Tese (doutorado)—Universidade de Brasília, Faculdade de Medicina, 2010. / Submitted by Jaqueline Ferreira de Souza (jaquefs.braz@gmail.com) on 2011-05-21T23:02:27Z No. of bitstreams: 1 2010_JosevanCerqueiraLeal.pdf: 2362756 bytes, checksum: 97a2737dd3c2b7e0f13aec04c037cb23 (MD5) / Approved for entry into archive by Jaqueline Ferreira de Souza(jaquefs.braz@gmail.com) on 2011-05-21T23:03:50Z (GMT) No. of bitstreams: 1 2010_JosevanCerqueiraLeal.pdf: 2362756 bytes, checksum: 97a2737dd3c2b7e0f13aec04c037cb23 (MD5) / Made available in DSpace on 2011-05-21T23:03:50Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2010_JosevanCerqueiraLeal.pdf: 2362756 bytes, checksum: 97a2737dd3c2b7e0f13aec04c037cb23 (MD5) / Introdução: As alterações pulmonares da lesão medular alta estão relacionadas com a fraqueza da musculatura abdominal e o conseqüente aumento da complacência abdominal e rebaixamento do diafragma. Quatro situações corriqueiras entre esses pacientes, imersão, inclinação, mudança postural e o uso da cinta abdominal, sugerem um reposicionamento do diafragma, melhorando a capacidade vital. Ainda persistem dúvidas sobre quais os reais mecanismos envolvidos nessa melhora. Objetivos: Descrever o comportamento da capacidade vital, capacidade pulmonar total e volume residual, em pacientes tetraplégicos, bem como a pressão inspiratória nasal ao fungar (PInas), durante a imersão, inclinação, mudança postural e utilização de cinta abdominal. Métodos: Foram estudados 15 pacientes tetraplégicos (C4 a C7) e 12 indivíduos hígidos, todos do sexo masculino, com idades médias de 27 e 30 anos, respectivamente. Os indivíduos foram submetidos a avaliação espirométrica, de volumes pulmonares e PInas. Todos esses parâmetros foram aferidos antes e durante a imersão ao nível dos ombros (com utilização de manguitos na raiz das coxas), variação aleatória da inclinação (0°, -20º e +20º), mudança postural e uso de cinta abdominal. Resultados: Os tetraplégicos exibiram distúrbio ventilatório restritivo, caracterizado por redução das capacidades pulmonar total e vital, respectivamente, de 79% e 52% do previsto, enquanto o grupo controle ficou dentro do esperado (acima de 80%). Os quatro protocolos (analisados no sentido do deslocamento cranial do diafragma) tiveram comportamento semelhante dentro de cada grupo, embora com algumas peculiaridades. Entre os tetraplégicos, as maiores modificações foram com a imersão e a mudança postural (até 30% de variação), com melhora das capacidades vital e inspiratória. A capacidade residual funcional diminuiu em todos os protocolos (em torno de 20%), exclusivamente pela redução no volume residual. Nos controles houve pouca modificação da capacidade vital, com melhora da capacidade inspiratória. A capacidade residual funcional diminuiu em todos os protocolos, porém, ao contrário dos pacientes, exclusivamente pela redução no volume de reserva expiratório. Ambos os grupos exibiram pouca variação da capacidade pulmonar total. Embora a capacidade residual funcional tenha diminuído de forma equivalente nos grupos (cerca de 25%), a PInas somente mostrou melhora entre os tetraplégicos (em torno de 15%), com exceção do protocolo da cinta abdominal. Discussão: Os resultados demonstraram que a melhora na capacidade vital entre os tetraplégicos foi decorrente da redistribuição de volumes. Embora a capacidade residual funcional tenha diminuído em ambos os grupos, a PInas melhorou somente entre os pacientes. Muito mais que interpretar como evidência no sentido de melhora na força diafragmática, considerando que a capacidade pulmonar total permaneceu inalterada, preferimos interpretar esse resultado como decorrente do fato de que os dois grupos estão operando em pontos distintos na curva pressão-volume. Conclusão: As quatro situações investigadas promovem melhora na capacidade vital entre pacientes tetraplégicos, às custas de redistribuição de volumes pulmonares, com significativa redução no volume residual e, por conseguinte, da capacidade residual funcional. Considerando que as trocas gasosas ocorrem nesse último parâmetro da função pulmonar, concluímos que os reais benefícios na utilização desses protocolos precisam ser revistos. _______________________________________________________________________________ ABSTRACT / Introduction: The pulmonary alterations in tetraplegic patients have a common origin, related to weakness of the abdominal muscles, a consequent increase in abdominal compliance and lowering the diaphragm. Four situations of everyday use in these patients, immersion, tilting with head down, change in posture from sitting to lying and using the abdominal binder, which seem to reposition the diaphragm, increasing vital capacity. The benefits of these situations also still need to be considered. Objectives: To describe the changes of lung volumes, especially total lung capacity and residual volume in tetraplegic patients, and the nasal inspiratory pressure to sniff (SNIP), in the following clinical situations: immersion, tilt, postural change and abdominal binder use. Methods: We studied 15 tetraplegic patients (C4 to C7) and 12 healthy individuals, all male, mean age of 27 and 30 years respectively. The individuals were submitted to four protocols on two different days, which consisted of spirometry, lung volume and SNIP. All these parameters were measured before and during immersion to the shoulders (used cuffs placed at the bases of the thighs), change in tilt (0°, -20° and +20°), postural change and use of abdominal binder. Results: The quadriplegic patients showed a restrictive ventilatory disorder, characterized by a reduction of total lung capacity and vital capacity by, 79% and 52% of predicted, respectively, while the control group showed as expected (> 80%). In general, considering the percentage changes, the four protocols (always analyzed in terms of displacement of the cranial diaphragm) had a similar behavior within each group, with some characteristics. Thus, among the tetraplegic, the biggest changes were with the immersion and postural change (up to 30% variation), with improvement in