Este estudo foi realizado com o objetivo de desenvolvimento e validação do método microbiológico rápido empregando a técnica de bioluminescência de Adenosina Trifosfato (ATP) como método alternativo para o teste de esterilidade. O ATP reage com o sistema enzimático luciferina/luciferase e gera um fóton de luz em presença de íons magnésio, reação que pode ser utilizada na detecção de microrganismos. A luz gerada na reação é medida por um dispositivo chamado luminômetro, que traduz o sinal em unidades relativas de luz (URL), metodologia altamente sensível que pode ser utilizada na análise de produtos estéreis com o objetivo de diminuição no tempo do ensaio. Enquanto a turbidez do meio de cultura só pode ser visualizada quando o contaminante chega à concentração de 106 UFC/ml, a tecnologia de bioluminescência de ATP pode detectar amostras com concentração em torno de 104 UFC. Foram empregados na validação dados obtidos a partir do método tradicional de esterilidade (técnica de filtração) realizado paralelamente ao método alternativo. As soluções parenterais utilizadas nos ensaios foram: solução fisiológica 0,9%; solução de dextrose 5%; ringer lactato; e solução de metronidazol 0,5%. As soluções-teste foram inoculadas intencionalmente com suspensões microbianas preparadas através da diluição de Bioballs&#174, com concentrações de 10 UFC/100 ml, 2 UFC/100 ml e 0,4 UFC/100 ml. Após a realização do teste convencional, as membranas resultantes do ensaio foram incubadas nos meios de cultura caldo caseína de soja e tioglicolato. Alíquotas destes meios foram retiradas após 96 horas de incubação para análise pelo método alternativo. Os seguintes microrganismos foram selecionados para o estudo: Staphylococcus aureus, Bacilus subtilis, Pseudomonas aeruginosa, Candida albicans, Clostridium sporogenes, Aspergillus brasiliensis, Kocuria rosea e Micrococcus luteus. A análise dos resultados obtidos mostrou que o método alternativo é capaz de detectar os microrganismos testados. Quanto à sensibilidade, o método alternativo apresentou vantagem na concentração 2 UFC/100 ml, e equivalência nas outras concentrações. A não interferência dos diferentes produtos e meios nos resultados encontrados permite vislumbrar evidência de robustez do método. Adicionalmente, em relação ao tempo de resposta, o método alternativo demonstrou ser equivalente ao convencional (p-valor=0,43). / This study is being conducted with a goal of validating and developing the fast microbiological method of ATP bioluminescence, as an alternative method to the sterility test. The ATP reacts with the enzymatic system luciferin-luciferase and produces light in the presence of magnesium ions, this reaction can be used for microorganism\'s detection. The light generated in this reaction can be measured by a device called luminometer that translates the signal in relative light units (RLU). This methodology has high sensibility and it can be used in the sterile products analysis with the objective of reducing the time of the sample. While the turbidity of the culture medium it can be visualized just when the sample reaches a concentration of 106 UCF per mL, the bioluminescence assay can detect samples at concentrations around 104 UCF per mL. The both methods, conventional (filtration technique) and alternative were done in parallel and the result data were used in the validation study. It was used in the assay the next parenteral solutions: physiological solution 0,9%, metronidazole solution 0,5%, dextrose solution 5% and Ringer lactate. The test solutions were inoculated with the microorganism suspensions, prepared by the dilution of the Bioballs® with result concentrations of 10 CFU/100 mL, 2 FU/100 mL and 0,4 CFU/ mL. After the conventional test was performed, the result membranes were incubated in thioglicollate and soybean casein broth. After 96 hours of incubation, aliquots from the broth were taken to perform the analysis by the alternative method. The following microorganisms were selected to perform the validation study: Staphylococcus aureus, Bacilus subtilis, Pseudomonas aeruginosa, Clostridium sporogenes, Candida albicans, Aspergillus brasiliensis, Kocuria rosea and Micrococcus luteus. The analysis of results shows that the alternative method can detect the test microorganisms. Regarding of the sensibility, the alternative method shows advantage in the 2 CFU/mL inoculum concentration and equivalence in the other two concentrations. The method shows evidence of robustness because the results were not affected by the products or culture media used in the assay. Additionally concerning the detection time, the alternative method was established equivalent to the conventional method (p-value=0,43).

