INTRODUÇÃO: O tabagismo é reconhecido, atualmente, como um dos maiores problemas de saúde em todo o mundo. Há uma \"epidemia\" global de uso de tabaco nos países em desenvolvimento, no século 21. OBJETIVOS: Analisar: as características gerais dos indivíduos matriculados espontaneamente em um ambulatório antitabágico; a eficácia geral do tratamento antitabágico e dos medicamentos; as mudanças nas características dos participantes antes e após a Lei Ambiente Fechado Livre do Cigarro em São Paulo e os níveis de cotinina urinária em fumantes ativos, passivos e controles. CASUÍSTICA E MÉTODOS: Foi realizado um estudo de coorte histórica cujo critério de inclusão foi a matrícula no ambulatório antitabágico do HU USP, no período de 2004 a 2011. Os dados foram coletados por meio de consulta a protocolos padronizados e ao sistema informatizado do serviço. Foram analisados os resultados de dosagens de cotinina e creatinina realizadas em amostras biológicas. RESULTADOS: Dentre os 1736 pacientes atendidos houve predomínio de mulheres (62,1%), brancos (75,3%) e indivíduos com idade entre 41 e 60 anos (63,1%). Aproximadamente 80% iniciaram o tabagismo antes dos 20 anos e 75% apresentaram grau de dependência moderado a grave. Dentre os 620 indivíduos acompanhados a partir de 2009, 34,5% abandonaram o tabagismo. Dentre eles, 21,5% obtiveram êxito até o quarto contato com o ambulatório. O uso de vareniclina e terapia de reposição de nicotina (TRN) aumentaram a probabilidade de sucesso (RRR= 2,73 e 2,78, respectivamente; p < 0,001 para ambas). Quanto maior o número de reuniões frequentadas no ambulatório, maior a probabilidade de sucesso terapêutico (p < 0,001). A análise da dosagem da cotinina urinária mostrou concentrações de cotinina urinária 18,7 vezes maior no grupo de tabagistas ativos comparados aos tabagistas passivos. CONCLUSÃO: O sucesso do ambulatório antitabágico do HU manteve-se em acordo com grande parte dos índices de sucesso terapêutico presentes na literatura médica. O abandono do hábito de fumar foi fortemente associado ao número de contatos dos fumantes com o grupo e a terapêutica medicamentosa. A cotinina urinária mostrou-se um bom marcador do tabagismo ativo / INTRODUCTION: Smoking is recognized today as one of the major health problems worldwide. There is a global \"epidemic\" of tobacco use in developing countries in the 21st Century. OBJECTIVES: Analyze: the general characteristics of individuals spontaneously enrolled in an outpatient smoking cessation clinic; the overall effectiveness of the smoking cessation treatment and medication; the changes in the characteristics of participants before and after the Smoke-Free Environment Act in São Paulo and the levels of urinary cotinine in active and passive smokers and controls. CASES AND METHODS: A historical cohort study was conducted, of which the inclusion criterion was the registration in the outpatient smoking cessation Clinic in the HU USP, in the period from 2004 to 2011. Data were collected by consultation of standardized protocols and of the computerized service system. The results of cotinine and creatinine measurements performed on biological samples were analyzed. RESULTS: Among the 1736 patients treated, there was a predominance of women (62.1%), whites (75.3%) and individuals aged between 41 and 60 years (63.1%). Approximately 80% began smoking before age 20 and 75% showed moderate to severe degree of dependence. Among the 620 individuals monitored from 2009 on, 34.5% quit smoking. Among them, 21.5% obtained success up to the fourth contact with the clinic. The use of varenicline and nicotine replacement therapy (NRT) increased the probability of success (RRR= 2.73 and 2.78, respectively; p < 0.001 for both). The greater the number of meetings attended at the clinic, greater the probability of treatment success (p < 0.001). The analysis of urinary cotinine dosage showed urinary cotinine concentrations 18.7 times higher in the active smokers group, compared to the passive smokers group. CONCLUSION: The success of the smoking cessation clinic in the HU remained largely in accordance with most therapeutic success rates found in medical literature. Quitting smoking was strongly associated to the number of contacts of the smokers with the group and drug therapy. Urinary cotinine proved to be an accurate marker for active smoking

INTRODUÇÃO: O tabagismo é reconhecido, atualmente, como um dos maiores problemas de saúde em todo o mundo. Há uma \"epidemia\" global de uso de tabaco nos países em desenvolvimento, no século 21. OBJETIVOS: Analisar: as características gerais dos indivíduos matriculados espontaneamente em um ambulatório antitabágico; a eficácia geral do tratamento antitabágico e dos medicamentos; as mudanças nas características dos participantes antes e após a Lei Ambiente Fechado Livre do Cigarro em São Paulo e os níveis de cotinina urinária em fumantes ativos, passivos e controles. CASUÍSTICA E MÉTODOS: Foi realizado um estudo de coorte histórica cujo critério de inclusão foi a matrícula no ambulatório antitabágico do HU USP, no período de 2004 a 2011. Os dados foram coletados por meio de consulta a protocolos padronizados e ao sistema informatizado do serviço. Foram analisados os resultados de dosagens de cotinina e creatinina realizadas em amostras biológicas. RESULTADOS: Dentre os 1736 pacientes atendidos houve predomínio de mulheres (62,1%), brancos (75,3%) e indivíduos com idade entre 41 e 60 anos (63,1%). Aproximadamente 80% iniciaram o tabagismo antes dos 20 anos e 75% apresentaram grau de dependência moderado a grave. Dentre os 620 indivíduos acompanhados a partir de 2009, 34,5% abandonaram o tabagismo. Dentre eles, 21,5% obtiveram êxito até o quarto contato com o ambulatório. O uso de vareniclina e terapia de reposição de nicotina (TRN) aumentaram a probabilidade de sucesso (RRR= 2,73 e 2,78, respectivamente; p < 0,001 para ambas). Quanto maior o número de reuniões frequentadas no ambulatório, maior a probabilidade de sucesso terapêutico (p < 0,001). A análise da dosagem da cotinina urinária mostrou concentrações de cotinina urinária 18,7 vezes maior no grupo de tabagistas ativos comparados aos tabagistas passivos. CONCLUSÃO: O sucesso do ambulatório antitabágico do HU manteve-se em acordo com grande parte dos índices de sucesso terapêutico presentes na literatura médica. O abandono do hábito de fumar foi fortemente