Made available in DSpace on 2014-06-11T19:23:27Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2010-04-30Bitstream added on 2014-06-13T19:50:11Z : No. of bitstreams: 1 grandi_az_me_sjrp.pdf: 6424714 bytes, checksum: 49930f6eb63282aae8d204a93c4bb882 (MD5) / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior (CAPES) / Os polímeros microbianos possuem propriedades físico-químicas com maior uniformidade do que os obtidos de outras fontes devido à especificidade do microrganismo utilizado e à possibilidade de um rígido controle dos parâmetros de fermentação. Estão entre as bactérias produtoras de polissacarídeos as bactérias ácido-láticas, as quais são capazes de converter açúcares, ácidos orgânicos, proteínas ou gorduras em componentes de sabor e aroma, contribuindo ainda para melhorar a textura e a viscosidade de produtos fermentados por meio da produção de exopolissacarídeos (EPS). Nestes produtos, possuem a função de realçar, atribuir e manter as características desejáveis de corpo, textura, viscosidade e aparência, melhorando dessa forma os atributos sensoriais do produto final. O objetivo deste trabalho foi estudar o comportamento de Lactobacillus helveticus autóctone em meio de cultivo com substâncias estimulantes ao crescimento e produção de exopolissacarídeos. A cultura foi previamente isolada de soro-fermento natural. Utilizou-se leite desnatado reconstituído (LDR 10%) como meio de produção, acrescido de fontes de carbono (glicose e frutose) e nitrogênio (sulfato de amônio, peptona de carne e extrato de levedura), ambas nas concentrações de 1, 2, 3, 4 e 5% (p/v). Inoculou-se os meios de fermentação com 1% (v/v) das culturas reativadas em meio De Man Rogosa Sharpe - MRS, e a produção de EPS foi avaliada depois de 24, 48, 72 e 96 horas de incubação, a 37ºC e 100 rpm. Das duas fontes de carbono testadas, a frutose foi a mais favorável à produção de exopolissacarídeos, proporcionando maiores quantidades (1,23 g/50mL de meio de produção). Para sulfato de amônio 5%, as produções chegaram a 3,63 com glicose e a 4,25g/50mL de meio de produção com frutose. Peptona de carne e extrato de levedura favoreceram a produção do biopolímero... / Microbial polymers have physical and chemical properties with larger uniformity than those obtained from other sources because of specificity microorganism used and possibility of a strict parameters of control fermentation. Among the polysaccharide-producing bacteria are the lactic acid bacteria, which are able to converting sugars, organic acids, proteins or fats in flavor and aroma components, thus contributing to improve the texture and viscosity of fermented products through the production of exopolysaccharides (EPS). These products have a enhance function, assign and maintain desirable characteristics of body, texture, viscosity and appearance, thus improving the sensory attributes of the final product. The aim was to study the behavior Lactobacillus helveticus autochthono, using a medium with substances stimulating the growth and exopolysaccharide production. Such autochthono culture was previously isolated from natural whey. Was used reconstituted skim milk (LDR 10%) as production medium, plus carbon sources (glucose and fructose) and nitrogen (ammonium sulfate, meat peptone and yeast extract), both varying in concentrations 1, 2, 3, 4 and 5% (w/v). Was inoculated the fermentation medium with 1% (v/v) culture reactivated in medium Man Rogosa Sharpe - MRS, and EPS production was evaluated after 24, 48, 72 and 96 hours of incubation at 37°C and 100 rpm. Carbon sources tested fructose was the most favorable, providing greater amounts of EPS (1.23 g/50mL of medium production). For ammonium sulfate 5%, the yield reached 3.63 with glucose, and 4.25 g/50mL of medium production with fructose. Meat peptone and yeast extract favored the biopolymer production in lower concentrations, the concentration 2% of both showed better results

Made available in DSpace on 2014-06-11T19:23:28Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2005-12-16Bitstream added on 2014-06-13T19:50:13Z : No. of bitstreams: 1 souza_dm_me_sjrp.pdf: 205423 bytes, checksum: 58061b7108c21ee390f437cf468d69fb (MD5) / A produção de polissacarídeos de origem microbiana deve ser realizada sob um controle rígido dos parâmetros de fermentação (pH, temperatura, velocidade de agitação, tempo de fermentação e composição do meio de cultura) para que a obtenção destes produtos tenha características homogêneas. Além das condições controladas é necessário utilizar espécies bacterinas puras para que os problemas de variação de estrutura possam ser evitados. Assim, é fundamental que qualquer estudo dirigido ao desenvolvimento de tecnologias para a fabricação de biopolímeros seja acompanhado pela caracterização do material produzido, principalmente a sua composição química em relação aos grupamentos acetila e piruvato que conferem viscosidadeàs soluções dos polissacarídeos. Nesta pesquisa foram utilizadas três culturas de bactérias produtoras de biopolímeros do gênero Bacillus, isoladas da rizosfera e codenominadas de 13F, 16F e 24F. Este estudo teve como objetivo determinar alguns parâmetros de fermentação para aumentar a produção dos biopolímeros