Realizou-se um estudo estrutura-atividade sobre os efeitos citoprotetor/citotóxico de 5 flavonóides envolvendo processos mitocondriais, com ênfase na apoptose. Nossos resultados mostram que a dupla ligação na posição 2-3 / grupos 3-OH em conjugação com a função 4-oxo no anel C da estrutura dos flavonóides parece favorecer a interação destes compostos com a membrana mitocondrial, diminuindo a sua fluidez, e tanto inibindo a cadeia respiratória das mitocôndrias, quanto causando desacoplamento. Por outro lado, a estrutura o-di-OH no anel B parece favorecer a inibição da cadeia respiratória, sendo que a ausência desta estrutura parece favorecer a atividade desacopladora. Os flavonóides que não afetaram a respiração mitocondrial, induziram a transição de permeabilidade mitocondrial. A capacidade dos flavonóides em liberar o Ca2+ acumulado pelas mitocôndrias correlaciona-se com a sua capacidade de afetar a respiração mitocondrial e sua inabilidade em induzir a transição de permeabilidade mitocondrial. Já os dados referentes aos estudos da atividade protetora contra a formação de radicais livres demonstraram que a quercetina, luteolina e a galangina foram substancialmente mais potentes que a taxifolina e a catequina em conferir proteção contra a lipoperoxidação, embora somente a quercetina tenha sido um efetivo seqüestrador tanto de DPPH?, quanto de O2?-. Esses resultados sugerem que a dupla ligação na posição 2-3 em conjugação com a função 4-oxo na estrutura dos flavonóides são os fatores mais importantes na atividade antioxidante dos flavonóides sobre as mitocôndrias. Ainda, a presença da estrutura o-di-OH no anel B, conforme observado na quercetina, favorece essa atividade via seqüestro de O2?-, enquanto que a ausência dessa característica estrutural na galangina, a favorece via diminuição da fluidez de membrana e/ou desacoplamento mitocondrial. Os ensaios realizados para avaliar o efeito dos flavonóides sobre as células HepG2 mostraram que galangina, luteolina e quercetina são capazes de induzir morte celular. Esse efeito parece estar associado à dissipação do potencial de membrana mitocondrial e à diminuição na capacidade energética celular, mais pronunciada no caso dos dois primeiros; porém, como essa diminuição na concentração de ATP não é drástica, a morte celular pode ocorrer por apoptose. Os experimentos realizados para avaliar essa possibilidade sugerem uma ativação das caspases via mitocôndria, observada pelo aumento das atividades de caspase -9 e -3 e também pela exposição de fosfatidil serina. A taxifolina que não apresentou capacidade de produzir dano celular, apresentou, por outro lado, capacidade de prevenir parcialmente a diminuição de viabilidade das células HepG2 induzida pelo pró-oxidante t-butilhidroperóxido, aparentemente por meio de sua atividade antioxidante que inibiu, também de forma parcial, o acúmulo de espécies reativas de oxigênio. / We carried out a structure-activity study addressing the protective/toxic effects of 5 flavonoids (quercetin, taxifolin, luteolin, catechin and galangin) upon mitochondrial aspects with emphasis on the mechanisms potentially involved in cell apoptosis. The major findings were: The 2,3 double bond/3-OH group in conjugation with the 4-oxo function on the C-ring in the flavonoid structure seems favour the interaction of these compounds with the mitochondrial membrane, decreasing its fluidity either inhibiting the respiratory chain of mitochondria or causing uncoupling; while the o-di-OH on the B-ring seems favour the respiratory chain inhibition, the absence of this structure seems favour the uncoupling activity. The flavonoids not affecting the respiration of mitochondria induced MPT. The ability of flavonoids to induce the release of mitochondria-accumulated Ca2+ correlated well with their ability to affect mitochondrial respiration on the one hand, and their inability to induce MPT, on the other. The data concerning the protective activity against the free radical formation showed that quercetin, luteolin and galangin were far more potent than taxifolin and catechin in affording protection against lipid peroxidation, although only quercetin was an effective scavenger of both DPPH? and O2?-. These results suggest that the 2,3-double bound in conjugation with the 4-oxo function in the flavonoid structure are major determinants of the antioxidant activity of flavonoids on mitochondria, the presence of an o-di-OH structure on the B-ring, as occurring in quercetin, favouring this activity via O2?- scavenging, while the absence of this structural feature in galangin, favouring it via decrease in membrane fluidity and/or mitochondrial uncoupling. The assays addressing the flavonoids effects on HepG2 cells showed that galangin, luteolin and quercetin are able to induce cell death. This effect appears to be linked to the mitochondrial membrane potential dissipation and consequent decrease in the cellular energy charge, more pronounced for the galangin or luteolin treatment. However, since this decrease in ATP content is not drastic, the apoptosis process can occur. The set of experiments performed in order to evaluate this possibility demonstrated caspases-9 and -3 activation and also phosphatidylserine exposure on the cell membrane. On the other hand, taxifolin, that did not present ability to induce injury to the cell, was able to partially inhibit a viability decrease of HepG2 cell exposed to the pro-oxidant t-butylhydroperoxide, probably on account of its capacity to partially decrease ROS formation.

