Dissertação (mestrado) - Universidade Federal de Santa Catarina, Centro de Ciências da Saúde. Programa de Pós-Graduação em Ciências Médicas. / Made available in DSpace on 2012-10-22T13:29:41Z (GMT). No. of bitstreams: 0

Dissertação (mestrado) - Universidade Federal de Santa Catarina, Centro de Ciências Biológicas, Programa de Pós-Graduação em Biologia Celular e do Desenvolvimento, Florianópolis, 2013. / Made available in DSpace on 2014-08-06T17:32:29Z (GMT). No. of bitstreams: 1 322298.pdf: 5633585 bytes, checksum: 44c191bbf3514f519196e0afb76d38a8 (MD5) Previous issue date: 2013 / A população brasileira é produto da miscigenação entre trêsprincipais grupos étnicos: Ameríndios (que já habitavam estas terras àépoca do descobrimento), Europeus (principalmente portugueses) eAfricanos (trazidos de forma forçada como mão de obra escrava).Estimar as diferentes proporções de ancestralidade em populaçõesmiscigenadas é de extrema importância para estudos genéticos quebuscam encontrar alelos de sucetibilidade a doenças, uma vez que a nãocorreção da estratificação populacional pode ocasionar desvios levandoa associações espúrias. Para o controle da estratificação populacional, autilização de marcadores informativos de ancestralidade tem sidoamplamente utilizada por apresentar um alto diferencial de frequênciaentre populações de regiões geograficamente distintas. O objetivo desteestudo foi genotipar quatro marcadores informativos de ancestralidadeadequados para amostras da população brasileira visando estender estaabordagem para entender a estruturação populacional em estudos decaso-controle, utilizando como modelo a doença psoríase. Adicional aoprincipal objetivo, um banco de dados biológico (BDB) foi diagramadoe implementado, para auxiliar na organização e armazenamento deinformações a respeito das amostras aqui utilizadas. As frequências dosquatro marcadores (AT3, Sb19.3, APO e PV92) foram estimadas emamostras de pacientes (PSR) diagnosticados com psoríase (n=100) econtroles saudáveis (PSC) sem histórico de doença (n=100, PSC)coletadas na cidade de Florianópolis - SC. Os perfis genéticos foramobtidos através de PCR convencional e eletroforese em gel de agarose.As análises estatísticas empregaram programas tais como GENEPOP,GDA e ADMIX 3. O BDB proposto foi desenvolvido e estruturado emsistema de gestão de bases de dados relacionais MySQL, e a interfacegráfica foi desenvolvida em linguagem PHP e HTML. Por meio deanálises moleculares e estatísticas, os resultados obtidos evidenciaramque os dois grupos de indivíduos aqui estudados (PSR e PSC)apresentaram semelhanças quanto a sua ancestralidade genética, nãosendo observado grandes diferenças populacionais. As estimativas demistura revelaram que as duas populações analisadas são tri-híbridas,com alta preponderância do componente europeu, seguido de africano eameríndio respectivamente. Apesar dos poucos marcadores utilizadosfoi possível discriminar a contribuição genética dos grupos ancestraisindicando que mesmo um número reduzido de marcadores pode sersuficiente, desde que apropriadamente selecionados, para responder umapergunta específica. O BDB construído e diagramado neste trabalhorecebeu o nome de LAPOGEdb (LAPOGE Database -www.lapoge.sites.ufsc) e, mostrou-se uma ferramenta eficaz para oarmazenamento estruturado de informações que variam entre dadosepidemiológicos e genéticos referentes a amostras utilizadas ao longo de19 anos de funcionamento do Laboratório de Polimorfismos Genéticosda Universidade Federal de Santa Catarina (LAPOGE-UFSC). <br> / Abstract : The Brazilian population is the product of interbreeding betweenthe three main ethnic groups: Amerindians (who inhabited these landsduring the discovery), Europeans (mainly Portuguese) and