Orientador: Rinaldo Poncio Mendes / Coorientador: Maria Sueli Parreira de Arruda / Banca: Eiko Nakagawa Itano / Banca: Ionice Felipe / Resumo: A paracoccidioidomicose (PCM) é uma doença infecciosa causada por espécies do gênero Paracoccidioides, um patógeno intracelular cujo controle depende de uma resposta imune celular efetiva por parte do hospedeiro. Neste contexto, o ambiente peritoneal emerge como um possível local para a imunoterapia, uma vez que os fagócitos peritoneais apresentam plasticidade de funções biológicas que vão de indução/regulação da inflamação, angiogenese e processos de remodelação tecidual à migração para tecidos inflamados e infectados. Recentemente, foi relatado que células peritoneais estimuladas com Concanavalina-A (Con- A) exibem um aumento da ativação de células peritoneais, caracterizada por uma elevada atividade fagocítica, aumento da produção de TNF-α e expressão do receptor de manose. Assim, este estudo teve como objetivo identificar uma possível ação da Con-A sobre a migração de células e perfil de resposta imune por fagócitos peritoneais em modelo murino de paracoccidioidomicose pulmonar. Para tanto, foram utilizados camundongos BALB/c naive ou infectados por via intratraqueal com o fungo. Para avaliação da migração de fagócitos peritoneais foi utilizado o corante vital fluorescente PKH26 PCL. O tratamento com Con-A foi realizado por via intraperitoneal, as doses foram administradas com um intervalo de quatro dias (pico da ativivação macrofágica) e os fagócitos peritoneais foram analisados in vitro quanto à produção de IL-6, IL-10, TNF-α, MCP-1, IFN-γ e IL -12p70 e espécies reativas de oxigênio e nitrogênio. Os resultados demostraram que o tratamento com três doses de Con-A em animais não infectados induziu a migração de células peritoneais para o pulmão e, ainda, um perfil de resposta pró-Th1 por essas células. Além disso, o tratamento com três doses de Con-A induziu, o desenvolvimento de resposta imune protetora por fagócitos peritoneais de camundongos BALB/c infectados com... / Abstract: The paracoccidioidomycosis (PCM) is an infectious disease caused by species of the genus Paracoccidioides, an intracellular pathogen that depends on an effective and protective specific-host cellular immune response. In this context, the peritoneal environment emerges as a possible site for immunotherapy, since phagocytes exhibit plastic biological functions related to induce/regulate inflammation, angiogenesis and tissue remodeling processes as well as to migrate to inflamed and infected tissue. Recently, it was reported that peritoneal cells stimulated with Concanavalin A (Con-A) show an increased cell activation characterized by high phagocytic activity, increased production of TNF-α and expression of mannose receptor. Thus, this study aimed to identify a possible action of Con-A in the peritoneal cavity, specifically the migration of peritoneal phagocytes and the profile of the response by peritoneal phagocytes in a murine model of pulmonary paracoccidioidomycosis. To this, BALB/c mice were used, infected intratracheally with the fungus or no. Assessment of migration of peritoneal phagocytes was by vital dye PKH26. The treatment with Con-A was by intraperitoneal route, the doses were given with an interval of four days (peak of macrophage activity) and the peritoneal phagocytes were analyzed in vitro for production of IL-6, IL-10, TNF-α, MCP-1, IFN-γ e IL -12p70 and reactive oxygen species by. Our findings showed that the treatment with three doses of Con-A in no-infected mice induces migration of peritoneal cells to the lung and also a pro-Th1 profile by peritoneal phagocytes. Furthermore, the treatment with three doses of Con-A lead a protective immune response in mice infected with P. brasiliensis, characterized by increased production of H2O2 in the presence or absence of P. brasiliensis antigens and in the production of IFN-γ and NO in the presence of fungal antigen. Despite of these findings, no changes were observed in the ... / Mestre