associado ao número de contatos dos fumantes com o grupo e a terapêutica medicamentosa. A cotinina urinária mostrou-se um bom marcador do tabagismo ativo / INTRODUCTION: Smoking is recognized today as one of the major health problems worldwide. There is a global \"epidemic\" of tobacco use in developing countries in the 21st Century. OBJECTIVES: Analyze: the general characteristics of individuals spontaneously enrolled in an outpatient smoking cessation clinic; the overall effectiveness of the smoking cessation treatment and medication; the changes in the characteristics of participants before and after the Smoke-Free Environment Act in São Paulo and the levels of urinary cotinine in active and passive smokers and controls. CASES AND METHODS: A historical cohort study was conducted, of which the inclusion criterion was the registration in the outpatient smoking cessation Clinic in the HU USP, in the period from 2004 to 2011. Data were collected by consultation of standardized protocols and of the computerized service system. The results of cotinine and creatinine measurements performed on biological samples were analyzed. RESULTS: Among the 1736 patients treated, there was a predominance of women (62.1%), whites (75.3%) and individuals aged between 41 and 60 years (63.1%). Approximately 80% began smoking before age 20 and 75% showed moderate to severe degree of dependence. Among the 620 individuals monitored from 2009 on, 34.5% quit smoking. Among them, 21.5% obtained success up to the fourth contact with the clinic. The use of varenicline and nicotine replacement therapy (NRT) increased the probability of success (RRR= 2.73 and 2.78, respectively; p < 0.001 for both). The greater the number of meetings attended at the clinic, greater the probability of treatment success (p < 0.001). The analysis of urinary cotinine dosage showed urinary cotinine concentrations 18.7 times higher in the active smokers group, compared to the passive smokers group. CONCLUSION: The success of the smoking cessation clinic in the HU remained largely in accordance with most therapeutic success rates found in medical literature. Quitting smoking was strongly associated to the number of contacts of the smokers with the group and drug therapy. Urinary cotinine proved to be an accurate marker for active smoking

Orientador: Maria José Hitomi Nagata / Coorientador: Valdir Gouveia Garcia / Coorientador: Letícia Helena Teodoro / Banca: Valdir Gouveia Garcia / Banca: Alvaro Francisco Bosco / Banca: Cláudio Aparecido Casatti / Banca: João Batista César Neto / Banca: Márcio Zaffalon Casati / Resumo: Este estudo avaliou histomorfometricamente, imunoistoquimicamente e pela reação em cadeia da polimerase via transcriptase reversa em tempo real (qRT-PCR) os efeitos da Terapia com Laser em Baixa Intensidade (LLLT) e da Terapia Fotodinâmica antimicrobiana (aPDT) adjuvantes ao tratamento mecânico da periodontite experimental (PE) em ratas com deficiência de estrógeno e sob influência sistêmica da nicotina. Foram utilizadas 360 ratas, divididas em 4 grupos: Grupo A (SH-vei) normais, Grupo B (SH-nic) - normais tratadas com nicotina, Grupo C (OVX-vei) - ovariectomizadas e Grupo D (OVX-nic) - ovariectomizadas tratadas com nicotina. A administração de nicotina foi iniciada nos animais do Grupo B (SH-nic) e Grupo D (OVX-nic) 30 dias antes da indução da PE. Os animais dos Grupos OVX-vei e OVX-nic foram submetidos à ovariectomia (OVX) bilateral 21 dias antes da PE realizada por adaptação de fio de algodão ao redor dos primeiros molares inferiores direitos e esquerdos. Após 7 dias, a ligadura foi removida e os animais subdivididos de acordo com os seguintes tratamentos locais realizados nos molares inferiores direitos e esquerdos: RAR - Raspagem e alisamento radicular e irrigação com soro fisiológico; LLLT - RAR e irrigação com soro fisiológico associada à LLLT; aPDT- irrigação com azul de toluidina-O (TBO) e após 1 minuto, irradiação com laser em baixa intensidade. Foram eutanasiados 10 animais de cada subgrupo, aos 7, 15 e 30 dias após o tratamento local. A perda óssea (PO) na furca foi avaliada por meio de análises histomorfométrica e imunoistoquímica. A expressão gênica das citocinas TNF-α, IL-1β e IL-6 foram avaliadas pela qRT-PCR. Os dados foram submetidos à análise estatística (α = 5%). Os animais do Grupo OVX-nic apresentaram maior PO comparativamente ao grupo SH-vei (p<0,05). O tratamento... / Abstract: This study evaluated histomorphometrically, immunohistochemically and by polymerase chain reaction via real-time reverse transcriptase (qRT-PCR) the effects of Laser Therapy in Low Intensity (LLLT) and antimicrobial Photodynamic Therapy (aPDT) adjuncts to mechanical treatment of periodontitis experimental (PE) in rats with estrogen deficiency and under the influence of systemic nicotine. It was used 360 rats divided into 4 groups: Group SH-veh: sham treated with saline (vehicle); Group SH-nic: sham treated with nicotine; Group OVX-veh: ovariectomized treated with saline (vehicle) and Group OVX-nic: ovariectomized treated with nicotine. Nicotine was administered to groups SH-nic and OVX-nic 30 days before the induction of PE. The animals in Groups OVX-veh and OVX-nic underwent ovariectomy (OVX) bilaterally 21 days before PE performed by adaptation of cotton thread around the first molars right and left. After 7 days, the ligature was removed and the animals divided according to the following local treatments performed in the right and left molars: RAR - Scaling and root planing and irrigation with saline; LLLT - RAR and irrigation with saline associated with LLLT; aPDT - irrigation with toluidine blue O (TBO) and after 1 minute irradiation with LLLT. Ten animals were euthanized of each group at 7, 15 and 30 days after treatment site. Bone loss (BL) in the furcation was evaluated by histomorphometric and immunohistochemical analyzes. The gene expression of TNF-α, IL-1β and IL-6 were measured by qRT-PCR. Data were subjected to statistical analysis (α = 5%). The animals of the OVX-nic group showed higher BL group compared with SH-vei (p <0,05). Local treatment with aPDT showed BL reduced, decreased expression of RANKL and the number of TRAP-positive cells and increased the expression of OPG and the number... / Doutor