Africans(brought forcefully as slave labor). Estimating the different proportionsof ancestry in admixed populations is of utmost importance for geneticstudies that seek to find disease susceptibility alleles, since no correctionof population stratification, can cause deviations leading to spuriousassociations. To control the population stratification, the use of ancestryinformative markers have been widely used for its feature of presentinga high frequency differential between geographically distinctpopulations. The aim of this study was to genotype four ancestryinformative markers suitable for samples of the brazilian population inorder to extend this approach to understand the population structure incase-control studies, using as a model the psoriasis disease. Additionalto the main objective, a biological database (BD) was diagrammed andimplemented through programming languages, to assist in organizingand storing information about the samples used here. The frequencies ofthe four markers (AT3, Sb19.3, APO and PV92) were estimated insamples of patients (PSR) diagnosed with psoriasis (n = 100) andhealthy controls (PSC) with no history of disease (n = 100, PSC)collected in the city of Florianópolis - SC. The genetic profiles wereobtained by standard PCR and visualization with agarose gel andelectrophoresis. The statistical analysis employed programs such asGENEPOP, GDA and ADMIX 3. The proposed BD was developed andstructured in MySQL relational database management system, while thegeneral user interface (GUI) was developed in PHP and HTML. Theresults obtained from the molecular analysis and statistics, showed thatthe two groups studied here (PSR and PSC) had some similarities intheir genetic ancestry, not observing large population differences.Estimates of mixture revealed that the two populations are tri-hybrid,with high preponderance of European component, followed by Africanand Amerindian respectively. Despite the few markers used it was ableto discriminate the genetic contribution of ancestral groups indicating,that even a small number of markers may be sufficient, whenappropriately selected, to answer a specific question. The BD builtedanddiagrammed in this work was named LAPOGEdb (LAPOGE Database -www.lapoge.sites.ufsc) and proved to be an effective tool for storingstructured information, ranging from genetic and epidemiological data,related to the samples used throughout 19 years of operation of theLaboratory of Genetic Polymorphisms of the Federal University ofSanta Catarina (UFSC-LAPOGE).

Tese (doutorado) - Universidade Federal de Santa Catarina, Centro de Ciências Físicas e Matemáticas, Programa de Pós-Graduação em Química, Florianópolis, 2014 / Made available in DSpace on 2015-02-05T20:13:02Z (GMT). No. of bitstreams: 1 331668.pdf: 2965661 bytes, checksum: 23e4f1dbf1b5d9b928a5023900f707be (MD5) Previous issue date: 2014 / Este trabalho relata o desenvolvimento de três novos imunossensores eletroquímicos label-free construídos a partir de moléculas de cristais líquidos (CL) e nanopartículas de ouro (AuNP), para detecção de mioglobina (Mb), troponina T (cTnT) e troponina I (cTnI), que são importantes biomarcadores empregados no diagnóstico de doenças cardíacas, como o infarto agudo do miocárdio. O primeiro imunossensor apresentado foi construído a partir da combinação do CL iônico, brometo de (E)-1-decil-4-((4-(deciloxi)fenil)diazenil)piridínio (Br-Py), como uma sonda redox, e AuNP estabilizadas em polietilenoimina. Essa plataforma foi empregada na imobilização covalente de anticorpos anti-Mb. Até onde sabemos esse foi um dos primeiros trabalhos publicados empregando moléculas de CL para o desenvolvimento de um imunossensor eletroquímico. Esse imunossensor foi