pelas três bactérias. Foi testado o efeito de diferentes concentrações de glicose, sacarose, manitol e frutose, utilizadas como fontes de carbono; o efeito de diferentes concentrações de nitrato de potássio e nitrato de sódio, em substituição ao sulfato de amônia, comumente encontrado nos meios de cultura, e o efeito de diferentes temperaturas e pH. Para a produção dos biopolímeros foi determinado o meio de fermentação que proporcionou a maior produção e o melhor rendimento para cada bactéria em estudo. A maior produção de biopolímero pela bactéria 13F foi obtida com manitol 4% e sacarose 2%, 20 mM de KNO3 e a 30°C e pH 7. A melhor produção de biopolímero pela bactéria 16F foi obtida com manitol 4%, 10 mM de NaNO3 e a 30°C e pH 8 e para a bactéria... / The production of polysaccharide of microbial origin has to be carried out under strict control of the fermentation parameters (pH, temperature, agitation speed, fermentation time and composition of the culture medium) so that the products are obtained under homogenic characteristics. In addition to controlled characteristics it is necessary to use pure species of bacteria in order to avoid problems with the variation of structure. Thus, it is fundamental that any study focus on the development of new technologies for the production of biopolymers should be accompanied by the characterization of the product, especially with regards to its chemical composition, more specifically, the acetyl and pyruvate groups which give viscosity to the polysaccharide solutions. In this study the production of biopolymer by three bacteria belonging to the genus Bacillus were studied. The bacteria were isolated from the rhizosphere and received the respective code names 13F, 16F and 24F. The objective was to determine the fermentation parameters in order to increase the production of biopolymers. It was evaluated the effect of different concentrations of the source of carbon (glucose, sucrose, mannitol and fructose); the effect of different concentrations of potassium nitrate and sodium nitrate in substitution to ammonia sulfate, usually found in culture media. The effects of different temperatures and pH. The fermentation parameter... (Complete abstract click electronic access below)

Made available in DSpace on 2014-06-11T19:32:55Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2013-02-15Bitstream added on 2014-06-13T18:44:34Z : No. of bitstreams: 1 dayoowoyemi_i_dr_rcla.pdf: 2213436 bytes, checksum: 57ef54bb4924dae1b326ff6c146c0802 (MD5) / Atualmente, existe um crescente interesse em explorar diversos habitats, a fim de revelar a biodiversidade microbiana, incluindo as leveduras. Tal diversidade ainda não acessada guarda a descoberta de novas espécies para ciência, provavelmente muitas das quais com potencial para aproveitamento em processos biotecnológicos. Com o objetivo de explorar e conservar a diversidade de fungos, o Central de Recursos Microbianos da UNESP (CRM – UNESP) mantém em seu acervo várias estirpes de leveduras isoladas de ecossistemas diversos, sendo alguns deles pouco explorados. No início deste trabalho sabíamos que muitas das leveduras depositadas no acervo do CRM – UNESP não estavam totalmente caracterizadas tanto em nível taxonômico, quanto em relação ao potencial biotecnológico que poderiam apresentar. Portanto, o presente estudo foi desenhado para caracterizar e identificar taxonomicamente leveduras depositadas no CRM – UNESP, bem como selecionar estirpes que produzem enzimas extracelulares degradadoras de polissacarídeos como amilase, celulase, xilanase, pectinase e ligninase. Usando uma abordagem polifásica, um total de 340 isolados de leveduras foi identificado, sendo que 71,2% compreendem 43 taxa de ascomicetos e os restantes 28,8% foram classificados em 27 taxa de basidiomicetos. O estudo também levou à descoberta de 8 prováveis novas espécies. Baseado nesta constatação, a classificação taxonômica e análise filogenética foi realizada para duas espécies anamórficas de ascomicetos e uma espécie teleomórfica de basidiomiceto. A descrição destas três espécies é apresentada neste estudo. Os resultados demonstraram que Wickerhamiella kiyanii FB1-1DASPT e W. pindamonhangabaensis H10YT pertencem à clade Wickerhamiella da ordem Saccharomycetales... / In recent time, there has been an increasing interest in exploring diverse ecological habitats in order to reveal the yeast biodiversity. The increased awareness in the biotechnological potentials of yeasts has also spurred attempts to search for new species with novel biotechnological capabilities. Aiming to explore and conserve the fungal diversity from various ecosystems, the UNESP – Central for Microbial Resources (UNESP – CMR) harbors various strains of ecologically diverse yeasts isolates, some of which were yet to be identified. Therefore, this study was designed to identify and characterize some yeasts from the UNESP – MRC and to select strains possessing extracellular plant polysaccharide degrading enzymes namely amylase, cellulase, xylanase, pectinase and ligninase. Using a polyphasic approach, a total of 340 strains were identified. Taxonomic classification grouped 71.2% of these isolates into 43 ascomycetous taxa while the remaining 