INTRODUÇÃO: A utilização dos anti-TNF no tratamento da artrite reumatoide é uma realidade cada vez mais frequente. Estudos de eficácia e efetividade têm trazido resultados de grande valor clínico. No entanto, a maneira como os diferentes desenhos de estudos são conduzidos pode mostrar resultados conflitantes. OBJETIVO: Avaliar o uso dos anti-TNF no tratamento da artrite reumatoide, comparando estudos de eficácia e efetividade. MÉTODOS: Rever sistematicamente a literatura sobre o assunto com as seguintes etapas: 1) Busca na base de dados eletrônica Pubmed; 2) Armazenamento e avaliação por título e resumo dos estudos selecionados com auxílio do aplicativo ZOTERO, versão 3.0.8; 3) Avaliação da qualidade de 39 estudos de eficácia e 06 de efetividade, utilizando a ferramenta GRADE; 4) Extração dos dados referentes aos desfechos ACR50, ACR70 e DAS28; 5) Análise dos dados extraídos. RESULTADOS: Para todos os desfechos analisados, em ambos os tipos de estudo, a síntese metaanalítica demonstrou que a terapia associada dos biológicos com MTX ou outro DMARD beneficiou o tratamento da doença. Nos estudos de eficácia, as sínteses meta-analíticas foram: ACR50: 1,64 (IC95% 1,57 a 1,72); ACR70: 1,92 (IC95% 1,80 a 2,06); remissão pelo DAS28: 1,78 (IC95% 1,67 a 1,90). Nos estudos de efetividade: ACR50: 1,29 (IC95% 1,04 a 1,59); ACR70: 1,27 (IC95% 1,05 a 1,52); remissão pelo DAS28: 1,36 (IC95% 1,18 a 1,57). Na comparação indireta dos três biológicos entre si, os valores das sínteses meta-analíticas dos riscos relativos aos DMARDs apresentou sobreposição dos intervalos de confiança, sugerindo que a magnitude do benefício é semelhante entre os anti-TNF. A análise de sensibilidade mostrou, que os estudos com cegamento placebo, com melhor qualidade, com pacientes em fase mais adiantada da doença e com menor tempo de acompanhamento dos pacientes, apresentaram valores maiores de benefício dos biológicos. CONCLUSÃO: Este estudo permitiu observar que o benefício dos biológicos está presente tanto nos estudos de eficácia quanto nos de efetividade. Entretanto, as diferenças observadas sugerem que, no mundo real da assistência ao paciente, o benefício dos anti-TNF seja menor do que o sugerido nos ensaios randomizados / INTRODUCTION: The use of anti-TNF in the treatment of rheumatoid arthritis is an increasingly common reality. Efficacy and effectiveness studies has brought results of great clinical value, but how different study designs are conducted can show conflicting results. OBJECTIVE: Evaluate the use of anti-TNF in the treatment of rheumatoid arthritis, comparing studies of efficacy and effectiveness. METHODS: Systematically review the literature about the subject, with the following steps: 1) Searching electronic databases of Pubmed; 2) Storage and evaluation by title and summary of selected studieds with aid of the Zotero version 3.0.8 application software; 3) Evaluation of quality of 39 studies of efficacy and 06 studies of effectiveness, using the GRADE tool; 4) Data extraction of ACR50, ACR70 and DAS28 outcomes; 5) Analysis of the extracted data. RESULTS: For all analyzed outcomes in both types of studies, a meta-analytic synthesis demonstrated that the associated therapy of the biologicals agents with MTX or other DMARD benefited the treatment of disease. In efficacy studies, the metaanalytic syntheses were: ACR50: 1.64 (CI95% 1.57 to 1.72); ACR70: 1.92 (CI95% 1.80 to 2.06); DAS28 remission: 1.78 (CI95% 1.67 to 1.90). In effectiveness studies: ACR50: 1.29 (CI95%1.04 to 1.59); ACR70: 1.27 (CI95%1.05 to 1.52); DAS28 remission: 1.36 (CI95%1.18 to 1.57). In the sensitivity analysis of RCTs for indirect comparison of the three biological agents each other, the values of the meta-analytic synthesis of the relative risks to DMARDs had overlapping confidence intervals, suggesting that the magnitude of benefit is similar between anti-TNF. The sensitivity analysis showed that studies with blinded placebo, studies with better quality, studies in patients with more advanced stage of the disease and studies with shorter follow-up of patients showed higher values of biological benefit. CONCLUSION: This study lead to the observation that the benefit of biologics is present in both studies of efficacy and effectiveness. However, suggests that in the real world, patient care benefit of the anti-TNF is smaller than suggested by randomized trials

A periodontite agressiva (PAg) compreende um grupo de doenças periodontais raras caracterizadas por rápida destruição dos tecidos periodontais, em indivíduos jovens e que geralmente não apresentam doenças sistêmicas. Estudos em populações e em famílias indicaram que fatores genéticos possuem influência na susceptibilidade a periodontite agressiva. Os polimorfismos genéticos da interleucina-1 (IL-1) e do fator de necrose tumoral-? (TNF-?) foram associados com o aumento da severidade da periodontite crônica. O objetivo deste estudo foi avaliar a associação entre o polimorfismo dos genes IL-1A (-889) e TNFA (-308) e a periodontite agressiva. Foram selecionados 60 indivíduos não fumantes, sendo 30 portadores de periodontite agressiva e os outros 30 sem doença periodontal. O polimorfismo genético foi analisado utilizando-se a técnica da reação em cadeia da polimerase e análise do polimorfismo de comprimento dos fragmentos de restrição (PCR-RFLP). Foi observado que a freqüência do genótipo 1/1 para IL-1A foi de 63,3% no grupo controle e de 56,7% no grupo teste. A avaliação do genótipo 1/2 mostrou uma freqüência de 26,7% no grupo controle e de 40% no grupo teste. O genótipo 2/2 ocorreu com uma freqüência de 10% no grupo controle e de 3,3% no grupo teste. O genótipo 1/1 para TNFA estava presente em 73,3% do grupo controle e em 80% do grupo teste. O genótipo 1/2 ocorreu com freqüência de 20% em ambos os grupos. O genótipo 2/2 foi encontrado em 6,7% dos controles e não foi detectado no grupo teste. Em relação aos alelos, o alelo 1 apresentou freqüência de 76,7% e o alelo 2 de 23,3% para ambos os grupos, para o gene IL-1A (-889). E para o gene TNFA (- 308) o alelo 1 ocorreu com freqüência de 83,3% no grupo controle e de 90% no grupo teste e o alelo 2 de 16,7% no grupo controle e 10% no grupo teste. A análise estatística revelou que não houve diferença significativa na distribuição dos genótipos, para ambos os genes, entre os dois grupos estudados. Não foi encontrada associação entre a periodontite agressiva e o polimorfismo dos genes IL- 1A (-889) e TNFA (-308) na população estudada. / Agressive periodontitis (AgP) is a relatively uncommon form of periodontal disease characterized by a rapid destruction of the periodontal supporting tissues in young adults who are usually systemically well. The results of population and family studies indicate that genetic factors seem to have a strong influence on susceptibility to AP. Genetic polymorphism at the interleukin-1 (IL-1) and tumor necrosis factor alpha (TNFA) were associated with the increase on the severity of chronic periodontitis. The aim of this study was to explore a possible association between IL-1A and TNFA genotypes in Brazilian white Caucasian patients with aggressive periodontitis. Sixty nonsmoking subjects, 30 patients and 30 periodontal healthy controls were included in the study. All subjects were systemically healthy. Two polymorphisms, IL-1A (-889) and TNFA (-308), were analyzed by means of polymerase chain reaction-restriction fragment length polymorphism. The 1/1 genotype for IL-1A was present in 63.3% of the controls and in 56.7% of the aggressive periodontitis patients. The genotype 1/2 was present in 26.7% of the controls and in 40% of the patients. The 2/2 genotype was present in 10% of the controls and in 3.3% of the diseased subjects. The 1/1 genotype for the TNFA was present in 73.3% of the controls and in 80% of the patients. The genotype 1/2 was present in the 20% of both groups. The genotype 2/2 was present in 6.7% of the controls and was not detected in the patients group. With regard to the IL-1A (-889) genotype, 76.7% of controls and patients were positive for allele 1. Allele 1 of the TNFA (-308) polymorphism was carried by 83.3% of the controls and 90% of the patients and allele 2 was carried by 16.7% of the controls and 10% of the patients. Statistical analysis revealed no significant difference in the distribution of genotypes for both genes between the two groups. No association was found between AgP and the IL-1A (-889) and TNFA (-308) polymorphisms investigated in the population presented here.

