Submitted by Nuzia Santos (nuzia@cpqrr.fiocruz.br) on 2015-04-14T14:03:09Z No. of bitstreams: 1 Roberta Carvalho Ferreira - Avaliação da colonização de Trypanosoma cruzi e Trypanosoma rangeli no trato intestinal de Rhodnius prolixus - 2014.pdf: 1324987 bytes, checksum: b6cd417c99954e8fdca43e7c13cf5538 (MD5) / Approved for entry into archive by Nuzia Santos (nuzia@cpqrr.fiocruz.br) on 2015-04-14T14:03:19Z (GMT) No. of bitstreams: 1 Roberta Carvalho Ferreira - Avaliação da colonização de Trypanosoma cruzi e Trypanosoma rangeli no trato intestinal de Rhodnius prolixus - 2014.pdf: 1324987 bytes, checksum: b6cd417c99954e8fdca43e7c13cf5538 (MD5) / Approved for entry into archive by Nuzia Santos (nuzia@cpqrr.fiocruz.br) on 2015-04-14T14:03:30Z (GMT) No. of bitstreams: 1 Roberta Carvalho Ferreira - Avaliação da colonização de Trypanosoma cruzi e Trypanosoma rangeli no trato intestinal de Rhodnius prolixus - 2014.pdf: 1324987 bytes, checksum: b6cd417c99954e8fdca43e7c13cf5538 (MD5) / Made available in DSpace on 2015-04-14T14:03:30Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Roberta Carvalho Ferreira - Avaliação da colonização de Trypanosoma cruzi e Trypanosoma rangeli no trato intestinal de Rhodnius prolixus - 2014.pdf: 1324987 bytes, checksum: b6cd417c99954e8fdca43e7c13cf5538 (MD5) Previous issue date: 2014 / Fundação Oswaldo Cruz. Centro de Pesquisa René Rachou. Belo Horizonte, MG, Brasil / Os parasitos Trypanosoma rangeli e Trypanosoma cruzi entram no tubo digestivo do vetor através do repasto sanguíneo e o intestino médio anterior (IMA) é o local onde se dão as primeiras interações parasito-hospedeiro. Sendo assim, a colonização do IMA de Rhodnius prolixus por T. cruzi (cepa CL) e T. rangeli (cepa CHOACHI) foi avaliada no presente estudo. Inicialmente, o estabelecimento da infecção em ninfas infectadas com epimastigotas de cultura ou tripomastigotas sanguíneas foi comparativamente avaliado. A avaliação de diferentes parâmetros mostrou que a dinâmica de colonização foi diferente dependendo da forma do parasito utilizada para a infecção em ambas as espécies. Dessa forma, a avaliação da dinâmica de colonização dos parasitos no intestino de insetos infectados foi realizada com tripomastigotas sanguíneas, as formas naturalmente presentes no hospedeiro vertebrado. Além disso, a porção do trato intestinal onde ocorre a diferenciação das formas tripomastigotas para epimastigotas foi determinada para as duas espécies. Para infecções por T. rangeli, a diminuição gradativa no número de tripomastigotas no IMA e o concomitante aparecimento de formas intermediárias e epimastigotas a partir do primeiro dia pós-infecção (pi) indicaram que a sua diferenciação acontece nessa porção do intestino. No caso de infecções por T. cruzi, a presença de apenas formas tripomastigotas e intermediárias no IMA e a presença de formas intermediárias e epimastigotas no intestino médio posterior (IMP) dos insetos sugere que a sua diferenciação ocorre no IMP do vetor. A quantificação dos parasitos mostrou uma redução de mais de 80% nas populações de T. cruzi nas primeiras 24 horas pi. A primeira hipótese para avaliar esta redução seria a de que os parasitos estariam cruzando rapidamente o IMA e estabelecendo a infecção no IMP dos insetos. Entretanto, o reduzido número de parasitos encontrado no IMP não corroborou a hipótese. Na segunda hipótese, os parasitos poderiam estar aderidos ao epitélio do IMA e por essa razão não teriam sido quantificados nas contagens a fresco. A ausência de parasitos no IMA através da quantificação por qPCR, associada a análise do epitélio intestinal em miscroscópio, sugerem fortemente que o parasito não se adere ao epitélio intestinal do IMA. Finalmente, a possibilidade dos parasitos estarem sendo eliminados do IMA nestas primeiras horas pi foi avaliada. A significativa redução no número de parasitos incubados com diferentes tecidos de R. prolixus, particularmente com o IMA de insetos recém-alimentados, sugere que uma parte significativa da população de T. cruzi que entra no vetor juntamente com o repasto é eliminada por fatores presentes no IMA do inseto. Em conclusão, o presente estudo mostrou que embora T. cruzi e T. rangeli apresentem formas infectivas similares, os parasitos utilizam diferentes estratégias para iniciar a infecção nos seus hospedeiros invertebrados. / Trypanosoma rangeli and Trypanosoma cruzi enter the vector’s intestinal tract together with the bloodmeal and the anterior midgut is the first compartment they interact with. Therefore, in the present study, the colonization of Rhodnius prolixus anterior midgut by T. cruzi (CL strain) and T. rangeli (CHOACHI strain) was evaluated. Initially, the parasite establishment was compared in the anterior midgut of nymphs infected with culture epimastigotes versus blood trypomastigotes. The evaluation of different parameters showed that the colonization dynamics was different according to the parasite development stage used in the infection, for both species. Thereby, the next objective was to evaluate the anterior midgut colonization in insects infected with blood trypomastigotes, which are the forms naturally present in the vertebrate host. Additionally, the midgut portion where trypomastigotes differentiate