As plantas são importantes fontes de produtos naturais com atividade biológica que diferem quanto a estrutura e propriedades biológicas. Uma das atividades biológicas dos componentes naturais que tem recebido grande atenção é a capacidade de exercer atividade antitumoral em diferentes tipos de câncer. A boldina é um alcaloide encontrado abundantemente nas folhas e cascas do boldo (Peumus boldus Mol), uma árvore de pequeno porte originária do Chile. Entre outras propriedades, já foi demonstrado que a boldina exerce feito antitumoral em linhagens de glioma in vitro. Neste contexto, o presente estudo avaliou os efeitos do tratamento com boldina em modelos experimentais de gliomas e câncer de bexiga. Boldina foi capaz de diminuir o crescimento celular das linhagens C6 e U-138 MG, por induzir parada do ciclo celular na fase G2/M e/ou apoptose. Estes achados parecem estar associados à inativação da proteína AKT e ativação da proteína GSK-3β. Além disso, a eficácia de boldina também está relacionada com uma diminuição na atividade da proteína ERK. Estes resultados nos levaram a investigar o efeito da boldina em um modelo experimental de glioma em ratos in vivo. O tratamento com 50 mg/Kg/dia de boldina i.p. por 10 dias reduziu significativamente o volume dos tumores implantados nos ratos. Adicionalmente, a análise patológica mostrou que as características de malignidade, como necrose, hemorragia e proliferação, diminuíram nos tumores dos ratos tratados. Experimentos toxicológicos com ratos sadios tratados com 50 mg/Kg/dia de boldina i.p. por 14 dias não revelaram sinais de toxicidade tecidual, danos gastrointestinais ou alteração de atividade de enzimas hepáticas. Ademais, a análise do efeito de boldina em um modelo de câncer de bexiga in vitro, mostrou resultados similares como os observados nas linhagens de glioma. Boldina diminui o crescimento celular da linhagem T24 e induziu parada em G2/M e apoptose. Estes achados também estão relacionados com diminuição da atividade das proteínas AKT e ERK, e aumento de atividade de GSK-3β. Juntos, nossos resultados propõem um novo componente natural, o alcaloide boldina, para o desenvolvimento de um novo agente anticâncer, o qual poderá ser usado em conjunto com os regimes de quimioterapia já estabelecidos. / Plants are important sources of biologically active natural products which differ in terms of structure and biological properties. One of the biological activities of plant compounds that has attracted great interest is the ability to exert antitumoral activity in different types of cancer. Boldine is an alkaloid that occurs abundantly in the leaves and barks of boldo (Peumus boldus Mol.) a widely distributed native tree of Chile. Among other properties, boldine has been shown to exert antitumoral activity against glioma cell lines cells in vitro. Within this context, the present study was designed to evaluate the effects of boldine treatment in experimental models of gliomas and bladder cancer. Boldine was able to diminish the cell growth of C6 and U-138 MG cell lines, by inducing cell cycle arrest at G2/M phase and/or apoptosis. These findings appear to be associated to the inactivation of AKT protein and activation of GSK-3β protein. Additionally, the efficacy of boldine is also correlated with decrease in ERK activity. These results lead us to investigate the effect of boldine in an in vivo rat glioma experimental model. Treatment with 50 mg/Kg/day of boldine i.p. for 10 days significantly diminished the volume of implanted gliomas in rats. Additionally, pathological analysis demonstrated that malignant characteristics, such as necrosis, hemorrhage and proliferation, appeared to be lower in boldinetreated rats. Toxicological experiments with healthy rats treated with 50 mg/Kg/day of boldine i.p for 14 days did not reveal signals of tissue toxicity, gastrointestinal damage or alteration in the activity of hepatic enzymes. Moreover, the analysis of boldine effect in a model of bladder cancer in vitro, showed similar results to those observed in glioma cell lines. Boldine diminished the T24 cell growth and induced G2/M arrest and apoptosis. These findings were also related to decrease in AKT and ERK activities and increase in GSK-3β activity. Taken together, our results propose a novel natural compound, the alkaloid boldine, for the development of a new anticancer agent, which could be used in conjunction with the established quemotherapies regimens.