otimizado para a determinação de Mb a partir da inibição do sinal da sonda Br-Py, obtido por voltametria de onda quadrada. A faixa de trabalho obtida foi de 10 a 72,8 ng mL-¹ com um limite de detecção (LOD) de 6,3 ng mL-¹. O segundo imunossensor foi construído empregando-se a mesma sonda redox Br-Py, que foi combinada com AuNP estabilizadas em silsesquioxano, matriz empregada para imobilização do anticorpo anti-cTnT por meio de interação eletrostática. Após otimização dos parâmetros de construção e operação obteve-se uma curva de calibração para cTnT. A faixa de trabalho obtida foi de 0,1 a 0,9 ng mL-¹ com um LOD de 0,08 ng mL-1. Já o terceiro imunossensor foi construído com uma molécula de CL colunar derivado de 1,3,4-oxadiazol e AuNP estabilizadas em hidrocloreto de polialilamina, sendo esta plataforma empregada para imobilização covalente do anticorpo anti-cTnI. Os estudos de formação do imunocomplexo foram realizados empregado como sonda redox o par Fe(CN)63-/4-, usando a inibição do sinal voltamétrico, medido por voltametria linear, ou então o aumento da Rct por espectroscopia de impedância eletroquímica. Após otimização dos parâmetros de construção e operação obteve-se uma curva de calibração para cTnI com uma faixa de trabalho de 0,01 a 0,3 ng mL-¹ com um LOD de 0,005 ng mL-1. O três imunossensores propostos foram empregados com sucesso na determinação dos biomarcadores cardíacos em amostras de soro simulado e de plasma sanguíneo.<br> / Abstract: This work reports the development of three new label-free electrochemical immunosensors constructed using liquid crystal (LC) molecules and gold nanoparticles (AuNP), for detection of myoglobin (Mb), troponin T (cTnT) and troponin I (cTnI), which are important biomarkers for the diagnosis of cardiac diseases, such as acute myocardial infarction. The first presented immunosensor was constructed from the combination of ionic LC, (E)-1-decyl-4-[(4-decyloxyphenyl)diazenyl]pyridinium bromide (Br-Py) as a voltammetric probe and AuNP stabilized in polyethyleneimine. This platform was used to covalent immobilization of anti-Mb antibodies. To our knowledge this was one of the first published works employing LC molecules for the development of an electrochemical immunosensor. This immunosensor was optimized for determination of Mb by inhibition of the signal of the Br-Py probe obtained by square wave voltammetry. The concentration working range was obtained from 10 to 72.8 ng mL-¹ with limit of detection (LOD) of 6.3 ng mL-¹. The second immunosensor was constructed employing the same redox probe Br-Py which was combined with AuNP stabilized in silsesquioxane, this matrix was employed to immobilization of anti-cTnT antibodies via electrostatic interaction. After optimization of the parameters of construction and operation a cTnT calibration curve was obtained. The concentration working range obtained was 0.1 to 0.9 ng mL-¹ with a LOD of 0.08 ng mL-¹. The third immunosensor was constructed with a columnar LC molecule, derivative from 1,3,4-oxadiazole, and AuNP stabilized in polyallylamine hydrochloride, this matrix was employed for covalent immobilization of anti-cTnI antibodies. The formation of the immunecomplex studies were performed, employed as a redox probe the couple Fe(CN)63-/4-, using the inhibition of the linear voltammetric signal, or Rct from electrochemical spectroscopy impedance. After optimization of the parameters of construction and operation, the calibration curve for cTnI was obtained with a working concentration range from 0.01 to 0.3 ng mL-¹ with a LOD of 0.005 ng mL-¹. The three proposed immunosensors were successfully employed in the determination of cardiac biomarkers in samples of simulated serum and blood plasma.

