Introdução: Doenças pulmonares ou infecções que ocorrem no início da vida podem ter permanente impacto na vida adulta. Pouco se sabe sobre o perfil de células do sistema imunológico em pulmões de crianças lactentes. Objetivo: Descrever o perfil de células do sistema imunológico no pulmão de lactentes sem doença pulmonar. Métodos: Amostras de pulmões histologicamente normais, obtidas através de autópsia de dez crianças que morreram de causas acidentais ou de doenças não pulmonares, foram marcadas por anticorpos contra linfócitos B e T, macrófagos, células NK (natural Killer), células citotóxicas, células dendríticas e mastócitos. As células foram quantificadas no epitélio, na camada interna, na camada externa das vias aéreas e nos septos alveolares. Membrana basal e septos alveolares foram medidos através de análise de imagem. Resultados expressos em células/mm de membrana basal epitelial brônquica ou alveolar. Resultados: A mediana das idades foi 2,5 meses (1-730 dias). Os resultados mostraram que a camada interna apresentou pequena densidade celular. No epitélio da via aérea e no parênquima houve predominância de células que estão relacionadas com a imunidade inata, tais como: CD56+, Granzyme + e CD68+. A camada externa e o parênquima alveolar apresentaram a maior densidade celular. Poucas células T CD4+ e células dendríticas foram encontradas na maioria dos compartimentos do pulmão. Conclusão: Há uma compartimentalização de células relacionadas com o sistema imunológico ao longo da via aérea e parênquima dos pulmões das crianças estudadas. Esta configuração pode estar relacionada com o desenvolvimento dos mecanismos de defesa da imunidade inata e da imunidade adquirida. Este conhecimento é importante para entender os mecanismos da imunocompetência pós-natal dos pulmões / Introduction: Pulmonary diseases or infections occurring early in life may have a permanent impact in adulthood. Little is known about the normal immune cell profile in the lungs of infants. Objective: To describe the immune cell profile of infants without lung disease. Methods: Histologically normal lung samples obtained at autopsy of ten infants that died either due to incidental or inflicted causes or non-pulmonary diseases were stained for antibodies against B and T lymphocytes, macrophages, NK cells, cytotoxic cells, dendritic cells and mast cells. Cells were quantified in the airway epithelial layer, inner layer, outer layer and alveolar septa. Basement membrane or alveolar septa lengths were assessed by image analysis. Results are expressed as cells/mm. Results: The median age of patients was 2.5 months and ranged from 1- 730 days. The inner layer of the airways was the region with the smallest density of cells. There was a predominance of cells related to the innate immunity such as CD56+, Granzyme B+ and CD68+ cells in the epithelial layer and alveolar parenchyma. The outer layer and the lung parenchyma presented the highest cellular density. There were very few CD4+ T cells or dendritic cells in most of the lung compartments. Conclusions: There was a compartmentalization of immune cells along airways and parenchyma in infants, which may be related to the development of innate and acquired lung defense mechanisms. This knowledge is important to understand mechanisms of postnatal immune competence of the lungs

Em termos de importância no processo de invasão de tumores e metástases, o desequilíbrio entre a expressão das gelatinases e seus inibidores teciduais resulta em degradação do principal constituinte da matriz extracelular, o colágeno tipo IV, favorecendo os processos de invasão tumoral e metástase. Foram avaliadas 53 lesões de 47 cães submetidos a cirurgia excisional com confirmação diagnóstica de mastocitoma por avaliação histopatológica e imuno-histoquímica para MMP-2, MMP- 9, TIMP-2 e TIMP-1. Os mastocitomas foram classificados em graus I (bem diferenciados), II (moderadamente diferenciados) a III (pouco diferenciados), segundo os critérios estabelecidos por Patnaik, Ehler e Macewen (1984) e as mesmas lesões foram classificadas em alto e baixo grau de malignidade de acordo com o sistema proposto por Kiupel et al. (2011). Os resultados obtidos através da imuno-positividade de mastócitos e leucócitos polimorfonucleraes para as quatro proteínas foram comparados as duas graduações estabelecidas, bem como ao tempo de sobrevida pós-cirúrgica e a mortalidade em função do tumor. Verificou-se que as metaloenzimas e seus inibidores não demonstram nenhum tipo de associação de expressão entre elas. Dentre os marcadores imuno-histoquímicos, a expressão mastocitária de TIMP-1 apresentou associação com o tempo de sobrevida, independente do tratamento quimioterápico adjuvante. Quanto menor a expressão de TIMP-1 nos mastócitos, maiores as taxas de mortalidade e menores os períodos de sobrevida. Enquanto que MMP-2, MMP-9 e TIMP-2 não foram indicadores prognósticos para esta neoplasia. Assim, nossos resultados mostram que o TIMP-1 apresentou-se como bom indicador de sobrevida e, portanto, sugere-se que a utilização deste índice prognóstico adicional a classificação histológica pode aumentar a precisão de prognostico dos mastocitomas em cães auxiliando na adequação de terapias apropriadas / In terms of importance regarding to tumor invasion process and metastasis , the imbalance between the expression of gelatinases and their tissue