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No. of bitstreams: 1 PDF - Érika Ponchet Alves.pdf: 1299396 bytes, checksum: 3c0c4042f58e9e0ee9edd8547eef555f (MD5) Previous issue date: 2015-07-31 / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior - CAPES / Medicinal plants represent a promising source of active compounds which can be used in the development of new drugs. There is a diversity of plants that are used by the population for therapeutic purposes, among which are the Guapira graciliflora Mart., popularly known as “joão-mole”, and Schinus terebinthifolius Raddi, known as “aroeira-da-praia”. These plants stand out in folk medicine due to its therapeutic properties in inflammatory and infectious processes. This study evaluated in vitro antimicrobial and antiproliferative activities besides, toxicity and chemical composition of the hydroalcoholic extract of the leaves of G. graciliflora. and the essential oil from unripe fruits of S. terebinthifolius. Antimicrobial activity was evaluated by microdilution technique in broth, with determination of minimum inhibitory concentration (MIC) and bactericidal/ Fungicide minimum concentration (MBC / MFC) using to bacterial strains: Staphylococcus aureus ATCC 6538, Escherichia coli ATCC 11775 and Salmonella enteritidis ATCC 13076, and the yeast Candida albicans ATCC 10231. The extracts were analyzed againstC. albicans biofilm after 48 hours of expositions, by means of the CFU / ml count and examination of cell morphology byfluorescence microscope (FM) using Calcofluor White. The antiproliferative activity was evaluated against nine tumor cell lines (U251, MCF7, NCI / ADR-RES, 786-0, NCI-460, HT29, K562, and PC-03 OVCAR-3) and a non-tumor cell line of keratinocytes (HaCat ). Preliminar toxicity was evaluated through the hemolysis assay. Phytochemical analysis of the extract G. graciliflora was performed by thin-layer chromatography, and the essential oil of S. terebinthifoliuswas analysed by Gas Chromatography hifenized with Mass Spectrometry (GC-MS). The G. graciliflora andS. terebinthifoliussamplesshowed potential antifungal against C. albicans with the MIC values of 0.25mg/mL and 1mg/mL, respectively, and no antibacterial activity (MIC>2mg/mL). Both samples (1mg/mL) reduced the number of CFU/mL of C. albicans biofilm. In fluorescence microscopy it was, observed the maintenance of cellular architecture of C.albicansafter the treatments. The G. gracilifloraextract presented cytocidal effect for all cells of the tumor lines except for the K562 (leukemia) while the essential oil of S. terebinthifolius proved cytocidal for all strains. Both samples did not produce hemolysis over 50% up to a concentration of 16mg/mL. Phytochemical analysis of the extract G. graciliflora revealed the predominance of flavonoid compounds, and the major compound identifiede onS. terebinthifolius essential oil were to, terpene, alpha- and beta- phellandrene. The extract from the leaves of G. graciliflora and the essential oil of the fruit of S. terebinthifolius showed potential antifungal against C. albicans in their planktonic form and organized in biofilms; besides antiproliferative activity across the human tumor cell lines and low toxicity on red blood cells. They have been considered promising sources of active compounds, for product development and medicine, anticandida and antiproliferative action. This way, other studies may extend these results, aiming the development to the studies of herbal medicines to clinical use. / As plantas medicinais representamuma fonte promissora de compostos ativos, que podem ser utilizados no desenvolvimento de novos fármacos. Existe uma diversidade de plantas que são usadas pela população para fins terapêuticos, dentre elas, encontram-se a Guapira graciliflora Mart., popularmente conhecida como joão-mole, e a Schinus terebinthifolius Raddi, conhecida como aroeira- da-praia. Essas plantas se destacam na medicina popular em função das suas propriedades terapêuticas em processos inflamatórios e infecciosos. Esteestudo avaliou in vitro as atividadesantimicrobiana eantiproliferativa, além da toxicidade, e da composição química do extrato hidroalcoólico das folhas da G. graciliflorae do óleo essencial dos frutos verdes da S. terebinthifolius. A atividade antimicrobiana foi avaliada por meio da técnica de microdiluição em caldo, com determinação da Concentração Inibitória Mínima (CIM) e Concentração Bactericida/Fungicida Mínima (CBM/CFM), frente às cepas bacterianasStaphylococcus aureus ATCC 6538, Escherichia coli ATCC 11775 e Salmonella enteritidis ATCC 13076, e a levedura Candida albicans ATCC 10231. Foi analisada a ação das duas amostras vegetais sobre o biofilme monoespécie de C. albicans, de 48 horas, por meio da contagem de UFC/mL e análise da morfologia celular em microscópio de fluorescência (MF), usando o Calcofluor White. A atividade antiproliferativa foi realizada contra nove linhagens de células tumorais humanas (U251, MCF7, NCI/ADR-RES, 786-0, NCI-460, HT29, k562, PC-03 e OVCAR-3) e uma linhagem não tumoral de queratinócitos (HaCat). Para o teste de toxicidade preliminar,realizou-se o ensaio de hemólise.A análise fitoquímica do extrato da G. graciliflora foi realizada através da Cromatografia de Camada Delgada, e a do óleo essencial da S. terebinthifoliuspor meio da Cromatografia Gasosa com Espectrometria de Massa (CG-EM). A G. graciliflorae a S. terebinthifoliusapresentaram potencial antifúngico frente a C. albicans, com valores da CIM0,25 mg/mL e 1mg/mL, respectivamente, e ausência de atividade antibacteriana (CIM>2 mg/mL). As duas substâncias vegetais (1 mg/mL) reduziram o número de UFC/mL no biofilme de C. albicans. Na microscopia de fluorescência, observou manutenção da arquitetura celular da C.albicans. A G. graciliflora apresentou efeito citocida para todas as células das linhagens tumorais, exceto para a K562 (leucemia); e o óleo essencial da S. terebinthifoliusmostrou-se citocida para todas as linhagens. As substâncias vegetais não produziram hemólise acima de 50% até a concentração de 16 mg/mL. A análise fitoquímica do extrato da G. graciliflorarevelou a predominância de compostos flavonoides, e no óleo essencial da S. terebinthifolius, de terpenos alfa e beta-felandreno. O extrato das folhas da G. graciliflora e o óleo essencial dos frutos da S. terebinthifolius apresentaram potencial antifúngico frente a C. albicans, em sua forma planctônica e organizada em biofilme; atividade antiproliferativa frente às células de linhagens tumorais humanas e baixa toxicidade frente às hemácias. Podem representar promissoras fontes de compostos ativos, para o desenvolvimento de produtos ou medicamentos, com ação anticandida e/ou antiproliferativa. Desta forma, são necessários outros estudos,para ampliar os conhecimentos a respeito dessas espécies, seguindo para os estudos de riscos e eficiência do uso clínico dessas substâncias.

