Fundação Norte-Rio-Grandense de Pesquisa e Cultura / The medicinal plants have been widely used in recent decades for therapeutic, driven by the high cost of industrialized pharmaceutical products. Among the great diversity of medicinal plants found in Brazil, is the |sambacaitá| or |canudinho| (Hyptis pectinata L. Poit), which stands out for its wide use in the treatment of bacterial infections, pain and inflammation. The intense extraction of medicinal plants has made several species enter in extinction. Therefore it is necessary to understand the mechanisms of plants for adaptation of cultivation techniques and vegetative propagating that aim sustainability and large scale production. In this context, the aim of this work was to realize a phenologic study to evaluate the influence of cattle manure and cutting heights and establish a protocol for micropropagation of H. pectinata. For the phenology study we realized evaluations weekly on plants with and without irrigation. To evaluate the influence of cattle manure and cutting heights, the experiment was arranged in a randomized block design, using split plot scheme, placing cattle manure doses in the plots and cutting heights of plants in the in the split plots. In the micropropagation assays we tested different concentrations of growth regulators. Finally, for the acclimatization assay we tested different substrates containing coconut coir and / or vermiculite. For the conditions of the Sergipe State it was observed that the beginning of flowering of H. pectinata plants occurs in late July, that is the rainy season, that in early October occurs the seed dispersion and from late October the plants enter in senescence. It is noted that H. pectinata is an annual plant. H. pectinata supports three harvests and cutting at 20 cm from the ground resulted in better regrowth. The organic manure is not a limiting factor for the growth of H. pectinata. The accessions SAM-016, SAM-017 and SAM-018 of H. pectinata can be micropropagated in medium containing 50% of MS salts without using growth regulators. The acclimatization of plantlets can be performed in coconut coir substrate + 1g.L-1 of lime stone + MS salts. / As plantas medicinais vêm sendo amplamente utilizadas nas últimas décadas com finalidades terapêuticas, impulsionadas pelo alto custo dos produtos farmacêuticos industrializados. Dentre a grande diversidade de plantas medicinais existentes no Brasil, está o sambacaitá ou canudinho (Hyptis pectinata L. Poit), que se destaca por sua ampla utilização nos tratamentos de infecções bacterianas, dores e inflamações. O intenso extrativismo das plantas medicinais tem feito diversas espécies entrarem em extinção. Por isso é necessário o entendimento dos mecanismos das plantas para a adequação de técnicas de cultivo e de propagação vegetativa que visem à sustentabilidade e a produção em larga escala. Nesse contexto, esse trabalho teve como objetivo, realizar o estudo fenológico, avaliar a influência de doses de esterco bovino e alturas de corte e estabelecer um protocolo de micropropagação de H. pectinata. Para o estudo da fenologia foram feitas avaliações semanais em plantas com e sem irrigação. Para avaliar a influência de doses de esterco bovino e alturas de corte, o experimento foi montado em blocos casualizados, usando esquema de parcelas subdivididas, colocando-se nas parcelas as doses de esterco, e nas subparcelas, as alturas de cortes da planta. Nos ensaios de micropropagação foram testados diferentes concentrações de reguladores de crescimento. Por fim, para o ensaio de aclimatização foram testados diferentes substratos contendo pó de coco e/ou vermiculita. Para as condições do Estado de Sergipe observou-se que o início da floração das plantas de H. pectinata, ocorre no final de julho, na estação chuvosa, que no início de outubro ocorra à dispersão das sementes, a partir de final de outubro as plantas entram em senescência. Notou-se que a H. pectinata é uma planta anual. H. pectinata suporta três colheitas e o corte a 20 cm do solo resultou em melhor rebrota. A adubação orgânica não é fator limitante para o cultivo de H. pectinata. Os acessos SAM-016, SAM-017 e SAM-018 de H.pectinata pode ser micropropagado em 50% dos sais do MS na ausência de regulador de crescimento. A aclimatização das mudas micropropagadas pode ser realizada no substrato pó de coco + 1g.L-1 de calcário + sais do MS.