inhibitors results in degradation of the main constituent of the extracellular matrix, collagen type IV, favoring the processes of tumor invasion and metastasis. Fifty-three lesions, of 47 dogs submitted to surgical excision confirmed the diagnosis of mast cell tumor were evaluated by histopathologic examination and immunohistochemistry for MMP-2, MMP-9, TIMP-2 and TIMP-1. Mast cell tumors were histologically classified as grades I (well differentiated), II (moderately differentiated) to III (poorly differentiated), according to the criteria established by Patnaik, Ehler and MacEwen (1984) and the same lesions were classified as high and low-grade of malignancy according to the system proposed by Kiupel et al. (2011). The results obtained by the immunopositivity of mast cells and polymorphonuclear leukocytes to the four proteins were compared with two established graduations, as well as to post-surgical survival times and mortality due to mast cell disease. It could be verified that metalloenzymes and their inhibitors do not establish any association between the expression of the cell types evaluated. Within the immunohistochemical markers, mast cell expression of TIMP-1 was associated with survival time, independent of adjuvant chemotherapy. The lower the expression of TIMP-1 in mast cells, higher the mortality rates and smaller post-cirurgical survival time. While MMP-2, MMP-9 and TIMP-2 levels were not prognostic indicators for this cancer. Thus, our results show that the TIMP-1 appeared as a good indicator of survival time and therefore it is suggested that the use of this prognostic index as additional histological classification can increase the accuracy of prognosis of mast cell tumors in dogs assisting in the adaptation of appropriate therapies

Introdução: Doenças pulmonares ou infecções que ocorrem no início da vida podem ter permanente impacto na vida adulta. Pouco se sabe sobre o perfil de células do sistema imunológico em pulmões de crianças lactentes. Objetivo: Descrever o perfil de células do sistema imunológico no pulmão de lactentes sem doença pulmonar. Métodos: Amostras de pulmões histologicamente normais, obtidas através de autópsia de dez crianças que morreram de causas acidentais ou de doenças não pulmonares, foram marcadas por anticorpos contra linfócitos B e T, macrófagos, células NK (natural Killer), células citotóxicas, células dendríticas e mastócitos. As células foram quantificadas no epitélio, na camada interna, na camada externa das vias aéreas e nos septos alveolares. Membrana basal e septos alveolares foram medidos através de análise de imagem. Resultados expressos em células/mm de membrana basal epitelial brônquica ou alveolar. Resultados: A mediana das idades foi 2,5 meses (1-730 dias). Os resultados mostraram que a camada interna apresentou pequena densidade celular. No epitélio da via aérea e no parênquima houve predominância de células que estão relacionadas com a imunidade inata, tais como: CD56+, Granzyme + e CD68+. A camada externa e o parênquima alveolar apresentaram a maior densidade celular. Poucas células T CD4+ e células dendríticas foram encontradas na maioria dos compartimentos do pulmão. Conclusão: Há uma compartimentalização de células relacionadas com o sistema imunológico ao longo da via aérea e parênquima dos pulmões das crianças estudadas. Esta configuração pode estar relacionada com o desenvolvimento dos mecanismos de defesa da imunidade inata e da imunidade adquirida. Este conhecimento é importante para entender os mecanismos da imunocompetência pós-natal dos pulmões / Introduction: Pulmonary diseases or infections occurring early in life may have a permanent impact in adulthood. Little is known about the normal immune cell profile in the lungs of infants. Objective: To describe the immune cell profile of infants without lung disease. Methods: Histologically normal lung samples obtained at autopsy of ten infants that died either due to incidental or inflicted causes or non-pulmonary diseases were stained for antibodies against B and T lymphocytes, macrophages, NK cells, cytotoxic cells, dendritic cells and mast cells. Cells were quantified in the airway epithelial layer, inner layer, outer layer and alveolar septa. Basement membrane or alveolar septa lengths were assessed by image analysis. Results are expressed as cells/mm. Results: The median age of patients was 2.5 months and ranged from 1- 730 days. The inner layer of the airways was the region with the smallest density of cells. There was a predominance of cells related to the innate immunity such as CD56+, Granzyme B+ and CD68+ cells in the epithelial layer and alveolar parenchyma. The outer layer and the lung parenchyma presented the highest cellular density. There were very few CD4+ T cells or dendritic cells in most of the lung compartments. Conclusions: There was a compartmentalization of immune cells along airways and parenchyma in infants, which may be related to the development of innate and acquired lung defense mechanisms. This knowledge is important to understand mechanisms of postnatal immune competence of the lungs

