Foram estudadas as áreas do sistema nervoso central de camundongos ativadas pela exposição de animais alérgicos ao antígeno (ovalbumina ? OVA) bem como uma resposta adaptativa desencadeada a partir da nebulização de OVA em uma caixa de esquiva adaptada. Animais imunizados apresentam aumento de atividade do núcleo paraventricular do hipotálamo e do núcleo central da amígdala após um único desafio intranasal com OVA e evitam entrar no compartimento previamente associado a nebulização com OVA. A ativação das áreas descritas acima é compatível com a elaboração de uma resposta adaptativa (evitar o contato com o antígeno). Animais tornados tolerantes à OVA no dia da imunização primária não apresentam atividade dos núcleos citados nem desenvolvem aversão ao local do desafio, demonstrando que essas alterações são dependentes de anticorpos IgE anti-OVA. Camundongos da linhagem C3H/HeJ, que não desenvolvem inflamação alérgica pulmonar, apresentam as mesmas respostas observadas em camundongos BALB/c, sugerindo que o processo inflamatório não é relevante nesse modelo. O tratamento prévio com cromoglicato dissódico suprime a ativação no SNC e a indução de aversão associada ao desafio com OVA. Esses fatos sugerem em conjunto que a desgranulação de mastócitos mediada por IgE em vias aéreas ative o SNC e desencadeie as alterações comportamentais descritas. / Activation of the central nervous system (CNS) was evaluated following ovalbumin (OVA) challenge in a murine model of asthma, as well as an adaptive response triggered by OVA nebulization during an avoidance test. Immunized animals showed increased activity in the paraventricular nucleous of the hypothalamus and central nucleous of the amygdala after a single intranasal OVA challenge. Furthermore, they avoid a compartment previously associated with the antigen. Activation of these brain areas is compatible with the display of adaptive responses (avoiding contact with the antigen). Induction of immunological tolerance along with primary immunization precludes both CNS activation and avoidance behavior, showing that these responses are IgE-mediated. Mice from the C3H/HeJ strain do not develop lung allergic inflammation but show a similar pattern of brain activity after OVA challenge and mount the same avoidance reaction seen in BALB/c mice, suggesting that an inflammatory infiltrate in the lung is not required in these responses. Prior treatment with dissodium cromoglycate inhibits CNS activation and avoidance behavior. Collectively, these findings demonstrate a role of IgE-mediated mast cell degranulation in signaling an allergic response initiated in the airways to the mouse brain.

Os mastócitos (MC) são células teciduais, ricas em mediadoras inflamatórias, envolvidos na resposta alérgica, com papel imunomodulador cada vez mais reconhecido. Células Dendríticas (DCs), por sua vez, são sabidamente necessárias para a resposta imune, sendo as células apresentadoras de antígenos mais eficientes, capazes de responder prontamente frente à sinais de perigo. Neste trabalho, demonstramos que o contanto celular de DCs com MCs (iDC-MC) induz a geração de DCs com imunofenotipo tolerogênico. As iDC-MC exibiram menor expressão de HLA-DR e maior expressão de PD-L1, assim, não foram capazes de manter uma proliferação alogeneica. Ainda, os linfócitos expostos as iDC-MC induziram maior expressão de FoxP3+, IL-10 e TGF-β, capazes de suprimir a proliferação de linfócitos T naïve estimulados com mitógeno. Além disso, o contato resultou na maior produção de IDO, fenômeno este, bloqueado quando MCs foram tratados com anti-PD-1 ou iDCs tratadas com PD-L1 ou PD-L2, mas a produção se manteve inalterada após o tratamento das iDCs com anti-histamínicos. / Mast cells (MC) are tissue resident cells, rich in inflammatory mediators, involved in allergic reactions, and with an increasingly recognized role in immunomodulation. Dendritic cells (DCs), on the other hand, are central to the determination of immune response patterns, being highly efficient antigen-presenting cells that respond promptly to changes in their microenvironment. Here, we show that direct cell contact between iDCs and MC bends DCs towards tolerance induction. These MC-exposed DCs decreased HLA-DR but increased PD-L1 expression and stimulated T lymphocytes to express FoxP3+, to secrete TGF-β and IL-10, and to suppress the proliferation of mitogen-stimulated naïve T lymphocytes. Furthermore, contact with MC induced DCs to express higher levels of indoleamine-2,3-deoxigenase (IDO), a phenomenon that was blocked by treatment of MC with anti-PD-1 or by the treatment of DCs with anti-PD-L1 or PD-L2, but not by blocking of H1 and H2 histamine receptors on DCs.

