Submitted by Hiolanda Rêgo (hiolandar@gmail.com) on 2013-08-13T18:45:22Z No. of bitstreams: 1 Dissertação_ICS_Jamille Souza Fernandes.pdf: 2233589 bytes, checksum: 8522e9d8827c7983ffa7b9a2501992f0 (MD5) / Made available in DSpace on 2013-08-13T18:45:22Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Dissertação_ICS_Jamille Souza Fernandes.pdf: 2233589 bytes, checksum: 8522e9d8827c7983ffa7b9a2501992f0 (MD5) / Cerca de 5 a 10% dos indivíduos infectados pelo Schistosoma mansoni evoluem para a forma grave da doença, caracterizada por fibrose periportal. A patogênese da esquistossomose é predominantemente causada pela resposta imune do hospedeiro aos antígenos do ovo e estudos têm enfatizado o papel de monócitos na progressão da fibrose em modelos experimentais. O objetivo deste estudo foi caracterizar as subpopulações de monócitos e o seu grau de ativação em indivíduos com diferentes graus de fibrose periportal secundária à esquistossomose. Participaram do estudo quarenta indivíduos da área endêmica em esquistossomose Água Preta, Bahia, Brasil. Monócitos foram obtidos através de células mononucleares do sangue periférico e avaliados ex vivo ou na presença do antígeno solúvel do ovo (SEA). Os monócitos foram classificados em: clássicos, intermediários e não-clássicos. A expressão de moléculas co-estimulatórias, citocinas e receptores de citocinas foram avaliadas usando a técnica de citometria de fluxo. De um modo geral, a frequência dos monócitos clássicos foi maior em relação às demais subpopulações. A expressão de HLA-DR foi maior nos monócitos de indivíduos com fibrose moderada a grave comparando com os indivíduos sem fibrose ou com fibrose incipiente. Quanto a expressão do receptor α de IL-4 (IL-4Rα) e de IL-10 (IL-10R) foi maior nos monócitos de indivíduos sem fibrose e com fibrose moderada a grave. A expressão de IL-6, TNF-α e TGF-β foi maior nos monócitos de indivíduos com fibrose moderada a grave, enquanto que a expressão de IL-12 foi menor nos monócitos desses indivíduos. Este estudo mostrou que os monócitos dos indivíduos com fibrose periportal, independente da subpopulação, participam na imunopatogênese da doença, uma vez que expressam altos níveis de citocinas pró-inflamatórias e pró-fibróticas e baixos níveis de citocinas anti-fibróticas. / Salvador

Submitted by Hiolanda Rêgo (hiolandar@gmail.com) on 2013-09-16T19:07:07Z No. of bitstreams: 1 Dissertação_Med_Rúbia Suely Santana.pdf: 1642074 bytes, checksum: 1f92a1cc25c46ac38f94fc74ee4bd1c8 (MD5) / Approved for entry into archive by Patricia Barroso(pbarroso@ufba.br) on 2013-09-17T17:41:17Z (GMT) No. of bitstreams: 1 Dissertação_Med_Rúbia Suely Santana.pdf: 1642074 bytes, checksum: 1f92a1cc25c46ac38f94fc74ee4bd1c8 (MD5) / Made available in DSpace on 2013-09-17T17:41:17Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Dissertação_Med_Rúbia Suely Santana.pdf: 1642074 bytes, checksum: 1f92a1cc25c46ac38f94fc74ee4bd1c8 (MD5) / National Institute of Health - NHI; International Collaborations in Infectious Disease Research; Grant AI088650 01. / A leishmaniose cutânea (LC) é uma doença parasitária inflamatória caracterizada pela presença de lesões ulceradas na pele. Pacientes com LC infectados por L. braziliensis produzem altos níveis de TNF, citocina que contribui para dano tecidual e desenvolvimento da úlcera. Infiltrado de células mononucleares é encontrado na lesão de pacientes com LC, com presença de linfócitos T e B e fagócitos mononucleares. A maioria dos trabalhos tem dado ênfase à resposta imune das células T e pouca atenção tem sido dada para a contribuição de monócitos na imunopatologia observada na LC. Recentemente, três subpopulações de monócitos, foram descritas baseadas na expressão das moléculas CD14 e CD16: Monócitos clássicos (CD14++CD16-), intermediários (CD14+CD16+) e não-clássicos (CD14++CD16+). Objetivo deste estudo foi caracterizar fenotipicamente e funcionalmente as subpopulações de monócitos de pacientes com LC. Material e Método: Células mononucleares do sangue periférico foram obtidas de indivíduos sadios, pacientes com leishmaniose cutânea com lesão recente (LCR) e paciente com leishmaniose cutânea com úlcera estabelecida. A caracterização das subpopulações de monócitos foi determinada por citometria de fluxo. Resultados: Nós observamos que a frequência das populações de monócitos intermediários e não-clássicos estavam aumentadas em indivíduos com LCR e em pacientes com LC. Expressão de MHC classe II foi aumentada em monócitos intermediários, sugerindo que essas células podem apresentar antígeno para células T. Também observamos que monócitos clássicos e intermediários produzem mais TNF que os não-clássicos em resposta a antígeno solúvel de Leishmania e LPS. CCL2 é uma quimiocina conhecida por desempenhar importante papel na resposta imune contra Leishmania, sendo observada que frequência de monócitos expressando CCL2 foi significantemente maior no sangue periférico de pacientes com LC quando comparados aos indivíduos sadios, indicando que células expressando CCL2 podem migrar para o sítio da lesão. Análises de biópsias de pacientes com LC mostraram que a população de monócitos predominante encontrada na lesão desses indivíduos são os monócitos não-clássicos .Conclusão: A identificação de células que contribuem para a imunopatologia observada na LC pode ajudar para desenvolver novas formas de imunoterapia para essa doença. Palavras-chave: leishmaniose, imunopatologia, subpopulações de monócitos. / Salvador