Made available in DSpace on 2015-02-05T21:21:15Z (GMT). No. of bitstreams: 1 331103.pdf: 1619905 bytes, checksum: 083bd2d2e884edeec88e8b5cddb5e931 (MD5) Previous issue date: 2014 / A intensa busca por novos biomarcadores de doenças com intuito de melhorar o diagnóstico e acompanhar a evolução da doença tem feito os pesquisadores reavaliar compostos antes ignorados, como a citrulina. Este aminoácido não proteico que faz parte do ciclo da ureia ganhou destaque nos últimos anos como marcador da função intestinal, auxiliando na rejeição ao transplante. A citrulina quando associada com outros marcadores também tem sido utilizada para acompanhar o desenvolvimento de algumas doenças, dentre elas a sepse e falência renal. Apesar de bastante avaliada, não há uma padronização metodológica para análise desse aminoácido, havendo necessidade do desenvolvimento de metodologias que sejam simples, baratas e que possam ser implementadas em exames de rotina. O presente trabalho teve por objetivo desenvolver e validar metodologias por cromatografia líquida e alta eficiência (CLAE) e eletroforese capilar (EC), capazes de identificar e quantificar o aminoácido citrulina em plasma. Foi possível desenvolver métodos para quantificar a citrulina por CLAE e EC sem a utilização de agentes de derivatização. Ambas as metodologias atenderam os parâmetros de precisão, com coeficiente de variação inferior a 4%, e exatidão, respectivamente, de 75 e 95%. A faixa de linearidade obtida apresentou coeficientes de determinação de 0,9905 e 0,996, e limites de detecção de 4,07 e 2,25 µg.mL-1 e quantificação de 12,34 e 6,88 µg.mL-1, respectivamente, para CLAE e EC. A quantificação da citrulina por ambas as técnicas mostrou ser possível, porém, a EC apresentou resultados mais promissores.<br> / Abstract: The intense search for new biomarkers of disease with the aim of improving diagnosis and monitor disease progression has made researchers reevaluate compounds previously ignored, such as citrulline. This non-protein amino acid that is part of the urea cycle has gained prominence in recent years as a marker of intestinal function, aiding in transplant rejection. Citrulline when associated with other markers have also been used to monitor the development of some diseases such as sepsis and renal failure. Despite being fairly analyzed there is no standardization for the analysis of this amino acid, there is need to develop methodologies that are simple, cheap and can be implemented in routine analysis. This study aimed to develop and validate methodologies for HPLC and CE can identify and quantify citrulline in plasma. It was possible to develop methods for quantifying citrulline by HPLC and CE without the use of derivatizing agents. Both methodologies met the precision data with a coefficient of variation less than 4%, the accuracy found was 75 and 95%. The range of linearity obtained exhibited correlation coefficients of 0.9905 and 0.996 and detection limits 4.07 and 2.25 µg/mL and quantification of 12.34 and 6.88 mg/mL, respectively for HPLC and CE. The quantification of the citrulline showed to be possibleby both techniques, but CE was the technique that showed more promising results.

Dissertação (mestrado) - Universidade Federal de Santa Catarina, Centro de Ciências da Saúde. Programa de Pós-Graduação em Nutrição / Made available in DSpace on 2012-10-26T09:41:46Z (GMT). No. of bitstreams: 1 310073.pdf: 2822774 bytes, checksum: 89c5bf566c7b92927bd7caba2e019280 (MD5) / Pacientes em tratamento para o câncer de mama são suscetíveis à alteração no comportamento alimentar, ganho de peso e desenvolvimento de estresse oxidativo, fatores que podem influenciar na recidiva da doença. Assim, o controle desses, por meio da alimentação, torna-se relevante. Baseado no exposto, o presente estudo objetivou avaliar a efetividade de uma intervenção nutricional educativa promovendo o aumento do consumo de frutas, legumes e verduras (FLV) e a redução do consumo de carnes vermelhas ou processadas sobre fatores nutricionais e biomarcadores de estresse oxidativo. Foi realizado um ensaio clínico não randomizado controlado com avaliação basal e após 12 meses de intervenção, no município de Florianópolis, Santa Catarina - Brasil. A população foi composta por mulheres recém-diagnosticadas para o câncer de mama, divididas em Grupo Intervenção (GI) (n=18) e Grupo Comparação (GC) (n=75). O GI foi submetido a uma intervenção orientando o consumo de no mínimo 400 g diárias de frutas, legumes e verduras (FLV) e a ingestão de no máximo 500 g semanais de carnes vermelhas ou processadas, conforme recomenda o documento "Alimentos, nutrição, atividade física e prevenção de câncer: uma perspectiva global", organizado pelo World Cancer Research Found e American Institute for Cancer Research. A intervenção nutricional educativa ocorreu, principalmente, através de orientação por telefone, materiais impressos via correspondência e encontros presenciais com palestras e aula de culinária. Na avaliação basal e após o tratamento ambos os grupos foram avaliados quanto ao consumo, em