A galectina-1 (Gal-1) é uma lectina que reconhece ?-galactosídeos e participa de vários processos biológicos, incluindo a modulação da resposta inflamatória. Dados da literatura mostram a participação desta lectina na indução da exposição de fosfatidilserina (FS - um marcador de apoptose), na geração de espécies reativas do oxigênio (EROs) e na modulação quimiotática de neutrófilos. Entretanto, ainda são escassos os dados relacionados ao impacto biológico da Gal-1, exógena e endógena, sobre a biologia destas células. Neste trabalho foram avaliados, in vitro, alguns aspectos funcionais da interação Gal-1/neutrófilo. Determinou-se o nível de expressão da Gal-1 (Western Blotting) e de seu mRNA (PCR real time), em leucócitos humanos obtidos do sangue periférico de doadores sadios e em células da linhagem promielocítica humana (HL-60). Leucócitos do sangue periférico e células HL-60 não expressam níveis detectáveis da proteína e também do mRNA para Gal-1. Por meio de ensaios de quimiluminescência (QL) foi possível analisar a capacidade da Gal-1 recombinante humana de induzir e modular a produção de EROs em neutrófilos humanos não ativados e ativados com fMLP (n-Formil-Methionyl-Leucyl-Phenylalanine). A Gal-1 induz a produção de EROs de modo dose-dependente em neutrófilos ativados com fMLP. Entretanto, em neutrófilos não ativados esta lectina não induz o metabolismo oxidativo e, além disso, é capaz de modular negativamente a produção de EROs em resposta ao fMLP. Tanto nas células não ativadas quanto ativadas com fMLP, os efeitos da Gal-1 na produção de EROs estão parcialmente associados a sua propriedade lectínica. Na literatura ainda não há relatos sobre a interferência da Gal-1 no metabolismo oxidativo em neutrófilos ativados com repetidas doses de fMLP. Sabe-se que o tratamento sucessivo com fMLP reduz os níveis de produção de EROs por neutrófilos, no entanto, a presença de Gal-1 não interferiu neste processo. Interessantemente, neutrófilos recuperados do peritônio de camundongos Gal-1-/- liberam mais EROs em resposta ao fMLP e a Gal-1 exógena quando comparado aos neutrófilos de animais selvagens. Com base nos achados in vitro e sabendo que na sepse polimicrobiana o neutrófilo desempenha um papel importante, o próximo passo foi utilizar o modelo de M-CLP (sepse moderada) em camundongos destituídos (Gal-1-/-) ou não (Gal-1+/+) do gene da Gal-1. Animais Gal-1-/-, apresentam menor taxa de sobrevivência. O influxo de neutrófilos e a carga bacteriana no peritônio são maiores nos animais Gal-1-/- apesar da menor quantidade de bactérias detectadas no sangue, em relação aos animais selvagens. No pulmão, o influxo de neutrófilos é semelhante para ambos os grupos. No entanto, após a injeção intraperitoneal de 107 Unidades Formadoras de Colônias (UFC) de bactérias, camundongos Gal-1-/- apresentam maior atividade bactericida no lavado peritoneal e sangue, em relação aos selvagens. A participação da Gal-1 na homeostase de neutrófilos foi demonstrada in vitro, por citometria de fluxo (anexina-V-FITC), onde a indução de FS nos neutrófilos tratados com Gal-1 favoreceu a fagocitose destas células por macrófagos. Portanto, este conjunto de resultados sugere que a Gal-1, exógena ou endógena, pode modular funções imunológicas de neutrófilos e participar da regulação do processo inflamatório/infeccioso sistêmico. / Galectin-1 (Gal-1) is a lectin that recognizes ?-galactosides and participates in biological processes, including modulation of the inflammatory response. Literature data show the involvement of this lectin to induce exposure of phosphatidylserine (PS - a marker of apoptosis), in the generation of reactive oxygen species (ROS) and in modulation of neutrophil chemotaxis. However, there are few data related to the biological impact of exogenous and endogenous Gal-1 on the biology of these cells. This study evaluated, in vitro, some functional aspects of the interaction of Gal-1 and neutrophil. It was determined the expression level of Gal-1 (Western blotting) and its mRNA (real time PCR) on human leukocytes obtained from peripheral blood of healthy donors and human promyelocytic cell line (HL-60). Peripheral blood leukocytes and HL-60 cells do not express detectable levels of this protein as well as the Gal-1 mRNA. Through chemiluminescence testing (CL) it was possible to analyze the ability of recombinant human Gal-1 to induce and modulate the production of ROS in naïve and activated (n-Formyl-Methionyl-Leucyl-Phenylalanine-fMLP) human neutrophils. Gal-1 induces ROS production in a dose-dependent way in fMLP activated neutrophils. However, in naive neutrophils this lectin does not induce oxidative stress and can negatively modulate ROS production in response to fMLP. The effects of Gal-1 on ROS production in both non-activated cells and activated cells are partially associated with their lectin property. In the literature there are no data about the interference of Gal-1 on ROS production in activated neutrophils with repeated doses of fMLP. It is known that the subsequent treatment with fMLP reduced levels of ROS production by neutrophils; however, the presence of Gal-1 did not affect this process. Interestingly, peritoneum neutrophils from Gal-1-/- mice release more ROS in response to fMLP and exogenous Gal-1 when compared to neutrophils from wild type animals. Based on the in vitro findings and considering that in polymicrobial sepsis, neutrophils play an important role, the next step was to use the M-CLP model (moderate sepsis) in mice lacking (Gal-1-/-) or not (Gal-1+/+) Gal-1 gene. Gal-1-/- animals present lower survival rate and fewer bacteria in the blood despite having higher bacterial load in infectious focus in relation to wild type mice. The rates of neutrophils influx into the peritoneum and lungs are similar for both groups. The participation of Gal-1 in the homeostasis of neutrophils was demonstrated in vitro by flow cytometry (annexin V-FITC), where induced PS by Gal-1 in the neutrophils enhanced the phagocytosis of these cells by macrophages. Therefore, this set of results suggests that Gal-1, exogenous or endogenous, can modulate immune functions of neutrophils and participate in the regulation of inflammatory/infectious disorders.