INTRODUÇÃO: As necroses de retalhos da mastectomia (RM) afetam até um terço das mulheres submetidas à reconstrução imediata de suas mamas e aumentam o risco de outras complicações e, por fim, de falha da reconstrução. A glicemia capilar (GC) tem sido usada para monitorização clínica de mudanças agudas na perfusão tecidual de retalhos livres. Nós avaliamos a acurácia diagnóstica da GC para predição de necrose de espessura total (NET) em RM após mastectomia com reconstrução imediata. MÉTODOS: Duzentos e trinta amostras de sangue para mensuração de GC foram coletadas ao longo da ferida operatória de 30 mulheres submetidas à ressecção total de suas mamas. Uma amostra de sangue periférico para mensuração da GC periférica foi colhida em cada paciente. Fotografias da mama foram capturadas no final da cirurgia e no pós-operatório (entre 7 e 14 dias). Estas fotos foram comparadas por um investigador cego aos valores das GCs para determinar a ocorrência de necrose e em que pontos de coleta ela ocorreu. A associação entre GC e a ocorrência de NET foi testada usando modelos de equações de estimação generalizadas. Nós analisamos a acurácia diagnóstica da GC como um teste intraoperatório de predição de NET usando curvas de Característica de Operação do Receptor e a estatística C (ou área sob a Curva). RESULTADOS: NET ocorreu em 21/230 (9.1%) pontos de coleta aleatória de 9/30 pacientes (30%). Cada decréscimo de 10mg/dL no valor absoluto da GC (GCA) foi associada a uma razão de chance (RC) de 1.71 (1.21-2.41; p=.002) para NET e C=.78 (.65-.92). Cada queda em 10% da razão entre a GC e a GC periférica (GCr) foi associada com uma RC=1.77 (1.23-2.55; p=.002) para NET e C=.75 (.47-.89). Para pontos de corte de GCA < 90 mg/dL ou GCR < 80%, a especificidade e sensibilidade para o teste como uma ferramenta de rastreamento para NET foi de 67% (14/21) e 86% (179/209), respectivamente. CONCLUSÕES: A performance da GC como uma ferramenta de rastreamento para NET foi sub ótima, com um poder discriminatório moderado. No entanto, sua mensuração pode ser informativa como uma ferramenta adicional para esta avaliação ainda altamente subjetiva. As associações observadas entre a GC e a ocorrência de NET pós-operatória suportam nossa hipótese de que os tecidos dos RM sob stress perfusional demonstram alterações metabólicas precoces / INTRODUCTION: Mastectomy skin flap (MSF) necrosis affects up to one-third of patients undergoing immediate breast reconstruction and increases the risk other complications rand, ultimately, reconstruction failure. Interstitial glucose level (IGL) has been used clinically to monitor acute changes in local tissue perfusion in free flaps. We evaluated the accuracy of IGL for prediction of full thickness necrosis (FTN) in MSF after mastectomy with immediate breast reconstruction. METHODS: Two hundred and thirty random blood samples for IGL measurement along the surgical wound edges of 30 women undergoing unilateral total breast resection with immediate reconstruction were collected. At the same time, a peripheral blood sample was also tested. Pictures of the breast were taken after skin closure with markings identifying the position where the samples were taken and 7 to 14 days post-operatively. These pictures were compared by an investigator blinded to IGL values to determine the occurrence of FTN and at which IGL sampling sites it occurred. The association between IGL and the occurrence of FTN was tested using generalized estimating equation models. We analyzed the diagnostic accuracy of IGL as an intraoperative test for FTN with the use of Receiver Operating Curves and their C-statistics (or Area Under the Curve). RESULTS: FTN occurred in 21/230 (9.1%) random sampling points from 9/30 patients (30%). Each 10mg/dL decrease in absolute IGL (IGLA) was associated with an OR=1.71 (1.21-2.41; p=.002) for FTN and C=.78 (.65-.92). Each 10% decrease in the ratio of IGL to peripheral glucose level (IGLR) was associated with an OR=1.77 (1.23-2.55; p=.002) for FTN, with C=.75 (.47-.89). For cut-offs of IGLA < 90 mg/dL or IGLR < 80%, the specificity and sensitivity of the test as a screening tool for FTN were 67% (14/21) and 86% (179/209), respectively. CONCLUSIONS: The performance of IGL as a screening tool for FTN was suboptimal, with a moderate discriminative power for FTN. However, it can be informative as an additional tool to the still highly subjective intraoperative evaluation of MSFs. The observed association between IGL measurements and post-operative FTN supports our hypothesis that tissues of the MSF under perfusion stress will show early metabolic alterations

Orientador: Maria Julia Marques / Tese (doutorado) - Universidade Estadual de Campinas, Instituto de Biologia / Made available in DSpace on 2018-08-12T10:29:05Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Carvalho_CandidaLuizaTonizzade_D.pdf: 7808064 bytes, checksum: e7eb0b2d08d94a0d2baad550d0683e29 (MD5) Previous issue date: 2008 / Resumo: A distrofia muscular de Duchenne é caracterizada pela falta de distrofina, proteína estrutural do sarcolema que promove a sua estabilização. Em ausência de distrofina, ocorre aumento da permeabilidade ao cálcio e conseqüente mionecrose. No camundongo distrófico mdx, os músculos extra-oculares (EOM) não apresentam mionecrose, sendo protegidos da falta de distrofina. Este fato os torna importantes para a maior compreensão dos mecanismos da patogênese da distrofia muscular. No presente trabalho verificamos se alterações nos níveis das proteínas calsequestrina e SERCA1, reguladoras do cálcio, e ?-distroglicana (?-DG), pertencente ao complexo distrofina-glicoproteínas, podem se relacionar a proteção contra a mionecrose dos EOM de animais distróficos. Utilizamos as técnicas de immunoblotting e imunofluorescência e observamos que os EOM de animais distróficos apresentaram aumento significativo no conteúdo das proteínas calsequestrina e SERCA1, bem como aumento significativo da ?-distroglicana. Músculos distróficos não protegidos (tibial, gastrocnêmio, sóleo, esternomastóide e diafragma) apresentaram diminuição no conteúdo destas proteínas em relação aos controles. Não foram observadas alterações na localização da utrofina, decorrente da falta da distrofina. Sugerimos que o aumento da ?