O ensaio turbidimétrico tem como princípio a redução da densidade óptica em suspensões microbianas, decorrente o incremento na concentração do antibiótico. No ensaio convencional trabalha-se com tubos de ensaio que demandam longo tempo para visualização da resposta. Assim, o método empregando microplacas com leitura cinética para a dosagem de antibióticos é de interesse considerável, uma vez que possibilita reduzir quantidade de material e tempo de análise necessários e permite o ensaio de grande número de amostras simultaneamente, com leitura e cálculo automatizado. O objetivo deste trabalho é desenvolver o método de doseamento microbiológico de vancomicina empregando microplacas e modo de leitura cinético, assim como validar o método desenvolvido, através da avaliação dos parâmetros de especificidade e seletividade, linearidade, faixa ou intervalo linear, exatidão e precisão. Adicionalmente foi contemplado desenvolvimento paralelo entre o método convencional e o cinético, de forma a permitir respaldo positivo quanto à validação. Sendo assim, através do estudo dos parâmetros de validação do método cinético, trabalhou-se em condições estabelecidas abrangendo curva-padrão de vancomicina com concentrações entre 0,6 e 1,0 µg/mL, e emprego de meio de cultura caldo de caseína-soja inoculado com Bacillus subtilis (ATCC 6633) na proporção de 5%. Foram obtidos resultados satisfatórios em 5 horas de incubação. Conclui-se que o ensaio em microplacas permite avaliar, com vantagens, a atividade do antibiótico frente ao microrganismo-teste, permitindo facilidade operacional e maior rapidez na obtenção dos resultados. / The principle of the turbidimetric assay is to reduce the optical density of microbial suspensions, due to the increase in the concentration of antibiotic. In the conventional test works with tubes that require long time to display the answer. Thus, the method using microplates with kinetic reading for the dosage of antibiotics is of considerable interest, since it allows possible to reduce the amount of material and analysis time required and allows for testing of large numbers of samples simultaneously, with automated reading and calculating. The aim of this work is to develop the method of microbiological assay of vancomycin using microplates and kinetic reading mode, and to validate the method developed by evaluating the parameters of specificity and selectivity, linearity, linear range, accuracy and precision. Also included was the parallel development between the conventional method and the kinetic, to enable positive support for the validation. Thus, by studying the validation parameters of the kinetic method, worked under conditions laid down covering vancomycin standard curve with concentrations between 0.6 and 1.0 mg / mL, and soybean-casein broth inoculated with 5% of Bacillus subtilis (ATCC 6633). Satisfactory results were obtained with 5 hours incubation. In conclusion, the microplate assay allows to evaluate, with advantages, the activity of the antibiotic against the microorganism, allowing greater operational ease and rapidity of obtaining results.

A água é, sem dúvida, a matéria-prima de maior volume empregada, considerando de forma global, na produção farmacêutica. Pode ser usada direta ou indiretamente, com profundo potencial de impacto na qualidade do produto e na segurança do paciente. Consiste em meio de crescimento que, embora não rico, apresenta variações em suas características microbianas. Sendo assim, os métodos tradicionais utilizados em sua análise, apesar de simples, exigem vários dias para obtenção de resultados e muitas vezes não são sensíveis o suficiente para recuperar microrganismos em determinados estados fisiológicos, como por exemplo, biofilmes ou em estado viável não cultivável. Em virtude disso, o presente trabalho foi elaborado com intuito de desenvolver pesquisas para inovar no controle de qualidade microbiológico da água utilizada para fins farmacêuticos e, além de agregar novas técnicas, visa que os produtos farmacêuticos estejam disponíveis no mercado de modo rápido, seguro, eficaz e com a qualidade desejada. Desta forma, o objetivo do presente trabalho foi avaliar o potencial das tecnologias alternativas, em específico a citometria de fluxo, no monitoramento microbiano da água purificada, de forma a assegurar a manutenção de baixo risco de falha microbiana. O estudo foi conduzido em três etapas: a primeira etapa foi denominada de prova de conceito e teve por objetivo avaliar se existia alguma correlação entre os resultados obtidos com o método alternativo com aqueles obtidos com o método tradicional; a segunda etapa foi a validação da metodologia alternativa, etapa na qual foram avaliados todos os parâmetros de validação exigidos pelas principais normas e compêndios farmacêuticos; a terceira e última etapa foi denominada de equivalência, etapa na qual foi demonstrada a equivalência entre o método alternativo e os métodos farmacopeicos quando desafiados com amostras de água purificada coletadas de reservatórios da Faculdade de Ciências Farmacêuticas (FCF/USP). Os resultados obtidos no presente estudo demonstraram que a citometria de fluxo é não só uma opção válida em relação ao método tradicional por semeadura em profundidade como também oferece como principal vantagem a possibilidade de se ter resultados em tempo real, possibilitando efetuar qualquer correção no processo produtivo a tempo. / Water certainly is the most used raw material used in pharmaceutical industry, considering volume of material and manufacturing process. It may be used either directly or indirectly, causing a considerable impact on product quality and patient safety. It may be considered a poor culture media that presents variable microbiologic characteristics. Even though the traditional microbiological methods used for water evaluation are simple, data obtainment requires several days. In addition, these methods are unable to recover microorganisms from determined physiological conditions, such as those observed in biofilms or in a viable but non-culturable state. Therefore, the present work aimed to research innovative methods for microbiologic quality control of water for pharmaceutical use. The new techniques intend to provide pharmaceutical product to market more rapidly, while maintaining its safety and quality. Specifically, the objective of this work was to evaluate alternative technologies, namely flow cytometry, and their application on microbiological assessment of purified water ensuring the low risk of microbiological fail. This study was conducted in three steps: the first, named as proof of concept, aimed to determine whether occurred any correlation between results obtained from traditional methods and results obtained from alternative method. Validation of alternative method was performed in the second step. This step was executed considering all validation parameters required for main pharmaceuticals norms and compendia. The last step was named equivalency, in which was showed the equivalence between traditional and alternative methods when challenged against purified water sampled from School of Pharmaceutical Sciences (FCF/USP) reservoirs. Results showed that flow citometry is equivalent to traditional methods and was also able to provide real-time evaluation, which enables to adjust the manufacturing process as soon as a deviation is detected.