vital capacity and inspiratory. The functional residual capacity decreased in all protocols, only by reduction in residual volume. In the control group there was little change in vital capacity, with improvement in inspiratory capacity. The functional residual capacity decreased in all protocols but, unlike the patients, only by the reduction of expiratory reserve volume. Both groups showed little change in total lung capacity. Although the functional residual capacity decreased equivalently in groups, the SNIP only showed improvement in quadriplegic patients, except for the abdominal binder use. Discussion: The results showed that the improvement in vital capacity in quadriplegic patients was due to a simple redistribution of volumes. Although the functional residual capacity decreased in both groups, the SNIP has improved only among patients. Much more than interpret as evidence towards improved diaphragm strength, whereas the total lung capacity remained unchanged, we prefer to interpret this result as due to the fact that both groups are operating at different points in the pressure-volume curve. Conclusion: The four cases investigated, in spite their different specifications, promoting an improvement in vital capacity of tetraplegic patients by a redistribution of lung volumes, with a significant reduction in residual volume and, therefore, functional residual capacity. Whereas gas exchange occurs in the latter parameter of lung function, we conclude that the real benefits of using these protocols need to be reviewed.

O objetivo deste trabalho foi avaliar o reparo ósseo em defeitos de tamanho não crítico tratados com enxerto de matriz orgânica de osso bovino medular em bloco ou de osso cortical em microgrânulos de 0,25-1,0mm (ambos materiais Gen-Ox®- Baumer-SA Brasil). Foram confeccionados defeitos ósseos de 6mm de diâmetro por 8mm de profundidade usando trefina cirúrgica, em ambas epífises distais dos fêmures de coelhos machos Nova Zelândia, sendo 15 defeitos preenchidos com matriz óssea em bloco (grupo experimental I), 15 com matriz óssea em microgrânulos (grupo experimental II) e 15 com coágulo sanguíneo (controle). Os animais de cada grupo foram mortos 30, 90 e 180 dias após a cirurgia. As epífises foram coletadas, fixadas e radiografadas usando o sistema de radiografia digital Digora e filmes periapicais convencionais. As imagens digitais (modos positivo e negativo) e as radiografias convencionais foram avaliadas por dois examinadores através de escores. Após isso, as epífises foram desmineralizadas com EDTA e incluídas em parafina. Foram obtidos cortes com 6µm de espessura que foram corados com hematoxilina e eosina e com o Tricrômico de Masson e observados em microscópio óptico. Na análise microscópica, pós 30 dias, o grupo experimental II apresentou algumas partículas de material em reabsorção por células mononucleares e também uma ligeira maior quantidade de osso trabeculado que os outros grupos. Neste período, enquanto os grupos experimentais apresentaram o defeito preenchido completa ou parcialmente com osso trabeculado, o grupo controle apresentou invaginação do tecido conjuntivo para o interior de defeito, apresentando apenas uma estreita faixa de tecido ósseo de arranjo trabecular. Após 90 dias todos os grupos mostraram intensa remodelação do osso trabeculado que foi substituído por osso lamelar. Após 180 dias, em geral, ambos os grupos experimentais e o grupo controle apresentaram um reparo semelhante. Na análise radiográfica não houve diferenças estatisticamente significantes nem intra nem interexaminadores. Também não foram observadas diferenças significantes entre os grupos em todos os períodos avaliados (p>0,05). Dessa forma, pela análise radiográfica o reparo ósseo foi similar em ambos os grupos experimentais e o controle nos períodos de 30, 90 e 180 dias após a cirurgia. Apesar do reparo ser similar em ambos os grupos experimentais e o controle no período de 180 dias pela análise microscópica e em todos os períodos pela análise radiográfica, o uso da matriz óssea desmineralizada em bloco ou microgrânulos evitou a invaginação do tecido conjuntivo para o interior do defeito ósseo nas fases iniciais do reparo. / The aim of this work was to verify the osseous repair in non through-andthrough defects treated with blocks of lyophilized bovine bone organic matrix of cancellous origin or micro granules (0.25-1.0 mm) of lyophilized bovine bone organic matrix of cortical origin (both materials Gen-Ox®- Baumer SA- Brazil). An osseous defect, 6mm in diameter by 8mm in depth, was created in both distal femoral epiphyses of male New Zealand White rabbits using a trephine bur. Fifteen defects were grafted with cancellous blocks (experimental group I), fifteen with cortical micro granules (experimental group II) and fifteen were filled with blood clot (control). The rabbits of each group were sacrificed 30, 90 and 180 days after surgeries. Thereafter, the epiphyses were collected and fixed. Radiographs were taken using the Digora digital radiographic system and conventional periapical films. The radiographic digital images (positive and negative) and the conventional radiographs were evaluated using scores by two examiners. After this, the epiphyses were demineralized with EDTA and embedded in paraffin. Semi-serial 6-µm thick sections were obtained, stained with hematoxylin and eosin and Masson Trichromic and examined under a light microscope. After 30 days the experimental group II presented some particles of bone matrix in resorption by mononuclear cells and a larger amount of primary woven bone than did the other groups. Both experimental groups showed total or partial closure by woven bone while the control group exhibited migration of the connective tissue into the defect area. After 90 days the experimental and control groups showed intense remodelation of neoformed woven bone that was replaced by lamellar bone. Generally, after 180 days both experimental and control groups exhibited a similar pattern of repair. In the radiographic analysis, neither intra-examiners significant differences nor interexaminers significant differences were observed. Also no significant differences among the groups in all evaluated periods were observed (p>0.05). The osseous repair evaluated by digital and conventional radiographs was similar in both experimental groups and control groups in the periods of 30, 90 and 180 days post-surgery. Although the bone formation appeared similar in the experimental and control groups after 180 days by the histological analysis and in all periods by radiographic analysis, the use of lyophilized bovine bone organic matrix in blocks or micro granules avoided the migration of connective tissue into the defect area in the initial phases of the repair.