28.8% were classified in 27 basidiomycetous taxa. The study also led to the discovery of 8 putative new species. As a result, we classified two anamorphic species in the Ascomycota and one teleomorphic species in the Basidiomycota. In this study we provide the description of both species. Our results demonstrated that the two ascomycetous species proposed as Wickerhamiella kiyanii FB1-1DASPT and W. pindamonhangabaensis H10YT belong to the Wickerhamiella clade of the Saccharomycetales (Saccharomycetes) while the basidiomycetous species proposed as Bulleromyces texanaensis ATT064T belong to the Bulleromyces / Papiliotrema / Auriculibuller clade of the Tremellales (Agaricomycotina). In order to show the significance of intraspecific diversity in yeasts, in one of our studies, we subjected 11 strains, (including the type strain CBS 8960T) of Hannaella kunmingensis... (Complete abstract click electronic access below)

Orientador: Maria de Lourdes Corradi Custodio da Silva / Banca: Gil Valdo José da Silva / Banca: Maurício Boscolo / Resumo: Bactérias do gênero Rhizobium são conhecidas por manterem uma relação simbiótica com determinadas plantas leguminosas e atuam como fixadores biológicos de nitrogênio. Elas vêm sendo estudadas em relação à produção de exopolissacarídeos (EPS), o qual acredita-se estar relacionado com o processo de reconhecimento e invasão do microrganismo na planta hospedeira. Estas moléculas apresentam propriedades físico-químicas e reológicas interessantes para a indústria alimentícia, podendo ser aplicadas como estabilizantes, emulsificantes ou gelificantes. Estudos da estrutura química realizados em quatro EPS produzidos por Rhizobuim tropici (em dois meios de cultivos diferentes), Mesorhizobium e Rhizobium sp os caracterizaram como sendo heteropolímeros. Esses polímeros são constituídos principalmente por glucose e galactose, com traços de manose, apresentando ácido urônico, acetila e piruvato com substituintes. Por cromatografia de gel permeação e eletroforese em gel de poliacrilamida apenas os polímeros produzidos por Rhizobium tropici (R2) e Mesorhizobium (R3) comportaram-se como moléculas homogêneas com baixo grau de polidispersividade. Estes EPS foram paracialmente caracterizados utilizando-se técnicas de FT-IR, RMN de 1H e 13C / Abstract: Bacteria of the Rhizobium genus are known to maintain a symbiotic relationship with certain leguminous plants and they act as biological nitrogen fixation. They have been studied as exopolysaccharides (EPS) producers, which may be related to the recognition process and to the microorganism invasion into the host plant. These molecules exhibit interesting physical-chemical and rheological properties for the food industry since they can be used as stabilizers, emulsifiers or gelling agents. Studies of the chemical structure of four EPS produced by Rhizobium tropici (in two different culture media), Mesorhizobium and Rhizobium sp have characterized them as heteropolymers. The EPS are constituted mainly by glucose and galactose with traces of mannose besides uronic acid, pyruvate and acetyl as substituents. Gel permeation chromatography and polyacrylamide gel electrophoresis showed that the polymers produced by Rhizobium tropici (R2) and Mesorhizobium (R3) behaved as homogeneous molecules with low polydispersity. Thus these two EPS were partially characterized by the techniques of FT-IR, 1H and 13C NMR / Mestre

Tese (doutorado) - Universidade Federal de Santa Catarina, Centro de Ciências Biológicas, Programa de Pós-graduação em Biotecnologia, Florianópolis, 2010 / Made available in DSpace on 2012-10-25T08:42:34Z (GMT). No. of bitstreams: 1 286377.pdf: 3812439 bytes, checksum: 6fcfa72b2a13e20109075fe00c344e6a (MD5) / Agaricus subrufescens (=A. brasiliensis) é um fungo comestível amplamente comercializado no Brasil e em outros países, devido as suas propriedades nutricionais e medicinais relacionadas principalmente aos polissacarídeos presentes em sua parede celular, tais como glucanas e glucomananas. Certos processos biotecnológicos têm sido utilizados para aumentar a escala produtiva do micélio e, consequentemente, aumentar a obtenção dos polissacarídeos. Previamente ao desenvolvimento desses processos de produção é importante estabelecer métodos de preservação do fungo in vitro e a recuperação do micélio após estocagem. Para a produção de biomassa foi utilizada a fermentação no estado sólido (FES) em grãos de trigo pré-tratados e a fermentação submersa (FSm) em hidrolisados de resíduos agroindustriais, como farelo de trigo (FT) e resíduo de cervejaria (RC). Polissacarídeos extraídos da frutificação (controle), do micélio em FES e do micélio isolado da FSm foram separados de acordo com suas massas molares por meio de diferentes membranas. Essas frações de polissacarídeos foram testadas na ativação de macrófagos in vitro. Entre os métodos de preservação, melhores resultados foram obtidos quando o meio de cultura foi suplementado com carvão ativo, tanto para a preservação quanto para a recuperação de A. subrufescens, sem alterações significativas na morfologia e genética do fungo durante um período de até 12 meses de estocagem. Para a FES, 21 min de cozimento dos grãos de trigo seguido de 24 