Orientador: Ana Paula Girol / Coorientador: Sonia Maria Oliani / Banca: Ana Cláudia Polli Lopes / Banca: Wanessa Silva Garcia Medina / Resumo: O processo de reparo de lesões térmicas pode ser dividido nas fases de inflamação, proliferação e remodelação. No seu processo de desgranulação, os mastócitos (MCs) liberam fatores quimiotáticos, citocinas e proteases, como triptase e quimase, para o meio extracelular, contribuindo na degradação da matriz lesada e síntese de uma nova. Além disso, estudos indicam que os MCs armazenam a proteína anti-inflamatória anexina A1 (AnxA1), envolvida na inflamação, apoptose, crescimento e diferenciação celular. Contudo, não se conhecem relatos da expressão e função da AnxA1 no reparo de queimaduras. Diante disso, os objetivos desse estudo foram quantificar e avaliar a ativação, acúmulo de histamina e heterogeneidade para triptase e quimase dos MCs, bem como, verificar a expressão da AnxA1, quantificar macrófagos, e dosar as citocinas TNF-α, IL-1β, IL-6, IL-10 e a quimiocina MCP-1 em modelo de queimadura de segundo grau em ratos Wistar. Para o desenvolvimento da lesão os animais foram anestesiados e submetidos à aplicação de um bloco metálico aquecido no dorso. Os animais foram divididos em grupos controles e tratados com pomada de sulfadiazina de prata a 1% (SDP 1%). As análises foram realizadas em 3, 7, 14 e 21 dias após injúria, e também em fragmentos de pele normal. Avaliações macroscópicas e histopatológicas da cicatrização confirmaram as características de queimadura de segundo grau e a melhor evolução da cicatrização nos animais tratados. A quantificação dos MCs mostrou grande quantidade de células intactas na pele normal e redução significante dessas células nas fases de inflamação (dia 3) e de proliferação (dia 7). Nas fases de proliferação de matriz (dia 14) e remodelação (dia 21) foi verificada maior quantidade de MCs nos animais controles e essas células foram observadas, principalmente, desgranuladas no dia 14 e... / Abstract: The repair process of thermal injury can be divided into phases of inflammation, proliferation and remodeling. The mast cells (MCs) in their degranulation process, release chemotactic factors, cytokines and proteases, as tryptase and chymase, to the extracellular environment contributing to the degradation of damaged matrix and synthesis of a new one. Moreover, studies indicate that MCs store the antiinflammatory protein annexin A1 (AnxA1) which involved in inflammation, apoptosis, growth and cell differentiation. However, there are no known reports of the expression and function of AnxA1 in burns repair. Thus, the objectives of this study were to quantify, assess the activation, histamine accumulation and heterogeneity for tryptase and chymase of MCs, as well as, check the expression of AnxA1, associated with macrophages quantification and the levels of TNF-α, IL-1β, IL-6, IL-10 and MCP-1 in a second degree burn model in rats. For the development of the lesions, animals were anesthetized for applying a water-heated metal block in the dorso. The animals were divided into control and treated or not with the cream of silver sulfadiazine 1% (SDP 1%). The analyzes were performed on 3, 7, 14 and 21 days after injury, and also in normal skin fragments. Macroscopic and histopathological evaluations of healing confirmed the burning characteristics of second degree and the better progress of wound repair in treated animals. Quantification of MCs showed large amount of intact cells in normal skin and a significant reduction of these cells in the stages of inflammation (day 3) and proliferation (day 7). In the phases of matrix proliferation (day 14) and remodeling (day 21) it was observed increased amount of MCs, only in the control animals, and these cells were mainly degranulated on day 14, but intact on day 21. Also, in the treated group on day 7 and in both groups on day 14, it was ... / Mestre