gramas e porções, de FLV, carnes vermelhas ou processadas, além de energia, macronutrientes e ácidos graxos, obtidos a partir de um questionário de frequência alimentar. Peso corporal e índice de massa corporal (IMC) foram avaliados de acordo com a recomendação da Organização Mundial de Saúde. Biomarcadores de estresse oxidativo sanguíneos foram determinados através de oxidação lipídica e protéica por hidroperóxidos lipídicos e proteínas carboniladas, e marcadores antioxidantes por glutationa reduzida e potencial antioxidante. Para dados basais foi utilizada análise de Qui-quadrado em variáveis categóricas e Test-t ou Mann-Whitney para dados contínuos, de acordo com a simetria dos dados. Quando em avaliações dos desfechos intragrupo utilizou-se Test-t pareado ou Wilcoxon de acordo com a simetria dos dados. Modelos complementares de regressão linear foram utilizados, com ajustes para energia e valores basais. Como resultados destaca-se que as análises ajustadas demonstraram um aumento significativo de 50% no consumo de FLV, e redução de 60% no consumo de carnes vermelhas ou processadas no GI em relação ao GC. Com relação ao peso corporal, não houve alteração no GI, enquanto no GC aumentou significativamente entre os dois períodos de avaliação. Quanto aos marcadores de estresse oxidativo, observou-se um aumento significativo de 30% na glutationa reduzida do GI sobre o GC, e em análises referente a diferença entre os 2 períodos de avaliação, o GC aumentou significativamente os marcadores oxidantes enquanto que o GI não alterou, porém reduziu o marcador que avaliou potencial antioxidante, significativamente. Sendo assim, pode-se concluir que a intervenção nutricional educativa, durante o tratamento para o câncer de mama, mostrou-se importante na estimulação de hábitos alimentares saudáveis e manutenção do peso corporal, além de possível reflexo desses no aumento da glutationa reduzida, a qual possui papel central na defesa das células contra o estresse oxidativo

Dissertação (mestrado) - Universidade Federal de Santa Catarina. Programa de Pós-Graduação em Biotecnologia. / Made available in DSpace on 2013-07-15T23:45:14Z (GMT). No. of bitstreams: 1 237897.pdf: 458130 bytes, checksum: 060a4a0f2a67fee33822c23e381a7b72 (MD5)

Tese (doutorado) - Universidade Federal de Santa Catarina, Centro de Ciências Biológicas. Programa de Pós-Graduação em Farmacologia / Made available in DSpace on 2013-07-16T00:36:56Z (GMT). No. of bitstreams: 1 224127.pdf: 1281267 bytes, checksum: 3b666a8a74b2a1c54415bfbd224e99f2 (MD5) / A própolis é uma resina natural produzida pelas abelhas e utilizada popularmente para o tratamento de inúmeras doenças, entre elas os processos inflamatórios. O objetivo geral deste trabalho foi avaliar, através de estudos in vitro e in vivo, usando técnicas farmacológicas e bioquímicas, a atividade antiinflamatória da própolis padronizada do sul do Brasil (P1) e de seu principal constituinte, Artepillin C, e investigar a farmacocinética de absorção desse constituinte após a ingestão oral de própolis P1. Foram utilizados os modelos farmacológicos de inflamação in vivo: edema de pata, peritonite e prostaglandina E2 (PGE2) no lavado peritoneal, avaliação da atividade da eNOS em cultura de células do endotélio vascular (EA.HY926), determinação da produção de óxido nítrico em cultura de células RAW 264.7 estimuladas com LPS; avaliação da expressão e atividade da p38-MAPK em cultura primária de músculo liso vascular aórtico de rato (VSM) na presença de angiotensina II; avaliação da atividade específica do fator NF B em células HEK 293 trasnfectadas como gene de expressão do NF B, estimuladas com TNF . Além disso, foram avaliadas as concentrações plasmáticas de Artepillin C em camundongos tratados com própolis ou Artepillin C para a determinação de biodisponibilidade através de HPLC e CG acoplada a espectroscopia de massa. Os resultados demonstraram que a própolis ou Artepillin C possuem efeito antiedematogênico e antiinflamatório, reduzem a produção de PGE2 no lavado peritoneal, mas não afetam a expressão da enzima eNOS ou a sua atividade. No entanto, eles inibem a ativação de RAW 264.7 e a conseqüente produção de NO, e promovem a ativação do sistema da p38-MAPK em VSM, e inibem a ativação do NF B. Além disso, demonstramos que concentrações efetivas de Artepillin C são encontradas no plasma após a ingestão oral de própolis P1 e de Artepillin C, com pico de concentração máxima entre 1 e 2 h. Esses dados indicam que a própolis P1 e o Artepillin C possuem efeito antiinflamatório envolvidos, pelo menos em parte, com a inibição da produção de PGE2, pela inibição da atividade de macrófagos e conseqüente redução da produção de NO durante o processo inflamatório, pelo aumento da resistência vascular mediada pela ativação do sistema p38-MAPK e pela inibição do NF B. Esses resultados justificam o uso popular da própolis como antinflamatório e demonstram pela primeira vez que o Artepillin C pode se considerado um biomarcador importante para o controle químico e biológico da qualidade da resina de própolis no Brasil.