O tabagismo durante a gravidez é o principal fator de risco previsível associado com complicações tanto no parto quanto na gestação. Estão relacionados, por exemplo, partos prematuros, baixo peso ao nascer, doenças no trato respiratório do feto e, com a morte infantil. A exposição à fumaça do tabaco pode ser avaliada através da presença de nicotina e cotinina nos fluidos biológicos, incluindo plasma, soro, urina, saliva, cabelo e unha. A saliva é uma matriz alternativa que apresenta como vantagens a facilidade de obtenção, não é uma amostra invasiva, a coleta pode ser assistida, é de baixo custo, o risco de contração de infecções durante a coleta e manuseio da amostra é mínimo e pode ser utilizada em situações que é difícil a obtenção de outro tipo de amostra. Como a prevalência de gestantes fumantes de cigarro é relativamente alta, é importante uma confirmação por um laboratório de análise para classificar de forma correta e confiável se a gestante é fumante ou não. O objetivo desta pesquisa foi desenvolver e validar um método para análise de nicotina e cotinina em amostras de saliva de gestantes. Foi utilizada a extração líquido-líquido para o preparo das amostras de saliva e foi realizada a cromatografia em fase gasosa com detector termiônico específico para a separação, identificação e quantificação dos analitos nicotina, cotinina e do padrão interno ketamina. O limite de detecção foi de 10 ng/mL para nicotina e de 6 ng/mL para cotinina. Os limites inferiores de quantificação foram de 40 ng/mL e 20 ng/mL para a nicotina e cotinina, respectivamente. O método foi considerado linear na faixa de concentração de 40 a 2000 ng/mL (R=0,996) para a nicotina e de 20 a 2000 ng/mL (R=0,999) para a cotinina. Os valores de recuperação dos analitos variaram de 66,1% a 92,2%. A precisão intradia apresentou uma variação de 6,06% a 11,50% e a precisão interdia variou de 6,89% a 10,57%. A exatidão intradia variou de -11,29% a 19,81%, e os valores da exatidão interdia variaram de -11,78% a 13,08%. Ambos os analitos apresentaram estabilidade nas amostras biológicas e em solução. Na primeira avaliação (período gestacional de 1 a 25 semanas), o método foi aplicado em 259 amostras de saliva de gestantes fumantes e não fumantes. E na segunda (período gestacional de 36 a 40 semanas e até 113 dias após o parto), foi aplicado em 45 amostras de gestantes fumantes. Foi observada uma diferença significativa ao comparar o autorrelato das gestantes fumantes e não fumantes, na primeira avaliação, com a concentração de nicotina e cotinina nas amostras de saliva (p<0,001). As concentrações de cotinina em amostras de saliva correlacionaram positivamente com o número de cigarros consumidos diariamente pelas gestantes fumantes, na primeira avaliação (p<0,001). Não foram obtidas diferenças estaticamente significativas para as variáveis: número de cigarros diários (p=0,255), concentração de nicotina (p=0,949) e cotinina (p=0,665). O ponto de corte da nicotina foi maior que zero, com sensibilidade de 36,8% e especificidade de 97,7%. Para a cotinina, o ponto de corte foi maior que 17,2 ng/mL, com sensibilidade de 94,3% e especificidade de 98,8%. O método analítico desenvolvido e validado atendeu aos critérios exigidos pela resolução 27/2012 e à 899/2003 da Agência Nacional de Vigilância Sanitária. / Smoking during pregnancy is the main factor associated with complications in both and gestation. It is related, for example, premature births, low birth weight, diseases in the respiratory tract of the fetus and, with child death. Exposure to tobacco smoke can be assessed by the presence of nicotine and cotinine in biological fluids including plasma, serum, urine, saliva, hair and nails. The saliva is an alternative matrix that presents as advantages the ease of obtaining, is not an invasive sample, the collection can be assisted, it is of low cost, the risk of contraction of infections during the collection and handling of the sample is minimal and can be used in situations where it is difficult to obtain another type of sample. As the prevalence of pregnant cigarette smokers is relatively high, confirmation by an analysis laboratory is important to correctly and reliably classify whether the pregnant woman is a smoker or not. The objective of this research was to develop and validate a method for the analysis of nicotine and cotinine in saliva samples from pregnant women. Liquid-liquid extraction was used for the preparation of saliva samples and gas chromatography with specific thermionic detector was performed for the separation, identification and quantification of the analytes nicotine, cotinine and the internal standard ketamine. The limit of detection was 10 ng/mL for nicotine and 6 ng/mL for cotinine. The lower limits of quantification were 40 ng/mL and 20 ng/mL for nicotine and cotinine, respectively. The method was considered linear in the concentration range of 40 to 2000 ng/mL (R=0.996) for nicotine and 20-2000 ng/mL (R=0.999) for cotinine. The recovery values of the analytes range from 66.1% to 92.2%. The intraday precision ranged from 6.06% to 11.50% and the interday precision ranged from 6.89% to 10.57%. The intraday accuracy ranged from -11.29% to 19.81%, and the interday accuracy ranged from -11.78% to 13.08%. Both analytes presented stability in the biological samples and in solution. At the first evaluation (gestational period of 1 to 25 weeks), the method was applied to 259 saliva samples from pregnant smokers and nonsmokers. And in the second (gestational period of 36 to 40 weeks and up to 113 days postpartum), it was applied in 45 samples of pregnant smokers. A significant difference was observed when comparing the self-report of pregnant smokers and nonsmokers in the first evaluation with the concentration of nicotine and cotinine in saliva samples (p<0.001). The concentrations of cotinine in saliva samples correlated positively with the number of cigarettes consumed daily by pregnant smokers in the first evaluation (p<0.001). No statistically significant differences were found for the variables: number of daily cigarettes (p=0.255), nicotine concentration (p=0.949) and cotinine (p=0.665). The cutoff point of nicotine was greater than zero, with sensitivity of 36.8% and specificity of 97.7%. For cotinine, the cutoff point was greater than 17.2 ng/mL, with sensitivity of 94.3% and specificity of 98.8%. The analytical method developed and validated met the criteria required by resolution 27/2012 and 899/2003 of the National Sanitary Surveillance Agency.