Made available in DSpace on 2014-08-20T13:59:07Z (GMT). No. of bitstreams: 1 tese_ilda_mariclei_de_castro_da_silva.pdf: 1329611 bytes, checksum: a99573a2ac01311a53266115797bd1b2 (MD5) Previous issue date: 2013-10-29 / In Brazil, among the temperate climate fruit, the pear (Pyrus sp.) is the third more commonly consumed although most of it is imported (95%) as its cultivation is still in small-scale. The lack of cultivars adapted to the soil and climate conditions of potentially productive regions is the main obstacle for its sustainable production, as these cultivars need to be apt to produce in regularly, with a considerable quality and amount to supply the demand of the of the internal market. Mutation induction techniques, such as the use of gamma radiation, have been quite efficient in the production of genetic variability and, thus, are very used in improvement programs of several species of plants. In pear trees, due to the little genetic variability, long cycles and cross-pollination, characteristics which make it more difficult to obtain new cultivars through the conventional improvement, the usage of the gamma radiation may fulfill these difficulties. This technique, along the tissue culture is an alternative which enables the development of specific cultivars, in a short term, in large scale and with a high health quality. However, to help the usage of in vitro propagation it is necessary to obtain propagation protocols. In this context, the present work aimed to optimize the in vitro and ex vitro cultivation of three pear cultivars (Pyrus sp.): Carrick, Ya-Li and Cascatense (a cultivar recently launched by the Genetic Improvement Program from Embrapa Temperate Climate), in order to foster its production and the mutations induction, aiming to select new genotypes with interest characteristics, from the original genotypes. The study was conducted in experiments which focused on multiplying in vitro the cultivar mentioned above, as well as radiate and, from this, micropropagation the cv. Ya-Li. For the carrying out of the experiments, nodal segments were used (1,0 cm) with two to three axilliary gems. To reach an efficient protocol of multiplication in vitro, the explants were inoculated in different cultivation means and salt concentrations, BAP and sucrose. To check the effects of different dosage of gamma radiation (0, 10, 20, 30 and 40 Gy) during the micropropagation, were carried experiments out of multiplication and rooting in vitro and aclimmatization. The results obtained showed that the multiplication in vitro of the cultivar Carrick can be fostered by using MS commercial Himédia, with supplementation of 1,2 mg L-1 of BAP and 30 g L-1 of sucrose, while the most appropriate mean for the multiplication in vitro of the cultivar Ya-Li is the MS, with 1,2 mg L-1 of BAP and 45 g L-1 of sucrose. For the Cascatense‟, the MS Himédia, supplemented by 0,8 mg L-1 of BAP and 30 g L-1 of sucrose presented the best responses. Concerning the use of irradiation, the gamma radiation led to morphological changes in the explants of the cultivar Ya-Li, during the micropropagation, being that these might be due to epigenetic and/or genetic (inheritable) changes. Thus, based on the results of this study, due to obtaining high rates of in vitro multiplication from the optimization of protocols, it appears that is possible to multiply the three cultivars on a large scale, as well as possible to obtain mutants of cv. Ya-Li via gamma radiation. However, to determine whether the morphological changes found are positive or negative and is transmitted by the progeny, although future research is needed in the materials obtained. / No Brasil, entre as frutas de clima temperado, a pera (Pyrus sp.) é a terceira mais consumida, porém, a maior parte é importada (95%), pois seu cultivo ainda é pequeno. A falta de cultivares adaptadas às condições edafoclimáticas das regiões potencialmente produtoras são os principais obstáculos à sua produção sustentável, em vista que estas cultivares necessitam estar aptas a produzir em quantidade e qualidade e com regularidade para suprir a demanda do mercado interno. Técnicas de indução de mutação, como o uso de radiação gama, têm se mostrado eficientes na produção de variabilidade genética e, por isso, muito utilizadas em programas de melhoramento de várias espécies de plantas. Em pereira, devido a pouca variabilidade genética, ciclos longos e alogamia, características estas que dificultam a obtenção de novas cultivares através do melhoramento convencional, a utilização da radiação gama pode suprir estas dificuldades. Esta técnica, acoplada à cultura de tecidos é uma alternativa que permite o desenvolvimento de cultivares específicas, em um curto espaço de tempo, em larga escala e com alta qualidade sanitária. Porém, para viabilizar a utilização da propagação in vitro se faz necessária a obtenção de protocolos de propagação. Neste contexto, o trabalho teve como objetivo otimizar o cultivo in vitro de três cultivares de pereira (Pyrus sp.): Carrick, Ya-Li e Cascatense (cultivar lançada recentemente pelo Programa de Melhoramento Genético da Embrapa Clima Temperado), visando potencializar sua produção e a indução de mutações, almejando selecionar novos genótipos com características de interesse, a partir dos genótipos originais. O estudo foi conduzido em experimentos que buscaram multiplicar in vitro as cultivares acima citadas, bem como irradiar e, a partir disso, micropropagar a cv. Ya-Li. Para a realização dos experimentos foram utilizados segmentos nodais (1,0 cm) contendo de duas a três gemas axilares. Visando a obtenção de um protocolo eficiente de multiplicação in vitro, os explantes foram inoculados em diferentes meios de cultivo e concentrações de sais, BAP e sacarose. Para verificar os efeitos de diferentes doses de radiação gama (0, 10, 20, 30 e 40 Gy) durante a micropropagação, foram realizados experimentos de multiplicação e enraizamento in vitro e aclimatização. Os resultados obtidos evidenciaram que a multiplicação in vitro da cultivar Carrick pode ser potencializada com o uso do meio MS Himédia comercial, com suplementação de 1,2 mg L-1 de BAP e 30 g L-1 de sacarose, enquanto que o meio mais adequado para a multiplicação in vitro da cultivar Ya-Li é o MS, com 1,2 mg L-1 de BAP e 45 g L-1 de sacarose. Para a Cascatense‟, o MS Himédia, suplementado de 0,8 mg L-1 de BAP e 30 g L-1 de sacarose foi o que apresentou melhores respostas. Em relação ao uso de irradiação, a radiação gama induziu alterações morfofisiológicas nos explantes da cultivar Ya-Li, durante a micropropagação, sendo que estas podem ser devido a variações epigenéticas e/ou genéticas (herdáveis). Desta forma, baseando-se nos resultados do presente estudo, devido à obtenção de altas taxas de multiplicação in vitro a partir da otimização dos protocolos, verifica-se que é possível multiplicar as três cultivares em larga escala, bem como obter possíveis mutantes da cv. Ya-Li via irradiação com raios gama. Porém, para determinar se as alterações morfofisiológicas encontradas são positivas ou negativas e se transmitem pela progênie, ainda se fazem necessárias pesquisas futuras nos materiais obtidos.