Trata-se de uma pesquisa que utilizou a revisão integrativa da literatura que objetivou as possíveis intervenções de enfermagem para os familiares de clientes transplantados de medula óssea. Realizou-se a busca de artigos e teses nas bases de dados eletrônicas Lilacs e Medline (período de 01/01/1990 a 05/05/2005), utilizando-se as palavras: “bmt” e “family” e “bone marrow transplantation” e “family” respectivamente. Foram identificadas duas publicações no Lilacs, sendo que apenas uma foi pertinente ao tema proposto e 807 publicações no Medline, das quais apenas 24 abordavam o tema proposto, a amostra foi constituída por 25 publicações. Para análise dos artigos utilizou-se um instrumento para identificação das características dos artigos, níveis de evidências, delineamento da pesquisa, características da crise familiar, fatores que influenciam a habilidade das famílias para enfrentar e se adaptar a uma crise e, por fim, intervenções de enfermagem propostas. Foi utilizado o modelo de crise proposto por Hill e Hansen que classifica a crise em quatro categorias: características do evento, ameaças percebidas, avaliação dos recursos da família e experiência passada em crises. Os resultados mostraram que 96% dos artigos foram obtidos do Medline, sendo que 12 (48%) artigos foram desenvolvidos por enfermeiros e os demais por outros profissionais. Em relação ao tipo de revista, 36% dos artigos foram publicados em periódicos específicos de enfermagem, sendo que 72% provém dos EUA, 16% da Grécia, Canadá, Polônia e Brasil (distribuídos igualmente) e 12% não foi possível identificar a procedência. As evidências clínicas variaram entre os níveis 4(64%), 5 (4%) e 6 (28%), e mostraram a importância da comunicação efetiva e clara entre os membros familiares, equipe e paciente para minimizar a ansiedade e depressão; que os tipos específicos de família, suas características, coesão, poucos conflitos, orientações culturais e intelectuais e ênfase religiosa promovem maior suporte emocional aos mesmos e que os grupos de apoio e redes de apoio minimizam a ansiedade, angústia e a depressão vivenciada pelo paciente e sua família. Quanto às intervenções percebe-se que a maioria está voltada para os aspectos psicológicos e sociais, sendo relevantes a ação do enfermeiro nas propostas de estratégias de enfrentamento para o familiar e o paciente frente às diversas fases do TMO. As intervenções propostas na literatura vão ao encontro das sugeridas pela NIC para os diagnósticos de enfermagem “processos familiares interrompidos e enfrentamento familiar comprometido”; em especial o suporte emocional (64%), suporte familiar (36%), redução da ansiedade (28%), grupo de apoio (32%), melhora do enfrentamento (40%) e assistência quanto aos recursos financeiros (24%). Apreende-se que outras intervenções sugeridas pela NIC poderão ser desenvolvidas pelos enfermeiros. / This study presents an integrative literature review of possible nursing interventions for family members of bone marrow transplant (BMT) patients. We looked for articles and theses in the electronic databases Lilacs and Medline (from 01/01/1990 to 05/05/2005), using the following keywords: “bmt” and “family” and “bone marrow transplantation” and “family” respectively. Two publications were identified in Lilacs, one of which was relevant for the proposed subject, against 807 publications in Medline, 24 of which dealt with the proposed theme. Thus, the sample consisted of 25 publications. In the analysis, we used an instrument to identify the articles’ characteristics, levels of evidence, research design, family crisis characteristics, factors influencing the families’ ability to deal with and adapt to a crisis and, finally, proposed nursing interventions. The crisis model by Hill and Hansen was used, which classifies a crisis into 4 categories: event characteristics, perceived threats, family resources and past crisis experience. The results evidenced that 96% of the articles came from Medline, 12 (48%) of which were developed by nurses and the remainder by other professionals. What the type of journal is concerned, 36% of the articles were published in specific nursing periodicals, 72% of which were from the USA, 16% from Greece, Canada, Poland and Brazil (equal distribution) and, for 12%, the origin could not be identified. Clinical evidence varied between levels 4 (64%), 5 (4%) and 6 (28%) and demonstrated the importance of effective and clear communication between family members, team and patient with a view to minimizing anxiety and depression; that specific family types, their characteristics, cohesion, few conflicts, cultural and intellectual orientations and religious emphasis provide greater emotional support and that support groups and networks minimize the anxiety, anguish and depression patients and relatives experience. Most interventions are aimed at psychological and social aspects. Nursing actions are relevant in strategies proposed for family members and patients to cope with the different phases of BMT. The interventions proposed in literature are in accordance with suggested NIC interventions for the nursing diagnoses “interrupted family processes and compromised family coping”; especially emotional support (64%), family support (36%), anxiety reduction (28%), support group (32%), improved coping (40%) and financial aid (24%). We believe that nurses can develop other NIC interventions.