Orientador: Cristiane Damas Gil / Coorientador: Sonia Maria Oliani / Banca: Eloísa Amália Vieira Ferro / Banca: Newton Antonio Bordin Jr / Resumo: A endometriose é uma doença inflamatória crônica, de etiologia multifatorial caracterizada pela implantação e crescimento do endométrio fora da cavidade uterina (endométrio ectópico). Nas lesões de endometriose, os mastócitos aparecem em elevado número, no entanto, poucos estudos investigaram seus mediadores inflamatórios na patogênese dessa doença. Entre os mediadores dos mastócitos ressaltamos a anexina A1 (ANXA1), proteína de 37 kDa com múltiplas ações biológicas como inibição da transmigração de leucócitos, proliferação celular e apoptose. Tais efeitos são mediados por receptores para peptídeos formilados (FPRs), especialmente FPR1. Assim, o objetivo desse trabalho foi investigar o papel das células inflamatórias, particularmente a ativação e heterogeneidade dos mastócitos, sua correlação com a expressão e o mecanismo de ação da ANXA1 em biópsias de endométrios eutópicos (controle, n=10) e ectópicos (endometriose de parede abdominal, n=18). As amostras de endométrio ectópico foram coletadas entre julho de 2003 e janeiro de 2012, incluídas em parafina e cedidas pelo Departamento de Patologia da FAMERP. As biópsias de endométrios eutópicos foram coletadas de pacientes sem quadro clínico de endometriose, entre junho de 2011 e junho de 2012, com a colaboração do Departamento de Ginecologia e Obstetrícia da FAMERP. Essas biópsias foram processadas para: (i) análises histopatológicas, (ii) quantificação de células inflamatórias (neutrófilos e mastócitos) e (iii) imuno-histoquímica utilizando anticorpos específicos para estudo da heterogeneidade dos mastócitos (triptase e quimase), da expressão da ANXA1 e do receptor FPR1 nos tecidos. A análise histopatológica das lesões de endometriose mostrou... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract: Endometriosis is a chronic inflammatory disease of multifactorial etiology, characterized by implantation and growth of endometrium outside the uterine cavity (ectopic endometrium). Endometriotic lesions presented a high number of mast cells, however, few studies have investigated their inflammatory mediators in the pathogenesis of this disease. Among these mediators we emphasize annexin A1 (ANXA1), a 37 kDa protein with multiple biological actions like inhibition of leukocyte transmigration, cellular proliferation and apoptosis. Such effects are mediated by formyl peptide receptors (FPRs), especially FPR1. Thus, the purpose of this study was to investigate the role of inflammatory cells, particularly the activation and heterogeneity of mast cells, and its correlation with expression and mechanism of action of ANXA1 in biopsies of eutopic (control, n = 10) and ectopic endometrium (abdominal wall endometriosis; n = 18). The samples of ectopic endometrium were collected between July 2003 and January 2012, embedded in paraffin and provided by the Department of Pathology of FAMERP. Biopsies of eutopic endometrium were collected from patients without clinical features of endometriosis, between June 2011 and June 2012, with the contribution of the Department of Obstetrics and Gynecology of FAMERP. These biopsies were processed for: (i) histopathology, (ii) the quantification of inflammatory cells (neutrophils and mast cells) and (iii) immunohistochemistry using specific antibodies to study the heterogeneity of mast cells (chymase and tryptase), and expression of ANXA1 and FPR1 receptor in tissues. Histopathological analysis of endometriotic lesions showed two morphological patterns: glandular pattern of mixed differentiation (presence of differentiated glands with simple prismatic epithelium and... (Complete abstract click electronic access below) / Mestre

Submitted by Automação e Estatística (sst@bczm.ufrn.br) on 2018-06-05T21:48:08Z No. of bitstreams: 1 JulianaCamposPinheiro_DISSERT.pdf: 3156974 bytes, checksum: c1f3d2042d35ddeed6bb80575a688402 (MD5) / Approved for entry into archive by Arlan Eloi Leite Silva (eloihistoriador@yahoo.com.br) on 2018-06-11T19:08:18Z (GMT) No. of bitstreams: 1 JulianaCamposPinheiro_DISSERT.pdf: 3156974 bytes, checksum: c1f3d2042d35ddeed6bb80575a688402 (MD5) / Made available in DSpace on 2018-06-11T19:08:18Z (GMT). No. of bitstreams: 1 JulianaCamposPinheiro_DISSERT.pdf: 3156974 bytes, checksum: c1f3d2042d35ddeed6bb80575a688402 (MD5) Previous issue date: 2018-02-27 / Os mastócitos são células secretoras que liberam diferentes mediadores químicos, dentre eles a triptase, participando tanto de estímulos fisiológicos quanto patológicos. A Ecaderina é um elemento da família das caderinas conhecida por desempenhar um papel importante na regulação da adesão intercelular em tecidos epiteliais. O presente estudo se propôs a avaliar a relação entre mastócitos e a expressão da E-caderina em ceratocistos odontogênicos e cistos radiculares. A avaliação imuno-histoquímica da triptase consistiu na quantificação de mastócitos degranulados e não degranulados em 15 campos, sendo 5 no tecido epitelial, 5 no tecido conjuntivo superficial e 5 campos no tecido conjuntivo profundo. A avaliação da E-caderina foi realizada de forma semi-quantitativa, utilizando os escores: 1 (0 a 50%) e 2 (>50%), sendo observado também o padrão de imunorreatividade celular (membranar, citoplasmática, membranar e citoplasmática) além da verificação do tamanho das lesões a partir da coleta de dados nas fichas clínicas dos pacientes. A análise das lesões císticas estudadas revelou maior média total de mastócitos nos cistos radiculares, quando comparados aos ceratocistos odontogênicos (IC 95%). No que diz respeito a quantidade de mastócitos no componente epitelial, verificou-se maior mediana nos cistos radiculares em relação aos ceratocistos odontogênicos, já no tecido conjuntivo constatou-se que os ceratocistos odontogênicos apresentaram a maior mediana. Ao verificar a densidade de mastócitos degranulados e não degranulados através do teste não paramétrico de Kruskal-Wallis, constatou-se que as maiores concentrações estavam relacionadas a mastócitos degranulados no epitélio de cistos radiculares (KW=30,343; p=0,000), sendo que nos ceratocistos odontogênicos as maiores densidades desses tipos celulares degranulados foram encontrados no tecido conjuntivo (KW=0,092; p=0,762). Ao se examinar a expressão da E-caderina no componente epitelial, observou-se uma similaridade entre as lesões císticas com maior expressão nos ceratocistos odontogênicos (p=0,798) que apresentaram marcação membranar em 63.3% dos casos. Realizando a análise da correlação de Spearman (r) foi observada uma correlação negativa entre a expressão da E-caderina e o número total de mastócitos (r= -0,311; p= 0,016), número de mastócitos degranulados (r= -0,255; p= 0,049) e a localização desses tipos celulares no tecido conjuntivo total e profundo tanto nos cistos radiculares quanto nos ceratocistos odontogênicos. Observou-se também, outra correlação negativa entre os mastócitos intraepiteliais (r= -0,265; p=0,016) e o tamanho das lesões císticas. Diante desses achados, verificamos que a maior concentração de mastócitos nos cistos radiculares confirma a sua natureza inflamatória, destacando a maior quantidade de mastócitos degranulados no componente epitelial, refletindo em menor expressão de e-caderina quando comparados aos ceratocistos odontogênicos, sugerindo desta forma, uma possível atuação da triptase na alteração das junções de adesão e consequente aumento na permeabilidade epitelial. No que diz respeito ao tamanho das lesões, verificou-se que as maiores densidades mastocitárias no componente epitelial foram identificadas em lesões menores, sugerindo uma atuação desses tipos celulares em uma etapa inicial de crescimento das lesões císticas estudadas. / Mast cells are secretory cells that release different chemical mediators, among them tryptase, participating in both physiological and pathological stimuli. E-cadherin is an element of the cadherin family known to play an important role in the regulation of intercellular adhesion in epithelial tissues. The present study aimed to evaluate the relationship between mast cells and E-cadherin expression in odontogenic keratocysts and radicular cysts. The immunohistochemical evaluation of tryptase consisted of the quantification of degranulated and non-degranulated mast cells in 15 fields, 5 in the epithelial tissue, 5 in the superficial connective tissue and 5 fields in the deep connective tissue. The evaluation of E-cadherin was performed semi-quantitatively, using the scores: 1 (0 to 50%) and 2 (> 50%), also observing the cellular immunoreactivity pattern (membrane, cytoplasmic, membrane and cytoplasmic) in addition to the verification of the size of the lesions from the data collection in the clinical records of the patients. The analysis of the cystic lesions studied revealed a higher total mean number of mast cells in the radicular cysts when compared to odontogenic keratocysts (95% CIs). With regard to the amount of mast cells in the epithelial component, a higher median was observed in the radicular cysts in relation to odontogenic keratocysts; in the connective tissue, odontogenic keratocysts were the largest median. When verifying the density of degranulated and non-degranulated mast cells through the Kruskal-Wallis non-parametric test, it was found that the highest concentrations were related to degranulated mast cells in the epithelium of radicular cysts (KW = 30,343; p = 0,000). Odontogenic keratocysts the highest densities of these degranulated cell types were found in connective tissue (KW = 0,092; p = 0,762). When examining the expression of E-cadherin in the epithelial component, a similarity was observed between cystic lesions with greater expression in odontogenic keratocysts (p = 0,798), which presented membrane marking in 63.3% of the cases. Spearman's correlation analysis showed a negative correlation between E-cadherin expression and total mast cells (r = -0,311; p = 0,016), number of degranulated mast cells (r = -0,255; p = 0,049) and the location of these cell types in total and deep connective tissue in both radicular cysts and odontogenic keratocysts. There was also another negative correlation between intraepithelial mast cells (r = -0,265; p = 0,016) and cystic lesion size. In view of these findings, we observed that the higher concentration of mast cells in the radicular cysts confirms their inflammatory nature, highlighting the greater amount of degranulated mast cells in the epithelial component, reflecting less e-cadherin expression when compared to odontogenic keratocysts. Possible tryptase activity in the alteration of adhesion joints and consequent increase in epithelial permeability. Regarding the size of the lesions, it was verified that the higher mast cell densities in the epithelial component were identified in smaller lesions, suggesting an action of these cell types in an initial stage of growth of cystic lesions studied.