Made available in DSpace on 2014-08-20T13:59:12Z (GMT). No. of bitstreams: 1 dissertacao_ilda_castro_silva.pdf: 4362339 bytes, checksum: bf7e02c52f488cce4b322ad0f90ed17c (MD5) Previous issue date: 2010-03-25 / Quinces (Cydonia oblonga Mill.) are good alternative for pear tree rootstock diversification, due the interest to control the plants development to obtain fast frutification, plants uniformity and higher fruit quality. Their propagation through the tissue culture allows the plant production in a large scale, with high sanitary in a short period of time. Another application of this technique is the regeneration or in vitro morphogenesis that consists in the organs induction by somatic embryogenesis or organogenesis, which is a pre-requirement for genetic transformation. The current work aimed at optimizing the multiplication and in vitro regeneration of Cydonia oblonga Mill. rootstocks, cultivars Adams and MC. For the multiplication experiments were used apicals shoots with excised tip (1,5cm), and inoculated in MS½ and MS¾ or MS medium modified (¾ of the normal concentration of NH4NO3 and KNO3 and EDTA-Ferric), containing different BAP concentrations or interaction among BAP and AG3 concentrations. The explants were maintained in growth chamber with 16h photoperiod, 48 μmol m-2 s-1 density photon flux and 25±2ºC temperature, for 40 days. The variables analyzed were shoots number per explants, shoots length, node number per shoot and percentage of hyperhydric shoots. In the regeneration experiments it was used as initial explants entire leaves or third basal leaves, young or adult leaves, with or without petiole, inoculated in MS medium, supplemented with TDZ (0, 1, 2, 3 and/or 4mg dm-3) and ANA (0,1mg dm-3), maintained in darkness for 40 days. Later, they were transferred to MS medium containing 1mg dm-3 TDZ and maintained in the light for 30 days more. After that period, the percentage of regenerate explants, the shoots number for regenerate explant and type of organogenesis formed was evaluated. Both cultivars present potential for in vitro propagation, however 'Adams' is more responsive, because it was obtained 6,3 shoots per explant, with 2,8mg dm-3 BAP, while ' MC' presents larger sensibility to this plant growth regulator and to develop the hyperhydric explants, however it demonstrated to be more efficient to the in vitro regeneration, presenting 26% of regenerating explants (with 1mg dm-3 TDZ). It was verified for both cultivars, the entire explant leaves were more responsive for the regeneration than basal thirds and that this happens mainly in the basal area of the explant, through direct and 9 indirect organogenesis. Based on the multiplication and the regeneration results, it was concluded that is possible the in vitro multiplication of these cultivars in large scale, as well as to improve the regeneration rates for future plant breeding works for characteristics of interest, through genetic transformation. / Os marmeleiros (Cydonia oblonga Mill.) são excelente alternativa de diversificação de porta-enxertos para pereiras, devido ao interesse por plantas com porte reduzido, rápida frutificação, uniformidade nos pomares e boa qualidade das frutas. A sua propagação por meio da cultura de tecidos permite a produção de plantas homogêneas, em larga escala, com alta qualidade sanitária e num curto espaço de tempo. Outra aplicação desta técnica é a regeneração ou morfogênese in vitro, que consiste na formação de órgãos, seja por meio de embriogênese somática ou organogênese, sendo esta um pré-requisito para a transformação genética. O presente trabalho teve como objetivo otimizar a multiplicação e regeneração in vitro dos porta-enxertos de Cydonia oblonga Mill., cultivares Adams e MC. Para os experimentos de multiplicação foram utilizadas brotações apicais com ápice excisado (1,5cm), inoculadas em meio MS½ e MS¾ ou MS modificado (¾ da concentração normal de NH4NO3 e KNO3 e Ferro na forma de EDTA-Férrico), contendo diferentes concentrações de BAP ou interação entre BAP e AG3, mantidas em câmara de crescimento com fotoperíodo de 16 horas, 48 μmol m-2 s-1 e 25±2ºC de temperatura por 40 dias. Após, analisaram-se as variáveis: número de brotações por explante, comprimento das brotações, número de nós por brotação e percentagem de explantes com hiperidricidade. Nos experimentos de regeneração utilizou-se como explante inicial folhas inteiras ou terços basais, jovens ou adultas, com ou sem pecíolo, inoculados em meio MS, suplementados com TDZ (0, 1, 2, 3 e/ou 4mg dm-3) e ANA (0,1mg dm-3), permanecendo no escuro por 40 dias. Posteriormente, foram transferidos para meio MS contendo 1mg dm-3 de TDZ e mantidos na luz por mais 30 dias. Após esse período, avaliou-se a percentagem de explantes regenerados, o número de brotações por explante regenerante e tipo de organogênese formada. As duas cultivares estudadas apresentam potencial para a propagação in vitro, porém Adams foi mais responsivo, pois obteve-se 6,3 brotações por explante, com 2,8mg dm-3 de BAP, enquanto MC apresenta maior sensibilidade a altas concentrações deste regulador de crescimento e à vitrificação, porém demonstrou ser mais eficiente durante a regeneração in vitro, apresentando 7 valores aproximados de 26% de explantes regenerantes (utilizando 1,0mg dm-3 de TDZ). Para ambas cultivares, o explante folha inteira é mais responsivo à regeneração do que terços basais e que esta ocorre principalmente na região basal do explante, via organogênese direta ou indireta. Baseado nos resultados obtidos tanto na fase de multiplicação quanto na de regeneração, verifica-se que é possível multiplicar in vitro estas cultivares em larga escala, bem como melhorar as taxas de regeneração para futuros trabalhos de melhoramento para características de interesse, via transformação genética.