into epimastigotes was determined for both flagellates. In T. rangeli infections, the gradual decrease in trypomastigote numbers and the finding of intermediate and epimastigote forms 24 hours (pi) in the anterior midgut indicates that the differentiation of the parasite occurs in this portion of the midgut. During T. cruzi infections, only trypomastigote and intermediate forms were observed in the anterior midgut, and the finding of intermediate and epimastigote forms in the posterior midgut suggests that its differentiation occurs in the insect’s posterior midgut. The parasite quantification showed that T. cruzi populations in the anterior midgut were reduced in about 80% during the first 24 hours pi. The first hypothesis to be tested evaluated wheter parasites rapidly crossed the anterior midgut and established infection in the posterior midgut. However, the low amount of parasites in the posterior midgut did not confirm this hypothesis. The other hypothesis suggests that parasites could be attached to the anterior midgut epithelium and, therefore, could not be quantified by the fresh counts. However, absence of parasites in the anterior midgut by qPCR and the analysis of the intestinal epithelium in the microscope showed that no parasites were attached to the anterior midgut at that period time point. Finally, the third hypothesis evaluated the possibility that parasites could have been killed in the anterior midgut during the first 24 hours pi. The reduction in number of parasites incubated with different tissues of R. prolixus, particularly with anterior midguts from blood fed insects indicates that a significant part of the T. cruzi population ingested with the blood meal is eliminated by factors present in the vector’s anterior midgut. In conclusion, this study showed that although T. cruzi and T. rangeli present similar infective forms, the parasites present different strategies to initiate the infection on their invertebrate hosts.

Orientador: Jesus Aparecido Ferro / Banca: Henrique Ferreira / Banca: Rafael Marini Ferreira / Banca: Fabricio José Jaciani / Banca; Helen Alves Penha / Resumo: Diante da importância do cancro cítrico para a citricultura mundial, a bactéria Xanthomonas citri subsp. citri, o agente causal da doença, tem sido amplamente estudada. Pesquisadores brasileiros realizaram o sequenciamento completo do genoma da X. citri subsp. citri isolado 306 (Xac306), com o intuito de elucidar os genes e mecanismos envolvidos na patogenicidade e/ou virulência da bactéria. As ORFs XAC2361 e XAC3898 possuem tamanhos e locais diferentes no genoma da Xac306, mas têm em comum o domínio Peptidase_M23, cujo processo biológico predito é de hidrolase de parede celular, mas a real função destas proteínas em Xac ainda é desconhecida. Este trabalho teve como objetivo avaliar, por meio da mutação sítio-dirigida, se as ORFs XAC2361 e XAC3898 estão relacionadas com a virulência e/ou patogenicidade de X. citri subsp. citri 306 e com o desenvolvimento do cancro cítrico. Para isso, foram realizados testes in vitro e in planta dos mutantes obtidos, visando observar alterações fenotípicas. Devido a presença de peptídeo sinal, a ORF XAC2361 foi fundida à proteína fluorescente mCherry (XAC2361-mCherry) para expressão in vivo e avaliação por microscopia de fluorescência. As análises fenotípicas demonstraram que o mutante ΔXAC2361 não apresentou alterações nos sintomas quando avaliado em limoeiro cravo (Citrus limonia Osbeck), porém apresentou menor capacidade de crescimento in vitro, menor motilidade swimming e swarming e menor capacidade de sobrevivência em SDS. Por outro lado,... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract: In view of the importance of citrus canker in citrus culture worlwide, the bacterium Xanthomonas citri subsp. citri, the causal agent of this disease, has been extensively studied. Brazilian researchers performed the complete sequencing of the genome of X. citri subsp. citri isolate 306 (Xac306), in order to elucidate the genes and mechanisms involved in the pathogenicity and/or virulence of Xac. The ORFs XAC2361 and XAC3898 have different sizes and location in the genome, but have in common the M23 Peptidase domain, whose biological process is predicted to act as cell wall hydrolase, but the actual function of these proteins in Xac is still unknown. This work aimed to evaluate, through site-directed mutagenesis, whether XAC2361 and XAC3898 ORFs are related to the virulence and / or pathogenicity of Xac306 and the development of citrus canker. In order to observe phenotypic changes, in vitro and in planta tests of the mutants were carried out. Due to the presence of signal peptide, the ORF XAC2361 was fused to the mCherry fluorescent protein (XAC2361-mCherry) for in vivo expression and fluorescence microscopy evaluation. Phenotypic analyzes demonstrated that the ΔXAC2361 mutant showed no change in symptoms when evaluated in Mexican lime (Citrus limonia Osbeck), but presented lower in vitro growth capacity, lower swimming and swarming motility, and lower survival capacity in SDS. On the other hand, the ΔXAC3898 mutant showed a significant reduction in virulence, lower in plant... (Complete abstract click electronic access below) / Doutor