Orientador: Cristiane Damas Gil / Banca: Rejane Maira Góes / Banca: Jusciele Brogin Moreli / Resumo: Introdução: A dermatite atópica (DA) é provocada tanto pelo desequilíbrio das respostas imunes quanto pela quebra da barreira epitelial. Embora a galectina-1 (Gal-1), proteína ligante de β-galactosídeos, possua efeitos imunomoduladores em várias doenças inflamatórias, as estratégias terapêuticas baseadas em suas propriedades anti-inflamatórias não são conhecidas na DA. Desse modo, avaliamos o efeito do tratamento farmacológico com a proteína recombinante Gal-1 (rGal-1) na imunomodulação da DA em modelo experimental murino. Métodos: Camundongos Balb/c machos foram imunizados por via subcutânea, com ovalbumina (OVA; 5 μg) nos dias 0 e 7. Após a imunização, os animais foram desafiados com 250 μg de OVA diluída em 50 μL de óleo Johnson's Baby ® nos dias 11, 14 a 18 e 21 a 24. Parte dos camundongos sensibilizados foram tratados intraperitonealmente com a proteína rGal-1 (0,3 ou 3 µg/animal) ou dexametasona (1 mg/kg) diluídos em 0,1 mL de salina estéril, na última semana do protocolo experimental, dias 21 a 24 (uma vez ao dia). Após 24 horas do último período de exposição à OVA, ou apenas óleo (Sham), os animais foram anestesiados para coleta de sangue e, posteriormente, realizada a eutanásia por deslocamento cervical para coleta da pele e baço. As análises posteriores foram realizadas por meio de: análises histológicas e quantitativa de mastócitos e eosinófilos na pele, dosagens de IgE anti-ovalbumina e citocinas no sangue e lisado de pele, imuno-histoquímica e western blotting... / Abstract: Introduction: Atopic dermatitis (AD) is caused by both dysregulated immune responses and an impaired skin barrier. Although beta-galactoside binding protein galectin-1 (Gal-1) has immunomodulatory effects in several inflammatory disorders, therapeutic strategies based on its anti-inflammatory properties have not been explored in AD. Thus, we evaluated pharmacological treatment with recombinant Gal- 1 protein (rGal-1) in the immunomodulation of AD in murine experimental model. Methods: Male Balb/c mice were immunized with ovalbumin (OVA, 5µg) on days 0 and 7. After immunization, animals were challenged with 250µg OVA diluted in 50 µL Johnsons's Baby® oil on days 11, 14-18 and 21-24. A subset of animals was treated intraperitoneally with rGal-1 (0.3 or 3 μg/animal) or dexamethasone (1 mg/kg) diluted in 0,1 mL sterile saline, in last week of the experimental protocol, days 21-24 (once a day). After 24 hours of the last OVA challenge, or oil (Sham), animals were anesthetized for blood collection, and subsequently performed euthanasia by cervival dislocation for colletction of skin and spleen. Subsequent analysis were performed by: histological analysis and quantification of mast cells and eosinophils in skin, dosage of IgE anti-OVA and cytokine levels in blood and skin homogenates, immunohistochemistry and western blot to detect Gal-1 and mitogen-activated protein kinases (MAPKs) expression in skin and spleen. Results: Treatment with rGal-1 decreased the clinical signs of dermatitis in BALB/c mice and diminished local eotaxin and IFN- levels. The treatment also suppressed the infiltration of eosinophils and mast cells, which was verified by reduced expression of mouse mast cell protease 6 (mMCP6) and eosinophil peroxidase (EPX). These localized effects are associated with extracellular signal-regulated kinase (ERK) activation and downregulation of endogenous Gal-1. The ... / Mestre

As doenças alérgicas alcançaram proporções mundialmente epidêmicas. A ativação de receptores para IgE, Fc RI, em mastócitos, é o mecanismo chave para a iniciação e propagação das respostas patofisiológicas dos processos alérgicos. Após a interação destas células com um alérgeno, há a ativação de uma cascata de eventos de sinalização, a qual resulta na secreção de mediadores alérgicos pré-formados, através de um processo regulado de exocitose, além da síntese e secreção de mediadores lipídicos e citocinas. Desta forma, a inibição da responsividade dos mastócitos, quando ativados por um alérgeno, representa uma via importante para o desenvolvimento de novos candidatos a fármacos com indicação antialérgica. Neste sentido, este trabalho buscou, num primeiro momento, contribuir com a compreensão dos papéis desempenhados por um glicerofosfolipídeo de membrana, fosfatidilinositol 4,5-bifosfato (PtdIns(4,5)P2), em eventos de sinalização em mastócitos, mediados