O objetivo geral deste estudo foi avaliar o efeito da mastite subclínica sobre a composição e a qualidade higiênica do leite de tanque de rebanhos leiteiros. Especificamente, objetivou-se avaliar o efeito da contagem de células somáticas (CCS) do leite cru de rebanhos leiteiros sobre as concentrações de gordura, proteína, sólidos totais e extrato seco desengordurado e sobre a contagem bacteriana total (CBT), contagem de psicrotróficos (CP) e contagem de coliformes (CC) do leite cru. Foram selecionados 230 rebanhos leiteiros localizados no Sul de Minas Gerais e Oeste de São Paulo, com base na média geométrica da CCS de cinco análises do mês anterior ao início das coletas. Estes rebanhos foram classificados de acordo com a CCS em três grupos: baixa (< 250.000 células/mL), média (> 250.000 e < 750.000 células/mL) e alta CCS (> 750.000 células/mL). Após a seleção dos rebanhos, amostras de leite de tanque foram coletadas quinzenalmente, por um período de três meses, totalizando 1380 amostras, que foram submetidas às análises de composição, CBT, CP e CC. Foi observado menor CBT e CC nos rebanhos com menor CCS, no entanto, rebanhos de média e alta CCS apresentaram maiores teores de gordura, proteína e sólidos totais. Foi observada média correlação entre CBT e CP (r = 0,6215) e entre CP e CC (r = 0,3692). Entre os indicadores de higiene e a composição do leite foram observadas correlações baixas e negativas entre CBT e gordura (r = -0,0585), CP e gordura (r = -0,0688) e CP e ST (r = - 0,0662). Os rebanhos com CCS < 250.000 células/mL apresentam maior qualidade higiênica do leite de tanque, no entanto, quanto à composição, rebanhos com maior CCS apresentaram maiores teores de gordura e proteína. / The general objective of this study was to evaluate the effect of subclinical mastitis on composition and hygienic quality in bulk tank milk of dairy herds. The specific objectives were to evaluated the effect of somatic cell count (SCC) of raw milk on contents of fat, protein, total solids and nonfat dry milk and on total bacterial count (TBC), psychrotrophic count (PC) and total coliform count (CC). A total of 230 dairy farms located in South of Minas Gerais and West of São Paulo were selected, based on SCC geometric mean obtained from five monthly analysis preceding the beginning of the study. These dairy farms were classified in three groups according to SCC: low (< 250,000 cells/mL), medium (> 250,001 and < 750,000 cells/mL) and high SCC (> 750,001 cells/mL). After herd selection, bulk milk samples were collected fortnightly during three months totalizing 1380 samples, which were subjected to analysis of composition, TBC, PC and CC. A decrease of TBC and CC was observed in herds with low SCC, however, herds with medium and high SCC had increase on - fat, crude protein and total solids contents. A medium correlation was observed among TBC and PC (r = 0.6215), and also among PC and CC (r = 0.3692). Based on hygiene indicators and the milk composition, it was observed a low and negative correlation among TBC and fat (r = -0.0585), PC and fat (r = -0.0688) and PC and total solids (r = -0.0662). Dairy herds with low SCC had higher hygienic quality of bulk tank milk, however, considering the composition, herds with higher SCC showed higher milk fat and protein concentration.