Made available in DSpace on 2014-08-20T14:22:03Z (GMT). No. of bitstreams: 1 tese_mateus_silveira_pasa.pdf: 859976 bytes, checksum: f2ff90aef57af32f1bbedd20e9ba4218 (MD5) Previous issue date: 2014-01-17 / Excessive vegetative growth is a major concern among pear growers because it results in serious negative effects in the orchard, such as increased pruning costs, shading of the inner parts of the canopy, poor fruit quality and difficult pest control. The use of plant growth regulators [e.g. Prohexadione calcium (PCa)] is one of the most promising techniques currently available to manage vegetative growth in pears. PCa reduces shoot growth by blocking the biosynthesis of the plant hormone gibberellin, which regulates longitudinal shoot growth. The aim of this study was, therefore, to evaluate the productive and vegetative responses of various pear cultivars to PCa. Three trials were carried out: Trial 1) PCa was applied to d Anjou pear trees in the lower and upper Hood River Valley, Oregon, USA to determine its effectiveness for managing the excessive vigor of d Anjou under different growing climates, with PCa rates ranging from 125 to 250 mg L-1. Ethephon was also applied (150 and 300 mg L-1) as an attempt to improve flower bud differentiation; Trial 2) PCa was selectively applied to dormant-headed (1/3rd removed) and unpruned shoots in a high-density d Anjou pear orchard in Oregon, USA. Both sets of shoots were treated with 250 mg L-1 P-Ca in either a single or double application; Trial 3) PCa was applied to Carrick , Packham s and William s pear in the experimental field of Federal University of Pelotas, RS, Brazil. Trees were treated with 750 g ha-1 i.a. PCa, which was split in four (187.5 g ha-1 a.i. each) and three timings (250 g ha-1 a.i. each) in the 2011 and 2012 growing seasons, respectively. The most important results are presented separated for each trial. Trial 1) P-Ca was effective for reducing shoot elongation at multiple sites over several growing seasons. In one case, the added benefits of increased fruit set and yield were also observed. However, the consistent reduction in return bloom and its translation to lower return yields, not previously documented for d Anjou , counteracts these benefits. Ethephon showed potential to ameliorate the activity of P-Ca on return bloom and production but it requires further investigation. Trial 2) At the end of the season, unpruned shoot length was decreased by 28% and 41% for shoots treated with P-Ca once and twice, respectively, while headed shoots were 37% shorter than their controls (treated only once). The number of nodes and average internode length were significantly reduced for P-Ca-treated shoots, irrespective of pruning level, conferring a higher node density relative to control shoots. These results implicate P-Ca as a powerful tool for precision-management of tree vigor in intensive pear plantings via selective treatment to areas of high vigor. Trial 3) The application of PCa at 750 g. ha-1 a.i satisfactorily controls shoot growth through the reduction of internode length of Carrick , Packham s and William s pears. Besides, it was observed that return bloom is not negatively affected by PCa. So, this plant growth regulator is a promissing management tool to reduce shoot growth and the need for pruning in pear orchards. / O excesso de crescimento vegetativo é uma das principais preocupações dos produtores de pera porque resulta em sérios efeitos negativos no pomar, como alto custo de poda, sombreamento da parte interna da copa, baixa qualidade de frutas e dificuldade no manejo de pragas e doenças. A utilização de fitorreguladores [e.g. Prohexadiona cálcio (PCa)] é uma das alternativas mais promissoras para manejar o crescimento vegetativo de pereiras. PCa reduz o crescimento de ramos através do bloqueio da biossíntese do hormônio vegetal giberelina, a qual regula o crescimento longitudinal dos ramos. O objetivo do presente estudo foi, portanto, de avaliar as respostas produtivas e vegetativas de várias cultivares de pereira em função da PCa. Três experimentos foram conduzidos: Experimento 1) PCa foi aplicado em pereiras d Anjou localizadas em regiões de baixa e alta altitude do Hood River Valley, Oregon, USA, para determinar a sua efetividade no manejo do crescimento vegetativo excessivo em diferentes condições climáticas, com doses de PCa variando de 125 a 250 mg L-1. O fitorregulador Etefon também foi aplicado (150 e 300 mg L-1) como uma tentativa de melhorar a diferenciação floral; Experimento 2) PCa foi seletivamente aplicado em ramos despontados no período de dormência (1/3 removido) e não podados em um pomar em alta densidade de pereiras d Anjou em Oregon, USA. Ambos os conjuntos de ramos foram tratados com 250 mg L-1 i.a. P-Ca, o qual foi aplicado uma ou duas vezes; Experimento 3) PCa foi aplicado em pereiras Carrick , Packham s e William s no campo experimental da Universidade Federal de Pelotas, RS, Brasil. As plantas foram tratadas com 750 g ha-1 a.i. PCa, o qual foi parcelado em quatro (187,5 g ha-1 i.a. cada) e três vezes (250 g ha-1 i.a. cada) nas safras de 2011 e 2012, respectivamente. Os resultados mais importantes são apresentados separadamente para cada experimento. Experimento 1) P-Ca foi eficiente na redução do crescimento de ramos nos diferentes locais e em diferentes safras. Em uma das safras, também foi observado aumento na frutificação efetiva e produtividade. No entanto, a consistente redução no retorno da floração, que resultou em menores retornos de produtividade, a qual não foi relatada anteriormente para d Anjou , neutraliza esses benefícios. Etefon mostrou potencial para melhorar os efeitos do PCa no retorno da floração e produção, mas isso requer estudos adicionais. Experimento 2) No final da estação de crescimento, o comprimento dos ramos não despontados foi reduzido em 28% e 41%, quando tratados com PCa uma e duas vezes, respectivamente, enquanto que os ramos despontados foram 37% menores (tratados apenas uma vez com PCa) do que o controle. O número de entrenós e comprimento médio dos entrenós foram significativamente reduzidos nos ramos tratados com PCa, independentemente do tipo de poda, conferindo uma maior densidade de entrenós em relação aos ramos controle. Esses resultados mostram que o PCa é uma potente ferramenta para o manejo preciso do vigor das plantas em pomares conduzidos em alta densidade através do tratamento seletivo de áreas com vigor excessivo. Experimento 3) A aplicação de PCa na dose de 750 g. ha-1 i.a. controla satisfatoriamente o crescimento de ramos das pereiras Carrick , Packham s e William s , através da redução no comprimento médio dos entrenós. Além disso, foi observado que o retorno da floração não é negativamente afetado pela aplicação do PCa. Dessa forma, esse fitorregulador é uma ferramenta de manejo promissora para reduzir o crescimento de ramos e a necessidade de poda de pomares de pereira.

