Made available in DSpace on 2016-05-02T13:55:32Z (GMT). No. of bitstreams: 1 DenisBuenodaSilva-dissertacao.pdf: 548077 bytes, checksum: a0097266c1d6f0990023e8b0c828c0e4 (MD5) Previous issue date: 2012-08-31 / Inflammatory process, endothelial dysfunction and oxidative stress in cardiovascular environment resulting from dyslipidemia are the conditions that promote and sustain atherosclerosis and cardiac hypertrophy. The present study verified the effect of propolis alone and its association with swimming in dyslipidemia, left ventricular hypertrophy and atherogenesis of hypercholesterolemic mice that were receiving a high-fat diet. 40 LDLr-/- mice, fed with high fat diet (20% total fat, 1.25% cholesterol and 0.5% cholic acid) ad libitum for 75 days, were used in the study. The animals were divided into 4 groups (n=10): hyperlipidic group (HL), sedentary, subjected to aquatic stress; hyperlipidic + swimming group (HL+NAT), submitted to a swimming protocol (1 hour per day, 5 times per week) from the 16th day of the experiment; hyperlipidic + propolis group (HL+PRO), sedentary, submitted to aquatic stress and which received oral propolis (70 µL of the propolis alcoholic extract of 85,71% every weekday) from the 16th day of the experiment; HL+NAT+PRO group, submitted to swimming protocol (1 hour per day, 5 times per week) from the 16th day of the experiment and which received oral propolis (70 µL of the propolis alcoholic extract of 85,71% every weekday) from the 16th day of the experiment. After 75 days of the experiment, the animals were weighed and anesthetized. Blood was collected and laboratory analyzes were performed for total cholesterol and fractions, and triglycerides. After thoracotomy, heart and aorta were removed. The heart was weighed and dissected, the left ventricle isolated, the ratio between the ventricular weight (mg) and the animal weight (g), was calculated and after, it was histologically processed. Ventricle and aorta slides were stained with hematoxina and eosin (HE) and picrosirius red for histological and histochemical analyzes; other slides were treated immunohistochemically with anti-protein proinflammatory CD40L antibodies to evaluate the inflammatory process. The HL animals showed severe dyslipidemia, atherogenesis and left ventricular hypertrophy, associated with a decrease in serum high density lipoprotein (HDL) levels and subsequent development of cardiovascular anti-inflammatory process, characterized by increased expression of CD40L in the left ventricle and aorta. Swimming and propolis separated and / or associated prevented left ventricular hypertrophy (HVE), atherogenesis, ventricular and arterial inflammation, decreasing the expression of CD40L and increased plasma levels of HDL-C. A propolis alone or associated with regular physical activity is beneficial in cardiovascular protection by anti-inflammatory action. / O processo inflamatório, a disfunção do endotélio e o estresse oxidativo no ambiente cardiovascular decorrente das dislipidemias são as condições que promovem e sustentam a aterosclerose e a hipertrofia cardíaca. O presente estudo verificou o efeito da própolis isolada e da sua associação com a natação na dislipidemia, na hipertrofia ventricular esquerda e na aterogênese de camundongos hipercolesterolêmicos que já recebiam dieta hiperlipídica. Foram utilizados 40 camundongos LDLr-/- alimentados com dieta hiperlipídica (20% de gordura total, 1,25% de colesterol e 0,5% de ácido cólico) ad libitum por 75 dias. Os animais foram divididos em 4 grupos (n=10): grupo hiperlipídico (HL), sedentário, submetido ao estresse aquático; grupo hiperlipídico + natação (HL NAT), submetido a um protocolo de natação (1 hora por dia, 5 vezes por semana) a partir do 16º dia do experimento; grupo hiperlipidico/própolis (HL PRO), sedentário, submetido ao estresse aquático e que recebeu própolis via oral (70 µL do extrato alcoólico de própolis a 85,71% todos os dias da semana) a partir do 16º dia do experimento; grupo HL NAT PRO, submetido a um protocolo de natação (1 hora por dia, 5 vezes por semana) a partir do 16º dia do experimento e que recebeu própolis via oral (70 µL do extrato alcoólico de própolis a 85,71% todos os dias da semana) a partir do 16º dia do experimento. Após os 75 dias de experimento, os animais foram pesados e anestesiados. O sangue foi coletado e foram realizadas as análises laboratoriais de colesterol total e frações, e triglicerídeos. Após a toracotomia, o coração e a artéria aorta foram removidos. O coração foi pesado e dissecado, o ventrículo esquerdo isolado, calculou-se a razão entre peso ventricular (mg) e peso animal (g), e, em seguida, foi processado histologicamente. Lâminas do ventrículo e aorta foram coradas com hematoxina e eosina (HE) e picrosírius red para análise histológica e histoquímica; outras lâminas foram tratadas imunohistoquimicamente com anticorpos antiproteína pró-inflamatória (CD40L) para avaliar o processo inflamatório. Os animais HL apresentaram dislipidemia severa, aterogênese e hipertrofia ventricular esquerda associada a uma diminuição dos níveis séricos da lipoproteína de alta densidade (HDL) e consequente desenvolvimento de processo anti-inflamatório cardiovascular caracterizado pelo aumento da expressão CD40L no ventrículo esquerdo e na aorta. A natação e a própolis separadas e/ou associadas preveniu a hipertrofia ventricular esquerda (HVE), a aterogênese, a inflamação ventricular e arterial, diminuindo a expressão de CD40L e aumentando os níveis plasmáticos da HDLc. A própolis isolada ou associada com uma atividade física regular é benéfica na proteção cardiovascular por ação anti-inflamatória.