Tese (doutorado) - Universidade Federal de Santa Catarina, Programa de Pós-Graduação em Biotecnologia e Biociências, Florianópolis, 2017. / Made available in DSpace on 2018-01-23T03:19:39Z (GMT). No. of bitstreams: 1 351723.pdf: 4050541 bytes, checksum: a231870e6bd57a030795ca43703aafb3 (MD5) Previous issue date: 2017 / A proteína ISG15 é o produto de um gene estimulado por interferons (IFN) do tipo I. Além de um papel de proteína semelhante à ubiquitina, ela é frequentemente descrita na literatura interagindo com o sistema imune, sendo capaz de regular proteínas que participam de vias de sinalização importantes como a JAK1, ERK1, STAT1 e RIG-I. ISG15 é também importante na resposta a infecções virais. Além dessas atividades intracelulares, ISG15 é secretada sendo capaz de induzir quimiotaxia em neutrófilos, estimular a proliferação de células NK, estimular a atividade citotóxica de monócitos e induzir a produção de IFN? por linfócitos T e células NK. Os mecanismos responsáveis pela capacidade de ISG15 de ativar células e genes imunes são pouco conhecidos, diante disso, buscou-se investigar o papel de citocina dessa proteína e seus potenciais mecanismos de ação. Nessa tese, foi observado que ISG15 é capaz de induzir a produção de IL-10 em monócitos primários de forma dose-dependente. Além disso, utilizando dados de transcriptoma, foi observada uma correlação significativa entre células mielóides, ISG15 e IL-10 e entre células linfóides e IFN?, essa última, corroborando estudos anteriores. Também com o auxílio dos bancos de dados, foi observado que a produção de IL-10 induzida por ISG15 está associada a MAPKs e PI3K em indivíduos saudáveis. Esse dado foi demonstrado com experimentos in vitro. Além disso, demonstrou-se que o eixo ISG15/IL-10 está amplificado em lesões causadas por M. leprae, mas ausente em indivíduos com tuberculose ativa embora ISG15 per se esteja fortemente correlacionada à inflamação e gravidade dessa patogenia. Por último, com a finalidade de identificar um possível receptor de ISG15, ensaios de purificação por afinidade em tandem foram realizados utilizando ISG15 fusionada aos motivos STREP e FLAG e proteínas de membranas de leucócitos totais. A precipitação permitiu identificar alvos de ISG15 já descritos na literatura além de proteínas de membrana que podem atuar como possíveis receptores, porém outros estudos precisam ser realizados para avaliar um potencial mecanismo de sinalização desencadeado por essa ligação. Em conclusão, esse estudo determina a produção de IL-10 como uma nova atividade biológica para ISG15, propõe essa proteína como um marcador de gravidade da para infecções por micobactérias e sugere alvos de ISG15 presentes na superfície de leucócitos humanos que podem atuar como potenciais receptores dessa proteína. / Abstract : In humans, interferon stimulated gene (ISG) 15 deficiency may lead to inflammatory interferonpathies and mycobacterial disease, which has been previously linked to its extracellular cytokine-like activity. Here, a novel role for secreted ISG15 as IL-10 inducer, unique to human primary monocytes, is demonstrated. Moreover, a significant correlation of ISG15-induced monocyte/IL-10 and lymphoid/IFN? expression, which was associated with p38 MAPK and PI3K signalling in healthy volunteers, was found employing targeted in vitro and ex vivo system analysis of novel and established human transcriptomic datasets. In human mycobacterial infections, the ISG15/IL10 axis was amplified in leprosy, whereas ISG15 strongly correlated to inflammation and disease severity in active tuberculosis (TB). The specificity and MAPK/PI3K-dependence of ISG15-induced monocyte IL-10 production was confirmed in vitro using CRISPR/Cas9 knockout and pharmacological inhibitors. In this study, we have also attempted to identify a potential receptor using tandem affinity purification assays with ISG15 fused to STREP-FLAG motifs and membrane proteins from total leukocytes. This assay led to the identification of potential ISG15 receptors but other studies must be carried out to evaluate a signalling mechanism potentially triggered by this binding. In conclusion, this study determines the production of IL-10 as a new biological activity for ISG15, proposes this protein as a marker of severity of mycobacterial infections and suggests new ISG15 targets present on the surface of human leukocytes that can act as potential receptors.