Orientador: Maria José Soares Mendes Giannini / Banca: Janaina de Cassia Orlandi Sardi / Banca: Gil Benard / Resumo: A interação fungo-hospedeiro resulta em um processo complexo cujo conhecimento permite melhor entendimento da patogênese das micoses sistêmicas. Espécies de Paracoccidioides são agentes causadores da paracoccidioidomicose (PCM), doença progressiva, crônica e sistêmica, geograficamente confinada na América Latina. O fungo é termodimórfico e a infecção ocorre após a inalação de conídios ou fragmentos de hifas, que ao entrarem em contato com o hospedeiro podem ser transformadas em formas leveduriformes. Esse evento é importante para o estabelecimento da PCM, associado a fatores ligados ao fungo bem como ao hospedeiro. A virulência fúngica é descrita como um evento altamente complexo onde em diferentes estágios da infecção ocorre a expressão de múltiplos genes, podendo estar fortemente associados ao estabelecimento da doença. A adesão e a sobrevivência no interior do hospedeiro são extremamente importantes para o estabelecimento da patogênese. Alguns genes de Paracoccidioides spp se apresentam diferencialmente expressos durante a transição dimórfica do fungo, apresentando baixos níveis de expressão na forma miceliar quando comparadas com a forma leveduriforme, sugerindo que estes possivelmente seriam fatores na composição de estratégias moleculares que P. brasiliensis utiliza para morfo-adaptação e sobrevivência no hospedeiro. O objetivo deste trabalho foi estudar a expressão de genes relacionados a alguns dos fatores de virulência de P. brasiliensis e P. lutzii na fase miceliar e leveduriforme, visando verificar o nível de expressão no fungo bem como na interação com células fagocíticas e epiteliais. Para tanto foram realizados ensaios de infecção com P.brasiliensis (Pb18) e P. lutzii (P01), nas fases miceliar e leveduriforme em células epiteliais pulmonares (MRC-5) e macrófagos alveolares (AMJ2-C11) utilizando a técnica de PCR em tempo real (qRT-PCR). Os genes eleitos para este estudo foram os ... / Abstract: The fungus - host interaction results in a complex process whose knowledge allows a better understanding of the pathogenesis of systemic mycoses. Paracoccidioides species are causative agents of paracoccidioidomycosis (PCM), a progressive, chronic and systemic disease , geographically confined to Latin America. The fungus is thermally and infection occurs after inhalation of conidia or hyphal fragments, which on contact with the host can be transformed into yeast forms. This event is important for the establishment of PCM besides other factors related to the host-fungus interaction. The fungal virulence is described as a highly complex event that enables the expression of multiple genes of the fungus in different stages of infection and can be strongly associated with the development of the disease. Adherence and survival within the host are extremely important for the establishment of pathogenesis. Paracoccidioides spp differentially expressed some genes during the dimorphic fungus transition, having low expression levels in the mycelial form compared with yeast-form, suggesting that these factors were likely to be in the composition of molecular strategies of P. brasiliensis that uses to morpho- adaptation and survival in the host. The aim of this study was to compare the gene expression of the some virulence factors of Paracoccidioides species by real-time PCR. For the assays, the infection was performed with the yeast and mycelial phase of P. brasiliensis (Pb18) and P. lutzii (P01) in pulmonary epithelial cells (MRC-5) and alveolar macrophages (AMJ2 -C11) using RT- PCR. The genes chosen for this study were those which express the 43 kDa glycoprotein (gp43), enolase, glyceraldehyde-3- phosphate dehydrogenase (GAPDH), 14-3-3 (30kDa), phospholipase, protease and hemolysin (Duf gene). The results showed a significant increase in the levels expression of enolase, gp43 and GAPDH in the yeast phase of P. brasiliensis. Enolase was more ... / Mestre