La propolis est un produit de la ruche à base de résine de plantes et d’arbres mélangée à de la cire d’abeille. Elle est utilisée pour polir les murs de la ruche et la protéger contre les intrus provenant de l’extérieur. Elle contient un grand nombre de composés incluant les métabolites des plantes, alors elle est un ingrédient des médicaments naturels, des additifs alimentaires et des produits cosmétiques en raison de sa richesse en polyphénols qui lui confèrent ses propriétés anti-oxydantes, anti-inflammatoires et antibiotiques. La composition de la propolis est cependant complexe et très variable en raison de la région de provenance qui est étroitement liée aux résines utilisées par les abeilles. De plus, la présence de contaminants dans l’environnement, comme les pesticides et les éléments traces d’origine anthropique, incluant des métaux lourds, donne un risque d’exposition à ces substances en consommant la propolis ou les extraits de propolis. Plusieurs échantillons de propolis brute ainsi que des teintures commerciales et artisanales provenant du Canada, de la Roumanie et du Brésil ont été analysés. L’extraction des polyphénols totaux des échantillons bruts a été faite 3 fois dans l’éthanol (EtOH) 70 % (v/v) à 70 ̊C, et les teintures ont quant à elles été diluées dans l’EtOH 70 %. Les polyphénols totaux ont ensuite été analysés par spectroscopie moléculaire UV-Vis en utilisant la méthode de Folin- Ciocalteu. Des analyses chromatographiques préliminaires par la chromatographie liquide couplée à la spectrométrie de masse (LC-MS) ont permis de comparer des polyphénols et des pesticides dans deux sources de propolis du Québec, avec une grande similarité entre les deux extraits. Des échantillons bruts ainsi que des extraits éthanoliques et des teintures ont été analysés suite à l’ionisation par plasma à couplage inductif (ICP-MS) et la spectroscopie de fluorescence atomique à vapeur froide (CVAFS) pour déterminer des concentrations de certains éléments traces présents à l’état de trace incluant l’As, le Cd, le Pb et le Hg total. / Propolis is a honeybee product made of plant and tree resins mixed with beeswax. It is used to build and repair the walls of the hive and to protect it from outside invaders. It contains a large number of compounds including plant metabolites, and is thus used in natural medications, cosmetic products and as food additives due to its richness in polyphenols, which confer its antioxidant, anti-inflammatory and antibiotic properties. However, the composition of propolis is complex and highly variable because of the geographical location of the resins used by the bees. Furthermore, the presence of contaminants in the environment, such as pesticides and trace elements of anthropogenic origin, brings a risk of exposure to these substances when consuming the propolis. Various raw propolis samples as well as commercial and homemade tinctures from Canada, Romania and Brazil were analysed. The raw samples were extracted 3 times in 70 % EtOH (v/v) at 70 ̊C, whereas the tinctures were diluted in 70 % EtOH. The total polyphenol content was determined by UV-Vis spectroscopy using the Folin-Ciocalteu method. Preliminary chromatography analyses by LC-MS on two propolis samples from Québec showed that the detected polyphenols and pesticides in their extracts were very similar, with only a few compounds found exclusively in either one or the other sample. Several raw propolis samples, their extracts and some tinctures were analyzed by ICP-MS and CVAFS to determine trace concentrations of heavy metals including As, Cd, Pb and total Hg.

O aumento da resistência microbiana devido a fatores como uso excessivo e ineficiente de antibióticos convencionais acarreta a necessidade da busca por novos compostos bioativos que atuem por mecanismos de ação diferentes aos fármacos já conhecidos. Na agricultura, o uso intensivo de pesticidas para o combate de microrganismos que comprometem principalmente a parte alimentícia também traz diversos problemas relacionados à resistência antimicrobiana e a riscos ambientais, oriundos do acúmulo dessas substâncias no solo. Dentro deste aspecto, o pseudofungo Pythium aphanidermatum, da classe dos oomicetos, destaca-se por ser uma espécie agressiva e altamente resistente a fungicidas comuns, apodrecendo raízes e frutos de cultivos de tomate, beterraba, pepino, pimentão, etc. A própolis verde, constituída em sua grande parte por material resinoso coletado e processado pela abelha da espécie Apis mellifera tem sido utilizada na medicina tradicional devido ao seu amplo espectro de ações preventivas e tratamentos de doenças, possuindo propriedades anti-inflamatórias, antimicrobianas, anticancerígenas e antioxidantes, tornando-se um produto de grande interesse na busca de novos compostos bioativos. Dentro destes aspectos apresentados, neste trabalho investigamos a ação da própolis verde contra o fitopatógeno P. aphanidermatum e identificamos através da técnica de cromatografia e bioensaios que a Artepillin C (3,5-diprenil-4-ácido-hidroxicinâmico), majoritária na própolis verde, foi o principal composto nesta ação. Os efeitos terapêuticos desta molécula tem sido foco de muitos estudos, porém ainda não há evidência em sua interação com agregados anfifílicos que mimetizam membranas celulares. O caráter anfifílico do composto, elevado pela presença dos grupos prenilados ligados ao ácido cinâmico, favoreceram a sua inserção nas membranas modelo, principalmente em seu estado agregado. Estas conclusões puderam ser inferidas devido às alterações nas propriedades das bicamadas lipídicas na presença da Artepillin C, podendo causar, especificamente para o caso de fitopatógenos como o P. aphanidermatum, perdas funcionais das proteínas de membranas, liberação de eletrólitos intracelulares e desintegração citoplasmática dos micélios e esporos. Ainda, as diferentes composições lipídicas nas vesículas influenciam no modo de interação do composto e consequentes alterações em suas estruturas, principalmente na presença do colesterol, que auxilia na manutenção da permeabilidade da bicamada lipídica, que pode contribuir para a integridade do conteúdo citoplasmático da célula. / The increase in the microbial resistance due to the excessive and inefficient use of conventional antibiotics brings the necessity to search new bioactive compounds which play their mechanism of action differently from the known drugs. In the agriculture, the intensive use of pesticide for the combat of microorganisms which undermine mainly the food portion also brings several issues related to the antimicrobial resistance and environment risks, originated from the high amount of these substances on the soil. In this aspect, the fungus-like Pythium aphanidermatum microorganism, from class Oomycete, stands out for being an aggressive species and highly resistant to common fungicides, rotting roots and fruits of tomato, beet, cucumber, pepper, etc. Green propolis, constituted by resinous material collected and processed by bees of the species Apis mellifera, has been used in the traditional medicine due its wide spectrum of preventive actions and diseases treatments, promoting anti-inflammatory, antimicrobial, anticancer and antioxidant properties, becoming a product of interest for investigation in the research of new bioactive compounds. Under all the aspects showed so far, in this work we investigated the action of the green propolis against the phytopathogen P. aphanidermatum and identified through chromatography and bioassays that Artepillin C (3,5-diprenyl-4-hydroxycinnamic acid), majority in the green propolis, was the main compound in this action. The therapeutic effects of this molecule have been the focus of several studies, but, so far there is no evidence for its interaction with amphiphilic aggregates that mimic cell membranes. The amphiphilic character of the compound, enhanced by the presence of two prenylated groups bounded to the cinnamic acid, favors the insertion of the compound in the model membranes mainly in its aggregation state. These conclusions could be inferred due the alterations in the properties of the lipid bilayer in the presence of Artepillin C, that may cause, specifically in the case of phytopathogens like P. aphanidermatum, functional losses of membrane proteins, releasing of intracellular electrolytes and cytoplasmatic disintegration of mycelium and spores. Moreover, the difference of the lipid composition in the vesicles influence in the action of the compound and consequent alteration in their structures, mainly in the presence of cholesterol, that provides the maintenance of permeability of the lipid bilayer, contributing to the integrity of the cytoplasmic material of the cell.