Dissertação (mestrado) - Universidade Federal de Santa Catarina, Centro de Ciências Biológicas, Programa de Pós-Graduação em Biotecnologia, Florianópolis, 2010 / Made available in DSpace on 2012-10-25T10:20:02Z (GMT). No. of bitstreams: 1 276167.pdf: 8668613 bytes, checksum: 3bae411187920f0e4eadbc2a39057abb (MD5) / Na medicina popular brasileira, a casca de banana tem um histórico de uso na cura de lesões por queimadura. Compostos antioxidantes têm sido isolados de diferentes fontes naturais e possuem um papel importante na prevenção e cura de doenças, como o câncer por exemplo. O objetivo deste estudo foi avaliar os extratos provenientes da casca de banana (Musa spp.) (EBAQ: extrato bruto aquoso; EBHE: extrato bruto hidroetanólico; ESC: extrato derivado de extração supercrítica) no processo de cicatrização de lesões, considerando seu potencial antioxidante, e quanto a sua atividade antitumoral in vitro e in vivo. Para avaliar o potencial cicatrizante dos extratos, camundongos isogênicos Balb/C (peso 20 ± 2g, n = 6) foram submetidos ao modelo de excisão e foram divididos em grupo controle negativo (CN), que receberam topicamente água durante 3, 6, 9, 12 e 15 dias, grupo controle positivo (CP), que receberam topicamente solução de alantoína (50 mg/kg/dia) durante 3, 6, 9, 12 e 15 dias e grupos tratados topicamente com os EBAQ e EBHE (50 mg/kg/dia), conforme os grupos controle. O potencial cicatrizante e as defesas antioxidantes foram avaliados. Os resultados foram estatisticamente significativos quando comparados com os grupos CN e CP. Os tratamentos com EBAQ e EBHE foram capazes de diminuir o período de epitelização e a cicatrização das lesões se deu em 9 dias, aumentar o teor de hidroxiprolina, diminuir a peroxidação lipídica e o conteúdo de proteína carbonilada nos tecidos cicatriciais, aumentar o teor de glutationa reduzida tendendo ao nível básal, diminuir as atividades das enzimas catalase, glutationa peroxidase e glutationa S-transferase e diminuir a atividade da superóxido dismutase demonstrando uma tendência ao nível basal. O estudo histológico da lesão foi realizado com o emprego do EBAQ para o tratamento das lesões, o qual foi o mais eficaz na análise de atividade cicatrizante, quando comparado ao tratamento com EBHE. Os resultados do estudo histológico da lesão confirmaram o potencial cicatrizante do EBAQ, uma vez que mostraram proliferação de fibroblastos e indução do processo de reepitelização. EBAQ, EBHE e ESC foram analisados em relação a atividade antitumoral in vitro. Apenas o EBAQ apresentou citotoxicidade in vitro contra as células d tumor ascítico de Ehrlich (TAE), com CI50 correspondente a 152,83 mg/mL. O EBHE não apresentou atividade no ensaio de citotoxicidade in vitro e não foi analisado no modelo in vivo para avaliar a atividade antitumoral. O ESC também não apresentou atividade no ensaio de citotoxicidade in vitro contra as células do TAE. Porém, apresentou elevada toxicidade quando aplicado no modelo de excisão em camundongo para avaliação do potencial cicatrizante. Por isso, foi aplicado aos ensaios de atividade antitumoral in vivo. Avaliações morfológicas em camundongos isogênicos Balb/C portadores de TAE (peso de 20 ± 2g, n = 6) mostraram que os animais tratados com o EBAQ e o ESC apresentaram diminuição significativa do peso corporal (~ 67 % e ~ 79 %, respectivamente) e no crescimento do TAE (~ 57 % e ~ 49 %, respectivamente), quando comparados ao grupo CN. EBAQ e ESC foram capazes de aumentar o número de células inviáveis (4 vezes e 2 vezes, respectivamente) e a porcentagem média de sobrevivência dos animais (~ 23 % e ~ 22 %, respectivamente), quando comparados ao grupo CN. Esses achados indicam que os EBQA e EBHE têm potencial cicatrizante que pode estar associado às suas propriedades antioxidantes. Além disso, os resultados dos testes de citotoxicidade in vitro e de atividade antitumoral in vivo são importantes indícios de uma possível aplicação de extratos da casca de Musa spp. casca (EBAQ e ESC) no tratamento do câncer. / In Brazilian popular medicine banana peel has a history of utility in burn healing. Antioxidant compounds have been isolated from different natural sources and play an important role in disease prevention and cure, such as cancer. The aim of this study was to evaluate Musa spp. peel extracts (ACE: aquous crude extract; HCE: hydroethanol crude extract; SCE: supercritical extract) in wound healing process, considering its antioxidant potential, and its antitumoral activity in vitro and in vivo. To evaluate wound healing potential, Balb/C mice (weight 20±2g, n=6) were cutaneous by injured and were divided in negative control group (NC), which received topically water during 3, 6 ,9, 12 and 15 days, positive control group (PC), which received topically allantoin solution (50 mg/kg/day) during 3, 6 ,9, 12 and 15 days, and treated groups which, received topically ACE and HCE (50 mg/kg/day), as in the control groups. Results were statistically significant when compared with NC and PC groups. ACE and HCE treatments were able to decrease the epithelization period and healing the lesions in 9 days, to increase the hydroxyproline content, to decrease lipid peroxidation and carbonyl protein contents in healing tissues, to increase reduced gluthatione content with a basal level tendency, to decrease catalase activity, decrease superoxide dismutase activity showing a tendency to basal level and to decrease gluthatione peroxidase and gluthatione S-transferase activities during all treatment period. Lesion histological study was performed with ACE treatment which was the most effective in wound healing evaluation when compared to HCE treatment. The results of lesion histological study confirmed the ACE healing potencial, since it showed fibroblast proliferation and induction of reepithelialization process. ACE, HCE and SCE were analyzed in respect to in vitro antitumoral activity. Only ACE showed in vitro cytotoxicity to Ehrlich ascites tumor (EAT) with IC50 corresponding to 152.83 mg/mL. HCE did not show in vitro cytotoxicity to EAT and it was not applied to the in vivo model to evaluate antitumoral activity. SCE did not show in vitro cytotoxicity to EAT, however, it showed high toxicity when applied in wound healing model. Because of this, SCE was applied to in vivo antitumoral assays. Morphological evaluations in EAT-bearing Balb/C mice (weight 20±2g, n=6) showed that animals treated with ACE and SCE presented significant reduction in the body weight (~ 67 % and ~ 79 %, respectively), and in EAT growth (~57 % and 49 %, respectively) when compared to the NC group. ACE and SCE were able to increase the inviable cell number (~ 4 times and ~ 2 times, respectively), the average percentage of survival of animals (~ 23 % and ~22 %, respectively) when compared to the NC group. These findings indicate that ACE andf HCE have a wound healing potential that may be associated to their antioxidant activity. They also indicate that in vitro cytotoxicity and in vivo antitumoral activity are important indications of a possible application of extracts of Musa spp. peel (ACE and SCE) in cancer treatment.