O conceito de odontologia minimamente invasiva implica na remoção da dentina infectada, preservando o máximo possível as estruturas dentárias remanescentes sadias. O laser de Er:YAG pode ser usado na remoção seletiva de lesões de cárie em dentes decíduos, promovendo maior conforto para os pacientes pediátricos, devido à ausência de pressão, vibração e ruído produzido pelo método convencional. O objetivo do presente ensaio clínico randomizado (split mouth) foi avaliar a eficiência e eficácia do laser de Er:YAG para remoção seletiva de lesões de cárie em molares decíduos, análise microbiológica da dentina afetada e clínica das restaurações após o período de um ano. Os dentes das crianças (n=29) foram randomizados em dois grupos: (I) laser de Er:YAG (250 mJ/4 Hz) (II) método convencional (baixa rotação). A eficiência dos tratamentos (tempo necessário para remoção do tecido cariado) foi avaliada pela contagem do tempo empregado na remoção seletiva de lesões de cárie nos molares decíduos. A eficácia (capacidade de remoção do tecido cariado) durante a remoção seletiva de lesões de cárie foi realizada por meio de teste cego, quando o examinador empregou avaliação visual e tátil da dentina. A análise microbiológica foi realizada através da contagem de Streptococcus mutans e Lactobacillus sp encontrados na dentina afetada das cavidades. Para a análise clínica das restaurações utilizou-se o critério USPHS modificado que inclui retenção, descoloração marginal, cárie secundária e adaptação marginal, juntamente com a fotografia dos dentes restaurados, sete dias após a realização das restaurações e novamente, após um ano. Todas as cavidades foram restauradas empregando o sistema restaurador Adper Single Bond 2/Filtek Z350. Os dados obtidos foram analisados pelo t-test, Mann-Whitney e Kruskal-Wallis com nível de significância de 5%. O laser de Er:YAG foi menos eficiente e apresentou a mesma eficácia que o método convencional durante a remoção seletiva de lesões de cárie na parede pulpar dos molares decíduos. Nas paredes circundantes o método convencional foi mais eficaz. Independente do método empregado, a dentina afetada encontrada na parede pulpar dos molares decíduos apresentou similar quantidade de Streptococcus mutans e Lactobacillus sp. As restaurações realizadas foram clinicamente aceitáveis pelo critério USPHS modificado no período de um ano. Dessa forma, pôde-se concluir que a remoção seletiva de lesões de cárie utilizando o laser de Er:YAG não influenciou no comportamento clínico das restaurações realizadas. / The concept of minimally invasive dentistry implies the removal of infected dentin preserving as much as possible of the remaining healthy tooth structure. The Er:YAG laser can be used for selective caries removal in deciduous teeth while provide greater comfort to the pediatric patients due to the absence of pressure, vibration and noise produced by the bur preparation. The aim of the present clinical randomized split mouth study was to evaluate the efficiency and effectiveness of an Er:YAG laser for selective caries removal in primary molars, microbiological dentin analysis and clinical restorations after one year period. The childrens teeth (n=29) were randomized into two groups: (I) an Er:YAG laser group (250 mJ/4 Hz) and (II) a bur preparation group (low speed turbine). The efficiency of the treatments (the time necessary for the removal of carious tissue) was evaluated based on the time spent on selective caries removal in the deciduous molars. The effectiveness (caries removal capacity) during the selective caries removal was determined by means of a blind test in which the examiner performed a tactile and visual examination of the dentin. Microbiological analysis was performed by counting the Streptococcus mutans and Lactobacillus sp found in the in the affected dentin cavities. For the clinical analysis of the restorations was used the modified USPHS criteria including retention, marginal discoloration, secondary caries, and marginal adaptation in combination with photographs of restored teeth, seven days after the restorative procedure and again after one year. All cavities were restored with the Adper Single Bond 2/Filtek Z350 system. The obtained data were analyzed by t-test, Mann-Whitney and Kruskal-Wallis with a significance level of 5%. The Er:YAG laser was less efficient and had the same effectiveness as bur preparation during selective caries removal at the pulpal wall of deciduous molars. In the surrounding walls, bur preparation was the more effective method. Regardless of the method employed, the affected dentin found in the pulpal wall of deciduous molars had similar amounts of Streptococcus mutans and Lactobacillus sp. The restorations were clinically accepted by the modified USPHS criteria over a one year period. Thus, it can be concluded that selective caries removal using an Er:YAG laser has no influence on the clinical behavior of restorations.