Baccharis dracunculifolia é conhecida por sua interação com insetos, especialmente Apis mellifera L., por possuir ampla diversidade de metabólitos secundários, bem como, por apresentar várias atividades biológicas. Suas folhas são pontuadas por tricomas secretores ricos em metabólitos secundários e também apresentam dutos secretores, estruturas que produzem e armazenam os óleos essenciais. Os metabólitos secundários de B. dracunculifolia são usados pelas abelhas A. mellifera para a produção de própolis ?verde?, que é extremamente valorizada pelas indústrias farmacêuticas, pois apresenta atividades antitumoral, antimicrobiana, antiinflamatória, antiulcerogênica, dentre outras. Considerando estas importantes atividades biológicas, e a necessidade de padronização da própolis, os objetivos do presente trabalho foram: desenvolver metodologia analítica por cromatografia gasosa para quantificar os constituintes majoritários presentes no óleo essencial da planta cultivada; desenvolver e validar metodologia analítica por CLAE capaz de garantir a autenticidade dos extratos hidroalcoólicos de B. dracunculifolia, bem como de própolis verde; determinar o perfil de variabilidade dos componentes voláteis e fixos de 10 diferentes acessos cultivados durante o período de 12 meses. De acordo com os resultados obtidos, o cultivo da espécie foi eficiente, observando-se rápido crescimento, cerca de 1 m de altura a partir do quarto mês de plantio, obtendo-se boa quantidade de biomassa, em média de 400 g por acesso, no período de análise. Com a metodologia desenvolvida para os voláteis foi possível analisar 480 amostras nos 12 meses de amostragem e identificar 14 componentes presentes no óleo das folhas cultivadas. As análises semiquantitativas indicaram que o nerolidol é o volátil majoritário, correspondendo em aproximadamente 50 % do óleo, sendo detectado durante todo ano e, por isso, o mesmo deve ser o maior responsável pelas propriedades odoríferas intensas, as quais são extremamente valorizadas pelas indústrias de fragrâncias e cosméticos. Além disso, com base no perfil de variabilidade dos voláteis, a época de floração foi a menos produtiva em termos de óleo essencial, em média de 0,3 %. Por outro lado, o período de fevereiro a abril foi o mais produtivo, em média de 1 % de óleo a partir das folhas secas. Adicionalmente, dentre os acessos cultivados, somente o 4 não é viável para o cultivo em larga escala. Esta população apresentou diferenças morfológicas em relação às folhas e se destacou pela baixa produtividade de óleo ao longo do ano. A metodologia desenvolvida por CLAE, permitiu distinguir e quantificar simultaneamente 10 padrões cromatográficos (ácido caféico, ácido cumárico, ácido ferúlico, ácido cinâmico, aromadendrina-4?-metil éter, drupanina, isosakuranetina, artepelin C, bacarina e ácido 2,2-dimetilcarboxietenil-2H-1-benzopirânico), os quais podem ser encontrados tanto em amostras hidroetanólicas de alecrim do campo bem como em amostras hidroalcoólicas de própolis verde. Além disso, todas as características de desempenho do método apresentaram resultados aceitáveis, conforme sugeridos pela Anvisa e Inmetro, e podem garantir com segurança e confiabilidade a quantificação dos metabólitos de interesse. Na análise das substâncias fixas, observou-se que o ácido caféico é o componente majoritário, correspondendo em média de 60 % dos fenólicos em análise. O perfil de variabilidade do artepelin C e bacarina foi crescente no decorrer dos meses em estudo, demonstrando teores mais elevados no último trimestre de amostragem, correspondendo em média de 8 e 25 % respectivamente. O flavonóide aromadendrina-4?-metil éter demonstrou concentrações diferenciadas durante o ano. Todavia, este flavonóide juntamente com o ácido caféico podem ser considerados marcadores quimiotaxonômicos da planta cultivada, já que os mesmos foram detectados durante todo ano e em todas as populações. Contudo, considerando a produção, tanto dos voláteis como dos compostos fenólicos, todos os acessos cultivados, com exceção da população 4, podem ser cultivados em larga escala para estes propósitos / Baccharis dracunculifolia is well known for its interaction with insects, mainly Apis mellifera L., for bearing a wide range of secondary metabolites, as well as for displaying many biological activities. Its leaves are punctuated with secretory thricomes rich in secondary metabolites and secretory ducts, which produce and store essential oils. B. dracunculifolia secondary metabolites are used by Apis mellifera to produce ?green? propolis, which is of great importance for pharmaceutical industry, since it displays anticancer, antibacterial, antiinflammatory and antiulcer, among other activities. Considering the displayed biological activities by B. dracunculifolia and the need to standardize the green propolis raw material, the aims of the present work were: a) to develop a gas chromatography analytical methodology to quantify the major volatile constituents in its cultivated populations; b) to develop and validate a HPLC method to quantify the major phenolic compounds present in the aerial parts of B. dracunculifolia, and in the crude green propolis. The developed chromatographic tools were used to study the seasonal influence in the biosynthesis of both volatile oils and phenolic components in 10 different cultivated populations during one year period. All the cultivated populations grew quite well, since it achieved 1 m in height in the fourth month of growth, and it produced an average of 400 g of biomass per individual. Using the developed GC methodology it was possible to analyze 480 samples, and to quantify 14 volatile components of the leaves during one year of its cultivation. The GC analysis indicated that nerolidol was the major compound present in the volatile fraction, about 50 %, which was detected during the entire experiment, and it shall be the most responsible compound for its intense fragrance with importance for cosmetic industry. On one hand, it was observed that during the flowering period the volatile oil production was lower, about 0.3 % w/w, and on the other hand, during the months of February, March and April, its production was higher, about 1 % w/w in dry leaves. Besides, it was observed that population 4 stood out, since it was morphologically different from all others and produced lower yielding of volatile components during the entire year. The HPLC developed methodology allowed to separate and quantify 10 phenolic (caffeic acid, coumaric acid, ferulic acid, cinnamic acid, aromadendrin-4?-methyl ether, drupanin, isosakuranetin, artepillin C, bacharin, 2,2-dimethylcarboxyethenyl-2H-1-benzopyran acid) compounds simultaneously in both B. dracunculifolia and green propolis ethanol extracts. Moreover, all the evaluated validation parameters displayed acceptable results, as established by Brazilian Governmental regulation agencies, Anvisa and Imetro, and it provide very good results for the accurate quantification of phenolic compounds of interest. The analysis indicated that caffeic acid was the major compound present in the analyzed samples, and it corresponded to 60 % of the total quantified phenolic compounds. The contents of artepelin C and bacharin varied greatly during the studied period, displaying higher contents during the last trimester of 8 e 25 %, respectively. The flavonoid aromadendrin-4?-methyl ether has not displayed a coherent pattern during the experiment, since it variable greatly. However, aromadendrin along with caffeic acid could be considered good chemical markers for the analysis of cultivated B. dracunculifolia, considering that both were found in all the samples. Overall, considering the production of both the volatile and phenolic compounds, all the cultivated populations, with exception of the population 4, could be cultivated in large scale for these purposes.