Dissertação (mestrado) - Universidade Federal de Santa Catarina, Centro de Ciências da Saúde. Programa de Pós-Graduação em Farmácia. / Made available in DSpace on 2012-10-23T08:39:05Z (GMT). No. of bitstreams: 1 252060.pdf: 593370 bytes, checksum: 858361c2f238891d3f74efba8b533051 (MD5)

FundaÃÃo Cearense de Apoio ao Desenvolvimento Cientifico e TecnolÃgico / The Hasumi vaccine (VH) is an imune-stimulant mode by two preparations obtained from distinctive forms, it is an assisting in a pool of tumours antigens. The assisting is taken off from calf splens and the antigen, from different forms of tumor. The VH is a sterile uncoloured liquid, conditioned in 0,5mL glass ampoules, separately. The present research aimed to evaluate, throughout a Phase I study, the security of VH, as well as the comprehension of its action mechanism. The clinical experiment was conducted in 24 healthy volunteers in wich the VH was given subcutaneously every 5 days during 2 months, accomplishing an amount in wich the two first ones were given in the hospital. Before the first administration, all the voluteers did the Prick test, to evaluate the possibility of reacting to hipersensibility. After that they were submit to clinical and laboratorial evaluation (hemogram, biochemical, urine extract and parasitological excrements exams, sorology to B and C hepatitis, HIV, FAN, reumatoidic factor, C3, CD3, CD4, CD8, IgA, IgG, IgE, IgM, PSA, CEA, AFP and HCG-beta). The planning of the experiment also had the repetition of such exams after the 3th, 6th and the 12th doses, as well as in the after-study 30 days after the last dose. By hte and of the study, significant adverse events were not observed. Therefore, in the last dose and within the stabilished treatment period of this experiment, the VH was shown to be safe and with no toxity. / A Vacina Hasumi (VH) à um imuno estimulante constituÃdo por duas preparaÃÃes obtidas de formas distintas, sendo um adjuvante e um pool de antÃgenos tumorais. O adjuvante à retirado de cÃlulas de baÃo de bezerros e o antÃgeno, de diversas formas de tumor. A VH à um lÃquido incolor estÃril, acondicionado em ampolas de vidro, no volume de 0,5mL, separadamente. O presente trabalho objetivou avaliar, atravÃs de um Estudo de Fase I, a seguranÃa da VH, bem como a compreensÃo do seu mecanismo de aÃÃo. O ensaio clÃnico foi conduzido em 24 voluntÃrios sadios nos quais a VH foi administrada por via subcutÃnea a cada 5 dias durante 2 meses, perfazendo um total de 12 administraÃÃes, sendo as 2 primeiras em regime de internamento hospitalar. Antes da primeira administraÃÃo, todos os voluntÃrios realizaram o prick teste, para avaliar a possibilidade de reaÃÃo de hipersensibilidade, apÃs o que, foram submetidos a avaliaÃÃes clÃnica e laboratorial (hemograma completo, bioquÃmica, sumÃrio de urina, parasitolÃgico de fezes, sorologia para hepatite B e C, HIV, FAN, fator reumatÃide, C3, CD3, CD4, CD8, IgA, IgG, IgE, IgM, PSA, CEA, AFP, Beta HCG). O planejamento do experimento compreendeu tambÃm a repetiÃÃo das avaliaÃÃes apÃs a 3a, 6a e a 12a doses e no pÃs-estudo, 30 dias apÃs a Ãltima dose. Ao final do estudo nÃo foram observados eventos adversos significantes. Portanto, na dose e no tempo de tratamento estabelecidos neste ensaio, a VH mostrou-se segura e nÃo apresentou toxicidade.