Os danos causados por Pratylenchus brachyurus e P. zeae às variedades de cana-de-açúcar SP70-1143 e SP71-1406 foram avaliados em dois ensaios em vasos de 150 litros. Cada ensaio constou da inoculação de 0, 200, 400 ou 800 nematóides por litro de solo de uma ou outra espécie de Pratylenchus. As populações de nematóides nas raízes e parâmetros de crescimento e produção foram avaliados ao longo do ciclo e por ocasião do corte, aos 17 meses. P. braghyurus se multiplicou nas raízes das duas variedades sem causar prejuízos a nenhuma delas, que foram consideradas tolerantes ao nematóide. Na variedade SP70-1143, P. zeae só se multiplicou nas plantas inoculadas com 200 nematóides por litro de solo, porém não causou reduções nos pesos frescos dos colmos e total da parte aérea, em relação às demais. SP71-1143 foi tida como resistente a P. zeae. Na variedade SP71-1406, as maiores populações de P. zeae foram registradas nas plantas que receberam 400 ou 800 nematóides por litro de solo. Estas plantas também mostraram reduções significativas nos pesos frescos dos colmos e total da parte aérea, em relação as demais. SP71-1406 foi considerada susceptível a P. zeae / Damage to two sugarcane varieties resulting from infestation by Pratylenchus brachyurus and P. zeae were evalueted in two experiments. Each experiment consisted of inoculation with 0, 200, 400 or 800 nematodes/l soil from one or another Pratylenchus species on the varieties SP70-1143 and SP71-1406, the most cultivated in São Paulo State, nowadays. Single buds from both varieties were grown in 150 l pots, containing sterilized sandy soil and were inoculated 30 days after planting. Nematode population in roots and parameters were evalueted along the plant growth cicle and at the harvest, 17 months after planting. P. brachyurus reproduction was observed at the roots of two varieties, but no growth reduction was caused by the parasities. Both varieties were considered tolerant to P. brachyurus. On SP70-1143, P. zeae reproduction ocurred only at initial population of 200 nematodes/l soil. At the harvest, these plants only showed significant decreases in fresh weight of top cane plus leaves and dry weight of roots when compared with the plants without nematodes. SP-1143 was classified as resistant to P. zeae. As far as SP71-1406 is concerned, the higher P. zeae populations were observed in the pots inoculated with 400 or 800 nematodes/l soil. In these cases, significant reduction on fresh weight of shoots and fresh weight of aerial parts observed. SP71-1406 was considered susceptible to P. zeae

A aveia (Avena sativa L.) é um cereal de importância mundial utilizada para a produção de grãos e forragem. A ferrugem do colmo da aveia, causada por Puccinia graminis f. sp. avenae (Pga), é uma das mais devastadoras doenças da aveia em todo o mundo. Para melhor entender as epidemias de ferrugem do colmo no Sul do Brasil, foram realizados levantamentos da virulência do patógeno durante dois anos em um programa de melhoramento de aveia. As epidemias foram caracterizadas por uma mistura de raças similares e de amplo espectro de virulência. A raça de maior virulência (TST) foi identificada em 2014, para a qual apenas o gene Pg-10 foi parcialmente efetivo. Marcadores moleculares para estudos de genética de populações para Pga são escassos. Utilizando a sequência genômica de um isolado de Pga, 19 marcadores de sequências simples repetidas (SSR) foram desenvolvidos. Estes marcadores foram utilizados para avaliar a diversidade genética de 66 isolados de Pga da Austrália, Brasil e Suécia. Os isolados do Brasil e da Austrália foram caracterizados por uma e duas linhagens clonais predominantes, respectivamente. Por outro lado, os isolados da Suécia foram caracterizados por uma população recombinante e alta diversidade genética (nove genótipos distintos entre dez isolados). No hospedeiro, um limitado número de genes de resistência à ferrugem do colmo está disponível para o melhoramento da aveia. Para identificar novos genes de resistência, 61 genótipos brasileiros do Programa Internacional de Aveia da Quaker foram avaliados para a resposta de plântula e de planta adulta à ferrugem do colmo na Austrália. Nos testes de plântula, o patótipo de maior virulência da Austrália conferiu tipo de infecção susceptível à todas as linhagens diferenciais e genótipos testados, sendo utilizado para investigar a presença de resistência de planta adulta (RPA). Em um ensaio de campo, os genótipos UFRGS 087105-1 e UFRGS 087129-1 foram resistentes a moderadamente resistentes e representam uma promissora fonte de RPA para a ferrugem do colmo na Austrália. No Brasil, o genótipo UFRGS 995088-3 é uma importante fonte de resistência à ferrugem do colmo. Este estudo reporta a análise genética e o mapeamento molecular da resistência em UFRGS 995088-3. A análise genética foi realizada em duas populações de linhagens endogâmicas recombinantes (LERs) F5:7. A razão de segregação para a resistência está em conformidade com a presença de um e três genes independentes. Um arranjo de 6000 SNPs da aveia foi utilizado para genotipar uma população de 85 LERs. Os dados moleculares fornecem evidências de um único gene para a resistência com distorção de segregação. Este