A própolis, um produto natural derivado de resinas de plantas coletadas por abelhas, foi usada por milhares de anos na medicina tradicional pelo mundo inteiro. Neste estudo, investigamos o efeito de uma fração da própolis vermelha brasileira (BRVD), no crescimento das células de melanoma murino (B16F10), das linhagens hematológicas humanas (HL-60 e K562), e de fibroblastos humanos (MCR-5 e FP). Após a análise preliminar de várias frações da própolis BRV, encontramos que a Fração BRVD inibiu fortemente o crescimento das células de uma maneira dose-tempo dependente pela necrose. Os resultados mostraram que essa fração induz eficazmente um efeito citotóxico em todas as linhagens estudadas, com média da IC50 em torno de 30 g/mL em 24 h de exposição. Estes resultados sugerem que a atividade antitumor da fração BRVD ocorre com a indução de necrose e os compostos dessa fração podem ser úteis como um agente contra o câncer / Propolis, a natural product derived from plant resins collected by honeybees, has been used for thousands of years in traditional medicine all over the world. In this study we have investigated the effect of some fractions from red Brazilian propolis on the growth of murine melanoma cell ( B16/F10), human hematological cells ( HL-60 and K562), and human fibroblasts cells (MCR-5 and FP). We found that BRVD strongly inhibited the growth of the cells in a dose- and time-dependent through induction of necrosis. Our results showed that BRVD effectively induced a cytotoxic effect on all cell lines studied, with IC50 average about 30 g/mL for 24 h of exposition. These results suggest that the antitumor activity of BRVD from red Brazilian propolis occurs through the induction of necrosis and its compounds may be useful as a anticancer agent

O EPP-AF® é um extrato padronizado de própolis quimicamente caracterizado e com eficácia e segurança pré-clínica estabelecidas. O objetivo principal deste trabalho foi realizar um ensaio clínico de segurança para avaliar a influência do EPP-AF® na atividade da P-gp e das principais isoformas CYP, através de um teste in vivo tipo coquetel de fármacos marcadores administrados em doses subterapêuticas. Foram investigados 16 voluntários adultos sadios antes e após a exposição a 375 mg de EPP-AF® por via oral durante 15 dias. As amostras seriadas de sangue foram colhidas até 12 h após a administração do coquetel contendo midazolam (0,2 mg), cafeína (10 mg), omeprazol (2 mg), metoprolol (10 mg), losartana (2 mg) e fexofenadina (10 mg). Foram desenvolvidos e validados três métodos analíticos empregando LC-MS/MS para quantificar as concentrações plasmáticas de fexofenadina, losartana, E-3174 (método 1), omeprazol, 5-OH-omeprazol, midazolam, metoprolol, ?-OHmetoprolol (método 2) e cafeína (método 3). Os métodos não apresentaram efeito matriz ou efeito residual e mostraram-se lineares para os analitos nos intervalos de 0,05-20 ng/mL (fexofenadina); 0,03 - 5 ng/mL (losartana e E31-74); 0,1 - 50 ng/mL (omeprazol), 0,3 - 50 ng/mL (5-OH-omeprazol), 0,01 - 10 ng/mL (midazolam), 0,05 - 50 ng/mL (metoprolol e ?- OH-metoprolol) e 5 - 1000 ng/mL (cafeína). Os parâmetros farmacocinéticos dos compostos foram calculados com base nas curvas de concentração plasmática versus tempo (AUC) empregando o programa Phoenix® WinNonlin®. Os valores das razões das AUC0-t e Cmax após e antes da exposição ao EPP-AF®, apresentados como média geométrica (IC90%) foram de 0,74 (0,62 - 0,89) e 0,90 (0,76 - 1,07) para fexofenadina; 0,88 (0,80 - 0,97) e 0,86 (0,76 - 0,98) para losartana; 0,96 (0,83 - 1,11) e 0,91 (0,79 - 1,04) para E-3174; 1,18 (0,91 - 1,54) e 1,21 (0,87- 1,70) para omeprazol; 1,12 (0,95 - 1,31) e 1,22 (0,95 - 1,67) para 5-OHomeprazol; 1,14 (1,03 - 1,28) e 1,21 (1,00 - 1,46) para o midazolam; 1,04 (0,92 - 1,18) e 0,94 (0,80 - 1,12) para o metoprolol; 1,05 (0,99 - 1,12) e 0,99 (0,88 - 1,12) para ?-OH-metoprolol; 0,97 (0,77 - 1,21) e 0,87 (0,69 - 1,11) para a cafeína. Quando observadas as razões metabólicas das AUC0-t E3174/losartana, 5-OH-omeprazol/omeprazol e ?-OHmetoprolol/ metoprolol encontramos, respectivamente, 1,11 (0,98 - 1,25); 0,94 (0,81 - 1,10) e 1,01 (0,88 - 1,16), indicando que, com exceção do CYP2D6, a administração de EPP-AF® nas condições estudadas apresenta potencial para inibição das isoformas CYP2C19 e CYP3A4 e indução das enzimas CYP1A2, CYP2C9 e do transportador de efluxo P-gp, embora as suas magnitudes encontram-se abaixo dos limites definidos pelos órgãos reguladores e portanto não apresentam relevância clínica / EPP-AF® is a standardized extract of propolis chemically characterized and with established pre-clinical efficacy and safety. The main objective of this work was to perform a clinical trial to evaluate the effect of EPP-AF® on P-gp and the major CYP isoforms activity, through an in vivo assay using the cocktail approach with sub-therapeutic doses. Sixteen healthy adult volunteers were investigated before and after exposure to orally administered 375 mg/day of EPP-AF® for 15 days. Serum blood samples were collected up to 12 h after the administration of midazolam (0.2 mg), caffeine (10 mg), omeprazole (2 mg), metoprolol (10 mg), losartan (2 mg) and fexofenadine (10 mg). Three analytical methods were developed and validated applying LC-MS/MS to quantify plasma concentrations of fexofenadine, losartan, E-3174 (method 1), omeprazole, 5-OH-omeprazole, midazolam, metoprolol, ?-OH-metoprolol (method 2), and caffeine (Method 3). Neither matrix effect nor carryover effect were observed. The methods were linear for the analytes in the ranges of 0.05 - 20 ng/mL (fexofenadine); 0.03 - 5 ng/ml (losartan and E-3174); 0.1 - 50 ng/mL (omeprazole), 0.3 - 50 ng/mL (5-OH-omeprazole), 0.01 - 10 ng/mL (midazolam), 0.05 - 50 ng/mL (metoprolol and ?-OH-metoprolol) and 5 - 1000 ng/mL (caffeine). The pharmacokinetic parameters of the compounds were calculated based on plasma concentration versus time (AUC) curves applying Phoenix® WinNonlin® software. AUC0-t and Cmax ratios after and before the EPPAF ® exposure, presented as geometric mean (CI 90%) were 0.74 (0.62 - 0.89) and 0.90 (0.76 - 1.07) for fexofenadine, 0.88 (0.80 - 0.97) and 0.86 (0.76 - 0.98) for losartan, 0.96 (0.83 - 1.11) and 0.91 (0.79 - 1.04) for E-3174, 1.18 (0.91 - 1.54) and 1.21 (0.87 - 1.70) for omeprazole; 1.12 (0.95 - 1.31) and 1.22 (0.95 - 1.67) for 5-OH-omeprazole, 1.14 (1.03 - 1.28) and 1.21 (1.00 - 1.46) for midazolam, 1.04 (0.92 - 1.18) and 0.94 (0.80 - 1.12) for metoprolol, 1.05 (0.99 - 1.12) and 0.99 (0.88 - 1.12) for ?-OH-metoprolol, 0.97 (0.77 - 1.21) and 0.87 (0.69 - 1.11) for caffeine. AUC0-t metabolic ratios of E3174/losartan, 5-OH-omeprazole/omeprazole and ?-OH-metoprolol/metoprolol we found to be, respectively, 1.11 (0.98 - 1.25), 0.94 (0.81 - 1.10 ) and 1.01 (0.88 - 1.16), indicating that, with the exception of CYP2D6, the administration of EPP-AF® under the conditions studied shows potential for CYP2C19 and CYP3A4 inhibition and CYP1A2, CYP2C9 and P-gp induction, although their magnitudes are below the limits defined by the regulatory agencies and therefore exhibit no clinical relevance