min de molho após o cozimento demonstrou ser mais adequado para a produção de polissacarídeos (glucomananas) pelo fungo, inclusive quando o substrato não foi suplementado com cálcio, ou com adição máxima de 0,25 % CaCO3 (pH 6,6). A quantidade inicial de inoculante para a melhor produção de glucomananas (6,89 mg.mL-1) foi aproximadamente 10,3 %, numa temperatura ótima de incubação de 27,2 °C. As maiores biomassas de A. subrufescens para a FSm em hidrolisados de RC e FT foram obtidas na concentração de HCl 0,45 % e 20 min de hidrólise, apresentando 9,65 g.L-1 e 22,1 g.L-1, respectivamente. Porém, melhores resultados de bioconversão foram obtidos em hidrolisados utilizando até 0,3 % de HCl e 30 min de hidrólise, com adição de 2 g.L-1 de carvão ativo durante a hidrólise. Também foram obtidas altas taxas de biomassa de A. subrufescens no cultivo em hidrolisado com pH 5,3 e temperatura de incubação de 30,2 ºC. Na separação com membranas houve aumento da retenção dos polissacarídeos de todos os extratos à medida que o tamanho dos poros da membrana diminuiu. Os polissacarídeos separados pelas membranas de microfiltração (MF) e ultrafiltração (UF1) favoreceram a retenção de polissacarídeos de maior massa molar da frutificação (627 g.mol-1) e do micélio (310 g.mol-1), obtido tanto em FES quanto em FSm. Todos os polissacarídeos extraídos e retentados pelas membranas ativaram macrófagos através da expressão do Fator de Necrose Tumoral-a (TNF-a). Porém, somente os extratos brutos da frutificação e do micélio isolado da FSm, e seus polissacarídeos de maior massa molar retidos pela membrana MF ativaram macrófagos através da expressão de Óxido Nítrico Sintase Induzível (iNOS). Resultados importantes também foram obtidos para os polissacarídeos das frutificações de A. subrufescens, apresentando efeito antigenotóxico e atividade antiherpética quando esses foram sulfatados. Baseado nesses resultados, pesquisas complementares estão sendo desenvolvidas para a obtenção de produtos biotecnológicos com finalidade nutricêutica e/ou farmacêutica. / Agaricus subrufescens (=A. brasiliensis) is an edible fungus widely commercialized in Brazil and other countries, mainly due to its nutritional and medicinal properties related principally to the polysaccharides present in the fungus cell wall, such as glucans and glucomannans. Biotechnological processes may in turn be used to scale up the production of mycelium and consequently the polysaccharides. Previous to the development of the production process it is important to establish techniques for the in vitro preservation and recovery of the mycelium after storage. Solid state fermentation (SSF) on pre-treated wheat grains and submerse fermentation (SmF) on hydrolyzed residues from the agro industries, such as wheat bran (FT) and brewery residues (RC) were used for biomass production. Polysaccharides extracted from fruiting bodies (control), mycelium on SSF and isolated mycelium from SmF were separated by molecular weight through different membranes. These polysaccharide fractions were tested on macrophage activity in vitro. Among the preservation techniques, better results were obtained when the media was supplemented with activated charcoal both for preservation and further recovery of A. subrufescens, without significant morphological and genetic changes within the 12 month storage period. For SSF, 21 min of wheat grain cooking followed by a 24 min resting time has shown to be the optimal condition for the production of polysaccharides (glucomannans) by the fungus, either with no supplement added, or when up to 0.25 % CaCO3 (pH 6.6) has been added to the substrate. The initial inoculum amount for the best polysaccharide production levels (6.89 %) was around 10.3 % with an optimal temperature of 27.2 °C. The highest biomass of A. subrufescens for the SmF in hydrolyzed RC and FT using HCL 0.45% and 20 min hydrolysis was 9.65 g.L-1 and 22.1 g.L-1, respectively. On the other hand, better results of bioconversion were obtained in hydrolyzed residues using up to 0.30 % HCl and 30 min hydrolysis, with the addition of 2 g.L-1 of activated charcoal throughout the process. High biomass levels were also obtained when the cultivation was carried out at a pH of 5.3 and with incubation temperature of 30.2 ºC. The results showed an increase in retention of all polysaccharide extracts as the membro ane porosity decreased. Microfiltration (MF) and ultrafiltration (UF1) membranes retained the highest polysaccharides from fruiting body (627 g.mol-1) and mycelium (310 g.mol-1) obtained on both SSF and SFm. All polysaccharide extracts and fractions separated by the membranes showed biological activity for TNF-a cytokines. On the other hand, only extracts obtained from fruiting bodies and isolated mycelium of FSm, and its high molecular weight polysaccharides retained by the MF membrane activated the iNOS. Important results were also obtained for the polysaccharides extracted from the fruiting bodies, showing antigenotoxic and antiherpetic activities after sulphatation. Based on these findings, additional research is currently in progress to purpose biotechnological products that can be used in both the nutraceutical and/or pharmaceutical areas.