O mecônio é uma matéria fecal que começa a acumular no intestino do feto por volta do terceiro mês de gestação e normalmente é eliminado nos primeiros dias de vida do recém nascido. No mecônio ocorre o acúmulo de substâncias com as quais a mãe entrou em contato durante o período de gestação e, portanto, sendo possível avaliar a exposição fetal. Nos casos de mães fumantes, compostos presentes no tabaco tais como nicotina e substâncias que são formadas após a metabolização da nicotina como por exemplo a cotinina, podem ser também detectadas nas amostras de mecônio, já que ocorre o acúmulo de nicotina e seus metabólitos no mesmo. O uso do cigarro durante o período gestacional acarreta em uma série de problemas ao feto como baixo peso ao nascer, parto pré-maturo, doenças no trato respiratório, dentre outros. Nos dias atuais é possível fazer a pesquisa de drogas lícitas e ilícitas em várias amostras biológicas tais como, sangue, urina, cabelo, fluido oral, mecônio, entre outras. O mecônio é uma boa opção, por vários motivos: amostragem fácil e não invasiva (a coleta pode ser feita na fralda), indica o histórico do uso de substâncias pela mãe durante a gestação por ser cumulativo, etc. O objetivo foi desenvolver e validar um método analítico empregando cromatografia em fase gasosa acoplada a espectrometria de massas para a determinação de nicotina e, seu metabólito, cotinina em amostras de mecônio coletadas de recém nascidos. Para o desenvolvimento do método foi utilizado 0,5g de mecônio e os analitos foram extraídos com metanol e em seguida a amostra foi submetida a purificação através da extração em fase sólida utilizando cartuchos Bond Elut Certify I. O método foi validado de acordo com os parâmetros estabelecidos pela ANVISA e demonstrou linearidade de 160 1600 ng/g para nicotina e de 160 1000 ng/g para cotinina. Os limites de detecção estabelecidos foram de 10 ng/g para nicotina e 60 ng/g para cotinina, enquanto os limites de quantificação foram de 60 ng/g para nicotina e 100 ng/g para cotinina. A exatidão apresentou valores de 91,73% a 103,73%, a precisão intra-ensaio variou entre 3,21% a 10,86%, e a precisão inter-ensaio obteve valores entre 4,91% a 9,88%. O método validado foi aplicado em amostras de mecônio coletadas no Hospital das Clínicas da Faculdade de Medicina de Ribeirão Preto (HCFMRP-USP). / Meconium is a fecal matter passed by the newborn after birth. It begins to form around the 3th month of gestation and accumulates in the fetus until birth. Substances which the mothers had contact during the gestation period may accumulate in meconium and, therefore, its possible to assess fetal exposure. Substances from the tobacco smoke, like nicotine and its metabolite cotinine, also accumulates in the meconium and can be detected .Maternal smoking during pregnancy is hazardous to the fetus and it is associated with low birth weight, prematurity, respiratory tract infections and others. Nowadays it is possible to assess licit and illicit drugs in several biological samples like blood, urine, hair, oral fluid, meconium and others. Meconium is the best choice because its easy to collect and its noninvasive, indicates a history of substances use by the mother in the latter half of pregnancy, etc. The purpose of this study was to develop and validate a methodology using gas chromatography-mass spectrometry to assess nicotine and cotinine in meconium samples collected from newborns. To the development of the methodology 0,5g of meconium was used per assay and the analytes were extracted from the matrix using methanol. Then, a solid phase extraction was applied using Bond Elut Certify I cartridges. The methodology was validated in the range of 160 1600 ng/g for nicotine and 160 - 1000 ng/g for cotinine. The limit of detection established was 10 ng/g for nicotine and 60 ng/g for cotinine, while the limit of quantification was 60 ng/g for nicotine and 100 ng/g for cotinine. The accuracy showed values between 91,73% and 103,73%, the intra-assay precision between 3,21% and 10,86% and the inter-assay precision between 4,91% and 9,88%. The validated methodology was applied to analysis of meconium samples collected from newborns in the Hospital das Clínicas da Faculdade de Medicina de Ribeirão Preto (HCFMRP-USP).