As mielopatias progressivas podem ser secundárias a alguns erros inatos do metabolismo (EIM) como as Mucopolissacaridoses (MPS), as Mucolipidoses (ML) e a Adrenomieloneuropatia (AMN). A escala para medir a gravidade de uma mielopatia que tem sido utilizada em algumas dessas condições é o escore JOA (Japanese Orthopaedic Association), escala que foi construída e validada somente para doença vertebral degenerativa. Objetivos: propor uma nova escala desenhada para mielopatias progressivas e apresentar dados de validação da JOA nessas doenças. Métodos: Uma nova escala foi construída, chamada “Progressive Mielopathy Severity Score System” (PROMSS), os seus escores variando de 0 a 100, e cobrindo os seguintes domínios: incapacidade motora (50% da escala), disfunção esfincteriana (20%), espasticidade (10%) e perda de sensibilidade (20%). Confiabilidades inter e intraexaminador foram testadas. A validação externa foi realizada através da sua comparação com as escalas já estabelecidas JOA, EDSS (Expanded Disability Status Scale), Índice de Barthel e Osame Motor Disability Score (OMDS). Resultados: 38 pacientes – 17 AMN, 3 MPS I, 3 MPS IV, 2 MPS VI, 2 ML e 11 pacientes com infecção pelo HTLV-1 – entraram no estudo. A média (dp) da PROMSS e JOA foi de 74,6(11,4) e 12,4(2,3), respectivamente. Conseguiu-se demonstrar evidência em favor da validade de construto (Spearman´s rank test com: JOA: r = 0,84, p < 0,0001; EDSS: r = - 0,83, p < 0,0001; Índice de Barthel: r = 0,56, p < 0,002; OMDS: r = - 0,94, p < 0,0001) e da confiabilidade (intraexaminador: r = 0,83; p < 0,0001; interexaminador: r = 0,94, p < 0,0001) da escala PROMSS. As propriedades métricas da JOA, por sua vez, foram similares às encontradas na PROMSS. Discussão: Vários requisitos clinimétricos foram cumpridos por ambas escalas, PROMSS e JOA. A responsividade, entretanto, não foi testada, já que necessitaríamos de períodos maiores entre as avaliações para permitir alguma progressão dos quadros clínicos. Nós acreditamos que, por sua amplitude maior, a PROMSS poderá ser útil para estudos de seguimento em mielopatias por EIM.