Orientador: Maria Marluce dos Santos Vilela / Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Instituto de Biologia / Made available in DSpace on 2018-07-21T05:58:45Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Yonezawa_GiseleNunes_M.pdf: 5345722 bytes, checksum: 5bd69326a1dc0517c7d781dc121e6aa1 (MD5) Previous issue date: 1996 / Resumo: A silicose é causada pela inalação de partículas de sílica resultando em doença inflamatória crônica, com formação de granulomas e fibrose pulmonar. Neste trabalho avaliamos a quimiotaxia , a fagocitose via CRI e CRJ e, a produção de ânion superóxido por monócitos de vinte e um indivíduos expostos cronicamente à sílica, e de quinze indivíduos normais. Observamos que a mediana da migração espontânea de monócitos foi de 27,90_; a migração de monócios estimulada com soro humano normal e soro de paciente incubados com LPS, , foi de 66,90µ e de 62,85µ respectivamente, no grupo de indivíduos expostos à sílica; no grupo controle, a migração espontânea de monócitos foi de 28,77µ (p=0,91), e a migração de monócitos estimulada com soro controle, incubados com LPS, foi de 61,20µ (p=0,77;p=0,57).O índice fagocitário para partículas de zimosan incubadas com meio, soro humano normal e soro de pacientes ou soro controle apresentaram medianas de 13,98,69,57 e 71,09 respectivamente, nos indivíduos expostos à sílica, e de 17,54, 68,49 e 68,49 no grupo controle. (p=0,34;p=0,40 e p=0,40). A mediana da capacidade fagocitária destes pacientes foi de 134,25; 385,25 e 390,0 para partículas de zimosan incubadas com meio, soro humano normal e soro de paciente, e no grupo controle foi de 128,25; 365,25 e 362,25 respectivamente.(p=0,83; p=0,52 e p=0,87).A produção espontânea de ânions superoxidos por monócitos apresentou mediana de 4,03 nos indivíduos expostos à sílica e de 3,30 no grupo controle (p=0,69) e de 9,24 nos pacientes e de 9,52 no grupo controle (p=0,71), quando estimulados com zimosan.Portanto não encontramos diferença significativa nas funções fagocitárias destes indivíduos em relação aos indivíduos normais. Também não observamos correlação entre estas funções estudadas e a classificação radiológica, tempo de exposição ou antecedente para tuberculose. Estes resultados sugerem que a sílica desencadeia uma resposta imune que é modulada e controlada no pulmão, resultando em discreta manifestação sistêmica / Abstract: The inhalation of silica partic1es leads to silicosis and the development of a chronic inflammatory disease involving granuloma formation and pulmonary fibrosis. In this work, we have evalueted the chemotaxis, CRI and CRJ mediated phagocytosis, and superoxide anion production of monocytes from 21 individuaIs who had experienced chronic exposure to silica and have compared the results with those from 15 unexposed individuals.In the former group, the median spontaneous monocyte migration distance was 27.9µ while that following stimulation by normal and patient's serum was 66.9 and 62.9µ in the presence of LPS, respectively. The corresponding values for monocytes from normal individuaIs were 28.8, 61.2 and 61.2µ. The monocyte phagocytic index in the presence of culture medium, normal serum and patient's serum was 14.0, 69.6 and 71.1, respectively, for the silica exposed individuaIs and 17.5, 68.5 and 68.5 for cells from unexposed persons. The median zymosan partic1e phagocytic capacity of patients monocyte in culture medium, normal serum and patient's serum was 134.3, 385.3 and 390.0, respectively, while the corresponding values for normal cells were 128.3, 365.3 and 362.3. The spontaneous production of superoxide anions was 4.0 and 3.3 nM/1O6cels/h in silica exposed and unexposed monocytes while in presence of zymosan these values were 9.2 and 9.5 nM/I06cels/h, respectively. ln none ofthe above monocyte function tests was there any significant difference between the cells fron silica-exposed and unexposed individuaIs. There was also no correlation between any of the tests results and the radilogical c1assification, length of exposure, or antecedents of tuberculosis. These results therefore suggest that silica initiates an immune response that is modulated and controlled within the lung although there may be subsequent discrete systemic manifestations / Mestrado / Imunologia / Mestre em Ciências Biológicas