Baccharis dracunculifolia é conhecida por sua interação com insetos, especialmente Apis mellifera L., por possuir ampla diversidade de metabólitos secundários, bem como, por apresentar várias atividades biológicas. Suas folhas são pontuadas por tricomas secretores ricos em metabólitos secundários e também apresentam dutos secretores, estruturas que produzem e armazenam os óleos essenciais. Os metabólitos secundários de B. dracunculifolia são usados pelas abelhas A. mellifera para a produção de própolis ?verde?, que é extremamente valorizada pelas indústrias farmacêuticas, pois apresenta atividades antitumoral, antimicrobiana, antiinflamatória, antiulcerogênica, dentre outras. Considerando estas importantes atividades biológicas, e a necessidade de padronização da própolis, os objetivos do presente trabalho foram: desenvolver metodologia analítica por cromatografia gasosa para quantificar os constituintes majoritários presentes no óleo essencial da planta cultivada; desenvolver e validar metodologia analítica por CLAE capaz de garantir a autenticidade dos extratos hidroalcoólicos de B. dracunculifolia, bem como de própolis verde; determinar o perfil de variabilidade dos componentes voláteis e fixos de 10 diferentes acessos cultivados durante o período de 12 meses. De acordo com os resultados obtidos, o cultivo da espécie foi eficiente, observando-se rápido crescimento, cerca de 1 m de altura a partir do quarto mês de plantio, obtendo-se boa quantidade de biomassa, em média de 400 g por acesso, no período de análise. Com a metodologia desenvolvida para os voláteis foi possível analisar 480 amostras nos 12 meses de amostragem e identificar 14 componentes presentes no óleo das folhas cultivadas. As análises semiquantitativas indicaram que o nerolidol é o volátil majoritário, correspondendo em aproximadamente 50 % do óleo, sendo detectado durante todo ano e, por isso, o mesmo deve ser o maior responsável pelas propriedades odoríferas intensas, as quais são extremamente valorizadas pelas indústrias de fragrâncias e cosméticos. Além disso, com base no perfil de variabilidade dos voláteis, a época de floração foi a menos produtiva em termos de óleo essencial, em média de 0,3 %. Por outro lado, o período de fevereiro a abril foi o mais produtivo, em média de 1 % de óleo a partir das folhas secas. Adicionalmente, dentre os acessos cultivados, somente o 4 não é viável para o cultivo em larga escala. Esta população apresentou diferenças morfológicas em relação às folhas e se destacou pela baixa produtividade de óleo ao longo do ano. A metodologia desenvolvida por CLAE, permitiu distinguir e quantificar simultaneamente 10 padrões cromatográficos (ácido caféico, ácido cumárico, ácido ferúlico, ácido cinâmico, aromadendrina-4?-metil éter, drupanina, isosakuranetina, artepelin C, bacarina e ácido 2,2-dimetilcarboxietenil-2H-1-benzopirânico), os quais podem ser encontrados tanto em amostras hidroetanólicas de alecrim do campo bem como em amostras hidroalcoólicas de própolis verde. Além disso, todas as características de desempenho do método apresentaram resultados aceitáveis, conforme sugeridos pela Anvisa e Inmetro, e podem garantir com segurança e confiabilidade a quantificação dos metabólitos de interesse. Na análise das substâncias fixas, observou-se que o ácido caféico é o componente majoritário, correspondendo em média de 60 % dos fenólicos em análise. O perfil de variabilidade do artepelin C e bacarina foi crescente no decorrer dos meses em estudo, demonstrando teores mais elevados no último trimestre de amostragem, correspondendo em média de 8 e 25 % respectivamente. O flavonóide aromadendrina-4?-metil éter demonstrou concentrações diferenciadas durante o ano. Todavia, este flavonóide juntamente com o ácido caféico podem ser considerados marcadores quimiotaxonômicos da planta cultivada, já que os mesmos foram detectados durante todo ano e em todas as populações. Contudo, considerando a produção, tanto dos voláteis como dos compostos fenólicos, todos os acessos cultivados, com exceção da população 4, podem ser cultivados em larga escala para estes propósitos / Baccharis dracunculifolia is well known for its interaction with insects, mainly Apis mellifera L., for bearing a wide range of secondary metabolites, as well as for displaying many biological activities. Its leaves are punctuated with secretory thricomes rich in secondary metabolites and secretory ducts, which produce and store essential oils. B. dracunculifolia secondary metabolites are used by Apis mellifera to produce ?green? propolis, which is of great importance for pharmaceutical industry, since it displays anticancer, antibacterial, antiinflammatory and antiulcer, among other activities. Considering the displayed biological activities by B. dracunculifolia and the need to standardize the green propolis raw material, the aims of the present work were: a) to develop a gas chromatography analytical methodology to quantify the major volatile constituents in its cultivated populations; b) to develop and validate a HPLC method to quantify the major phenolic compounds present in the aerial parts of B. dracunculifolia, and in the crude green propolis. The developed chromatographic tools were used to study the seasonal influence in the biosynthesis of both volatile oils and phenolic components in 10 different cultivated populations during one year period. All the cultivated populations grew quite well, since it achieved 1 m in height in the fourth month of growth, and it produced an average of 400 g of biomass per individual. Using the developed GC methodology it was possible to analyze 480 samples, and to quantify 14 volatile components of the leaves during one year of its cultivation. The GC analysis indicated that nerolidol was the major compound present in the volatile fraction, about 50 %, which was detected during the entire experiment, and it shall be the most responsible compound for its intense fragrance with importance for cosmetic industry. On one hand, it was observed that during the flowering period the volatile oil production was lower, about 0.3 % w/w, and on the other hand, during the months of February, March and April, its production was higher, about 1 % w/w in dry leaves. Besides, it was observed that population 4 stood out, since it was morphologically different from all others and produced lower yielding of volatile components during the entire year. The HPLC developed methodology allowed to separate and quantify 10 phenolic (caffeic acid, coumaric acid, ferulic acid, cinnamic acid, aromadendrin-4?-methyl ether, drupanin, isosakuranetin, artepillin C, bacharin, 2,2-dimethylcarboxyethenyl-2H-1-benzopyran acid) compounds simultaneously in both B. dracunculifolia and green propolis ethanol extracts. Moreover, all the evaluated validation parameters displayed acceptable results, as established by Brazilian Governmental regulation agencies, Anvisa and Imetro, and it provide very good results for the accurate quantification of phenolic compounds of interest. The analysis indicated that caffeic acid was the major compound present in the analyzed samples, and it corresponded to 60 % of the total quantified phenolic compounds. The contents of artepelin C and bacharin varied greatly during the studied period, displaying higher contents during the last trimester of 8 e 25 %, respectively. The flavonoid aromadendrin-4?-methyl ether has not displayed a coherent pattern during the experiment, since it variable greatly. However, aromadendrin along with caffeic acid could be considered good chemical markers for the analysis of cultivated B. dracunculifolia, considering that both were found in all the samples. Overall, considering the production of both the volatile and phenolic compounds, all the cultivated populations, with exception of the population 4, could be cultivated in large scale for these purposes.