Foram analisadas 72 amostras de leite humano cru recebidas do Banco de Leite do Conjunto Hospitalar de Sorocaba, com valores de acidez conhecidos. Quarenta e oito delas tinham acidez aceitável (até 8º D) e outras 24 amostras com acidez acima desse limite. Foram realizadas contagens bacterianas: bactérias lácticas, lipolíticas, coliformes totais e fecais, microrganismos aeróbios mesófilos totais e Staphylococcus coagulase positiva. Quarenta e nove questionários de freqüência alimentar foram aplicados em lactantes doadoras de leite com o propósito de estabelecer correlação entre microbiologia, acidez e nutrição das lactantes. Nas amostras com valor de acidez < 8°D as populações microbianas encontradas foram: para o grupo dos microrganismos mesófilos aeróbios totais e bactérias lácticas a população máxima encontrada ficou na ordem de 106 UFC/mL. Já para bactérias lipolíticas este valor não ultrapassou 1,9x105UFC/mL. Os coliformes totais foram isolados em 47,2% (34 amostras) das amostras analisadas, destas 87,5% confirmaram também a presença de E.coli. Para Staphylococcus coagulase positiva o valor máximo encontrado foi 1x104 UFC/mL e foi similar às amostras ácidas e não ácidas. Nas amostras rejeitadas (acidez > 8ºD) as contagens máximas tanto para o grupo de mesófilos como de bactérias lácticas foram da ordem 107 UFC/mL. As bactérias lipolíticas foram encontradas em 53,52% (13 amostras) do total de amostras analisadas e o grupo dos coliformes foi detectado em 52,94% das amostras ácidas, destas 33,33% apresentaram crescimento de E. coli. Os dados foram avaliados pela correlação de Pearson entre as variáveis: população de microrganismos mesófilos aeróbios totais e acidez Dornic. O nível de significância foi estabelecido em p<0,05. Os valores de acidez Dornic não mostraram correlação (R = 0,215) estatisticamente significativa com a população de microrganismos mesófilos aeróbios totais (UFC/mL) para as amostras analisadas. De acordo os dados nutricionais, pequenas diferenças são observadas em relação ao consumo de alimentos e alteração de acidez do leite humano. Pelos valores encontrados não foi possível detectar correlação entre a nutrição da lactante e os valores de acidez encontrados nas amostras de leite humano. / Seventy two samples of human breastmilk obtained from the Milk of the Hospitals Group of Sorocaba were analyzed, prior to pasteurization. Dornic acidity was titrated in duplicate for each sample. Forty eight of them had acceptable acidity (up to 8° D) and other 24 samples with acidity above of that limit. Quantifying the initial population: lactic bacteria, lipolitics bacteria, total coliforms and Escherichia coli, aerobic mesofilic microorganisms and Staphylococcus positive coagulase. Forty nine questionnaires of alimentary frequency were applied in lactic donors of milk with the purpose of to detect correlation among microbiology, acidity and nutrition of the lactic ones. The samples with value of acidity <8°D the found populations of microorganism were: group of the microorganisms mesofilic total aerobic and lactic bacteria the found maximum population was 106 CFU/mL. Although for lipolitics bacteria this value did not cross 1,9x105 CFU/mL. The group of total coliforms were isolated in 47,2% (34 samples) of the analyzed samples, of these 87,5% they also confirmed the presence of E.coli. In Staphylococcus positive coagulase the detect maximum value was 1x104 CFU/mL and it was similar to the acid samples and no acid. In the samples with acidity above 8ºD (rejected) the maximum population so much for the mesofilic group as of lactic bacteria they were 107 CFU/mL. The lipolitics bacteria were found in 53,52% (13 samples) of the total of analyzed samples and the group of the coliforms was detected in 52,94% of the acid samples, of these 33,33% they presented growth of E. coli. Data were analyzed to detect correlation between variables: population of aerobic mesofilic microorganisms and acidity Dornic, using Pearson`s coefficient. The level of significance was set at p <0,05. The values of acidity Dornic did not show correlation (R = 0,215) statistically significant with the population of aerobic mesofilic microorganisms (CFU/mL) for the analyzed samples. According to the data nutritional, small differences are noticed regarding to the consumption of foods and alteration of acidity of the human milk. For the found values it was not possible to detect correlation between the nutrition of the lactic and the values of acidity found in the samples of human milk.

De acordo com compêndios farmacêuticos, o teste de esterilidade, requer período de incubação de 14 dias para obtenção de resultado analítico, período em que produto farmacêutico é mantido em quarentena, o que demanda custos elevados. Os métodos alternativos com aplicação na avaliação da esterilidade são particularmente interessantes, quando possibilitam a redução do período de incubação do teste, o período de quarentena e, em consequência, os custos envolvidos, além de reduzir o tempo para preparação do material requerido, para execução do ensaio e para a capacitação técnica. O presente estudo avaliou o desempenho do método microbiológico rápido BacT/Alert 3D (Biomerieux&#174;) aplicado ao teste de esterilidade em comparação ao teste de esterilidade por método indireto descrito nas farmacopeias (brasileira, americana, européia e japonesa). O Bact/Alert 3D se baseia na detecção do crescimento microbiano, que é feita por meio de detecção de alteração da cor de um sensor sensível à liberação de dióxido de carbono produzido por metabolismo microbiano. Os testes utilizaram três diferentes soluções parenterais de grande volume: solução salina 0,9%, concentrado polieletrolítico para diálise e solução de metronidazol. Micro-organismos desafio: Escherichia coli ATCC 8739, Pseudomonas aeruginosa ATCC 9027, Staphylococcus aureus ATCC 6538, Bacillus subtilis ATCC 6633, Clostridium sporogenes ATCC 19404, Candida albicans ATCC 10231 e Aspergillus brasiliensis ATCC 16404. Cargas de contaminação: 20, 2 e 0,2 UFC/membrana. Temperatura de incubação: 32,5 ± 0,5 °C. As amostras foram avaliadas por 14 dias. Amostras dos três produtos foram artificialmente contaminadas com