A falência hepática fulminante é caracterizada pela rápida perda da função hepática com alta mortalidade. Neste trabalho verificamos o efeito da administração da fração mononuclear de células da medula óssea em ratos submetidos à lesão hepática aguda provocada por paracetamol, que atende aos critérios de um bom modelo de lesão hepática auxiliando na investigação dos mecanismos fisiopatológicos. Foram utilizados 173 ratos Wistar fêmeas para a realização deste estudo. Os animais foram pré-induzidos por fenobarbital 350mg/L, diluídos na água ingerida, durante quatro dias e após receberam uma dose de 1g/Kg de paracetamol via intraperitonial. A fração mononuclear de medula óssea de ratos machos foi purificada por gradiente de Ficoll e administrada nos animais 24 horas após a lesão. Uma concentração de 1x106 células marcadas por DAPI, diluídas em 0,2mL de PBS, foi injetada através da veia porta. O grupo sham recebeu o mesmo volume de solução salina através da veia porta e um subgrupo para estudo do dano oxidativo recebeu N-Acetilcisteína 150mg/kg intraperitonialmente. Experimentos prévios foram realizados para o estudo da melhor via de injeção celular, comparando a veia porta com a veia da cauda, através da avaliação da mortalidade cirúrgica. Pode-se observar um aumento da sobrevida nos ratos tratados com células de medula pela veia porta e com presença de células DAPI positivas no fígado. Além disso, os animais tratados apresentavam pouca necrose e diminuição nos níveis da ALT, 72h após a lesão, porém sem diferenças estatisticamente significativas em relação aos grupos não tratados. Não foram observadas diferenças no subgrupo analisado para dano oxidativo. Neste trabalho foi possível demonstrar que a fração mononuclear de medula óssea é capaz de aumentar significativamente a taxa de sobrevida de ratos Wistar submetidos à falência hepática fulminante por paracetamol. Estes resultados podem representar uma perspectiva de tratamento para casos de falência hepática fulminante. / Acute liver failure (ALF) is characterized by a rapid loss of liver function associated to high mortality. In the present work we investigated the effect of mononuclear bone marrow cells in rats with acetaminophen-induced ALF. This model fulfills the criteria for a good model of liver lesion, helping to elucidate the physiological mechanisms involved. We used 173 female Wistar rats that were pre-induced with phenobarbital 350mg/L diluted in the drinking water for four days and received 1g/Kg of acetaminophen (APAP) via intraperitoneal injection. one marrow mononuclear fraction of male rats was purified by Ficoll density gradient and administered to animals 24 hours after the APAP injection. DAPI-stained cells were injected through the portal vein in a concentration of 1x106 in 0.2mL of PBS. Sham group received the same volume of PBS and a subgroup for studying oxidative stress received N-Acetilcisteine 150mg/kg via intraperitoneal. Additional experiments were performed to confirm the best delivery method comparing portal and tail vein injections evaluating the surgical mortality. An increase in survival was observed in rats treated with bone marrow cells, as well as the presence of DAPI-positive cells in the livers. In addition, animals showed few necrotic areas and decreased ALT levels, although not statistically different from non treated animals. No differences were found in the subgroup analyzed for oxidative stress. In this study we have shown that bone marrow derived cells are capable of significantly increasing the survival rate of APAP-induced ALF in Wistar rats. This result may represent a perspective for the treatment of cases of acute liver failure.

No contexto atual dos centros de transplante de célula-tronco hematopoética (TCTH), as complicações precoces e tardias relacionadas ao transplante têm preocupado as equipes médicas, pois aumentam as taxas de morbi-mortalidade, elevando também os custos operacionais dos estabelecimentos de saúde. Neste sentido, a atenção dada as condições de saúde bucal dos pacientes que se submetem ao TCTH tem merecido nos últimos anos uma maior preocupação, embora ainda de uma maneira muito despadronizada, unidirecional e generalizada. Frente a evidência de que as condições intrabucais sofreriam modificações em função do protocolo do TCTH, a questão da influência da presença de infecções bucais nas complicações relacionadas ao TCTH recebeu maior atenção. Por conseguinte, iniciaram-se um número maior de investigações, direcionadas para o tipo e quantidade de infecção presente na cavidade oral. Objetivo: neste contexto o presente estudo foi desenvolvido no sentido de avaliar, mais precisamente, o impacto da presença da atividade inflamatória periodontal, assim como a presença de reconhecidas bactérias associadas à infecção periodontal, nas complicações relacionadas ao TCTH. Métodos: estudo prospectivo, observacional, em 105 pacientes candidatos ao TCTH autólogo e alogênico [condicionamento mieloablativo ou de intensidade reduzida (RIC)] do Serviço de Hematologia do Hospital de Clínicas de Porto Alegre (HCPA), sobre a presença da atividade inflamatória periodontal, definida por profundidade de sondagem e sangramento gengival, diagnosticada na avaliação bucal de rotina prétransplante e sua relação com mucosite oral, neutropenia, dias de febre, pega e Doença do Enxerto versus Hospedeiro (DECH) aguda. A associação foi aferida por ferramentas estatísticas uni e multivariadas, para p<= 0,05. Resultados: dos 91 pacientes com dados avaliáveis, 86,8% tinham atividade inflamatória periodontal (pelo menos um sítio com profundidade de sondagem>= 3 mm associada ao sangramento) e estavam igualmente distribuídos entre todas as modalidades de transplante. Devido ao fato que os desfechos avaliados foram superponíveis entre os grupos que receberam células-tronco de sangue periférico CTSP (autólogo e alogênico com RIC), as análises foram realizadas de acordo com a origem das células-tronco, com exceção da DECH aguda. A presença da atividade inflamatória periodontal aumentou significativamente os dias de mucosite nos pacientes submetidos ao TCTH com célula-tronco da medula óssea (MO) quando comparado ao TCTH de CTSP (p = 0.023), e este efeito permaneceu significativo (p = 0.03) mesmo quando controlado para o regime de condicionamento com Irradiação Corporal Total. Conclusão: a presença da atividade inflamatória periodontal levou a um aumento significativo na duração da mucosite oral nos pacientes que receberam TCTH de MO. Estes achados devem ser confirmados em um grupo maior de pacientes.