-DG nos EOM de animais distróficos possa auxiliar na integridade do sarcolema e, conseqüentemente, na proteção das fibras musculares. Já o aumento das proteínas ligadas ao Ca2+ nos EOM mdx poderia ajudar na rápida remoção do excesso de cálcio, resultando na manutenção da sua homeostase e proteção à mionecrose. Os resultados obtidos nos demais músculos distróficos confirmam que distúrbios no tamponamento do cálcio podem estar envolvidos na distrofia muscular. / Abstract: Duchenne muscular dystrophy is one of the most common hereditary diseases. Abnormal calcium ion handling renders dystrophic muscle fibers more susceptible to necrosis. In the mdx mice, extraocular muscles (EOM) are protected and do not undergo myonecrosis. We investigated whether this protection is related to an increased expression of calcium-binding proteins, which may protect against the elevated calcium levels seen in dystrophic fibers. The expression of SERCA1 and calsequestrin was examined in EOM and in non-spared limb, diaphragm and sternomastoid muscles of control and mdx mice using immunofluorescence and immunoblotting. Dystrophic EOM presented a significant increase in the proteins studied, and a significant increase in ?-dystroglycan expression. These proteins were reduced in the non-spared mdx muscles. The were no changes in utrophin distribution. The increase of Ca2+-handling proteins in dystrophic EOM may permit a better maintenance of calcium homeostasis, with the consequent absence of myonecrosis. The results further support the concept that abnormal Ca2+-handling is involved in dystrophinopaties. / Doutorado / Anatomia / Doutor em Biologia Celular e Estrutural

O adalimumabe (Humira®, Abbott) é um antagonista do Fator de Necrose Tumoral- alpha (TNF-alfa ). É aprovado para o tratamento de artrite reumatoide, espondilite anquilosante, doença de Crohn, psoríase crônica e artrite reumatoide juvenil. É um anticorpo monoclonal que contém apenas sequências humanas de peptídeos contra a molécula do Fator de Necrose Tumoral-alfa. Na literatura, relatos e série de casos sugerem que os antagonistas do Fator de Necrose Tumoral-alfa são úteis no tratamento da inflamação ocular, edema macular cistoide e secundário à uveíte e degeneração macular relacionada à idade. Entretanto, a administração sistêmica do adalimumabe pode gerar efeitos adversos graves. A fim de diminuir esses efeitos adversos e aumentar a concentração da medicação no segmento posterior do olho, uma possível opção é a injeção intravítrea. O objetivo do presente estudo foi avaliar a toxicidade do adalimumabe intravítreo nas diferentes doses para a retina de coelhos por meio de avaliação clínica (biomicroscopia e oftalmoscopia indireta), funcional (eletrorretinograma) e histopatológica (microscopia óptica e eletrônica). Foram utilizados 30 coelhos albinos da raça Nova Zelândia divididos em cinco grupos de seis coelhos. Injeções intravítreas foram realizadas nas seguintes concentrações de adalimumabe: 0,5mg/0,1ml, 1mg/0,1ml, 2,5mg/0,1ml, 5,0mg/0,1ml e 10mg/0,2ml e 0,1ml de solução salina balanceada (BSS) foi injetada nos olhos esquerdos dos grupos 1 e 2 para constituir o grupo controle. Foram realizadas biomicroscopia e fundoscopia e sinais de inflamação, infecção ou toxicidade foram observados durante duas semanas. O eletrorretinograma foi realizado antes do tratamento e após 14 dias da injeção intravítrea. Os animais foram sacrificados, foi feita a enucleação dos olhos, e o tecido para a avaliação histopatológica foi preparado. A injeção intravítrea de adalimumabe (Humira®) nas doses estudadas até 5mg (0,5mg, 1,0mg, 2,5mg, 5mg) não apresentou sinais clínicos, eletrorretinográficos e histopatológicos de toxicidade para a retina de coelhos a curto prazo. No grupo de 10mg, foram observados sinais inflamatórios leves em três dos seis olhos e houve diminuição da amplitude da onda a na resposta fotópica do ERG, não foram observadas alterações na microscopia óptica / Adalimumab is a fully human anti-TNF alpha monoclonal antibody consisting of 100% human sequences developed using phage display technology. It is currently FDA approved for the treatment of rheumatoid arthritis, ankylosing spondylitis, Crohns disease, moderate to severe chronic psoriasis, and juvenile idiopathic arthritis. Anti-TNF alpha drugs may be an effective therapy for cystoid macular edema associated with uveitis. Significant improvements in chronic diabetic macular edema and regression of CNV from AMD have also been documented in small published series after systemic treatment with TNF-alpha antagonists. However the systemic administration of these drugs can have serious side effects. Intravitreous injection would assure delivery of high concentrations of medication at the posterior segment with minimum side effects.The aim of this study was to evaluate the ocular toxicity of escalating doses of intravitreous adalimumab (Humira®) in the rabbit eye. Thirty New Zealand albino rabbits received intravitreous injections of 0.1ml of adalimumab 0.5 mg (6 eyes), 1mg (6 eyes), 2.5mg (6 eyes), 5mg (6 eyes) and 0.2ml was injected in the10mg (6 eyes) group. BSS (0,1ml) was injected in the left eye of the rabbits from the groups 1 and 2 to serve as control group. Slit lamp biomicroscopy, fundoscopy were carried out at baseline, day 7 and 14 following intravitreous injection while electroretinography (ERG) was carried out at baseline and day 14. Animals were euthanized on day 14 and histopathological examination of the eyes was performed. The tested doses of intravitreous adalimumab up to 5mg (0.5mg, 1.0mg, 2.5mg, 5mg) had no associated ocular short-term toxicity in rabbit eyes. The 10mg group showed mild inflammatory reaction in 3 out of 6 eyes and showed decrease in the a wave amplitude in the photopic response, light microscopy was normal