Conselho Nacional de Desenvolvimento CientÃfico e TecnolÃgico / CoordenaÃÃo de AperfeiÃoamento de Pessoal de NÃvel Superior / Piplartine and piperine are alkaloids/amides isolated from Piper species. The activity of these compounds was initially evaluated on the brine shrimp lethality assay, sea urchin development, MTT assay using tumor cell lines, and hemolytic assay. Piperine showed a higher toxicity in brine shrimp than piplartine. Both piplartine and piperine inhibited the sea urchin development, but in this assay piplartine was more potent than piperine. In MTT assay, piplartine was also the most active with IC50 values ranging from 0.7 to 1.7 Âg/mL. None of the tested substances induced hemolysis. Since the piplartine showed the best results, its mode of action was studied. Viability of HL-60, K562, JUKART, and MOLT-4 cell lines were affected by piplartine only after an exposure time of 24h, as analyzed by the Trypan blue exclusion. Piplatine reduced the number of viable cells associated with an increasing of the number of non-viable cells, which corroborate data from morphologic analysis. The cytotoxic activity of piplartine was related to the inhibition of DNA synthesis, as revealed by the reduction of BrdU incorporation. Administration of piplartine or piperine (50 or 100 mg/kg/day) inhibited the solid tumor development in mice transplanted with Sarcoma 180. The inhibition rates were of 28.7 and 52.3% for piplartine and 55.1 and 56.8% for piperine at lowest and highest dose, respectively. Piplartine-antitumor activity was related to the tumor proliferation rate inhibition, as observed by reduction of Ki67 staining in tumor of the treated-animals. The histopathological analysis of liver and kidney showed that both organs were reversible affected by piplartine and piperine treatment, but in a different way. Piperine was more toxic to the liver while piplartine affected more the kidney. Thus, both amides may act as antitumor agents, although, they seem to act through different pathways. Piplartine activity seems to be related to direct cytotoxicity on tumor cells, while piperine presented a host mediated activity / Piplartina e piperina sÃo alcalÃides/amidas presentes em plantas do gÃnero Piper. A atividade desses compostos foi inicialmente avaliada atravÃs do ensaio de toxicidade aguda em Artemia sp., desenvolvimento de ovos de ouriÃo do mar, ensaio do MTT usando cÃlulas tumorais e ensaio hemolÃtico. A piperina apresentou toxicidade maior em Artemia sp. que a piplartina. Ambas inibiram o desenvolvimento de ouriÃo do mar, mas neste ensaio a piplartina foi mais potente que a piperina. No ensaio do MTT, a piplartina tambÃm foi a mais ativa com valores de CI50 variando de 0,7 a 1,7 Âg/mL. Nenhuma das substÃncias testadas induziu hemÃlise. O mecanismo de aÃÃo da piplartina foi, entÃo, estudado. A viabilidade de cÃlulas HL-60, K562, JUKART e MOLT-4 foi afetada por piplartina apenas apÃs de um perÃodo de exposiÃÃo de 24h, quando analisada por exclusÃo por azul de tripan. A piplatina reduziu o nÃmero de cÃlulas viÃveis associado com um aumento no nÃmero de cÃlulas nÃo-viÃveis, o que colabora com os achados da analise morfolÃgica, onde observou-se um aumento do nÃmero de cÃlulas mortas. A atividade citotÃxica da piplartina està relacionada com a inibiÃÃo da sÃntese de DNA, como revelado pela incorporaÃÃo do BrdU. A administraÃÃo de piplartina ou piperina (50 ou 100 mg/kg/dia) inibe o desenvolvimento de tumor sÃlido em camundongos transplantados com Sarcoma 180. A inibiÃÃo foi de 28,7 e 52,3% para piplartina e 55,1 e 56,8% para piperina na menor e maior dose, respectivamente. A atividade antitumoral da piplartina, mas nÃo da piperina, està relacionada com a inibiÃÃo da proliferaÃÃo do tumor, como observada pela reduÃÃo da marcaÃÃo com Ki67 em tumores de animais tratados. A analise histopatolÃgica do fÃgado e rins demostrou que ambos os ÃrgÃos foram reversivelmente afetados pelo tratamento com piplartina e piperina, mas de maneira diferente. A piperina foi mais tÃxica para o fÃgado, enquanto que a piplartina afetou mais os rins. Assim, ambas as amidas podem atuar como agentes antitumorais, embora, elas pareÃam atuar por vias diferentes. Sendo que a atividade da piplartina parece estar relacionada diretamente a sua aÃÃo citotÃxica, enquanto que a atividade da piperina sÃria mediada pelo hospedeiro.

CoordenaÃÃo de AperfeiÃoamento de Pessoal de NÃvel Superior / In searching for anticancer compounds derived from plant sources, 18 flavonoids were assayed for their cytotoxic potentials and the results were compared for structure-activity relationship purposes. The flavonoid group was subdivided in flavones and pterocarpans. The cytotoxic activity was initially evaluated on tumor cell lines, through the MTT assay, and on sea urchin eggs development. The pterocarpans showed a consistently higher activity on both assays. For the flavones, some structure-activity observations can be highlighted: a) a hydroxyl instead of a methoxyl group on C4 and C5 positions increases activity; b) a hydroxyl and a sugar on C3 position decreases activity and, by the data acquired, it can be emphasized that the methoxyl on C3 increases activity and c) the methoxyl on C7 position increases activity. The pterocarpans, a methoxyl group on C2 position increases the cytotoxic activity. Since the 2,3,9- trimethoxypterocarpan showed the best results in both assays, mode of action studies were conducted for the non-prenylated pterocarpans as an attempt to understand the influence of these groups over their bioactivity. All pterocarpans tested reduced cell viability, as indicated by the trypan blue assay, except for the 3,10-dihydroxy-9-methoxypterocarpan at 12,5 micrograma/mL. They also inhibited DNA synthesis and 2,3,9-trimethoxypterocarpan induced morphological cell alterations, which could be suggestive of apoptosis. On the assays for induction of cellular apoptosis this same compound caused DNA fragmentation and mitochondria depolarization, therefore maintaining membrane integrity, typical apoptotic signs. The other compounds, besides DNA fragmentation, there was noticeable loss of membrane integrity