O período de transição nas vacas leiteiras é caracterizado por alterações fisiológicas como redução de consumo, balanço energético negativo, lipólise e perda de peso, hipocalcemia, queda na função imune e contaminação bacteriana do útero. O estudo avaliou o efeito de duas aplicações de vitamina ADE intramuscular sobre o perfil bioquímico, metabolismo oxidativo e a função de leucócitos polimorfonucleares de vacas holandesas multíparas e primíparas, com dieta a base de silagem de milho e concentrado, no período de transição. Foram utilizados 32 vacas holandesas, randomizadas em dois grupos, sendo que o grupo tratado recebeu vitaminas ADE (270.000 UI vitamina A, 80.000 UI vitamina D e 80 mg vitamina E/mL) na dose de 1mL/50 kg pela via intramuscular profunda, aos 20 e 10 dias antes do parto. Aos -20d;-10d; 0d; 7d; 14d; 28 dias do parto foram colhidas amostras de sangue para análise. As alterações fisiológicas do parto foram evidenciadas pelas variáveis: habilidade de redução férrica plasmática, glicose, ácidos graxos não esterificados, colesterol, aspartato aminotransferase, gamaglutamil transferase e creatinoquinase. O período de transição interferiu tanto na produção de espécies reativas a oxigênio (EROs) quanto na porcentagem de leucócitos polimorfonucleares (PMN) fagocitando sob estímulo de Staphylococcus aureus conjugada com iodeto de propídio (SAPI). Vacas primíparas apresentaram menor desafio metabólico que as vacas multíparas, demonstrado pelos maiores valores da atividade de superóxido dismutase e concentrações plasmáticas de glicose, e menores valores de betahidroxibutirato e gamaglutamil transferase nas primíparas. Além disso, as vacas primíparas apresentaram maior porcentagem de PMN fagocitando e maior produção de EROs frente ao estímulo da SAPI. A suplementação parenteral com vitaminas ADE, na dose utilizada, não foi suficiente para melhorar o status antioxidante das vacas, independente do número de partos, porém a suplementação aumentou a produção de EROs pelos leucócitos PMN quando estimulados com lipopolissacarídeos de Escherichia coli (LPS). / The transition period in dairy cattle is characterized by physiological changes such as reduced feed intake, negative energy balance, weight loss and lipolysis, hypocalcemia, reduced immune function and bacterial contamination of the uterus. This study evaluate the effect of two applications of intramuscular vitamin ADE on the biochemical profile, oxidative metabolism and function of polymorphonuclear leukocytes of primiparous and multiparous Holstein cows with diet based on corn silage and concentrate during the transition period. Thirty-two Holstein cows, randomized into two groups, the treatment group received vitamins ADE (270,000 IU vitamin A, 80,000 IU vitamin D and vitamin E 80 mg/mL) at a dose of 1mL/50 kg by intramuscular injection, at 20 and 10 days before calving. At -20d, -10d, 0d, 7d, 14d, 28 days of postpartum blood samples were collected for analysis. Physiological changes of calving were evidenced in the following variables: ferric reducing ability of plasma, glucose, nonesterified fatty acids, cholesterol, aspartate aminotransferase, gammaglutamil transferase and creatine kinase. Furthermore the transition period interfered in the production of reactive oxygen species (ROS) and the percentage of polymorphonuclear leukocytes (PMN) phagocytosing under stimulus Staphylococcus aureus conjugated with propidium iodide (SAPI). Primiparous dairy cows had lower metabolic challenge that multiparous, demonstrated by higher values of the activity of superoxide dismutase and glucose concentrations, and lower values of betahydroxybutyrate and gammaglutamil transferase in primiparous. Moreover, primiparous cows had higher percentages of phagocytosing PMN and increased production of ROS with SAPI stimulus. Parenteral supplementation with vitamins ADE was not sufficient to improve the antioxidant status of cows, regardless of the number of calving, but supplementation increased the production of ROS by PMN leucocytes when stimulated with lipopolysaccharide of Escherichia coli (LPS).

Submitted by Nathália Faria da Silva (nathaliafsilva.ufv@gmail.com) on 2017-06-14T14:43:21Z No. of bitstreams: 1 resumo.pdf: 19226 bytes, checksum: 3311f50c2162c5bb897dc91d378af6b2 (MD5) / Made available in DSpace on 2017-06-14T14:43:21Z (GMT). No. of bitstreams: 1 resumo.pdf: 19226 bytes, checksum: 3311f50c2162c5bb897dc91d378af6b2 (MD5) Previous issue date: 2005-05-15 / Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e Tecnológico / Na busca de novos resultados para elucidar o papel de HAP1 e ROX1, que codificam um ativador do metabolismo oxidativo e um repressor do metabolismo oxidorredutivo, respectivamente, na levedura Crabtree negativa Kluyveromyces lactis cuja versatilidade metabólica pode ser explorada em vários campos da biotecnologia, inicialmente, foi identificado um gene ortólogo ROX1 à S. cerevisiae na seqüência genômica de K.lactis. O gene KlROX1 possui 40% de identidade daquele presente em S. cerevisiae e um motif característico do domínio HMG (High Mobility Group). Com base nessa seqüência uma linhagem mutante com deleção de ROX1 foi construída e confirmada. O fenótipo URA + e rox1 - dos transformantes obtidos, K.lactis ∆rox1::URA3, foram 100% estáveis sob condição seletiva. O gene putativo ROX1 de K.lactis teve a sua função em resposta ao oxigênio confirmada em culturas de K. lactis sob regime contínuo e desrepressão por glicose, pois, a deleção de ROX1 induziu a um aumento no nível do transcrito do gene hipóxico HEM13. A análise dos produtos do metabolismo permitiu inferir que a deleção do gene ROX1 em K. lactis aumentou a capacidade fermentativa dessa levedura sob aerobiose e de desrepressão catabólica. A investigação em culturas K. lactis ∆hap1 submetidas ao cultivo contínuo aeróbico sob desrepressão por glicose revelou um fenótipo relacionado ao metabolismo oxidorredutivo, ou seja, K. lactis ∆hap1 é mais fermentativa levando a diversidade de metabólitos em torno do piruvato. A proposta da via de regulação parcial negativa controlando a expressão de HEM13 foi confirmada nas culturas K. lactis. / The objective of this study was to search for new results in order to elucidate the role of HAP1 and ROX1, which codify an oxidative metabolism activator and an oxidoreductive metabolism repressor respectively, in the Crabtree-negative yeast Kluyveromyces lactis, whose metabolic versatility can be exploited in several biotechnology fields. Initially, a ROX1 gene orthologous to S. cerevisiae was identified in the genomic sequence of K. lactis. The KlROX1 gene has 40% identity with the one present in S. cerevisiae and a characteristic motif of the HMG (High Mobility Group) domain. Based on this sequence, a mutant line with ROX1 deletion was built and confirmed. The obtained transformant URA + and rox1 - phenotypes, K. lactis ∆rox1::URA3, were 100% stable under selective condition. The putative K. lactis ROX1 gene had its function in response to oxygen confirmed in cultures of K. lactis under continuous regime and glucose derepression, since ROX1 deletion induced an increase in the level of the HEM13 hypoxic gene transcript. The analysis of metabolism products allowed inferring that the deletion of gene ROX1 in K. lactis increased the yeast fermentative capacity under aerobic and catabolic derepression. The investigation in K. lactis ∆hap1 cultures under continuous aerobic cultivation and glucose derepressiom revealed a phenotype related to oxidoreductive metabolism, in other words, K. lactis ∆hap1 is more fermentative, leading to metabolite diversity around the piruvate. The proposal of the partial negative regulation pathway controlling the HEM13 expression was confirmed in K. lactis cultures.