Orientador: Julio Lopes Sequeira / Banca: Louisiane de Carvalho Nunes / Banca: Alessandre Hataka / Banca: Sheila Canevese Rahal / Banca: Noeme Souza Rocha / Resumo: O presente trabalho teve como objetivo quantificar e avaliar presença dos mastócitos nos diferentes tipos de neoplasias malignas da glândula mamária da cadela. Através de estudo retrospectivo, foi empregado à coloração histoquímica do azul de toluidina, para detecção de mastócitos, e a técnica imunoistoquímica, usando os anticorpos Ki-67 para proliferação celular e a caspase-3 para identificar as células em apoptose. As amostras (n= 102) foram descritas conforme a Classificação Histopatológica para Neoplasia Mamária do Cão e do Gato da Organização Mundial de Saúde. Os animais sem raça definida apresentaram o maior número de casos, e entre os animais com raça definida, a raça Poodle foi a que apresentou o maior número de casos. A idade média das cadelas foi de 8,6 anos. Os tipos morfológicos de neoplasias encontradas foram o carcinoma in situ com 0,98%, carcinoma complexo com 45,09%, carcinoma simples com 35,29%, carcinossarcoma com 10,78% e os tipos especiais de carcinomas que representaram 7,89% dos casos. Os mastócitos estavam presentes no foco neoplásico em 96,08% das amostras. 99% das amostras apresentaram marcação positiva para o anticorpo Ki-67 (MIB-1). Já a imunomarcação pela caspase-3 revelou marcação positiva em 95% dos casos. Foi observada correlação significativa positiva entre o número de mastócitos e o índice de proliferação (Ki-67) (p˂0,05) nos carcinomas do tipo complexo. Os mastócitos mostraram influência na proliferação das células dos carcinomas complexos, contudo, é necessário mais estudos para elucidar o papel destas células no índice de proliferação / Abstract: The presented study aimed to quantify and evaluate the presence or absence of mast cells in different types of malignancies in the mammary gland of the female dogs. For this, it was used the blue toluidine in the histochemical colours with the purpose of detecting mast cells, and immunohistochemical techniques, using the antibodies Ki-67 to the proliferation of the cells and caspase-3 antibody to identify undergoing cells in apoptosis. All samples were put according to the pathological classification for dog's and cat's breast cancer in the World Health Organization. About the racial pattern, it was observed a higher number of cases in animals without breed, and in the animals with breed, the Poodle was the one with the largest number of cases. The average age of the female dogs was 8.6 years old. The morphological types of neoplasm founded were: carcinoma in situ with 0.98% (1/102), complex carcinoma with 45.09% (46/102), simple carcinoma in 35.29% (36/102) carcinosarcom in 10.78% (11/102) and special types of carcinomas that were represented with 7.89% (08/102) of the total number of cases. The mast cells were presented in the neoplasic focus with 96.08% (98/102), and it prevailed in areas where there are lots of human tissues, especially around the vessels. About the immune numbers of samples using the Ki-67 (MIB-1), it was conclude that 99% (101/102) showed positive results. However, using the caspase-3 it was showed positive results in 95% (97/102). About the influence of mast cells in the proliferation of neoplasic cells, it was observed a significant positive correlation between the number of mast cells and the proliferation (Ki-67) for the complex carcinoma (p 0.05). The correlation between death and cells proliferation showed a negative significant relation in spindle cells carcinomas, between the apoptotic number (Caspase-3) and the proliferation number (NORs). How bigger is the number / Doutor

Submitted by VICTOR GUSTAVO BALERA BRITO (victor_balera@hotmail.com) on 2018-07-03T00:06:47Z No. of bitstreams: 1 Dissertação Mestrado (Victor G B Brito) (FINAL).pdf: 4446716 bytes, checksum: 348cbec88d5fb2161f9d4aaa27992ac2 (MD5) / Approved for entry into archive by Ana Paula Rimoli de Oliveira null (anapaula@foa.unesp.br) on 2018-07-03T12:24:17Z (GMT) No. of bitstreams: 1 brito_vgb_me_araca_int.pdf: 4446716 bytes, checksum: 348cbec88d5fb2161f9d4aaa27992ac2 (MD5) / Made available in DSpace on 2018-07-03T12:24:17Z (GMT). No. of bitstreams: 1 brito_vgb_me_araca_int.pdf: 4446716 bytes, checksum: 348cbec88d5fb2161f9d4aaa27992ac2 (MD5) Previous issue date: 2018-06-13 / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior (CAPES) / Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de São Paulo (FAPESP) / Introdução: A doença periodontal (DP) é uma desordem inflamatória dos tecidos de suporte dos dente, iniciada pelo acumulo de biofilme bacteriano, apresentando consequências locais e sistêmicas. A coexistência de doenças sistêmicas, como a hipertensão, pode levar a uma inflamação exacerbada, maior reabsorção óssea e dano sistêmico pronunciado. Além disso, células imunes residentes têm importante papel na progressão da DP, porém, a participação dos mastócitos (MC) ainda não é bem compreendida. Objetivos: Avaliar o papel dos MC sobre o metabolismo ósseo local (mandíbula) e sistêmico (fêmur), em modelo animal normotenso (ratos Wistar) e hipertenso (ratos SHR) com DP. Métodos: Ratos machos Wistar e SHR (10 semanas) foram utilizados. A depleção de MC foi conduzida pelo pré-tratamento com o composto 48/80 e a DP foi induzida por ligadura bilateral nos primeiros molares inferiores, mantida por 15 dias. Foi realizada a identificação de MC no tecido gengival, por coloração com Azul de Toluidina. A