por IgE. Este trabalho permitiu destacar a importância de PtdIns(4,5)P2 como um regulador chave das respostas de Ca2+ e das alterações de morfologia de mastócitos estimulados por um alérgeno. Foi observado ainda que níveis reduzidos de PtdIns(4,5)P2 determinaram a inibição do processo de endocitose de receptores Fc RI ativados, um evento crucial para a redução da transdução de sinais. Estes resultados não somente trazem um ganho de conhecimento acerca dos detalhes que orquestram os eventos de sinalização em mastócitos estimulados por um alérgeno, como também apontam que a regulação dos níveis de PtdIns(4,5)P2 pode certamente ser apontada como alvo para o desenvolvimento de novas moléculas inibidoras da ativação mastocitária. A segunda etapa deste trabalho teve como objetivo avaliar o potencial inibitório de alguns compostos de origem natural e sintética sobre a degranulação de mastócitos, evento em que mediadores alérgicos, como a histamina, são secretados, em resposta ao estímulo celular. Inicialmente, avaliou-se o efeito inibitório de um conjunto de arilcumarinas sintéticas, estruturalmente relacionadas, sobre a degranulação. Um número significativo de moléculas foram ativas e, dentre elas, algumas substituições junto à estrutura do anel 3-fenilcumarínico, como as hidroxilações das posições 6, 2\'e 5\', puderam ser identificadas como importantes para o potencial bioativo. Finalmente, o trabalho apresentou uma molécula de origem natural, como um potente inibidor da degranulação de mastócitos e da secreção de citocinas. Trata-se da piridovericina, um metabólito secundário, isolado do fungo entomopatogênico Beauveria bassiana. Dessa forma, tanto as cumarinas, como a piridovericina podem ser apontadas como compostos de partida de grande potencial para o desenvolvimento de novos fármacos anti-alérgicos. / Allergic diseases have approached epidemic proportions worldwide. The activation of IgE receptors, Fc RI, from mast cells, is the key event for the initiation and propagation of pathophysiological responses involved in the allergic processes. The interaction between mast cells and allergens triggers a signaling cascade, which results in secretion of pre-formed allergic mediators, through regulated exocytosis, in addition to the synthesis and secretion of lipid mediators and cytokines. In this way, the inhibition of mast cell responsiveness, upon allergen stimulation, represents an important pathway for the development of new antiallergic drug candidates. Thus, the present work tried, firstly, to gain better insight of the roles played by phosphatidylinositol 4,5-biphosphate (PtdIns(4,5)P2) during IgE-mediated mast cell signaling. This work highlighted the importance of PtdIns(4,5)P2 as a key regulator of Ca2+ responses and mast cell morphological alteration, when activated by an allergen. It was observed that reduced levels of PtdIns(4,5)P2 determined the inhibition of activated Fc RI endocytosis, a crucial event for signal transduction termination. Those results not only improve the actual knowledge in mast cell signaling but also point out the regulation of PtsIns(4,5)P2 levels as a target to be pursued during the development of new inhibitors of mast cell activation. The second part of this work aimed to evaluate the capacity of both synthetic and natural compounds to inhibit mast cell degranulation, characterized by the release of granule-contained allergic mediators, such as histamine, upon cell stimulation. Initially, the inhibitory effect of a set of structurally related synthetic arylcoumarins was evaluated. A significant number of molecules were active, and a few substitutions within such molecules could be pointed as important for the biological activity, such as the hydroxylation of carbons 6, 2\' e 5\' of the 3-phenylcoumarin ring. Lastly, this work presents a natural compound as a potent inhibitor of mast cell degranulation and cytokine secretion. The refered compound is pyridovericin, a secondary metabolite isolated from the entomophatogenic fungus Beauveria bassiana. Therefore, both the coumarin derivatives and pyridovericin can be regarded as lead compounds for the development of new anti-allergic drugs.