O desenvolvimento encefálico representa um período de grande vulnerabilidade. Embora diversos trabalhos mostrem que a exposição ao fumo passivo pode levar ao desenvolvimento de sintomas psicocomportamentais da farmacodependência, ainda não está claro se a exposição à poluição tabagística ambiental (PTA) na fase inicial de formação do SNC pode levar à predisposição ao uso de drogas de abuso na adolescência. Assim, o foco deste estudo foi avaliar se a exposição à PTA no início do período pós-natal (P) contribui para a sensibilização comportamental e efeitos recompensadores ao etanol e à cocaína durante a adolescência. Camundongos machos Swiss-Webster foram expostos do 3º (P3) ao 15º (P15) dia de vida pós-natal, duas vezes por dia, à mistura da fumaça central e lateral de cigarros referência (3R4F). Na adolescência (P34-P45), foram avaliados os efeitos do tratamento repetido de etanol e cocaína (primeiro protocolo) como também o efeito do tratamento agudo com cocaína (segundo protocolo). No primeiro protocolo os animais foram desafiados com cocaína (i.p) ou etanol (i.p), para a avaliação da sensibilização comportamental (P34-P35) (n=6) e da preferência condicionada por lugar (CPP) (P36-P45) (n=6). A quantificação por Western Blotting (n=6) das proteínas marcadoras de plasticidade, como os receptores dopaminérgicos D1R e D2R, c-Fos, FRA1 e Rac1, no estriado e no córtex pré-frontal (CPF) foi realizada imediatamente após o dia do teste da CPP no P45. Já para o segundo protocolo, os animais foram desafiados com cocaína (i.p) para a avaliação da sensibilização comportamental (P34-P35) (n=12), da CPP (n=10) e a quantificação dos mesmos marcadores bioquímicos (n=6) além da dinorfina-A, nas mesmas estruturas encefálicas que no primeiro protocolo. Essas análises foram realizadas duas horas após a expressão da sensibilização comportamental (P36). O primeiro protocolo avaliou a exposição repetida ao etanol e a cocaína na adolescência na predisposição à dependência enquanto o segundo se a exposição aguda a cocaína seria capaz de levar ao mesmo efeito. No primeiro protocolo observamos sensibilização cruzada pela PTA e quanto ao teste da CPP não foi observada diferença estatística nem para o tratamento com etanol, nem para o com cocaína. Nossos resultados indicam que houve efeito estimulatório nos grupos tratados com cocaína no segundo protocolo deste estudo, representado pelo aumento da atividade locomotora após administração da droga. Por outro lado, não observamos sensibilização cruzada pela PTA, a qual foi obtida no primeiro protocolo. Já para o segundo protocolo, foi observado o condicionamento pela cocaína. Com relação à quantificação das proteínas, nosso estudo mostrou diminuição na concentração de receptores DR1 no estriado no grupo exposto à PTA e tratado com etanol em relação ao grupo controle tratado com etanol no primeiro protocolo deste estudo e sugerem que a exposição repetida ao etanol é capaz de induzir alterações nos receptores de dopamina. No segundo protocolo deste estudo observamos aumento de c-Fos no estriado e no CPF no grupo tratado com cocaína em relação ao seu controle e que a exposição aguda à cocaína é capaz de induzir aumento da dinorfina no CPF, enquanto à exposição prévia à PTA previne este aumento. Vale ressaltar que esse trabalho é inovador uma vez que avaliamos a exposição à PTA na infância e se esta poderia levar a sensibilização cruzada com a cocaína e à alterações em vias envolvidas nesse comportamento na adolescência. Em conjunto, nossos resultados sugerem que a exposição à fumaça do cigarro, mesmo gerando baixas concentrações plasmáticas de nicotina e cotinina, foi capaz de produzir alterações na expressão da sensibilização comportamental, na CPP e alterações bioquímicas, tanto no tratamento repetido de etanol e cocaína quanto na vigência da cocaína. / The brain development represents a very vulnerable period. Although multiples studies showed that exposure to secondhand smoke during the early post-natal period induces impairment in cognitive functions and predisposition to substance dependence psychobehavioral symptoms in adolescents, there is no definitive evidences that exposure to the environmental tobacco smoke (ETS) can lead to the use of drugs of abuse. We aimed to evaluate if the exposure to ETS in the early postnatal period (P) can contribute to the behavioral sensitization and rewarding effects of ethanol and cocaine during adolescence. Using reference cigarettes (3R4F), Swiss-Webster male mice were exposed from the 3rd (P3) to 15th (P15) day of age, twice a day, to the mixture of the cigarettes\' sidestream and mainstream. In adolescence (P34-P45), we evaluated the effects of repeated treatment with ethanol or cocaine (first protocol) and also the effect of acute treatment with cocaine (second protocol). On first protocol, animals were then challenged with cocaine or ethanol to evaluate evidence of behavioral sensitization (P34-P35) (n=6) and conditioned place preference (CPP) (P36-P45) (n=6). Based on Western Blotting analysis, we also quantified proteins markers of plasticity immediately after the day of CPP test (P45), in the prefrontal cortex (PFC) and striatum (dopamine receptors D1R and D2R, c-Fos, FRA1 and Rac1). On second protocol, animals were challenged with cocaine to evaluate evidence of behavioral sensitization (P34-P35) (n=12) and CPP (P36-P45) (n=10). Quantification of those markers of plasticity (n=6), plus dynorphin-A was evaluated two hours after the day of behavioral sensitization expression in P36 in PFC and striatum. The first protocol evaluated the repeated exposure to ethanol and cocaine during adolescence in the predisposition to addiction while the second protocol using acute exposure to cocaine would be able to lead to the same effect. In the first protocol we observed cross-sensitization by ETS and for CPP test, no significant difference for the treatment with ethanol and cocaine were observed. Our results indicated a stimulatory effect in animals challenged with cocaine on second protocol, represented by the increase in locomotors activity after drug administration. On the other hand, we found no cross-sensitization by ETS, which was obtained in the first protocol. As for the second protocol, it was possible to observe the conditioning for cocaine. Regarding our Western Blotting assays, we observed that the group exposed to ETS and challenged with ethanol had decreased D1R in the first protocol of this study. These results suggest that repeated exposure to ethanol could induce changes in dopamine receptors. In the second protocol was an increase of c-Fos in the striatum and the PFC compared to control and that acute exposure to cocaine can induce increase of dynoprhin-A while the prior exposure to ETS prevents this increase on PFC. It is noteworthy that this present study is innovative since it evaluated the exposure to ETS in childhood and this could lead to cross-sensitization with cocaine and changes in pathways involved in this behavior in adolescence. Taken together, our results suggest that exposure to ETS, even findings low levels of nicotine and cotinine plasmatic was able to produce changes in the expression of behavioral sensitization in the CPP and biochemical changes in both the repeated treatment of ethanol and cocaine as in the acute treatment of cocaine.