Tese (doutorado) - Universidade Federal de Santa Catarina, Centro de Ciências Agrárias, Programa de Pós-Graduação em Recursos Genéticos Vegetais, Florianópolis, 2014. / Made available in DSpace on 2015-05-26T04:04:46Z (GMT). No. of bitstreams: 1 333653.pdf: 1434383 bytes, checksum: 9b83008c5fabddc4e42e0cd1da4f9b67 (MD5) Previous issue date: 2014 / Atualmente, a busca por métodos alternativos no controle de doenças de plantas vem aumentando. Neste contexto, a indução da resistência de plantas surge como uma alternativa amigável ao meio ambiente. Dentre os indutores de resistência, pode-se destacar a ulvana, um heteropolissacarídeo sulfatado extraído das paredes celulares de algas verdes do gênero Ulva spp. Este polissacarídeo tem potencial no controle de vários patógenos em culturas economicamente importantes, tais como macieira e feijão. Assim, o presente trabalho teve por objetivo avaliar a eficiência de ulvanas sulfatadas quimicamente e parcialmente depolimerizadas e estudar os mecanismos bioquímicos de defesa relacionados ao estresse oxidativo no controle de Alternaria brassicicola e Colletotrichum higginsianum em plantas de Arabidopsis thaliana. Para a avaliação do efeito da sulfatação química e da depolimerização parcial da ulvana, plantas de A. thaliana genótipo WT foram pulverizadas com ulvanas com teor de sulfato variando de 18,9 a 36,6%, com 8 frações com diferentes pesos moleculares ou ramnose e inoculadas com A. brassicicola ou C. higginsianum. A severidade das doenças foi quantificada 5 dias após a inoculação. Para a avaliação do estresse oxidativo, plantas dos genótipos WT, AtrbohF e AtrbohD foram tratadas com água (testemunha) ou ulvana (1 mg mL-1) e três dias depois inoculadas com A. brassicicola. A severidade da doença foi quantificada cinco dias após a inoculação. As atividades de peroxidases, NADPH oxidases, catalases, ascorbato peroxidases, glutationa redutases e superóxido dismutases foram determinadas às 6, 12, 24 e 48 horas após a inoculação (h.a.i). A perda de eletrólitos devido a danos na membrana celular foi determinada às 12 h.a.i, enquanto que o crescimento do fungo in planta e o acúmulo de peroxido de hidrogênio foram visualizados 72 h.a.i. A pulverização tanto de ulvana quanto dos seus derivados com diferentes teores de sulfato reduziu a severidade de A. brassicicola e C. higginsianum de forma semelhante. As frações DU1, DU3, DU5 e DU7 reduziram de forma mais eficiente a severidade de A. brassicicola quando comparadas com a ulvana. Por outro lado, as frações com baixo peso molecular DU6 e DU8 falharam em controlar o patógeno. Estes resultados sugerem que a eficiência em induzir respostas de defesa em A. thaliana pode estar mais relacionada com características estruturais do que o grau de polimerização da ulvana. A ramnose, o principal açúcarcomponente da ulvana, reduziu tanto a severidade de A. brassicicola quanto a de C. higgisanum de forma semelhante ao polissacarídeo. Foi possível observar que o tratamento com ulvana reduziu a colonização dos tecidos e, consequentemente, a severidade de A. brassicicola nos genótipos WT e AtrbohF e aumentou a atividade de NADPH oxidase e os níveis de peróxido de hidrogênio. Além disso, o polissacarídeo tendeu a incrementar a atividade de enzimas envolvidas com a remoção de espécies ativas de oxigênio, sugerindo um controle rígido do sistema antioxidante. A ulvana não protegeu o mutante AtrbohD e plantas WT previamente infiltradas com difenileno iodonio, ambas afetadas na atividade de NADPH oxidase e no acúmulo de peroxido de hidrogênio.<br> / Abstract : Nowadays, there is an increasing demand for alternative disease control methods in plants. In this context, the induction of plant resistance arises as an eco-friendly alternative. Among resistance inducers, ulvan, a sulfated heteropolysaccharide extracted from green seaweed belonging to Ulva spp., has potential to control several pathogens in economically important crops such as apple and beans. Thus, the present work aimed to evaluate the efficiency of chemically sulfated and partially depolymerized ulvans and to study the biochemical defense mechanisms related to oxidative stress in the control of Alternaria brassicicola and Colletotrichum higginsianum in Arabidopsis thaliana plants. In order to evaluate the effect of chemical sulfation and partial depolymerization of ulvan, WT A. thaliana plants were sprayed with ulvans (sulfate content varying