Resumo: Avaliou-se a segurança e a eficácia da técnica de biopsia pulmonar transtorácica percutânea e seus efeitos sobre o metabolismo oxidativo na espécie ovina. Foram utilizados 20 ovinos clinicamente sadios e destinados ao abate. Inicialmente, foram coletadas amostras de sangue da veia jugular em tubos de ensaio contendo heparina. Após a colheita, foi realizado o exame clínico seguido da biopsia pulmonar com agulha semi-automática no 7º espaço intercostal direito cerca de 5 cm acima do olécrano. Avaliou-se o número de tentativas para a realização do procedimento e o tamanho dos fragmentos. As amostras obtidas foram analisadas histologicamente. Uma nova colheita de sangue foi realizada 30 minutos após a biopsia, e as amostras levadas ao laboratório para a detecção indireta dos radicais livres [superóxido dismutase (SOD), glutationa total (GSH-t) e peroxidase (GSH-Px) e substâncias reativas ao ácido tiobarbitúrico (TBARS)]. Após o abate foi realizado o exame pos mortem para avaliação de complicações da técnica e das eventuais lesões provocadas. Entre todos os animais submetidos à biopsia apenas dois demonstraram resistência à técnica, sendo obtidos fragmentos pulmonares que mediram entre 4 mm a 7 mm de comprimento, com média de 1,8 1 tentativas por fragmento. As principais alterações relacionadas à técnica foram: tosse, dispnéia inspiratória, elevação das freqüências cardíaca e respiratória e aumento do ruído broncobronquiolar. Ao exame pos mortem observou-se hemorragia dos músculos intercostais e pleura visceral de tamanho variado em todos os cordeiros, além de feridas lineares de até 14 mm nos dois animais que não reagiram bem ao procedimento. Das 20 tentativas de execução da técnica, 18 obtiveram sucesso, enquanto que em duas o fígado foi equivocadamente puncionado. As amostras de tecido pulmonar foram consideradas representativas... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract: It was evaluated the safety and effectiveness of the percutaneous transthoracic lung biopsy technique and its effects of the procedure on oxidative metabolism in sheep. It was used 20 clinically healthy sheep. Initially, blood samples were collected from the jugular vein in test tubes containing heparin. After collecting the blood, the clinical examination was carried out followed by lung biopsy with a semi-automatic needle biopsy. The number of attempts and size of the fragments were measured and the samples were analyzed histologically. New blood samples were collected 30 minutes after the biopsy. All blood samples were taken to the laboratory for the indirect detection of free radicals [superoxide dismutase (SOD), total glutathione (GSH-t), glutathione peroxidase (GSH-Px) and thiobarbituric acid reactive substances (TBARS)]. After the slaughter, a post mortem examination assessed the technical complications and possible injuries. Among all animals underwent biopsy only two did not tolerate the technique. It were obtained Lung fragments from 4 mm to 7 mm and it were required on average 1,8 attempts. The main changes related to the procedure were: cough, labored breathing, increased heart and breathing rate and increased broncobronquiolar noise. The post-mortem examination revealed bleeding of the intercostal muscles and visceral pleura of various sizes in all lambs, and a wound up to 14 mm in the lung of two animals that did not tolerate the procedure. From 20 attempts to implement the technique, 18 were successful, while in two of them the liver was mistakenly punctured. Samples of lung tissue were representative. It was possible to visualize intact structures, including bronchioles and alveoli. The activity of SOD and GSH-Px decreased thirty minutes after the biopsy. There were no changes in GSH-t and TBARS concentrations after the procedure. The percutaneous transthoracic lung... (Complete abstract click electronic access below) / Orientador: Roberto Calderon Gonçalves / Coorientador: Débora Cristina Damasceno / Banca: Simone Biaggio Chiacchio / Banca: Fernando José Benesi / Mestre

O período de transição nas vacas leiteiras é caracterizado por alterações fisiológicas como redução de consumo, balanço energético negativo, lipólise e perda de peso, hipocalcemia, queda na função imune e contaminação bacteriana do útero. O estudo avaliou o efeito de duas aplicações de vitamina ADE intramuscular sobre o perfil bioquímico, metabolismo oxidativo e a função de leucócitos polimorfonucleares de vacas holandesas multíparas e primíparas, com dieta a base de silagem de milho e concentrado, no período de transição. Foram utilizados 32 vacas holandesas, randomizadas em dois grupos, sendo que o grupo tratado recebeu vitaminas ADE (270.000 UI vitamina A, 80.000 UI vitamina D e 80 mg vitamina E/mL) na dose de 1mL/50 kg pela via intramuscular profunda, aos 20 e 10 dias antes do parto. Aos -20d;-10d; 0d; 7d; 14d; 28 dias do parto foram colhidas amostras de sangue para análise. As alterações fisiológicas do parto foram evidenciadas pelas variáveis: habilidade de redução férrica plasmática, glicose, ácidos graxos não esterificados, colesterol, aspartato aminotransferase, gamaglutamil transferase e creatinoquinase. O período de transição interferiu tanto na produção de espécies reativas a oxigênio (EROs) quanto na porcentagem de leucócitos polimorfonucleares (PMN) fagocitando sob estímulo de Staphylococcus aureus conjugada com iodeto de propídio (SAPI). Vacas primíparas apresentaram menor desafio metabólico que as vacas multíparas, demonstrado pelos maiores valores da atividade de superóxido dismutase e concentrações plasmáticas de glicose, e menores valores de betahidroxibutirato e gamaglutamil transferase nas primíparas. Além disso, as vacas primíparas apresentaram maior porcentagem de PMN fagocitando e maior produção de EROs frente ao estímulo da SAPI. A suplementação parenteral com vitaminas ADE, na dose