Diversos estudos têm demonstrado que o sistema serotoninérgico participa ativamente da regulação do circuito nociceptivo e locomotor da medula espinal. A atividade física induz analgesia e é um dos tratamentos efetivos para a melhora da função sensorial e motora de indivíduos com lesão nervosa periférica. Estudos demonstram que o exercício físico ocasiona mudanças em diferentes neurotransmissores. Para melhor compreensão da relação entre exercício físico e alterações no sistema serotoninérgico, o presente estudo demonstra os efeitos do treinamento aeróbico em esteira ergométrica sobre o padrão de imunorreatividade serotonina nos núcleos dorsal e magno da rafe, e na medula espinal lombossacral de ratos submetidos à secção do nervo ciático, mediante emprego de imunoistoquímica e densitometria óptica. Para isto os animais foram divididos em seis grupos: (1) ratos sem qualquer manipulação experimental e sedentários (NS, n = 5); (2) ratos sem qualquer manipulação experimental e treinados (NT, n = 5); (3) ratos com secção do nervo ciático e treinamento aeróbico (SNTT, n = 5); (4) ratos com secção do nervo ciático e sedentários (SNTS, n=5); (5) ratos com nervo ciático isolado, mas não seccionado (sham) e submetidos ao treinamento (ST, n=5); e (6) ratos com nervo ciático isolado, mas não seccionado, e sedentários (SS , n=5). Sete dias após o procedimento cirúrgico, os animais dos grupos com treinamento foram adaptados em esteira ergométrica diariamente por 10 minutos, durante 4 dias, a velocidade de 5 m/min. No quinto dia, esses ratos foram submetidos ao teste de esforço máximo, o qual consistiu em exercício graduado na esteira, com acréscimos da velocidade em 5 m/min a cada 3 min, iniciando com velocidade de 5 m/min e tendo como limite a intensidade máxima de cada animal. O valor máximo alcançado foi utilizado para planejamento do programa de treinamento aeróbico dos ratos. Após uma semana da secção do nervo ciático, os animais iniciaram o programa de treinamento aeróbico em esteira ergométrica, o qual teve duração de quatro semanas. A densitometria óptica revelou aumento da imunorreatividade no citoplasma de neurônios do núcleo magno da rafe (NMR) nos grupos de animais SNTT e SNTS. No núcleo dorsal da rafe (DNR), o acréscimo ocorreu apenas no citoplasma de neurônios de ratos do grupo ST. No corno ventral da medula espinal, apenas o grupo SNTT teve aumento dos valores de densitometria óptica. Apesar de este grupo ter mostrado os maiores valores de densitometria óptica no corno dorsal, este acréscimo não foi estatisticamente significativo. O teste dos filamentos de Von Frey mostrou a presença de analgesia nos grupos de animais com lesão nervosa periférica e treinamento físico. O índice de funcionalidade do nervo ciático indicou recuperação apenas no grupo SNTT. Com base nesses resultados, pode-se sugerir que tanto o treinamento aeróbico em esteira como a lesão nervosa contribuem para o aumento da imunorretividade à serotonina mostrada neste estudo. Todavia, ainda é necessária a realização de estudos mais detalhados relacionando serotonina, exercício físico e lesão de nervo periférico para melhor entendimento das relações funcionais entre estes parâmetros.

O objetivo deste estudo foi analisar os efeitos de um protocolo de natação sobre a alodinia mecânica e possíveis alterações no corno dorsal da medula espinhal de ratos machos adultos com dor neuropática crônica experimental, induzida por constrição crônica do nervo ciático. No experimento 1 foi testado o efeito do protocolo de natação na produção de analgesia e se este é mediado pelo sistema opióide endógeno em ratos com dor muscular crônica experimental. No experimento 2, estudou-se o efeito da analgesia induzida pelo exercício de natação em animais com dor neuropática experimental, avaliando a alodinia mecânica e as alterações imunoistoquimicas do corno dorsal da medula espinhal. O protocolo de exercício consistiu em natação em água aquecida (36°C), 30 min diariamente, durante 3 semanas. A alodinia mecânica foi avaliada através de filamentos de Von Frey e foi considerada a diminuição dela quando houve aumento no limiar de retirada frente ao estimulo mecânico com filamentos de Von Frey. A avaliação das alterações no corno dorsal da medula espinhal foram realizadas através de analise da imunorreatividade da serotonina e do CGRP (peptídeo relacionado ao gene da calcitonina). Os resultados mostraram que o protocolo de natação foi capaz de produzir analgesia opióide endógeno no modelo de dor muscular. Entretanto, no modelo de dor neuropática a natação não produziu analgesia. O modelo de dor neuropática levou a diminuição do CGRP ipsilateral a lesão, em contrapartida, não foi encontrada alteração serotonérgica entre ambos os grupos. Em conclusão, a natação é capaz de produzir analgesia no modelo de dor muscular, entretanto, na dor neuropática, que envolve um sistema mais complexo incluindo possíveis modificações centrais, a natação não produziu analgesia.