Orientador: Maria José Soares Mendes Giannini / Coorientador: Francisco Javier Enguita / Banca: Daniel de Assis Santos / Banca: Nádia Rezende Barbosa Raposo / Banca: Cláudia Viana Maurer Morelli / Banca: Valéria Valente / Resumo: A paracoccidioidomicose (PCM) é uma micose sistêmica causada por fungos do gênero Paracoccidioides e endêmica na América Latina. Três aspectos são de grande importância nessa doença: o desenvolvimento de antifúngicos e modelos alternativos para estudo dos mesmos e a busca de biomarcadores para o diagnóstico. O número de antifúngicos disponíveis é restrito, e problemas como efeitos adversos, interações medicamentosas e a ocorrência de isolados fúngicos resistentes são descritos. Neste contexto, a busca por novos compostos tem aumentado. Adicionalmente, modelos animais alternativos como Caenorhabditis elegans, zebrafish (Danio rerio) e Galleria mellonella são utilizados para o estudo de novos fármacos de forma simples e em grande escala. Neste trabalho, utilizou-se desses modelos para avaliação da eficácia antifúngica e toxicidade do ácido gálico e seus derivados ésteres de alquila (galatos). O composto com melhor atividade nesses modelos foi testado em camundongos. O galato de dodecila apresentou melhor eficácia e menor toxicidade no modelo C. elegans - C. albicans e menor efeito tóxico em embriões de zebrafish. Entretanto, em G. mellonella e camundongos infectados com Paracoccidioides, o composto não apresentou eficácia antifúngica, o que pode ser decorrente de sua baixa biodisponibilidade. Para resolver tal problema, os galatos foram associados a um sistema lipídico nanoestruturado. Tal associação foi benéfica, resultando em menor toxicidade em fibroblastos pulmonares e em z... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract: Paracoccidioidomycosis (PCM) is a systemic mycosis caused by the fungi of the genus Paracoccidioides, which is endemic in Latin America. Three aspects are of great importance in this disease: the development of new antifungals and the use of alternative models for their study and also, the search of biomarkers for diagnosis. The number of antifungal agents available is restricted, and problems such as adverse effects, drug interactions and the development of resistance are related to them. In this context, the search for new compounds has increased. In addition, alternative animal models such as Caenorhabditis elegans, zebrafish (Danio rerio) and Galleria mellonella have been used for the study of new drugs in a simple and large scale manner. In this work, these models were used to evaluate the antifungal efficacy and toxicity of gallic acid and its alkyl esters derivatives (gallates). The compound with the best activity in these models was tested in mice. Dodecyl gallate presented better efficacy and lower toxicity in the C. elegans - C. albicans model and lower toxic effect in zebrafish embryos. However, in G. mellonella and in mice infected with Paracoccidioides sp., the compound showed no antifungal efficacy, which may be explained due to its low bioavailability. To resolve such a problem, gallates were associated with a nanostructured lipid system. Such association was beneficial, resulting in lower toxicity in lung fibroblasts and zebrafish, as well as in greater efficacy in the murine model. Another aspect of this study concerns the investigation of microRNAs for PCM. MicroRNAs are small non-coding RNAs that perform functions in biological processes and diseases. Thus, with the aid of RT-qPCR, eight microRNAs were differentially expressed in the serum of patients with chronic PCM. In the lung cells, distinct microRNAs were observed according to... (Complete abstract click electronic access below) / Mestre

A paracoccidioidomicose (PCM) é uma doença sistêmica de caráter granulomatoso, causada pelo fungo termodimórfico Paracoccidioides brasiliensis. A PCM é endêmica nas Américas do Sul e Central. Vacina de DNA é uma abordagem promissora e atual na imunoterapia. O peptídeo P10 contem um epítopo da gp43 reconhecido por linfócitos T-CD4+ e é protetor contra a PCM experimental. No presente trabalho analizamos o uso de vacinas de DNA usando vetores de expressão de P10, IL-12 e HSP60 em camundongos infectados intratraquealmente (i.t.) com P. brasiliensis. Esquema Profilático: camundongos BALB/c foram imunizados com pCDNA3 com sequências codificadoras de P10, HSP60 ou IL-12 e foram infectados i.t com 3x105 leveduras do isolado Pb18. Esquema Terapêutico: Camundongos BALB/c e B10.A foram infectados i.t. e