Orientador: Lília Freire Rodrigues de Souza / Tese (doutorado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Ciências Médicas / Made available in DSpace on 2018-08-22T13:01:05Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Teocchi_MarceloAnanias_D.pdf: 2726481 bytes, checksum: e5cce5b510a5bcad6802507e6b36bcce (MD5) Previous issue date: 2013 / Resumo: A epilepsia do lobo temporal associada à esclerose hipocampal [ELT(EH)] é o tipo mais comum de epilepsia focal que causa crises refratárias. A morte neuronal na EH pode ser desencadeada por danos excitotóxicos e citocinas específicas. Pesquisas em modelos experimentais de crises convulsivas ressaltaram a citocina pleiotrópica fator de necrose tumoral (TNF) como um importante efetor/mediador de neuroinflamação e morte celular. Além disso, esses modelos sugeriram que o TNF possa ter uma ação dicotômica por meio de seus dois receptores: ativação da morte celular programada (via TNFRSF1A) ou atuação na sobrevivência celular (via TNFRSF1B), através do fator nuclear kappa B (NFkB). Klotho (KL), originalmente identificada como uma proteína antienvelhecimento, tem se destacado como um importante hormônio regulador de cálcio e fósforo. Sua função cerebral é desconhecida; porém, camundongos knockout para Kl apresentam características que remetem ao envelhecimento humano, com neurodegeneração e redução de sinapses no hipocampo. Em modelos de doença renal crônica e colite, foi comprovado que o TNF inibe KL através do NFkB. Nosso objetivo é identificar alvos críticos na epileptogênese e na fisiopatologia molecular da ELT(EH). Avaliamos a expressão relativa do RNAm de cinco genes-alvo: TNF, TNFRSF1A, TNFRSF1B, NFKB1 e KL. A expressão gênica foi avaliada em amostras de tecido hipocampal de 14 pacientes com ELT(EH) e comparadas com cinco amostras de controles post mortem. Além disso, ambos os receptores do TNF foram analisados nas amostras hipocampais por imuno-histoquímica. Todos os cinco genes avaliados apresentaram expressão significantemente alterada nos pacientes com ELT(EH) (P<0,05). A expressão de ambos os receptores foi constatada nos tecidos dos pacientes. Este é o primeiro estudo a relacionar KL e epilepsia. Nossos dados reforçam o componente inflamatório da EH e sugerem que o TNF possa inibir a expressão de KL no hipocampo dos pacientes. A repressão de KL abre novas frentes de pesquisa que podem contribuir para a compreensão da complexa fisiopatologia da ELT(EH). Além disso, uma vez que TNF, TNFRSF1A e NFKB1 são protagonistas na via extrínseca da apoptose, concluímos que a sinalização do TNF participe criticamente da neurodegeneração hipocampal associada à ELT. Existem controvérsias sobre o papel do TNFRSF1B. Sua ativação pode estar relacionada a mecanismos de sobrevivência, hipótese corroborada pela concomitante hiperexpressão de NFKB1; todavia, já foi demonstrado que o TNFRSF1B pode reforçar a ação do TNFRSF1A. Apresentamos evidências de que KL e a sinalização do TNF constituem um importante eixo para estudos farmacológicos, especialmente em relação aos benefícios de uma terapia anti-inflamatória nesses pacientes / Abstract: Temporal lobe epilepsy associated with hippocampal sclerosis [TLE(HS)] is the most common form of focal epilepsy that causes refractory seizures. Neuronal death in HS can be triggered by excitotoxic damage and specific cytokines. Previous research in seizure models indicates that the pleiotropic cytokine tumor necrosis factor (TNF) as an important effector/mediator of neuroinflammation and cell death. Through its two receptors, TNF can play a dichotomous role in animal seizures: programmed cell death activation (via TNFRSF1A) or cell survival actuation (via TNFRSF1B), through the nuclear factor kappa B (NFkB) activation. Klotho (KL), originally identified as an antiaging protein, is emerging as an important calciophosphoregulatory hormone. Its cerebral function is unclear; however, the Kl knockout mouse exhibits a phenotype resembling human aging presenting neural degeneration and a reduction of synapses in the hippocampus. Studies have demonstrated that TNF downregulates KL through NFkB in animal models of chronic kidney disease and colitis. Our aim is to identify critical targets in epileptogenesis to clarify the molecular pathophysiology in TLE(HS). We evaluated the relative mRNA expression of five target genes: TNF, TNFRSF1A, TNFRSF1B, NFKB1 and KL. Gene expression was performed in resected hippocampal tissue samples from 14 TLE(HS) patients and compared to five post mortem controls. Moreover, an immunohistochemistry assay was done to verify the activation of both TNF receptors in patient and control tissues. We found that all target genes were differentially regulated in the TLE(HS) patients (P<0.05). Both TNF receptors were clearly activated in patient's tissues. This is the first study relating KL to epilepsy. Our data corroborates the prominent role of inflammation in HS and suggests that TNF might affect KL expression in hippocampus. As a multifunctional protein, KL downregulation in TLE(HS) patients opens several possible avenues of research that will help us to understand the complex pathophysiology in HS. Furthermore, since TNF, TNFRSF1A and NFKB1 are key factors in the death receptor signaling canonical pathway, we conclude that TNF signaling plays a crucial role in TLE hippocampal neurodegeneration. There is still some controversy on TNFRSF1B role. Its augmentation could be related to a survival mechanism because the concomitant NFKB1 upregulation; however, it has already been demonstrated that TNFRSF1B may reinforce TNFRSF1A action. Our evidence reveals KL and the TNF pathway as an important axis for pharmacological studies regarding the benefits of an anti-inflammatory therapy in these patients / Doutorado / Saude da Criança e do Adolescente / Doutor em Ciências