gene foi mapeado em um intervalo de 0,7 cM entre dois marcadores que explicam 95 % da resistência. Estes marcadores poderão servir de base para estudos futuros de validação em outras populações. / Oat (Avena sativa L.) is a major cereal crop of global importance used for grain and forage production. Oat stem rust, caused by Puccinia graminis f. sp. avenae (Pga), is one of the most severe diseases of oats worldwide. To better understand the epidemics of stem rust in South Brazil, virulence surveys were carried out during two epidemic years in an oat breeding program. The epidemics were characterized by a mixture of similar and highly virulent races. The most virulent race (TST) was identified in 2014, for which only Pg-10 was partially effective. Molecular markers suitable for population genetics of Pga are scarce. Using the genomic sequence of a Pga isolate, 19 simple sequence repeat (SSR) markers were developed. These markers were used to assess the genetic diversity of 66 Pga isolates from Australia, Brazil and Sweden. Brazilian and Australian isolates were characterized by one and two predominant clonal lineages, respectively. In contrast, the Swedish isolates were characterized by a highly diverse recombinant population (nine distinct genotypes out of ten isolates). In the host, a limited number of resistance genes to stem rust are available for oat breeding. In order to identify novel resistance sources, 61 Brazilian genotypes from Quaker International Oat Nursery were assessed for seedling and adult plant response to stem rust in Australia. In the seedling tests, the most virulent pathotype of Australia conferred susceptible infection type to all differential set and genotypes tested, and thus it was used to investigate the presence of adult plant resistance (APR). In a field trial, the genotypes UFRGS 087105-1 and UFRGS 087129-1 were resistant to moderately resistant and represent a promising source of effective APR to oat stem rust in Australia. In Brazil, the genotype UFRGS 995088-3 is a useful stem rust resistance source. This study reports the genetic analysis and the molecular mapping of the resistance in UFRGS 995088-3. The genetic analysis was performed using two recombinant inbred line (RIL) populations F5:7. The segregation ratio of RIL populations for the resistance conformed to the presence of one and three independent genes. A 6 K oat single nucleotide polymorphism (SNP) array was used to genotype one population comprising 85 RILs. The molecular marker data provided evidence of a single-gene for the resistance with distorted segregation. This gene was mapped in a 0.7 cM interval between two markers that explained 95 % of the resistance. These markers can be used as a basis for further validation studies using other populations.

Fundamentos: a rosácea é uma dermatose freqüente que possui multiplicidade de fatores envolvidos no seu desencadeamento. Na literatura recente, há autores que apontam o Helicobacter pylori como um possível agente etiológico da doença. Porém os poucos estudos publicados sobre o assunto que utilizaram pacientes controles não encontraram evidências de que esta associação seja importante. No Brasil, não há trabalhos publicados quanto à exposição ao Helicobacter pylori em pacientes com rosácea, e mesmo o perfil geral dos pacientes com rosácea, no país, é pouco conhecido. Objetivos: o principal objetivo do estudo foi avaliar se a exposição ao Helicobacter pylori constitui um fator de risco para o desenvolvimento da rosácea. Os outros objetivos do trabalho foram: avaliar uma possível diferença da presença de distúrbios dispépticos entre casos de rosácea e controles, analisar se a exposição ao Helicobacter pylori ocorre homogeneamente nos diferentes estágios evolutivos da rosácea, e descrever o perfil clínico-epidemiológico dos pacientes com rosácea. Metodologia: foi realizado um estudo caso-controle no Serviço de Dermatologia do Hospital de Clínicas de Porto Alegre I Universidade Federal do Rio Grande do Sul e no Laboratório Faillace (Porto Alegre, RS), no período entre 15 de abril de 1996 e 18 de maio de 1998. Os casos de rosácea (n=62) foram definidos de acordo com o critério clínico de Marks ( 1992) e classificados de acordo com os critérios de Plewig e Kligman (1993). Em situações de dúvidas clínicas, foram realizadas biópsias cutâneas, e a histopatologia foi utilizada para definir os diagnósticos. Os pacientes controles (n=124) foram selecionados entre pacientes não portadores de rosácea, atendidos no mesmo Serviço. Houve pareamento para idade, sexo e raça e apenas pacientes acima de 18 anos foram incluídos. As variáveis aferidas em ambos os grupos foram renda familiar mensal, grau de escolaridade, uso prévio de medicamentos sistêmicos, presença de distúrbios dispépticos e sorologia (IgG por enzimaimunoensaio) para Helicobacter pylori. Foram realizadas análise de risco bivariada e análise estatística estratificada. Resultados: houve uma fraca associação entre a exposição ao Helicobacter pylori e a rosácea (OR= 1,41 p=0,367), porém a análise estratificada demonstrou que o uso de medicamentos prévios e a renda familiar mensal inferior a 10 salários mínimos agiram de modo a modificar a relação entre o fator em estudo e o