utilizada, não foi suficiente para melhorar o status antioxidante das vacas, independente do número de partos, porém a suplementação aumentou a produção de EROs pelos leucócitos PMN quando estimulados com lipopolissacarídeos de Escherichia coli (LPS). / The transition period in dairy cattle is characterized by physiological changes such as reduced feed intake, negative energy balance, weight loss and lipolysis, hypocalcemia, reduced immune function and bacterial contamination of the uterus. This study evaluate the effect of two applications of intramuscular vitamin ADE on the biochemical profile, oxidative metabolism and function of polymorphonuclear leukocytes of primiparous and multiparous Holstein cows with diet based on corn silage and concentrate during the transition period. Thirty-two Holstein cows, randomized into two groups, the treatment group received vitamins ADE (270,000 IU vitamin A, 80,000 IU vitamin D and vitamin E 80 mg/mL) at a dose of 1mL/50 kg by intramuscular injection, at 20 and 10 days before calving. At -20d, -10d, 0d, 7d, 14d, 28 days of postpartum blood samples were collected for analysis. Physiological changes of calving were evidenced in the following variables: ferric reducing ability of plasma, glucose, nonesterified fatty acids, cholesterol, aspartate aminotransferase, gammaglutamil transferase and creatine kinase. Furthermore the transition period interfered in the production of reactive oxygen species (ROS) and the percentage of polymorphonuclear leukocytes (PMN) phagocytosing under stimulus Staphylococcus aureus conjugated with propidium iodide (SAPI). Primiparous dairy cows had lower metabolic challenge that multiparous, demonstrated by higher values of the activity of superoxide dismutase and glucose concentrations, and lower values of betahydroxybutyrate and gammaglutamil transferase in primiparous. Moreover, primiparous cows had higher percentages of phagocytosing PMN and increased production of ROS with SAPI stimulus. Parenteral supplementation with vitamins ADE was not sufficient to improve the antioxidant status of cows, regardless of the number of calving, but supplementation increased the production of ROS by PMN leucocytes when stimulated with lipopolysaccharide of Escherichia coli (LPS).

O objetivo foi avaliar a atividade funcional dos polimorfonucleares (PMN) do sangue de bezerros neonatos \"in vitro\" - metabolismo oxidativo induzida por: S. aureus, E. coli e PMA e fagocitose para S. aureus e E. coli, em citômetro de fluxo. Quinze animais avaliados nos tempos: t0 (antes da ingestão de colostro/leite); t1(até 48 hs. p.n); t2 (48 - 96 hs. p.n.); t3 (96 - 144 hs. p.n.); t4 (144-192 hs. p.n.); t5 (192-240 hs.p.n.) receberam quatro litros (grupo 1 - G1), dois litros de colostro ( grupo 2 - G2) e somente leite (grupo 3 - G3). O metabolismo oxidativo basal não diferiu em nenhum dos grupos e idades. Entre os grupos este foi menor em G1 do que em G3 (t3). Induzido pela S. aureus foi maior entre t1 e t3 (grupo 1), entre t2 e t3 (grupo 2) e sem diferenças (grupo 3). Entre os grupos G1 foi maior que G3 (t1). Induzido pela E.coli foi maior entre t1 e t3 (grupo 1), maior em t2 (grupo 2) e sem diferenças (grupo 3). Entre os grupos G1 foi maior que G2 e G3 (t1). O PMA estimulou a explosão respiratória em G1, G2 e G3 entre t0 e t5. Entre os grupos G1 foi menor para do que G2 e G3. A comparação entre metabolismo basal e induzido para G1 foi maior para PMA e S. aureus entre t0 e t5 e para E. coli entre t1 e t5; para G2 foi maior para o PMA entre t0 e t5, para S. aureus entre t0 e t3 e para a E. coli entre t2 e t4; para G3 foi maior para o PMA e S.aureus entre t0 e t5 e para a E. coli entre t3 e t5. A fagocitose induzida pela S. aureus foi maior nos tempos t1, t2 e t4 (grupo1) e o percentual de fagocitose foi maior após t0; para o grupo 2, foi maior em t2 e t3 e o percentual foi maior após t0; para o grupo 3, não diferiram entre os tempos. Entre os grupos G1 foi maior que G2 e G3 (t4) e o percentual foi maior para G1 e G2 (t3) do que G3 e maior para G1 do que G2 (t5). A fagocitose induzida pela E. coli e o percentual de fagocitose não diferiram em nenhum grupo. Entre os grupos G1 foi maior do que G3 (t0) e o percentual foi maior para G1 do que G2 (t2). Conclusão: o colostro não interferiu no metabolismo oxidativo basal e estimulado pelo PMA, a S. aureus estimulou o metabolismo oxidativo e a fagocitose antes e após a ingestão de colostro. A E. coli não induziu o metabolismo oxidativo (G3) e não foi eficiente para estimular a fagocitose. Não ficou esclarecida a influência da idade sobre a atividade dos PMNs. O fornecimento de quatro litros de colostro melhora resposta funcional dos PMNs para as bactérias. / The aim of this study was to evaluate \"in vitro\" functional activities of neonatal calves blood polymorphonuclear leukocytes (PMNs) - respiratory burst and phagocytosis induced by S.aureus, E.coli and PMA, measured by flow cytometry. Fifteen calves were tested at times: t0 (before milk/colostrum ingestion); t1 (until 48 hours post partum); t2 (48-96 hrs p.p.); t3 (96 - 144 hrs. p.p.); t4 (144-192 hrs. p.p.); t5 (192-240 hrs. p.p.) and the groups intakes were 4 liters of colostrum (group 1), 2 liters of colostrum (group 2) and only milk (group 3). The basal respiratory burst did not differ among groups but it was lower in G1 than G3 (t3). The burst induced by S.aureus was higher between t1 and t3 (G1) and t2 and t3 (G2) and showed no difference (G3). The G1 values were higher than G3 (t1). E.coli induced higher values between t1 and t3 (G1), higher on t2 (G2) and showed no difference (G3). Among groups G1 was higher than G2 and G3 (t1). The PMA induced the respiratory burst in G1, G2 and G3 between t0 and t5. Among groups G1 was lower in G2 than G3. The induced basal metabolism was compared and G1 was higher to PMA and S.aureus between t0 and t5 and