Submitted by Ana Damasceno (ana.damasceno@unipampa.edu.br) on 2017-05-12T17:36:02Z No. of bitstreams: 2 license_rdf: 1232 bytes, checksum: 66e71c371cc565284e70f40736c94386 (MD5) Caracterização química, atividades antioxidante, antileucêmica e antimicrobiana da própolis âmbar sul brasileira.pdf: 1920627 bytes, checksum: a4863fc2a0ca638e21de691cb6125515 (MD5) / Made available in DSpace on 2017-05-12T17:36:02Z (GMT). No. of bitstreams: 2 license_rdf: 1232 bytes, checksum: 66e71c371cc565284e70f40736c94386 (MD5) Caracterização química, atividades antioxidante, antileucêmica e antimicrobiana da própolis âmbar sul brasileira.pdf: 1920627 bytes, checksum: a4863fc2a0ca638e21de691cb6125515 (MD5) Previous issue date: 2017-03-27 / A própolis é um composto utilizado pelas abelhas, com a finalidade de vedar a colmeia e evitar contaminações, que se destaca por suas atividades biológicas as quais têm sido muito estudadas para fins terapêuticos. Quando produzida por abelhas da espécie Apis mellifera a substância é composta por cerca de 50 % de resina vegetal misturada a enzimas presentes em sua saliva e cera. Este produto natural pode variar dependendo da origem botânica/geográfica e mais de 300 compostos já foram descritos. No caso do Brasil, existe grande variabilidade da composição química que é facilmente explicada pela sua grande biodiversidade. O objetivo deste trabalho foi analisar o perfil químico e as atividades antioxidante, antileucêmica e antimicrobiana da própolis de São Gabriel/Rio Grande do Sul, a qual denominamos própolis Âmbar, e comparar suas propriedades com as própolis brasileiras Vermelha e Verde. As análises do perfil químico foram realizadas pelas técnicas de GC-MS, HPLC e quantificação dos flavonoides e fenóis totais. A atividade antioxidante foi aferida pelas técnicas DPPH°, ABTS°+ e FRAP. A atividade antileucêmica foi analisada nas linhagens celulares K562, Jurkat e U937 pelos parâmetros de IC50, viabilidade, apoptose e ciclo celular. E a atividade antimicrobiana foi analisada aferindo-se o crescimento das espécies E. coli e S. aureus. Os resultados obtidos da análise por GC-MS das própolis Âmbar, dos dois anos coletados, identificam um total de 99 compostos dentre os quais apenas 16 foram identificados para as própolis Verde e Vermelha. Também foi possível notar que grande parte dos compostos encontrados são descritos para o gênero Eucalyptus que parece ser uma fonte vegetal importante para a produção da própolis Âmbar. Quanto aos fenóis totais, flavonóides totais e atividade antioxidante, as própolis apresentaram resultados diferentes entre si, sendo os valores obtidos para a própolis Âmbar sempre menores que os encontrados para as própolis Verde e Vermelha. Porém quanto à atividade antileucêmica a própolis Âmbar apresentou resultados similares a própolis Vermelha nas análises de IC50 e viabilidade. E na análise do efeito antimicrobiano todas as própolis igualaram seu efeito em concentrações acima de 500 µg/mL, apresentando também atividades semelhantes no tratamento com E.coli na concentração de 100 µg/mL. Tipificação, identificação da origem geográfica/botânica e quantidade de estudos sobre suas atividades biológicas agregam valor à própolis. Esperamos com este trabalho expandir o conhecimento técnico-científico da própolis Âmbar contribuindo com o desenvolvimento regional e ampliando o conhecimento sobre própolis. / Propolis is a compound used by bees to seal the hive and prevent contamination that stands out because of its biological activities which have been studied for therapeutic purposes. When produced by Apis mellifera bees specie the substance is composed by about 50% vegetable resin mixed with enzymes present in its saliva and wax. This natural product may vary depending on the botanical/geographical origin and more than 300 compounds have already been described. In Brazil there is a great variability of chemical composition that is easily explained by the Brazilian biodiversity. The goal of this work was to analyze the chemical profile and antioxidant, antileukemic and antimicrobial activities of São Gabriel/Rio Grande do Sul propolis, which we call Amber propolis, and to compare its properties with the Brazilian propolis Red and Green. The chemical analyzes were performed by total flavonoids and total phenols quantification, GC-MS and HPLC. The antioxidant activity was measured by DPPH°, ABTS°+ and FRAP techniques. The antileukemic activity was analyzed in the K562, Jurkat and U937 cell lines taken into account IC50, viability, apoptosis and cell cycle parameters. The antimicrobial activity was analyzed by E. coli and S. aureus growth. The results obtained from the GC-MS of Amber propolis, collected in two years, identified a total of 99 compounds among, from these only 16 were identified for the Green and Red propolis. It was also possible verify that most of the compounds found are described for the genus Eucalyptus which seems to be an important source of compounds for the Amber propolis production. Values for total phenolics, total flavonoids and antioxidant activity, were different among the propolis, being the values obtained for the Amber propolis always smaller than those found for the Green and Red propolis. However, regarding the antileukemic activity, the propolis Amber presented similar results to the Red propolis for IC50 analyzes and viability. In the analysis of the antimicrobial effect, all the propolis presented similar effects above 500 μg/mL and also presenting some levels of activity at 100 μg / mL in E. coli. Typification, identification of the geographical/botanical origin and quantity of studies on its biological activities add value to propolis. We hope with this work to expand the technical-scientific knowledge of propolis Amber contributing to regional development and expanding knowledge about propolis.