O. catharinensis e O. odorifera são árvores originárias da Mata Atlântica. Historicamente estas espécies foram intensamente exploradas e atualmente encontram-se vulneráveis de extinção. A embriogênese somática é uma ferramenta de grande potencial na reprodução de espécies de difícil propagação. No presente trabalho analisou-se o efeito dos meios de cultura MS e WPM e de diferentes de ANA e 2,4-D na indução da embriogênese somática nessas espécies. Em O. catharinensis a combinação WPM + 2,4-D mostrou-se mais efetiva na indução de calos. Resultados mais expressivos foram observados no tratamento WPM + 144µM 2,4-D. Os piores índices de indução foram obtidos no meio MS + 2,4-D. Em O. odorifera não foi utilizado o meio MS. Nesta espécie, mais importante do que o tipo do regulador de crescimento foi sua concentração. Maiores percentuais de calos foram observados em concentrações mais elevadas desses reguladores. WPM + ANA mostrou-se bastante efetivo em O. odorifera, ao contrário do que foi observado em O. catharinensis, onde os resultados foram pouco expressivos. / O. catharinensis and. O. odorifera are originary trees of the brazilian Rain Forest. Historically these species had been intensely explored and are currently considered vulnerable of extintion. Somatic embryogenesis is a tool of great potential in the reproduction of species of difficult propagation. In the present work was analyzed the effect of MS and WPM and different concentrations of ANA and 2,4-D in the iniciation of somatic embryogenesis in this species. In O. catharinensis WPM + 2,4-D revealed more effective in the induction of callus. More expressive results had been observed in the treatment WPM + 144µM 2,4-D. The worse rates of induction had been observed at the combination MS + 2,4-D. In O. odorifera the MS medium was not used. In this specie more important of what the type of the growth regulator was its concentration. Higher rates of callus had been observed at higher concentrations of these regulators. WPM + ANA revealed effective in O. odorifera, in contrast of what was observed in O. catharinensis, where the results had been little expressive.

Submitted by Ricardo Cedraz Duque Moliterno (ricardo.moliterno@uefs.br) on 2016-08-24T20:52:09Z No. of bitstreams: 1 Disserta??o Final_Fl?via_PPGRGV (2).pdf: 1857571 bytes, checksum: 967f2b7d728622a11a98a803f13ff0de (MD5) / Made available in DSpace on 2016-08-24T20:52:09Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Disserta??o Final_Fl?via_PPGRGV (2).pdf: 1857571 bytes, checksum: 967f2b7d728622a11a98a803f13ff0de (MD5) Previous issue date: 2015-03-20 / Coordena??o de Aperfei?oamento de Pessoal de N?vel Superior - CAPES / Hyptis ramosa Pohl ex Benth (Lamiaceae) is native and endemic to the semi-arid northeast, with its unknown phytochemical constitution so far. Considering the pharmacological importance of the species of this family, the development of forms of propagation and in vitro culture can contribute to the inclusion of these species in sustainable production systems and the conservation of the same. Thus, the objective of this work was to study the in vitro propagation of the species H. ramosa, through direct organogenesis and callus formation, and the biochemical characterization of the obtained calluses, thus allowing the establishment of strategies for their conservation and sustainable use. To this, H. ramosa seeds were disinfected and established in medium MS / 2 culture. In the multiplication phase was tested the influence of cytokinins BAP, CIN and TDZ on different explants. The obtained shoots were individualized and transferred to MS / 2 medium containing different concentrations of auxin IBA and activated carbon for rooting them. Regenerated and rooted in vitro microplants were subjected to pre-acclimatization in different cultivation container closure and then were transferred to ex vitro conditions in commercial substrate Plantmax? being quantified plant survival rate at 30 days after transfer. For callus induction, we used explants and different concentrations of 2,4-D and BAP, determining the growth curve from the fresh weight of callus until the 28th day of cultivation, at intervals of seven days. Concurrent with obtaining the growth curve it is quantified in calluses obtained the total soluble sugar content, reducing sugar and crude protein. The in vitro propagation of H. ramosa is possible using the nodal segment as a source of explants in MS medium supplemented with BAP. In vitro rooting occurs, even in free auxin. The species showed survival of 100%, regardless of the day of pre-acclimatization phase. For callus induction the best explant is the nodal segment, and the combination of 2.4-D and BAP favor the formation of the same. The callus growth curve showed quadratic behavior with two different phases and biochemical analysis showed the maximum level of total soluble sugars, reducing sugars and crude protein at 14 ?, 21 ? and 14 ? days, respectively. / Hyptis ramosa Pohl ex Benth (Lamiaceae) ? uma esp?cie nativa e end?mica do semi?rido nordestino, sendo sua constitui??o fitoqu?mica desconhecida at? o momento. Considerando