O cigarro é considerado pela Organização Mundial de Saúde como o maior agente de poluição ambiental doméstica atualmente. Muitos estudos têm analisado os efeitos do tabagismo passivo em seres humanos, mas pouco tem sido estudado em animais domésticos, assim como crianças, são os mais afetados pelo tabagismo passivo. O presente estudo busca correlacionar o exposição ao fumo passivo com a incidência de mutagênese através do teste da presença de micronúcleos nas células epiteliais da mucosa oral de cães expostos. Paralelamente, foi estudada a possível correlação desde dado com o nível de dependência à nicotina do proprietário, avaliada pelo teste de Fagerstrom. Para a avaliação da mutagênese, esfregaços da mucosa oral foram colhidos de 48 cães, 23 fumantes passivos e 25 não expostos. O número de micronúcleos por celula foi avaliado em todas as amostras. Os dados mostram que a incidência de micronúcleos foi estatisticamente maior nos animais fumantes passivos comparado com o controle (p < 0,001). Além disso, nos animais dos proprietários com escore 8 (dependência de nicotina muito alta) no Teste de Fagerstrom, a quantidade de micronúcleos foi significativamente maior do que nos animais de proprietários com escore 6 (alta dependência). Da mesma forma, nos cães de proprietários com escore 6 a incidência de micronúcleos foi estatisticamente maior que nos cães de proprietários com escore 3. Concluiu-se que existe uma associação entre a dependência da nicotina do proprietário e a frequência de alterações citogenéticas no cão exposto ao fumo passivo. Além das implicações para a saúde do animal, as observações do presente estudo podem contribuir para um estímulo à cessação do tabagismo em proprietários de animais domésticos / Cigarette smoking is considered by WHO as the major domestic air pollution agent. Many studies have addressed passive smoking and human beings but little has been studied about domestic animals. Domestic animals as well as children are dramatically affected by passive smoking. The present work tries to correlate passive smoking and micronucleus incidence in oral mucosa smears of pet dogs. In addition we studied a possible correlation between micronucleus incidence and owner´s nicotine dependence. With this purpose, owners were submitted to Fagerström questionnaire to address nicotine dependence. In the same way, oral mucosa smears were collected from 48 animals, 23 passive smokers and 25 not exposed to passive smoking. Micronucleus counts were performed in all samples at light microscopy. We observed a statistically significant difference (p < 0,001) between the two groups with an increased incidence of micronucleus formation in the passive smokers group compared to controls. Moreover, in the animals whose owners were at score 8 (very high nicotine dependence) on the Fagerstrom Test, the number of micronuclei was significantly higher than in animals with owners of score 6 (high dependency). Likewise, in dogs whose owners had a score 6 the incidence of micronuclei was statistically higher than in dogs whose owners had a score 3. It was concluded that there is an association between nicotine dependence of owners and frequency of cytogenetic alterations in dogs exposed to secondhand smoke. Besides ambient health impacts, the observations of the present study may contribute in helping dog owners quit smoking

O presente trabalho teve como objetivo sintetizar, caracterizar e avaliar o desempenho de um polímero de impressão molecular magnético (MMIP – magnetic molecularly imprinted polymers) na extração seletiva de nicotina e cotinina em amostras de urina, com posterior análise por cromatografia gasosa acoplada à espectrometria de massas (GC-MS). Para tal, nanopartículas de Fe3O4 foram preparadas pelo método de co-precipitação com posterior modificação da sua superfície por silanização, que envolve a estabilização com tetraetilortosilicato (TEOS) seguida da funcionalização com 3-​(Trimethoxysilyl)​propyl methacrylate (MPS). O MIP foi sintetizado sobre as nanopartículas magnéticas pelo método de polimerização por precipitação, empregando-se nicotina, ácido metacrílico, etileno glicol dimetacrilato, ácido 4,4’-azobis(4-cianovalérico), e acetonitrila como molécula modelo, monômero funcional, agente de ligação cruzada, iniciador radicalar e solvente de síntese, respectivamente. As partículas sintetizadas foram caracterizadas por Microscopia Eletrônica de Varredura – MEV, Microscopia de Força Atômica – AFM, Espectroscopia no Infravermelho por Transformada de Fourier - FT-IR, Espectrometria de Energia Dispersiva de Raios-X - EDS e Análise Termogravimétrica – TGA. O MMIP foi empregado na extração em fase sólida dispersiva de nicotina e cotinina em urina, empregando-se um imã externo para separar as partículas da amostra. O extrato foi analisado por GC-MS, operado no modo SIM e as relações m/z monitoradas foram 84, 133 e 162 para a nicotina e 98, 147 e 176 para a cotinina. A faixa analítica foi de 0,1 a 3,0 mg L-1 (r >0,99), com limite de quantificação (LQ) de 0,1 mg L-1 para ambos analitos. As precisões intra e interdia (na forma de desvio padrão relativo) foram menores que 20 % para o LQ e menores que 15% para os demais pontos; e as exatidões intra e inter dia (na forma de erro relativo) ficaram compreendidas entre ± 9%. O método foi empregado na análise de nicotina e cotinina em quatro amostras de urina de fumantes. Os valores obtidos para cotinina encontram-se na faixa de 0,19 a 0,28 mg L-1, enquanto que a nicotina foi detectada em concentrações menores que o LQ. Assim, o método mostrou-se adequado para monitorização da exposição ao tabaco, já que a cotinina é o bioindicador mais indicado para esta finalidade. / In this study, a magnetic molecularly imprinted polymer (MMIP) was synthesized, characterized and used in the selective extraction of nicotine and cotinine from urine samples followed by gas chromatography-mass spectrometry (GC-MS) analysis. Fe3O4 nanoparticles were prepared by the co-precipitation method using