Made available in DSpace on 2017-07-24T19:38:01Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Elementos pre-textuais.pdf: 567197 bytes, checksum: b26ed97be7d0d26d6ba01f298cc6bef8 (MD5) Previous issue date: 2009-06-29 / This study aimed to chemically analyze extracts of propolis samples and leaves of plant species of the Baccharis genus in the region of Ponta Grossa - PR, to classify the regional propolis compared to the green propolis (PG12). Baccharis dracunculifolia, the source of green propolis, may present metabolic changes related to environmental factors. To compare with published data, the essential oils obtained by hydrodistillation from the leaves of female (0.81%) and male (0.85%) specimens of B. dracunculifolia harvested in the dry season were analyzed by GC-MS. The two samples showed a low monoterpenes/sesquiterpenes ratio (0.85/96.88% ♀; 2.35/ 95.25% ♂). The monoterpenes b-pinene, limonene and terpinen-4-ol were identified. The main sesquiterpenes hydrocarbons are b-caryophyllene (♀ 7.88%; ♂ 8.88%), b-humulene (♀ 4.61%; ♂ 2.18%), germacrene D (♀ 5.53%; ♂ 4.04%) trans-b- guaiene (♀ 7.98%; ♂ 6.06%) and cadinene (♀ 7.34%; ♂ 5.48%). The oxygenated sesquiterpenes (E)-nerolidol (♀ 24.69%; ♂ 17.16%) and spathulenol (♀ 14.62%; ♂ 21.39%) were found as the major constituents. The high yield, the low monoterpenes / sesquiterpenes ratio and the high proportions of oxygenated sesquiterpenes are the main characteristics of the essential oil of B. dracunculifolia from this region. The leaves of three species of Baccharis (B. dracunculifolia, B. semiserrata and B. uncinella) were extracted using a Soxhlet apparatus with the sequence of solvents chloroform, ethyl acetate and methanol, and the extracts were analyzed by TLC, UV and HPLC. Free phenolic acids were identified: caffeic acid (Bd ♀ and Bd ♂), p-coumaric acid (Bd ♀), ferulic acid (Bd ♀, ♂ Bd, Bu and Bs) and the flavonoid rutin (Bd ♀, Bd ♂, Bu). Thus, it is demonstrated for the first time, the co-occurrence of polar phenolic substances in these three plant species. The ethanol extracts obtained from 13 samples of propolis were analyzed by TLC-HR and UV-VIS, allowing the classification of the regional propolis in three groups. The most characteristic sample of each type (ADI, WS- 3, RS-2) was chosen for analysis by HPLC in comparison with green propolis PG12. Fresh sprouts of male and female specimens of B. dracunculifolia were extracted by rinsing with methanol and the extracts were analyzed by HPLC. All extracts of propolis and B. dracunculifolia showed artepillin C ensuring that this plant is the source of regional propolis. The caffeic acid, ferulic acid and p-coumaric acid were identified in the four samples of propolis. Apigenin is present only in the regional propolis samples, between 2.4% and 3.9%, while crisin was identified only in the PG12, but as a main component (18.1%). An unidentified flavonoid (lma x 365 nm, 42,96 min) is the main substance present in the three samples of regional propolis and also the extract obtained by the rinsing of the plant sprouts. All the ethanol extracts of regional propolis showed excellent levels of antioxidant activity when tested against the radical DPPH, several of them getting to be more effective than the PG12. A comparative analysis of antioxidant power and chemical composition of the samples indicates that the unidentified flavonoid is responsible for the strong antioxidant activity of ADI and WS-2 compared to RS-2 and PG12. / Neste trabalho, foram analisados extratos de amostras de própolis e de folhas de espécies vegetais do gênero Baccharis da região de Ponta Grossa – PR, visando classificar a própolis regional em comparação com a própolis verde (PG12). Baccharis dracunculifolia, a fonte da própolis verde, pode apresentar variações metabólicas relacionadas a fatores ambientais. Para comparar dados publicados sobre esta planta com dados obtidos do vegetal coletado nesta região, foram analisados por CG-EM os óleos essenciais obtidos por hidrodestilação das folhas de espécimes feminino (0,81%) e masculino (0,85%) de B. dracunculifolia colhidos na estação seca. As duas amostras apresentaram baixa razão monoterpenos/sesquiterpenos (0,85/96,88% ♀; 2,35/95,25% ♂). Foram identificados os monoterpenos b-pineno, limoneno e terpinen-4-ol. Os sesquiterpenos hidrocarbonetos principais foram: b-cariofileno (♀ 7,88%;♂ 8,88%), a-humuleno (♀ 4,61%; ♂ 2,18%), germacreno D (♀ 5,53%; ♂ 4,04%), trans-b- guaieno (♀ 7,98%; ♂ 6,06%) e d-cadineno (♀ 7,34%; ♂5,48%). Os sesquiterpenos oxigenados (E)-nerolidol (♀ 24,69%; ♂ 17,16%) e espatulenol (♀ 14,62%; ♂ 21,39%) se encontraram como constituintes majoritários. O alto rendimento, a baixa relação monoterpenos/sesquiterpenos e as altas proporções de sesquiterpenos oxigenados são as principais características do óleo essencial de B. racunculifolia desta região. As folhas de três espécies de Baccharis (B. dracunculifolia, B. semiserrata e B. uncinella) foram extraídas em aparelho Soxhlet com a sequência de solventes clorofórmio, acetato de etila e metanol, analisando-se os extratos por CCD, UV e CLAE. Foram dentificados os ácidos fenólicos livres: ácido caféico (Bd ♀ e Bd ♂), ácido p-cumárico (Bd ♀), ácido ferúlico (Bd ♀, Bd ♂, Bu e Bs) e o flavonóide rutina (Bd ♀, Bd ♂, Bu). Assim, demostrou-se, pela primeira vez, a co-ocorrência de substâncias fenólicas polares nestas três espécies vegetais. Os extratos etanólicos obtidos de 13 amostras de própolis foram analisados por CCD-AR e UV-VIS, permitindo classificar as própolis regionais em três grupos. Foi escolhida a amostra mais característica de cada grupo (ADI, WS-3, RS-2) para análise por CLAE em comparação com a própolis verde PG12. Brotos frescos dos espécimes masculino e feminino de B. dracunculifolia foram extraídos por enxágüe com metanol e também submetidos à análise por CLAE. Todos os extratos, de própolis e de B. dracunculifolia, apresentaram artepilina C garantindo que esta é a fonte vegetal da própolis regional. Os ácidos caféico, ferúlico e pcumárico foram identificados nas quatro amostras de própolis. Apigenina estaria presente somente nas própolis regionais, entre 2,4% e 3,9%, enquanto a crisina foi identificada somente na PG12, mas como componente principal (18,1%). Um flavonoide (lmáx 365 nm, 42,96 min) é a substância principal das três amostras de própolis regionais e também do extrato obtido por enxágue dos brotos da planta, mas não foi identificado. Todos os extratos etanólicos de própolis regionais apresentaram excelentes níveis de atividade antioxidante quando testados frente ao radical DPPH, vários deles chegando a ser mais efetivos que o da PG12. Uma análise comparativa do poder antioxidante e da composição química das amostras permitem concluir que o flavonóide não identificado é o responsável pela fortíssima atividade antioxidante de ADI e WS-2 em comparação com RS-2 e PG12.