Dissertação (mestrado) - Universidade Federal de Santa Catarina, Centro de Ciências da Saúde. Programa de Pós-graduação em Farmácia / Made available in DSpace on 2013-07-16T00:54:56Z (GMT). No. of bitstreams: 1 225426.pdf: 3097846 bytes, checksum: 7bfbd4bac77b5e1d864d3db7f7663f7c (MD5) / O estudo da literatura demonstrou que o Transtorno Depressivo Maior é acompanhado por resposta de fase aguda, caracterizada por concentrações significativamente maiores (em relação ao grupo controle) de proteínas de fase aguda, tais como a alfa-1-glicoproteína ácida e alfa-1-antitripsina, bem como diminuição na concentração de albumina, transferrina e proteínas totais. Demonstrou-se que as alterações mencionadas refletem-se no eletroforetograma de proteínas séricas. Nesta pesquisa, onde a amostra denominada "estudo" foi composta por 32 pacientes ambulatoriais do núcleo de Psiquiatria do HU da UFSC, diagnosticados com base no CID-10 e classificados como portadores de transtorno depressivo maior -de moderado a severo (pontuação média = 38) com base na escala de depressão de Hamilton (HAM-D); e a amostra denominada "controle" foi composta por 30 voluntários saudáveis, tais achados foram, em sua maioria, replicados. Encontraram-se alterados apenas no subgrupo feminino, a banda -1 e alfa-2 da eletroforese, as concentrações de alfa-1 antitripsina ( -1AT) e alfa-1 glicoproteína ácida ( -1GPA), todos com valores mais altos; a albumina e o zinco sérico com valores mais baixos; no hemograma número maior de leucócitos, e das subpopulações neutrófilos, monócitos e basófilos; o número de hemácias e o hematócrito foram maiores significativamente; a hemoglobina globular média (HGM) esteve diminuída significativamente. A contagem de reticulócitos foi maior. Os linfócitos totais e os subtipos CD3, CD4 e CD8 não apresentaram diferenças significativas. As imunoglobulinas IgA, IgG, IgM e IgE foram encontradas semelhantes ao grupo controle. A fração betaglobulina e a transferrina, bem com a CLFT (capacidade de ligação do ferro total) foram encontradas maiores. Porém, a ferritina, a IgM e o índice de saturação da transferrina, foram demonstrados aumentados apenas no subgrupo masculino. O ferro apresentou uma ligeira tendência a estar aumentado no subgrupo feminino, mas a CLFL (capacidade de ligação do ferro livre) apresentou-se semelhante. O estudo dos lipídeos séricos demonstrou concentrações de colesterol total e da fração LDL-colesterol elevados, em relação ao grupo controle. A concentração de triglicerídeos e de HDL-colesterol foi encontrada semelhante entre os grupos. Os hormônios TSH, prolactina, além de cortisol urinário de 12 horas (corrigido pelo RFG) resultaram em valores semelhantes, porém o cortisol basal sérico encontrou-se diminuído no subgrupo feminino.