from 18.9 to 36.6%), eight fractions with different molecular weight or rhamnose and inoculated with A. brassicicola or C. higginsianum. The severity of both diseases was quantified five days after inoculation. In order to evaluate the oxidative stress responses, A. thaliana plants ecotypes WT, AtrbohF and AtrbohD were sprayed with water (control) or ulvan (1 mg mL-1) and inoculated three days later with A. brassicicola. The disease severity was quantified five days after inoculation. The activities of peroxidases, NADPH oxidases, catalases, ascorbate peroxidases, glutathione reductases and superoxide dismutases were determined at 6, 12, 24 and 48 hours after inoculation (h.a.i). Electrolyte loss due to damage in cell membrane was quantified at 12 h.a.i, whereas the colonization of host tissues by the fungus and hydrogen peroxide accumulation were visualized at 72 h.a.i. The spraying of ulvan and its derivatives with different sulfate content reduced the severity of A. brassicicola and C. higginsianum at a similar extent. Fractions DU1, DU3, DU5 and DU7 reduced the disease more efficiently when compared to ulvan. On the other hand, low molecular weight fractions DU6 and DU8 failed to control the pathogen suggesting that the efficiency in inducing resistance in A. thaliana may be related to structural features than chain size itself. On the other hand, the main sugar component of ulvan namely rhamnose reduced the severity of both diseases at a similar extent as the polysaccharide did. It was possible to observe that ulvan reduced the colonization of host tissues and, consequently, the severity of A. brassicicola and increased the activity of NADPH oxidases as well ashydrogen peroxide levels in WT and AtrbohF plants. Ulvan did not protect the AtrbohD mutant and WT plants previously sprayed with diphenyleneiodonium both impaired in NADPH oxidases activity and hydrogen peroxide accumulation.

Tese (doutorado) - Universidade Federal de Santa Catarina, Centro de Ciências Biológicas. Programa de Pós-Graduação em Biotecnologia / Made available in DSpace on 2013-06-25T18:52:35Z (GMT). No. of bitstreams: 1 311573.pdf: 7982077 bytes, checksum: 243e7ae4350af569490079c4e00e4810 (MD5) / Agaricus brasiliensis (syn A. subrufescens) é um fungo basidiomiceto nativo no Brasil, que apresenta paredes celulares ricas em polissacarídeos, tais como ?-(1?6)-(1?3)-glicanas nos corpos de frutificação e ?-(1?2)-glico-?-(1?3)-mananas no micélio. Neste trabalho, estes polissacarídeos foram isolados e modificados quimicamente gerando seus respectivos derivados sulfatados. Os polissacarídeos nativos (FR e MI) e sulfatados (FR-S e-MI-S) foram caracterizados quimicamente e avaliados quanto as suas atividades citotóxica e anti-herpética in vitro. Uma vez que FR-S e MI-S apresentaram uma promissora ação anti-HSV-1 (cepas KOS e 29-R) e anti-HSV-2 (cepa 333), seu mecanismo de ação foi determinado. A atividade anti-herpética in vivo do MI-S também foi testada utilizando-se modelos murinos de infecção ocular, cutânea e genital. FR-S e MI-S apresentaram duas novas bandas de absorção no espectro de infravermelho em 1253 e 810 cm-1, relacionados aos grupamentos C-S-O e S=O, respectivamente. A massa molecular do FR e MI foram estimados em 609 e 310 kDa, respectivamente. FR-S (127 kDa) e MI-S (86 kDa) apresentaram massas reduzidas provavelmente devido a hidrólise ocorrida durante a reação de sulfatação. FR-S e MI-S apresentaram ~14% de enxofre na análise elementar. Análise de RMN de 1H e 13C confirmaram as estruturas mencionadas anteriormente para FR e MI, sendo o FR-S totalmente sulfatado em C-4 e C-6, enquanto o MI-S parcialmente sulfatado em C-2, C-3, C-4 e C-6. Embora FR e MI não terem apresentado atividade, FR-S e MI-S exibiram promissora ação anti-HSV, com índices de seletividade (SI=CC50/EC50) superiores a 208. FR-S e MI-S não tiveram efeito virucida, mas significativamente inibiram a adsorção e penetração, provavelmente por interagir com glicoproteínas virais. Estudos de combinação revelaram que FR-S e MI-S atuam de forma sinérgica com o aciclovir. Além disso, MI-S inibiu a expressão das proteínas virais ICP27, UL42, gB e gD. Não foi observada toxicidade nos grupos de animais não infectados e tratados com MI-S. O tratamento tópico e oral com MI-S não foi efetivo na redução da doença ocular. A aplicação tópica de MI-S nas lesões cutâneas também não foi efetiva, mas os animais infectados cutaneamente