Submitted by (lucia.rodrigues@ufrpe.br) on 2017-02-09T14:23:37Z No. of bitstreams: 1 Jomel Francisco dos Santos.pdf: 1033055 bytes, checksum: 0882131c9f37caac6cc396d21eb8c175 (MD5) / Made available in DSpace on 2017-02-09T14:23:37Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Jomel Francisco dos Santos.pdf: 1033055 bytes, checksum: 0882131c9f37caac6cc396d21eb8c175 (MD5) Previous issue date: 2013-06-03 / Joint contractures are a severe complication of joint injuries that can permanently limit the extremity function. Current treatments for contractures in humans have little effect and there is an obvious need for clarification of the pathophysiology of this chronic and disabling dysfunction. Sheep joint is a promising model for the investigation of normal and pathologic states by the similarity with the biomechanics of certain human joints. The aim of this study was to investigate by the techniques of immunohistochemistry and cytochemistry the presence of key components for the development of joint contractures in sheep and to evaluate the potential of this species as an experimental model to study this disease. Therefore, we used 15 knee joint capsules of healthy Santa Inês ewes to identify myofibroblasts and mast cells. For investigation of myofibroblasts was performed immunohistochemical technique. Following histologic routine preparation, the antigen retrieval was performed by heating in citrate, followed by peroxidases blockage, blocking nonspecific protein and then primary antibody was incubated. After the secondary antibody was added to the cuts, and DAB chromogen was added. Slides were counterstained with Harris Hematoxylin and mounted. In cytochemical technique was applied the stain Toluidine Blue to disclosure mast cells. Analysis of the cuts was made under a light microscope. Positive controls of myofibroblasts (ovine cervix) and mast cells (umbilical cord) were stained satisfactorily by the standard techniques. In joint capsules, α-SMA protein was observed in the wall of arteries and rare myofibroblasts were observed in each section, as well as few mast cells were scored. Other studies about ovine joint capsule injuries must be conducted to confirm the presence of myofibroblasts and the development of joint contracture. / As contraturas articulares são complicações severas de doenças articulares que podem limitar permanentemente a função de extremidades. Os tratamentos atuais para contratura em seres humanos têm pouca eficácia e há uma evidente necessidade de esclarecimento sobre a patofisiologia dessa disfunção crônica e incapacitante. A articulação do ovino é um modelo promissor para a investigação dos estados normais e patológicos, pela semelhança com a biomecânica de determinadas articulações humanas. O objetivo deste trabalho foi investigar por meio das técnicas de imuno-histoquímica e citoquímica a presença de componentes-chave para o desenvolvimento da contratura articular na espécie ovina e avaliar a potencialidade desta espécie como modelo experimental para estudo desta patologia. Para tanto, foram utilizadas 15 cápsulas articulares de joelhos de ovelhas Santa Inês sadias para localização de miofibroblastos e mastócitos. Para investigação de miofibroblastos foi realizada a técnica de imuno-histoquímica. Após a preparação para rotina histológica, a recuperação antigênica foi realizada por aquecimento em citrato, seguida pelo bloqueio das peroxidades, bloqueio de proteínas inespecíficas e então, o anticorpo primário foi incubado. Após, o anticorpo secundário foi acrescentado aos cortes, e o cromógeno DAB foi adicionado. As lâminas foram contracoradas com Hematoxilina de Harris e montadas. Na técnica citoquímica, foi aplicada a coloração de Azul de Toluidina para evidenciação dos mastócitos. As análises dos cortes foram feitas em microscópio de luz. Os controles positivos da pesquisa de α-SMA (cérvix ovina) e de mastócitos (cordão umbilical) foram marcados ou corados satisfatoriamente pelas respectivas técnicas. Nas cápsulas articulares, a proteína foi observada na parede de artérias e raros miofibroblastos foram observados em cada corte, assim como poucos mastócitos foram corados. Outros estudos sobre lesões de cápsula articular de ovinos devem ser conduzidos para confirmar a presença de miofibroblastos e o desenvolvimento da contratura articular.