após 30 dias foram submetidos à imunização por 4 semanas, ou 5 meses somente para B10.A, com pCDNA3 codificando P10 e/ou IL-12. Níveis de anticorpos, unidades formadoras de colônias (UFC) e produção de citocinas foram analizados. Foi observada redução significativa de UFC nos pulmões dos camundongos imunizados com vetor contendo P10/IL-12. A histopatologia dos pulmões mostrou áreas preservadas e redução de inflamação nestes animais. O nível de citocinas nos pulmões mostrou aumento de IFN-g e IL-12 caracterizando uma resposta Th1. Tratamento de animais B10. A com pP10 até 5 meses, reduziu o número de leveduras infectantes perto de esterilização. / Paracoccidiodomycosis (PCM) is a systemic granulomatous disease caused by the thermo-dimorphic fungus Paracoccidioides brasiliensis. It is widespread in South and Central America. Gene therapy is a promising approach to Ag-specific immunotherapy. Peptide 10 contains the T-cell epitope of gp43 and is protective against experimental infection in mice. Presently, we analyzed the used of DNA-based vaccine encoding P10, IL-12 and HSP60 in mice intratracheally infected with P. brasiliensis. Prophylactic protocol: BALB/c mice were immunized with pCDNA3 encoding P10, HSP60 or IL-12 prior to intratracheal infection with 3x105 yeast cells of isolate Pb18. Therapeutic protocol: BALB/c and B10. A mice were infected and after 30 days, they were immunized for 4 weeks, or 5 months for B10.A only, with pCDNA3 encoding P10 and/or IL-12. Antibody titers in sera, colony forming units (CFU) and cytokine production were measured. A significant reduction of CFU in the lungs of mice immunized with plasmid encoding P10/IL-12 was observed. The lung histopathology confirmed the results showing preserved areas and reduction of inflammation in vaccinated animals. The cytokine levels in lungs showed enhanced levels of IFN-g and IL-12 characterizing a Th1 response. Further treatment of B10.A mice up to 5 months with pP10 reduced the number of infective yeasts close to sterilization.

Paracoccidioidomicose (PCM) é uma micose sistêmica causada pelo fungo Paracoccidioides brasiliensis e é considerada a 10º causa de morte dentre doenças infecciosas e parasitárias no Brasil. As células dendríticas (DCs) são as mais eficientes na apresentação de antígenos, e sendo de 100 a 1000 vezes mais eficientes que um adjuvante não específico. P10, motivo específico de 15 aminoácidos derivado da gp43 excretada pelo fungo, é reconhecido por linfócitos T, direciona para resposta Th1 e confere proteção no modelo experimental. Nesse sentido, analisamos a capacidade de DCs pulsadas com P10 em ativar uma resposta protetora. In vitro observamos que a proliferação de esplenócitos foi maior quando a reestimução era feira com P10 e DCs juntos. In vivo, camundongos infectados e tratados com DCs pulsadas com P10 apresentaram diminuição da carga fúngica e melhoria do tecido pulmonar, aumento de IFN-<font face=\"Symbol\">g/IL-12 e diminuição de IL-4/IL-10. Esses resultados evidenciam o potencial das DCs atuando como adjuvante para o P10 em uma vacina para o tratamento e cura da PCM. / Paracoccidiodomycosis (PCM) is a systemic mycosis caused by the fungus Paracoccidioides brasiliensis. In Brazil, it is ranked as the tenth cause of death among the chronic infectious and parasitic diseases. Dendritic cells (DCs) are the most efficient antigen presenting cells, and they are at least 100-1000 times more efficient than a non specific adjuvant. The P10, 15-amino acid peptide motif derived from gp43 secreted by the fungus, is recognized by T cells, induces Th1 response and protects mice in a murine model of the disease. In the present work we analyzed the ability of DCs pulsed with P10 to elicit a protective response. In vitro results showed that a stronger proliferation of the splenocytes was reached when induced by DCs with P10. In vivo, mice infected and treated with DCs pulsed with P10 showed reduce of the fungi burden with less inflamed areas, higher levels of IFN-<font face=\"Symbol\">g/IL-12 and lower levels of IL-10/IL-4. All that point out the importance of the adjuvant role of DCs when developing a vaccine using P10 for the treatment or cure of PCM.