BioBalls® SingleShot dos micro-organismos desafio de diferentes cargas de contaminação foram submetidas ao teste de esterilidade farmacopeico, com inoculação por método indireto. Após 18h de incubação, foram retiradas alíquotas de cada um dos meios de cultura, que foram inoculadas nos frascos de meio de cultura do BacT/Alert 3D. Bact/Alert 3D demonstrou equivalência ao método farmacopeico (p > 0,05) e tempo de detecção inferior. / Nowadays, the harmonized sterility test method described on pharmacopoeias requires an incubation period of 14 days. During this period the product stays on quarantine waiting the result for release, which demands warehousing and inventory costs. The application of Rapid microbiologial methods for sterility testing is particulary interesting considering the benefits of incubation time reduction, quarantine period reduction, time reduction for material preparation, reduction of time for test execution and technical training.This work evaluated comparetivelly the performance of Bact/Alert 3D system as a rapid microbiologial method applied to sterility testing and sterility testing according to described on Brazilian pharmacopeia and harmonized pharmacopeias (American pharmacopeia, European pharmacopeia and Japanese pharmacopeia). The Bact/Alert 3D is based on microrganisms gowth and has as principle the detection of pad color change which is sensible to carbon dioxide release by microorganism metabolism. To perform the evaluation it was considered Buffer saline solution, Metronidazol solution and Polieletrolitic dialysis concentrate solution. Challenge Microrganisms: Staphylococcus aureus (ATCC 6538), Bacilus subtilis (ATCC 6633), Pseudomonas aeruginosa (ATCC 9027), Escherichia coli (ATCC 8739 ), Clostridium sporogenes (ATCC 19404), Candida albicans (ATCC 10231) and Aspergillus brasiliensis (ATCC 16404). Inoculum load: 20CFU/sample; 2 CFU/sample; 0,2CFU/sample. Incubation temperature: 32,5 ± 0,5 °C. The samples were evaluated during 14 days. Aseptic samples of the three products were intentionally contaminated with BioBalls® SingleShot of challenge microorganisms, according to inoculum concentration desired, and were tested by indirect inoculation. After 18h aliquotes of were taken from inoculated culture media and inoculated into BacT/Alert 3D culture media bottles. Bact/Alert showed equivalence to compendial method (p > 0,05) and showed results faster than compendial method.

O solo é um recurso natural imprescindível para a manutenção da vida, mas seu uso intensivo e incorreto tem acelerado o seu processo de degradação, o que compromete a sustentabilidade dos sistemas agrícolas e do ambiente. Entretanto, práticas de manejo que incluem o preparo de solo com baixo ou nenhum grau de revolvimento, e sistemas de culturas com alta adição de carbono (C) ao solo, parecem estar entre as mais importantes para restabelecer a qualidade do solo. Desse modo, os atributos que têm íntima relação com a MOS (matéria orgânica do solo), como os microorganismos do solo, têm maior potencial de serem adotados como indicadores de qualidade do solo. A partir disso, esse trabalho teve como objetivo avaliar a dinâmica da microbiota do solo cultivado com diferentes culturas com potencial agroenergético (cana-de-açúcar a soja e o milho) sob diferentes formas de manejo, a partir da quantificação de indicadores biológicos de qualidade do solo, tomando-se como referência o solo sob condições de Cerrado nativo adjacente. Amostras de solo foram coletadas de lavouras comerciais da Fazenda Brejinho (Pedro Afonso-TO), nas profundidades de 0 a 5 cm e 5 a 10 cm. Foram determinados o carbono da biomassa microbiana, o carbono orgânico total, a respiração microbiana e foram calculados os quocientes metabólico e microbiano. O carbono da biomassa microbiana e a respiração microbiana sofreram alterações em função do manejo adotado nas diferentes culturas, sendo que, o solo sob cultivo de cana-de-açúcar, sob preparo convencional e sem rotação de culturas, sofreu maior redução da atividade microbiana quando comparado aos solos sob demais culturas e formas de manejo. Por outro lado, para manter e melhorar a qualidade do solo, é necessário adotar técnicas de manejo mais conservacionistas que propiciem menor revolvimento do solo, possibilitando maior retenção de água e a manutenção da umidade do solo, e tendo a rotação de culturas como fonte adição de C ao solo e de diversidade microbiana. / Soil is an essential natural resource for life maintenance, but intensive and incorrect uses have accelerated the degradation process of this resource, which compromises the agricultural systems and environmental sustainability. However, management practices including low soil disturbance and cropping systems with high C addition to the soil appear to be among the most important to restore soil quality. Thus, the attributes, which have an intimate relationship with the soil organic matter, such as soil microorganisms, have the greatest potential to be used as indicators of soil quality. After that, in this study we aimed to evaluate the soil microbial communities dynamic under differents agro-energy cropping systems, such as sugarcane, soybeans and corn, and we used the soils under native Cerrado as reference. The soil samples were collected on commercial fields from Brejinho Farm (in Pedro Afonso municipality, Tocantins State), considering two depths, 0-5 cm and 5-10cm. We determined the microbial biomass carbon, total organic carbon, microbial respiration, and we calculated the metabolic quotient (qCO2) and the microbial quotient (qM). The microbial biomass carbon and microbial respiration were changed by the different cropping systems. The sugarcane cropping system, which involved conventional tillage, without crop rotation, suffered greater reduction of microbial activity compared with the cropping systems under no-till. Thus, to maintain and increase soil quality, it is necessary to expand the conservation management techniques adoption that provide less soil disturbances and increase soil aggregation, allowing water retention and maintenance of soil moisture, and with crop rotation as a source of C addition to soil and microbial diversity.