to E.coli between t1 and t5. The G2 showed higher values to PMA between t0 and t5, to S.aureus between t0 and t3 and E.coli between t2 and t4. The G3 showed higher values in PMA and S.aureus between t0 and t5 and E.coli between t3 and t5. The S.aureus induced phagocytosis was higher on t1, t2 and t4 (G1) and the phagocystosis percentage was higher after t0. G2 groups showed higher values on t2 and t3 and higher percentage after t0. G3 had no difference on times. G1 showed higher values than G2 and G3 (t4) and G1 and G2 (t3) had higher percentage than G3 with G1 higher than G2 (t5). The E.coli induced phagocytosis and its percentage did not differ among groups. G1 was higher than G3 (t0) and G1 showed higher phagocytosis percentage than G2 (t2). Conclusion: the colostrum did not affect either, the basal respiratory burst and the one stimulated by PMA. S. aureus stimulated the respiratory burst and phagocytosis before and after the colostrum intake. E.coli did not induce the respiratory burst (G3) and did not stimulate the phagocytosis. The age influence in PMNs activity was not totally clarified. The intake of 4 litters of colostrum increases the PMNs activity against the species of bacteria studied.

Made available in DSpace on 2014-06-11T19:22:52Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2007-08-17Bitstream added on 2014-06-13T18:08:44Z : No. of bitstreams: 1 figueira_tr_me_rcla.pdf: 369273 bytes, checksum: 78be44f75df9ba9856f75c31056f5ad3 (MD5) / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior (CAPES) / O objetivo deste estudo foi analisar a influência do estado de treinamento aeróbio sobre os efeitos do exercício prévio nos parâmetros da cinética do consumo de oxigênio (VO2) durante o exercício moderado. Para isto, 14 voluntários não treinados (GNT: massa corporal, 81,2 + 10,3 kg; estatura, 1,78 + 0,07 m; idade, 21,2 + 4,0 anos) e outros 14 ciclistas treinados (GT: massa corporal, 68,2 + 6,9 kg; estatura, 1,75 + 0,05 m; idade, 21,4 + 3,5 anos) (indivíduos com no mínimo dois anos de engajamento no treinamento e competições) realizaram um teste progressivo até a exaustão voluntária para a determinação do VO2 máximo (VO2max) e do limiar de lactato (LL). Posteriormente, realizaram em diferentes dias e em ordem aleatória, duas transições repouso-exercício (seis minutos na carga correspondente a 80% do LL), sendo uma delas precedida em oito minutos pelo exercício prévio (dois tiros de um minuto na carga correspondente a 120% VO2max, com um minuto de recuperação entre eles). Durante estes testes foram coletadas amostras de sangue capilar para a determinação da concentração de lactato sanguíneo e também monitoradas as variáveis cardiopulmonares a cada incursão ventilatória. O VO2 de repouso foi aumentado (p < 0,05) pelo exercício prévio (EPS) em ambos os grupos (GNT: 0,836 + 0,061 vs. 0,506 + 0,194 L/min; GT: 0,373 + 0,055 vs. 0,577 + 0,137 L/min). O tempo da resposta média do VO2 (constante tempo da resposta geral 0-360 s) foi significantemente reduzido na condição EPS apenas para o GNT (32,9 + 7,4 vs. 28,6 + 7,7 s; p < 0,05; GT: 25,7 + 5 vs. 23,3 + 5,8 s; p > 0,05). No GT, a Assimptota (VO2 médio dos últimos dois min de exercício) mostrou-se significantemente... / The aim of this study was to analyze the influence of aerobic fitness on the effects of prior exercise on VO2 kinetics parameters during moderate-intensity exercise. Fourteen untrained subjects (UG: body mass, 81.2 + 10.3 kg; height, 1.78 + 0.07 m; age, 21.2 + 4.0 years) and fourteen well trained cyclists (TG: body mass, 68.2 + 6.9 kg; height, 1.75 + 0.05 m; age, 21.4 + 3.5 years) (more than two years of engagement in endurance training and competition) performed one incremental test to voluntary exhaustion, in order to determine the lactate threshold (LT) and maximal VO2 (VO2max). Thereafter, they performed in different days and in random order, two rest to moderate-intensity exercise transitions (six minutes at 80% of LT), preceded by either no prior exercise or prior supra-maximal exercise (two bouts of one min at 120% of VO2max, with rest of one min between them). During the tests, capillary blood samples were collected to determine lactate concentration and the pulmonary gas exchanges were monitored continuously breath-by-breath. Resting VO2 was significantly (p < 0.05) increased by prior exercise (EPS) in both groups (UG, 0.836 + 0.061 vs. 0.506 + 0.194 L/min; TG, 0.373 + 0.055 vs. 0.577 + 0.137 L/min). Mean response time (time constant of overall VO2 response - 0 - 360 s) was significantly speeded by EPS in untrained group (UG: 32.9 + 7.4 vs. 28.6 + 7.7 s, p < 0.05; TG: 25.7 + 5.0 vs. 23.3 + 5.8 s, p > 0.05). In the trained group, the Assimptota (mean last two minutes VO2 value of moderate exercise) was significantly increased by EPS (TG: 2.208 + 0.383 vs. 2.067 + 0.266 L/min, p < 0.05; UG: 1.600 + 0.269 vs. 1.600 + 0.292 L/min, p > 0.05). It can be concluded... (Complete abstract click electronic access below)

Made available in DSpace on 2016-06-02T19:22:00Z (GMT). No. of bitstreams: 1 TeseETO.pdf: 666671 bytes, checksum: f1e90d7f19054ef35461fae1290b60b8 (MD5) Previous issue date: 2006-04-20 / Universidade Federal de Sao Carlos / Moderate exercise training is known to enhance fish appetite, feed conversion efficiency and growth rate. This type of exercise raises the hematocrit, thus blood hemoglobin concentration and the oxygen carrying capacity of the blood. This allows that less blood needed to be diverted away from the gut to supply aerobic metabolism in the muscles. Continuously swimming fish show lowered circulating levels of stress hormones (like cortisol) and this represents an energy saving and permits higher fish growth rate, with more homogenous body size. All aerobic living forms have defenses against reactive oxygen species. Oxygen consumption can increase with exercise training and