O uso de células da medula óssea no tratamento da insuficiência hepática aguda é uma alternativa promissora, visto que o único tratamento disponível atualmente é o transplante hepático o qual, devido à falta de órgãos para transplante e complicações pós-cirúrgicas, está associado a uma alta mortalidade. O interesse na identificação de populações celulares capazes de se diferenciar em células tipo-hepatócitos tem ganhado grande atenção, não somente como uma promissora fonte de células para terapia celular de doenças hepáticas, mas também como potencial fonte celular para modelos in vitro de testes pré-clínicos de medicamentos, modelos para estudo da hepatogênese, e desenvolvimento de fígados bioartificiais. O presente estudo teve como objetivo identificar a capacidade de diferentes populações de células da fração mononuclear da medula óssea (FMMO) de se diferenciar em células tipo-hepatócitos. Para isso, utilizamos um sistema de co-cultivo, onde as células da fração aderente e nãoaderente da FMMO eram mantidas em contato com o meio de hepatócitos derivados de animais com ou sem lesão por Tetracloreto de Carbono (CCl4). Nossos resultados mostram que células da fração não-aderente são capazes de adquirir características típicas de hepatócitos após 24 horas de exposição às células do tecido lesionado, tais como expressão gênica de Albumina e Citokeratina-18, e produção e secreção de uréia. Foi identificada a presença de microvesículas carregando material genético específico de hepatócitos no sobrenadante das células diferenciadas, indicando um possível mecanismo molecular na indução da diferenciação. Este trabalho permitiu o estudo da diferenciação celular in vitro e análise do papel do microambiente de lesão neste processo. / Cell therapy using bone marrow-derived cells is a promising approach for the treatment of acute liver failure, as liver transplant is associated to high mortality due to lack of organs and post-surgical complications. The identification of cell populations capable of generating hepatocyte-like cells has gained immense interest, not only as a promising cell source for cell-based therapy of liver diseases, but also as a potential cell source for in vitro models of drug safety testing, models for studying hepatogenesis, and development of bioartificial livers. In the present study, we investigated the capability of different populations from the bone marrow mononuclear cells (BMMC) to differentiate into hepatocyte-like cells. For that, adherent and non-adherent cells from the BMMC were co-cultured with hepatocytes obtained from animals with or without Carbon Tetrachloride (CCl4)-induced liver injury. Our results showed that non-adherent BMMC presented signs of differentiation, such as Albumin and Cytokeratin-18 expression and urea production, after 24 hours of co-culture with damaged hepatocytes. Microvesicles carrying hepatocyte-specific genetic material were detected in the supernatant from differentiated cells, thus suggesting a mechanism of differentiation. In summary, this study assessed in vitro differentiation of BMMC and analyzed the role of injury micro-environment in cell plasticity.

Orientador: Sara Teresinha Ollala Saad / Tese (doutorado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Ciencias Medicas / Made available in DSpace on 2018-08-04T23:41:32Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Luzo_AngelaCristinaMalheiros_D.pdf: 6304878 bytes, checksum: b63321671c0c64c404503f26c1bd336a (MD5) Previous issue date: 2005 / Resumo: A reconstituição da linhagem hematopoiética é um procedimento comum no tratamento de várias doenças hematológicas e não hematológicas. A medula óssea tem sido a principal fonte de obtenção de células tronco nos últimos 50 anos. Recentemente, células tronco obtidas de sangue periférico pós-mobilização e células mononucleares de sangue de cordão umbilical humano têm sido utilizadas com sucesso. Entretanto, as células tronco parecem ter características diferentes. Vários estudos foram publicados, recentemente, analisando a expressão gênica de sub populações de células tronco de linhagem hematopoiética de medula óssea, sangue periférico e de sangue de cordão. Tendo em vista que os procedimentos de terapia celular e transplante são realizados com a infusão de sangue total, o objetivo deste trabalho foi de analisar a expressão gênica das células mononucleares totais de sangue de cordão umbilical humano, a partir da técnica de análise seriada de expressão gênica (SAGE), e compará-Ia com a biblioteca de células mononucleares de medula óssea depositada on fine no Sagemap database. A expressão das proteínas de ciclo celular foi estudada através do método de "immunobfotting': a partir de células de sangue de cordão de recém nascidos prematuros e de termo, submetidas a cultura líquida de curta duração e em cultura em meio sem i-sólido de metilcelulose, suplementados com fatores estimulantes de crescimento. As células foram analisadas de quatro em quatro horas durante 24 horas e após, a cada 24 horas até 96 horas. A leitura das culturas em metilcelulose foi realizada no 7° e no 14o. dia. A análise de expressão gênica das células mononucleares de sangue de cordão evidenciou: 44.924 tags totais (15.519 tags únicas; 7772 genes conhecidos; 3935 seqüências preditas ou anotadas e 3812 genes desconhecidos) A medula apresentou 36577 tags totais (13075 tags únicas, 6711 genes conhecidos; 3371 seqüências preditas ou anotadas e 2993 genes desconhecidos). A análise funcional foi realizada através dos programas Gene Ontofogy Consortium e David. A distribuição por categoria foi similar nas duas bibliotecas. A análise detectou 48 genes