on higher concentrations, an indicative cell death by necrosis. Based on these observations, it is conclusive that the methoxyl group on C2 position is an important pharmacophoric unit for pterocarpans, which emerge as a potential class of anticancer chemicals. / Na busca por compostos obtidos de plantas com potencial antitumoral, dezoito flavonÃides foram avaliados quanto a atividade citotÃxica, seus resultados foram comparados a fim de compreender quais grupamentos conferem uma maior atividade da molÃcula. O grupo dos flavonÃides foi dividido em flavonas e pterocarpanos. Inicialmente, a atividade citotÃxica foi avaliada em cÃlulas tumorais atravÃs do mÃtodo do MTT e no desenvolvimento embrionÃrio de ovos de ouriÃo do mar. O grupo dos pterocarpanos foi mais ativo que as flavonas em ambos os ensaios utilizados. No grupo das flavonas algumas observaÃÃes sobre a relaÃÃo estrutura-atividade podem ser citadas: a) a hidroxila no lugar da metoxila em C4â e C5âmelhora a atividade; b) a hidroxila e o aÃÃcar em C3 diminui a atividade; c) A metoxila em C3 e em C7 aumenta a atividade. No grupo dos pterocarpanos a metoxila em C2 potencializa a atividade citotÃxica. Como o composto 2,3,9- trimetoxipterocarpano apresentou os melhores resultados em ambos os ensaios, foram realizados ensaios para estudo do mecanismo de aÃÃo apenas dos pterocarpanos nÃo prenilados, na tentativa de entender a influÃncia dos grupos sobre a atividade. Todos os pterocarpanos testados reduziram a viabilidade celular por azul de tripan nas concentraÃÃes testadas, exceto o composto 3,10- dihidroxi-9-metoxipterocarpano na concentraÃÃo de 12,5 micrograma/mL. TambÃm inibiram a sÃntese de DNA e causaram alteraÃÃes morfolÃgicas nas cÃlulas sugestivas de apoptose para o composto 2,3,9-trimetoxipterocarpano. Nos ensaios que avaliam a induÃÃo da apoptose o composto 2,3,9-trimetoxipterocarpano causou fragmentaÃÃo do DNA, despolarizaÃÃo da mitocÃndria e manutenÃÃo da integridade da membrana celular, achados caracterÃsticos da apoptose. JÃ os outros compostos induziram, alÃm de fragmentaÃÃo do DNA, perda da integridade da membrana plasmÃtica nas maiores concentraÃÃes, indicando morte celular por necrose. Com base nesses resultados podemos concluir que o grupamento metoxila em C2 constitue uma importante unidade farmacofÃrica para os pterocarpanos, que apontam como um grupo com elevado potencial antitumoral.

A nanoemulsão lipídica (LDE) se concentra nas células neoplásicas e pode ser utilizada como transportador de derivado lipofílico da daunorrubicina, como o Noleil- daunorrubicina (oDNR). Neste estudo, a LDE-oDNR foi preparada por homogeneização em alta pressão e sua toxicidade e atividade anti-tumoral testadas. A associação LDE-oDNR teve rendimento elevado e permaneceu estável por longo período. Em camundongosC57BL/6J, a dose máxima tolerada (DMT) foi 65 vezes maior e a DL50 48 vezes maior no tratamento LDE-oDNR comparado ao tratamento DNR comercial, resultando em alta redução da toxicidade. Em camundongos implantados com células de melanoma B16, a preparação LDE-oDNR (7,5 mol/kg) levou a redução de 59 ± 2% do crescimento do tumor comparado a redução de 23 ± 2% para o tratamento DNR comercial na mesma dose (p<0,001). A probabilidade de sobrevida teve aumento pronunciado nos animais tratados com LDE-oDNR comparado à DNR comercial (p <0,01). Além disso, apenas 30% dos animais portadores de melanoma submetidos ao tratamento com LDE-oDNR apresentaram metástases, comparado a 82% quando tratados com DNR comercial. Uma forte redução de toxicidade também foi observada pela redução da anemia e leucopenia nos animais tratados com LDE-oDNR, em comparação com DNR comercial. A preparacao LDE-oDNR foi eficaz também no quadro de trombocitose induzida por tumor. Os testes com fragmentos extraídos de tumores dos animais tratados mostraram que a LDE-oDNR foi mais eficaz na destruição das células neoplásicas comparado ao tratamento DNR comercial (9% de células viáveis com tratamento LDE-oDNR, 27% sob tratamento DNR). O estudo mostrou que o tratamento proposto com o derivado ODNR associado à nanoemulsão (LDE-oDNR) é efetivo no combate às células tumorais, seletivo, menos tóxico e melhor tolerado. Os estudos de farmacocinética e biodistribuição somam a este protocolo informações importantes relacionadas às propriedades de absorção, distribuição, metabolismo e excreção da formulação em estudo comparado à DNR comercial / A lipidic nanoemulsion (LDE) that concentrates in neoplastic cells can be used as vehicle to daunorubicin lipophylic derivatives, such as N-oleyl-daunorubicin (oDNR). Here, LDE-oDNR was prepared by high pressure homogenization to test toxicity and anti-tumor activity. LDE-oDNR association yield was high and stable for long period. In mice, maximum tolerated dose was 65 and LD50 was 48-fold greater in LDE-oDNR than in commercial DNR treatment, showing very strong toxicity reduction. In melanoma B16-tumor bearing mice, LDE-oDNR (7.5 mol/Kg) reduced tumorgrowth by of 59±2%, and DNR by only 23±2% at same dose level (p<0.001). Survival was pronouncedly increased in LDE-oDNR compared to DNR treatment (p<0.01). Furthermore, the number of melanoma-bearing mice with metastasis was 30% under LDE-oDNR, compared to 82% under DNR treatment. Strong reduction of toxicity was also observed by reduction of anemia and leucopenia under LDE-oDNR, compared to commercial DNR tumor-induced thrombocytosis was more effective with LDE-oDNR than with DNR. Tests with fragments extracted from tumors of treated animals showed that LDE-oDNR was more effective in killing neoplastic cells than DNR (9% of viable cells under LDE-oDNR; 27% under DNR). The pharmacokinetics and biodistribution studies add important information to this protocol related to the properties of absorption, distribution, metabolism and excretion of the formulation under study compared to free DNR. The remarkable toxicity reduction and increase in pharmacological action supports novel LDE-oDNR as a promising weapon in cancer treatment