desfecho. No estrato em que essas variáveis modificadoras de efeito não interferiram, verificou-se uma forte associação entre a bactéria e a dermatose (OR=8,0 p""0,023). Não ocorreram diferenças importantes entre casos e controles quanto à presença de distúrbios dispépticos; também não ocorreram diferenças importantes quanto à freqüência de reagência sorológica ao Helicobacter pylori entre os diferentes estágios evolutivos da rosácea. O perfil dos pacientes com rosácea da amostra mostrou-se semelhante aos já descritos na literatura mundial. Conclusão: a freqüência da sorologia reagente para Helicobacter pylori em casos e em controles demonstrou não existir uma forte associação de risco entre o bacilo e a dermatose, exceto quando as variáveis modificadoras de efeito são removidas. Portanto, a principal conclusão do estudo é que, provavelmente, o Helicobacter pylori constitua um fator de risco para a rosácea em determinados grupos de indivíduos. / Background: rosacea is a frequent dermatosis triggered by multiple factors. In recent literature there are authors who indicate Helicobacter pylori as a possible etiological agent of the disease. However, the few studies published on this subject using control patients did not find evidence that this association is important. In Brazil, no studies have been published regarding exposure to Helicobacter pylori in patients with rosacea, and even the general profile of the patients with rosacea in the country is little known. Objectives: the main objective of the study was to assess whether the exposure to Helicobacter pylori constitutes a risk factor for the development of rosacea. The other objectives ofthe study were: to assess a possible difference in the presence of dyspeptic disorders between cases of rosacea and the controls; to analyze whether exposure to Helicobacter pylori occurs homogeneously in the different stages of evolution of rosacea, and; to describe the clinical-epidemiological profile o f rosacea patients. Methodology: a case-control study was perfomed at the Dermatology Service of Hospital de Clínicas de Porto Alegre I Universidade Federal do Rio Grande do Sul, and at Laboratório Faillace (Porto Alegre, RS), in the period from April 15, 1996 to May 18, 1998. The rosacea cases (n=62) were defined according to the clinicai criterion of Marks (1992) and classified according to the criteria ofPlewig and Kligman (1 993). In situations of clinicai doubt, skin biopsies were perfomed, and the histopathology was used to define the diagnoses. The control patients (n= l24) were selected among patients who did not have rosacea, seen at the same Service. Matching was perfomed for age, sex and race, and only patients over 18 years of age were included. The variables measured in both groups were monthly family income, schooling, previous use of systemic medications, presence of dyspeptic disorders and serology (lgG by enzyme immunoassay) for Helicobacter pylori. Bivariate risk analysis and stratified statistical analysis were perfomed. Results: a weak association was found between exposure to Helicobacter pylori and rosacea (OR= l ,41 p=0,367), but stratified analysis showed that the use of previous medications and family in come below 1 O rninimum wages modified the relationship between the factor studied and outcome. In the stratum where these effect-modifying variables did not interfere, a strong association was found between the bacteria nad dermatosis (OR=8,0 p=0,023). No significant ditferences were found as to frequency of serological reaction to Helicobacter pylori among the different evolutionary stages of rosacea. The profile ofthe rosacea patients in the sample proved similar to those already described in world literature. Conclusion: the frequency of serology reagent for Helicobacter pylori in cases and controls showed that there is not strong risk association between the bacillus and dermatosis, except when the effect-modifying variables are removed. Thus, the main conclusion o f the study is that, probably Helicobacter pylori constitues a risk factor for rosacea in certain groups o f individuais.

Orientador: Helio José Montassier / Banca: Ricardo luiz Moro de Sousa / Banca: Rafael Antonio Casarin Penha Filho / Banca: Cintia Hiromi Okino / Banca: Marcos Rogério André / Resumo: A bronquite infecciosa (BI) é uma doença altamente contagiosa que acomete o trato respiratório e urogenital de aves comerciais e que é causada pelo vírus da bronquite infecciosa (VBI) resultando em grandes perdas econômicas para a indústria avícola em todo o mundo. No presente estudo, foram obtidos três isolados de VBI de um lote matrizes de produção rotineiramente vacinado contra BI, em três diferentes idades, sendo que essas aves revelaram-se persistentemente infectadas com o VBI pelo período de 65 semanas em que foram avaliadas. Para tanto, foi realizada para esses três isolados do VBI uma análise molecular e filogenética da região S1 do gene que codifica a glicoproteína da espícula (S) e também foram caracterizadas a antigenicidade, a virulência e o tropismo tecidual através da infecção experimental em pintos livres de patógenos específicos (SPF) e de aves sentinelas, que foram colocadas em contato com as aves experimentalmente infectadas para avaliar o potencial de disseminação destes isolados de VBI. Os resultados revelaram que os três isolados do VBI são geneticamente próximos e sorologicamente relacionados, sendo classificados após a análise filogenética na linhagem 11 do genótipo I (GI-11), anteriormente denominada de genótipo BR-I, além de que esses vírus demonstraram maior tropismo e lesões renais. Foram observadas poucas diferenças em relação à patogenicidade para a traquéia e rins, que podem estar associadas a mutações que ocorreram no gene S1 destes isolados du... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract: Infectious bronchitis (IB) is a highly contagious disease that affects the respiratory and urogenital tract of commercial birds and is caused by infectious bronchitis virus (IBV), resulting in major economic losses to the poultry industry worldwide. In the present study, three isolates of VBI were obtained at three different ages from one set of broiler breeders that were vaccinated against IBV according to a routine protocol, and was persistently infected with IBV for the 65 weeks. A molecular and phylogenetic analysis of the S1 region of the gene coding for the spike glycoprotein (S) was performed for these three isolates. In addition, antigenicity, virulence and tissue tropism were also characterized by experimental infection of specific pathogen free chicks (SPF) and sentinel birds, which were used to assess the potential for dissemination of these IBV isolates. The results showed that the three IBV isolates are genetically and serologically close related, and after phylogenetic analysis they were classified in the BR-I genotype. In addition, these viruses demonstrated greater tropism and lesions for kidneys. There were few differences in pathogenicity for tracheal and renal tissues of experimental infected birds, and these differences may be associated with mutations that occurred in the S1 gene of these isolates during persistent infection. The three IBV isolates from persistently infected broiler breeders retained their ability to infect sentinel birds by contact and caused similar clinical and pathological changes in these birds. In conclusion, IBV isolates of BR genotype I are continuously evolving during the productive cycle of persistent infected broiler breeders, causing outbreaks that are not impeded by the current vaccination program with Massachusetts vaccine strains. In addition, the genetic alteratio... (Complete abstract click electronic access below) / Doutor

Resumo: No presente trabalho, verificou-se a capacidade de produção de basidiosporos produzidos pelos teliossoros telióides de Puccinia pampeana. Avaliou-se a inibição da germinação de esporos de três agentes causais de ferrugem pelas substâncias auto-inibidoras, presentes nas paredes dos teliosporos telióides, e a suscetibilidade de espécies de Capsicum e também outras solanáceas, como jiló e berinjela. Foi constatado, que choques de temperatura (35ºC e 8ºC) por 3 horas, em seguida temperatura continua de 12ºC, não inviabilizam os teliossoros telióides, apenas provocam diferenças no início da produção de basidiosporos. Quando mantidos a 12ºC, e com lavagens diárias dos soros, são capazes de produzir basidiosporos por um período de até 5 meses. Extratos aquosos de esporos (EAE1, EAE2, EAE3, EAE4) preparados com 20 mg de teliosporos telióides, continham quantidades de autoinibidor capazes de inibir teliosporos aecidióides de P. pampeana, e urediniosporos de Coleosporium plumierae e de Hemileia vastatrix, sendo este efeito inibidor na germinação, comprovado mesmo após 6 horas em contato com os extratos. Nos testes de inoculação observou-se, que nem todas as espécies dentro do gênero Capsicum, são suscetíveis, pois algumas apresentaram reação de hipersensibilidade. Como é o caso de C.annuum (pimenta cayenne) e C. chinense (pimenta habañero), que após a formação dos espermogônios (11 dias), aos 15 dias da inoculação, apresentou manchas necróticas na região periférica aos espermogônios, interrompendo a infecção. Também foi observada reação de hipersensibilidade, de forma mais moderada em C. annuum (pimenta serrano) e C. baccatum (chapéu-de-frade) nas folhas, as hastes de ambas as espécies apresentavam estruturas do fungo. Nas outras solanáceas inoculadas: Solanum gillo (jiló) e Solanum melongena (berinjela), não foram ... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract: In the present work, we studied the basidiospore production capacity of telioid teliosori of Puccinia pampeana. We evaluated the spore germination inhibition of three rust causal agents by self-inhibiting substances present in the walls of telioid teliospores, as well as the susceptibility of Capsicum species and other solanaceous plants, such as jiló and eggplant. It was observed that telioid teliosori submitted to temperature shocks (35ºC and 8ºC) for 3 hours and then maintained at 12ºC did not become unviable. The shocks only caused differences in the beginning of basidiospore production. When maintained at 12ºC, with the sori washed daily, they were capable of producing basidiospores for a period of up to 5 months. With regard to spore aqueous extracts (EAE1, EAE2, EAE3, EAE4) prepared with 20 mg of telioid