Dissertação (mestrado) - Universidade Federal de Santa Catarina, Centro de Ciências Agrárias, Programa de Pós-Graduação em Aquicultura, Florianópolis, 2013. / Made available in DSpace on 2014-08-06T17:26:31Z (GMT). No. of bitstreams: 1 324675.pdf: 1653130 bytes, checksum: 66bab93aed1650647dda18c5ef458cc3 (MD5) Previous issue date: 2013 / Ambientes costeiros marinhos, especialmente sistemas semi-fechados como manguezais, são altamente susceptíveis à contaminação causada pelo desenvolvimento urbano e industrial. Organismos sentinela têm sido propostos como bioindicadores de contaminação aquática, através da avaliação de alterações biológicas desencadeadas por xenobióticos presentes no ambiente, as quais expressam a exposição aos mesmos e/ou seus efeitos. Crassostrea brasiliana é uma espécie de ostra eurialina que habita áreas de manguezal ao longo de toda a costa brasileira. O objetivo do presente estudo foi investigar a transcrição diferencial de genes selecionados como alvo em C. brasiliana e avaliar seu potencial como biomarcadores moleculares relacionados ao estresse causado pela contaminação do Manguezal do Itacorubi, em Florianópolis, SC. Situado dentro do perímetro urbano do município esta área vem sofrendo constante pressão antrópica, principalmente pelo aporte de esgoto sanitário não-tratado. Ostras provenientes de um cultivo e aclimatadas por uma semana em laboratório foram transplantadas para duas áreas. Uma localizada no manguezal do Itacorubi, área densamente povoada, e outra localizada no manguezal do Ratones, área pristina, que foi considerada como local de referência (RAT). No manguezal do Itacorubi, as ostras foram transplantadas para dois pontos distintos (ITAI e ITAII). Foram realizadas duas exposições, uma no início do verão 2011/2012 (EXP1) e outra após a temporada de verão (EXP2). Exemplares coletados em 24h e 96h após a exposição in situ, tiveram suas brânquias dissecadas, o mRNA foi extraído e por transcrição reversa foi obtido o cDNA. Através do uso de PCR em tempo real (qPCR) foram quantificados os níveis de transcritos de genes alvo nas ostras expostas em comparação ao grupo referência. Com base no transcriptoma da C. brasiliana, previamente realizado pelo nosso grupo de pesquisa, foram selecionados, como genes alvo para validação neste estudo de campo, os genes Citocromo P450 (CYP2AU1 e CYP2B-like), Fatty Acid Binding Protein (FABP), Sulfotransferase1C1 (SULT), Glutationa S-transferases (GSTO e GSTmicrossomal), Glutationa Peroxidase (GPx), Catalase (CAT) e Superóxido Dismutase (SOD), os quais estão associados, principalmente, às respostas de defesa contra o estresse oxidativo e com o processo de biotranformação. O mesmo padrão de transcrição foi constatado nos dois experimentos no tempo de exposição de 24h para os genes FABP, SULT, CYP2AU1 e CYP2B-like, assim como para FABP no tempo de 96h. A transcrição de outros genes, como CAT em 24h e CYP2AU1, CYP2B, GSTO e GSTmicrossomal em 96h, mostraram diferenças nos níveis de transcritos entre os grupos expostos e o grupo referência, porém não apresentaram o mesmo padrão de transcrição na análise comparativa entre as duas exposições in situ realizadas. Os níveis mais elevados de transcritos de FABP, SULT e CYPs (CYP2B1-like e CYP2AU1) em ostras do mangue, C. brasiliana, observados para ITAI em 24h, nas duas exposições in situ, permitem sugerir a validação desses genes como biomarcadores de contaminação ambiental por esgoto sanitário.

Dissertação (mestrado) - Univesidade Federal de Santa Catarina, Centro Tecnológico. Programa de Pós-Graduação em Biotecnologia. / Made available in DSpace on 2012-10-20T21:58:15Z (GMT). No. of bitstreams: 1 199827.pdf: 1352641 bytes, checksum: f498527ce74dc44b8ea4bd486e271cd6 (MD5)