e tratados oralmente com MI-S mostraram redução significativa dos escores da doença e cura acelerada das lesões pelo HSV-1 após o nono dia. A administração vaginal de MI-S (500 µg), 20 min antes do desafio viral, significantemente reduziu os escores da doença (dias 5 a 9), títulos virais (dias 1 e 3) e mortalidade em comparação aos grupos controles. A sulfatação aumentou em 5X o efeito citotóxico do FR contra células tumorais A549, enquanto foi essencial para a atividade do MI. A combinação de fatores como o alto grau de substituição e a massa molecular relativamente menor teve impacto positivo sobre a atividade citotóxica do FR-S e MI-S. Os resultados mostram que o MI-S tem potencial a ser utilizado na redução da severidade das lesões cutâneas pelo HSV-1 e principalmente como um microbicida evitando a transmissão sexual das infecções genitais pelo HSV-2. Ainda, os resultados promissores obtidos na triagem preliminar estimulam novos estudos para avaliação do mecanismo da atividade citotóxica do MI-S e FR-S.

Tese (doutorado) - Universidade Federal de Santa Catarina, Centro de Ciências Biológicas. Programa de Pós-graduação em Farmacologia / Made available in DSpace on 2013-07-15T23:00:01Z (GMT). No. of bitstreams: 1 212760.pdf: 3793665 bytes, checksum: 1d3548c82c1c667fb06eb82add689737 (MD5) / O tratamento in vivo em camundongos com ligantes do receptor periférico benzodiazepínico (PBR) exerceram efeito inibitório na resposta inflamatória em dois modelos de inflamação aguda. No primeiro modelo o efeito antiinflamatório em de pré-tratamento com os ligantes PBR, PK11195 1-(2-chlorophenyl)-N-methyl-N(1-methylpropyl)-3-isoquinoline carboxamide e Ro5-4864 7-chloro-5-(4-Chlorophenyl)-1,3-dihydro-1-methyl-2-H-1,4-benzodiazepin-2, mostraram que a formação do edema em resposta a carragenina (300 mg/pata) foi inibida por PK11195 e Ro5-4864, em diferentes intervalos de tempo. O estudo do tempo resposta mostrou que a melhor resposta com ambos ligantes foi ótima em animais injetados no tempo de 24h, por esta razão este tempo de pré-tratamento foi escolhido para estudo da dose resposta. A formação do edema de pata em resposta a carragenina (300 mg/pata) foi reduzida por PK11195 e Ro5-4864 em diferentes doses (0,00001-10mg/kg, i.p.) produzindo uma inibição dose dependente na formação do edema de pata em camundongos induzida pela carragenina. PK11195 e Ro5-4864 (0.1 mg/kg, i.p.) quando administrado 24 h antes da indução do edema, inibiram de forma significativa o edema de pata de camundongos induzido por vários mediadores inflamatórios. No segundo modelo o pré-tratamento com os ligantes (0.1 mg/kg, i.p.), 24 h antes da indução da pleurisia induzida pela carragenina, mostrou uma significante inibição no recrutamento das células totais e diferenciais, principalmente a custas de neutrófilos, inibindo também a liberação de Interleucina-13 (IL-13) e Interleucina-6 (IL-6) no líquido pleural

Dissertação (mestrado) - Universidade Federal de Santa Catarina, Centro de Ciencias Fisicas e Matematicas, Programa de Pós-Graduação em Química, Florianópolis, 2005 / Made available in DSpace on 2013-07-15T23:14:30Z (GMT). No. of bitstreams: 1 275239.pdf: 363284 bytes, checksum: 3bfefa44139ad952540370802f0bbd88 (MD5) / O polissacarideo Lentinan foi isolado a partir do extrato aquoso de cogumelos shiitake cultivados em Santa Catarina. As metodologias de extracao foram as desenvolvidas por Chiahara e Yap. O metodo de Yap mostrou-se mais eficiente, pois foram obtidos maiores rendimento e pureza. A amostra, de cor branca, apresenta-se volumosa, e soluvel em agua quente e em DMSO. O produto da hidrolise acida, analisado por HPLC e TLC, formou exclusivamente a D-Glicose. A espectroscopia de infravermelho mostrou que todas as ligacoes glicosidicas da cadeia tem configuracao ß. As analises de RMN C13 demonstraram que para cada cinco moleculas de glicose ligadas em posicao 1?3 na cadeia principal, outras duas estao ligadas em posicao 1? 6 como ramificacao. A concentracao critica (*C) do Lentinan foi estudada por viscosimetria, onde o valor da *C para a concentracao 20mM de NaOH foi de 1,1mg/mL. Os resultados de espalhamento de luz revelaram que o Lentinan existe como dupla helice e como cadeia aleatoria em concentracoes de NaOH menores que 20mM e maiores que 100mM, respectivamente. Pelas medidas de espalhamento tambem foi determinado a massa molar media ponderada do polissacarideo como 4,46 x 106g.mol-1.