Orientador : Maria Marluce dos Santos Vilela / Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Ciencias Medicas / Made available in DSpace on 2018-07-31T15:01:56Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Amoras_AnaLidiaBraga_M.pdf: 16753114 bytes, checksum: d704d73dbf02424f587fbb18b6726b51 (MD5) Previous issue date: 2001 / Resumo: A Imunodeficiência Comum Variável (ICV) é uma sindrome incompletamente definida, caracterizada por defeito na formação de anticorpos. Devido ao fato da ICV apresentar ainda inúmeros pontos não esclarecidos, propusemo-nos analisar evolutivamente a apresentação clinico-laboratorial de 17 pacientes com diagnóstico de ICV, em seguimento no Ambulatório de Imunologia-Alergia e Pneumologia do Hospital de Clinicas da Universidade Estadual de Campinas(Unicamp). Os pacientes foram avaliados quanto à idade de início dos sintomas e à forma de apresentação clinica e imunológica. A função fagocitária de monócitos foi avaliada in vitro através da quimiotaxia, fagocitose mediada via Fc, CRI e CR3 e atividade do sistema NADPH oxidase. A concentração dos níveis séricos de IgM, IgG, IgA e subclasses de IgG foi determinada por nefelometria e as subpopulações linfocitárias e células NK por citometria de fluxo. Todos os pacientes apresentaram as primeiras manifestações clinicas antes dos quatro anos de idade, evoluíram com infecções de repetição e, em 8 pacientes havia associação de manifestações gastrointestinais e em 7 fenômenos autoimunes. Ao diagnóstico, a média da concentração de IgM, IgG e IgA foi 17 mg/dl, 365 rng/dl e 7,85 mg/dl, respectivamente. Observou-se nos pacientes com ICV, redução significativade todas as subclassesde IgG (IgGI, p=0,0001; IgG2, p=0,002; IgG3, p=0,006 e IgG4, p=0,0001), em relação ao grupo controle. A porcentagem de células NK foi significantemente reduzida (P=0,006) quando comparada aos indivíduos normais. A porcentagem de células-T CD3+(p=0,013)e CD8+ (P=0,004)foi significantemente aumentada e a relação CD4/CD8 (P=0,013) foi significantemente reduzida nos pacientes com ICV em relação ao grupo controle. Entretanto, a porcentagem de células-T CD4+ não demonstrou diferença entre os doisgrupos. Redução do número de' células-B circulantes com valores inferiores a 2% foi observado em 47% dos pacientes com ICV. A fagocitose mediada via Fc, CRI, CR3 (p=0,0001)de monócitos e quimiotaxia (p=0,0027)foram significantemente reduzidas nos pacientes com ICV em relação ao controle normal. Entretanto, não houve diferença na produção de ânion superóxido entre os dois grupos. Devido a heterogeneidade de apresentação clínica entre nossos pacientes e dos relatados na literatura sugere-se que a ICV possa ser a expressão fenotípica de várias doenças, e que defeitos na quimiotaxia e fagocitose de monócitos podem ser caracterizados em um grupo de pacientes, determinando uma nova direção na fisiopatologiada ICV / Abstract: Common variable immunodeticiency is an incompletely detined syndrome, characterized by a defect in antibody formation. Since CVI presents numerous, as yet unclarified, defects we proposed to analyze the evolution of the clínical-laboratorial presentations of 17 patients diagnosed with CVI from the Immunology-Allergy and Pneumology Clínic ofthe Hospital de Clínicas at the State University of Campinas, Brazil. The patients were evaluated according to their age at the initiation of symptoms and their clínical and immunological evolutional presentation. Blood monocyte phagocytic functions were evaluated in vitro by chemotaxis, phagocytosis mediated by Fc, CRI and CR3 and NADPH-oxidase activity. Concentrations of the serum levels of IgM, IgG, IgA and subclasses of IgG were determined by nephelometry and the lymphocyte subset and NK cells were evaluated by flow cytometry. All the patients presented initial clínical manifestations before four years of age, developing repeated infections and, in 8 patients, there was an association of gastrointestinal manifestations and 7 patients presented autoimmune phenomenons. At the time of diagnosis, the mean concentrations of IgM, IgG and IgA were 17.0 rng/dL, 365.0 mg/dL and 7.85 rng/dL, respectively. In CVI patients, significant reductions in all the subclasses of IgG (IgGI, p=0.0001;IgG2, p=0.002; IgG3, p=0.006 and IgG4, p=0.0001) were observed in relation to the control group. The elative number of NK cells was significantly reduced (p=0.006) whencompared with normal individuals. The percentage of CD3+ (p=0.013) and CD8+ T cells (p=0.004) were significant1yreduced in patients with CVI in relation to the control group. However a percentage of CD4+ T cells did not demonstrate any differences between the two groups. A reduction in the number of circulating B cells was also observed, with values lower than 2 % in 47 % of the patients with CVI. Phagocytosis measured via Fc, CRI, CR3 (p=0.0001) of monocytes and chemotaxis (p=0.0027) were significant1yreduced in the patients with CVI in relation to the normal controls. However, there was no difference in the superoxide production between the two groups. Due to the heterogeneity of the clinicalpresentations of our patients and those related by the literature, it may be suggested that CVI may be a phenotypic expression of various diseases and that the defects in the chemotaxis and phagocytosis of monocytes may be characterized in a group of patients, determining a new direction in the physiopathology of CVI / Mestrado / Pediatria / Mestre em Saude da Criança e do Adolescente