Orientador: Ana Paula Girol / Coorientador: Sonia Maria Oliani / Banca: Ayder Anselmo Gomes Vivi / Banca: Cristiane Damas Gil / Resumo: As lesões uterinas são causas importantes de desconforto, infertilidade e óbito entre as mulheres no Brasil e no mundo. O câncer de endométrio é um tumor maligno frequente e sua incidência vem aumentando nas últimas décadas. Enquanto, o tumor uterino benigno mais comum, o leiomioma, acomete cerca de 40% das mulheres na idade reprodutiva, sendo relacionado à menorragia, dismenorreia e infertilidade. Investigações indicam que o microambiente tumoral é crucial para o avanço do câncer, sendo caracterizado, principalmente, pela composição alterada da matriz extracelular, alta densidade de microvasos e abundância de células inflamatórias, como mastócitos (MCs). MCs desgranulados liberam fatores quimiotáticos e proteases, como triptase e quimase, para o meio extracelular, contribuindo na degradação da matriz extracelular, promoção da angiogênese, propiciando ambiente favorável para invasão tumoral e remodelação tecidual por meio de proteólises seletivas na matriz e ativação de metaloproteinases. Outro aspecto importante no crescimento tumoral é a proteína anti-inflamatória Anexina A1 (ANXA1), relacionada à regulação dos processos de crescimento e migração/invasão celular, sendo seus efeitos mediados por receptores para peptídeos formilados (FPRs), especialmente FPR1 e FPR2. Diante da importância dos MCs e da ANXA1/FPR no desenvolvimento tumoral, o objetivo desta investigação foi analisar a heterogeneidade dos MCs e a expressão das proteínas ANXA1, FPR1 e FPR2 em biópsias humanas da... / Abstract: Uterine lesions are important causes of discomfort, infertility and death among women in Brazil and in the world. Endometrial cancer is a frequent malignant tumor and its incidence has been increasing in the last decades. Besides, the most common benign uterine tumor, leiomyoma, affects about 40% of women at reproductive age, being related to menorrhagia, dysmenorrhea and infertility. Investigations indicate that the tumor microenvironment is crucial for the advancement of cancer, being characterized mainly by the altered composition of the extracellular matrix, high microvessel density and abundance of inflammatory cells, such as mast cells (MCs). Degranulated MCs release chemotactic and protease factors, such as tryptase and chymase, to the extracellular medium, contributing to the degradation of the extracellular matrix, promoting angiogenesis, providing a favorable environment for tumor invasion and tissue remodeling through selective proteolysis in the matrix and activation of metalloproteinases. Another important aspect of tumor growth is the anti-inflammatory protein Annexin A1 (ANXA1), related to the regulation of growth and migration / invasion processes, and its effects mediated by receptors for formylated peptides (FPRs), especially FPR1 and FPR2. The objective of this investigation was to analyze the heterogeneity of the MCs and the expression of the ANXA1, FPR1 and FPR2 proteins in human biopsies of clinical-pathological variables of normal uterus: simple endometrial hyperplasia (HES), adenomyosis, leiomyomas and endometrial adenocarcinoma (ADC) of grades I and II. MCs were quantified according to their state of activation and expression of tryptase and chymase proteases. Expression of ANXA1 and its FPR1 and FPR2 receptors in the MCs and uterine tissues were analyzed in the different biopsies studied. Our results showed intact and degranulated MCs in the normal ... / Mestre

Orientador: Sandra Helena Penha de Oliveira / Banca: João Eduardo Gomes Filho / Banca: Ana Paula Campanelli / Resumo: O objetivo do presente estudo foi investigar o papel dos Mastócitos (MAST) na resposta tecidual de camundongos com Diabetes Mellitus (DM) submetidos a Doença Periodontal (DP). Os camundongos foram pré-tratados com uma dose única de estreptozotocina (STZ) para indução do DM. Para avaliar o papel dos MAST no controle da DP, os camundongos foram depletados de MAST pelo tratamento com composto 48/80. Subsequentemente foi realizada a indução da DP nos camundongos com DM e controles pela ligadura dos primeiros molares homólogos. Após um período de 7 e 14 dias os animais foram sacrificados para coleta das amostras para ensaios subseqüentes. Os níveis de reabsorção óssea dos camundongos diabéticos e normais foram avaliados radiograficamente para confirmação da presença da DP. O recrutamento de Neutrófilos (NE) foi avaliado pela produção da enzima Mieloperoxidase (MPO) no tecido gengival. Os níveis de IFN-g, IL-4, RANTES/CCL5, KC/CXCL1 e Linfotactina/ XCL1 nos tecidos gengivais e IFN-g e IL-4 no plasma foram avaliados pelo método imunoenzimático (ELISA). Os resultados mostram que animais diabéticos com DP apresentaram após 14 dias da indução da DP uma perda óssea significativa quando comparado ao grupo controle, diferentemente do grupo de 7 dias. Esta perda foi potenciada nos animais diabéticos com DP depletados de MAST. Verificou-se elevados níveis de MPO nos animais normais e com DM após 14 dias da indução da DP. Nos animais com DM e com DP tratados com 48/80 foi observada uma redução parcial dos níveis de MPO. A produção de IFN-g, IL-4, RANTES/CCL5, KC/CXCL1 e Lin-fotactina/XCL1 foi observada nos animais diabéticos independente da indução da DP após o período 7 e 14 dias. Conclui-se então que o DM favoreceu o aumento da perda óssea e o recrutamento de neutrófilos na DP. Como também induziu a produção de altos níveis dos mediadores... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract: The aim of this study was to investigate the role of Mast cells (MAST) on the tissue response in mice with Diabetes Mellitus (DM) submitted to Periodontal Disease (PD). The mice were pretreated with a single dose of streptozotocin (STZ) for the induction of DM. To evaluate the role of MAST in the PD, the mice were depleted of MAST by a pretreatment with compound 48/80. Subsequently, PD was induced in diabetic and normoglycemics mice by using a ligature around the first molars homologous. Seven and fourteen days after the surgery, the animals were sacrificed and the samples were collected for the subsequent experiments. The levels of bone resorption in diabetic and normoglycemic mice with PD were radiographically evaluated to confirm the presence of the PD. Neutrophil migration (NE) was quantified by the presence of the MPO enzyme in the gingival tissue. The levels of IFN-g, IL-4, RANTES/CCL5, KC/CXCL1 and Lymphotactin/XCL1 from gingival tissues and plasma were evaluated by Enzyme- Linked Immunosorbent Assay (ELISA). The results showed that diabetic mice had a significant bone resorption 14 days after the induction of PD when compared to normoglycemics mice. This bone resorption was higher in the diabetic MAST-cell depleted mice with PD. The level of MPO was higher in diabetic and normoglycemic mice 14 days after the induction of PD. Furthermore, it was observed a partial reduction of MPO levels in diabetic mice with PD treated with compound 48/80. The level of IFN-g, IL-4, RANTES/CCL5, KC/CXCL1 and Lymphofotactin/XCL was observed in diabetic mice independently of the induction of PD after 7 or 14 days. In conclusion, DM increased bone resorption and neutrophil recruitment in the PD mice, as well as it induced the production of high levels of IFN-g, IL -4, RANTES/CCL5, KC/CXCL1 and Lymphofotactin/XCL1. The MAST depletion increased bone resorption and reduced NE recruitment... (Complete abstract click electronic access below) / Mestre

Foram estudadas as áreas do sistema nervoso central de camundongos ativadas pela exposição de animais alérgicos ao antígeno (ovalbumina ? OVA) bem como uma resposta adaptativa desencadeada a partir da nebulização de OVA em uma caixa de esquiva adaptada. Animais imunizados apresentam aumento de atividade do núcleo paraventricular do hipotálamo e do núcleo central da amígdala após um único desafio intranasal com OVA e evitam entrar no compartimento previamente associado a nebulização com OVA. A ativação das áreas descritas acima é compatível com a elaboração de uma resposta adaptativa (evitar o contato com o antígeno). Animais tornados tolerantes à OVA no dia da imunização primária não apresentam atividade dos núcleos citados nem desenvolvem aversão ao local do desafio, demonstrando que essas alterações são dependentes de anticorpos IgE anti-OVA. Camundongos da linhagem C3H/HeJ, que não desenvolvem inflamação alérgica pulmonar, apresentam as mesmas respostas observadas em camundongos BALB/c, sugerindo que o processo inflamatório não é relevante nesse modelo. O tratamento prévio com cromoglicato dissódico suprime a ativação no SNC e a indução de aversão associada ao desafio com OVA. Esses fatos sugerem em conjunto que a desgranulação de mastócitos mediada por IgE em vias aéreas ative o SNC e desencadeie as alterações comportamentais descritas. / Activation of the central nervous system (CNS) was evaluated following ovalbumin (OVA) challenge in a murine model of asthma, as well as an adaptive response triggered by OVA nebulization during an avoidance test. Immunized animals showed increased activity in the paraventricular nucleous of the hypothalamus and central nucleous of the amygdala after a single intranasal OVA challenge. Furthermore, they avoid a compartment previously associated with the antigen. Activation of these brain areas is compatible with the display of adaptive responses (avoiding contact with the antigen). Induction of immunological tolerance along with primary immunization precludes both CNS activation and avoidance behavior, showing that these responses are IgE-mediated. Mice from the C3H/HeJ strain do not develop lung allergic inflammation but show a similar pattern of brain activity after OVA challenge and mount the same avoidance reaction seen in BALB/c mice, suggesting that an inflammatory infiltrate in the lung is not required in these responses. Prior treatment with dissodium cromoglycate inhibits CNS activation and avoidance behavior. Collectively, these findings demonstrate a role of IgE-mediated mast cell degranulation in signaling an allergic response initiated in the airways to the mouse brain.