com diferença na abundância de expressão ~ 10 e :510 e classificados no programa UniGene. Trinta e cinco foram mais expressos em sangue de cordão e estavam relacionados com resposta imune, ciclo celular e migração trans endotelial (homing). A validação do SAGE foi realizada através do método de reação em cadeia da polimerase, em tempo real quantitativo (qPCR), em 11 genes diferencialmente expressos, confirmando os resultados obtidos em 10 dos 11 genes validados, apresentando uma porcentagem de confirmação de 90%. Os resultados de alfa, beta e gama globina foram comparáveis aos da ontogenia da linhagem hematopoiética. F11 receptor, CDC25B, TGFA, SMARCC2, SKP1A, e NKG7 foram mais expressos em sangue de cordão e S100-A8 na medula óssea. A análise dos ensaios clonogênicos evidenciou um aumento significativo no número de colônias no i e no 14° dia nas culturas de sangue de neonatos prematuros, com significância estatística. Houve um aparecimento precoce das colônias no sétimo dia de cultura. As características morfológicas das culturas das células dos prematuros, no sétimo dia, eram semelhantes as das culturas de termo no décimo quarto dia. As culturas de prematuros no décimo quarto dia apresentavam grande quantidade de fibroblastos e se assemelharam, em número e morfologias, às de recém nascidos de termo com vinte e um dias de cultura. A análise da expressão das proteínas de ciclo celular demonstrou aumento de expressão de p130 à partir de 4 horas, cumulativo, desaparecendo ou diminuindo a partir de 24 horas. A expressão de p107 ocorreu após as 24 horas de cultura, acumulando até 96 horas. Entretanto, as expressões de p130 e p 107 foram maiores nas células de sangue de cordão que nas da medula óssea. Estes resultados sugeriram que as células de sangue de cordão umbilical de recém nascidos prematuros poderiam apresentar uma rápida progressão em ciclo celular. Os resultados aqui obtidos abrem novas perspectivas na caracterização funcional destes genes que poderão contribuir para um maior conhecimento da biologia das células de sangue de cordão umbilical / Abstract: Haematopoietic reconstitution is a common procedure for many haematological and non-haematological diseases. Up to now, total mononuclear bone marrow cells have been the main source for this procedure. Lately, total mononuclear peripheral and cord blood cells have also been successfully used. Many studies of gene expression profile of bone marrow, peripheral or cord blood manipulated cells have been performed during the last few years but, as total mononuclear cells have usually been used in clinical practice, the present study had the aim to compare, using serial analysis of the gene expression (SAGE), cord blood mononuclear cells with the bone marrow mononuclear celllibrary already deposited in Sagemap database. The cell cycle proteins expression were analysed by immunoblotting proceeding with umbilical cord blood cells from premature and full term neonates, submitted to clonogênic assays performed with short liquid culture and semi-solid methylcellulose culture, supplemented with growth factors. The cells were collected and analysed each four hours during the first 24 hours. Then, they were collected and analysed each 24 hours till 96 hours Cord blood revealed 44.924 tags (total) representing 15.519 unique tags (7772 known genes; 3935 sequence predicted or annotated; 3812 no matches). Bone marrow showed 36577 tags (total) representing 13075 unique tags (6711 known genes; 3371 sequence predicted or annotated; 2993 no matches). Genes were annotated using Gene Ontology Consortium. Category distribution was similar in both libraries. We found 48 genes with fold change difference ~ 10 and ~ 10 and UniGene number. Thirty-five were most expressed in cord blood and were related with immune response, cell cycle and homing. SAGE validation was performed by quantitative real time polymerase chain reaction (qPCR) of 11 differentially expressed genes confirming the SAGE results in 10 genes with a confirmation rate of 90%. Alpha, beta and gamma globin results were comparable with haematopoiesis ontogeny. F11 receptor, CDC25B, TGFA, SMARCC2, SKP1A, and NKG7 were most expressed in cord blood and S100-A8 in bone marrow. Fourteen highly expressed genes were function described. The semi-solid cultures analysis demonstrated that the cells of premature neonates had an early growth of CFU-E/BFU-E, CFU-GM and CFU-GEMM on the 7thday of culture, and the number of these colonies on the 7thand 14thday of culture was higher than fuI! term neonate's cells culture with statistic significance. The morphological characteristics on ih day of culture were comparable to those from full term neonates obtained on the 14thday. The premature cells cultures on the 14thday showed even fibroblasts and were comparable to those of full term neonates on the 21st day in terms of number and morphology of the colonies. The cell cycle protein expression analysis demonstrated the expression of p130 increased after the first 4 hours and accumulated, disappearing, or diminishing after 24 hours. On the other hand the p107 expression appeared after 24 hrs and accumulated until 96 hrs. However, the p130 and p107 expression was twofold higher in premature cells compared to full term cells. These results suggest that premature cells have a rapid exit from GO/G1 to S-phase Thus, homing, cell cycle differentiation, and immune response related genes seem to be highly expressed in cord blood cells. Further studies verifying the role of these genes may contribute for greater knowledge regarding cord blood cell biology / Doutorado / Clinica Medica / Doutor em Clínica Médica