O Artepelin C (ART C) é um produto natural presente na própolis verde brasileira que apresenta diversas atividades biológicas. Dentre essas, destacam-se as atividades anticancerígenas, o que o torna um promissor candidato à fármaco para o tratamento de diversos tipos de câncer (pulmão, rins, cólon, testículos, próstata e leucemia). A determinação do metabolismo de um candidato a fármaco é uma das etapas primordiais no desenvolvimento do mesmo. Atualmente, modelos in vitro para a determinação do metabolismo do candidato frente às enzimas da citocromo P450 (CYP450) vem sendo largamente utilizados. Esses modelos apresentam como principais vantagens a simplicidade, o baixo custo e a ausência ou uso reduzido de animais. No presente trabalho, avaliou-se o metabolismo in vitro do ART C empregando microssomas hepáticos de ratos e de humanos, com o objetivo de caracterizar os parâmetros cinéticos enzimáticos e identificar os possíveis metabólitos formados durante o metabolismo. Para tanto, foi desenvolvido e validado um método analítico para análise do ART C em meio microssomal. A análise do ART C foi realizada por cromatografia líquida de alta eficiência, empregando coluna C18 e fase móvel composta por metanol : solução aquosa de ácido fórmico 0,1% (70:30, v/v). A vazão utilizada foi de 1,2 mL min-1 e a detecção foi realizada em 315 nm. A metodologia analítica foi validada de acordo com o guia para validação de métodos bioanalíticos da Agência Nacional de Vigilância Sanitária, avaliando-se os parâmetros seletividade, linearidade, efeito residual, limite inferior de quantificação, precisão, exatidão e estabilidade, sendo que os resultados obtidos corroboraram com as exigências do guia. A seguir, foram determinadas as condições de velocidade inicial da reação enzimática (V0), necessárias para a determinação dos parâmetros cinéticos enzimáticos do metabolismo do ART C em microssomas hepáticos de ratos e humanos. As condições de V0 determinadas foram tempo de incubação de 30 minutos e concentração proteica microssomal de 0,5 mg mL-1 para os microssomas de ratos e tempo de incubação de 40 minutos e concentração proteica microssomal de 0,5 mg mL-1 para os microssomas de humanos. O modelo microssomal de rato demonstrou um possível perfil cinético sigmoidal, adequando-se ao modelo cinético de Hill. Os parâmetros cinéticos determinados foram: Vmáx = 0,7567 ± 0,0212 µmol mg-1 min-1, coeficiente de Hill = 10,90 ± 2,80 e S50 = 33,35 ± 0,55 µM. A partir desses parâmetros obteve-se o clearance intrínseco para o ART C de 16,63 ± 1,52 µL min-1 mg-1. Para o modelo microssomal de humanos, os resultados do metabolismo do ART C não se adequaram a nenhum dos modelos cinéticos enzimáticos já descritos. Em ambos os modelos microssomais, foi possível a identificação de dois metabólitos do ART C. Para tanto, foi empregado a cromatografia liquida acoplada a espectrometria de massa de alta resolução ou acoplada a espectrometria de massa de múltiplos estágios. Os resultados revelaram que ambos os metabólitos formados são produtos de hidroxilação do ART C. / Artepillin C (ART C) is a natural product present in Brazilian green propolis, which has several biological properties. Among these ones, the anticancer properties have been highlighted, making ART C a promising drug candidate for treatment of several types of cancer (lungs, kidneys, colon, testicles, prostate and leukemia). The knowledge of a drug metabolism is one of the key stages in early drug development. Nowadays, in vitro models have been used to determine the metabolic route by the cytochrome P450 (CYP450) enzymes for a drug candidate. The main advantages of using these models are the simplicity, the relative low cost and the absence or reduced use of animals. In this project, we determined the in vitro metabolism of ART C by employing rat and human liver microsomes, in order to characterize the enzymatic kinetics parameters and to identify possible produced metabolites during the metabolism. To accomplish that, an analytical method was developed and validated for ART C analysis in microsomal medium. The ART C analysis was carried out by high performance liquid chromatography, using a C18 column and methanol : formic acid aqueous solution 0.1% (70:30, v/v) as mobile phase. The flow rate used was 1.0 mL min-1 and detection was set at 315 nm. The analytical methodology was validated according to ANVISA guideline for bioanalytical method validation. The following parameters were evaluated: selectivity, linearity, carryover, lower limit of quantification, precision, accuracy and stability, wherein the obtained results corroborate to the guides requirement. Hereafter, the initial velocity conditions for the enzymatic reaction (V0) of ART C metabolism in rat and human liver microsomes was determined. The V0 conditions were incubation time 30 minutes and microsomal protein concentration 0.5 mg mL-1 for rat microsomes and incubation time 40 minutes and microsomal protein concentration 0.5 mg mL-1 for human microsomes. The metabolism by rat liver microsomes suggested a sigmoidal profile, adapting to the Hills kinetics model. The enzymatic kinetics parameters determined were: Vmax = 0.7567 ± 0.0212 µmol mg-1 min-1, Hill coefficient = 10.90 ± 2.80 and S50 = 33.35 ± 0.55 µM. Based on these parameters, the calculated intrinsic clearance for ART C was 16.63 ± 1.52 µL min-1 mg-1. The in vitro metabolism assay employing human microsomes did not fit any enzymatic kinetics models. In both microsomal models, two ART C metabolites were determined. The identification of the metabolites was performed by liquid chromatography coupled to a high resolution mass spectrometry or coupled to a multiple-stage mass spectrometry. The results revealed that both ART C metabolites were produced after a hydroxylation reaction.