FeCl3.6H2O, FeCl2.4H2O and ammonia. After, the particles were silanized/stabilized with tetraethyl orthosilicate (TEOS), and functionalized with 3-(trimethoxysilyl) propyl methacrylate (MPS). The MIP has been prepared on the magnetic nanoparticles by the precipitation polymerization method, using nicotine, methacrylic acid, ethylene glycol dimethacrylate, 4,4′-Azobis(4-cyanovaleric acid) and acetonitrile as template, functional monomer, cross-linker, initiator and solvent, respectively. The materials were characterized by scanning electron microscopy, atomic force microscopy, Fourier transform infrared spectroscopy, energy dispersive X-ray spectrometry and thermogravimetry. All the characterization results confirmed the nature of the Fe3O4 nanoparticles, as well as their subsequent treatments with TEOS, MPS and the MIP synthesis. The particles were used to extract nicotine and cotinine from urine samples in a dispersive solid phase extraction procedure employing an external magnet to separate the particles from the sample. The extracts were analyzed by GC-MS. Selective ion monitoring (SIM) mode was used and three ions in a group at m/z 162, 84, 133, and m/z 176, 147, 98 were used to monitor nicotine and cotinine, respectively. The analytical range was 0.1 to 3.0 mg L-1 (r > 0.99), with a limit of quantitation (LOQ) of 0.1 mg L-1 for both analytes. The intra- and interday precision (as RSD) were less than 20% for the LOQ and less than 15% for other points; and intra- and inter day accuracies (as relative error) were within ± 9%. The method was employed to analyze nicotine and cotinine in four smokers' urine samples. The cotinine concentrations ranged from 0.19 to 0.28 mg L-1, whereas the nicotine was detected in concentrations lower than LOQ. Thus, the method was suitable for tobacco exposure monitoring, once the cotinine can be considered the most suitable biomarker for this purpose. / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior - CAPES

Os polímeros de impressão molecular (MIPs) são materiais com capacidade de estabelecer interações seletivas com uma molécula que foi previamente adicionada durante a etapa de síntese, denominada molécula molde. A molécula molde pode ser, por exemplo, um fármaco, que é removido da matriz polimérica após a síntese. Apesar disto, o MIP ainda possui a capacidade de estabelecer interações de natureza seletiva com a molécula molde. Devido à estas interações seletivas, estes polímeros têm sido amplamente aplicados na área analítica, e também vêm sendo considerada sua aplicação como sistema de liberação prolongada/sustentada de fármacos. Os sistemas de liberação prolongada de fármacos apresentam vantagens como a redução de picos plasmáticos associados a efeitos adversos, contribuindo para o desenvolvimento de melhores alternativas clínicas para a administração de fármacos. Neste trabalho, foram selecionados dois fármacos de caráter básico contendo grupamentos amina terciária para proposição de sistemas de liberação prolongada baseados em partículas de MIPs: a nicotina, molécula hidrofílica indicada na terapia de abandono do fumo; e a donepezila, molécula lipofílica indicada no tratamento da doença de Alzheimer. Partículas poliméricas de MIPs foram sintetizadas pela técnica de polimerização por precipitação e os materiais poliméricos foram caracterizados usando diferentes técnicas como espectroscopia no infravermelho, microscopia eletrônica de varredura e microscopia de força atômica. Estudos de isoterma de adsorção indicaram a heterogeneidade dos sítios de ligação, com melhor ajuste ao modelo não linear de Langmuir-Freundlich. As formulações para administração por diferentes vias (oral ou transdérmica) foram delineadas a partir da dispersão das partículas poliméricas em veículos apropriados para uso farmacêutico, sobretudo, veículos lipídicos, como o óleo mineral e o ácido oleico. O fármaco foi previamente solubilizado nos veículos oleosos para assegurar maiores interações do tipo fármaco-polímero. As formulações transdérmicas para liberação de nicotina baseadas em MIPs permitiram prolongar a liberação in vitro do fármaco conforme o modelo cinético de Higuchi, caracterizando a difusão do fármaco a partir da matriz polimérica. Estudos de permeação cutânea in vitro usando pele de orelha de porcos foram realizados para avaliar as formulações transdérmicas, demonstrando que até 48 horas, a permeação cutânea da nicotina foi prolongada seguindo uma cinética de ordem zero. Foi possível demonstrar que a velocidade de permeação cutânea da nicotina a partir das formulações baseadas em MIPs (razão fármaco/polímero 1:3) foi menor do que nas formulações baseadas em polímeros não impressos (NIPs), provavelmente devido ao reconhecimento seletivo da nicotina nas partículas de MIPs. A cinética de liberação da donepezila a partir dos sistemas baseados em MIPs também foi melhor ajustada ao modelo de Higuchi, sendo que os MIPs apresentaram melhor efeito em prolongar a liberação do fármaco do que os NIPs, independente da razão fármaco:polímero. Deste modo, sistemas inovadores para liberação prolongada de fármacos baseados em MIPs, considerando diferentes vias de administração, foram apropriadamente desenvolvidos e avaliados. / Molecularly imprinted polymers (MIPs) are synthetic polymers that have the property to establish selective interactions with a compound called template e.g. a drug. The template is added in the synthesis step. After the synthesis, the template is removed. However, the property to establish selective interactions remain among MIPs and template. MIPs have been applied in the analytical field due to their selective interactions. The application of these materials as sustained release drug delivery systems has also been evaluated. Sustained release drug delivery systems may offer advantages, avoiding the high plasmatic peak concentrations of drugs related to their side effects. These drug delivery systems may also contribute to develop better clinical strategies to administration of drugs in the clinical