O feijão (Phaseolus vulgaris L.) é uma leguminosa com alto valor nutricional devido principalmente, ao seu conteúdo protéico e mineral. Uma diminuição no consumo de feijão tem sido observada devido a hábitos alimentares modernos, adquiridos em função de fatores como distância entre casa e trabalho, aumento do trabalho feminino fora do lar, competitividade no mercado de trabalho que acelera o ritmo das atividades, avançando nos horários das refeições, além do tempo de cozimento do feijão que é fator preponderante para aceitação do produto tanto para a dona de casa como pela indústria alimentícia. O objetivo deste trabalho foi avaliar os aspectos físico-químicos e sensoriais do grão de feijão pré-cozido e irradiado com doses de 1kGy, 2kGy e 3kGy, e controle (sem irradiação). Foi realizada a determinação da composição centesimal e mineral, taninos, ácido fítico, digestibilidade da proteína, análise sensorial e microbiológica para os microrganismos mesófilos, coliformes termotolerantes e totais, Estafilococos e Salmonella. A cocção não alterou a composição centesimal obtendo os seguintes teores em base seca: proteína 7,54%; lipídeos 1,29%; fibra alimentar 10,75%, carboidrato 15,56%. Em relação a composição mineral obteve os seguintes valores para sódio 34,5%; cálcio 186,60%; magnésio 160,50%; manganês 0,90%; potássio 122,16%; ferro 4,20%; zinco 2,25% e selênio 0,30%. Houve diminuição no teor de tanino com o aumento da dose de radiação com exceção da dose 3 kGy, obtendo valores de: 0,61mg catequina/g (controle); 0,50mg catequina/g (1 kGy); 0,43mg catequina/g (2 kGy) e 0,54mg catequina/g (3 kGy). Os teores de ácido fítico não diminuiram com o aumento da dose de radiação apresentando valores de: 7,98mg/g (controle); 8,73mg/g (1 kGy); 5,95mg/g (2 kGy) e 6,67mg/g (3 kGy). O feijão apresentou excelente digestibilidade, sendo que a dose de 2 kGy apresentou a melhor porcentagem ( 91,72%). Através da análise sensorial realizada no feijão pré-cozido observou que o produto final apresentou uma maior tendência a aceitabilidade do que a não aceitabilidade. Em relação às análises microbiológicas o processo de radiação foi determinante para a diminuição da contagem microbiana / The bean (Phaseolus vulgaris L.) is a leguminosae with high nutritional value due especially to its mineral and proteinic content. A decrease in consumption of beans has been observed due to modern eating habits related to factors such as distance between home and work, increase in the number of female workers outside home, labor market competition which accelerates the pace of activities and reduce meal times, besides the cooking time of the beans, which is an important factor for the acceptance of the product both to the person who is cooking and to the food industry. The aim of this paper was to study the physiochemical and sensorial aspects of the grains of beans pre-cooked and irradiated with doses of 1kGy, 2kGy and 3kGy, and control (without irradiation). It was conducted the determination of the centesimal and mineral composition, tannin, phytic acid, digestibility of the protein, sensorial and microbiological analysis for the mesophile microorganisms, thermotolerant and total coliforms, staphylococcus and salmonella. The pre-cooked beans presented the following centesimal composition in a dry-basis: protein 7,54%; lipids 1,29%; fiber 10,75%, carbohydrate 15,56%. Regarding the mineral composition, the following values were obtained: sodium 34,50%; calcium 186,60%; magnesium 160,50%; manganese 0,90%; potassium 122,16%; iron 4,20%; zinc 2,25% e selênium 0,30%. There was a decrease on tannin content with the increase of radiation dose except for the dose 3 kGy, showing values of: 0,61mg catechin/g (control); 0,50mg catechin/g (1 kGy); 0,43mg catechin/g (2 kGy) and 0,54mg catechin/g (3 kGy). The phytic acid contents did not drop with the increase of radiation, showing values of: 7,98mg/g (control); 8,73mg/g (1 kGy); 5,95mg/g (2 kGy) and 6,67mg/g (3 kGy). The beans presented excellent digestibility, with the 2 kGy dose showing the best percentage (91,72%). It was observed through the sensorial analysis carried out in the precooked beans that the final product showed more inclination to acceptability than to a non-acceptability. Regarding the microbiological analysis, the radiation process was determinant for the decrease on the microbial count