a import?ncia farmacol?gica das esp?cies dessa fam?lia, o desenvolvimento de formas de propaga??o e cultivo in vitro poder? contribuir para a inser??o dessas esp?cies em sistemas de produ??o sustent?veis e a conserva??o das mesmas. Diante disso, o objetivo deste trabalho foi estudar a propaga??o in vitro da esp?cie H. ramosa, atrav?s de organog?nese direta e calog?nese, bem como a caracteriza??o bioqu?mica dos calos obtidos, permitindo assim o estabelecimento de estrat?gias para a sua conserva??o e explora??o sustent?vel. Para isso, sementes de H. ramosa foram desinfestadas e estabelecidas em meio de cultura MS/2. Na fase de multiplica??o foi testada a influ?ncia das citocininas BAP, CIN e TDZ sobre diferentes explantes. As brota??es obtidas foram individualizadas e transferidas para meio MS/2 contendo diferentes concentra??es da auxina AIB e de carv?o ativo para o enraizamento das mesmas. As microplantas regeneradas e enraizadas in vitro foram submetidas ? pr?-aclimatiza??o em diferentes tipos de fechamento do recipiente de cultivo e, posteriormente, foram transferidas para a condi??o ex vitro em substrato comercial Plantmax?, sendo quantificada a taxa de sobreviv?ncia das plantas aos 30 dias ap?s a transfer?ncia. Para a indu??o de calos utilizou-se diferentes explantes e concentra??es de 2,4-D e BAP, determinando-se a curva de crescimento a partir da mat?ria fresca dos calos at? o 28o dia de cultivo, em intervalos de sete dias. Concomitante com a obten??o da curva de crescimento quantificou-se nos calos obtidos o teor de a??cares sol?veis totais, a??cares redutores e prote?na bruta. A propaga??o in vitro de H. ramosa ? poss?vel utilizando-se o segmento nodal como fonte de explante, em meio de cultura MS suplementado com BAP. O enraizamento in vitro ocorre, mesmo em meio isento de auxina. A esp?cie apresentou sobreviv?ncia de 100%, independentemente da realiza??o da fase de pr?-aclimatiza??o. Para indu??o de calos o melhor explante ? o segmento nodal, sendo a combina??o de 2.4-D e BAP favor?vel a forma??o dos mesmos. A curva de crescimento de calos mostrou comportamento quadr?tico com duas fases distintas e a an?lise bioqu?mica evidenciou o teor m?ximo de a??cares sol?veis totais, a??cares redutores e prote?na bruta aos 14?, 21? e 14? dias, respectivamente.

Inseticidas e fungicidas geralmente são estudados quanto a sua eficiência no controle de pragas e doenças, entretanto podem provocar efeitos fisiológicos pouco conhecidos capazes de influenciar o desenvolvimento das culturas. O tiametoxam é um inseticida sistêmico do grupo dos neonicotinóides, da família nitroguanidina, que atua no receptor nicotínico acetilcolina de insetos, danificando o sistema nervoso dos mesmos, levando-os à morte. Este inseticida, largamente utilizado no controle de pragas iniciais e insetos sugadores, apresenta efeito bioativador, uma vez que mesmo na ausência da pragas, promove aumento em vigor e desenvolvimento nas plantas tratadas. Acredita-se que os efeitos do tiametoxam em plantas são indiretos, pois atuam na expressão dos genes responsáveis pela síntese e ativação de enzimas metabólicas, relacionadas ao crescimento da planta, alterando a produção de aminoácidos e precursores de hormônios vegetais. Existem alguns trabalhos com tiametoxam com o objetivo de verificar seus efeitos no metabolismo e desenvolvimento das plantas, mas os resultados ainda não são claros, evidenciando forte interação entre cultivares, épocas, condições de estresse e disponibilidade de nutrientes. Em função da grande utilização do inseticida tiametoxam na agricultura brasileira, o estudo deste agroquímico, no sentido de alterar o metabolismo e desenvolvimento de plantas, constitui-se de grande importância na agregação de informações à literatura biológica e agronômica. Os objetivos deste trabalho foram verificar o efeito da aplicação de tiametoxam em plantas de cana-de-açúcar, feijoeiro, soja, laranjeira e cafeeiro, em diferentes doses e formas de aplicação (tratamento de sementes, pulverização foliar e aplicação no solo), sobre parâmetros de desenvolvimento (área foliar, massa seca de folhas e raízes, comprimento radicular) e aspectos bioquímicos (teores foliares de nutrientes e atividade enzimática). Os experimentos foram realizados em vasos, no Horto Experimental do Departamento de Ciências Biológicas da ESALQ/USP. Concluiu-se que a aplicação de tiametoxam em pulverização foliar, em cana-deaçúcar, aumenta a área foliar e o comprimento das raízes, amplia a espessura do córtex da raiz, incrementa o diâmetro do cilindro vascular e aumenta o número de metaxilemas; em feijoeiro, em tratamento de sementes, aumenta a área foliar, a massa seca da parte aérea e a atividade da nitrato redutase em folhas e em pulverização foliar aumenta a atividade da nitrato redutase e a atividade da fenilalanina amônia-liase em folhas; em soja, em tratamento de sementes, aumenta a área foliar, massa seca e comprimento das raízes e os teores foliares de cálcio e magnésio, e em pulverização foliar, reduz os teores de fósforo e cálcio, mas aumenta os teores de potássio; em mudas de laranjeira, aplicado no solo, aumenta a