Orientador: Francisco José de Souza Filho / Tese (doutorado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Odontologia de Piracicaba / Made available in DSpace on 2018-08-24T03:24:26Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Marion_JeffersonJosedeCarvalho_D.pdf: 27665945 bytes, checksum: 849cd1484ec134422fbd4351ca11630e (MD5) Previous issue date: 2013 / Resumo: O tratamento por meio de revitalização do canal radicular tem sido considerado para dentes com rizogênese incompleta e polpa necrosada. A revitalização do canal radicular compreende a descontaminação do canal e o preenchimento do mesmo com coágulo visando a invaginação do espaço do canal com tecido conjuntivo e consequente revitalização do espaço pulpar desvitalizado. O objetivo deste estudo foi analisar histologicamente os efeitos da ampliação do forame apical no procedimento de revitalização do canal radicular em dentes de cães, com polpa vital ou necrosada, e com ápices completamente formados. Foram utilizados 2 cães da raça Beagle, que foram divididos em 5 grupos: G.1 - necrose pulpar com coágulo sanguíneo; G.2 - necrose pulpar com medicação intracanal (associação de Ca(OH)2 com CLX gel 2%); G.3 - controle positivo polpa vital com coágulo sanguíneo; G.4 - controle positivo polpa vital com medicação intracanal (associação de Ca(OH)2 com CLX gel 2%); G.5 - controle negativo - canais radiculares com lesões apicais induzidas. Para a indução de necrose pulpar e desenvolvimento das lesões periapicais, os dentes foram mantidos abertos para contaminação dos canais radiculares pelo período de 180 dias. Os canais foram tratados pela técnica crown-down e os forames apicais ampliados até a lima K #40. Os resultados demonstraram que no grupo G.1 houve revitalização do canal radicular, total ou parcial, em 63,6% dos dentes. No grupo G.2 em 77,8% dos casos houve revitalização parcial ou total do canal radicular. No grupo G.3 houve revitalização do canal radicular, parcial ou total, em 100% dos casos. No grupo G4 não houve revitalização do canal radicular em 100% dos casos (houve selamento biológico apical). No grupo G.5 em 100% dos casos houve formação de lesão periapical. Desta forma, pode se concluir que a revitalização do canal radicular em dentes com necrose pulpar ocorreu em maior percentual no grupo com medicação intracanal, enquanto que, nos dentes com polpa vital a revitalização do canal radicular ocorreu em maior porcentagem no grupo com coágulo / Abstract: Treatment through revitalization of the root canal has been considered for teeth with incomplete root formation and necrotic pulp. The revitalization of root canal includes canal decontamination and filling with clot aiming the invagination of canal space with connective tissue and consequent revitalization of the devitalized pulp space. The aim of this study was to histologically analyze the effects of apical foramen enlargement in root canal revitalization procedure in dogs' teeth, with vital or necrotic pulp, with completely formed apices. Two Beagle dogs were divided into 5 groups: G.1 - pulp necrosis with blood clot; G.2 - pulp necrosis with intracanal medication (association of Ca(OH)2 with 2% chlorhexidine gel); G.3 - positive control vital pulp with blood clot; G.4 - positive control vital pulp with intracanal medication (association of Ca(OH)2 with 2% chlorhexidine gel); G.5 - negative control - root canals with induced apical lesions. For induction of pulp necrosis and periapical lesion development, the teeth were kept open to root canals contamination for a period of 180 days. The root canals were treated by crown-down technique and apical foramen was enlarged to #40 K file. The results showed that in G.1 group there was root canal revitalization, partial or total, in 63.6% of teeth. In G.2 group, partial or complete root canal revitalization occurred in 77.8% of cases. In G.3 group, partial or total revitalization of root canals occurred in 100% of cases. In G.4 there was no revitalization of the root canal in 100% of cases (there were biological apical sealing). In the group G.5, in 100% of cases there was formation of apical lesions. Therefore, it can be concluded that the revitalization of the root canal in teeth with pulp necrosis occurred in higher percentage in the group with intracanal medication, whereas in teeth with vital pulp, revitalization root canal occurred in higher percentage in the group with clot / Doutorado / Endodontia / Doutor em Clínica Odontológica

Muitas evidências indicam que exposições a eventos adversos no início da vida, tais como abuso e negligência, aumentam a vulnerabilidade a psicopatologias na vida adulta. Tem sido relatado que psicopatologias podem levar a não apenas prejuízos cognitivos, emocionais e sociais, mas também a uma variedade de alterações neuroquímicas. Separações maternas periódicas no período neonatal têm sido usadas como um modelo animal de eventos adversos no início da vida, avaliando-se seus efeitos sobre aspectos comportamentais e fisiológicos observados na vida adulta. As primeiras duas semanas de vida representam um período crítico para o desenvolvimento neural em ratos. Sabe-se que períodos prolongados de separação materna (SM) podem modificar parâmetros neurobiológicos e comportamentais. Logo, o objetivo do presente estudo foi verificar os efeitos duradouros de SM repetida em diferentes parâmetros, incluindo comportamentos de medo, sociais, cognitivos e alimentar, assim como uma série de análises neuroquímicas. Ratos Wistar machos e fêmeas foram sujeitos a SM repetidas (incubadora a 32°C, 3h/dia) nos dia 1 ao 10 de vida. Na primeira parte deste trabalho, os animais foram expostos à tarefa de Medo Condicionado ao Contexto aos 60 dias de idade. Uma semana após, as atividades da Na+, K+-ATPase e de enzimas antioxidantes foram medidas na amígdala. Na segunda parte deste trabalho, os animais foram expostos ao teste de Interação Social por 15 min aos 70 dias de idade. Foram observadas as frequências e durações dos seguintes comportamentos: cheirar; ataque lateral; ataque frontal; boxing; e tempo gasto sem demonstrar comportamentos sociais. A ocitocina foi medida no líquor. Na terceira parte deste trabalho, ratos adultos foram expostos a tarefas de memória (Reconhecimento de Objetos e ao Labirinto Aquático de Morris). O Comportamento Alimentar também foi analisado. Dano celular, quebras do ADN, citocinas inflamatórias e fator neurotrófico derivado do encéfalo (BDNF) foram medidos no hipocampo. A SM aumentou o Medo Condicionado ao Contexto e a atividade da Na+, K+-ATPase na amígdala. Foi