teliospores, they contained quantities of the self-inhibitor that were capable of inhibiting P. pampeana aecidioid teliospores and Coleosporium plumierae and Hemileia vastatrix urediniospores. This inhibiting effect on germination was demonstrated even after 6 hours of contact with the extracts. In inoculation tests, it was observed that not all species within the genus Capsicum are susceptible, since some of them showed a hypersensitivity reaction, such as C. chinense (datil pepper), which, after spermogonia formation (11 days), showed necrotic spots in the peripheral region of the spermogonia at 15 days from inoculation, interrupting the infection. A milder hypersensitivity reaction was also observed in leaves of C. annuum (chili pepper) and C. baccatum (chapéu-de-frade); the stalks of both species showed structures of the fungus. No symptoms or signs of infection were observed in other solanaceous plants inoculated - Solanum gillo (jiló) and Solanum melongena (eggplant) - which demonstrates the specificity of this rust to Capsicum spp. / Orientador: Edson Luiz Furtado / Coorientador: Mário Barreto Figueiredo / Banca: Nilton Luiz de Souza / Banca: Rômulo Fujito Kobori / Mestre

Made available in DSpace on 2014-06-11T19:28:36Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2007-05-10Bitstream added on 2014-06-13T18:34:57Z : No. of bitstreams: 1 passador_mm_me_botfca.pdf: 1114277 bytes, checksum: dbed231b6e9273ff1d6a2ceda569bce9 (MD5) / Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e Tecnológico (CNPq) / No presente trabalho, verificou-se a capacidade de produção de basidiosporos produzidos pelos teliossoros telióides de Puccinia pampeana. Avaliou-se a inibição da germinação de esporos de três agentes causais de ferrugem pelas substâncias auto-inibidoras, presentes nas paredes dos teliosporos telióides, e a suscetibilidade de espécies de Capsicum e também outras solanáceas, como jiló e berinjela. Foi constatado, que choques de temperatura (35ºC e 8ºC) por 3 horas, em seguida temperatura continua de 12ºC, não inviabilizam os teliossoros telióides, apenas provocam diferenças no início da produção de basidiosporos. Quando mantidos a 12ºC, e com lavagens diárias dos soros, são capazes de produzir basidiosporos por um período de até 5 meses. Extratos aquosos de esporos (EAE1, EAE2, EAE3, EAE4) preparados com 20 mg de teliosporos telióides, continham quantidades de autoinibidor capazes de inibir teliosporos aecidióides de P. pampeana, e urediniosporos de Coleosporium plumierae e de Hemileia vastatrix, sendo este efeito inibidor na germinação, comprovado mesmo após 6 horas em contato com os extratos. Nos testes de inoculação observou-se, que nem todas as espécies dentro do gênero Capsicum, são suscetíveis, pois algumas apresentaram reação de hipersensibilidade. Como é o caso de C.annuum (pimenta cayenne) e C. chinense (pimenta habañero), que após a formação dos espermogônios (11 dias), aos 15 dias da inoculação, apresentou manchas necróticas na região periférica aos espermogônios, interrompendo a infecção. Também foi observada reação de hipersensibilidade, de forma mais moderada em C. annuum (pimenta serrano) e C. baccatum (chapéu-de-frade) nas folhas, as hastes de ambas as espécies apresentavam estruturas do fungo. Nas outras solanáceas inoculadas: Solanum gillo (jiló) e Solanum melongena (berinjela), não foram... / In the present work, we studied the basidiospore production capacity of telioid teliosori of Puccinia pampeana. We evaluated the spore germination inhibition of three rust causal agents by self-inhibiting substances present in the walls of telioid teliospores, as well as the susceptibility of Capsicum species and other solanaceous plants, such as jiló and eggplant. It was observed that telioid teliosori submitted to temperature shocks (35ºC and 8ºC) for 3 hours and then maintained at 12ºC did not become unviable. The shocks only caused differences in the beginning of basidiospore production. When maintained at 12ºC, with the sori washed daily, they were capable of producing basidiospores for a period of up to 5 months. With regard to spore aqueous extracts (EAE1, EAE2, EAE3, EAE4) prepared with 20 mg of telioid teliospores, they contained quantities of the self-inhibitor that were capable of inhibiting P. pampeana aecidioid teliospores and Coleosporium plumierae and Hemileia vastatrix urediniospores. This inhibiting effect on germination was demonstrated even after 6 hours of contact with the extracts. In inoculation tests, it was observed that not all species within the genus Capsicum are susceptible, since some of them showed a hypersensitivity reaction, such as C. chinense (datil pepper), which, after spermogonia formation (11 days), showed necrotic spots in the peripheral region of the spermogonia at 15 days from inoculation, interrupting the infection. A milder hypersensitivity reaction was also observed in leaves of C. annuum (chili pepper) and C. baccatum (chapéu-de-frade); the stalks of both species showed structures of the fungus. No symptoms or signs of infection were observed in other solanaceous plants inoculated - Solanum gillo (jiló) and Solanum melongena (eggplant) - which demonstrates the specificity of this rust to Capsicum spp.