área foliar, a massa seca das folhas, a massa seca do caule e ramos e a área foliar média, mas reduz os teores foliares de nitrogênio, fósforo e enxofre; em mudas de café arábica, aplicado na raiz, aumenta o número de folhas, a massa seca de raízes finas e o comprimento das raízes. / Insecticides and fungicides are often studied to their efficiency in controlling pests and diseases, however can cause physiological effects little known that can affect crop growth. Thiamethoxan is a systemic insecticide from the neonicotinoid group, nitroguanidine family, which acts on nicotinic acetylcholine receptor of insects, damaging their nervous system, leading them to death. This insecticide, that is widely used for controlling pests and sucking insects, has bioactivator effect, since even in the absence of pests, promotes an increase in vigor and development in treated plants. It is believed that the effects of thiamethoxan in plants are indirect, because it acts in the genes expression responsible for metabolic enzymes activation and synthesis, related to plant growth, by modifying amino acids and plant hormones precursors production. There is a number of studies with thiamethoxan in the way to determine the effects on metabolism and development of plants, but the results are not clear, showing strong interaction between cultivars, stress conditions and nutrient availability. Due to the wide use of the insecticide thiamethoxan in Brazilian agriculture, the study of this insecticide in order to know the metabolism changes in the plants, brings a great importance in the collection of knowledge to the agronomic and biological literature. The objectives of this study was to evaluate the effect of thiamethoxan on sugar cane, common beans, soy, orange and coffee plants with different doses and forms of application (seed treatment, foliar spray and soil application) on developmental parameters (leaf area, dry mass of leaves and roots, root length) and biochemical aspects (nutrient content and enzymatic activity). The experiments were conducted in pots in the ESALQ / USP, Experimental Field of Biological Sciences Department. It was concluded that the application of thiamethoxan as foliar spray on sugar cane, increases leaf area and root length, increases the thickness of the cortex of the root, increases the diameter of the vascular cylinder and increases the number of vessels; in bean for seed treatment, increases the leaf area, dry mass of shoots and the activity of nitrate reductase in leaves, and foliar spray increases the activity of nitrate reductase and phenylalanine ammonia-lyase in leaves; in soybean, in seeds treatment, increases leaf area, dry weight of roots, root length and foliar calcium and magnesium, and foliar spray, reduces the amount of phosphorus and calcium, but increased levels of potassium; in orange trees, applicated on the soil, increases the leaf area, leaf area average, leaves dry mass, stems and branches dry mass, but reduces the amount of nitrogen, phosphorus and sulfur in the leaf; in arabica coffee seedlings, applied at the root, increases the number of leaves, fine roots dry mass and length of roots.

A Glutamina (Gln) melhora a regeneração hepática em ratos nutridos. Para avaliar o efeito molecular da Gln endovenosa no remanescente hepático, 52 ratos foram classificados em: 1. Nutridos com hepatectomia parcial (HP) e Gln (N-Gln=10) ou prolina (N-Pro=10); 2. Desnutridos com HP: (D-Gln=10) ou (D-Pro=10); 3. Nutridos e Desnutridos sem HP (N-Controle=6) e (D-Controle=6). Após 96 horas da HP os resultados foram: DNA = (D-Gln, D-Pro e D-Controle < N-Gln, N-Pro e N-controle), (N-Gln, N-Pro, D-Gln e D-Pro < N e D-Controle), (N-Gln > D-Gln); RNA= (N-Gln, N-Pro, D-Gln e D-Pro < N e D-Controle), (N-Gln > D-Gln e N-Pro). Não houve diferença nos genes transcritos (GT) para HGF, TGF-a e timidina kinase. Concluímos que: A desnutrição e HP reduzem DNA e RNA; A Gln não altera os GT estudados em ratos desnutridos 96 horas após HP / Glutamine dipeptide (Gln) improve hepatic regeneration of nourished rats. To evaluate molecular effect of Gln on liver remnant 52 rats was classified into: 1. Nourished with partial hepatectomy (PH) and Gln (N-Gln=10) or proline (N-Pro=10); 2. Malnourished (MN) with PH: (MN-Gln=10) or (MN-Pro=10); 3. Nourished and Malnourished rat without PH (N-Control=6) and (MN-Control=6). Results: DNA = (MN-Gln, MN-Pro and MN-Control < N-Gln, N-Pro and N-control), (N-Gln, N-Pro, MN-Gln and MN-Pro < N and MN-Control), (N-Gln > MN-Gln); RNA= (N-Gln, N-Pro, MN-Gln and MN-Pro < N and MN-Control), (N-Gln > MN-Gln and N-Pro). There was no difference on transcript genes (TG) for HGF, TGF-a and thymidine kinase. Conclusions: Malnutrition and PH decrease hepatic DNA and RNA; Gln does not modify TG studied 96 hours after PH in MN rats