Made available in DSpace on 2014-06-11T19:27:57Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2001Bitstream added on 2014-06-13T19:57:02Z : No. of bitstreams: 1 sene_mg_me_botfm.pdf: 956728 bytes, checksum: fe9e35a9180c7ad377bc30cbf9974ccd (MD5) / A paracoccidioidomicose (Pbmicose) é micose sistêmica causada pelo fungo dimórfico Paracoccidioides brasiliensis, que acomete principalmente trabalhadores rurais do sexo masculino. A doença tem como principais manifestações clínicas a forma aguda/subaguda e a forma crônica. Métodos sorológicos têm considerável valor na Pbmicose e diferentes testes têm sido utilizados no diagnóstico e monitoramento da resposta do paciente ao tratamento. O objetivo deste estudo foi avaliar a IFI, a ID e o ELISA antes e após introdução do tratamento de pacientes com a forma aguda/subaguda e a forma crônica da Pbmicose. Para cada teste, os seguintes parâmetros foram avaliados: sensibilidade (SE), especificidade (EP), valor preditivo positivo (VPP), valor preditivo negativo (VPN) e eficiência (EF). No período pré-tratamento a IFI teve SE=92,3%, VPP= 87,5%, VPN= 92% e EF=88,6%. A ID teve SE=94,93%, VPP=97,4%, VPN=95% e EF=96,2%. Para o ELISA, SE=100%, VPP=95%, VPN=100% e EF=97,4%. No grupo de doadores de sangue, a EP da IFI, da ID e do ELISA foram, respectivamente, de 93,3%, 100% e 100%. Em soros de pacientes com outras micoses sistêmicas (histoplasmose, criptococose, actinomicose, aspergilose e adiaspiromicose), as EP para os testes foram de 60%, 90% e 80%, respectivamente. Durante o tratamento, maior correlação foi obtida entre a ID e o ELISA (r= 0,61591, p<0,05), obtendo-se baixas correlações com a IFI. O tempo necessário para negativar o ELISA (Md= 20,0 meses) foi maior do que a ID (Md= 13,5 meses). O ELISA se negativou em geral nove meses após a ID, o que sugere que este teste passe a ser um referencial para suspensão do tratamento de manutenção. Devido à sua elevada sensibilidade, especificidade, VPP, VPN e eficiência, o ELISA deve ser incluído na rotina sorológica de pacientes com Pbmicose. / Pararaccidioidomycosis (Pbmycosis) is a systemic mycosis caused by the dimorphic fungus Paracoccidioiodes brasiliensis, which often affects rural workers, usually male adults. The overt disease is manifested by two clinical forms, acute/subacute and chronic forms. Serological methods are of considerable value in Pbmycosis, and various tests has been utilized in the diagnostic and monitoring the patient's response to treatment. The aim of this study was to evaluated the reliability of the double immunodiffusion test (ID), indirect immunofluorescence (IIF) and immunoenzymatic assay (ELISA) in the pre-treatment and during the period of treatment of patients with acute/subacute and chronic forms of Pbmycosis. For each test the following parameters were evaluated: Sensitivity (SE), Specificity (SP), Positive and Negative Predictive Values (PPV and NPV) and Efficiency (EF). In the pre-treatment period these values for IFI were SE=92.3%, PPV=87.5%, NPV=92% and EF=88.6%. For ID: SE=94.9%, PPV=97.4%, NPV=95% EF=96.2%. For ELISA: SE=100%, PPV=95%, NPV=100% and EF=97.4%. In the group of blood donors, for IFI, ID and ELISA the ES were, respectively, 93.3%, 100% and 100%. In patients with other deep mycosis (histoplasmosis, cryptococcosis, actinomycosis, aspergillosis and adiaspiromycosis) the ES for these tests were respectively 60%, 90% and 80%. During the period of treatment, the highest correlation was observed between ID and ELISA (r= 0,61591, p<0,05), and the lowest correlations with IFI. The time elapsed to negative the ELISA was larger (Md=20 months) than for ID (Md= 13,5 meses). In overall, the ELISA negativated nine months after ID. This result suggests that the ELISA may be a referential test to monitoring the time for interruption of the treatment in Pbmycosis. Moreover, owing to its high values of SE, SP, PPV, NPV and EF, ELISA should be included in the serological routine for patients with Pbmycosis.