perda óssea alveolar e parâmetros de arquitetura óssea na mandíbula e fêmur foram avaliados por microtomografia computadorizada, a expressão gênica de marcadores de formação, remodelamento e reabsorção na mandíbula e fêmur foram avaliada por RT-PCR em tempo real, e a produção de citocinas nos tecidos de interesse foi avaliada por ELISA. Principais resultados: Observamos significativa perda óssea induzida por DP, principalmente no SHR, em comparação ao Wistar, e a depleção de MC foi capaz de prevenir esta perda. A DP levou a expressão aumentada de Opn, Opg, Rankl e Rank, Trap, Ctsk, Vtn, Itga5 e Itgb5, além de aumento na produção de TNF-α, IL-6, IL-10 e CXCL3 na mandíbula, o que foi reduzido em animais depletados de MC. No fêmur, a DP não levou a alterações da arquitetura óssea, mas foi capaz de aumentar a expressão de Runx2, Opn, Opg, Rankl, Rank, Trap, Mmp2, Mmp9, Vtn, Itga5 e Itgb5, o que também foi significativamente reduzido pela depleção de MC. Conclusões: Nossos dados sugerem um importante papel dos MC nas consequências ósseas locais (mandíbula) da DP, especialmente nos animais SHR, além dos efeitos sistêmicos (fêmur) onde os MC possivelmente têm participação na modulação da expressão de marcadores ósseo, alterados pela DP, o que foi mediado por vias diferentes das observadas na resposta local. / Introduction: Periodontal disease (PD) is an inflammatory disorder of the tissues supporting the teeth, which start from the bacterial biofilm accumulation, and results in local and systemic damage. The coexistence of systemic diseases, such as hypertension, can lead to exacerbated inflammation, increased alveolar bone resorption and increased systemic damage. In addition, resident immune cells have an important role in PD progression, however the mast cells (MC) participation is still not well understood. Aims: To evaluate the role of MC in the local (mandible) and systemic (femur) bone metabolism in a normotensive (Wistar) and hypertensive (SHR) rats with PD. Methods: Males Wistar and SHR rats (10-week old) were used. MC depletion was conducted by compound 48/80 treatment and PD was induced by bilateral ligature placed in the lower first molars, which was maintained for 15 days. The identification of MC in the gingival tissue was done by Toluidine Blue staining, alveolar bone loss and bone architecture parameters of mandible and femurs were evaluated by micro-computed tomography, bone markers gene expression on the mandible and femur were evaluated by real time RT-PCR, and the cytokines production was evaluated by ELISA. Key results: We observed a more significant PD-induced bone loss in SHR, compared to Wistar, and MC depletion was able to prevent this loss. PD increased the expression of Opn, Opg/ Rankl/Rank, Trap, Ctsk, Vtn, Itga5 and Itgb5, as well as increased production of TNF-α, IL-6, IL-10 and CXCL3 in the mandible, what was prevented by MC depleted animals. In the femur, PD did not change bone architecture parameters, but was able to increase expression of Runx2, Opn, Opg/Rankl/Rank, Trap, Mmp2, Mmp9, Vtn, Itga5 and Itgb5, which also was significantly reduced by MC depletion. Conclusions: Our data suggest an important role of MC in the local bone consequences (mandible) of PD, especially in SHR, as well the systemic effects (femur), where MC may have a role in bone dynamics by modulating the expression of bone markers, altered by PD, through different mechanism from those observed in the local response. / 15/03965-2

Made available in DSpace on 2015-07-22T20:49:21Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2010-01-27 / A artrite reumatóide é uma doença caracterizada por formação de autoanticorpos, inflamação crônica e edema articular, resultando em lesão das articulações afetadas e do osso adjacente. No tratamento dessa doença, tem sido utilizado glicocorticóides (GCs), que induzem a expressão de genes dos mediadores anti-inflamatórios, como a proteína anexina 1 (Anx-A1), e a regulação dos pró-inflamatórios. Na patogênese da artrite, estão envolvidas células inflamatórias como os mastócitos, que, sob ativação, liberam potentes mediadores pró-inflamatórios contidos nos seus grânulos citoplasmáticos. No presente estudo, avaliamos a ocorrência dos mastócitos na evolução da artrite induzida por colágeno (CIA) e os seus efeitos sob os neutrófilos, leucócitos que auxiliam na promoção da inflamação articular. As avaliações dos volumes de patas dos camundongos experimentais mostraram que os sinais clínicos da artrite aumentaram gradualmente, até 42 dias após a imunização com o colágeno. As análises dos joelhos e dos dígitos mostraram influxo de neutrófilos nas articulações nos 21º e 32º dias, respectivamente, após a CIA. Histologicamente, os joelhos e dígitos apresentaram diferentes níveis de infiltração leucocitária, mostrando que essas articulações são afetadas em diferentes períodos da inflamação. A migração neutrofílica foi acompanhada por aumento do número de mastócitos nos dígitos e intenso processo de desgranulação nos joelhos, no 21º dia após a CIA. Para avaliar os efeitos dessas células inflamatórias na CIA, os animais foram tratados com os fármacos prednisolona, comumente utilizado na clínica médica, ou nedocromil, estabilizador da membrana de mastócitos. Após a administração dos fármacos, a ocorrência da artrite não foi modificada, embora a migração neutrofílica tenha sido reduzida. O GC prednisolona causou aumento dos mastócitos nos tecidos articulares, enquanto a ação do nedocromil inibiu a proliferação e migração