrear patógenos para habitações humanas, depreciar alimentos, vestimentas e documentos. Estratégias de controle do organismo com menor risco ambiental podem ser utilizadas, como os fungos entomopatogênicos, com potencial no controle de suas ootecas, que são a fase de maior propagação do inseto. A estrutura geográfica em que as baratas vivem pode levar a subdivisões populacionais, com efeitos na patogenicidade e virulência dos entomopatógenos. O objetivo deste trabalho foi verificar o nível de divergência genética de populações de P. americana de duas cidades do Estado de São Paulo e avaliar a eficiência de controle de fêmeas e ootecas de P. americana após o tratamento com inseticidas sintéticos e fungos entomopatogênicos. As duas populações apresentaram alto nível de segregação, com diferenças em sua mortalidade. O uso dos fungos Metarhizium anisopliae (Metschnikoff, 1879) e Beauveria bassiana (Bals.-Criv.) Vuill. (1912) foi menos eficaz no controle de fêmeas de P. americana do que calda inseticida contendo lambdacialotrina na primeira aplicação em campo. M. anisopliae apresentou resultados promissores no controle de ootecas e fêmeas de P. americana, indicando seu potencial de uso em programas de manejo integrado deste inseto / Periplaneta americana's (Linnaeus, 1758) species is an urban pest capable of carrying pathogens to human habitations, depreciating food, clothing and documents. Control strategies of the organism with less environmental risk can be used, such as entomopathogenic fungi with potential in control of their oothecae, which is the stage of higher spreading of the insect. The geographical structure in which the cockroaches live can lead to population subdivisions, with effects on pathogenicity and virulence of entomopathogenic. The objective of this study was to determine the level of genetic diversity of P. americana's populations of two cities of São Paulo and evaluate the control efficiency of P. americana's females and ootheace after treatment with synthetic insecticides and entomopathogenic fungi. Both populations showed a high level of segregation, with differences in their mortality. The use of fungi Metarhizium anisopliae (Metschnikoff, 1879) and Beauveria bassiana (Bals.-Criv.) Vuill. (1912) was less effective in the control of P. americana's females than spraying containing insecticide lambdacyhalothrin in the first field application. M. anisopliae showed promising results in control of P. americana's oothecae and females, indicating its potential use in integrated pest management programs for this insect

Made available in DSpace on 2015-01-26T13:21:23Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2014-03-10Bitstream added on 2015-01-26T13:30:34Z : No. of bitstreams: 1 000802279.pdf: 2261736 bytes, checksum: a4950b15ba3fc29d5773714bbf50e186 (MD5) / O Curcumin apresenta potencial terapêutico no tratamento e prevenção de doenças crônicas, inclusive câncer. O objetivo do presente trabalho foi avaliar o impacto do tratamento sistêmico do curcumin sobre os períodos iniciais da carcinogênese bucal induzida pelo 4-NQO em ratos. Quarenta ratos distribuídos em quatro grupos (n=10) foram tratados com solução de 50 ppm de 4-NQO dissolvido na água de beber ad libitum durante todo período experimental, que ocorreu em 8 e 12 semanas, sendo que dois desses grupos foram tratados com 30 ou 100 mg/kg de peso corporal de curcumin diariamente por gavagem oral, e um grupo tratado com veículo no volume correspondente à maior dose de curcumin. Os animais do grupo controle negativo (n=10) foram sacrificados no início do experimento. Os cortes histológicos, provenientes da língua dos animais, foram corados por H&E ou submetidos à reação de imunohistoquímica para detecção de PCNA, Bcl-2, SOCS1 e -3 , e STAT3. Parte das peças foi utilizada para a verificação da expressão de Vimentina, Cdh1, Cdh2 e TWIST1 por RT-qPCR. O tratamento com 100mg/kg de peso corporal de curcumin por 12 semanas, principalmente, diminuiu os valores do H-score de PCNA, Bcl-2, SOCS3, STAT3, enquanto aumentou SOCS1, além de reduzir as atipias celulares observadas na análise morfológica do epitélio lingual. A expressão dos genes avaliados por RT-qPCR também foi reduzida pelo tratamento com curcumin, independentemente da dose utilizada. Os resultados do presente estudo demonstram que o curcumin acaba por intervir e atenuar o desenvolvimento do processo carcinogênico. / Curcumin has therapeutic potential in the treatment and prevention of chronic diseases , including cancer. The aim of this study was to evaluate the impact of systemic treatment of curcumin on the initial periods of oral carcinogenesis induced by 4 - NQO in rats. Forty rats were distributed into four groups (n = 10) and treated with 50 ppm of 4-NQO solution dissolved in the drinking water ad libitum throughout the experimental period, which occurred at 8 and 12 weeks , with two of these groups were treated with 30 or 100 mg / kg body weight daily by oral gavage curcumin, and a group treated with vehicle corresponding to larger dose of curcumin volume. The animals in the negative control group (n = 10 ) were sacrificed at the beginning of the experiment. Histological sections, from the language of animals, were stained with H&E or subjected to immunohistochemical analysis for detection of PCNA, Bcl-2, SOCS1 and -3, and STAT3. Part of the pieces was used to check the expression of vimentin, Cdh1, Cdh2 and TWIST by RT - qPCR . Treatment with 100mg/kg body weight of curcumin for 12 weeks, mainly, decreased the values of the H -score of PCNA, Bcl-2, SOCS3, STAT3 , while increased SOCS1 , and reduce cellular atypia observed in the morphological analysis of lingual epithelium. The gene expression assessed by RT- qPCR was also reduced by treatment with curcumin, regardless of the dose used. The results of this study demonstrate that curcumin eventually intervene and attenuate the development of the carcinogenic process.