encontrado um efeito significativo da SM sobre a catalase apenas em fêmeas, aumentando sua atividade. A SM reduziu os comportamentos sociais (duração de cheirar; frequências de ataques lateral e frontal; frequência e duração de boxing). Houve uma tendência dos animais SM apresentarem redução na ocitocina no líquor. Animais SM apresentaram desempenho prejudicado nos testes de Reconhecimento de Objetos e Labirinto aquático de Morris. Não houve efeito sobre o Comportamento Alimentar. Os seguintes resultados foram encontrados nas avaliações neuroquímicas: SM aumentou as quebras de ADN no hipocampo, apresentou uma tendência a diminuir o TNF-α hipocampal em ratos machos e aumentou significativamente o TNF-α hipocampal em fêmeas. Nossos resultados sugerem um papel do ambiente precoce na programação das respostas de medo, sociais e cognitivas na vida adulta, assim como em suas neuroquímicas subjacentes. Observamos que um evento aversivo no início da vida, tal como a SM, pode levar a prejuízos em parâmetros comportamentais e neuroquímicos. Encontramos uma atividade aumentada na amígdala (indicada pela Na+, K+-ATPase) causada pela SM, afetando comportamentos relacionados ao medo, com melhor desempenho na tarefa de medo condicionado em adultos, e esse efeito pode ser tarefa-específico (os efeitos sobre a memória espacial e de reconhecimento de objetos são opostos). Ademais, a SM reduziu comportamentos agressivos e sociais. Esse resultado pode ser relacionado à tendência da SM reduzir os níveis de ocitocina no líquor, a qual é um hormônio envolvido em comportamentos afiliativos e sociais. As diferenças de sexo nos comportamentos sociais estão de acordo com estudos anteriores. Os prejuízos de memória em animais SM podem ser relacionados às mudanças neuroquímicas encontradas no hipocampo, tais como índices aumentados de quebras de ADN. Ademais, nosso trabalho encontrou diferenças de sexo nas atividades neuroquímicas, tais como atividade da CAT na amígdala em fêmeas SM e um efeito contrário entre machos e fêmeas SM nos níveis de TNF-α. Esses achados demonstram que um estresse no início da vida pode levar a efeitos neuroquímicos sexo-específicos. / A large body of evidences indicates that exposure to early adverse life events such as childhood neglect and abuse can increase vulnerability to psychopathology in adult life. It has been reported that psychopathologies may lead not only to cognitive, emotional and social impairments, but also to a variety of neurochemical alterations. Periodic neonatal maternal separation (MS) in the rat has been used as a rodent model of the effects of early adverse life events on adult physiology and behavior. The first two weeks of life are a critical period for neural development in rats. The purpose of the present study was to verify the long-term effects of repeated MS in different parameters, including conditioned fear, social, cognitive and feeding behaviors, as well as a series of neurochemical analysis. Female and male Wistar rats were subjected to repeated MS (incubator at 32°C, 3h/day, during postnatal days 1-10). In the first part of this work, the subjects were exposed to a Contextual Fear Conditioning task at 60 days of age, and Na+, K+ -ATPase and antioxidant enzymes activitieswere evaluated in the amygdala. In the second part of this work, the animals were exposed to 15-min Social Interaction test at 70 days of age in order to analyze social behaviors (frequencies and durations of sniffing; lateral attack; frontal attack; boxing; and time spent in non-social behavior). Oxytocin was measured in cerebral spinal fluid (CSF). In the third part of the present work, adult rats were exposed to Object Recognition and Morris Water Maze memory tasks. Feeding behavior was analyzed as well. Cell damage, mitochondrial viability, DNA breaks, inflammatory cytokines, and brain-derived neurotrophic factor (BDNF) were measured in the hippocampus. MS effects were observed, with increased Contextual Fear Conditioning and increased Na+, K+-ATPase in amygdala, without differences groups on the antioxidant enzymes activities (SOD, GPx, CAT) in male rats. Nevertheless, we found a significant MS effect in females, with an increase of CAT activity. MS decreased social behaviors (sniffing duration; frequencies of lateral and frontal attacks; frequency and duration of boxing). Two way ANOVA indicated a tendency of MS animals towards decreased CSF oxytocin levels. MS animals also shoed impairments on performances of object recognition and Morris water maze tasks, and no differences on feeding behavior. The following results were found on neurochemical assessments: MS increased DNA breaks in hippocampus; additionally, a tendency for MS decreasing hippocampal TNF-α in male rats was observed, while MS significantly increased hippocampal TNF-α in females. Our results suggest a role of early rearing environment in programming fear, social and cognitive responses in adulthood, as well as their underlying neurochemistry. We found that an aversive early-life event, such as MS, may lead to impairments in behavioral and neurochemical parameters. We found that MS increased activity in the amygdala (as indicated by the increased activity of Na+, K+-ATPase), affecting behaviors related to fear in adulthood, and this effect could be task-specific. Moreover, MS decreased aggressive and social behaviors. This result may be related to the marginally reduced CSF oxytocin levels in MS subjects, which is a hormone involved in affiliative and social behaviors. Sex differences on social behaviors are in accordance to previous studies. MS also impaired short- and long-term memories as observed on Object Recognition and Morris Water Maze tasks. These memory impairments on MS animals may be associated to neurochemical changes found in hippocampus, such as increased DNA breaks. Moreover, our work found sex differences on neurochemical activities, such as amygdalar CAT activity in MS females and an opposing effect of hippocampal TNF-α in MS females compared to males. These findings reveal that early stress may lead to sex-specific neurochemical effects.