Dissertação (mestrado) - Universidade Federal de Santa Catarina. Programa de Pós-Graduação em Biotecnologia. / Made available in DSpace on 2013-07-15T23:25:42Z (GMT). No. of bitstreams: 1 224306.pdf: 1144206 bytes, checksum: 3851e6455c9e7fcbff5c43c79ee99f3c (MD5) / Compostos presentes em algas marinhas podem desempenhar importantes funções biológicas, entre elas: atividade antimicrobiana direta, influenciando as interações entre planta-patógeno ou ativando mecanismos de defesa das plantas tratadas. O polissacarídeo ulvana, os extratos solúvel e insolúvel em metanol, o extrato etanólico obtidos de Ulva fasciata e o polissacarídeo B obtido de Ulva sp. foram testados quanto a atividade antimicrobiana e o potencial desta macroalga marinha no controle da antracnose de feijoeiro comum, causada pelo fungo Colletotrichum lindemuthianum. Para a obtenção da ulvana, algas frescas foram autoclavadas com água destilada; a solução resultante foi filtrada e precipitada com etanol. O polissacarídeo foi identificado por RNM-1H e RNM-13C e I.V. como unidades repetitivas de ácido ulvanobiurônico-3-sulfato. Para a obtenção dos extratos metanólicos e do extrato etanólico, algas secas e moídas foram extraídas com metanol em sistema de soxhlet ou com etanol, respectivamente. A atividade antimicrobiana da ulvana e dos extratos metanólicos foi determinada pelo método de difusão em ágar frente a bactérias potencialmente patogênicas ao homem: Escherichia coli, Staphylococcus aureus, Pseudomonas aeruginosa, Bacillus cereus, Micrococcus luteus, a levedura Candida albicans e bactérias fitopatogênicas: Xanthomonas campestris e Erwinia carotovora. A concentração inibitória mínima, através do método de microdiluição em caldo, foi determinada contra os fungos: C. lindemuthianum (fitopatogênico), Trichophyton mentagrophytes e Microsporum canis (dermatófitos). Além disto, o efeito da ulvana e dos extratos metanólicos foi avaliado, in vitro, nos testes de inibição de crescimento miceliano e inibição da germinação de conídios de C. lindemuthianum. In vivo, foi avaliado o efeito do extrato etanólico, extratos metanólicos, ulvana e polissacarídeo B na proteção de plantas de feijão comum (Phaseolus vulgaris L.) contra antracnose em casa-de-vegetação. Os resultados demonstraram que os extratos metanólicos inibiram o crescimento de bactérias Gram-negativas: P. aeruginosa, X. campestris e E. carotovora. Além disso, o extrato insolúvel (2 mg/ml) em metanol inibiu o crescimento de T. mentagrophytes e o extrato solúvel em metanol (1 e 2 mg/ml) inibiu significativamente (p<0,05) o crescimento miceliano de C. lindemuthianum. Por outro lado, nenhum dos extratos testados inibiu a germinação dos conídios deste fungo e a ulvana não apresentou nenhuma atividade in vitro contra os microrganismos testados. Nos experimentos in vivo, observou-se que o extrato etanólico (10 mg de alga seca/ml) e a ulvana (10 mg/ml) de U. fasciata apresentaram uma possível indução de resistência quando pulverizados três dias e quatro dias antes da inoculação do fungo, respectivamente.