Submitted by Jean Medeiros (jeanletras@uepb.edu.br) on 2016-08-18T12:17:47Z No. of bitstreams: 1 PDF - Carolina Medeiros de Almeida.pdf: 2829867 bytes, checksum: ce1cd81409b0c3ee23f78d614e7c3375 (MD5) / Made available in DSpace on 2016-08-18T12:17:47Z (GMT). No. of bitstreams: 1 PDF - Carolina Medeiros de Almeida.pdf: 2829867 bytes, checksum: ce1cd81409b0c3ee23f78d614e7c3375 (MD5) Previous issue date: 2016-06-09 / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior - CAPES / Guapira graciliflora Mart. is a medicinal plant, commonly found in the caatinga, in the Brazilian semi-arid and widely used by the local population because of their antituberculosis, anti-inflammatory and healing activities. The aim of this study was to evaluate in vitro the antifungal, antibiofilm and antiproliferative potential of G. graciliflora. A hydroalcoholic extract of G. graciliflora‘s leaves was obtained. Then, the extract was fractionated by filter column on fritted funnel. The chemical characterization of the extracts was performed by G Electrospray Ionization Mass Spectrometry (ESI-MS). The antifungal activity of graciliflora extract and its fractions was evaluated by broth microdilution method to determine the Minimum Inhibitory and Fungicidal Concentrations (MIC / MFC) against Candida albicans ATCC 10231; Candida glabrata CBS 07; Candida krusei CBS 573 and Candida dubliniensis CBS 7889. The ability to inhibit formation of a C. albicans biofilm was evaluated considering the number of colony forming units (CFU/ml), the cell metabolic activity (MTT) and hydrogenic potential (pH). The antiproliferative activity of the extract and its fractions were evaluated against human tumoral cell lines (U251, MCF-7, NCI-ADR/RES, 786-0, NCI-H460, PC-3, HT-29) and not tumoral cell line (HaCat) by Sulforhodamine B assay. The cytotoxicity of the extract was evaluated on the line RAW 264.7 macrophages also by Sulforhodamine B assay. The phytochemical characterization of the extract indicated the suggestive presence of the flavonoids rutin and kaempferol. The extract and its methanol fraction showed moderate antifungal activity against C. albicans, C. glabrata and C. krusei and strong activity against c. dublniensis. The analysis about the metabolic activity and the number of viables cells at 24 and 48 hours biofilms showed diference (p < 0,05) only for the number of viables cells at 24 hours and the metabolic activity at 48 hours, with the extract‘s concentrations of 125 µg/mL and 62,5 µg/mL reducing the major number of CFU/mL (34,1% and 36,9%. respectively) and the concentration of 250 µg/mL was the most effective in decrease the metabolic activity (50,79%) of C. albicans cells. The pH values observed in biofilms treated with the extract were higher than those observed in untreated biofilm. The extract and its fractions have no antiproliferative effect against tumor cell lines tested, with average activity (mean log GI50) greater and equal to 1.71 mg/mL. Cell viability of macrophages was maintained above 80% for the extract concentrations up to 62,5 mg/mL. The extract of G. graciliflora‘s leaves has flavonoids is its chemical composition. Also has antifungal and antibiofilm potential, without significance evidence of antiproliferative activity against tumor and not tumor cell lines. / A Guapira graciliflora Mart. é uma planta medicinal, comumente encontrada na caatinga, no semi-árido brasileiro e bastante utilizada pela população local em função de suas atividades antituberculose, anti-inflamatória e cicatrizante. O objetivo do presente estudo foi avaliar in vitro os potenciais antifúngico, antibiofilme e antiproliferativo da G. graciliflora. Foi obtido um extrato hidroalcóolico das folhas da G. graciliflora através do processo de maceração. Posteriormente foi realizado fracionamento através de coluna filtrante em funil de placa porosa. A caracterização química do extrato foi realizada através de Espectrometria de Massas com ionização por eletrospray (ESI-MS). A atividade antifúngica do extrato da G. graciliflora e de suas frações foi avaliada através do método da microdiluição em caldo com determinação das Concentrações Inibitória Mínima e Fungicida Mínima (CIM/CFM), frente à Candida albicans ATCC 10231; Candida glabrata CBS 07; Candida krusei CBS 573 e Candida dubliniensis CBS 7889. A capacidade em inibir a formação de um biofilme de C. albicans foi avaliada considerando o número de unidades formadoras de colônias (UFC/mL), a atividade metabólica (MTT) e o potencial hidrogeniônico (pH). A atividade antiproliferativa do extrato e de suas frações foi avaliada sobre linhagens de células tumorais (U251, MCF-7, NCI- ADR/RES, 786-0, NCI-H460, PC-3, HT-29) e não-tumoral humanas (HaCaT) através do método da Sulforrodamida B. A citotoxicidade do extrato foi avaliada sobre a linhagem de macrófagos RAW 264.7 também pelo método da Sulforrodamina B. A caracterização fitoquímica do extrato indicou a presença sugestiva dos flavonoides rutina e kaempferol. O extrato e sua fração metanólica exibiram moderada atividade antifúngica sobre C. albicans, C. glabrata e C. krusei e forte atividade sobre C. dubliniensis. A análise da atividade metabólica e a contagem de células viáveis nos biofilmes de 24 e 48 horas demonstrou diferenças estatisticamente significativa (p < 0,05) apenas para a contagem de células viáveis em 24 horas e para a atividade metabólica em 48 horas, cujas concentrações do extrato de 125 µg/mL e 62,5 µg/mL foram as que mais reduziram o número de UFC/mL (34,1% e 36,9%, respectivamente) e a concentração de 250 µg/mL foi a mais efetiva em diminuir a atividade metabólica (50,79%) das células de C. albicans. Os valores de pH observados nos biofilmes tratados com o extrato foram maiores do que naqueles sem tratamento. O extrato e suas frações não apresentaram efeito antiproliferativo sobre as linhagens tumorais testadas, com médias de atividade (log GI50) maior e igual a 1,71 µg/mL. A viabilidade celular dos macrófagos foi mantida acima de 80% para concentrações do extrato até 62,5 µg/mL. O extrato das folhas da G. graciliflora possui flavonoides em sua composição química. Apresenta potenciais antifúngico e antibiofilme, sem evidências significativas de atividade antiproliferativa sobre linhagens de células tumorais e não tumorais humanas.