de neutrófilos, com efeitos potencialmente aumentados nos dígitos. A imunização com o colágeno bovino induziu o processo inflamatório caracterizado, principalmente, por ativação e desgranulação dos mastócitos, com consequente efeito na propagação do processo inflamatório e no recrutamento dos neutrófilos. Assim, o perfil inflamatório das células estudadas, nos dígitos e nos joelhos, sugeriu que o acometimento das articulações durante o desenvolvimento da CIA é tempodependente. Nos estudos relacionados com a artrite reumatóide (AR) humana investigamos a mobilização endógena da proteína Anx-A1 e do seu receptor para peptídeos formilados tipo 1 (FPRL-1) nos linfócitos circulantes de pacientes em atividade ou em remissão. As análises ultraestruturais mostraram colocalização e alta expressão da Anx-A1 e do FPRL-1, principalmente no núcleo e citosol dos linfócitos de pacientes com AR em atividade, em relação aos remissivos. Esses dados sugerem que a Anx-A1 endógena é ativada durante a AR, podendo estar correlacionada com o receptor FPRL-1. Dessa forma, chegamos à conclusão de que o estudo dos tipos celulares envolvidos na artrite e a atividade que a proteína Anx- A1 pode exercer durante a evolução desta doença poderão definir o desenvolvimento de novas terapias anti-inflamatórias baseadas no sistema Anx-A1. / Rheumatoid arthritis (RA) is a disease characterized by auto-antibody formation, chronic inflammation and joint oedema resulting in injury of affected cartilage and adjacent bone. In the treatment of this disease glucocorticoids (GC) have been used, wich induce genic expression of anti-inflammatory mediators, such as the annexin 1 protein (Anx-A1), and proinflammatory ones. In the pathogenesis of arthritis inflammatory cells such as mast cells are involved. Under activation these release potent proinflammatory mediators, wich are stored in their citoplasmic granules. In the present study we have analyzed the occurrence of mast cells during collageninduced arthritis (CIA) and their effect on neutrophils, a kind of leukocyte that promotes joint inflammation. Paw volume analysis of experimental mice showed that clinical signs of rheumatoid arthritis gradually increased until 42 days after collagen immunization. Knee and digit analysis showed neutrophil influx into the joints on the 21st and 32nd days, respectively, after CIA. Histologically, knees and digits presented different levels of leukocyte infiltration, showing that these joints are affected at different stages of the inflammation. Neutrophil migration was accompanied by an augmented number of mast cells in the digits and an intense process of degranulation in the knees, on the 21st day after CIA. To evaluate the effects of these inflammatory cells in CIA the animals were treated with prednisolona, commonly used in clinical treatment, and nedocromil, a membrane mast cell stabilizer drug. After drug administration, although the occurrence of arthritis was not modified, neutrophilic migration to the tissue was reduced. The prednisolona GC produced a marked mast cell migration to the joints and nedocromil action inhibited neutrophil proliferation and migration, with a profound effect on the digit joints. Collagen immunization induced an inflammatory process mainly characterized by mast cell activation and degranulation, with a profound effect on the maintenance of the inflammatory process and neutrophil recruitment. From this point of view, the profile of the cells studied in the digits and knees suggested that the joints are affected in a time-dependent manner during CIA development. In the studies related to human rheumatoid arthritis (RA) we investigated endogenous mobilization of the Anx-A1 protein and its formyl peptide receptor like 1 (FPRL-1) in the circulating lymphocytes of active and remissive patients. Ultrastructural analysis showed co-localization and high expression of Anx-A1 and FPRL-1, especially in the nucleus and cytosol of the lymphocytes of active RA patients in relation to remissive ones. These data suggest that endogenous Anx-A1 is activated during RA and this may be correlated to FPRL- 1. In this way we may conclude that the study of cellular types involved in arthritis and that the role that Anx-A1 protein may play during disease development may contribute to the development of new anti-inflammatory therapies based on the Anx- A1 system. / TEDE / BV UNIFESP: Teses e dissertações

Made available in DSpace on 2015-07-22T20:50:50Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2010-11-24 / Introdução: O retalho cutâneo é um procedimento cirúrgico frequente na cirurgia plástica, tem como principal complicação a formação de necrose. Desta maneira, diversos estudos utilizaram o laser de baixa intensidade para aumentar a viabilidade de retalhos. Atualmente, os diodos emissores de luz tem sido introduzidos, como alternativa da luz laser. Objetivo: Avaliar o efeito da terapia a laser de baixa intensidade e diodo emissor de luz na viabilidade do retalho cutâneo randômico em ratos. Materiais e métodos: Foram utilizados 48 animais distribuídos em 4 grupos; em todos os animais foi realizado o retalho cutâneo randômico: grupo 1 simulação; grupo 2 radiação laser 660nm, com densidade de energia 5J/cm2; grupo 3 radiação LED 630nm, 5J/cm2 e grupo 4 radiação laser 660nm, 89J/cm2. A irradiação foi realizada após o ato operatório e nos 4 dias subsequentes, em 1 ponto a 2,5cm da base cranial do retalho. No 7º dia pós-operatório, foi avaliada a densidade vascular, número de