Orientadores: Irene G. H. Lorand-Metze, Carmino Antonio de Souza / Tese (doutorado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Ciencias Medicas / Made available in DSpace on 2018-08-02T22:09:55Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Aranha_FranciscoJosePenteado_D.pdf: 4848490 bytes, checksum: 4333d1776315a558a79321e3bad5d6b6 (MD5) Previous issue date: 2002 / Resumo: A influência dos monócitos presentes no enxerto de medula óssea sobre a doença do enxerto-versus-hospedeiro não tem sido estabelecida em estudos clínicos. Avaliamos a possível influência dos monócitos no enxerto de medula óssea objetivando, primariamente, analisar a correlação com a GVHD-A e a GVHD-C e, secundariamente, com os dados da "pega" do enxerto e sobrevida. Os critérios de elegibilidade dos pacientes estudados foram: idade <60 anos; com doença primária onco-hematológica ou doença hematológica não maligna. Os pacientes foram transplantados tendo como fonte a medula óssea de doadores aparentados e HLA-completamente compatíveis. Os dados relacionados quanto à composição celular do enxerto foram as células CD34+, as subpopulações de linfócitos T, os linfócitos B e os monócitos. Nós analisamos 83 pacientes condicionados, principalmente, com bussulfan e ciclofosfamida. A profilaxia da GVHD foi realizada com ciclosporina e methotrexate. A mediana de dias para a "pega" de granulócitos =O,5x109 / l e de plaquetas >20x109/l foi de 20 dias (11-34) e 18,5 dias (10-60), respectivamente. Na análise univariada nenhum parâmetro estudado foi correlacionado com "pega" mais rápida do enxerto. A freqüência de GVHD-A graus II a IV, foi de 12/83 (14,5%). Na análise univariada as CNT _ 2,31x108/Kg e as células CD14+ = 4,78x106/kg foram correlacionadas significativamente com a menor freqüência de GVHD-A (P=0,04 e P=0,02, respectivamente). Além disso, os pacientes com a idade >27 anos e com disparidade de sexo entre doador e receptor apresentaram maior freqüência de GVHD-A (P= 0,03 e P=0,04, respectivamente). Na análise multivariada, tanto as CNT como a idade mantiveram a significância em relação à GVHD-A. A probabilidade de apresentar a GVHD-A quando a idade foi <27 anos e as CNT infundidas =2,31x108 / kg foi de 3,2%. Um maior risco de GVHD-A (51,5%) foi encontrado quando a idade foi >27 anos e as CNT =31x108 / kg (P=0,01). O número de CD14+ mostrou uma interação entre essas células e as CNT (R=0,48 correlação de Spearman). A GVHD-C foi diagnosticada em 31/77 dos pacientes (40%) avaliados. Encontramos uma correlação entre a presença da GVHD-A com maior risco de GVHD-C (P<0,01). Há uma tendência de melhor sobrevida nos pacientes que receberam maior quantidade de células CD34+ (P=0,06). As células CD 14+ não tiveram qualquer impacto sobre a sobrevida global. Esses dados sugerem que os monócitos podem ter um efeito de proteção, reduzindo a freqüência da doença do enxerto-versus-hospedeiro aguda no TMO alogênico / Doutorado / Clinica Medica / Doutor em Clínica Médica

Dissertação (mestrado) - Universidade Federal de Santa Catarina, Centro de Ciências Biológicas, Programa de Pós-Graduação Multicêntrico em Ciências Fisiológicas, Florianópolis, 2016 / Made available in DSpace on 2016-09-20T04:13:58Z (GMT). No. of bitstreams: 1 340346.pdf: 1683869 bytes, checksum: e520ccf8906dd7af510d2f858eb1d826 (MD5) Previous issue date: 2016 / Os monócitos são um grupo de células imunitárias circulantes no sangue, na medula óssea e no baço, constituindo cerca de 10% do total de leucócitos nos humanos. Quando emigram para algum tecido, essas células se diferenciam em macrófagos e tem papel fundamental na homeostase deste devido ao seu alto potencial reparador e angiogênico. Os monócitos têm sido colocados como fundamentais no processo de reparo do músculo esquelético, um tecido com alta capacidade de adaptação frente aos mais diversos estímulos impostos. Duas principais subclasses de monócitos são encontradas na circulação dos seres humanos: as células CD14++CD16-, denominadas de monócitos clássicos, com maior predominância, e as células CD14+CD16+, em menor proporção. Além das diferenças inerentes ao subtipo de monócitos, tem sido especulado que expressão de proteínas envolvidas na fagocitose, migração e