Vibrio parahaemolyticus (Vp) é uma bactéria naturalmente presente em regiões estuarinas, sendo a principal causa de gastrenterite de origem bacteriana associada a pescados, principalmente ostras cruas. Nesta pesquisa, foi desenvolvida uma avaliação quantitativa de risco para avaliar a probabilidade de Vp causar doença após o consumo de ostra crua, produzida e comercializada no Estado de São Paulo. O estudo incluiu a identificação e caracterização do perigo, a avaliação da exposição e a caracterização do risco. Um modelo matemático foi desenvolvido. Este modelo leva em consideração o comportamento de Vp em ostras na cadeia produtiva, em cada estação do ano, além da relação entre a dose de Vp ingerida e a probabilidade de desenvolver a doença. A avaliação da exposição foi desenvolvida em três etapas: cultivo, pós-coleta e consumo. Na etapa de cultivo foram considerados os fatores que influenciam a prevalência e o número de Vp em ostras no momento da coleta. Na etapa pós-coleta, foram descritas as práticas da indústria e foram considerados os fatores associados ao processamento, transporte e manipulação. Já na etapa de consumo foram considerados os fatores como a quantidade de ostras consumidas por porção, o peso médio por ostra consumida e a população de Vp patogênico no momento do consumo. O resultado do modelo quantitativo da avaliação da exposição foi, então, integrado ao modelo dose-resposta, Beta-Poisson, para se obter uma estimativa do risco. Esta estimativa expressa o impacto da exposição humana a Vp, sobre a saúde pública, associada ao consumo de ostras. A simulação de Monte Carlo foi utilizada para avaliar o efeito da variabilidade e incerteza das variáveis do modelo sobre a estimativa do risco. O modelo prediz uma probabilidade de ocorrência de doença de 4,6x10-4, por porção de ostra, consumida ao longo do ano. As variáveis que possuem maior influência sobre o risco de ocorrência de doença são a população de Vp em ostras no cultivo, a temperatura de transporte das ostras até o varejo e a porcentagem de Vp patogênico em ostra, no momento do seu consumo. O modelo evidencia que uma das maneiras de reduzir o risco de ocorrência de doença seria intervir nas condições de transporte de ostras até o varejo por meio da sua refrigeração. Com o modelo é possível identificar fatores e simular cenários para avaliar o comportamento de V. parahaemolytícus como um perigo microbiológico, ao longo da cadeia produtiva de ostra até o momento do seu consumo. Também é possível avaliar o impacto de medidas de intervenção na cadeia produtiva. As suposições adotadas limitam a aplicabilidade do modelo. Portanto, é necessário que o modelo seja validado, particularmente com relação ao número de casos de doença causados por Vp, cujos dados de vigilância epidemiológica inexistem no Brasil. / Vibrio parahaemolyticus (Vp) is naturally present in estuarine regions and is the main cause of gastroenteritis associated with the consumption of bivalve molluscan shellfish, specially raw oysters. In this research, a quantitative risk assessment was developed to evaluate the probability of Vp causing disease after consumption of raw oyster, produced and commercialized in the state of Sao Paulo. The study included the identification and characterization of the hazard, exposure assessment and risk characterization. A mathematical model was developed. This model takes into account the behavior of Vp in oysters in the productive chain, for each season of the year, besides the relationship between the number of cells of Vp ingested and the probability of developing the disease. The exposure assessment was done in three steps: farming, after harvesting and consumption. At the farming step, the factors that influence the prevalence and the population of Vp at the time of harvesting were considered. At the after harvesting step, the factors associated with transportation, handling and processing were considered. At the consumption step, factors related to the amount of oysters and the average weight per oyster consumed and the density of pathogenic Vp at the time of consumption were considered. Then, the quantitative model of exposure assessment was integrated to the dose-response model, BetaPoisson, in order to obtain a risk estimate. This calculation expresses the impact of the human exposure to Vp associated with the consumption of oysters on public health. The Monte Carlo simulation was used to evaluate the effect of variability and uncertainty of variables of the model in the risk estimation. The model predicts a probability of occurrence of the disease of 4,6x10-4 per serving of oyster consumed during one year. The variables showing the greatest influence on the risk of occurrence of disease are the density of Vp in oyster in the farming step, the temperature during transportation of oysters to the retail market and the percentage of pathogenic Vp strains in oysters,\' at the moment of consumption. The model indicates that the use of refrigeration during transportation of oysters to retail could reduce the risk of disease. The model allows the identification of factors and the simulation of scenarios in order to evaluate the behavior of V. parahaemolyticus, as a microbiologícal hazard, in the productive chain of oyster to the consumption. It is also possible to evaluate the impact of intervention measures in the productive chain. The assumptions Iimit the application of the model. Therefore, it is necessary to validate the model, particularly in relation to the number of cases of dísease caused by V. parahaemolyticus of which the data on epidemiologic surveillance do not exist in Brazil.