Made available in DSpace on 2014-06-11T19:32:55Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2013-07-04Bitstream added on 2014-06-13T20:44:18Z : No. of bitstreams: 1 martins_pmm_dr_rcla.pdf: 973158 bytes, checksum: 8092208107da6d0372b2a5093d8b6213 (MD5) / A citricultura é uma das atividades mais importantes do setor agrícola brasileiro. Ainda assim, a incidência de doenças como o cancro cítrico afeta sobremaneira a produtividade dos pomares. Seu agente etiológico, a bactéria Xanthomonas citri subsp. citri (Xac) é capaz de infectar todas as espécies cultivadas, não havendo cura para plantas afetadas. Assim, dados a respeito de seus processos biológicos básicos poderiam auxiliar a vislumbrar soluções para esta enfermidade. Assim, visamos com este trabalho obter informações sobre a formação do septo em Xac, processo do qual participa a proteína ZapA e cujas perturbações têm alto potencial de interferência na multiplicação da bactéria e, portanto, em seu controle. Três estratégias foram utilizadas para esta determinação: 1) estudo de interactantes de ZapA através de ensaio de duplo-híbrido em leveduras; 2) análise do perfil de expressão global de um mutante produzindo cópias extras de ZapA, com a identificação de vias possivelmente por ela influenciadas; e 3) disrupção de ZapA e XAC3407, para averiguar sua interferência no estabelecimento de infecção in planta, sendo XAC3407 um possível novo componente septal a ser descrito em Xanthomonas spp. Embora aparentemente os resultados não apontem para um envolvimento direto entre ZapA e a expressão do fenótipo virulento de Xac, os processos celulares nos quais esta proteína parece atuar diretamente são bastante variados, incluindo aqueles relativos à percepção de estresse, regulação da montagem do flagelo, citoesqueleto e biossíntese de componentes do envelope celular. Todos estes elementos são discutidos caso a caso neste trabalho, na tentativa de que possam lançar luz no conhecimento acerca da biologia básica de Xac / Citriculture is one of the most important activities of Brazilian agricultural sector. Even though, the incidence of diseases such as citrus canker affects drastically the orchards productivity. Its etiologic agent, the bacterium Xanthomonas citri subsp. citri (Xac) is able to infect all citric cultivars, without any treatment to the diseased plants until now. That’s the reason why new data concerning the basic biological processes of Xac can be enormously useful to provide insight on its control. What we sought with this work was to assess new information on Xac’s septum formation, a process where the protein ZapA is involved and which impairment has a high potential for disturbing the bacterium growth and, consequently, be useful for control purposes. Three approaches were used for us to reach these goals: 1) the study of ZapA interactants by an yeast-two-hybrid assay; 2) analysis of the expression profile of a mutant strain with extra copies of ZapA, allowing the identification of biochemical pathways possibly influenced by this protein; and 3) depletion of ZapA as well as of XAC3407, to assess its interference during infection establishment in planta, being XAC3407 a possible new septal component to be described in Xanthomonas spp. Although our data seems not to support any involvement of ZapA in the virulent phenotype of Xac, the protein-protein interactions and pathways in which it is enrolled are as broad as stress perception, flagellum assembly regulation, cytoskeleton and cell envelope biosynthesis. All these elements are discussed in this work in the hope that it may shed light on the current knowledge of Xac’s basic biology

Orientador: Antonio de Goes / Coorientador: Andressa de Souza Pollo / Banca: Daniel Rufino Amaral / Banca: Rita de Cássia Panizzi / Resumo: O clima tropical brasileiro propicia o desenvolvimento de inúmeras doenças fúngicas nas culturas produzidas, incluindo as fruteiras tropicais. O Brasil é um grande produtor de frutas, incluindo goiaba e manga, que são inclusive exportadas para outros países. Além das doenças conhecidas que incidem sobre essas culturas, sintomas atípicos têm sido observados em condições de campo, sem relação específica com patógenos já identificados. Assim, este trabalho teve por objetivo isolar fungos de tecidos lesionados de frutos, folhas e ramos de goiabeiras, assim como de folhas de mangueiras para estabelecer suas relações parasitárias e identificá-los molecularmente. Foram obtidos 25 isolados de goiabeiras de três municípios e dois isolados de mangueiras de um município do Estado de São Paulo. Os isolados tiveram sua região ITS rDNA (Internal Transcribed Spacer) e a região parcial do gene TEF1 (translation elongation factor 1-alpha) sequenciadas, o que proporcionou a identificação acurada dos isolados, em gênero. Os isolados de goiabeiras foram identificados como Neopestalotiopsis spp., sendo esse o primeiro relato em goiabeiras, e os isolados de mangueiras foram agrupados juntamente com as espécies Pseudopestalotiopsis theae e Pestalotiopsis trachicarpicola, sendo este também o primeiro relato dessas espécies em mangueiras. Os isolados de goiabeiras e de mangueiras foram inoculados em folhas destacadas de goiabeira 'Paluma', em condições de laboratório, com ferimento e sem ferimento. E... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract: The Brazilian tropical climate promotes the development of numerous fungal diseases in the crops produced in the country, including tropical fruit crops. Brazil is a major producer of fruits, including guava and mango, which are even exported to other countries. Besides the known diseases that affect these crops, atypical symptoms have been observed under field conditions, with no specific relation to pathogens already identified. Thus, this work aimed to isolate fungi from such lesions of fruits, leaves and branches of guava plants, as well as from leaves of mango plants to identify them molecularly and prove their symptomatic association with such crops. We obtained 25 isolates from guava plants located in three municipalities and two isolates from mango plants located in one municipality of São Paulo state. These isolates were submitted to sequencing of ITS rDNA region (Internal Transcribed Spacer) and the partial TEF1 gene (translation elongation factor 1-alpha), which provided the accurate identification of the isolates in genus. The isolates from guava plants were identified as Neopestalotiopsis spp. It is the first report of this genus in guava. Moreover, the isolates from mango plants were grouped with the species Pseudopestalotiopsis theae and Pestalotiopsis trachicarpicola. It is also the first report of these species in mango trees. Guava and mango isolates were inoculated on 'Paluma' guava leaves under laboratory conditions, with injury and without injury. In addition, the isolates from mango plants were inoculated on detached leaves of 'Tommy Atkins' mango. The isolates were able to cause symptoms similar to those from which they came in greater severity in wounded leaves. However, the isolates of Neopestalotiopsis spp. were also capable of causing symptoms on intact leaves. Thus, it was concluded that new genotypes of fungi are asso... (Complete abstract click electronic access below) / Mestre