diapedese poderiam estar envolvidas no processo de reparo do músculo esquelético, influenciando a resolução da inflamação causada por algum tipo de estímulo. Diante disso, este estudo teve como objetivo observar o fenótipo e estado de ativação de monócitos circulantes de indivíduos saudáveis expostos a um protocolo de dano muscular induzido por exercício excêntrico. Catorze indivíduos participaram deste estudo, todos do sexo masculino, com idade de 24±3,6 anos, massa corporal de 72,3±10,8 kg, estatura de 174±6,1 cm e % de gordura de 23,8±2,7. Foram coletados 16 mL de sangue para análises posteriores, após esse procedimento foi realizado um teste de força isométrica máxima em um dinamômetro isocinético, composto de 3 tentativas com duração de 3-5 segundos e intervalo de 2 minutos, o maior valor obtido em N?m-1 foi retido como pico de torque. Após esses procedimentos, foi realizado o protocolo de dano muscular, que consistiu em 3 séries de 20 repetições para flexores do cotovelo, apenas a fase excêntrica, com intervalo de 2 minutos entre as séries, em dinamômetro isocinético a 45°?s-1. As coletas de sangue e de força se seguiram por mais três dias, constituindo 24 horas, 48 horas e 72 horas após o dano. Os dados foram analisados por ANOVA para medidas repetidas e o nível de significância adotado foi 95% (p<0,05). Nos momentos observados após o protocolo de dano, 24h, 48h e 72h, pôde-se observar um decréscimo significante na capacidade de produção de torque em comparação ao basal (Basal=69,2±9,9; 24h=50,4±10,7; 48h=53,7±9,3 e 72h=54,5±9,5, em N·m-1). No entanto, a recuperação da funcionalidade muscular não foi uniforme, sendo que um grupo (n=7) teve recuperação esperada 72h após o dano (Basal=100%; 72h=89,7±6,4%), enquanto outro grupo (n=7) teve recuperação inferior a 80% no momento 72h (Basal=100%; 72h=69,5±10,5%). Esses dois grupos foram classificados como Rec >80% (n=7), com idade de 22,7±3,1 anos, massa corporal de 71,4±7 kg, estatura de 173±5,1 cm e % de gordura de 23,7±1,8. O outro grupo foi denominado Rec <80% (n=7), idade 25,3±3,7 anos, massa corporal 73,1±14,1 kg, estatura 174±7,4 cm e % de gordura de 23,8±2,7. Não houve variação no decorrer do tempo para a % de monócitos CD14++CD16- em ambos os grupos, contudo, o grupo Rec >80% apresentou valores iniciais significantemente maiores (p<0,05) que o grupo Rec <80% (Basal: Rec <80%=95,9±1,6% vs. Rec >80%=90,2±5,4%). O conteúdo da proteína p47phox foi significantemente maior (p<0,01) no momento 24h em comparação ao basal no grupo Rec >80%. Houve diferença significativa no grupo Rec <80% nos momentos 48h e 72h quando comparados ao momento 24h. Quando analisada a variação em percentual da expressão da p47phox em comparação ao basal, pôde-se observar uma variação negativa da expressão no intervalo basal-24h no grupo Rec <80% em comparação com os outros intervalos (p<0,01), e também uma diferença entre os grupos no intervalo basal-24h (p<0,05). As concentrações de hidroperóxidos lipídicos foram significantemente maiores no momento 48h no grupo Rec >80% (p<0,05). Esses dados sugerem que uma menor proporção de monócitos CD14++CD16+ juntamente com incremento antecipado na expressão de p47phox possam contribuir para o reparo mais eficiente do músculo esquelético após um dano induzido por exercício excêntrico. <br> / Abstract : Monocytes are a group of immune cells circulating in the blood, bone marrow and spleen, constituting around 10% of all leukocytes in humans. When they migrate to some tissue are called macrophages and plays a key role in the homeostasis of this due to its high repair capacity and angiogenic potential. Monocytes have been placed as fundamental in the skeletal muscle repair process, a tissue with high capacity of adaptation in front to various stimuli. Two main subclasses of monocytes are found in the circulation of humans: the CD14++CD16- cells called monocytes classic, with higher predominance, and the CD14+CD16+ cells, to a lesser extent. In addition to the inherent differences in a subtype of monocytes, it has been speculated that expression of proteins involved in phagocytosis, migration and diapedesis could be involved in the skeletal muscle repair process, influencing the resolution of inflammation caused by some kind of damage. Thus, this study aimed to observe the phenotype and monocyte activation state of healthy individuals exposed to muscle damage induced by eccentric exercise protocol. Fourteen individuals participated in this study, all male, aged 24±3.6 years, body mass 72.3±10.8 kg, the height of 174±6.1 cm and % fat 23.8±2.7. Initially, 16 mL of blood was collected for further analysis, after this procedure was carried