Orientador: Edson Rosa Pimentel / Tese (doutorado) - Universidade Estadual de Campinas, Instituto de Biologia / Made available in DSpace on 2018-08-26T15:25:06Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Vieira_CristianoPedrozo_D.pdf: 3245048 bytes, checksum: 0556c35183a4503cef8427390d086781 (MD5) Previous issue date: 2015 / Resumo: Nutrição terapêutica é a administração de alguns nutrientes, em doses maiores que as necessidades alimentares diárias que podem prevenir deficiências orgânicas e atuar como agentes farmacológicos. A glicina apresenta amplos efeitos benéficos em processos inflamatórios e tumorais. O Chá verde feito de folhas e brotos da planta Camellia sinensis, é a segunda bebida mais consumida em todo mundo. O interesse econômico e social tem ganhado espaço no mercado e atualmente seu consumo faz parte da rotina diária de muitas pessoas que utilizam essa bebida como uma finalidade terapêutica. O Chá verde possui propriedades antimutagênicas, antidiabéticos, antiinflamatórias, antioxidante, antimicrobial e hipocolesterolêmica. A tendinite é reconhecidamente um problema clínico que motiva a comunidade científica a buscar tratamentos que auxiliem no restabelecimento das propriedades funcionais dos tendões. O presente estudo investigou o efeito do chá verde e ou da ração rica em glicina após 7 e 21 dias da indução da tendinite com colagenase. Ensaios bioquímicos, moleculares, morfológicos e biomecânicos foram desenvolvidos. Além disso, tenócitos em cultura foram tratados com glicina após inflamação induzida por TNF-?. Nossos ensaios in vivo mostraram altas concentrações de hidroxiprolina e glicosaminoglicanos no grupo glicina e chá em 21 dias de tratamento. Nos ensaios biomecânicos os grupos chá verde e dieta de glicina em 21 dias suportaram maiores cargas biomecânicas antes da ruptura. Além disso, uma melhor organização das fibras de colágeno foi observada no grupo chá verde em 7 dias. Análises bioquímicas e moleculares da junção miotendínosa mostraram que a inflamação instalada na região osteotendinea pode provocar alterações significativas nesse local. Marcantes alterações foram notadas nas metaloproteínases (MMP) tais como MMP-2, MMP-8 e MMP-9 em animais com tendinite tratados ou não com chá verde e glicina. No estudo in vitro, tenócitos extraídos a partir de tendão de Aquiles foram tratados com TNF-?, seguindo ou não de tratamento com glicina em meio de cultura. Antes e após 24 horas da inflamação foi adicionado glicina. Tenócitos inflamados e tratados com glicina mostraram expressão de colágeno tipo I próxima aos grupos tratados com glicina previamente e depois da inflamação quando comparado ao grupo controle. Todos os grupos tratados com glicina mostraram menor expressão de MMP-2. A atividade da MMP-9 foi alta apenas no grupo tratado com glicina em 48 horas. A concentração de ácido urônico foi menor no grupo tratado com glicina 24 horas após a inflamação. No ensaio de migração celular, resultados em 24 horas de tratamento foram similares ao grupo controle. Em geral, tanto a glicina quanto o chá verde influenciam na síntese dos componentes do tendão, melhoram a organizaçao das fibras colagênicas, aumentam a resistência a cargas do tendão inflamado e consequentemente aceleram o processo de remodelamento após indução da tendinite. Além disso, o tratamento com glicina em cultura de tenócitos mostrou uma reorganização eficiente da matriz extracelular, corroborando com os resultados encontrados in vivo / Abstract: Therapeutic nutrition is the administration of some nutrients, in higher doses than those recommended for the daily food needs that can prevent dysfunctions and act as pharmacological agents. Glycine has large beneficial effects in inflammatory and tumor processes. Green tea made from leaves and buds of the Camellia sinensis plant, is the second most consumed beverage in the world. The economic and social interest has gained space in the market and currently its consumption is part of the daily routine of many people who use this drink as a therapeutic purpose. Green tea has antimutagenic, antidiabetic, anti-inflammatory, antioxidant, antimicrobial and hypocholesterolemic properties. Tendinitis is recognized as a clinical problem that motivates the scientific community to investigate treatments that help in restoring the functional properties of tendons. The present study investigated the effect of green tea and/or diet rich in glycine after 7 and 21 days of tendinitis collagenase-induced. Biochemical, molecular, morphological and biomechanical tests were developed. Furthermore, tenocytes in culture were treated with glycine after inflammation induced by TNF-?. Our tests in vivo showed high concentrations of hydroxyproline and glycosaminoglycans in glycine and green tea group in 21 days of treatment. In biomechanical assay, green tea and glycine diet groups in 21 days showed a high biomechanical loads bore before rupture. In addition, better organization of collagen fibers was observed in green tea group in 7 days. Biochemical and molecular analyzes of myotendinous junction showed that the inflammation installed in osteotendinious region can cause significant change in that region. Remarkable changes were noted in metalloproteinases (MMP) such as MMP-2, MMP-8 and MMP-9 in animals with tendinitis treated with or without glycine and green tea. In the in vitro study, tenocytes from Achilles tendon were treated with TNF-?, or not following treatment with glycine in the culture medium. Before and 24 hours after inflammation was added glycine. Tenocytes inflamed and treated with glycine showed expression of collagen type I close to the treated groups with glycine previously and after the inflammation when compared to the control group. All treated groups showed less glycine MMP-2 expression. The activity of MMP-9 was high only in the group treated with glycine for 48 hours. In the cell migration assay results in 24 hours of treatment were similar to the control group. In general, both glycine and green tea influenced the synthesis of the tendon components, improve the organization of the collagenous fibers, increase the load resistance of the inflamed tendon and consequently accelerate the remodeling process after inducing tendinitis. In addition, the treatment with glycine in tenocytes culture showed efficient reorganization of the extracellular matrix, confirming the results found in vivo / Doutorado / Biologia Celular / Doutor em Biologia Celular e Estrutural