mastócitos e porcentagem de área de necrose. Resultados: A porcentagem de necrose foi significativamente menor no grupo 3 (14,08%) e no grupo 4 (14,03%) em relação ao grupo 1 (28,70%) e ao grupo 2 (22,7%) com p<0,05. Na densidade vascular e número de mastócitos, somente os animais do grupo 3 apresentaram aumento significativo em relação ao grupo 1 (p<0,05). Conclusão: A terapia a laser de baixa intensidade e diodo emissor de luz com as mesmas energias totais foram eficientes no aumento da viabilidade de retalho cutâneo randômico em ratos. / Introduction: The skin flap is a common surgical procedure in plastic surgery, is the main complication of necrosis formation. Thus, several studies have used low level laser therapy to increase flap survival. Currently, LEDs have been introduced as an alternative to laser light. Objective: To evaluate the effect of low level laser therapy and light emitting diode on the viability of random skin flap in rats. Materials and methods: We used 48 animals divided into four groups, in all animals was performed random skin flap (4x10cm): group 1 sham; group 2 laser radiation 660nm, with energy density 5J/cm2; group 3 radiation LED 630nm, 5J/cm2 and Group 4 laser radiation 660nm, 89J/cm2. The irradiation was performed after surgery and 4 days subsequent to a point 2.5 cm from the cranial base of the flap. On the 7th postoperative day was evaluated vascular density, mast cell numbers and percentage of necrotic area. Results: The percentage of necrosis was significantly lower in group 3 (14.08%) and group 4 (14.03%) than in group 1 (28.70%) and group 2 (22.7%) with p <0.05. Vascular density and mast cell numbers, only the animals in group 3 had increased significantly compared to group 1 (p <0.05). Conclusion: The low level laser therapy and light emitting diode with the same total energies were effective in increasing the viability of random skin flaps in rats. / TEDE / BV UNIFESP: Teses e dissertações

Orientador: Renée Laufer Amorim / Banca: Júlio Lopes Sequeira / Banca: Giovana Wingeter Di Santis / Resumo: O mastocitoma cutâneo (MTC) canino é uma neoplasia maligna constituída por mastócitos, que corresponde a aproximadamente 11% das neoplasias cutâneas do cão. A classificação histopatológica em três graus de malignidade, proposta por Patnaik et al. (1984) para os MTCs é o principal fator prognóstico. Recentemente, uma nova classificação com dois graus de malignidade foi proposta (KIUPEL et al., 2011) e parece trazer menor discordância na graduação. Neste estudo foram avaliadas as expressões proteicas de SCF, IGF-1, m-TOR e c-KIT através da técnica de imunoistoquímica (IHQ) em MTCs caninos em busca de novos fatores prognósticos. Analisaram-se as relações entre estas quatro proteínas e, entre IGF-1 e SCF com fatores prognósticos como o grau histológico, índice mitótico e proliferação celular, além de dados epidemiológicos como idade, gênero, porte físico e localização da lesão. Foram utilizadas 133 amostras de MTCs de 133 cães dispostas em lâminas de microarranjo de tecidos (TMA). A associação estatística foi observada entre a expressão de SCF e grau histológico de acordo com Kiupel et al. (2011), índice mitótico, proliferação celular pelo KI-67, localização da Iesão, idade, c-KIT e IGF-1. A expressão do fator de crescimento IGF-1 teve relação com o índice mitótico, o porte físico dos animais e a expressão de c-KIT e m-TOR. A expressão de SCF está relacionada ao padrão aberrante de expressão do seu receptor c-KIT. Com base nas relações observadas podemos concluir que as proteínas IGF-1, m-TOR, SCF e c-KIT interagem no desenvolvimento dos MTCs caninos e que cães de porte grande e gigante apresentam maior expressão de IGF-1, corroborando com maior incidência de MTCs nestas raças / Abstract: The canine mast cell tumor (MTC) is a malignant neoplasm composed of mast cells, which corresponds to approximately 11% of cutaneous neoplasms of the dog. The histopathological classification in three grades of malignancy, proposed by Patnaik et al. (1984), for MTCs is the main prognostic factor. Recently, a new classification with two malignancy degrees was suggested (KIUPEL et al., 2011) and seems to bring less disagreement in diagnosis. We carried out the study evaluating the protein expression of SCF, IGF-1, m-TOR and c-KIT by immunohistochemical technique (IHC) in canine MTCs searching new prognostic factors. We analyzed the relationships between these four proteins, and between IGF-1 and SCF with prognostic factors such as histological grade, mitotic index and cell proliferation, as well as epidemiological data such as age, gender, physical size and location of the lesion. Were used 133 samples of canine MTCs. The statistical association was observed between the expression of SCF and histological grade according to Kiupel et al. (2011), mitotic index, cell proliferation by Ki-67, Iesion location, age, c-KIT and IGF-1. The growth factor IGF-1 expression was related to mitotic index, the animals physical size and the m-TOR expression. The SCF expression is related to the aberrant pattern of expression of its c-KIT receptor. The association between the IGF-1 expression and the animal size was observed, and seems to interact with the m-TOR co-expression. Based on the observed relationships we can conclude that IGF-1, m-TOR, SCF and c-KIT proteins interacts on the development of canine MTCs, and large and giant-sized animals show higher expression of IGF-1, confirming increased incidence of MTCs on these races / Mestre