Made available in DSpace on 2014-06-11T19:23:00Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2012-10-22Bitstream added on 2014-06-13T20:10:23Z : No. of bitstreams: 1 oliveira_m_me_botib.pdf: 513843 bytes, checksum: 1073981036663c777b20eaca756894f1 (MD5) / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior (CAPES) / A Paracoccidioidomicose (PCM) é uma importante doença sistêmica que acomete os pulmões, e mesmo após tratamento eficaz deixa sequelas como fibrose e enfisemas pulmonares. É muito importante que as sequelas provenientes da doença sejam quantificadas com precisão. Assim, a Tomografia Computadorizada de Alta Resolução (TCAR) se tornou o exame de diagnóstico por imagem mais utilizado para a avaliação das sequelas da PCM. O diagnóstico auxiliado por sistemas computacionais pode ajudar a produzir uma avaliação mais precisa das sequelas (fibrose e enfisema) causadas pela PCM. Esta pesquisa tem como objetivo o desenvolvimento de algoritmos em ambiente computacional Matlab® capazes de quantificar objetivamente fibrose e enfisema em pacientes com PCM confirmada. O algoritmo consiste em selecionar a região de interesse (ROI), e por meio da utilização de máscaras, filtros de densidades e operadores morfológicos, obter a quantificação da área lesionada em relação à área sadia do pulmão. O método proposto foi testado em 30 exames de TCAR de pacientes com PCM confirmada. Os resultados das quantificações objetivas foram comparados com as avaliações visuais realizadas por um especialista da área de radiologia, e apresentaram uma maior diferença de 39,14% para fibrose e 18,7% para enfisema. Para validar a eficiência do método proposto nessa pesquisa, em distinguir as estruturas pulmonares e realizar suas quantificações, foi construído um fantoma virtual pulmonar. Os valores da composição do fantoma foram comparados com os valores obtidos pelo algoritmo, apresentando diferença de 11,5% para enfisema e de 4,5% para fibrose. Em relação à comparação dos resultados das composições dos fantomas com a avaliação visual realizada pelo radiologista, foi verificada uma diferença de 40% e 23% para fibrose e... / The paracoccidioidomycosis (PCM) is a major systemic disease affecting the lungs, and even after effective treatment leaves sequelae such as fibrosis and pulmonary emphysema. It is very important that the sequelae from disease be quantified with greater accuracy. Thus, the High Resolution Computed Tomography (HRCT) has become the diagnostic imaging test most widely used to assess the sequelae of the PCM. The computer-aided diagnosis systems can help produce a more precise assessment of the sequelae (fibrosis and emphysema) caused by PCM. This research aims to develop algorithms in environment Matlab® capable of objectively quantify fibrosis and emphysema in patients with PCM. The algorithm consists of selecting the region of interest (ROI), and by the use of masks, density filters and morphological operators, to obtain the quantification of lesion area compared to the area of healthy lung. The proposed method was tested on 30 HRCT scans of patients with PCM. The results of objective quantification were compared with visual evaluations performed by specialist radiology, and showed a greater difference of 39.14% and 18.7% for fibrosis and emphysema, respectively. To validate the efficiency of the proposed method in this research, in distinguishing lung structures and conduct their baseline, we built a virtual phantom lung. The values of the composition of the phantom were compared with the values obtained by the algorithm, showing a difference of 11.5% to emphysema and fibrosis to 4.5%. In comparing the results of compositions of the phantoms with the visual evaluation performed by the radiologist, there was a difference of 40% and 23% for fibrosis and emphysema, respectively. The objective quantification of fibrosis and emphysema is the original PCM. The results show the feasibility and reliability... (Complete abstract click electronic access below)