this result in a higher production of reactive oxygen species. Antioxidants, like vitamin C, in the diet can reduce the disease risks and the oxidative damage by the reactive oxygen species. The aim of this study was to verify growth and oxidative metabolism of matrinxã, Brycon cephalus, after moderate and continuous exercise training (speed 1 2 BL.s-1) and after fed with vitamin C supplemented diet (432 mg AA.kg dieta-1). Matrinxãs were divided into four groups: Control (submitted to diet without vitamin C supplementation and to sedentarism), Vit.C (submitted to diet with vitamin C supplementation and to sedentarism), Exe (submitted to diet without vitamin C supplementation and to exercise training) and Vit.C+Exe (submitted to diet with vitamin C supplementation and to exercise training), during 60 and 90 days. After these treatments, matrinxãs were anesthetized and blood samples were collected with heparinized needles and syringes by caudal vein puncture. Fish were sacrificed by vertebral section, weighed and lengthened. Liver, white and red muscle and heart were collected for the biochemistry analysis. Plasma cortisol levels, liver vitamin C concentration, intermediary metabolite levels (glucose, glycogen, lactate, pyruvate and ammonia) and oxidative stress indicators (lipid hydroperoxide, superoxide dismutase and glutathione peroxidase) were measured. The exercise training increased growth rate of matrinxãs indicated by the condition factor and the maintenance of the liver glycogen levels and the higher muscle protein concentration. This moderate swimming exercise raised the hematocrit of matrinxãs and lowered the plasma cortisol levels. The vitamin C supplemented diet enhanced hepatic levels of this vitamin. This supplementation did not permit the increase of growth rate, however it reduced the lipid peroxidation levels. Exercise and vitamin C supplemented diet associated were responsible for the maintenance lipid peroxidation and antioxidants enzymes levels. After 90 days of experiment period, the group Vit.C+Exe showed similar growth and condition factor to the group Exe. The moderate exercise training with vitamin C supplemented diet increased the growth and the survive rates of matrinxãs, B. cephalus, due to the some alterations on the metabolism, improving the fish condition and favoring the fisheries production. / O exercício estimula o apetite do peixe, além de promover melhor aproveitamento dos nutrientes e maior taxa de crescimento. O exercício físico aumenta o hematócrito e a concentração de hemoglobina elevando a capacidade de transporte de oxigênio pelo sangue, não promovendo prejuízos ao processo de digestão durante a natação contínua. A redução dos níveis dos hormônios do estresse e da interação agressiva durante o exercício físico moderado permitem crescimento homogêneo dos animais. Os peixes, como todos os seres vivos aeróbicos, apresentam defesa antioxidante (enzimática e não-enzimática) contra espécies reativas de oxigênio. Devido ao aumento do consumo de O2 em conseqüência ao exercício, pode haver aumento destes radicais no organismo. Os antioxidantes, como a vitamina C, presentes na dieta podem diminuir os riscos de doenças e os danos oxidativos ocasionados pelas espécies reativas de oxigênio. O objetivo do presente estudo foi verificar o crescimento e o metabolismo oxidativo de matrinxã, Brycon cephalus, submetido ao exercício físico moderado e contínuo (velocidade de 1 2 BL.s-1) e à alimentação com dieta suplementada com vitamina C (432 mg AA.kg dieta-1). Os matrinxãs foram submetidos a quatro diferentes tipos de tratamentos: Controle (submetidos à alimentação com dieta não suplementada com vitamina C e ao sedentarismo), Vit.C (submetidos à alimentação com dieta suplementada com vitamina C e ao sedentarismo), Exe (submetidos à alimentação com dieta não suplementada com vitamina C e ao exercício) e Vit.C+Exe (submetidos à alimentação com dieta suplementada com vitamina C e ao exercício) pelos períodos de 60 e 90 dias. Após estes períodos experimentais, os matrinxãs foram anestesiados para a coleta de amostras sanguíneas por punção da veia caudal com seringas e agulhas heparinizadas. Estas amostras foram utilizadas para a determinação dos parâmetros hematológicos e obtenção de plasma por centrifugação. Os animais foram sacrificados por secção medular e pesados e medidos. A coleta de amostras de fígado, músculos branco e vermelho foi realizada para análises bioquímicas. Os níveis plasmáticos de cortisol, concentração de vitamina C no fígado, concentração dos intermediários metabólicos (glicose, glicogênio, lactato, piruvato, proteína e amônia) e indicadores de estresse oxidativo (hidroperóxido de lipídio, superóxido dismutase e glutationa peroxidase) foram determinados. A utilização do exercício físico moderado apresentou efeito positivo sobre o crescimento dos matrinxãs, indicado pelo fator de condição aparente e pelo aumento dos níveis de proteína muscular, além de promover aumento do hematócrito e diminuição dos níveis de cortisol plasmático. A suplementação de vitamina C foi eficaz em aumentar os níveis hepáticos desta vitamina. A dieta suplementada com vitamina C não promoveu aumento do crescimento, entretanto reduziu os níveis de peroxidação lipídica. A associação do exercício físico com a alimentação suplementada permitiu a manutenção dos níveis de peroxidação lipídica e das enzimas antioxidantes. Os matrinxãs do grupo Vit.C+Exe (90 dias) apresentaram crescimento e fator de condição aparente semelhante ao do grupo Exe. Assim, verificamos que a aplicação do exercício físico moderado e da suplementação da dieta com vitamina C podem levar à obtenção de maiores taxas de crescimento e de sobrevivência dos matrinxãs, B. cephalus, devido a alterações no metabolismo, melhorando a condição dos animais e favorecendo, deste modo, o aumento da produção de pescado.