CoordenaÃÃo de AperfeiÃoamento de Pessoal de NÃvel Superior / Physalis angulata L. (Solanaceae) à uma planta considerada daninha conhecida popularmente como Camapu, dispersa em vÃrios estados do Brasil e em vÃrios continentes. O presente trabalho relata o estudo fitoquÃmico dos extratos: clorofÃrmico e acetato de etila, oriundos do extrato etanÃlico das partes aÃreas de Physalis angulata L. A cromatografia em sÃlica gel resultou na separaÃÃo de cinco vitaesterÃides (fisalinas D, B, F, 5-a-etÃxi-6-b-hidrÃxi-5,6-diidrofisalina B, E, e uma fisalina semi-sintÃtica denominada de 5-a-etÃxi-6-b-hidrÃxi-2,3,5,6-tetrahidrofisalina B). As cinco fisalinas foram avaliadas quanto ao potencial citotÃxico em 9 linhagens de cÃlulas tumorais (CEM, HL-60, PC-3, HCT-8, MDA-MB-231, MDA-MB 435, K-562, MCF-7, B-16), sobre o desenvolvimento de embriÃes de ouriÃo do mar e quanto à sua capacidade hemolÃtica. A atividade antitumoral in vivo para as fisalinas B e D foi avaliada em camundongos inoculados com o tumor sarcoma 180. As fisalinas apresentaram uma promissora atividade citotÃxica, sendo que a fisalina D foi a mais ativa sobre as cÃlulas tumorais com uma CI50 < 3,0 Âg/mL. As fisalinas D, B, F, 5-a-etÃxi-6-b-hidrÃxi-5,6-diidrofisalina B, inibiram o desenvolvimento embrionÃrio em uma concentraÃÃo < 30 Âg/mL, entretanto, na 1Â. divisÃo e na blÃstula, a fisalina D (PA-1), novamente foi a mais ativa, com CI50 = 4.786 e 5.498 Âg/mL, respectivamente. Na 3 divisÃo, a fisalina B (PA-2) mostrou uma CI50 de 5.308 Âg/mL. Nenhuma fisalina apresentou atividade hemolÃtica na mÃxima concentraÃÃo testada (200 Âg/mL). O estudo dos efeitos das fraÃÃes sobre a viabilidade (exclusÃo por azul de tripan), e induÃÃo de morte (coloraÃÃo por BE/LA) nas cÃlulas HL-60 demonstrou que principalmente a fisalina B e D (10 Âg/mL) foram as mais fortes indutoras do fenÃmeno apoptÃtico. PorÃm, fisalina D (15 Âg/mL) apresentou elevado perfil na induÃÃo de necrose celular. As fisalinas D e fisalina B nas doses de 10 e 25 mg/Kg apresentaram potencial de inibiÃÃo do crescimento tumoral correspondente a 45% em ambas as doses para a fisalina D e de 44 e 52%, respectivamente para a fisalina B. Esta atividade antitumoral in vivo foi relacionada à inibiÃÃo da taxa de proliferaÃÃo do tumor, como observado pela marcaÃÃo atravÃs do anticorpo Ki-67. A anÃlise de histopatolÃgica de rim e fÃgado mostrou que ambos os ÃrgÃos foram moderadamente afetados apÃs o tratamento com as fisalinas, mas de uma maneira reversÃvel / The present study describes the phytochemical analysis of the chloroform and ethyl acetate partitions obtained from the ethanol extract of Physalis angulata L. (Solanaceae). The sÃlica gel chromatography resulted on the separation of 5 whytaesteroids (physalina D, B, F, 5-a-etoxi-6-b-hidroxi-5,6-dihidrophysalin B, E and a semi-synthetic physalin named as 5-a-etÃxi-6-b-hidrÃxi-2,3,5,6-tetrahidrophysalin B). The physalins were evaluated for their cytotoxic potentials on 9 tumor cell lines (CEM, HL-60, PC-3, HCT-8, MDA-MB-231, MDA-MB 435, K-562, MCF-7, B-16), on the embryogenesis of sea-urchin eggs and for its lytic capacity in erythrocytes. Antitumoral activity in vivo was observed on a mouse model inoculated with Sarcoma 180. The physalins showed a promising cytotoxic effect, being physalin D the most active on the cell lines (IC50 < 3,0 mg/mL). The physalins D, B, F, 5-a-etoxi-6-b-hidroxi-5, 6-dihidrophysalin B inhibited the progression of the sea-urchin embryoâs cell cycle within a concentration under 30 Âg/mL. On the 1st cleavage and blastulae stages, physalin D showed to be the most active, with the respective IC50 of 4.786 and 5.498 Âg/mL. On 3rd cleavage, physalin B presented an IC50 of 5.308 Âg/mL. None of the physalins showed any sings of lytic activity in concentrations as high as 200 Âg/mL. The study about the physalins effects upon cell viability (trypan blue daye) and death mechanisms on HL-60 cells (EB/AO staining) suggests that physalins B and D were the strongest inducers of apoptosis. Physalin D also induced cellular necrosis on a rather intense level. Physalin B, on doses of 10 and 25 mg/Kg, inhibited tumor growth on 44 e 52%, respectively, while physalin D inhibited tumor growth on 45% in both treatments. The antitumor activity in vivo was related to the lowest proliferation rate, as evaluated by the Ki-67 antibody marker. The histopathological analysis of kidney and liver suggests that those organs are affected, in a reversible manner, on mice treated with physalins