practice. In this study, we select basic compounds with tertiary amine moieties to propose sustained release drug delivery systems based on MIPs. The selected drugs were nicotine (hydrophilic drug administered as an aid to smoking cessation therapy) and donepezil (lipophilic drug administered in the treatment of the Alzheimer’s disease). Polymer particles of MIPs were synthetized by precipitation polymerization and characterized by different techniques as infrared spectroscopy, scanning electron microscopy, and atomic force microscopy. Adsorption isotherms studies indicated the heterogeneity of the binding sites with the better adjust to Langmuir-Freundlich model. The formulations were designed to administration by different pathways (transdermal or oral), and they were prepared from the dispersion of polymer particles in an oil vehicle as oleic acid and mineral oil. The drug was previously incorporated in the oil vehicle. Nicotine was administered by transdermal formulations based on MIPs using mineral oil as vehicle, and the results indicated that drug release was controlled according to Higuchi kinetic model, characterising the drug diffusion from the polymer matrix. Permeation studies were carried out using porcine ear skin, and the results demonstrated that the permeation of nicotine was prolonged up to 48 h according to zero order kinetic. The nicotine transdermal formulations based on MIPs showed a better effect in the control of drug permeation across the skin in relationship to the non-imprinted ones (NIPs) only when the amount of nicotine in the formulations was increased, with a drug/polymer ratio of 1:3. The donepezil release from the formulations based on MIPs using oleic acid as vehicle was better adjusted to Higuchi kinetic model, and the release rate of MIPs was smaller than NIPs, independent of the drug/polymer ratio. In this way, novel sustained release drug delivery systems based on MIPs were successfully developed and characterised for drug administration by different pathways. / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior - CAPES

O tabagismo é um problema de saúde pública em todo o mundo. Entre as mulheres, devido ao aumento da prevalência comparada aos homens, o tabagismo feminino tem merecido atenção. Para o enfrentamento, é necessário entender o fenômeno e criar estratégias mais adequadas que incluam aspectos emocionais e sociais da dependência do tabagismo. Este estudo buscou descrever os esquemas cognitivos, sintomas de ansiedade e depressão de 112 mulheres que procuraram tratamento para cessação do tabagismo e sua relação com o insucesso do tratamento. A coleta de dados incluiu roteiro de entrevista estruturada e escalas validadas para a população brasileira que têm o objetivo de avaliar os esquemas cognitivos, sintomas de ansiedade e de depressão, e aspectos da dependência do cigarro. O conhecimento de fatores emocionais envolvidos no tabagismo e sua cessação podem ser úteis às ações de apoio à mudança comportamental do fumante. Objetivo: Descrever o perfil psicológico de mulheres que buscam cessação do tabagismo quanto aos esquemas cognitivos, sintomas de ansiedade e depressão antes e depois do tratamento com Terapia Cognitivo- Comportamental em grupo, e analisar fatores que contribuem para o desfecho de cessação. O desenho do estudo foi longitudinal e transversal. Para avaliar os esquemas cognitivos, o Questionário de Esquemas de Young em sua forma curta foi utilizado. Os grupos de terapia cognitivo-comportamental foram realizados concomitantes ao cuidado usual por médicos do estudo. Esses profissionais foram treinados no protocolo do estudo e o seguimento foi realizado por telefone por um membro do estudo independente e cego. Resultados: Os resultados forneceram evidências de que esquemas cognitivos tiveram relação significativa com os sintomas de depressão e ansiedade, com a adesão e os resultados do tratamento (cessação do tabagismo) / Cigarette smoking is a major public health problem worldwide. Among women, due to increased prevalence compared to men, the female smoking has deserved attention. To face, it is necessary to understand the phenomenon and create more appropriate strategies that include emotional and social aspects of smoking dependence. This study aimed to describe the cognitive schemes, symptoms of anxiety and depression of 112 women who sought treatment for smoking cessation and its relationship to treatment failure. Data collection included structured interview and validated scales for the Brazilian population who have to evaluate the cognitive schemes, symptoms of anxiety and depression and aspects of tobacco dependence. Knowledge of emotional factors involved in smoking and its cessation may be helpful to actions to support behavioral change of the smoker. Objective: To describe the psychological profile of women seeking smoking cessation regarding cognitive schemes, symptoms of anxiety and depression before and after treatment with cognitive-behavioral therapy in groups and analyze factors that contribute to the outcome of cessation . Method: The layout of the study was longitudinal and transversal. To assess the cognitive schemes, the Young Schema Questionnaire in its short form was used. The Cognitive Behavioral Therapy groups were conducted at the same time as the medical care and were applied by psychologists and medical doctors. These professionals were trained in the study protocol and the follow-up was conducted by telephone by the same independent and blind evaluator. Results: Our results provided evidence that the cognitive schemas of those women who sought treatment for quitting smoking showed a significant relation to the symptoms of depression and anxiety, with the adherence and the results of the treatment (quitting smoking), and with the positive impact of Cognitive Behavioral Therapy in decreasing schemas scores. It was also evident that the overall time throughout which the individual had smoked correlated to smaller rates of being able to quit smoking