Made available in DSpace on 2016-06-02T19:22:03Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2270.pdf: 1060140 bytes, checksum: 0b7efc00ddc044eb8a10b097ae4da1f9 (MD5) Previous issue date: 2008-12-10 / Universidade Federal de Sao Carlos / Copper sulfate (CuSO4) is widely used in aquaculture. Exposure to this compound can be harmful to fish, resulting in oxidative metabolism alterations and gill tissue damages, prejudicing the respiratory gasses exchange. Pacu, Piaractus mesopotamicus, (Wt = 43,4 ± 3,35 g) were distributed in experimental tanks (n = 10; 180 L) and exposed for 48 h to control (without copper addition), 0.4Cu (0.4 mg.L-1), 2.0Cu (2.0 mg.L-1), 0CupH (without copper addition, pH = 5.0), 0.4CupH (0.4 mg.L-1, pH = 5.0), 2.0CupH (2.0 mg.L-1, pH = 5.0), 0CuHpx (without copper addition, hypoxia), 0.4CuHpx (0.4 mg.L-1, hypoxia), e 2.0CuHpx (2.0 mg.L-1, hypoxia). The oxidative metabolic responses to copper were tissue-specific. In liver and red muscle the superoxide dismutase (SOD) was responsive to the increases in the aquatic copper. Glutathione peroxidase (GSH-Px) and catalase (CAT) showed close relation between the activities of these enzymes. The plasmatic intermediary metabolites and hematological variables in fish of group 0.4Cu were similar to those of control group. Conversely, the exposure to 2.0Cu caused an increase in the plasmatic pyruvate, number of red blood cells (RBC) and hemoglobin (Hb). Plasmatic copper concentration [Cup] increased in group 0.4Cu and decreased in 2.0Cu, suggesting the absence of linearity between aquatic and the absorbed copper. Exposure to 0.4Cu and 2.0Cu resulted in a reduction in Na+/K+-ATPase activity and an increase in metallothionein (MT) in the gills. Exposure to 0CupH caused a decrease in glucose and pyruvate concentrations and increase in RBC, Hb, and branquial Na+/K+-ATPase activity. These responses suggest that the fish acted mechanisms to revert the blood acidosis, save energy and increase the oxygen uptake. In the hepatic oxidative metabolism of fish exposed to 0CupH, an increase in SOD activity was observed. Probably GSH-Px was effective in keeping the hydroperoxides concentrations (HP). CAT was affected by pH variations. In the white muscle there was an increase in HP concentration without alteration in the antioxidante defenses (ADs). Plasmatic concentrations of glucose, lactate, pyruvate and ammonia decreased, while RBC, Hb and branquial Na+/K+-ATPase increased, suggesting that pacu exposed to hypoxia tended to increase the oxygen uptake and reduce the metabolism in order revert the blood pH fall. The evaluation of biomarkers in response to copper in acid medium suggests an interaction between these factors in the oxidative metabolism. These responses were tissue-specific. The intermediary metabolites showed different response pattern, but RBC and Hb presented similar responses in fish exposed to copper in neutral and acid pH. The intermediary metabolites, hematological parameters and oxidative metabolism were influenced by the significant interaction between copper and dissolved oxygen. MT was an effective biomarker, responding to copper in different pHs and dissolved oxygen. Combined-factors, copper + acid medium and copper + hypoxia, caused significant disturbance in the biomarkers than singlefactors. / O sulfato de cobre (CuSO4) é amplamente utilizado na aqüicultura. A exposição ao cobre pode ser danosa aos peixes e resultar em alterações no metabolismo oxidativo e danos no tecido branquial, dificultando as trocas gasosas. Pacus, Piaractus mesopotamicus, (Wt = 43,4 ± 3,35 g), foram distribuídos em tanques experimentais (n = 10; 180 L) e expostos por 48 h ao controle (sem adição de cobre), 0.4Cu (0.4 mg.L-1), 2.0Cu (2.0 mg.L-1), 0CupH (sem adição de cobre, pH = 5.0), 0.4CupH (0.4 mg.L-1, pH = 5.0), 2.0CupH (2.0 mg.L-1, pH = 5.0), 0CuHpx (sem adição de cobre, hipóxia), 0.4CuHpx (0.4 mg.L-1, hipóxia), e 2.0CuHpx (2.0 mg.L-1, hipóxia). As respostas do metabolismo oxidativo ao cobre mostraram-se tecido-específicas. No fígado e no músculo vermelho a superóxido desmutase (SOD) foi responsiva aos aumentos de cobre aquático. As atividades da glutationa peroxidase (GSH-Px) e catalase (CAT) mostraram íntima relação entre a atividade destas peroxidases. Os intermediários metabólicos plasmáticos e os parâmetros hematológicos nos peixes do grupo 0.4Cu foram semelhantes aos do grupo controle. Por outro lado, a exposição a 2.0Cu causou aumento na concentração de piruvato plasmático, número de eritrócitos (Eri) e concentração de hemoglobina (Hb). A concentração de cobre no plasma [Cup] aumentou no grupo 0.4Cu e diminuiu no 2.0Cu, sugerindo não haver relação linear entre o cobre presente na água e o cobre absorvido. As exposições a 0.4Cu e 2.0Cu resultaram em diminuição da atividade da Na+/K+-ATPase e aumento na concentração de metalotionina (MT) branquial. A exposição dos peixes a 0CupH diminuiu a concentração de glicose e piruvato com aumento do Eri, da Hb e na atividade da Na+/K+-ATPase branquial. Estas respostas sugerem que o organismo acionou mecanismos para reverter o quadro de acidez no sangue, poupar energia e elevar a captação de oxigênio. No metabolismo oxidativo hepático do