Made available in DSpace on 2014-06-11T19:23:01Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2012-02-24Bitstream added on 2014-06-13T19:28:40Z : No. of bitstreams: 1 arantes_td_me_botib.pdf: 1137572 bytes, checksum: 264ea534831c365fabd16c634fed4c50 (MD5) / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior (CAPES) / Taking into account that paracoccidioidomycosis infection occurs by inhalation of the asexual conidia produced by Paracoccidioides sp. in its saprobic phase, this work presents the collection of aerosol samples as an option for environmental detection of this pathogen, by positioning a cyclonic air sampler at the entrance of armadillo burrows. Detection strategies included: direct culture, extinction technique culture and Nested PCR of the ITS1-5.8S-ITS2 region, as well as the evaluation of one armadillo (D. novemcinctus) as positive control for the studied area. Although the pathogen could not be isolated by the culturing strategies, the aerosol sampling associated with molecular detection by Nested PCR proved the best method for detecting Paracoccidioides sp. in the environment. Most of the ITS sequences obtained herein presented high similarity with the homologous sequences of P. lutzii from GenBank database, suggesting that this Paracoccidioides species may be not exclusive to mid-western Brazil as proposed so far

Orientador: Maria José Soares Mendes Giannini / Banca: Luis Octávio Regasini / Banca: Eduardo Bagagli / Resumo: Paracoccidioides brasiliensis e P. lutzii são fungos dimórficos, agentes etiológicos da paracoccidioidomicose, que é uma micose humana sistêmica geograficamente confinada na América Latina. Vários antifúngicos podem ser utilizados para o tratamento dessa doença, tais como anfotericina B, sulfamídicos e azólicos (itraconazol) e de maneira geral seu uso é prolongado. As limitações frequentes dos antifúngicos e o aumento na incidência das infecções fúngicas sistêmicas têm ressaltado a necessidade da descoberta e do desenvolvimento de novos fármacos. O objetivo deste estudo foi comparar a atividade antifúngica de anfotericina B, itraconazol e galatos de alquila anti-complexo de Paracoccidioides por métodos fenotípicos e proteômicos. Para tanto foi padronizado o teste de sensibilidade para selecionar o galato de maior potência, utilizando o documento M27-A2 (2002), modificado pela adição de Alamar Blue. Adicionalmente, análises proteômicas foram realizadas antes e após tratamento com o antifúngico selecionado para verificar o perfil das possíveis proteínas-alvo. A atividade antifúngica foi estudada contra isolados de P. brasiliensis (S1, S2 e PS3) e P. lutzii, (Pb01-like), e depois o teste foi estendido para mais seis isolados. O valor da CIM do ácido gálico variou de 31,25 a 0,250 mg/L para todos os isolados. Os galatos mostraram valores de CIM entre 16 a 0,004 mg/L. O menor valor de CIM foi observado para seis galatos que possuem uma substituição por uma cadeia relativamente longa de carbonos. O perfil proteico dos isolados Pl01 e Pb18 foi estudado por eletroforese 2D após contato com anfotericina B , itraconazol e o galato de decila (todos a uma concentração de 0,125 mg/L. Mais de 130 spots para ambos os fungos foram observados e a maioria destas proteínas... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract: Paracoccidioides brasiliensis and P. lutzii are dimorphic fungi, etiological agents of paracoccidioidomycosis, which is a systemic human mycosis geographically restricted to Latin America. Various antifungal agents may be used to treat this disease, such as amphotericin B, sulfamidic agents and itraconazole, and these drugs are used in long-term therapies. The limitations of antifungals and increased incidence of systemic fungal infections has underscored the need for discovery and development of new drugs. The objective of this study was to compare the antifungal activity of amphotericin B, itraconazole and alkyl gallates anti-Paracoccidioides complex by phenotypic and proteomic methods. Thus, the susceptibility test was applied to select the most potent gallate, using the document M27-A2 (2002), modified by the addition of Alamar Blue. Finally, proteomic analyses was developed before and after the treatment with the antifungal agent selected, to study the protein profile after this treatment. The antifungal activity was evaluated against isolates of P. brasiliensis (S1, S2 and PS3) and P. lutzii (PB01-like), and after, the test has been extended to six isolates. The MIC values of gallic acid varied from 31.25 to 0.250 mg/L for all isolates. The gallates showed MIC values ranging from 16 to 0,004 mg/L. The lowest MIC value was observed for six gallates bearing a substitution for a long side chain. The protein profile of isolates Pb18 and Pl01 was studied by 2D electrophoresis after contact with amphotericin B, itraconazole and decyl gallate, all in the concentration of (0.125 mg/L ). More than 130 spots for both species were observed, and the most of these proteins... (Complete abstract click electronic access below) / Mestre