Protoplast fusion of Lolium perenne and Lotus corniculatus for gene introgression by Sanjeev V. Raikar Lolium perenne is one of the most important forage crops globally and in New Zealand. Lotus corniculatus is a dicotyledonous forage that contains valuable traits such as high levels of condensed tannins, increased digestibility, and high nitrogen fixing abilities. However, conventional breeding between these two forage crops is impossible due to their markedly different taxonomic origin. Protoplast fusion (somatic hybridisation) provides an opportunity for gene introgression between these two species. This thesis describes the somatic hybridisation, the regeneration and the molecular analysis of the putative somatic hybrid plants obtained between L. perenne and L. corniculatus. Callus and cell suspensions of different cultivars of L. perenne were established from immature embryos and plants were regenerated from the callus. Of the 10 cultivars screened, cultivars Bronsyn and Canon had the highest percentage of callus induction at 36% each on 5 mg/L 2,4-D. Removal of the palea and lemma which form the seed coat was found to increase callus induction ability of the embryos. Plant regeneration from the callus was achieved when the callus was plated on LS medium supplemented with plant growth regulators at different concentrations. Variable responses to shoot regeneration was observed between the different cultivars with the cv Kingston having the lowest frequency of shoot formation (12%). Different factors affecting the protoplast isolation of L. perenne were investigated. The highest protoplast yield of 10×106 g-1FW was obtained when cell suspensions were used as the tissue source, with enzyme combination ‘A’ (Cellulase Onozuka RS 2%, Macerozyme R-10 1%, Driselase 0.5%, Pectolyase 0.2%), for 6 h incubation period in 0.6 M mannitol. Development of microcolonies was only achieved when protoplasts were plated on nitrocellulose membrane with a L. perenne feeder layer on PEL medium. All the shoots regenerated from the protoplast-derived calli were albino shoots. The highest protoplast yield (7×106 g-1FW) of L. corniculatus was achieved from cotyledons also with enzyme combination ‘A’ (Cellulase Onozuka RS 2%, Macerozyme R-10 1%, Driselase 0.5%, Pectolyase 0.2%), for 6 h incubation period in 0.6 M mannitol. The highest plating efficiency for L. corniculatus of 1.57 % was achieved when protoplasts were plated on nitrocellulose membrane with a L. perenne feeder layer on PEL medium. The highest frequency of shoot regeneration (46%) was achieved when calli were plated on LS medium with NAA (0.1 mg/L) and BA (0.1 mg/L). Protoplast fusion between L. perenne and L. corniculatus was performed using the asymmetric somatic hybridisation technique using PEG as the fusogen. L. perenne protoplasts were treated with 0.1 mM IOA for 15 min and L. corniculatus protoplasts were treated with UV at 0.15 J/cm2 for 10 min. Various parameters affecting the fusion percentage were investigated. Successful fusions were obtained when the fusions were conducted on a plastic surface with 35% PEG (3350 MW) for 25 min duration, followed by 100 mM calcium chloride treatment for 25 min. A total of 14 putative fusion colonies were recovered. Shoots were regenerated from 8 fusion colonies. Unexpectedly, the regenerated putative hybrid plants resembled L. corniculatus plants. The flow cytometric profile of the putative somatic hybrids resembled that of L. corniculatus. Molecular analysis using SD-AFLP, SCARs and Lolium specific chloroplast microsatellite markers suggest that the putative somatic hybrids could be L. corniculatus escapes from the asymmetric protoplast fusion process. This thesis details a novel Whole Genome Amplification technique for plants using Strand Displacement Amplification technique.

A Glutamina (Gln) melhora a regeneração hepática em ratos nutridos. Para avaliar o efeito molecular da Gln endovenosa no remanescente hepático, 52 ratos foram classificados em: 1. Nutridos com hepatectomia parcial (HP) e Gln (N-Gln=10) ou prolina (N-Pro=10); 2. Desnutridos com HP: (D-Gln=10) ou (D-Pro=10); 3. Nutridos e Desnutridos sem HP (N-Controle=6) e (D-Controle=6). Após 96 horas da HP os resultados foram: DNA = (D-Gln, D-Pro e D-Controle < N-Gln, N-Pro e N-controle), (N-Gln, N-Pro, D-Gln e D-Pro < N e D-Controle), (N-Gln > D-Gln); RNA= (N-Gln, N-Pro, D-Gln e D-Pro < N e D-Controle), (N-Gln > D-Gln e N-Pro). Não houve diferença nos genes transcritos (GT) para HGF, TGF-a e timidina kinase. Concluímos que: A desnutrição e HP reduzem DNA e RNA; A Gln não altera os GT estudados em ratos desnutridos 96 horas após HP / Glutamine dipeptide (Gln) improve hepatic regeneration of nourished rats. To evaluate molecular effect of Gln on liver remnant 52 rats was classified into: 1. Nourished with partial hepatectomy (PH) and Gln (N-Gln=10) or proline (N-Pro=10); 2. Malnourished (MN) with PH: (MN-Gln=10) or (MN-Pro=10); 3. Nourished and Malnourished rat without PH (N-Control=6) and (MN-Control=6). Results: DNA = (MN-Gln, MN-Pro and MN-Control < N-Gln, N-Pro and N-control), (N-Gln, N-Pro, MN-Gln and MN-Pro < N and MN-Control), (N-Gln > MN-Gln); RNA= (N-Gln, N-Pro, MN-Gln and MN-Pro < N and MN-Control), (N-Gln > MN-Gln and N-Pro). There was no difference on transcript genes (TG) for HGF, TGF-a and thymidine kinase. Conclusions: Malnutrition and PH decrease hepatic DNA and RNA; Gln does not modify TG studied 96 hours after PH in MN rats