grupo 0CupH houve aumento da atividade da SOD. Possivelmente, a GSH-Px foi efetiva em manter as concentrações de hidroperóxido (HP). A CAT foi sensível às variações do pH. No músculo branco houve aumento do HP sem alteração das defesas antioxidantes (DAs). Houve diminuição na concentração plasmática de glicose, lactato, piruvato, amônia e aumento no Eri, Hb e na atividade da Na+/K+- ATPase branquial, sugerindo que, em hipóxia, o pacu tendeu a aumentar a captação de O2 e reduziu o metabolismo na tentativa de reverter a diminuição do pH do sangue. A avaliação dos biomarcadores em resposta ao cobre em meio ácido sugere uma interação entre estes fatores do metabolismo oxidativo, sendo, estas respostas, tecido-específicas. Os intermediários metabólicos se comportaram de maneira diferente, mas Eri e Hb tiveram o mesmo padrão de resposta nos peixes expostos ao cobre em pH neutro e pH ácido. Os intermediários metabólicos, os parâmetros hematológicos e o metabolismo oxidativo foram influenciados pela interação significativa entre cobre e oxigênio dissolvido. A MT se mostrou um efetivo biomarcador por responder ao cobre em diferentes pHs e oxigênio dissolvido. Os fatores associados, cobre + meio ácido e cobre + hipóxia, causaram distúrbios significativos nos biomarcadores em relação aos fatores isolados.

Made available in DSpace on 2016-06-02T19:22:46Z (GMT). No. of bitstreams: 1 DissWSM.pdf: 741825 bytes, checksum: 42c42a8e241385705c4144be52b7f9ce (MD5) Previous issue date: 2006-03-10 / Financiadora de Estudos e Projetos / The physiological and biochemical responses to air exposure were analyzed in jeju, Hoplerythrinus unitaeniatus at 1(T1), 6 (T6) and 12 (T12) hours of exposure and 1 (TR1) e 6 (TR6) hours after returning to water environment. Plasma cortisol and glucose were significantly higher than those of control group (T0) after 1 and 6 hours and 1, 6 and 12 hours of air exposure, respectively. Acid-base and ionic unbalances during air exposure were evidenced by plasma pH and Na+ and K+ concentration following pH recovery as fish returned to water environment. Ammonia accumulation was found in all experimental groups increasing continuously during air exposure (from 102.20 nmol/mL in T0 to 339.53 nmol/mL in T12). During the recovery period in water there was a reduction in plasma ammonia concentration but it was significantly higher than the controls. Plasma lactate showed a slightly increase during air exposure and was significantly higher than the controls only 1 hour after recovery in water (from 4115.42 nmol/mL in T0 to 6423.84 nmol/mL in TR1) while piruvate increased after 6 hour in water (from 171.87 nmol/mL in T0 para 243.96 nmol/mL in TR6). Hematocrit, red blood cells, hemoglobin concentration and mean corpuscular hemoglobin concentration increased significantly during air exposure. On the first hour of air exposure the lipid hydroperoxide (HP) increased. There was a reduction of catalase (CAT) and superoxide dismutase (SOD) activity and an increase of glutathione peroxidase (GPX) during air exposure. Air exposure can be characterized as an stressor agent to H. unitaeniatus and imply in physiological adjustments to keep the O2 transfer from air to tissue and homeostasis as well as energy mobilization. / As respostas fisiológicas e bioquímicas de jeju, Hoplerythrinus unitaeniatus a exposição ao ar foram analisadas após 1(T1), 6 (T6) e 12 (T12) horas de exposição ao ar e 1 (TR1) e 6 (TR6) horas após o retorno ao ambiente aquático. As concentrações plasmáticas de cortisol e glicose foram significativamente maiores que as do grupo controle (T0) em 1 e 6 horas e 1, 6 e 12 horas em exposição ao ar, respectivamente. Desequilíbrio iônico e ácido-base durante exposição aérea foram evidenciados pela redução do Na+ e K+ plasmático e pH com subseqüente restauração do equilíbrio ácidobase quando o animal retornou ao meio aquático. Acúmulo de amônia foi observado em todos os grupos experimentais, aumentando progressivamente durante a exposição ao ar de 102,20 nmol/mL em T0 para 339,53 nmol/mL em T12. Durante recuperação em meio aquático, a amônia mostrou tendência a diminuir mas ainda foi significativamente maior do que a do grupo controle. A concentração de lactato mostrou tendência a aumento durante a exposição aérea, mais foi significativamente maior apenas após 1h de recuperação em meio aquático (de 4115,42 nmol/mL em T0 para 6423, 84 nmol/mL no grupo TR1) enquanto que o piruvato aumentou após 6 horas de recuperação (de 171,87 nmol/mL no T0 para 243,96 nmol/mL no TR6) no meio aquático. O hematócrito, número de eritrócitos, concentração de hemoglobina e concentração de hemoglobina corpuscular média aumentaram significativamente nos animais expostos ao ar atmosférico. Durante a primeira hora de exposição ao ar houve aumento de hidroperóxidos de lipídeos (HP). Durante a exposição aérea ocorreu diminuição da atividade da catalase (CAT) e da superóxido dismutase (SOD) e aumento da atividade glutationa peroxidase (GPX). A exposição ao ar atmosférico pode ser caracterizada como um agente estressor para H. unitaeniatus e implica em ajustes fisiológicos para manter a transferência do O2 atmosférico para os tecidos e a homeostase e mobilização de energia.