Resumo: A Paracoccidioidomicose (PCM) é uma micose sistêmica e a de maior ocorrência na América Latina, causada pelo fungo Paracoccidioides brasiliensis. Apesar dos esforços contínuos de diversos grupos de pesquisa principalmente do Brasil, Colômbia Venezuela e Argentina, a fase ambiental produtora de propágulos infectantes, seu nicho ecológico e outros aspectos fundamentais da biologia deste patógeno ainda representa um enigma. Sabe-se, no entanto, que há alguns indicadores biológicos onde se constata a infecção natural do P. brasiliensis em espécies de tatu Dasypus novemcinctus em áreas endêmicas. Assim, o isolamento sistemático deste patógeno nesta espécie animal tem despertado o interesse em avaliar outras espécies animais cuja distribuição geográfica seja coincidente com a da PCM. O conhecimento de reservatórios naturais de fungos patogênicos e o mapeamento de regiões habitadas pelos fungos são dados fundamentais para elucidar a eco-epidemiologia da PCM. O presente projeto focalizou a detecção ambiental do P. brasiliensis, bem como de outros fungos patogênicos geneticamente relacionados, em animais silvestres pelo emprego de métodos moleculares em amostras de tecido de animais atropelados em beiras de estradas. Sabe-se que esse material é muitas vezes negligenciado, sendo utilizado em estudos de conservação biológica e de parasitologia. Esta abordagem é inédita e útil no estudo da eco-epidemiologia da PCM. Foram avaliados também tatus (D. novemcintus) capturados em regiões geograficamente definidas, visando o isolamento fúngico do P. brasiliensis, bem como de outros fungos patogênicos, por cultura de órgãos, histopatologia e técnicas moleculares. A integração dos dados micológicos, moleculares e a aplicação de técnicas de geoprocessamento permitiu a caracterização da área geográfica dos animais avaliados e contribuiu para um melhor conhecimento sobre a ocorrência do patógeno no hospedeiro animal / Abstract: Paracoccidioidomycosis (PCM) is the most prevalent systemic mycosis of Latin America, caused by fungus Paracoccidioides brasiliensis. Despite the continuous efforts by several research groups mainly from Brazil, Colombia, Venezuela and Argentina, the saprobic form producing infective propagula, its exact niche in nature and other fundamental aspects of the biology of this pathogen still remains enigmatic. It is known however that some biological indicators where there is a natural infection of P. brasiliensis from the nine-banded armadillo Dasypus novemcinctus in an endemic area. Thus, the systematic isolation of this pathogen in this species has increased the necessity in evaluating several wild mammals whose geographical distribution is coincident of PCM. The knowledge about natural reservoirs of pathogenic fungi and mapping landscape of areas inhabited by fungi may be clarified the ecoepidemiology of PCM. This work focused on the environmental detection of P. brasiliensis, as well as other related pathogenic fungi in wild animals, the use of molecular tools in tissue samples from road-killed wild animals. While road-killed animals proved to be usefull both form parasitological and conservative studies, these materials have been negleted in the area of infections disease. This approach is new and has been useful to elucidate PCM ecoepidemiology. It was evaluated armadillos (D. novemcinctus) captured is some restricted areas, such as from Savanna and a County considered to be hyperendemic for PCM, by culture, histopathology and molecular techniques, in order to confirm if P. brasiliensis also occurs in such defined ecological conditions. The use the Geographical Information Systems (GIS), thus contributing to a better understanding about the occurrence of the pathogen in the host animal and the associated biotic and abiotic factors / Orientador: Eduardo Bagagli / Coorientador: Sandra de Moraes Gimenes Bosco / Banca: Hélio Langoni / Banca: Maria Terezinha Serrão Peraçoli / Banca: Andréa de Faria Fernandes Belone / Banca: Silvio Alencar Marques / Acompanhado de 1 CD-ROM / Doutor