Em termos de importância no processo de invasão de tumores e metástases, o desequilíbrio entre a expressão das gelatinases e seus inibidores teciduais resulta em degradação do principal constituinte da matriz extracelular, o colágeno tipo IV, favorecendo os processos de invasão tumoral e metástase. Foram avaliadas 53 lesões de 47 cães submetidos a cirurgia excisional com confirmação diagnóstica de mastocitoma por avaliação histopatológica e imuno-histoquímica para MMP-2, MMP- 9, TIMP-2 e TIMP-1. Os mastocitomas foram classificados em graus I (bem diferenciados), II (moderadamente diferenciados) a III (pouco diferenciados), segundo os critérios estabelecidos por Patnaik, Ehler e Macewen (1984) e as mesmas lesões foram classificadas em alto e baixo grau de malignidade de acordo com o sistema proposto por Kiupel et al. (2011). Os resultados obtidos através da imuno-positividade de mastócitos e leucócitos polimorfonucleraes para as quatro proteínas foram comparados as duas graduações estabelecidas, bem como ao tempo de sobrevida pós-cirúrgica e a mortalidade em função do tumor. Verificou-se que as metaloenzimas e seus inibidores não demonstram nenhum tipo de associação de expressão entre elas. Dentre os marcadores imuno-histoquímicos, a expressão mastocitária de TIMP-1 apresentou associação com o tempo de sobrevida, independente do tratamento quimioterápico adjuvante. Quanto menor a expressão de TIMP-1 nos mastócitos, maiores as taxas de mortalidade e menores os períodos de sobrevida. Enquanto que MMP-2, MMP-9 e TIMP-2 não foram indicadores prognósticos para esta neoplasia. Assim, nossos resultados mostram que o TIMP-1 apresentou-se como bom indicador de sobrevida e, portanto, sugere-se que a utilização deste índice prognóstico adicional a classificação histológica pode aumentar a precisão de prognostico dos mastocitomas em cães auxiliando na adequação de terapias apropriadas / In terms of importance regarding to tumor invasion process and metastasis , the imbalance between the expression of gelatinases and their tissue inhibitors results in degradation of the main constituent of the extracellular matrix, collagen type IV, favoring the processes of tumor invasion and metastasis. Fifty-three lesions, of 47 dogs submitted to surgical excision confirmed the diagnosis of mast cell tumor were evaluated by histopathologic examination and immunohistochemistry for MMP-2, MMP-9, TIMP-2 and TIMP-1. Mast cell tumors were histologically classified as grades I (well differentiated), II (moderately differentiated) to III (poorly differentiated), according to the criteria established by Patnaik, Ehler and MacEwen (1984) and the same lesions were classified as high and low-grade of malignancy according to the system proposed by Kiupel et al. (2011). The results obtained by the immunopositivity of mast cells and polymorphonuclear leukocytes to the four proteins were compared with two established graduations, as well as to post-surgical survival times and mortality due to mast cell disease. It could be verified that metalloenzymes and their inhibitors do not establish any association between the expression of the cell types evaluated. Within the immunohistochemical markers, mast cell expression of TIMP-1 was associated with survival time, independent of adjuvant chemotherapy. The lower the expression of TIMP-1 in mast cells, higher the mortality rates and smaller post-cirurgical survival time. While MMP-2, MMP-9 and TIMP-2 levels were not prognostic indicators for this cancer. Thus, our results show that the TIMP-1 appeared as a good indicator of survival time and therefore it is suggested that the use of this prognostic index as additional histological classification can increase the accuracy of prognosis of mast cell tumors in dogs assisting in the adaptation of appropriate therapies