out maximal isometric strength test on an isokinetic dynamometer, consisting of 3 attempts lasting 3-5 seconds with 2 minutes of rest; the highest value obtained in N·m-1 was retained as torque peak. After these procedures, muscle damage protocol was performed which consisted of three sets of 20 repetitions for the elbow flexors, just eccentric actions, with 2 minutes of intervals between series using an isokinetic dynamometer at 45°·s-1. Blood samples and strength followed by three more days, constituting 24 hours, 48 hours and 72 hours after injury. Data were analyzed by ANOVA for repeated measures, and the significance level was 95% (P <0.05). At the moments after the damage protocol, 24h, 48h, and 72h, it was observed a significant decrease in torque production capacity compared to baseline (Baseline=69.2±9.9; 24h=50.4±10.7; 48h=53.7±9.3 and 72h=54.5±9.5). However, the recovery of muscle functionality was not uniform, and one group (n=7) had expected recovery 72h after damage (Baseline=100%; 72h=89.7±6.4%) while another group (n=7) had less than 80% recovery in time 72h (Baseline=100%; 72h=69.5±10.5%). These two groups were classified as Rec > 80% (n=7), aged 22.7±3.1 years, body mass 71.4±7 kg, height 173±5.1 cm and fat mass 23.7±1.8 %. The other group was designated Rec < 80% (n=7), aged 25.3±3.7 years, body weight 73.1±14.1 kg, height 174±7.4 cm and fat mass 23.8±2.7 %. There was no change over time in the % of monocytes CD14++CD16- in both groups, however, the Rec >80% group had values significantly higher at the baseline (p<0.05) than the Rec >80% group (Baseline: Rec <80% = 95,9±1,6% vs. Rec >80% = 90,2±5,4). p47phox expression was significantly higher (p<0.01) when 24 compared to baseline in Rec >80% group. Furthermore, there was a significant increase in the Rec <80% group at the moments 48h and 72h when compared with the moment 24h. When analyzed the variation in the percentage of p47phox expression compared to baseline, it was observed a negative variation of expression in a basal-24 range in Rec <80% group compared with the other intervals (p<0.01), and also a difference between groups at baseline-24 range (p<0.05). For products of oxidative stress, lipid hydroperoxide concentrations were significantly higher at 48 hours in Rec >80% group (p<0.05). These data suggest a lower proportion of CD14+CD16+ monocytes along with an anticipated increase in p47phox expression may contribute to the more efficient skeletal muscle repair after eccentric exercise muscle damage.

Orientador: José Mauricio Sforcin / Coorientador: Ana Paula Bordon Graciani / Banca: Rodrigo Tavanelli Hernandes / Banca: Wander Rogério Pavanelli / Banca: Karen Brajão de Oliveira / Banca: Maria Teresa Teixiera Cruz Rosete / Resumo: Não disponível / Abstract: Not available / Doutor

Submitted by Hiolanda Rêgo (hiolandar@gmail.com) on 2013-09-19T16:24:56Z No. of bitstreams: 1 Tese_Med_ Anselmo de Santana Souza.pdf: 4782838 bytes, checksum: af3640ed9c747b1632ed0e17ef967c30 (MD5) / Approved for entry into archive by Flávia Ferreira(flaviaccf@yahoo.com.br) on 2013-09-22T23:49:14Z (GMT) No. of bitstreams: 1 Tese_Med_ Anselmo de Santana Souza.pdf: 4782838 bytes, checksum: af3640ed9c747b1632ed0e17ef967c30 (MD5) / Made available in DSpace on 2013-09-22T23:49:14Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Tese_Med_ Anselmo de Santana Souza.pdf: 4782838 bytes, checksum: af3640ed9c747b1632ed0e17ef967c30 (MD5) / Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e Tecnológico (CNPq); National Institute of Health (NIH). / O HTLV-1 é o agente etiológico da leucemia/linfoma de células T do adulto (ATLL) e da mielopatia associada ao HTLV-1 (HAM/TSP). Tem-se documentado que células mononucleares de indivíduos infectados não proliferam quando estimuladas com antígenos não relacionados ao vírus como, por exemplo, derivado proteico purificado de Mycobacterium tuberculosis (PPD) e toxoide tetânico (TT). Alguns fatores que podem estar relacionados a essa falta de resposta são as funções de células T regulatórias e disfunção de células apresentadoras de antígeno. Objetivo: Avaliar a resposta imune de indivíduos infectados pelo HTLV-1 ao toxoide tetânico. Materiais e Métodos: Foram selecionados portadores assintomáticos do HTLV-1 baixo produtor de IFN- e controles sadios. Realizou-se sorologia para TT. Os indivíduos soronegativos para TT foram imunizados. Antes e após imunização, fez-se a sorologia para TT e avaliação da expressão de citocinas (IFN- , TNF e IL-10) por linfócitos T CD4+ e T CD8+ estimulados com TT. Os monócitos dos pacientes e controles, estimulados com TT, foram avaliados para a expressão de HLA-DR, CD80, CD86, TNF, IL-12 e IL-10 antes da imunização. Resultados: Após imunização, os pacientes apresentaram menores títulos de IgG anti-TT quando comparados com os controles (p = 0,007). As células mononucleares dos pacientes, estimuladas com TT, não aumentaram a produção de IFN- , TNF e IL-10 após imunização. A frequência de linfócitos T CD4+ expressando IFN- , TNF e IL-10, após estímulo, foi menor nos pacientes do que nos controles pós-imunização (p = 0,01, p = 0,04 e p = 0,01, respectivamente). Os monócitos dos pacientes não aumentaram a expressão de HLA-DR após estímulo com TT. A expressão de TNF e IL-12 por monócitos de pacientes elevaram-se após estímulo com TT (p = 0,009 e p = 0,006, respectivamente). Conclusões: Os indivíduos infectados pelo HTLV-1, após esquema de vacinação, apresentaram diminuição da resposta imune humoral e celular contra TT. Os monócitos destes pacientes exibiram uma disfunção na apresentação antigênica através do mecanismo de expressão de HLA-DR, porém, o segundo sinal (expressão de CD80 e CD86) e expressão de citocinas não apresentaram anormalidades. Tais resultados sugerem que estes mecanismos imunológicos podem participar no aumento da susceptibilidade dos indivíduos infectados pelo HTLV-1 a adquirir outras doenças infecciosas. / Salvador

Submitted by Hiolanda Rêgo (hiolandar@gmail.com) on 2013-09-18T17:24:12Z No. of bitstreams: 1 Dissertação_Med_Taís Menezes Cerqueira Campos.pdf: 1224117 bytes, checksum: 93142e385e22b4c0f7393af2a0cc02a4 (MD5) / Approved for entry into archive by Flávia Ferreira (flaviaccf@yahoo.com.br) on 2013-10-31T17:01:11Z (GMT) No. of bitstreams: 1 Dissertação_Med_Taís Menezes Cerqueira Campos.pdf: 1224117 bytes, checksum: 93142e385e22b4c0f7393af2a0cc02a4 (MD5) / Made available in DSpace on 2013-10-31T17:01:12Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Dissertação_Med_Taís Menezes Cerqueira Campos.pdf: 1224117 bytes, checksum: 93142e385e22b4c0f7393af2a0cc02a4 (MD5) / Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e Tecnológico - CNPq; National Institute of Health - NIH; Instituto Nacional de Ciência e Tecnologia de Doenças Tropicais - INCT-DT. / A leishmaniose cutânea causada por Leishmania braziliensis é caracterizada pela presença de uma ou mais lesões ulceradas, de bordas elevadas. Células T CD4+ e CD8+ atuam como fonte produtora de citocinas que ativam macrófagos para destruição do parasita. Monócitos circulantes constituem uma população heterogênea, subdividida em: monócitos clássicos (CD14++CD16-), intermediários (CD14++CD16+) e não-clássicos (CD14+CD16++), e são conhecidos por migrarem para sítios inflamatórios e secretarem citocinas. TNF pode mediar a patologia da LC através de vários mecanismos entre eles, indução de óxido nítrico (NO), aumento de citotoxidade e expressão de metaloproteinases de matriz (MMPs). MMP-9 é uma enzima dependente de zinco, que degrada colágeno tipo IV, componente da membrana basal e, é controlada pelo TIMP-1 (tissue inhibitor of metalloproteinase-1). Recentemente, foi demonstrada que a infecção de macrófagos por L. braziliensis aumenta a expressão de MMP-9. Embora os fatores que induzem a ruptura da membrana basal levando ao desenvolvimento da úlcera ainda não sejam conhecidos, é provável que a MMP-9 contribua para os danos teciduais na LC. Objetivo: investigar a contribuição das sub-populações de monócitos para produção de MMP-9. Desenho do estudo: Estudo transversal, com 28 pacientes com LC, 12 com LCR e 20 controles sadios. Material e Métodos: Células mononucleares foram obtidas de todos os participantes da pesquisa para a marcação ex-vivo das sub-populações de monócitos e MMP-9, e a frequência destas células foi determinada por citometria de fluxo. Realizou-se cultura por 72 horas estimulando as células com SLA e os níveis de MMP-9 e TIMP-1 nos sobrenadantes foram determinados por ELISA. A contribuição de TNF para a produção de MMP-9 foi determinada na presença ou ausência de TNF recombinante em cultura de CMSP por 24 horas e os níveis de MMP-9 foram determinados por ELISA. Resultados: Monócitos foram as principais células produtoras de MMP-9 e as três sub-populações de monócitos de pacientes com LCR e LC expressaram mais MMP-9, quando comparados com as de indivíduos sadios. Em pacientes com LC a sub-população de monócitos não-clássicos foi a principal fonte produtora de MMP-9. Níveis elevados de MMP-9 e baixos níveis de TIMP-1 foram encontrados em sobrenadantes de cultura de CMSP de pacientes com leishmaniose cutânea. A presença de TNF em cultura de CMSP induziu a secreção de MMP-9. Conclusão: Altos níveis de TNF em pacientes com leishmaniose cutânea contribuem para a produção de MMP-9 por monócitos. / Salvador